CN103635183A - 使用pi3k/mtor的吡啶并嘧啶抑制剂来治疗淋巴瘤的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供用于治疗包括血液恶性肿瘤的癌症的方法，其包括施用式I的化合物。

Description

使用PI3K/MTOR的吡啶并嘧啶抑制剂来治疗淋巴瘤的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年4月29日提交的美国临时专利申请第61/480,991号、2011年6月7日提交的美国临时专利申请第61/493,998号、和2011年12月2日提交的美国临时专利申请第61/566,066号的优先权的权益，其全部通过引用方式并入本文中。

发明背景

淋巴组织增生恶性肿瘤（包括淋巴瘤和淋巴细胞性白血病）是常见的恶性肿瘤，在美国每年出现约93,000例新病例。

正在开发的治疗这些恶性肿瘤的治疗模式取得了不同程度的成功。例如，在超过30种的非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的亚类中，外套细胞淋巴瘤(MCL)占了3%至10%的案例。在诊断或复发时，使用各种化疗方案能够治疗MCL。尽管鉴于治疗上的这些进步，预后在改善，但中位总生存期仍然为4.8年。

滤泡性淋巴瘤(FL)是常见的惰性B细胞NHL，其构成约20%的所有新诊断的淋巴瘤案例和约70%的所有惰性NHL。像许多淋巴瘤一样，它的发病率日益增加，每年诊断出超过24,000例新病例。尽管FL的可行治疗模式种类日益增加，其包括单独的放射免疫疗法或者联合化学疗法、以及骨髓移植，但由于分子逃逸机制(molecularescape mechanism)，许多FL患者出现难于治疗疾病或者复发。

在美国，B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)是成年白血病最常见类型，每年有约15,000例新病例。根据世界卫生组织(WHO)分类，CLL与成熟外周B细胞肿瘤小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)相同。虽然有多种治疗选择，但由于CLL/晚期SLL是进行性疾病，所以一旦出现症状，患者具有相对较短的总生存期，其范围为18个月至6年，22.5%的患者具有10年生存预期。

弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是恶性淋巴瘤中最常见的亚类，其构成所有病例中约40%。尽管在过去数年间治疗得到改善，但具有晚期DLBCL的患者中约三分之一难于治疗或者会复发，并且它们中很大一部分死于他们所患疾病。

因此，为了治疗包括淋巴瘤和淋巴细胞性白血病的淋巴组织增生恶性肿瘤，特别是复发的或顽固性淋巴瘤或淋巴细胞性白血病的淋巴组织增生恶性肿瘤，对临床有效药物的需求增加。更特别地，用于治疗复发的或顽固性NHL、MCL、FL、CLL/SLL和DLBCL的临床有效药物的需求增加。

发明概要

因此，提供用于治疗淋巴组织增生恶性肿瘤的方法，具体而言，复发的或顽固性MCL、FL、CLL/SLL和DLBCL，其包括向需要其的患者施用治疗有效量的式I的化合物：

或其药学上可接受的盐；或者包含治疗有效量的式I的化合物的药物组合物；

对于式I的化合物，其中：

R¹是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的杂环烷基烷基、任选取代的杂芳基、或者任选取代的杂芳基烷基；

R²是氢或烷基，其中烷基被1、2、3、4、或5个R⁸基团任选取代；

X是-NR³-；

R³是氢；

R⁴是任选取代的烷基；

R⁵是氢；和

R⁶是苯基、酰基、或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被1、2、3、4、或5个R⁹基团任选取代；

当存在时，每个R⁸独立地为羟基、卤代、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基烷基、或烷氧基烷基氨基；以及

当存在时，每个R⁹独立地为卤代、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、氨基烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、杂环烷基、或杂芳基，以及其中在R⁹内单独或者作为另一基团一部分的所述环烷基、芳基、杂环烷基、和杂芳基独立地被选自卤代、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、和二烷基氨基的1、2、3、或4个基团任选取代。

在另一方面中，本文提供治疗患有非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、外套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的患者的方法，其包括向所述患者施用有效量的包含2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐的组合物。在一些实施方案中，所述方法包括至少一个给药周期，其中所述给药周期为28天的时间，其中以约50mg每日两次施用2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在另一方面中，本文提供治疗患有外套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的人患者的方法，其包括向所述患者施用临床证实安全和有效量的包含2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐的组合物。在一些实施方案中，所述方法包括至少一个给药周期，其中所述给药周期为28天的时间，其中以约50mg每日两次施用2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在另一方面中，本文提供治疗患有外套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、或弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的人患者的方法，其包括向所述患者施用FDA批准量的包含2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐的组合物。在一些实施方案中，所述方法包括至少一个给药周期，其中所述给药周期为28天的时间，其中以约50mg每日两次施用2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

在另一方面中，提供治疗患有外套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、或者弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的人患者的药物组合物，所述组合物包含临床证实安全和有效量的2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

附图简述

图1显示患有MCL的患者在治疗前和使用化合物A治疗两个周期之后的CT扫描图。

图2显示在每日治疗之后在第1周期第1天和第27天以及第2周期第22天的平均血浆浓度。

图3显示在外套细胞淋巴瘤中通过化合物A的PI3K/MAPK途径抑制和Ki67降低。

发明详述

缩略语和定义

在本文中，以下缩略语和定义具有指定的意思：

缩略语    意思

Ac	乙酰基
		br	宽峰
℃	摄氏度
		c-	环
CBZ	CarboBenZoxy=苄氧基羰基
		d	双峰
dd	双重双峰
		dt	双重三峰
DCM	二氯甲烷
		DMA	二甲基乙酰胺
DME	1,2-二甲氧基乙烷
		DMF	N,N-二甲基甲酰胺
DMSO	二甲亚砜
		dppf	1,1’-双(二苯基膦)二茂铁
EI	电子轰击离子化
		g	克
h或hr	小时
		HPLC	高压液相色谱法
L	升
		M	摩尔或摩尔浓度
m	多重峰

mg	毫克
		MHz	兆赫（频率）
Min	分钟
		mL	毫升
μL	微升
		μM	微摩尔或微摩尔的
mM	毫摩尔的
		mmol	毫摩尔
mol	摩尔
		MS	质谱分析
N	当量或当量浓度
		nM	纳摩尔
NMR	核磁共振谱法
		q	四峰
RT	室温
		s	单峰
t或tr	三峰
		TFA	三氟乙酸
THF	四氢呋喃
		TLC	薄层色谱法

符号“-”表示单键；“=”表示双键；“≡”表示三键；以及

表示单键或双键。符号

是指双键上的基团在与符号相连的双键末端任意位置上出现，即，双键的几何构型（E-或Z-）并不清楚。当示出基团由其母式分隔时，在键的末端使用

或

符号，该符号理论上为分裂，从而使基团与它的母结构式分离。

除非另有明确说明，当示出或描述化学结构时，假定所有碳均具有氢取代以形成四价。例如，在以下示意图左侧的结构中，暗示其含有九个氢。这九个氢示出在右侧结构中。有时，文字表示的式子描述结构中特定原子具有一个氢或者多个取代氢（明确定义的氢），例如，-CH₂CH₂-。本领域普通技术人员理解，为了使其他复杂结构的描述简洁和简单，上述描述性技术在化学领域常见。

如果示出基团“R”“漂浮”在环体系上，例如在下式中：

则除非另有定义，取代基“R”可位于环体系上任意原子上，只要形成的结构稳定，假设其可取代来自环原子之一的示出、暗示、或明确定义的氢。

如果示出基团“R”“漂浮”在稠合环体系上，例如在下式中：

则除非另有定义，取代基“R”可位于稠合环体系的任意原子上，只要形成稳定结构，假设其可取代来自环原子之一的示出的氢（例如，在上式中的-NH-）、暗示的氢（例如，在上式中，未显示氢、但理解为存在氢处）、或明确定义的氢（例如，在上式中，“Z”等于=CH-）。在示出的例子中，“R”基团可位于稠合环体系的5元或6元环上。在以上示出的式子中，例如当y是2时，则两个“R”可位于环体系的任意两个原子上，并且假设其分别取代环上示出、暗示、或明确定义的氢。

当示出存在于环体系的基团“R”含有饱和碳时，例如在下式中：

其中，在该例子中，“y”能够为大于1，假设其各自取代在环上通常示出、暗示、或明确定义的氢；并且除非另有定义，在所得结构稳定下，两个“R”可位于同一碳上。简单的例子是当R是甲基的时候。在示出的环的碳上能够存在成对的二甲基（“环状”碳）。在另一例子中，在相同碳上两个R、连同该碳可形成环，从而形成具有例如下式中示出环的螺环（“螺环状”基团）结构：

“酰基”是指-C(O)R基团，其中R是任选取代的烷基、任选取代的烯基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环烷基、或杂环烷基烷基，如本文所定义，例如，乙酰基、三氟甲基羰基、或2-甲氧基乙基羰基等。

如本文所定义，“酰氨基”是指-NRR’基团，其中R是氢、羟基、烷基、或烷氧基，而R’是酰基。

“酰氧基”是指-OR基团，其中R是酰基，如本文所定义，例如氰甲基羰基氧基等。

“施用”及其变化形式（例如，“使施用”化合物）关于本发明的化合物是指引入化合物或化合物的前药至需要治疗的动物的系统内。当联合一种或多种其他活性试剂来提供本发明的化合物或其前药时，“施用”及其变化形式分别理解为包括同时和连续引入化合物或其前药和其他试剂。

“烯基”是指含有至少一个双键的一至六个碳原子的直链一价烃基或者三至6个碳原子的支链一价烃基，例如，乙烯基、丙烯基、1-丁-3-烯基和1-戊-3-烯基等。

如本文所定义的“烷氧基”是指-OR基团，其中R是烷基。例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。

如本文所定义的“烷氧基烷基”是指经至少一个（优选一个、两个或三个）如本文所定义的烷氧基取代的烷基。代表性例子包括甲氧基甲基等。

如本文所定义的“烷氧基烷基氨基”是指–NRR’基团，其中R是氢、烷基、或烷氧基烷基，以及R’是烷氧基烷基。

如本文所定义的“烷氧基烷基氨基烷基”是指经至少一个（具体而言，一个或两个）烷氧基烷基氨基取代的烷基。

如本文所定义的“烷氧基羰基”是指-C(O)R基团，其中R是烷氧基。

“烷基”是指一至六个碳原子的直链饱和一价烃基或者三至六个碳原子的支链饱和一价烃基，例如，甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基（包括所有异构形式）、或者戊基（包括所有异构形式）等。

如本文所定义的“烷基氨基”是指-NHR基团，其中R是烷基。

如本文所定义的“烷基氨基烷基”是指经一个或两个烷基氨基取代的烷基。

如本文所定义的“烷基氨基烷氧基”是指-OR基团，其中R是烷基氨基烷基。

如本文所定义的“烷基羰基”是指-C(O)R基团，其中R是烷基。

“炔基”是指至少含有一个三键的一至六个碳原子的直链一价烃基或者三至六个碳原子的支链一价烃基，例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔-2-基等。

“氨基”是指-NH₂。

“氨基烷基”是指经至少一个（具体而言，一个、两个、或三个）氨基取代的烷基。

如本文所定义的“氨基烷基氧基”是指-OR基团，其中R是氨基烷基。

“芳基”是指一价六至十四元一或二碳环，其中单环是芳香环，而在双环中至少一环为芳香环。除非另有说明，只要化合价规则允许，基团的化合价可位于基团内任意环的任意原子上。代表性例子包括苯基、萘基和茚满基等。

如本文所定义的“芳基烷基”是指经一个或两个如本文所定义的芳基（例如，苄基和苯乙基等）取代的烷基。

如本文所定义的“芳氧基”是指-OR基团，其中R是芳基。

如本文所定义的“羧基烷基”是指经至少一个（具体而言，一或两个）-C(O)OH基团取代的烷基。

“环烷基”是指三至十个碳环原子的单环或稠合二环、饱和的或者部分未饱和的（但不是芳香）、单价烃基。稠合的二环烃基包括桥环体系。除非另有说明，只要化合价规则允许，基团的化合价可位于基团内任意环的任意原子上。一个或两个环碳原子可被-C(O)-、-C(S)-或-C(=NH)-基团取代。更具体而言，术语环烷基包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或环己-3-烯基等。

