CN103652367B - 一种反刍动物复合微生态饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种反刍动物复合微生态饲料及其制备方法。将微生态饲料添加剂和黄腐酸按照2.5-5.0∶1复配；所述的微生态饲料添加剂为；将含腐植酸钠的固态培养基经过混合菌悬液发酵制备而成。本发明的产品作为添加剂，具有益生菌和黄腐酸两种功效，不仅能够改善反刍动物胃肠道微生态平衡，增加采食量，增强动物机体免疫力；同时能够提高饲料转化率，改善饲料报酬，降低生产成本。

Description

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种饲料添加剂及其制备方法，特别涉及一种反刍动物复合微生态饲料添加剂及其制备方法。

背景技术

随着人口数量的不断增长和人们物质文明生活水平的不断提高，人们对畜产品的需求量也在不断增加。同时，人们对畜产品的质量安全也有了更高的要求。动物产品的无污染、绿色、安全等成了人们的普遍要求和需求。目前饲料添加剂主要为含矿物质、维生素、氨基酸等成分的营养物质添加剂；抗生素类物质，用以预防疾病；各类香精等香味调节剂，用以增强饲料的适口性；激素类添加剂，用以增快动物迅速生长的调节剂。但上述四种产品除了价格较高外，造成的药物残留、抗药性等问题严重危害人类的健康。

发明内容

本发明的目的是提供一种反刍动物复合微生态饲料添加剂及其制备方法，从反刍动物的生理特点出发，以瘤胃微生态学和系统动物营养学的观点来研究反刍动物用复合微生态制剂，强调微生态制剂作用的位置重点在瘤胃，而不是像单胃动物那样在小肠。另一方面，微生态制剂对反刍动物的作用效果取决于所用的菌种类别及其科学组合、制剂活力、应用剂量，同时也与动物所处的生理状态、日粮类型等因素有关，目前对反刍动物微生态制剂的研究缺乏针对以上因素的系统性研究。因此，本发明采用现代生物发酵与复配技术，将腐植酸钠添加至培养基中制备出含腐植酸的微生态制剂，然后将微生态制剂与黄腐酸按适当比例复配，制备出了适合反刍动物的复合微生态饲料添加剂，该产品是一类含有腐植酸类物质的微生态制剂，与单一的微生态制剂相比，在促进牛羊对饲料消化吸收、改善瘤胃微生态环境、提高生产性能、增强机体免疫力、减少环境污染等方面的作用效果更好。

为实现上述目的，本发明的目的是本发明提供了一种反刍动物复合微生态饲料添加剂，将微生态饲料添加剂和黄腐酸按照2.5-5.0∶1复配；所述的微生态饲料添加剂为：将含腐植酸钠的固态培养基经过混合菌悬液发酵制备而成。

所述的混合菌悬液为：枯草芽孢杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液按照2-5∶1.5-3.5∶0.5-2比例混合而成的；混合菌悬液在含腐植酸钠的固态培养基中的接种比例为8-10％(W/V)；所述的含腐植酸钠的固态培养基由固体物质和水组成，其比例为1∶0.8-1.1，其中固体物质组成成分包括：麸皮40-50％、豆粕25-30％、玉米皮20-30％、腐植酸钠3-6％、硫酸铵0.5-1％、磷酸氢二钾0.5-1％、硫酸镁0-0.1％和氯化锌0-0.05％。

所述的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和植物乳杆菌分别为枯草芽孢杆菌CGMCC1.0892(BacillussubtilisCGMCC1.0892)活菌数为1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g、酿酒酵母菌CGMCC2.119(SaccharomycescerevisiaeCGMCC2.119)活菌数为1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g、植物乳杆菌CGMCC1.0557(LactobacillusplantarumCGMCC1.0557)活菌数为1.0×10⁹-9.9×10⁹cfu/g。

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂的制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌依次经过斜面培养、一级种子液培养、二级种子液培养，制得枯草芽孢杆菌活菌的种子液，活菌数达1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g；

