CN103483462A - 一种可口革囊星虫多糖的制备方法及其抗败血症应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可口革囊星虫多糖的制备方法及可口革囊星虫多糖的应用，可口革囊星虫粉先灭内源酶，再通过枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶组成的组合酶酶解，酶解液三级过滤后，真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖，该制备方法制作简单，省却了脱蛋白工艺和乙醇醇沉工艺，缩短生产周期，有利于减排节能和保护环境，酶解效果仍较好，得到的可口革囊星虫多糖中多糖含量仍达到50～70%。该可口革囊星虫多糖具有抗败血症的作用。

Description

一种可口革囊星虫多糖的制备方法及其抗败血症应用

技术领域

本发明涉及星虫多糖的制作方法，具体涉及一种可口革囊星虫多糖的制备方法及可口革囊星虫多糖在抗败血症的应用。

背景技术

可口革囊星虫（Phascolosoma esculenta），隶属于星虫动物门，为我国土著种，广泛分布于长江口以南的沿海地区，产量丰富。可口革囊星虫是高蛋白低脂肪的海洋生物。我国多种本草中记载了其食用和药用价值, 是我国民间传统药食滋补佳品,有些地区用其代替中药冬虫夏草。可口革囊星虫富含蛋白质和多糖等多种活性物质, 能够调节机体多种机能。长期以来，可口革囊星虫主要用于食用，但公开号CN102153666A的发明专利申请，公开了海洋星虫多糖的制备方法和在抗疲劳功能中的应用，其制备方法是星虫原料中加入碱溶液或碱性下的胰酶溶液，然后加热提取得到粗多糖，该发明专利申请中还公开了用三氯乙酸脱去星虫蛋白和乙醇醇沉工艺（一般需过夜或静置12h），脱蛋白后星虫多糖含量可以达到80%以上。该发明专利申请公开了星虫多糖具有抗疲劳的作用，具体可以增加小鼠游泳时间等。

发明内容

本发明的目的是提供一种可口革囊星虫多糖制备方法，该方法省却了脱蛋白工艺和乙醇醇沉工艺，制作简单，得到的可口革囊星虫多糖中多糖含量仍达到50～70%。本发明还公开了可口革囊星虫多糖具有抗败血症的作用。

本发明所要解决的技术问题是一种可口革囊星虫多糖的制备方法，步骤如下：

a、将去杂、去内脏的可口革囊星虫洗净后粉碎，在100℃温度下灭内源酶10min，得到可口革囊星虫粉； 

b、在可口革囊星虫粉中加入蒸馏水和组合酶，搅拌均匀为可口革囊星虫溶液，可口革囊星虫溶液在45～55℃温度条件下酶解1.5～2.5h，酶解后在85℃下灭酶15min，灭酶后用80～100目过滤得到酶解液，其中可口革囊星虫溶液中可口革囊星虫粉与蒸馏水的重量比为1：5～10，可口革囊星虫溶液中组合酶的重量百分终浓度为0.1～0.5%，组合酶由重量比1：1的枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶配制而成；

 c、将上述酶解液用孔径0.45mm微孔滤膜过滤，滤液再用截留分子量为5000~10000 Da的超滤膜超滤得到超滤液，超滤液真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖。

可口革囊星虫多糖在制备抗败血症药物中的应用。每天口服剂量可以是100～500mg/day kg BW等。

与现有技术相比本发明的优点在于一种可口革囊星虫多糖的制备方法及可口革囊星虫多糖的应用，可口革囊星虫粉先灭内源酶，再通过枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶组成的组合酶酶解，酶解液三级过滤后，真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖，该制备方法制作简单，省却了脱蛋白工艺和乙醇醇沉工艺，缩短生产周期，有利于减排节能和保护环境，酶解效果仍较好，得到的可口革囊星虫多糖中多糖含量仍达到50～70%。该可口革囊星虫多糖具有抗败血症的作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

将可口革囊星虫去泥沙、内脏等杂质，洗净后磨成粉，在100℃温度下灭内源酶10min，冷却后得到可口革囊星虫粉10公斤；在可口革囊星虫粉中加入75公斤蒸馏水和0.2公斤组合酶（重量比1：1的枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶配制），搅拌均匀为可口革囊星虫溶液，可口革囊星虫溶液在45～55℃温度条件下酶解1.5h，酶解后在85℃下灭酶15min，灭酶后用80～100目过滤得到酶解液；将酶解液用孔径0.45mm微孔滤膜过滤，滤液再用截留分子量为5000~10000 Da的超滤膜超滤得到超滤液，超滤液真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖，测定可口革囊星虫多糖中多糖含量为62%。