如本文所定义的“环烷基烷基”是指经至少一个（具体而言，一或两个）环烷基取代的烷基。

如本文所定义的“二烷基氨基”是指其中R和R’为烷基的-NRR’基团、或者N-氧化物衍生物、或其经保护的衍生物，例如，二甲基氨基、二乙基氨基、N,N-甲基丙基氨基、或者N,N-甲基乙基氨基等。

如本文所定义的“二烷基氨基烷基”是指经一个或两个二烷基氨基取代的烷基。

如本文所定义的“二烷基氨基烷氧基”是指-OR基团，其中R是二烷基氨基烷基。代表性例子包括2-(N,N-二乙基氨基)-乙氧基等。

“稠合多环”或“稠合环体系”是指含有桥环或稠合环的多环体系，即，两环在它们的环结构中具有多于一个的共同原子。在该申请中，稠合多环和稠合环体系并不一定全部均为芳香环体系。通常但不必须，稠合多环共享临近的数个原子，例如萘或1,2,3,4-四氢-萘。在该定义中，螺环体系不是稠合多环，但本发明的稠合多环体系自身可具有通过稠合多环的单个环原子与它连接的螺环。在一些例子中，如本领域普通技术人员所理解，在芳香体系上两相邻基团可稠合至一起以形成环结构。稠合的环结构可含有杂原子以及可被一个或多个基团任选取代。另外应当注意，这些稠合基团的饱和碳（即饱和的环结构）能够含有两个取代基。

“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴或碘。

如本文所定义的“卤代烷氧基”是指-OR’基团，其中R’是卤代烷基，例如三氟甲氧基或2,2,2-三氟乙氧基等。

“卤代烷基”是指经一个或多个卤素（具体而言，一至五个卤素原子）取代的烷基，例如，三氟甲基、2-氯乙基、和2,2-二氟乙基等。

“杂芳基”是指5至14个环原子的单环、稠合二环或稠合三环一价基团，其环原子含有一个或多个（具体而言，一个、两个、三个、或四个）独立选自-O-、-S(O)_N-(n是0、1或2)、-N-、-N(R^x)-的环杂原子，而其余的环原子为碳，其中包含单环基团的环是芳香环以及其中包含二环或三环基团的稠合环至少之一是芳香环。包含二环或三环基团的任意非芳香环的一个或两个环碳原子可被-C(O)-、-C(S)-或-C(=NH)-基团取代。R^x是氢、烷基、羟基、烷氧基、酰基或烷基磺酰基。稠合的二环基团包括桥环体系。除非另有说明，只要化合价规则允许，化合价可位于杂芳基的任意环的任意原子上。当化合价的点位于氮上时，则没有R^x。更具体而言，术语杂芳基包括但不限于1,2,4-三唑基、1,3,5-三唑基、苯邻二甲酰亚胺基(phthalimidyl)、吡啶基、吡咯基、咪唑基、噻吩基、呋喃基、吲哚基、2,3-二氢-1H-吲哚基（包括例如，2,3-二氢-1H-吲哚-2-基或2,3-二氢-1H-吲哚-5-基等）、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、苯并咪唑基、苯并二恶茂-4-基、苯并呋喃基、噌啉基、吲嗪基、萘啶基-3-基、酞嗪基-3-基、酞嗪基-4-基、蝶啶基、嘌呤基、喹唑啉基、喹喔啉基、四唑基、吡唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、苯并噁唑基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基（包括例如，四氢异喹啉-4-基或四氢异喹啉-6-基等）、吡咯并[3,2-c]吡啶基（包括例如，吡咯并[3,2-c]吡啶-2-基或吡咯并[3,2-c]吡啶-7-基等）、苯并吡喃基、噻唑基、异噻唑基、噻重氮基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、和其衍生物、或N-氧化物或其受保护的衍生物。

如本文所定义的“杂芳基烷基”是指经至少一个（具体而言，一或两个）杂芳基取代的如本文所定义的烷基。

“杂原子”是指O、S、N或P。

“杂环烷基”是指3至8个环原子的饱和的或者部分未饱和的（但非芳香性）一价单环基团或者5至12个环原子的饱和的或者部分未饱和的（但非芳香性）一价稠合二环基团，其中一个或多个（具体而言，一个、两个、三个、或四个）环杂原子独立地选自O、S(O)_n（n是0、1或2）、N、N(R^y)（其中R^y是氢、烷基、羟基、烷氧基、酰基或烷基磺酰基)，其它环原子是碳。一个或两个环碳原子可被-C(O)-、-C(S)-或-C(=NH)-基团取代。稠合的二环基团包括桥环体系。除非另有说明，只要化合价规则允许，基团的化合价可位于基团内任意环的任意原子上。当化合价的点位于氮上时，则没有R^y。更具体而言，术语杂环烷基包括但不限于吖丁啶基、吡咯烷基、2-氧代吡咯烷基、2,5-二氢-1H-吡咯基、哌啶基、4-哌啶酮基、吗啉基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、四氢吡喃基、2-氧代哌啶基、硫代吗啉基(thiomorpholinyl)、硫吗啉基(thiamorpholinyl)、全氢化吖庚因基(perhydroazepinyl)、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、噁唑啉基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、奎宁环基、异噻唑烷基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、十氢异喹啉基、四氢呋喃基、和四氢吡喃基、和其衍生物、和N-氧化物或其受保护的衍生物。

如本文所定义的“杂环烷基烷基”是指经一个或两个杂环烷基取代的烷基，如本文所定义，例如，吗啉基甲基、N-吡咯烷基乙基、和3-(N-吖丁啶基)丙基等。

如本文所定义的“杂环烷基烷基氧基”是指-OR基团，其中R是杂环烷基烷基。

“饱和桥环体系”是指非芳香的二环或多环体系。这些体系可含有单独的或者共轭的不饱和度，但是它的中心结构不是芳香或者杂芳香环（但其上可具有芳香取代）。例如，六氢-呋喃并[3,2-b]呋喃、2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-茚、7-氮杂-二环[2.2.1]庚烷、和1,2,3,4,4a,5,8,8a-八氢-萘包括在“饱和桥环体系”类型中。

“螺环基”或“螺环”是指由另一环的特定环碳开始的环。例如，如下所示，饱和桥环体系（环B和B’）的环原子、但不是桥头原子能够为饱和桥环体系和与它连接的螺环基（环A）的共同原子。螺环基能够为碳环或杂脂肪族环。

“任选的”或者“任选地”是指随后描述的事情或情况可以或者可以不发生，以及描述包括所述事情或情况发生和它不会发生的情况。本领域普通技术人员理解，对于描述含有一种或多种任选取代基的任意分子，仅旨在包括空间上可实现和/或合成上可行的化合物。在术语中，“任选取代的”是指所有随后改变。因此，例如，在术语“任选取代的芳基C_1-8烷基”中，任选取代可发生在“C_1-8烷基”部分和分子的“芳基”部分，并且分子的任意部分可以或者可以不被取代。在以下“经取代的”定义中示出示例性任选取代的列表。

如本文所定义的“任选取代的烷氧基”是指-OR基团，其中R是任选取代的烷基。

如本文所定义的“任选取代的烷基”是指经独立地选自以下的一个或多个基团（具体而言，一个、两个、三个、四个或五个基团）任选取代的烷基：烷基羰基、烯基羰基、环烷基羰基、烷基羰基氧基、烯基羰基氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、氰基、氰基烷基氨基羰基、烷氧基、烯基氧基、羟基、羟基烷氧基、卤代、羧基、烷基羰基氨基、烷基羰基氧基、烷基-S(O)_0-2-、烯基-S(O)_0-2-、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基-NR^c-（其中R^c是氢、烷基、任选取代的烯基、羟基、烷氧基、烯基氧基、或氰基烷基)、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、二烷基氨基羰基氨基、烷氧基烷基氧基、和-C(O)NR^aR^b（其中R^a和R^b独立地为氢、烷基、任选取代的烯基、羟基、烷氧基、烯基氧基或氰基烷基）。

如本文所定义的“任选取代的烯基”是指经独立地选自以下的一个或多个基团（具体而言，一个、两个、三个、四个或五个基团）任选取代的烷基：烷基羰基、烯基羰基、环烷基羰基、烷基羰基氧基、烯基羰基氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、氰基、氰基烷基氨基羰基、烷氧基、烯基氧基、羟基、羟基烷氧基、卤代、羧基、烷基羰基氨基、烷基羰基氧基、烷基-S(O)_0-2-、烯基-S(O)_0-2-、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基-NR^c-（其中R^c是氢、烷基、任选取代的烯基、羟基、烷氧基、烯基氧基或氰基烷基)、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烷基氨基羰基氨基、二烷基氨基羰基氨基、烷氧基烷基氧基、和-C(O)NR^aR^b（其中R^a和R^b独立地为氢、烷基、任选取代的烯基、羟基、烷氧基、烯基氧基或氰基烷基）。

“任选取代的氨基”是指基团-N(H)R或–N(R)R，其中每个R独立地选自以下基团：任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂环烷基、任选取代的杂芳基、酰基、羧基、烷氧基羰基、-S(O)₂-(任选取代的烷基)、-S(O)₂-任选取代的芳基)、-S(O)₂-(任选取代的杂环烷基)、-S(O)₂-(任选取代的杂芳基)、和-S(O)₂-(任选取代的杂芳基)。例如，“任选取代的氨基”包括二乙基氨基、甲基磺酰基氨基、和呋喃基-氧基-亚磺酰氨基。

如本文所定义的“任选取代的氨基烷基”是指经至少一个（具体而言，一或两个）如本文所定义的任选取代的氨基取代的烷基。

如本文所定义的“任选取代的芳基”是指经独立地选自以下的一个、两个或三个取代基任选取代的芳基：酰基、酰氨基、酰氧基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、烷氧基、烯基氧基、卤代、羟基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、羧基、氰基、烷基硫代、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、氨基烷氧基，或者芳基是五氟苯基。在“芳基”上任选取代基内，单独或者作为另一基团的一部分的烷基和烯基（包括，例如，在烷氧基羰基中烷基）经一个、两个、三个、四个或五个卤素任选取代。

如本文所定义的“任选取代的芳基烷基”是指经如本文所定义的任选取代的芳基取代的烷基。

如本文所定义的“任选取代的环烷基”是指经独立地选自以下的一个、两个、或三个基团取代的环烷基：酰基、酰氧基、酰氨基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、烷氧基、烯基氧基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、烷基硫代、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、卤代、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、硝基、烷氧基烷基氧基、氨基烷氧基、烷基氨基烷氧基、二烷基氨基烷氧基、羧基、和氰基。在“环烷基”上上述任选取代基内，单独或者作为环烷基环上另一取代基一部分的烷基和烯基独立地被一个、两个、三个、四个或五个卤素基团任选取代，例如卤代烷基、卤代烷氧基、卤代烯基氧基或卤代烷基磺酰基。

如本文所定义的“任选取代的环烷基烷基”是指经至少一个（具体而言，一或两个）任选取代的环烷基取代的烷基。

“任选取代的杂芳基”是指经独立地选自以下的一个、两个或三个取代基任选取代的杂芳基：酰基、酰氨基、酰氧基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、烷氧基、烯基氧基、卤代、羟基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、羧基、氰基、烷基硫代、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、氨基烷氧基、烷基氨基烷氧基、和二烷基氨基烷氧基。在“杂芳基”上任选的取代基内，单独或者作为另一基团一部分的烷基和烯基（包括，例如，在烷氧基羰基中烷基）独立地被一个、两个、三个、四个或五个卤素基团任选取代。

如本文所定义的“任选取代的杂芳基烷基”是指经如本文所定义的至少一个（具体而言，一或两个）任选取代的杂芳基取代的烷基。

如本文所定义的“任选取代的杂环烷基”是指经独立地选自以下的一个、两个或三个取代基任选取代的杂环烷基：酰基、酰氨基、酰氧基、任选取代的烷基、任选取代的烯基、烷氧基、烯基氧基、卤代、羟基、烷氧基羰基、烯基氧基羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、羧基、氰基、烷基硫代、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、烷基磺酰基氨基、氨基烷氧基，或者芳基是五氟苯基。在“杂环烷基”上任选取代基内，单独或者作为另一基团一部分的烷基和烯基（包括，例如，在烷氧基羰基中烷基）独立地被一个、两个、三个、四个或五个卤素基团任选取代。

