CN103429076B - 新颖的抗真菌组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及新颖的抗真菌组合物，及其在处理农产品中的用途。
Description
技术领域
本发明公开了控制植物疾病和预防作物微生物腐败（spoilage）的新颖的抗真菌组合物。
发明背景
据估计世界作物产量的约25%由于微生物腐败而损失，其中真菌导致的腐败是迄今为止最严重的原因。从经济学观点以及人道主义观点（humanepoint）来看，预防食品腐败都非常重要。毕竟世界上许多地方的人在遭受饥饿。
在抵抗植物和作物疾病以及减轻它们对产量和品质造成的损伤方面的成功大幅取决于杀真菌剂的及时应用。由于抗性现象的发生，许多杀真菌剂（例如苯并咪唑）的长期和频繁使用促成了它们有效性的降低。
一类重要的杀真菌剂是三唑（triazoles）。提出的第一种三唑是三唑酮（triadimefon）。这种三唑于1976年由拜耳首次提出（见Kucketal.,1987）。三唑酮在植物中提供治疗活性以及保护活性、低应用率（lowapplicationrates）和极佳的再分布（redistribution）。过去二十年间提出了其他的三唑杀真菌剂，它们具有改进的效能和植物安全性（例如氟环唑（epoxiconazole））、更宽的有效谱（例如丙环唑（propiconazole）、戊唑醇（tebuconazole））或专门的应用（例如用于种子处理的苯醚甲环唑（difenoconazole）和灭菌唑（triticonazole））（见Kucketal.,1987）。除了在保护农产品方面的用途——例如保护收获的水果或蔬菜免受致植物病的真菌（见EP2036438A1）或保护谷物免受真菌毒素污染（见WO2007/009969）之外，三唑还被用于保护食品免受真菌腐蚀（见EP0101102A2）。
然而，三唑杀真菌剂在其发展和维持中仍未对挑战免疫。它们对植物具有众所周知的副作用。应用至幼芽和根上常常降低伸长并导致叶更小、更厚和更绿。经处理的植物可能在衰老方面被延迟，根据作物的不同这会阻碍收获或提高产量（见Buchenauer,1987）。
更大的担心是抗性的发生，因为三唑杀真菌剂具有许多与苯并咪唑相同的特性。对三唑杀真菌剂的抗性最初在白粉病中发生，也在其他疾病中观察到过（见Kucketal.,1987；Buchenauer,1987；Maetal.,2002）。另外，尽管三唑杀真菌剂的开创为子囊菌（Ascomycete）和担子菌（Basidiomycete）疾病提供了有效的、系统性的杀真菌剂解决方案，但是破坏性的卵菌（Oomycete）疾病例如马铃薯晚疫病（potatolateblight）和葡萄霜霉病（grapedownymildew）的控制受到限制，并且（由疫霉属（Phytophthora）和腐酶属（Pythium）导致的）长成的植物的根部腐朽和系统性霜霉病完全不能通过应用三唑杀真菌剂来控制。
几十年来，多烯大环内酯抗霉菌剂那他霉素（natamycin）已被用于预防食品如乳酪和香肠上的真菌生长。例如，在EP0748588A1中描述了包含多烯抗真菌剂和咪唑抗真菌剂的真菌组合物用于处理食品和农产品的用途。通过使用Streptomycesnatalensis发酵生产的这一天然防腐剂在全世界被广泛用作食物防腐剂，并且在食品工业中具有安全使用的悠久历史。其针对所有已知的食物腐败真菌都非常有效。尽管那他霉素在例如乳酪工业中被应用多年，但是迄今为止从未观察到抗性真菌物种的发生。
因此可以得出结论：对更有效的用于处理植物和作物中的真菌生长和植物和作物上的真菌生长的抗微生物组合物（例如抗真菌组合物）具有严重的需求。
发明内容
本发明通过提供含有多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的新的协同抗微生物（例如抗真菌）组合物，解决了上述问题。在本文中使用时，术语“协同的”表示组合使用时抗真菌化合物的组合效果大于他们各自使用时的效果之和。
通常，两种活性成分的协同活性可以例如使用处理交互作用层（treatmentinteractionstratum，见Slinker，1998）在方差分析模型中测试。相对有效性可以通过下式计算：（（未经处理的对照的进化状态值–组合物的进化状态值）/（未经处理的对照的进化状态值））×100。然后可以通过下式计算交互作用系数：（（化合物A+化合物B的组合的相对有效性）/（化合物A的相对有效性+化合物B的相对有效性））×100。大于100的交互作用系数表示化合物之间的协同作用。
或者可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉菌生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的抗真菌活性（以%计）。可以根据Colby方程（Colby，1967）计算包含两种活性成分的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性（E，以%计）：E=X+Y–[（X·Y）/100]，其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以%计）。如果组合的观察到的抗真菌活性（O，以%计）超出组合的预期抗真菌活性（E，以%计）并且因而协同因子O/E>1.0，那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。