枯草芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；一级种子液培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；二级种子液培养基组成为豆粕40-55g/L，蛋白胨8-11g/L，牛肉膏25-35g/L，葡萄糖45-55g/L，MgCl₂0.3-1.1g/L，K₂HPO₄0.05-0.15g/L；枯草芽孢杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32-36℃，时间均为22-26小时；

(2)将酿酒酵母菌依次经过斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得酿酒酵母菌的种子液，活菌数达1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g；

酿酒酵母的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基；一级种子液培养基为麦芽汁培养基；二级种子液培养基组成为麸皮13-17g/L、葡萄糖7-12g/L、MgSO₄0.1-0.3g/L、K₂HPO₄0.3-0.6g/L、(NH₄)₂SO₄0.3-0.6g/L；酿酒酵母的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32-36℃，时间均为22-26小时；

(3)将植物乳杆菌经斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得植物乳杆菌的种子液，活菌数达1.0×10⁹-9.9×10⁹cfu/g；

植物乳杆菌的斜面培养基为MRS琼脂培养基；一级种子液培养基为MRS培养基；二级种子液培养基组成为豆粕8-12g/L、麸皮7-12g/L、葡萄糖3-7g/L、MgCl₂0.05-0.15g/L、K₂HPO₄0.5-0.9g/L、(NH₄)₂SO₄0.3-0.7g/L；植物乳杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为35-38℃、时间均为10-15小时；

(4)将上述(1)、(2)、(3)所得种子液按2-5∶1.5-3.5∶0.5-2比例混合，制备成混合菌悬液；

(5)将麸皮40-50％、豆粕25-30％、玉米皮20-30％、腐植酸钠3-6％、硫酸铵0.5-1％、磷酸氢二钾0.5-1％、硫酸镁0-0.1％和氯化锌0-0.05％混合(分别按质量百分数)，制备成培养基中的固体物质。

(6)将上述(5)所得固体物质与水按1∶0.8-1.1比例混合，得到含腐植酸钠的固态培养基；

(7)将上述(4)所得混合菌悬液接种于上述(6)所得的固态培养基中，其比例为8-10％(W/V)；在30-40℃条件下发酵36-48小时，得到微生态饲料添加剂；

(8)将上述(7)所得的微生态饲料添加剂与黄腐酸按照2.5-5.0∶1进行复配，即得成品。

本发明的优点在于：

(1)本发明将腐植酸钠添加至固态培养基中，促进了益生菌的生长繁殖，有利于发酵产物的产生；

(2)本发明将微生态饲料与黄腐酸以适当比例复配，使得微生态饲料在动物体内发挥效果更好，同时具有腐植酸类物质对动物的促生长和提高免疫力等作用，可作为一类抗生素的替代产品；

(3)实际生产中，使用本发明产品可提高奶牛产奶量10％～25％，提高肉羊日增重13％～20％，降低肉羊料重比10～25％。

从反刍动物的生理特点出发，以瘤胃微生态学和系统动物营养学的观点来研究反刍动物用复合微生态制剂，强调微生态制剂作用的位置重点在瘤胃，而不是像单胃动物那样在小肠。另一方面，微生态制剂对反刍动物的作用效果取决于所用的菌种类别及其科学组合、制剂活力、应用剂量，同时也与动物所处的生理状态、日粮类型等因素有关，目前对反刍动物微生态制剂的研究缺乏针对以上因素的系统性研究。因此，本发明采用现代生物发酵与复配技术，将腐植酸钠添加至培养基中制备出含腐植酸的微生态制剂，然后将微生态制剂与黄腐酸按适当比例复配，制备出了适合反刍动物的复合微生态饲料添加剂，该产品是一类含有腐植酸类物质的微生态制剂，与单一的微生态制剂相比，在促进牛羊对饲料消化吸收、改善瘤胃微生态环境、提高生产性能、增强机体免疫力、减少环境污染等方面的作用效果更好。

具体实施方式

实施例1

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂，将微生态饲料添加剂和黄腐酸按照3.5∶1复配；所述的微生态饲料添加剂为：将含腐植酸钠的固态培养基经过混合菌悬液发酵制备而成。