如本文所定义的“任选取代的杂环烷基烷基”是指经如本文所定义的至少一个（具体而言，一或两个）任选取代的杂环烷基取代的烷基。

“淋巴组织增生恶性肿瘤”是淋巴样细胞的恶性肿瘤疾病，其包括淋巴瘤和淋巴细胞性白血病。淋巴组织增生恶性肿瘤包括例如非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)的超过30种亚类，包括侵袭性B细胞淋巴瘤（例如，弥散性大B细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、和伯基特氏淋巴瘤）、惰性B细胞淋巴瘤（例如滤泡性淋巴瘤）、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤(MZL)（例如，结外MZL(MALT淋巴瘤)、淋巴结MZL和脾MZL(NCCN,2010)）；和淋巴浆细胞性淋巴瘤（也称为沃尔丹斯特伦氏巨球蛋白血症）。

如本文所使用，“化合物A”是指结构

其名称为2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。化合物A公开在WO07/044813中，其全部内容通过引用方式并入本文中。

“药物组合物”包含：1)式I的化合物或其单个异构体，其中化合物任选作为其药学上可接受的盐、另外任选作为其水合物和另外作为其溶剂化物；以及2)如本文所述的药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

本文所述的反应的“产率”分别表示为理论产率的百分比。

本发明中“患者”包括人和其他动物，特别是哺乳动物、和其他有机体。因此，本方法适用于人治疗和兽用用途。在优选的实施方案中，患者是哺乳动物，并且在最优选的实施方案中，患者是人。

术语“有效量”或“药物有效量”或者“治疗有效量”是指提供所期望的生物、治疗和/或预防结果的试剂的足够量。该结果能够降低、缓解、减轻、缩小、延迟和/或缓和一种或多种病症、症状或疾病病因、或者得到生物系统的任何其他所期望的改变。对于癌症，有效量包括足够导致肿瘤缩小和/或降低肿瘤生长速率（例如抑制肿瘤生长）、或者预防或延迟其他非所需细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足够延迟生长的量。在一些实施方案中，有效量是足够预防或延迟复发的量。通过一次或多次施用能够得到有效量。药物或组合物的有效量可以：(i)减少癌细胞数目；(ii)减小肿瘤尺寸；(iii)抑制、妨碍、减缓达一定程度、并优选停止癌症细胞浸润至外周器官；(iv)抑制（即，减慢至一定程度以及优选停止）肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)抑制或延迟肿瘤的出现和/或复发；和/或(vii)减轻与癌症相关的一种或多种症状至一定程度。例如，治疗用途的“有效量”是提供复发的或顽固性MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的临床显著下降的化合物A或其代谢物、药学上可接受的盐或其溶剂化物、或包含化合物A的组合物或其代谢物、或其药学上可接受的盐所需要的量。

在一些实施方案中，得到至少一种治疗作用。治疗作用可以为MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的尺寸减小、减少转移、完全缓解、部分缓解、病理完全反应、增加总反应率或稳定疾病。在一些实施方案中，如与使用抗肿瘤剂的治疗相比，通过施用化合物A或其代谢物或者药学上可接受的盐获得可比较的临床受益率（CBR=CR+PR+SD≥6个月)。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或更多。

化合物的“药学上可接受的盐”是指盐，其为药学上可接受的以及具有母化合物的期望药理作用。据理解，药学上可接受的盐无毒。关于合适的药学上可接受的盐的另外的信息能够在通过引用并入本文中的Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany,Easton,PA,1985、或者S.M.Berge等人，“PharmaceuticalSalts,”J.Pharm.Sci.,1977;66:1-19中找到，两者均通过引用并入本文中。

药学上可接受的酸式加成盐的例子包括使用诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等的无机酸以及诸如醋酸、三氟乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、葡庚糖酸、4,4’-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基醋酸、叔丁基醋酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸、p-甲苯磺酸、和水杨酸等的有机酸形成的那些。

药学上可接受的碱式加成盐的例子包括当母化合物中存在的酸性质子被诸如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、镁、铝盐等的金属离子取代时所形成的那些。优选的盐是铵、钾、钠、钙、和镁盐。由药学上可接受的有机无毒碱得到的盐包括但不限于伯胺、仲胺、和叔胺的盐；包括天然存在的取代胺的取代胺类；环胺；和碱离子交换胺。有机碱基的例子包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡碱、普鲁卡因、海巴青霉素、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺、聚胺树脂等。示例性有机碱基为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己胺、胆碱、和咖啡碱。

“前药”是指在血液中例如通过水解体内转化（通常快速）以产生上式的母化合物的化合物。常见例子包括但不限于具有携有羧酸部分的活性形式的化合物的酯和酰胺形式。本发明的化合物的药学上可接受的酯的例子包括但不限于烷基酯（例如具有约一至约六个碳），其烷基是直链或支链。可接受的酯也包括环烷基酯和芳基烷基酯，例如但不限于苄基。本发明的化合物的药学上可接受的酰胺的例子包括但不限于伯酰胺、和仲和叔烷基酰胺（例如具有约一至约六个碳）。根据常规方法可制备本发明的化合物的酰胺和酯。在T.Higuchi和V.Stella,“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”A.C.S.Symposium Series的第14卷中，以及在Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.EdwardB.Roche,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中提供对前药的透彻讨论，两者均通过引用方式并入本文中用于所有目的。

“代谢物”是指在动物或人体中通过代谢或生物转化产生的化合物或它的盐的分解或最终产物；例如，经生物转化至极性分子，例如通过氧化、还原或水解，或者转化至缀合物（参见讨论生物转化的Goodman和Gilman,"The Pharmacological Basis of Therapeutics"8.sup.th Ed.,Pergamon Press,Gilman等人（编辑），1990）。如本文所使用，本发明的化合物的代谢物或它的盐在体内可以为化合物的生物活性形式。在一个例子中，可使用前药使得体内释放生物活性形式、代谢物。在另一例子中，偶然发现生物活性代谢物，即，没有进行前要自身的设计。鉴于本公开，本领域技术人员知道本发明的化合物的代谢物的活性测定。

除非另有说明，如本文所使用的疾病、疾患或综合征的的“使治疗”或“治疗”是指抑制疾病、疾患或综合征，即，抑制它的发展；和缓解疾病、疾患或综合征，即，导致疾病、疾患或综合征的消退。如本领域所知，在治疗的情况下，系统与局部递送的调节、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、药物相互作用、和病症的严重程度可能都是必要的，并且通过本领域普通技术人员使用常规实验方法可以确定。

“预防”是指预防疾病、疾患或综合征出现在人身上，即在可能暴露于或者倾向于患上疾病、疾患或综合征、但尚未感受到或表现出疾病、疾患或综合征的症状的动物中不出现疾病、疾患或综合征的临床症状。

实施方案

以下段落呈现能够用于实施本发明的大量实施方案。在各例子中，实施方案包括所引用的化合物以及单独的异构体和异构体的混合物。此外，在各例子中，实施方案包括所引用的化合物的药学上可接受的盐、水合物、和/或溶剂化物及其单独的异构体或者异构体的混合物。

在一个实施方案中，提供用于治疗癌症的方法，其包括向患者施用有效量的式I的化合物或其代谢物或者药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，癌症是淋巴组织增生恶性肿瘤。

在另一实施方案中，淋巴组织增生恶性肿瘤是复发的或顽固性MCL、FL、CLL/SL或DLBCL。

包括以下所述的代表性化合物的任意以下实施方案可用于实施本文公开的任意方法。

式I的化合物

在一个实施方案中，在式I的化合物中，R¹是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的杂环烷基烷基、任选取代的杂芳基或任选取代的杂芳基烷基。具体而言，R¹是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基烷基或任选取代的杂环烷基烷基。更具体而言，R¹是氢、烷基、经一个或两个羟基取代的烷基、经烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基烷基或杂环烷基烷基。甚至更具体而言，R¹是氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、2-乙氧基乙基、3-甲氧基丙基、3-乙氧基丙基、3-异丙氧基丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苄基或2-哌啶-1-基乙基。另外更具体而言，R¹是乙基、异丙基、环戊基或环己基。另外更具体而言，R¹是乙基。

在另一实施方案中，R²是氢或烷基，其中烷基被1、2、3、4或5个R⁸基团任选取代。具体而言，R²是氢或烷基，其中烷基被一个、两个或三个R⁸基团任选取代。更具体而言，R²是氢或烷基，其中烷基被一个、两个或三个R⁸基团任选取代；以及当存在时，每个R⁸独立地选自氨基、烷基氨基、二烷基氨基、和卤代。甚至更具体而言，R²是氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、3-氨基丙基、3-(N-甲基氨基)-丙基、3-(N,N-二甲基氨基)-丙基、2-氟乙基或2,2,2-三氟乙基。另外更具体而言，R²是氢或乙基。甚至更优选地，R²是乙基。

在另一实施方案中，R²是氢。

在另一实施方案中，R⁴是任选取代的烷基。具体而言，R⁴是甲基或乙基。更具体而言，R⁴是甲基。

在另一实施方案中，R⁶是酰基。更具体而言，R⁶是烷基羰基。甚至更具体而言，R⁶是乙酰基。

在另一实施方案中，R⁶是被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代的苯基。具体而言，R⁶是被一个或两个R⁹基团任选取代的苯基；以及当存在时，每个R⁹独立地选自芳基、卤代、烷氧基、芳氧基、和卤代烷基。更具体而言，R⁶是被一个或两个R⁹基团任选取代的苯基；以及当存在时，每个R⁹独立地选自苯基、氟、氯、甲氧基、苯氧基、和三氟甲基。甚至更具体而言，R⁶是苯基、经苯基取代的苯基、氟苯基、二氟苯基、氯苯基、二氯苯基、经氯和氟取代的苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、苯基氧基苯基或三氟甲基苯基。另外更具体而言，R⁶是苯基、2-苯基-苯基、3-苯基-苯基、4-苯基-苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2,3-二氟苯基、2,4-二氟苯基、2,5-二氟苯基、2,6-二氟苯基、3,4-二氟苯基、3,5-二氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2,3-二氯苯基、2,4-二氯苯基、2,5-二氯苯基、2,6-二氯苯基、3,4-二氯苯基、3,5-二氯苯基、3-氯代-4-氟代-苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2,3-二甲氧基苯基、2,4-二甲氧基苯基、2,5-二甲氧基苯基、2,6-二甲氧基苯基、3,4-二甲氧基苯基、3,5-二甲氧基苯基、4-苯基氧基苯基、2-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基或4-三氟甲基苯基。

在另一实施方案中，R⁶是经1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代的杂芳基。

在另一实施方案中，R⁶是被一个或两个R⁹任选取代的6元的杂芳基。更具体而言，R⁶是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基或哒嗪基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是卤代。甚至更具体而言，R⁶是吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、3-氟吡啶-4-基、吡嗪-2-基、吡嗪-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、哒嗪-3-基或哒嗪-4-基，其各自被一个或两个R⁹任选取代。

在另一实施方案中，R⁶是吡嗪基、嘧啶基或哒嗪基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是卤代。甚至更具体而言，R⁶是吡嗪-2-基、吡嗪-3-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、哒嗪-3-基或哒嗪-4-基。

在另一实施方案中，R⁶是经一个或两个R⁹任选取代的5元的杂芳基。具体而言，R⁶是吡唑基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、或四唑基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是烷基、芳基烷基、氰基、芳基、烷氧基羰基或卤代。更具体而言，R⁶是吡唑-1-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-1-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-1-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-1-基、三唑-4-基、三唑-5-基、四唑-1-基或四唑-5-基；其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基、N-叔丁氧基羰基或氯。甚至更具体而言，R⁶是吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-4-基、三唑-5-基或四唑-5-基；其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基、N-叔丁氧基羰基或氯。

在另一实施方案中，R⁶是噻吩基、吡咯基、呋喃基、吡唑基、噻唑基、异噁唑基、咪唑基、三唑基或四唑基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基、N-叔丁氧基羰基或氯。具体而言，R⁶是噻吩-2-基、噻吩-3-基、吡咯-2-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、异噁唑-4-基、咪唑-5-基、三唑-5-基、四唑-5-基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基、N-叔丁氧基羰基或氯。更具体而言，R⁶是噻吩-2-基、噻吩-3-基、5-氰基-噻吩-2-基、4-甲基-噻吩-2-基、4-甲基-噻吩-3-基、5-氯代-噻吩-5-基、5-苯基-噻吩-2-基、吡咯-2-基、N-叔丁氧基羰基-吡咯-2-基、N-甲基-吡咯-2-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、N-苄基-吡唑-4-基、吡唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、异噁唑-4-基、咪唑-5-基、三唑-5-基或四唑-5-基。