在本发明的一个实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物选自由吲唑磺菌胺（amisulbrom）、氧环唑（azaconazole）、联苯三唑醇（bitertanol）、糠菌唑（bromuconazole）、环丙唑醇（cyproconazole）、苄氯三唑醇（diclobutrazol）、苯醚甲环唑（difenoconazole）、烯唑醇（diniconazole）、高效烯唑醇（diniconazole-M）、氟环唑（epoxiconazole）、乙环唑啉（etaconazole）、腈苯唑（fenbuconazole）、三氟苯唑（fluotrimazole）、氟喹唑（fluquinconazole）、氟硅唑（flusilazole）、粉唑醇（flutriafol）、呋菌唑（furconazole）、顺式呋菌唑（furconazole-cis）、己唑醇（hexaconazole）、环菌唑（huanjunzuo）、亚胺唑（imibenconazole）、种菌唑（ipconazole）、叶菌唑（metconazole）、腈菌唑（myclobutanil）、戊菌唑（penconazole）、丙环唑（propiconazole）、丙硫菌唑（prothioconazole）、喹唑（quinconazole）、硅氟唑（simeconazole）、戊唑醇（tebuconazole）、四氟醚唑（tetraconazole）、丁三唑（triazbutil）、灭菌唑（triticonazole）、烯效唑（uniconazole）和烯效唑-P（uniconazole-P）组成的组。在一个优选的实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物选自由联苯三唑醇、环丙唑醇、苯醚甲环唑、氟环唑、腈苯唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、叶菌唑、腈菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、戊唑醇、四氟醚唑、灭菌唑和烯效唑组成的组。在一个进一步更优选的实施方式中，至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物选自由苯醚甲环唑、氟环唑、氟喹唑、氟硅唑、粉唑醇、丙环唑、丙硫菌唑、戊唑醇和四氟醚唑组成的组。在一个实施方式中，组合物可还含有两种或更多不同的来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物。应当理解，来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的衍生物（包括但不限于来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的盐或溶剂合物）或来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的经修饰的形式也可以应用在本发明的组合物中。含有三唑杀真菌剂例如丙环唑的商业产品的例子是具有以下商品名的产品：Tilt（丙环唑）、Propimax（丙环唑）、Bumper（丙环唑）、Quilt（丙环唑+嘧菌酯）或Stratego（丙环唑+肟菌酯）。含有三唑杀真菌剂如戊唑醇的商业产品的例子是具有以下商品名的产品：Folicur（戊唑醇）、Orius（戊唑醇）、Uppercut（戊唑醇）或HeadlineSBR（戊唑醇+吡唑醚菌酯）。含有三唑杀真菌剂如四氟醚唑、叶菌唑或丙硫菌唑的商业产品的例子分别是具有以下商品名的产品：Domark（四氟醚唑）、Twinline（叶菌唑+吡唑醚菌酯）或StrategoYLD（丙硫菌唑+肟菌酯）或Proline（丙硫菌唑）。所述商业产品可以被并入本发明中。
在一个实施方式中，多烯抗真菌化合物选自由以下化合物组成的组：那他霉素、制霉菌素（nystatin）、两性霉素B、三烯菌素（trienin）、意北霉素（etruscomycin）、菲律宾菌素（filipin）、钦氏菌素（chainin）、制皮菌素（dermostatin）、lymphosarcin、杀念珠菌素（candicidin）、金色制霉素（aureofungin）A、金色制霉素B、哈霉素（hamycin）A、哈霉素B和鲁斯霉素（lucensomycin）。在一个优选的实施方案中，多烯抗真菌化合物是那他霉素。在一个实施方案中，组合物也可含有两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯抗真菌化合物的衍生物（包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂合物）或经修饰形式的多烯抗真菌化合物也可以在本发明的组合物中应用。含有那他霉素的商业产品的一个例子是商品名为Delvocid的产品。所述产品由DSMFoodSpecialties（荷兰）生产，并且可以是含有例如50%（w/w）那他霉素的固体或是含有例如2-50%（w/v）那他霉素的液体。所述商业产品可以被并入本发明的组合物中。