所述的混合菌悬液为：枯草芽孢杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液按照3∶2.5∶1比例混合而成的；混合菌悬液在含腐植酸钠的固态培养基中的接种比例为8％(W/V)；所述的含腐植酸钠的固态培养基由固体物质和水组成，其比例为1∶1，其中固体物质组成成分包括：麸皮45％、豆粕28％、玉米皮20％、腐植酸钠5％、硫酸铵1％、磷酸氢二钾0.9％、硫酸镁0.05％和氯化锌0.05％。

所述的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和植物乳杆菌分别为枯草芽孢杆菌CGMCC1.0892(BacillussubtilisCGMCC1.0892)活菌数为8×10⁸cfu/g、酿酒酵母菌CGMCC2.119(SaccharomycescerevisiaeCGMCC2.119)活菌数为8×10⁸cfu/g、植物乳杆菌CGMCC1.0557(LactobacillusplantarumCGMCC1.0557)活菌数为8×10⁹cfu/g。

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂的制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌依次经过斜面培养、一级种子液培养、二级种子液培养，制得枯草芽孢杆菌活菌的种子液，活菌数达8×10⁸cfu/g；

枯草芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；一级种子液培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；二级种子液培养基组成为豆粕45g/L，蛋白胨9g/L，牛肉膏30g/L，葡萄糖45g/L，MgCl₂1g/L，K₂HPO₄0.1g/L；枯草芽孢杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为33℃，时间均为24小时；

(2)将酿酒酵母菌依次经过斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得酿酒酵母菌的种子液，活菌数达8×10⁸cfu/g；

酿酒酵母的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基；一级种子液培养基为麦芽汁培养基；二级种子液培养基组成为麸皮15g/L、葡萄糖9g/L、MgSO₄0.2g/L、K₂HPO₄0.5g/L、(NH₄)₂SO₄0.5g/L；酿酒酵母的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为33℃，时间均为24小时；

(3)将植物乳杆菌经斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得植物乳杆菌的种子液，活菌数达8×10⁹cfu/g；

植物乳杆菌的斜面培养基为MRS琼脂培养基；一级种子液培养基为MRS培养基；二级种子液培养基组成为豆粕10g/L、麸皮8g/L、葡萄糖5g/L、MgCl₂0.1g/L、K₂HPO₄0.7g/L、(NH₄)₂SO₄0.5g/L；植物乳杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为35℃、时间均为12小时；

(4)将上述(1)、(2)、(3)所得种子液按3∶2.5∶1比例混合，制备成混合菌悬液；

(5)将麸皮45％、豆粕28％、玉米皮20％、腐植酸钠5％、硫酸铵1％、磷酸氢二钾0.9％、硫酸镁0.05％和氯化锌0.05％混合(分别按质量百分数)，制备成培养基中的固体物质。

(6)将上述(5)所得固体物质与水按1∶1比例混合，得到含腐植酸钠的固态培养基；

(7)将上述(4)所得混合菌悬液接种于上述(6)所得的固态培养基中，其比例为8％W/V)；在35℃条件下发酵40小时，得到微生态饲料添加剂；

(8)将上述(7)所得的微生态饲料添加剂与黄腐酸按照3.5∶1进行复配，即得成品。

实施例2

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂，将微生态饲料添加剂和黄腐酸按照4.5∶1复配；所述的微生态饲料添加剂为：将含腐植酸钠的固态培养基经过混合菌悬液发酵制备而成。

所述的混合菌悬液为：枯草芽孢杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液按照4∶3∶1.5比例混合而成的；混合菌悬液在含腐植酸钠的固态培养基中的接种比例为9％(W/V)；所述的含腐植酸钠的固态培养基由固体物质和水组成，其比例为1∶0.8，其中固体物质组成成分包括：麸皮40％、豆粕25％、玉米皮30％、腐植酸钠3％、硫酸铵0.9％、磷酸氢二钾1％、硫酸镁0.1％。