在另一实施方案中，R⁶是噻吩-2-基、噻吩-3-基、吡咯-2-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-5-基、异噁唑-4-基、咪唑-5-基、三唑-5-基或四唑-5-基，其各自被一个R⁹任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基、N-叔丁氧基羰基或氯。

在另一实施方案中，R⁶是吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噁唑基或苯并异噁唑基，其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代。具体而言，R⁶是吲哚-2-基、吲哚-3-基、吲哚-4-基、吲哚-5-基、吲哚-6-基、吲哚-7-基、苯并咪唑-2-基、苯并咪唑-4-基、苯并咪唑-5-基、苯并咪唑-6-基、苯并咪唑-7-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、苯并呋喃-4-基、苯并呋喃-5-基、苯并呋喃-6-基、苯并呋喃-7-基、苯并噁唑-2-基、苯并噁唑-4-基、苯并噁唑-5-基、苯并噁唑-6-基、苯并噁唑-7-基、苯并异噁唑-3-基、苯并异噁唑-4-基、苯并异噁唑-5-基、苯并异噁唑-6-基或苯并异噁唑-7-基；其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代。更具体而言，R⁶是吲哚-6-基。

在另一实施方案中，R¹是氢、任选取代的烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基烷基或任选取代的芳基烷基；X是-NH-；R²是氢或烷基，其中烷基被一个或两个R⁸基团任选取代；R⁴是烷基；R⁵是氢；R⁶是苯基或杂芳基，其中苯基和杂芳基被一个、两个或三个R⁹基团任选取代；每个R⁸独立地为氨基、烷基氨基、二烷基氨基、或卤代；以及当存在时，每个R⁹独立地为烷基、芳基烷基、氰基、芳基、烷氧基羰基或卤代。

在另一实施方案中，R⁶是吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-4-基、三唑-5-基或四唑-5-基；其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代。

在另一实施方案中，R¹是烷基或环烷基；R⁴是甲基；以及R⁶是被一个或两个R⁹基团任选取代的杂芳基。具体而言，当存在时，每个R⁹独立地是烷基、芳基烷基、氰基、芳基、烷氧基羰基或卤代。具体而言，R⁶是吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-4-基、三唑-5-基或四唑-5-基；其各自被一个R⁹基团任选取代，其中当存在时，R⁹是甲基、苄基、氰基、苯基或N-叔丁氧基羰基。

在另一实施方案中，R²是氢。

在另一实施方案中，R²是甲基或乙基。

在另一实施方案中，R¹是烷基或环烷基；R⁴是甲基；以及R⁶是被一个或两个R⁹基团任选取代的苯基。具体而言，当存在时，每个R⁹独立地为卤代、烷氧基或卤代烷基。

在另一实施方案中，R¹是烷基或环烷基；R⁴是甲基；以及R²是氢。

在另一实施方案中，R¹是烷基或环烷基；R⁴是甲基；以及R²是任选取代的烷基。

以下示出式I的代表性化合物。例子仅为示意性，并不以任何方式限制本发明的范围。根据理论与应用化学国际联合会(InternationalUnion of Pure and Applied Chemistry(IUPAC))、国际生物化学与分子生物学联盟(International Union of Biochemistry and Molecular Biology(IUBMB))、和化学文摘社(Chemical Abstracts Service(CAS))同一的命名规则的体系化应用来命名本发明的化合物。使用ACD/Labs命名软件8.00版，产品版本8.08来得到名称。

表1

式IA的化合物

在另一实施方案中，式I的化合物是式IA的化合物。

或其药学上可接受的盐，其中：

R¹是烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基、或杂芳基烷基；

R²是氢或烷基；

R⁴是烷基；

R⁵是氢；

R⁶是苯基、酰基、或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代；以及

当存在时，每个R⁹各自地为卤代、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、氨基烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、杂环烷基、或杂芳基，以及其中在R⁹内单独或者作为另一基团一部分的所述环烷基、芳基、杂环烷基、和杂芳基独立地被选自卤代、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、和二烷基氨基的1、2、3、或4个基团任选取代。

在一个实施方案中，R¹是烷基、环烷基、杂环烷基烷基、或芳基烷基；X是-NH-；R²是氢或烷基；R⁴是烷基；R⁵是氢；R⁶是苯基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被一个、两个、或三个R⁹基团任选取代；每个R⁸独立地为氨基、烷基氨基、二烷基氨基、或卤代；以及当存在时，每个R⁸独立地为烷基、芳基烷基、氰基、芳基或烷氧基羰基。

在另一实施方案中，R⁴是甲基。

在另一实施方案中，R¹是烷基、环烷基、或杂环烷基。

在另一实施方案中，R¹是烷基。

在另一实施方案中，R⁶是被1、2、或3个R⁹基团任选取代的杂芳基。

在另一实施方案中，当存在时，每个R⁹独立地为烷基、芳基烷基、氰基、芳基、烷氧基羰基或卤代。

在另一实施方案中，R⁶是吡唑基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、或四唑基；其各自被1、2、或3个R⁹基团任选取代。

在另一实施方案中，R⁶是吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-4-基、三唑-5-基或四唑-5-基；其各自被1、2、或3个R⁹基团任选取代。

在另一实施方案中，R⁶是吡嗪基、嘧啶基或哒嗪基，其各自被1、2、或3个R⁹基团任选取代以及R⁴是甲基。

在另一实施方案中，R²是氢；R⁴是甲基；R¹是任选取代的烷基、环烷基、或杂环烷基，以及R⁶是被1、2、或3个R⁹基团任选取代的杂芳基。

在另一实施方案中，式IA的化合物选自：

在另一实施方案中，式IA的化合物选自：

在另一实施方案中，式IA的化合物选自：

2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-环戊基-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-4-甲基-8-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-4-甲基-8-(苯基甲基)-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；

2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(4-甲基-3-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(2-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(3-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-6-呋喃-3-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-6-异噁唑-4-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-6-呋喃-2-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	5-(2-氨基-8-乙基-4-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-基)噻吩-2-甲腈；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-嘧啶-5-基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-6-(1H-咪唑-5-基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1,3-噻唑-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-四唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；
	2-氨基-4,8-二乙基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；以及
2-氨基-8-环戊基-4-甲基-6-(1,3-噻唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。

在另一实施方案中，式IA的化合物是2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮（化合物A）或其药学上可接受的盐。

一般施用

在一方面中，本发明提供包含PI3K的抑制剂和式I的mTOR以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物。在某些其他具体的实施方案中，施用是口服途径。通过用于类似用途的任意可接受的施用方式或试剂能够以纯化形式或者如本文所述的合适组合物中进行式I的化合物、或它们的药学上可接受的盐的施用。因此，在相同或单独的媒介物中能够施用式I的化合物。施用能够为例如口服、鼻用、胃肠外（静脉内、肌肉内或皮下）、局部、透皮、阴道内、膀胱内、脑池内或经直肠，以固体、半固体、冻干粉末或液体剂型的形式，例如，片剂、栓剂、丸剂、弹性软和硬胶囊、粉末、溶液、混悬液或气雾剂等，特别是在适合于简单施用精确剂量的单位剂型。

组合物能够包括常见药物载体或赋形剂和式I的化合物作为活性剂，任选联合另一试剂，并且，此外，其可包括载体和佐剂等。

佐剂包括防腐剂、润湿剂、混悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、乳剂、和分散剂。通过各种抗菌和抗真菌剂能够确保预防微生物的作用，例如，对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。也可期望包括等张剂，例如糖、氯化钠等。通过使用延长吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶使能够延长可注射药物形式的吸收。

如果需要，本发明的药物组合物也可包含少量的辅助物质，例如润湿或乳化剂、pH缓冲剂、抗氧化剂等，例如，柠檬酸、去水山梨糖醇月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化的羟基甲苯等。

配制的选择取决于多种因素，例如药物施用的方式（例如，用于口服施用，则以片剂、烷基或胶囊的形式配制）和药物的生物利用度。最近，根据通过增加表面积，即，降低粒子尺寸能够增加生物利用度的原则，已经开发出药物制剂，特别是对于显示较差生物利用度的药物。例如，美国专利第4,107,288号描述具有10至1,000nm的尺寸范围的颗粒的药物制剂，其中活性材料支撑在大分子的交联基质上。美国专利第5,145,684号描述药物制剂的制备，其中在表面改性剂的存在下将药物研磨为纳米粒子（400nm的平均粒子尺寸），然后分散在液体介质中以得到表现出显著更高生物利用度的药物制剂。

适于胃肠外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散物、悬浮物或乳剂、和用于重新组成至无菌可注射溶液或分散物的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶液或赋形剂的例子包括水、乙醇、多醇（丙二醇、聚乙二醇、甘油等）、其合适的混合物、植物油（例如橄榄油）、和可注射有机酯，例如油酸乙酯。例如，通过使用诸如卵磷脂的涂层、在分散剂的情况下通过维持所需粒子尺寸、以及通过使用表面活性剂能够维持合适的流动性。

使用根据待治疗的疾病状况的严重程度能够调节的方便日剂量方案，一种具体施用途径是口服。

用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒。在这些固体剂型中，使用至少一种惰性常用赋形剂（或载体）来掺和活性化合物，例如柠檬酸钠或磷酸二钙或者(a)填料或增充剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、和硅酸；(b)粘结剂，例如，纤维素衍生物、淀粉、褐藻胶、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、和阿拉伯树胶；(c)湿润剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、褐藻酸、交联羧甲基纤维素钠、络合硅酸盐、和碳酸钠；(e)溶液迟凝剂，例如石蜡；(f)吸收促进剂，例如，季铵化合物；(g)润湿剂，例如，鲸蜡醇、和单硬脂酸甘油酯、硬脂酸镁等；(h)吸附剂，例如，高岭土和斑脱土；以及(i)润滑剂，例如，滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂硫酸钠或其混合物。在胶囊、片剂、和丸剂的情况下，剂型也可包括缓冲剂。

使用涂层和外壳，例如肠溶衣和本领域众所周知的其他物质能够制备如上所述的固体剂型。它们可含有镇静剂以及也能够具有使得这些组合物在肠道的某些部分中以延缓方式释放活性化合物或化合物的组合物。能够使用的嵌入的组合物的例子为聚合物和蜡。活性化合物也能够为微胶囊形式，如果合适，可使用一种或多种以上所提到的赋形剂。

口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、和酏剂。例如通过溶解、分散等本发明的化合物、或其药学上可接受的盐、和任选药物佐剂在诸如水、盐水、水性右旋糖、甘油、乙醇等的载体；诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺的增溶剂和乳化剂；油类，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油、和芝麻油；甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、和山梨聚糖的脂肪酸酯；或者这些物质的混合物等中从而形成溶液或悬浮物来制备这些剂型。

除了活性化合物之外，悬浮物可含有悬浮剂，例如，乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖、和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、斑脱土、琼脂和黄蓍胶、或这些物质的混合物等。

直肠施用的组合物是例如通过混合本发明的化合物与例如合适非刺激性赋形剂或载体（例如可可豆脂、聚乙二醇或栓剂蜡）制备的栓剂，其在常温下为固体，但在体温下为液体，因此，在合适的体腔中融化并释放其中的活性组分。

本发明的化合物的局部施用剂型包括软膏、粉末、喷雾、和吸入剂。在无菌条件下将活性组分与生理上可接受的载体和任意防腐剂、缓冲剂、或者如可能需要的推进剂一起掺和。眼用制剂、眼部软膏、粉末、和溶液也涵盖在本发明的范围内。

压缩的气体可用于分散在气雾剂中本发明的化合物。适于该目的的惰性气体是氮气、二氧化碳等。

通常，取决于施用的特定方式，药学上可接受的组合物含有约1%至约99%重量的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐、和99%至1%重量的合适药物赋形剂。在一个例子中，组合物为约5%至约75%重量的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐，其他为合适的药物赋形剂。