本发明的组合物通常包含从约0.005g/l到约100g/l和优选地从约0.01g/l到约50g/l的多烯抗真菌化合物。优选地，所述量为0.01g/l到3g/l。
本发明的组合物通常包含从约0.0001g/l到约2000g/l和优选地从约0.0005g/l到约1500g/l的来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物。更优选地，所述量为从0.001g/l到1000g/l。
在一个实施方式中，本发明的组合物还包含至少一种选自下组的额外化合物，所述组由粘着剂（stickingagent）、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂（adhesive）、除草剂、肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV-吸收剂和抗氧化剂组成。其他抗微生物抗真菌化合物可以是抗真菌化合物（例如抑霉唑、噻苯达唑或百菌清），或抵抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，根据本发明的组合物也可以包含两种或更多种任何上述额外的化合物。在两种防抗真菌化合物被分别应用的情况下，任何上述额外的化合物也可以与多烯抗真菌化合物和/或至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物组合。在一个实施方式中，额外的化合物是特定用途（例如食物、饲料、药物、化妆品或农业）可接受的添加剂。适用于食物、饲料、药物、化妆品或农业的额外的化合物是本领域技术人员已知的。
在一个特定的实施方式中，其他抗微生物化合物是属于亚磷酸盐类的天然作物保护化合物，例如KH2PO3或K2HPO3或这两种亚磷酸盐的混合物。在本文中使用时，含亚磷酸根的化合物表示包含亚磷酸根即PO3（以例如H2PO3 -、HPO3 2-或PO3 3-的形式）的化合物，或允许释放亚磷酸根离子的任何化合物，包括化合物例如亚磷酸和膦酸及其衍生物如酯和/或碱金属盐或碱土金属盐。在本发明的组合物包含多烯抗真菌化合物（例如那他霉素）和至少一种含亚磷酸根的化合物的情况下，相对于每克多烯抗真菌化合物，它们优选地包含0.1g或更少的木素磺酸盐（lignosulphonate），更优选地0.1g或更少的多酚。优选地，相对于每克多烯抗真菌化合物，它们包含0.01g或更少的木素磺酸盐，更优选地0.01g或更少的多酚。具体地，它们不含木素磺酸盐，并优选地不含多酚。含亚磷酸根的化合物的合适例子是亚磷酸及其（碱金属或碱土金属）盐，例如亚磷酸钾盐例如KH2PO3和K2HPO3，亚磷酸钠盐和亚磷酸铵盐，和亚磷酸的（C1-C4）烷基酯及其盐，例如乙基亚磷酸铝（乙膦铝（fosetyl-Al））、乙基亚磷酸钙、异丙基亚磷酸镁、异丁基亚磷酸镁、仲丁基亚磷酸镁和正丁基亚磷酸铝。当然，含亚磷酸根的化合物的混合物也包括在内。例如KH2PO3和K2HPO3的混合物可以通过例如向KH2PO3溶液中添加KOH或K2CO3至5.0–6.0的终pH来容易地获得。如上文所指出的，作物或植物中被代谢成为亚磷酸盐/酯化合物的前体-型化合物也可以包括在本发明的组合物中。其例子是膦酸酯，例如乙膦铝复合物。在例如作物或植物中，该分子的膦酸乙基酯部分被代谢成为亚磷酸盐/酯。这类化合物的一个例子是被称作Aliette（Bayer，德国）的商业膦酸氢乙基酯（ethylhydrogenphosphonate）。组合物中亚磷酸盐/酯与那他霉素的比例（以重量计）一般在2:1到500:1（w/w）之间，优选地在3:1到300:1（w/w）之间，更优选地在5:1到200:1（w/w）之间。
根据本发明的组合物可具有从1到10、优选地从2到9、更优选地从3到8、最优选地从4到7的pH。它们可以是固体例如粉末组合物，或者可以是液体。本发明的组合物可以是水性或非水性的即用型组合物，但是也可以是水性或非水性的浓缩组合物/悬浮液，或在使用前必须用合适的稀释剂例如水或缓冲体系稀释的储存组合物、悬浮液和/或溶液。或者，本发明的组合物也可以被用于制备涂层乳液。本发明的组合物也可以具有浓缩干产品（例如粉末、颗粒和片剂）的形式。它们可以被用于制备用于对产品进行浸没或喷雾的组合物，所述产品例如是农产品，包括植物、作物、蔬菜和/或水果。当然，当多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物作为独立的组合物被施用时，以上也适用。