所述的黄腐酸提取原料为内蒙古自治区武川地区的褐煤；所述的腐植酸钠提取原料为内蒙古自治区武川地区的褐煤。

所述的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和植物乳杆菌分别为枯草芽孢杆菌CGMCC1.0892(BacillussubtilisCGMCC1.0892)9×10⁸cfu/g、酿酒酵母菌CGMCC2.119(SaccharomycescerevisiaeCGMCC2.119)9×10⁸cfu/g、植物乳杆菌CGMCC1.0557(LactobacillusplantarumCGMCC1.0557)9×10⁹cfu/g。

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂的制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌依次经过斜面培养、一级种子液培养、二级种子液培养，制得枯草芽孢杆菌活菌的种子液，活菌数达9×10⁸cfu/g；

枯草芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；一级种子液培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；二级种子液培养基组成为豆粕40g/L，蛋白胨10g/L，牛肉膏25g/L，葡萄糖50g/L，MgCl₂0.7g/L，K₂HPO₄0.09g/L；枯草芽孢杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为35℃，时间均为22小时；

(2)将酿酒酵母菌依次经过斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得酿酒酵母菌的种子液，活菌数达9×10⁸cfu/g；

酿酒酵母的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基；一级种子液培养基为麦芽汁培养基；二级种子液培养基组成为麸皮13g/L、葡萄糖11g/L、MgSO₄0.3g/L、K₂HPO₄0.6g/L、(NH₄)₂SO₄0.4g/L；酿酒酵母的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为35℃，时间均为22小时；

(3)将植物乳杆菌经斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得植物乳杆菌的种子液，活菌数达9×10⁹cfu/g；

植物乳杆菌的斜面培养基为MRS琼脂培养基；一级种子液培养基为MRS培养基；二级种子液培养基组成为豆粕9g/L、麸皮10g/L、葡萄糖6g/L、MgCl₂0.15g/L、K₂HPO₄0.5g/L、(NH₄)₂SO₄0.7g/L；植物乳杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为37℃、时间均为10小时；

(4)将上述(1)、(2)、(3)所得种子液按4∶3∶1.5比例混合，制备成混合菌悬液；

(5)将麸皮40％、豆粕25％、玉米皮30％、腐植酸钠3％、硫酸铵0.9％、磷酸氢二钾1％、硫酸镁0.1％混合(分别按质量百分数)，制备成培养基中的固体物质。

(6)将上述(5)所得固体物质与水按1∶0.8比例混合，得到含腐植酸钠的固态培养基；

(7)将上述(4)所得混合菌悬液接种于上述(6)所得的固态培养基中，其比例为9％(W/V)；在30℃条件下发酵47小时，得到微生态饲料添加剂；

(8)将上述(7)所得的微生态饲料添加剂与黄腐酸按照4.5∶1进行复配，即得成品。

实施例3

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂，将微生态饲料添加剂和黄腐酸按照3.0∶1复配；所述的微生态饲料添加剂为：将含腐植酸钠的固态培养基经过混合菌悬液发酵制备而成。

所述的混合菌悬液为：枯草芽孢杆菌种子液、酿酒酵母菌种子液、植物乳杆菌种子液按照5∶3∶2比例混合而成的；混合菌悬液在含腐植酸钠的固态培养基中的接种比例为10％(W/V)；所述的含腐植酸钠的固态培养基由固体物质和水组成，其比例为1∶1.1，其中固体物质组成成分包括：麸皮43％、豆粕27％、玉米皮22.6％、腐植酸钠6％、硫酸铵0.6％、磷酸氢二钾0.75％、硫酸镁0.02％和氯化锌0.03％。

所述的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和植物乳杆菌分别为枯草芽孢杆菌CGMCC1.0892(BacillussubtilisCGMCC1.0892)活菌数为6×10⁸cfu/g、酿酒酵母菌CGMCC2.119(SaccharomycescerevisiaeCGMCC2.119)活菌数为6×10⁸cfu/g、植物乳杆菌CGMCC1.0557(LactobacillusplantarumCGMCC1.0557)活菌数为6×10⁸cfu/g。