制备这些剂型的实际方法对于本领域技术人员而言是已知的、或者显而易见；例如，参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，(Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1990)。在任何情况下，待施用的组合物含有有效量的本发明的化合物、或其药学上可接受的盐以用于依照本发明的技术治疗病症。

在本文公开的药物组合物中，以有效量施用式I的化合物、或它们的药学上可接受的盐或溶剂化物，取决于包括待采用的具体化合物、代谢稳定性和化合物的作用时长、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、代谢率、药物联合、特定病况的严重程度、和接受治疗的宿主的各种因素，有效量可变化。能够以每天约0.1至约1,000mg范围的剂量水平来向患者施用式I的化合物。对于具有约70千克的体重的正常成年人来说，约0.01至约100mg/千克体重/天范围的剂量是示例。然而，使用的具体剂量能够改变。例如，剂量能够取决于大量因素，包括患者的需求、待治疗的病症的严重程度、以及待使用的化合物的药理作用。对于特定患者的最优剂量的决策是本领域普通技术人员众所周知的。

如果以固定剂量配制，这些联合产品采用在上述剂量范围内的本发明的化合物以及在批准剂量范围内的其他药物活性剂。当联合配制不合适时，可选择地将式I的化合物与已知的药学上可接受的试剂连续使用。

在一些实施方案中，有效量得到选自减小肿瘤尺寸、减少转移、完全缓解、部分缓解、稳定疾病、增加总反应率、病理完全反应的至少一种治疗作用。在一些实施方案中，有效量得到改善的临床受益率（CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6个月)。如与其他治疗相比，在一些实施方案中，临床受益率的改善为约20%或更高。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或更大。在一些实施方案中，治疗作用是增加总反应率。在一些实施方案中，增加总反应率是约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或更大。

在一些实施方案中，如与没有施用化合物A的其他治疗相比，使用a)化合物A或其药学上可接受的盐治疗获得可比较的临床受益率（CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6次给药周期)。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约20%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约30%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约40%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约50%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约60%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约70%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约80%。

在一些实施方案中，如与没有使用化合物A的其他治疗相比，使用a)化合物A或其药学上可接受的盐获得可比较的临床受益率（CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6个月)。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约20%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约30%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约40%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约50%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约60%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约70%。在一些实施方案中，临床受益率的改善为至少约80%。

在另一方面中，本文提供用于评估化合物A治疗患有外套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤的患者的治疗作用的方法，其包括测定和比较在患者血液或组织样品中至少一种生物标记的治疗前和治疗后水平。与对照相比，在患者血液或组织中生物标记水平的差异可提供化合物A的临床益处的指示。例如，在患者中生物标记的水平的增加或降低可以指示临床益处。该方法可提供定量结果，其使得可连续监控使用化合物A的治疗进展，从而例如测定病症是否改善或恶化。

在一些实施方案中，生物标记能够为如在血浆中发现的循环蛋白标志物，例如VEGF-A、PIGF、葡萄糖、胰岛素、循环和组织微小RNA(micro-RNA)；循环血浆DNA；在编码PI3K催化亚基的基因中突变；以及靶特异性DNA标志物（周围血液单核细胞、循环血癌细胞、和血浆DNA、和癌症样品）。在其他实施方案中，生物标记能够为癌症DNA标志物，例如在编码PI3K催化和/或调节亚基的基因中突变；或者沉默或激活补体事件（例如，PTEN、KRAS、BRAF、LKB-1）。在其他实施方案中，标志物能够为非癌症DNA标志物，例如由使基因型与化合物A的安全性、耐受性、药物代谢动力学、药效学、和可能的效能相关的SNP分析提供或与其相关；磷酸化标志物（癌症组织样品、周围血液单核细胞、和循环血癌细胞）；磷酸受体（pEGFR和pMET）；MAPK途径（pMEK和pERK）；PI3K途径（pAKT[两种表位]、pGSK3β、pPRAS40、p4EBP1、pFKHR、pNF-kB、pBAD、和pCaspase9）。评估在血液或组织样品中标志物的浓度的方法是熟练技术人员容易知道的。

一般合成

通过以下所述的合成工序能够制备本发明的化合物。在制备这些化合物中使用的起始材料和试剂可由市售供应商获得，例如AldrichChemical Co.(Milwaukee,Wis.)或者Bachem(Torrance,Calif.)；或者按照在以下参考文献示出的步骤，通过本领域熟练技术人员已知的方法来制备：例如Fieser和Fieser的Reagents for Organic Synthesis，1-17卷(John Wiley和Sons,1991)；Rodd的Chemistry of Carbon Compounds，1-5卷和增刊(Elsevier Science Publishers,1989)；Organic Reactions，1-40卷(John Wiley和Sons,1991)；March的Advanced OrganicChemistry,(John Wiley和Sons,第4版)，以及Larock的ComprehensiveOrganic Transformations(VCH Publishers Inc.,1989)。这些流程仅为能够合成本发明的一些方法的示意，以及鉴于该公开能够得到和由本领域技术人员建议这些流程的各种修订形式。如果需要，使用常规技术，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、层析等，可分离和纯化起始材料和反应的中间体。使用常规方式，包括物理接触和光谱数据可特征化这些材料。

除非另有相反说明，本文所述的反应发生在大气压下以及在约﹣78℃至约150℃范围的温度下，更具体而言，在约0℃至约125℃，以及更具体而言，在约室温（或环境温度），例如约20℃下。除非另有说明（如在氢化的情况下），所有反应在氮气气氛下进行。

通过本领域已知的技术能够制备前药。这些技术通常改变在给定化合物中合适的官能团。通过常规操作或者在体内，这些经修饰的官能团重新产生原来的官能团。根据常规方法可制备本发明的化合物的酰胺和酯。在T.Higuchi和V.Stella,“Pro-drugs as Novel DeliverySystems,”A.C.S.Symposium Series的14卷中，和在BioreversibleCarriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press,1987中提供对前药的透彻讨论，两者均通过引用方式并入本文以用于所有目的。

本发明的化合物、或者它们的药学上可接受的盐在它们的结构中可具有对称碳原子或者季铵化氮原子。通过本文所述合成方法可制备的式I的化合物可存在于单一立体异构体、外消旋物、以及对映异构物和非对映异构体的混合物中。化合物也可作为几何异构体存在。所有这些单一立体异构体、外消旋物及其混合物、和几何异构体旨在涵盖在本发明的范围之内。本发明的一些化合物可作为互变异构体存在。例如，在存在酮或醛处，分子可作为烯醇式存在；在存在酰胺处，分子可作为亚胺酸存在；以及在存在烯胺处，分子可作为亚胺存在。所有这些互变异构体均在本发明的范围内。尤其，咪唑-5-基和吡唑-5-基也能够分别以它们各自的互变异构形式咪唑-4-基和吡唑-3-基存在。无论使用何种结构或者何种术语，各互变异构体涵盖在本发明的范围内。

本发明也包括式I的化合物的N-氧化物衍生物和受保护的衍生物。例如，当式I的化合物含有可氧化的氮原子时，则通过本领域众所周知的方法氮原子能够转化为N-氧化物。当式I的化合物含有诸如羟基、羧基、硫醇的基团或含有氮原子的任何基团时，使用合适的“保护基团”或者“保护性基团”能够保护这些基团。合适的保护性基团的综合清单能够在T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,Inc.1991中找到，其公开全部通过引用方式并入本文中。通过本领域众所周知的方法能够制备式I的化合物的受保护的衍生物。

由立体异构体的外消旋混合物或者非外消旋混合物中制备和/或分开和分离单一立体异构体的方法是本领域众所周知的。例如，使用手性合成子或手性试剂可制备、使用常规技术可解析旋光活性(R)-和(S)-异构体。通过本领域普通技术人员所已知的方法可解析对映异构物（R-和S-异构体），例如通过：形成例如，通过结晶可分离的非对映异构体盐或络合物；通过形成非对映异构体衍生物，其可通过以下分离：例如结晶、一种对映异构物与对映异构物特异性试剂的选择性反应（例如酶氧化或还原），随后分离经修饰或未经修饰的对映异构物；或者在手性环境中气体-液体或者液相色谱，例如在手性支撑物上，例如具有结合的手性配基的二氧化硅或者在手性溶剂存在下。理解，在通过上述的分离步骤之一将所需对映异构物转化为另一化学实体处，可能需要进一步的步骤来释放所需对映异构体形式。可选择地，通过使用旋光活性试剂、底物、催化剂或溶剂的不对称合成；或者通过经不对称转型来转化一种对映异构物至另一种可合成具体对映异构物。对于对映异构物的混合物，其富集在特定对映异构物中，通过重结晶可进一步富集（伴随产量损耗）对映异构物的主要组分。

此外，本发明的化合物连同药学上可接受的溶剂，例如水、乙醇等能够存在于非溶剂化或者溶剂化形式中。通常，为了本发明，认为溶剂化形式等同于非溶剂化形式。

制备本发明的化合物的化学方法是本领域技术人员已知的。实际上，可能有超过一种制备本发明的化合物的方法。对于具体例子，参见M.Barvian等人，J.Med.Chem.2000,43,4606-4616；S.N.VanderWei等人，J.Med.Chem.2005,48,2371-2387；P.L.Toogood等人，J.Med.Chem.2005,48,2388-2406；J.Kasparec等人，Tetrahedron Letters2003,44,4567-4570；以及本文所引用的参考文献。也参见美国授权之前公布US2004/0009993A1(M.Angiolini等人)，其通过引用方式并入本文中，以及本文所引用的参考文献。以下例子示出但不限制本发明。本文引用的所有参考文献全部通过引用方式并入。

根据流程1能够制备本发明的化合物，其中R¹是任选取代的烷基；R²是氢或任选取代的烷基；R⁴是甲基或乙基;R⁶是苯基或杂芳基，其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团任选取代（如在本发明概要中所定义），以及R²是氢。

流程1

在室温下向在溶剂（例如水）中的市售2-甲基-2-异硫脲硫酸盐的溶液加入诸如碳酸钠的碱和式10的中间体。将反应混合物搅拌过夜左右。在中和之后，通过过滤收集11，并随后在真空下干燥。然后使用POCl₃处理11，将反应加热回流约2小时，然后在真空浓缩至干。1能够在不进一步纯化下直接用于下一反应中。

通过在溶剂（例如水）中一边加热下使式1的中间体与伯胺R¹NH₂反应来制备式2的中间体。然后在约0℃下在溶剂（例如甲醇）中使用一氯化碘来处理2，并根据需要使其反应过夜左右至完成以形成3。在完成后，使用丙酮研磨残渣。然后在碱（例如三乙胺）的存在下、以及在催化剂，例如Pd(OAc)₂和(+)BINAP的存在下，在诸如DMA的溶剂中使中间体3与乙酸乙酯反应。将反应加热至约100℃，并根据需要使其反应过夜左右至完成以形成4。然后任选通过柱层析法纯化4。

在室温下在诸如DIPEA的碱的存在下通过处理4和DBU来制备5。然后将反应混合物回流加热以及使其反应约15小时。在蒸发溶剂之后，使用丙酮研磨残渣，并通过过滤收集以得到5。

在室温下在诸如DCM的溶剂中，通过使5与诸如Br₂的溴化剂反应来制备6。然后将反应混合物搅拌大约过夜。将所得产物过滤，然后混悬在诸如DCM的溶剂中，并使用诸如三乙胺的碱处理。然后使用水洗涤混合物，并使用诸如Na₂SO₄的干燥剂干燥以得到6。

然后在室温下在诸如Pd(dpppf)的催化剂和诸如三乙胺的碱的存在下在诸如DME-H₂O混合物的溶剂中使用6和式R⁶B(OH)₂的硼酸（或酯）进行铃木偶联反应(Suzuki coupling)。将反应混合物加热回流约4小时。在冷却至室温之后，使用水和乙酸乙酯分层反应混合物。在分离之后，使用诸如Na₂SO₄的干燥剂干燥有机层以得到7。

然后在室温下边搅拌约4小时下在诸如DCM的溶剂中使用m-CPBA将7的甲基硫代基团氧化。在减压下去掉溶剂之后，在诸如二噁烷的溶剂在使用式R²NH₂的胺处理产物，并在室温下搅拌大约过夜以得到式I的化合物。