在另一个方面中，本发明涉及包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的试剂盒。多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物可存在于两个独立的包装（例如容器）中。试剂盒的组分可以是包装中的干燥形式或是液体形式。需要时，试剂盒可包含用于溶解化合物的说明书。另外，试剂盒可含有用于应用化合物的说明书。
在另一方面，本发明涉及通过用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物处理农产品来保护产品抵抗真菌的方法。另外，可以在用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物处理产品之前、同时或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物处理产品。可以通过多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的顺次应用来处理产品，或反之亦然。或者，可以通过多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的同时应用来处理产品。在同时应用的情况下，化合物可存在于被同时应用的不同的组合物中，或化合物可存在于单一组合物中。还在另一实施方式中，可以通过应用两种抗真菌化合物的单独模式或交替模式来处理产品。在一个实施方式中，本发明涉及通过对产品应用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物来处理产品的方法。通过应用化合物，能够预防产品上或产品中的真菌生长。也就是说，化合物保护产品抵抗真菌生长和/或抵抗真菌感染和/或抵抗真菌腐败。化合物也可以被用于处理已经感染真菌的产品。通过应用化合物，归因于这些产品上或产品中真菌的疾病发生可以被减缓、停止，或产品甚至可以从疾病中痊愈。在本发明的一个实施方式中，用根据本发明的组合物或试剂盒处理产品。在一个实施方式中，产品是食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方式中，产品是农产品。
多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物、根据本发明的组合物和根据本发明的试剂盒可以通过喷雾被应用至产品。适用于将液体形式的这些化合物、组合物和试剂盒应用至产品的其他方法也是本发明的一部分。这些方法包括但不限于，浸渍（dipping）、浇水、浸透（drenching）、引入接收器（dumptank）中、蒸发、雾化（atomizing）、成雾（fogging）、熏蒸、涂抹、刷抹（brushing）、粉化（dusting）、起泡、铺展、包装和涂覆（例如借助于蜡或静电）。另外，也可以将抗真菌化合物注射进土壤中。使用自动化系统的喷雾应用已知降低人力成本并且是成本有效的。为此目的可使用本领域技术人员公知的方法和设备。感染风险较高时，根据本发明的组合物也可以定期喷雾。感染风险较低时，喷雾间隔可以更长。取决于应用的类型，应用的多烯抗真菌化合物的用量可以从5ppm到10,000ppm、优选地从10ppm到5,000ppm和最优选地从20到1,000ppm变化。取决于应用类型，被应用的至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的用量可从10ppm到5,000ppm、优选地从20ppm到3,000ppm和最优选地从50到1,000ppm变化。
在一个特定的实施方式中，可以在收获后处理农产品。通过使用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物，在较长的时间段中实现了收获后和/或储存疾病的控制，从而允许在长距离和在温度与湿度方面具有不同的受控气氛的多种储存条件下运输收获的农产品。收获后储存病症为例如皮孔斑点（lenticelspots）、枯萎（scorch）、衰老性分解（senescentbreakdown）、苦陷症（bitterpit）、褐斑（scald）、水核（watercore）、褐化（browning）、维管分解（vascularbreakdown）、CO2损伤、CO2或O2不足、和软化。真菌疾病可例如由以下真菌引起：Mycosphaerellaspp.、Mycosphaerellamusae、Mycosphaerellafragariae、Mycosphaerellacitri；毛霉属的物种（Mucorspp.），例如Mucorpiriformis；Moniliniaspp.，例如Moniliniafructigena、Monilinialaxa；拟茎点霉属的物种（Phomopsisspp.）、Phomopsisnatalensis；Colletotrichumspp.，例如Colletotrichummusae、Colletotrichumgloeosporioides、Colletotrichumcoccodes；Verticilliumspp.，例如Verticilliumtheobromae；Nigrosporaspp.