实施例2

与实施例1基本相同，所不同的只是蒸馏水为50公斤，组合酶为0.07公斤，酶解时间为2.5h，可口革囊星虫多糖中多糖含量为50%。

实施例3

与实施例1基本相同，所不同的只是蒸馏水为100公斤，组合酶为0.54公斤，酶解时间为2.0h，可口革囊星虫多糖中多糖含量为70%。

应用例

将300只小鼠随机分成星虫多糖组和对照组，每组各150只，星虫多糖组用上述实施例1的可口革囊星虫多糖连续灌胃30天，(200mg/day kg BW)，对照组用200 mg/day kg BW生理盐水连续灌胃30天，灌胃结束将小鼠用80 mg/kg的戊巴比妥钠麻醉，切开腹腔取出盲肠，在回盲瓣下用棉线结扎，结扎部分的盲肠采用22号针扎两次，制备得到成熟的小鼠败血症模型，将盲肠放回腹腔，缝合腹腔，得到败血症小鼠模型。1、对建立的败血症小鼠模型，取星虫多糖组和对照组各50只，每天观察一次小鼠的存活情况并记录，持续8天；8天后对照组败血症小鼠模型全死亡，星虫多糖组败血症小鼠模型18只存活，说明星虫多糖可以提高患败血症小鼠的存活率，存活率达到42%。2、对建立的败血症小鼠模型，取星虫多糖组和对照组各50只，观察 3天后存活的小鼠，取小鼠全血并摘取小鼠肝和脾组织，分别对肝、脾和血各组织匀浆以后，涂布平板，37 °C培养18 h，计算每个样本的菌落数，结果星虫多糖组败血症小鼠模型的小鼠菌落数：肝组织菌落数平均为17500±531个/毫克组织，脾组织菌落数平均为51000±648个/毫克组织，血组织菌落数平均为171000±862个/毫克组织；对照组败血症小鼠模型的小鼠菌落数：肝组织菌落数平均为43200±963个/毫克组织，脾组织菌落数平均为84600±1854个/毫克组织，血组织菌落数平均为697000±3731个/毫克组织；说明可口革囊星虫多糖可以降低败血症小鼠的致病菌数。3、对建立的败血症小鼠模型，取星虫多糖组和对照组各50只， 观察24 h后取活着的小鼠全血，在血中加抗凝剂，3500 rpm离心15 min，取血浆，采用酶联免疫吸附分析检测促炎症因子白介素1β和肿瘤坏死因子α，抗炎症因子白介素10的表达，结果星虫多糖组败血症小鼠模型的小鼠血浆中：白介素1β平均为665±31pg/ml，肿瘤坏死因子α平均为574±47pg/ml，白介素10平均为951±62pg/ml；对照组败血症小鼠模型的小鼠血浆中：白介素1β平均为1131±91pg/ml，肿瘤坏死因子α平均为1263±89pg/ml，白介素10平均为1013±93pg/ml；说明可口革囊星虫多糖可明显降低败血症小鼠中促炎症因子白介素1β和肿瘤坏死因子α在血浆中的表达，而不影响抗炎症因子白介素10的表达。

毒理学检测

采用1000 mg/day kg BW和 10000 mg/day kg BW两种剂量的可口革囊星虫多糖连续对小鼠灌胃30天，结果1000 mg/day kg BW剂量灌胃的小鼠未显示出明显的毒性迹象，10000 mg/day kg BW剂量灌胃的小鼠未发生死亡。

Claims (2)

1.一种可口革囊星虫多糖的制备方法，其特征在于步骤如下：

a、将去杂、去内脏的可口革囊星虫洗净后粉碎，在100℃温度下灭内源酶10min，得到可口革囊星虫粉； 

b、在可口革囊星虫粉中加入蒸馏水和组合酶，搅拌均匀为可口革囊星虫溶液，可口革囊星虫溶液在45～55℃温度条件下酶解1.5～2.5h，酶解后在85℃下灭酶15min，灭酶后用80～100目过滤得到酶解液，其中可口革囊星虫溶液中可口革囊星虫粉与蒸馏水的重量比为1：5～10，可口革囊星虫溶液中组合酶的重量百分终浓度为0.1～0.5%，组合酶由重量比1：1的枯草杆菌蛋白酶和Alacase蛋白酶配制而成；

 c、将上述酶解液用孔径0.45mm微孔滤膜过滤，滤液再用截留分子量为5000~10000 Da的超滤膜超滤得到超滤液，超滤液真空浓缩干燥得到可口革囊星虫多糖。

2.可口革囊星虫多糖在制备抗败血症药物中的应用。