可选择地，根据流程2能够制备式I的化合物，其中R¹是任选取代的烷基；R⁴是甲基或乙基；R⁶是苯基或杂芳基，其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团（如本发明的概要所定义）任选取代，以及R²是氢。

流程2

通过使式8的中间体与纯POCl₃反应并一边加热下制备式9的中间体。然后在0℃下在诸如水或THF和三乙胺的溶剂中使用伯胺R¹NH₂来处理9以形成10。在减压下去除溶剂之后，然后在0℃下在诸如THF的溶剂中使用氢化铝锂来处理中间体10。在猝灭和水性激发(aqueous workup)之后，去除溶剂得到未进一步纯化的结晶11。在室温下在诸如二氯甲烷或氯仿的溶剂中使用二氧化锰(II)处理11，在过滤和去除溶剂下得到醛12。在回流THF中能够进行醛12和(乙氧甲酰基亚甲基)三苯基正膦的维蒂希反应以得到常见中间体4。使用在流程1中所描述的步骤，然后将4用于制备式I的化合物。

根据流程3能够制备本发明的化合物，其中R¹是任选取代的烷基；R⁴是甲基或乙基；R⁶是苯基或杂芳基，其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团（如在本发明的概要中定义）任选取代；以及R²是氢。

流程3

通过一边加热下在诸如水的溶剂中使用伯胺R¹NH₂与式13的中间体反应来制备式14的中间体。然后在约0℃下在诸如甲醇的溶剂中使用一氯化碘来处理14，并根据需要使其反应过夜左右至完成以形成15。在完成后，使用丙酮研磨残渣。然后在碱（例如三乙胺）的存在下、以及在催化剂，例如Pd(OAc)₂和(+)BINAP的存在下，在诸如DMA的溶剂中使中间体15与乙酸乙酯反应。将反应加热至约100℃，并根据需要使其反应过夜左右至完成以形成16。然后任选通过柱层析法纯化16。然后通过使用如在流程1中所述的相同反应条件由16能够制备式I的化合物（从由4制备5处开始）。

根据流程4能够可选择地制备本发明的化合物，其中R¹是任选取代的烷基；R⁴是甲基或乙基；R⁶是苯基或杂芳基，其各自被1、2、3、4或5个R⁹基团（如本发明的概要所定义）任选取代，以及R²是氢。

流程4

通过使式19的中间体与纯POCl₃反应并一边加热下制备式20的中间体。然后在0℃下在诸如水或THF和三乙胺的溶剂中使用伯胺R¹NH₂来处理20以形成21。在减压下去除溶剂之后，然后在0℃下在诸如THF的溶剂中使用氢化铝锂来处理中间体21。在猝灭和水性激发之后，去除溶剂得到未进一步纯化的结晶22。在室温下在诸如二氯甲烷或氯仿的溶剂中使用二氧化锰(II)处理22，在过滤和去除溶剂下得到醛23。在质子溶剂中在诸如碳酸钾或氢氧化钠的碱的存在下由23和芳基乙腈(arylacetonitrile)的克脑文盖尔缩合反应(Knovenegal-type condensation)提供环化亚胺24。在水解之前需要使用乙酸酐将亚胺乙酰化，在水性酸存在下和一边加热下发生水解以得到25。随后，在室温下使用m-CPBA能够将25氧化为对应的砜，并使用铵置换以得到I。

具体化合物的合成描述在WO20070444813，其全部通过引用方式并入。

实施例

通过化合物测定PI3K活性及其抑制的合适体外测定法是本领域已知的。使用在生物实施例1和2中描述的测定法中一种或多种已经测定式I的化合物。在癌症的治疗中测定体外效能的测定法是本领域已知的（也参见生物实施例，以下实施例3、4、和5）。

实施例1

阶段1评估患有晚期恶性肿瘤的患者口服施用的化合物A的安全性、药物代谢动力学(PK)和药效学的剂量-递增研究

在患有实体瘤或淋巴瘤的受试者中施用两种给药方案进行化合物A的阶段I，非随机化、开放性(open-label)剂量-递增研究以评估化合物A的安全性、PK、和药效学。

使用常见‘3+3’剂量-递增设计来治疗患者，在各给药方案中至多九个不同剂量水平，其同期组群为三至六个受试者。

在28天的周期中，使患者每日两次(bid)或每日一次(qd)接受5、10或50mg的化合物A。进行药物代谢动力学和药效学分析，并且评估每8周的肿瘤反应。

结果

使用化合物A给药96患者，包括83例具有实体瘤和13例具有淋巴瘤的患者。以bid给药方案(30-240mg/天)给药52例患者和qd给药方案给药31例患者（70-100mg/天，并且以50mg bid给药方案给药患有淋巴瘤的13例患者）。在bid方案中，在实现50mg bid的最高耐受剂量(MTD)下治疗25例受试者。最高给药剂量(MAD)是120mg bid。在qd方案下，MAD是100mg，而且实现的MTD是90mg。最常见的相关副作用事件（大于10%的患者）为恶心、痢疾、厌食症、升高肝脏酶、皮肤和皮下紊乱、和呕吐。级别≥3AST/ALT升高出现在四个患者（三患者开始为120mg bid以及一患者开始剂量为50mgbid）中。在bid和qd方案中随着剂量增加化合物A暴露增加。在给药之后中位值t_max是1-3小时。在稳态下平均t_1/2,z的范围为3至9小时。在化合物的重复剂量施用之后，在肿瘤和替代组织中PI3K和ERK途径信号的巨大药效调节明显。例如，由以50mg bid施用化合物A的五例患者中观察到不同实体瘤的受损组织活检中可见，pAKT-T308(57-71%)、p4EBP1(62-80%)、和pERK(53-80%)在给药后降低。11例患者研究≥16周以及17例患者治疗≥24周。一名具有外套细胞淋巴瘤(MCL)的患者表现出局部反应，并进行了12周期的治疗(图1)。一名具有III期MCL(RP LN，骨髓阴性)的75岁女性患者于2009年4月诊断出来，然后在2009年5月至8月间开始6周期的R-CHOP。在R-CHOP之后，继续进行利妥昔单抗的维持治疗。

结论

单一试剂化合物A的MTD经鉴定为50mg bid和90md qd。观察在实体瘤患者（具有延长疾病稳定性）和在淋巴瘤患者（在MCL中一名局部反应）中活性。在通常耐受较好剂量下化合物A在实体瘤和替代组织中表现出显著药效活性。

实施例2

阶段1在具有淋巴瘤的患者中，化合物A，经口服施用PI3K/mTOR抑制剂的安全性、药物代谢动力学和药效学的剂量-扩展群组研究

设计以下阶段1研究以评估作为连续日给药方案施用的化合物A在具有复发的或顽固性淋巴瘤的受试者的扩展群组中的安全性和药物代谢动力学。

如通过实施例5A的结果所表明，化合物A通常较好耐受50mg每日两次或90mg每日一次的最大耐受剂量。发现随着剂量增加，化合物A的血浆暴露水平增加。在最高耐受剂量下，每日一次和每日两次给药方案在稳态下产生类似的平均血浆暴露值。

患者和方法

研究设计

这是阶段1，在具有淋巴瘤的受试者中使用口服给予的化合物A作为单一试剂的开放性、非随机化试验。最高耐受剂量扩展群组计划的参与数为至少15名患者。

目的

主要目的是为了确定作为具有复发的或顽固性淋巴瘤的受试者的连续日给药方案、每日两次口服施用的连续日给药方案的安全性和耐受性。

次要目的是为了确定(a)连续每日给药的化合物A的血浆药物代谢动力学；以及(b)化合物A对肿瘤组织的药效作用。

试探性目的是为确定(a)在具有淋巴瘤的受试者中化合物A的药效作用；(b)对化合物A的早期效能数据（反应率）；以及(c)在每日两次重复施用之后化合物A的长期安全性和耐受性。

关键符合性标准

关键符合性包括以下：

●复发的或顽固性淋巴瘤的组织学经确认的诊断

●可测定的疾病

●充足骨髓功能，其定义为：

●ANC≥1000/mm3(慢性淋巴细胞性白血病，具有ANC≥500/mm3)

●血小板≥30,000/mm3

●血红蛋白≥8g/dL

●档案或新鲜肿瘤组织的可获得性

●之前未使用选择性PI3K抑制剂治疗

●书面同意书。

结果

在淋巴瘤群组中参与16例患者。早期数据显示2011年9月1日的截止日期。患者的基线特征表示在表2.1中。

表2.1

在十六次测定的受试者中感受到的最常见的副作用事件概述在表2.2中。

表2.2

^a MedDRA v.12.1优选的术语和NCI-CTCAE v.3.0分级

6例受试者的研究治疗细节概述在表2.3中。

表2.3

表2.4概述在评价功效的13例受试者中最佳反应。

表2.4.在评估功效的受试者中最佳反应^a

^a在完成作为连续每日给药方案的每日两次施用的化合物A的2周期（8周）之后疾病评价的受试者。

^b在周期2之后所达到的部分反应，目前在周期17。

^c通过周期14，一名患者维持疾病稳定。

^d在周期5之后所达到的部分反应，目前在周期7

图2示出在使用化合物A50mg口服每日两次(BID)进行每日治疗之后在周期1第1和27天（C1D1,D1D27）、以及周期2第22天（C2D22）化合物A的平均(SD血浆浓度。图2表明，在50mg BID每日剂量之后在参与该研究中淋巴瘤患者的药物暴露类似于在具有实体瘤患者中之前观察到的药物暴露（在虚线处显示的平均浓度）。在第27天的累积量(AUCtau)为约3倍，并且C2D22与C1D27的AUCtau比率(n=4)为0.91(64.4%)。

在表2.5中数据证实化合物A在外套细胞淋巴瘤中抑制PI3K和MAPK途径的能力。结果表明对PI3K和MAPK途径的巨大抑制、以及对Ki67增殖的几乎完全抑制。该发现也由图3反馈，该图3示出经化合物A治疗的淋巴瘤细胞的PTEN IHC和Ki67IF染色。利用标准化工序，使用抗-PTEN抗体（NCL-PTEN，克隆体28H6，稀释1/300，Novocastra Laboratories Ltd）在福尔马林固定、石蜡-嵌入的组织切片FFPE(5微米)中通过免疫组织化学来评估PTEN表达。连续切片5微米厚的冷冻保存的肿瘤组织样品，并转化为FFPE切片。

表2.5

总结

化合物A是双重PI3K/mTor抑制剂，其在具有淋巴瘤的患者中耐受性好。在具有淋巴瘤的患者中化合物A的药物代谢动力学性能与在具有实体瘤的患者中所观察到的一致。在PTEN缺乏外套细胞淋巴瘤患者中，PI3K和ERK途径信号的巨大药效调节是显著的。由于间接影响，出现MAPK途径抑制。如通过Ki67染色所显示，观察到对增殖的清楚完全的抑制。

实施例3

使用化合物A对淋巴组织增生恶性肿瘤的治疗

这是2阶段2期、非随机化、开放性、多中心研究。将患者分为3组之一：第1组登记具有复发的或顽固性(R/R)MCL的患者；第2组登记具有R/R级别1、级别2或级别3a FL的患者；第3组登记具有R/R CLL/SLL的患者；以及第4组登记具有R/R DLBCL的患者（这最后一组使用1-阶段设计）。根据FDA和人用药品管理委员会(Committee for Medicinal Products for Human Use(CHMP))指南，目标反应率是2期研究的标准主要功效终点。尽管诸如反应率的替代终点可能并不是评估靶向治疗的最佳测定值，但是药物能够导致肿瘤萎缩的证据被认为是抗肿瘤活性的充分证据，从而表明该新药值得进一步评价。

研究目的

该研究的主要目的是为了评价在具有以下复发的或顽固性淋巴瘤或白血病亚类之一的患者中化合物A的功效：MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL。该研究的次要目的是：(i)为了评价在经化合物A治疗的具有MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者中反应的持续时间、无恶化存活期(progression free survival)(PFS)和在6个月（24周）内具有PFS的患者比例；(ii)为了评价在具有MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者中化合物A的安全性和耐受性；以及(iii)为了进一步特征化在具有MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者中化合物A的血浆药物代谢动力学(PK)。探索性目的是(i)为了评估在具有MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者中化合物A的药效作用；以及(ii)根据癌症组织的分子形状以确定对化合物A反应和/或抵抗的预测性标志物。