；Botrytisspp.，例如Botrytiscinerea；Diplodiaspp.，例如Diplodiacitri；Peziculaspp.；Alternariaspp.，例如Alternariacitri、Alternariaalternata；Septoriaspp.，例如Septoriadepressa；Venturiaspp.，例如Venturiainaequalis、Venturiapyrina；Rhizopusspp.，例如Rhizopusstolonifer、Rhizopusoryzae；Glomerellaspp.，例如Glomerellacingulata；Sclerotiniaspp.，例如Sclerotiniafruiticola；Ceratocystisspp.，例如Ceratocystisparadoxa；Fusariumspp.，例如Fusariumsemitectum、Fusariummoniliforme、Fusariumsolani、Fusariumoxysporum；Cladosporiumspp.，例如Cladosporiumfulvum、Cladosporiumcladosporioides、Cladosporiumcucumerinum、Cladosporiummusae；青霉菌属的物种（Penicilliumspp.），例如绳状青霉菌（Penicilliumfuniculosum）、扩展青霉菌（Penicilliumexpansum）、指状青霉菌（Penicilliumdigitatum）、意大利青霉菌（Penicilliumitalicum）；Phytophthoraspp.，例如Phytophthoracitrophthora、Phytophthorafragariae、Phytophthoracactorum、Phytophthoraparasitica；Phacydiopycnisspp.，例如Phacydiopycnismalirum；Gloeosporiumspp.，例如Gloeosporiumalbum、Gloeosporiumperennans、Gloeosporiumfructigenum、Gloeosporiumsingulata；Geotrichumspp.，例如Geotrichumcandidum；Phlyctaenaspp.，例如Phlyctaenavagabunda；Cylindrocarponspp.，例如Cylindrocarponmali；Stemphylliumspp.，例如Stemphylliumvesicarium；Thielaviopsisspp.，例如Thielaviopsisparadoxy；曲霉属的物种（Aspergillusspp.），例如黑曲霉（Aspergillusniger）、Aspergilluscarbonarius；Nectriaspp.，例如Nectriagalligena；Cercosporaspp.，例如Cercosporaangreci、Cercosporaapii、Cercosporaatrofiliformis、Cercosporamusae、Cercosporazeae-maydis。
本发明的另一方面涉及多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物保护产品抵抗真菌的用途。如上文所述，化合物可以顺次或同时使用（例如应用）。在一个实施方式中，本发明涉及一种用途，其中根据本发明的组合物或试剂盒被应用至产品。在一个实施方式中，产品是食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方式中，产品是农产品。
在一个特定的实施方式中，多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物可在药物中被用于例如治疗和/或预防真菌疾病。多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物可例如以药物组合物的形式被使用。组合物可还包含药物可接受的赋形剂。抗真菌化合物可口服施用或肠胃外施用。组合物的类型取决于施用途径。
本发明的另一个方面涉及用多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物处理的产品。在一个实施方式中，用根据本发明的组合物或试剂盒处理产品。本发明因此涉及包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的产品。经处理的产品的表面上和/或产品内可包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物。或者，经处理的产品可包含涂层，所述涂层包含这些化合物。在一个实施方式中，经处理的产品表面上包含从0.000001到200mg/dm2、优选地0.00001到100mg/dm2、更优选地从0.00005到10mg/dm2的多烯抗真菌化合物。在另一个实施方式中，它们在表面上包含从0.000001到200mg/dm2、优选地0.00001到100mg/dm2、更优选地从0.00005到10mg/dm2的至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物。在一个实施方式中，产品是食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方式中，产品是农产品。