一种反刍动物复合微生态饲料添加剂的制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌依次经过斜面培养、一级种子液培养、二级种子液培养，制得枯草芽孢杆菌活菌的种子液，活菌数达6×10⁸cfu/g；

枯草芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；一级种子液培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；二级种子液培养基组成为豆粕50g/L，蛋白胨8g/L，牛肉膏35g/L，葡萄糖55g/L，MgCl₂0.3g/L，K₂HPO₄0.15g/L；枯草芽孢杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32℃，时间均为26小时；

(2)将酿酒酵母菌依次经过斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得酿酒酵母菌的种子液，活菌数达6×10⁸cfu/g；

酿酒酵母的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基；一级种子液培养基为麦芽汁培养基；二级种子液培养基组成为麸皮17g/L、葡萄糖7g/L、MgSO₄0.1g/L、K₂HPO₄0.3g/L、(NH₄)₂SO₄0.6g/L；酿酒酵母的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32℃，时间均为26小时；

(3)将植物乳杆菌经斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得植物乳杆菌的种子液，活菌数达6×10⁹cfu/g；

植物乳杆菌的斜面培养基为MRS琼脂培养基；一级种子液培养基为MRS培养基；二级种子液培养基组成为豆粕12g/L、麸皮7g/L、葡萄糖3g/L、MgCl₂0.05g/L、K₂HPO₄0.9g/L、(NH₄)₂SO₄0.3g/L；植物乳杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为36℃、时间均为13小时；

(4)将上述(1)、(2)、(3)所得种子液按5∶3∶2比例混合，制备成混合菌悬液；

(5)将麸皮43％、豆粕27％、玉米皮22.6％、腐植酸钠6％、硫酸铵0.6％、磷酸氢二钾0.75％、硫酸镁0.02％和氯化锌0.03％混合(分别按质量百分数)，制备成培养基中的固体物质。

(6)将上述(5)所得固体物质与水按1∶1.1比例混合，得到含腐植酸钠的固态培养基；

(7)将上述(4)所得混合菌悬液接种于上述(6)所得的固态培养基中，其比例为10％(W/V)；在37℃条件下发酵36小时，得到微生态饲料添加剂；

(8)将上述(7)所得的微生态饲料添加剂与黄腐酸按照3.0∶1进行复配，即得成品。

下面就动物做如下实施例：

实施例1

肉羊实验

试验选用同品种、同性别、体重(19.4kg±1.24)相近、健康无病的4月龄羔羊120只，随机分为4组，包括对照组和试验I～III组，每组30头，组间差异不显著(P＞0.05)。试验组添加反刍动物复合微生态饲料添加剂1％。精料日粮配方及营养水平见表1.试验羊的精粗料供给、饲喂方法、管理措施及日常安排均按羊场常规方法进行。分组饲养，饮水、光照、运动等条件一致。对照组和试验组的营养水平完全相同。试验开始和试验结束进行2次空腹称重，每次连续称重2d，取平均值，测定日增重。并记录投料量，计算各组的平均日耗量，根据增重计算饲料转化率。同时，还对羊的排粪次数、粪量及形状有无异常等进行观察。试验共70天，前10天为预饲期，正式期为60天。

表1肉羊混合精料组成及营养水平(风干基础)

反刍动物复合微生态饲料添加剂对肉羊的日增重和料重比的影响见表2，从表中可见，试验组较对照组日增重和饲料转化率均有提高，试验日增重分别提高13.72％、17.11％和19.08％；试验组饲料转化率较对照组提高17.44％、19.26％和15.45％。由此复合微生态饲料对肉羊日增重和饲料转化率均有显著的提高。

表2肉羊日增重和料重比的变化

实施例2：

奶牛实验：

选择健康、生长发育正常、体重、胎次、产奶量和产犊天数近似的中国荷斯坦奶牛80头，采用随机区组设计分为4组(1个对照组和3个试验组)，对照组，试验组添加复合微生态制剂1％。精料日粮配方为玉米54％、麸皮13％、豆粕15％、棉粕13％、石粉1％、磷酸氢钙1％、食盐1％、小苏打1％、预混料1％。试验奶牛的精粗料供给、饲喂方法、管理措施及日常安排均按牛场常规方法进行。试验奶牛每日2次挤奶。自由采食和饮水，满足供给清洁饮水，保持圈舍卫生。