研究设计

这是每日2次(bid)口服50mg，28天给药周期在具有复发的或顽固性(R/R)MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者中进行的化合物A的多中心、多国、非随机化、开放性、2-阶段、2期临床试验，该患者具有至少2次标准治疗方案失败经历。将患者分组至根据疾病分组的三组之一：

第1组：R/R MCL

第2组：R/R Grade1,2,或3a FL

第3组：R/R CLL或SLL

第4组：R/R DLBCL

西蒙的极大极小2阶段设计用于确定在经研究的1或多组疾病组中药物对批准的进一步研究是否有效；第4组(DLBCL)使用1-阶段设计。根据淋巴瘤(IWL)国际工作组和慢性淋巴细胞性白血病(IWCLL)工作组标准，通过研究者来评估目标反应。

研究群体

主要选择标准：

●经组织学和表型确认的外套细胞淋巴瘤(MCL)，其在抗肿瘤治疗之前复发或者顽固性至少2次但不多于4次。

●经组织学或细胞学确认的级别1、2或3a滤泡性淋巴瘤(FL)，其在抗肿瘤治疗之前复发或者顽固性至少2次但不多于6次。

●经组织学或细胞学确认的慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，该慢性淋巴细胞性白血病(CLL)在抗肿瘤治疗之前复发或者顽固性至少2次但不多于6次，并且其需要根据IWCLL标准治疗。

●经组织学或细胞学确认的小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)，在抗肿瘤治疗之前复发或者顽固性至少2次但不多于6次。

○顽固性疾病是指对标准治疗方案没有反应或者在6个月完成标准治疗方案。

●经组织学或细胞学确认的弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)，其在抗肿瘤治疗之前复发或者顽固性至少2次但不多于6次。

○顽固性疾病是指对标准治疗方案没有反应或者在6个月完成标准治疗方案。

●具有MCL、FL、SLL或DLBCL的患者必需具有通过计算机化断层显象(CT)（或者磁共振成像[MRI]，如果CT扫描不能进行）或者之前未经照射或在照射之后增加大小的造影剂增强性PET/CT在最长横径中测定≥1.5cm和在至少2处垂直尺寸中明确可测定的至少1处靶病变。推荐但不需要基线18-氟代-脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描术(FDG-PET)。

●MCL、FL和DLBCL需要至少150微米的最近保存或新鲜肿瘤组织的组织或者组织块。

●CLL/SLL至少需要外周血液血沉棕黄层样品。

主要排除标准

●在4周内使用细胞毒性化学疗法、生物试剂、研究型疗法治疗，或者在6周的研究登记期内使用亚硝基脲或丝裂霉素C治疗

●在2周、或者研究登记的药物或它的代谢物的5个半衰期（看哪个更长）内使用小分子激酶抑制剂治疗

●之前使用PI3K、mTOR或Akt抑制剂治疗。允许在他们的国家允许使用西罗莫司(temsirolimus)的患者中使用该药物对MCL的之前治疗。

●在参与的2周内放射治疗

●在16周的参与内自身干细胞移植

●之前的同种异体间移植。

●涉及中枢神经系统或柔脑膜

●肝炎B面抗原(HBsAg)或肝炎C抗体（抗-HCV）血清阳性

给药方案

所有患者每日两次服用化合物A（早上和晚上），如在《研究参考手册》中描述两次给药之间优选12(±1)小时的间隔。

无论因果关系是什么，在感受到1次或者多次级别≥2AE的患者中，可降低化合物A的1或2次给药水平。所有与级别≥2转氨酶升高、无法耐受的级别≥2皮疹和级别≥3副作用事件(AE)相关的化合物A需要降低剂量。需要剂量2次给药水平的患者由研究中淘汰。在治疗的给药周期1中出现的任何级别的肿瘤裂解综合征不需要降低剂量。

如果导致剂量降低的毒性的级别≤3以及在降低剂量水平的1个治疗给药周期之后不再复发，则允许再次升高一次给药水平。

直至任何与IMP相关毒性达到级别≤1或者基线，否则不能恢复化合物A的给药。

主要和次要端点

主要端点是客观反应率(ORR)，其是指如通过恶性淋巴瘤国际工作组反应标准(IWRC)或者通过恶性淋巴瘤的国际工作组反应标准(IWRC)和慢性淋巴细胞性白血病改进国际工作组(IWCLL)指南所定义的感受到完全反应/缓解(CR)或者部分反应/缓解(PR)的患者的比例。在CR评估之后，所有符合CR标准的具有MCL、FL、SLL或DLBCL的患者具有确认性FDG-PET扫描图不少于6周。除非通过包括分子分析的骨髓活检证实CR，认为牵涉具有预先处理骨髓的患者（通过活检、流式细胞计量术或IHC）为PR。

次要端点包括：(i)中位值PFS、在6个月（24周）处具有PFS的患者的比例、反应持续时间；(ii)安全性（AE和实验室参数）；以及(iii)在给药周期1、3、和6测定化合物A的血浆浓度。

评价方案

给药周期是指使用化合物A给药28天。AE数据的收集由同意通知书签订之时开始，以及在研究治疗的每一位置拜访时进行，并在研究治疗结束后进行30天。在位置拜访之间的规定间隔期下进行电话安全性评价。在给药周期1，第1天，开始化合物A之前，根据研究流程进行安全性评价（AE、生命体征、心电图[ECG]、眼科检查、实验室测试、和伴随药物）。

在2年的周期里或者直至疾病进展或由研究淘汰，在给药周期2的后期以及然后每3个给药周期进行肿瘤评价。继续进行研究超过2年的患者最少每6次给药周期进行一次肿瘤评价。

对于具有MCL、FL、CLL/SLL或DLBCL的患者，单独进行化合物A血浆浓度分析。在规定时间点下获得血液样品，并且如果可能，在有IMP相关的SAE处。

获得血液或经处理的血液、毛发、和肿瘤组织样品用于在限定的方案下分析各种设立的和探索性药效生物标记。当可能时，PD样品收集时间与规定的PK时间点相一致。

任选的研究用肿瘤活检可由同意的患者在规定的时间点下收集。最大取样是包括基线的3次活检时间点。分析肿瘤组织的与化合物A作用机制相关的生物标志。当收集任选的活检组织时，需要匹配血液和毛发取样。

在第一次给药化合物A之前，在由签订任选遗传药理学(PGx)知情同意书的患者上获得血液样品。收集PGx血液样品以研究作为与化合物A的药物代谢动力学或者药效学可变性相关的内在因素的药物代谢酶(DME)和/或药物转运蛋白。对于CLL患者，由知情同意的患者获得另外的口腔棉签用于基因型分型分析。PGx血液和口腔棉签也可用于基因分型和/或肿瘤基因组测序分析。对于PK/PD/PGx样品收集、制备、存储、和装运的详细说明提供在单独的《实验手册》的学习位置。

统计考虑

样品大小确定

根据以下假设，该研究采用对于各疾病组具有0.05的α和90%的效率的西蒙的极大极小2阶段设计。

当已经选入所需数量的有价值患者以及完成2次功效评价（在给药周期2和给药周期5完成处）时，在各疾病组内进行阶段1的分析。

第4组使用1-阶段设计(H00.1和Ha0.30)，选入33名有价值患者。

主要端点的分析

当选入所需数目的有价值患者时，在各疾病组内进行客观反应率(ORR)的主要功效分析。具体而言，主要功效分析的数据截止日期是指当所有患者已经进行至少6个月研究或者不在继续研究时的最早日期。针对每一疾病组定义这点。

功效群体定义为接受至少2个给药周期的化合物A，并提供基线和至少1次基线后肿瘤评价的所有经注册患者。也包括由于早期临床进展、毒性或死亡没有基线之后评价的患者。

基于在功效群体中具有客观反映(OR)的患者的比例来计算各疾病组的反应率，其具有对应95%CI。

次级端点的分析

使用基于功效群体的卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)方法来估算在6个月时无恶化存活期(PFS)中位值、和具有PFS的受试者的比例。通过系统器官分类和优选的条件指标AE和SAE的发生率。概述实验室测试结果。

对于安全性参数的分析，实验室在所有待治疗/安全群体中进行分析。所有待治疗/安全群体定义为暴露于IMP的所有经注册的患者，无论待施用的治疗量如何。

研究持续期

在化合物A施用之前，研究由28天筛选期组成，然后为具有28天治疗给药周期的治疗期、以及约30天的治疗后安全随访期。患者继续接受化合物A，直至符合研究淘汰标准，并且继续研究直至最后的治疗后回访或者无论何者更晚，直至与化合物A相关的毒性已经消失或者被认为不可逆转。

如果临床指定，如果在按照修订的IWRC或IWCLL指南的进行性疾病记录之前不再继续研究治疗，则在原始方案之后或之前，在治疗期之后获得疾病评估。

预期的参与期间为约24个月。

化合物A的剂量

所有患者每日两次（早上和晚上）服用化合物A，优选在两次给药之间间隔12(±1)小时。优选应当将50-mg剂量作为单一50-mg剂量强度胶囊施用。施用一杯（约8盎司(240mL)）水来服用化合物A，在给药之前至少2小时和之后1小时不允许进食；如果错过给药，可在常规给药时间之后至多4小时服药。不要在4小时时间窗之外给药或者在更远的时间下进行。如果患者在服用化合物A之后呕吐就不应当施用额外的剂量。患者可服用其他伴随药物（除了在施用化合物A同时使用水改变胃酸pH的药物）。在具体协议确定的拜访时在研究地点施用研究型药品；其他给药由自己施用。在研究拜访时将研究型药品发放至患者手中，并保存分配记录。在随后回访时，计数剩余的化合物A，并记录治疗依从性。

剂量推迟/改变

监控患者的副作用事件(AE)，同时记录至研究总，并告知他们的医生，一旦发现可能的任何新的或加重的AE就及时通知。作为一般途径，建议尽可能在毒性早期症状时使用支持疗法来治疗所有AE。

在毒性降低后重新增加剂量

取决于AE的严重程度，一旦AE减弱，则可重新增加一次患者的剂量水平。

药效学分析

通过研究者和赞助者、并在患者知情同意下，收集癌症组织、毛发、和血液（包括外周血液血沉棕黄层）来用于药效学分析。

研究可包括以下研究：在患者的癌症中预先存在的靶突变（PI3K催化和/或调节亚基）对反应、途径相关的蛋白的血浆水平波动（例如，VEGF-A、葡萄糖、和胰岛素）、在信号转导蛋白和脂质（例如，pAKT、pERK、pGSK3β、和PIP3）的磷酸化中药物诱导的变化的影响、以及在靶调节基因（例如，PTEN、KRAS、和LKB-1）中补体遗传性改变的贡献评价对功效的作用。

在药效分析收集的各样本类型中可分析的代表性候选生物标记提供如下：

循环蛋白标志物（血浆）

●VEGF-A、PIGF、葡萄糖、和胰岛素。

●循环和组织微小RNA。

●循环血浆DNA。

●在编码PI3K催化亚基的基因中突变。

●靶特异性DNA标志物（周围血液单核细胞）、循环血癌细胞、血浆DNA、和癌症样品。

癌症DNA

●在编码PI3K催化和/或调节亚基的基因中突变

●沉默或激活补体事件（例如，PTEN、KRAS、BRAF、LKB-1）。

非癌症DNA

●使基因型与化合物A的安全性、耐受性、药物代谢动力学、药效学、和可能的效能相关的SNP分析。

●磷酸化标志物（癌症组织样品、周围血液单核细胞、和循环血癌细胞）。

●磷酸受体（pEGFR和pMET）。

●MAPK途径（pMEK和pERK）。

●PI3K途径(pAKT[两个表位]、pGSK3β、pPRAS40、p4EBP1、pFKHR、pNF-kB、pBAD、和pCaspase9)。

在评估药效改变中，描述性统计（成组t检验）用于描述浓度-时间数据和用于分析相对于基线的改变。在合适处，可将数据与来自其他研究的数据合并作为荟萃分析(meta-analysis)的一部分。可联合可获得的药物代谢动力学和安全性数据来评估药效学分析的结果。

反应标准

外套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤(修订的IWG标准，2007)