在本文中使用时，术语“食品“应当被非常广义地理解，包括但不限于，乳酪、奶油乳酪、碎乳酪、松软干酪（cottagecheese）、经加工的乳酪、酸奶油、干燥的经发酵的肉制品，包括萨拉米香肠和其他香肠、葡萄酒、啤酒、酸乳、果汁和其他饮料、沙拉酱、松软干酪酱（cottagecheesedressing）、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉（surfaceglaze）和糖霜、涂抹酱、披萨饼馅料、糕饼和糕饼填料、橄榄、橄榄卤水（olivebrine）、橄榄油、果汁、番茄泥和番茄糊、作料、和水果浆和其他类似的食品。
在本文中使用时，术语“饲料产品”也应当非常广义地理解，包括但不限于宠物食物、肉鸡饲料等等。
在本文中使用时，术语“药物产品”也应当非常广义地理解，包括包含活性分子例如药物、药剂或药物化合物和任选地包含药物可接受的赋形剂的产品，所述赋形剂即与活性分子组合用于制备合适或便利的剂型的任何惰性物质。
在本文中使用时，术语“化妆品产品”也应当非常广义地理解，包括下述产品，所述产品被用于通过防止水分的蒸腾来保护或治疗角质组织如皮肤和唇、头发和指甲的干燥，并且护理组织以及给予这些组织良好的外观。术语“化妆品组合物”涉及的产品包括但不限于保湿霜、个人清洁产品、闭合的药物递送贴片、指甲油、粉、擦拭片、护发素、皮肤处理乳液、剃须霜等等。
在本文中使用时，术语“农产品”也应当非常广义地理解，包括但不限于谷物，例如小麦、大麦、裸麦、燕麦、水稻、高粱等等；甜菜，例如糖用甜菜（sugarbeet）和饲料甜菜（fodderbeet）；梨果和核果和浆果，例如苹果、梨、李子、杏、桃、杏仁、樱桃、草莓、覆盆子和黑莓；豆科植物，例如豆子、扁豆、豌豆、大豆；油料植物，例如油菜、芥末、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生；葫芦科，例如南瓜、小黄瓜（gherkins）、甜瓜、黄瓜、倭瓜、茄子；纤维植物，例如棉花、亚麻、大麻、黄麻；柑橘水果，例如橙、柠檬、葡萄柚、蜜桔、枸橼；热带水果，例如木瓜、百香果、芒果、杨桃、菠萝、香蕉、奇异果；蔬菜，例如菠菜、莴苣、芦笋、十字花科如卷心菜和芜菁、胡萝卜、洋葱、番茄、马铃薯、马铃薯种子（seed-potatoe）、尖辣椒（hotpepper）和甜椒；月桂样植物，例如酪梨、肉桂、樟脑树；或产品如玉米、烟草、坚果、咖啡、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡胶植物、以及观赏植物例如切花、玫瑰、郁金香、百合、水仙花、藏红花、风信子、大丽花、大丁草、康乃馨、倒挂金钟（fuchsias）、菊花和球根花卉（flowerbulbs）、灌木、落叶树和常绿树例如松柏植物、温室植物和树木。其包括但不限于植物及其部分、果实、种子、插条（cuttings）、栽培种、移植物、鳞茎、块茎、根-块茎、根茎、切花和蔬菜。
用于制备本文所述的组合物的方法是本发明的另一个方面。方法包括向至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物添加多烯抗真菌化合物。化合物可例如被单独地添加至水性组合物并混合，需要时随后调节pH、粘度等等。如果单独添加，则单独的化合物中的一些或全部可以是粉末形式，但是替代性地，一些或全部也可以是液体形式。化合物也可例如以粉末形式被彼此添加并混合，以获得粉末组合物。粉末状的组合物可随后被添加至水性组合物。
实施例
实施例1
收获前应用
用真菌接种香蕉植物的叶。未经接种的叶被包括在内作为对照。接着，用组合物1（那他霉素）、组合物2（联苯三唑醇）、组合物3（环丙唑醇）、组合物4（苯醚甲环唑）、组合物5（腈苯唑）、组合物6（氟硅唑）、组合物7（粉唑醇）、组合物8（叶菌唑）、组合物9（腈菌唑）、组合物10（丙环唑）、组合物11（丙硫菌唑）、组合物12（戊唑醇）、组合物13（四氟醚唑）、组合物14（灭菌唑）、组合物15（烯效唑）、组合物16（那他霉素+联苯三唑醇）、组合物17（那他霉素+环丙唑醇）、组合物18（那他霉素+苯醚甲环唑）、组合物19（那他霉素+腈苯唑）、组合物20（那他霉素+氟硅唑）、组合物21（那他霉素+粉唑醇）、组合物22（那他霉素+叶菌唑）、组合物23（那他霉素+腈菌唑）、组合物24（那他霉素+丙环唑）、组合物25（那他霉素+丙硫菌唑）、组合物26（那他霉素+戊唑醇）、组合物27（那他霉素+四氟醚唑）、组合物28（那他霉素+灭菌唑）和组合物29（那他霉素+烯效唑）处理叶的确定部分。通过喷雾应用每种组合物。未经处理的叶也包括在内（未经处理的对照）。