表3反刍动物复合微生态制剂对奶牛生产性能的影响

试验结果见表3，从表中可见，各试验组较对照组奶产量、乳蛋白均有提高，而体细胞数有所下降，综合产奶量和乳品质的变化情况，试验组对奶牛的产奶量有明显提高，试验I提高19.84％，试验II提高13.05％，试验III提高14.91％，由此可见，饲喂反刍动物复合微生态制剂可提高产奶量10以上。

综上所述，该产品的特点为：

(1)本发明将腐植酸钠添加至固态培养基中，促进了益生菌的生长繁殖，有利于发酵产物的产生；

(2)本发明将微生态饲料与黄腐酸以适当比例复配，使得微生态饲料在动物体内发挥效果更好，同时具有腐植酸类物质对动物的促生长和提高免疫力等作用，可作为一类抗生素的替代产品；

(3)实际生产中，使用本发明产品可提高奶牛产奶量10％～25％，提高肉羊日增重13％～20％，降低肉羊料重比10～25％。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实施例对本发明进行了详尽说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (1)

1.一种反刍动物复合微生态饲料添加剂，其制备方法为：

(1)将枯草芽孢杆菌依次经过斜面培养、一级种子液培养、二级种子液培养，制得枯草芽孢杆菌活菌的种子液，活菌数达1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g；枯草芽孢杆菌的斜面培养基为：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；一级种子液培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；二级种子液培养基组成为豆粕40-55g/L，蛋白胨8-11g/L，牛肉膏25-35g/L，葡萄糖45-55g/L，MgCl₂0.3-1.1g/L，K₂HPO₄0.05-0.15g/L；枯草芽孢杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32-36℃，时间均为22-26小时；

(2)将酿酒酵母菌依次经过斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得酿酒酵母菌的种子液，活菌数达1.0×10⁸-9.9×10⁸cfu/g；酿酒酵母的斜面培养基为：麦芽汁琼脂培养基；一级种子液培养基为麦芽汁培养基；二级种子液培养基组成为麸皮13-17g/L、葡萄糖7-12g/L、MgSO₄0.1-0.3g/L、K₂HPO₄0.3-0.6g/L、(NH₄)₂SO₄0.3-0.6g/L；酿酒酵母的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为32-36℃，时间均为22-26小时；

(3)将植物乳杆菌经斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养，制得植物乳杆菌的种子液，活菌数达1.0×10⁹-9.9×10⁹cfu/g；

植物乳杆菌的斜面培养基为MRS琼脂培养基；一级种子液培养基为MRS培养基；二级种子液培养基组成为豆粕8-12g/L、麸皮7-12g/L、葡萄糖3-7g/L、MgCl₂0.05-0.15g/L、K₂HPO₄0.5-0.9g/L、(NH₄)₂SO₄0.3-0.7g/L；植物乳杆菌的斜面培养、一级种子液培养和二级种子液培养的培养温度均为35-38℃、时间均为10-15小时；

(4)将上述(1)、(2)、(3)所得种子液按2-5∶1.5-3.5∶0.5-2比例混合，制备成混合菌悬液；

(5)将麸皮40-50％、豆粕25-30％、玉米皮20-30％、腐植酸钠3-6％、硫酸铵0.5-1％、磷酸氢二钾0.5-1％、硫酸镁0-0.1％和氯化锌0-0.05％混合(分别按质量百分数)，制备成培养基中的固体物质；

(6)将上述(5)所得固体物质与水按1∶0.8-1.1(W/V)比例混合，得到含腐植酸钠的固态培养基；

(7)将上述(4)所得混合菌悬液接种于上述(6)所得的固态培养基中，其比例为8-10％(V/W)，在30-40℃条件下发酵36-48小时，得到微生态饲料添加剂；

(8)将上述(7)所得的微生态饲料添加剂与黄腐酸按照2.5-5.0∶1进行复配，即得成品。