完全缓解(CR)需要所有以下各项：

●疾病的所有临床迹象和疾病相关症状全部消失。

●通常亲FDG淋巴瘤存在于没有预先进行PET扫描的患者中或者在治疗之前FDG PET扫描为阳性时：只要PET为阴性，允许任何量的治疗后参与量。在没有预先进行PET扫描、或者如果预先PET扫描为阴性，可变亲FDG的淋巴瘤或者具有未知亲和力的FDG存在于患者中。

●在CT上所有淋巴结和结节质量必须退回至正常大小（对于比治疗之前大1.5cm的结节，它们的横径不超过1.5cm）。在治疗之前在长轴上1.1至1.5cm和短轴上大于1.0cm的之前所涉及的结节必须降低至在治疗之后在短轴上不超过1.0cm。

●如果在治疗之前在物理检查或CT扫描的基础上认为增长的话，脾脏和/或肝脏在物理检查时应当不明显以及通过显像研究应当认为为正常大小，并且与淋巴瘤相关的结节应当消失。然而，由于认为大小正常的脾可能仍然含有淋巴瘤，而增长的脾可以反馈解剖、血液体积的变化，造血生长因子的用途、或者其他非淋巴瘤的原因，对脾相关的测定不一定可靠。

●如果在治疗之前骨髓参与淋巴瘤，则在骨髓活检重复样品中必须清除渗入物。关于该测定的活检样品必须充足（目标为至少20mm单边核心）。如果通过形态学无法确定样品，则通过免疫组织学应当为阴性。通过免疫组织化学为阴性、但通过流式细胞计量术正式有少量克隆的淋巴细胞的样品认定为CR，直至可以得到证实患者结果明显差异的数据。

部分缓解(PR)需要所有以下各项：

●在至多6个的最大明显结节的SPD或结节质量达至少50%降低。这些结节或质量应当进行选择，如果：在至少2个垂直尺寸下它们明显可测量；它们来自身体的不同区域；以及无论何时涉及这些位置时，它们包括疾病的纵膈和腹膜后区域。

●其他结节、肝脏或脾脏的大小没有增加。

●脾脏和肝脏结节在它们SPD中、对于单一结节，最大横径中必须减少至少50%。

●除了脾脏和肝脏结节外，其他器官的参与通常有价值，并且不是可测定的疾病。

●如果样品在处理之前为阳性，则骨髓评估与PR的测定无关。然而，如果为阳性，则应当规定细胞类型（例如，小肿瘤B细胞）。通过之前所提到的标准具有CR的患者、但他具有持续形态上骨髓侵犯被认为部分反应者。在治疗之前骨髓侵犯导致临床CR、但在治疗之后没有评价骨髓的情况下，认为患者为部分反应者。

●没有疾病的新位置。

●通常的亲FDG淋巴瘤。对于没有治疗前PET扫描或者如果在治疗之前PET扫描为阳性的患者，则治疗后PET扫描应当在至少1个之前所侵犯的位置处为阳性。

●可变亲FDG淋巴瘤/FDG亲和力未知。对于没有治疗前PET扫描、或者如果治疗前PET扫描为阴性的患者，应当使用CT标准。

慢性淋巴细胞性白血病

完全缓解(CR)需要所有以下各项：

●外周血液淋巴细胞（通过血液和分类计数评估）小于4×10⁹/L(4000/μL)。

●如果基线扫描图不正常，通过物理检查和显像没有显著淋巴结病（淋巴结的直径>1.5cm）。

●如果基线扫描图不正常，通过物理检查和显像没有肝肿大或脾肿大。

●没有全身症状（症状B）。

●血细胞计数大于以下值：

○不需要外源性生长因子下，嗜中性白细胞大于1.5×10⁹/L(1500/μL)。

○不需要外源性生长因子下，血小板大于100×10⁹/L(100000/μL)。

○不需要输血血红细胞或者需要外源性红细胞生成素下，血红蛋白大于110g/L(11.0g/dL)。

●骨髓穿刺液和活检必须具有以下发现：

○长久正常细胞。

○小于30%的有核细胞成为淋巴细胞。

○无B-淋巴结节（通过IHC证实）。

轻微后遗症(MRD)：通过4色流式细胞计量术(MRD流式)或者等位基因特异性寡核苷酸PCR，应当评估MRD的CR的性质。在没有MRD下，当患者具有小于1CLL细胞/10000白血球的血液或骨髓时，患者被认为具有CR。如果在之前的3个月内患者没有接受单克隆抗体（例如阿仑单抗,利妥昔单抗），则血液能够用于进行该评价。如果在过去的3个月之内患者已经接受单克隆抗体，则骨髓必须用于MRD评价。

具有不完全骨髓复原的完全反应(CRi)：符合CR的所有标准的患者，但其具有细胞减少的骨髓和持久缺血或者血小板减少症或与CLL无关的嗜中性白血球减少症，但药物毒性是次要的。如果骨髓细胞减少，在4周之后进行4次重复的测定，或者直至恢复外周血细胞计数。

结节部分反应(nPR)：满足CR的所有标准的患者，但他具有通过IHC的B-淋巴结的骨髓迹象。

部分缓解(PR)需要：

●血细胞计数应当显示以下结果之一：

○不需要外源性生长因子下，嗜中性白细胞大于1.5×109/L(1500/μL)。

○不需要外源性生长因子下，血小板大于100×109/L(100000/μL)或者相对于基线50%改善。

○不需要输血血红细胞或者需要外源性红细胞生成素下，血红蛋白大于110g/L(11.0g/dL)或者相对于基线的50%改善。

●以及以下三种结果中两者：

○降低血淋巴细胞的数目由治疗前的值至50%或更多。

○通过物理检查或显像中淋巴结病的减少，如通过以下定义：

■淋巴结尺寸增加50%或更多，在至多6个淋巴结的总产物、或者在现有治疗检测的最长淋巴瘤的最大直径。

○在任何淋巴结上没有增加、以及没有新的增大的淋巴结。

●在小淋巴结(<2cm)中，小于25%的增加不被认为是显著增加。

●通过物理检测或显像脾肿大和肝肿大减低50%或更多。

为了清楚和便于理解，上述发明已经一定程度详细示意和示例。参照各种具体实施方案和技术描述本发明。然而，应当理解，可进行许多修改和变更，但仍在本发明的精神和范围内。对本领域技术人员显然，可在所附权利要求书的范围内进行修改和变更。因此，理解，上述描述旨在示意而非限制。因此，不应当参照上述说明书，而应当参照上述所附权利要求书以及这些权利要求被赋予的等同形式的全部范围来决定本发明的范围。在该申请中所引用所有专利、专利申请和出版物全部并入用于所有目的，其与各单独的专利、专利申请或出版物单独表示的范围相同。

Claims (26)

1.一种在患者中治疗癌症的方法，其包括向所述患者施用有效量的式IA的化合物：

或其代谢物或者药学上可接受的盐；其中：

R¹是烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基、或杂芳基烷基；

R²是氢或烷基；

R⁴是烷基；

R⁵是氢；和

R⁶是苯基、酰基、或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被1、2、3、4、或5个R⁹基团任选取代；以及

当存在时，每个R⁹独立地为卤代、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基、氨基烷基、环烷基、芳基、芳基烷基、芳氧基、杂环烷基、或杂芳基，以及其中在R⁹内单独或者作为另一基团一部分的所述环烷基、芳基、杂环烷基、和杂芳基独立地被选自卤代、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、氨基、烷基氨基、和二烷基氨基的1、2、3、或4个基团任选取代，

其中所述癌症选自由复发的或顽固性NHL、MCL、FL、CLL/SLL、和DLBCL组成的组。

2.权利要求1所述的方法，其中在式IA的化合物中，R¹是烷基、环烷基、杂环烷基烷基、或芳基烷基；R₂是氢或烷基；R⁴是烷基；R⁵是氢；R⁶是苯基或杂芳基，其中所述苯基和杂芳基被一个、两个、或三个R⁹基团任选取代；当存在时，每个R⁸独立地为氨基、烷基氨基、二烷基氨基、或卤代；以及当存在时，每个R⁸独立地为烷基、芳基烷基、氰基、芳基、烷氧基羰基。

3.权利要求1所述的方法，其中在式IA的化合物中，R⁴是甲基。

4.权利要求1所述的方法，其中在式IA的化合物中，R¹是烷基、环烷基、或杂环烷基。

5.权利要求1或4所述的方法，其中在式IA的化合物中，R¹是烷基。

6.权利要求1-5所述的方法，其中在式IA的化合物中，R⁶被1、2、或3个R⁹基团任选取代的杂芳基。

7.权利要求1-6所述的方法，其中在式IA的化合物中，R⁶是吡唑基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、或四唑基；其各自被1、2、或3个R⁹基团任选取代。

8.权利要求1-7所述的方法，其中在式IA的化合物中，R⁶是吡唑-3-基、吡唑-4-基、吡唑-5-基、咪唑-2-基、咪唑-4-基、咪唑-5-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、噁唑-2-基、噁唑-4-基、噁唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、1,2,3-噁二唑-4-基、1,2,3-噁二唑-5-基、1,3,4-噁二唑-2-基、1,2,4-噁二唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、三唑-4-基、三唑-5-基、或四唑-5-基；其各自被1、2、或3个R⁹基团任选取代。

9.权利要求1-8所述的方法，其中在式IA的化合物中，R²是氢，R⁴是甲基，R¹是任选取代的烷基、环烷基、或杂环烷基，以及R⁶是被1、2、或3个R⁹基团任选取代的杂芳基。

10.权利要求1所述的方法，其中所述式IA的化合物选自：

2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-环戊基-4-甲基-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-4-甲基-8-(1-甲基乙基)-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-4-甲基-8-(苯基甲基)-6-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(4-甲基-3-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(2-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(3-噻吩基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-6-呋喃-3-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-6-异噁唑-4-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-6-呋喃-2-基-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 5-(2-氨基-8-乙基-4-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-基)噻吩-2-甲腈； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-嘧啶-5-基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-6-(1H-咪唑-5-基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-1,2,3-三唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1,3-噻唑-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-四唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮； 2-氨基-4,8-二乙基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮；以及 2-氨基-8-环戊基-4-甲基-6-(1,3-噻唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。

11.权利要求1-10所述的方法，其中所述式IA的化合物是2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

12.一种在人患者中治疗淋巴组织增生恶性肿瘤的方法，其包括向所述患者施用有效量的2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐；其中所述方法包括至少一个给药周期，其中所述给药周期为28天的时间。

13.权利要求12所述的方法，其中以约50mg BID施用2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

14.权利要求13所述的方法，其中所述淋巴组织增生恶性肿瘤选自由复发的或顽固性NHL、MCL、FL、CLL/SLL和DLBCL组成的组。

15.权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述有效量得到选自由减小肿瘤尺寸、减少转移、完全缓解、部分缓解、稳定疾病、增加总反应率、病理完全反应组成的组的至少一种治疗作用。

16.权利要求1-15中任一项所述的方法，其中如与其他治疗相比，根据等式CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6个月），所述有效量得到改善的临床受益率（CBR)。

17.权利要求15所述的方法，其中所述临床受益率的改善为约20%或更高。

18.权利要求17所述的方法，所述治疗作用是增加总反应率。

19.权利要求18所述的方法，其中所述增加总反应率为约10%或更大。

20.权利要求19所述的方法，其中如与没有施用化合物A的其他治疗相比，根据等式CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6次给药周期），使用a)化合物A或其药学上可接受的盐治疗获得可比较的临床受益率（CBR)。

21.权利要求19所述的方法，其中所述临床受益率的改善为至少约20%。

22.权利要求21所述的方法，其中如与没有使用化合物A的其他治疗相比，使用a)化合物A或其药学上可接受的盐获得可比较的临床受益率（CBR=CR（完全缓解）+PR（部分缓解）+SD（稳定疾病）≥6个月)。

23.权利要求22所述的方法，其中所述临床受益率的改善为至少约20%。

24.一种在人患者中用于治疗淋巴组织增生恶性肿瘤的组合物，所述组合物包含有效量的2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

25.权利要求24所述的组合物，其中以约50mg BID的剂量配制所述2-氨基-8-乙基-4-甲基-6-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮或其药学上可接受的盐。

26.权利要求24或25所述的组合物，其中所述淋巴组织增生恶性肿瘤选自由复发的或顽固性NHL、MCL、FL、CLL/SLL和DLBCL组成的组。

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