获得的结果显示本发明的组合物保护香蕉植物免于真菌生长，还证明与活性化合物各自应用时的活性相比，本发明的组合物显示协同增强的活性。
实施例2
收获后应用
根据deLapeyredeBellaireandDubois（1987）所述方法使香蕉受伤。使用木塞穿孔器对香蕉造成创伤，之后用真菌孢子污染。在室温下孵育若干小时后，将香蕉浸在以下组合物之一中：a）无处理（对照1）、b）浸在水中（对照2）、c）浸在那他霉素中、d）浸在联苯三唑醇中、e）浸在环丙唑醇中、f）浸在苯醚甲环唑中、g）浸在腈苯唑中、h）浸在氟硅唑中、i）浸在粉唑醇中、j）浸在叶菌唑中、k）浸在腈菌唑中、l）浸在丙环唑中、m）浸在丙硫菌唑中、n）浸在戊唑醇中、o）浸在四氟醚唑中、p）浸在灭菌唑中、q）浸在烯效唑中、r）浸在那他霉素+联苯三唑醇中、s）浸在那他霉素+环丙唑醇中、t）浸在那他霉素+苯醚甲环唑中、u）浸在那他霉素+腈苯唑中、v）浸在那他霉素+氟硅唑中、w）浸在那他霉素+粉唑醇中、x）浸在那他霉素+叶菌唑中、y）浸在那他霉素+腈菌唑中、z）浸在那他霉素+丙环唑中、z1）浸在那他霉素+丙硫菌唑中、z2）浸在那他霉素+戊唑醇中、z3）浸在那他霉素+四氟醚唑中、z4）浸在那他霉素+灭菌唑中、z5）浸在那他霉素+烯效唑中。在该处理后，将香蕉在闭合箱中于21℃和提高的湿度下孵育。每天视觉评价香蕉的真菌发展。
结果显示与单独的那他霉素或至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物相比，含有那他霉素和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的组合物更好地保护香蕉抵抗真菌。令人惊讶的是，那他霉素和至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的组合应用导致感染的强烈的协同减少。
实施例3
处理香蕉
每个处理组使用四个有机的、未成熟的（绿色的）香蕉。根据deLapeyredeBellaireandDubois（1987）所述方法，使用木塞钻孔器对每个香蕉的皮造成三次创伤。随后，用15μl含有1×105孢子/ml的Fusariumproliferatum悬浮液接种每个创口。在20℃下孵育4小时后，用100μl新鲜制备的包含500ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、1000ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个香蕉创口。另外，抗真菌组合物包含1.00%（w/w）甲基羟乙基纤维素（MHEC）、0.40%（w/w）黄原胶、0.20%（w/w）消泡剂、0.30%（w/w）柠檬酸、0.39%（w/w）乳酸和0.11%（w/w）山梨酸钾。组合物的pH为4.0。使用不含那他霉素和丙环唑的组合物作为对照。将经处理的、未成熟的香蕉在闭合箱中于暗中、20℃下和95%的相对空气湿度中孵育，所述条件在存在饱和的Na2HPO4水溶液时获得。在孵育的最初20天期间，闭合箱中包含成熟的（黄色的）香蕉，以提高乙烯气体水平，从而诱导经处理的、未成熟的香蕉的成熟。
孵育39和42天后，通过计数每12个创口的总数中长有霉菌的创口总数来测定香蕉上的霉菌生长程度。
表1中的结果清楚地证明，与单独的那他霉素或丙环唑相比，包含500ppm那他霉素和1000ppm丙环唑二者的抗真菌组合物保护香蕉更好地抵抗霉菌生长。
孵育39和42天后，用单独的对照组合物或那他霉素处理的所有12个创口均显示霉菌生长，而单独用丙环唑处理的12个创口中的4个有霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理时，孵育39天后12个创口均无霉菌生长，孵育42天后12个创口中仅1个有霉菌能够（见表1）。
因此，500ppm那他霉素和1000ppm丙环唑的组合在香蕉上具有协同的抗真菌活性。
实施例4
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含500ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、150ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。
孵育期间，以双重方式（twofoldmanner）评价香蕉上霉菌生长的程度：（i）计算每12个创口的总数中长有霉菌的创口数；和（ii）通过计算与用对照组合物处理的香蕉创口上的霉菌生长相比，用抗真菌组合物处理的香蕉创口上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的抗真菌活性（以%计）。根据Colby方程（Colby，1967）计算包含两种活性成分的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性（E，以%计）：
E=X+Y–[（X·Y）/100]
其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以%计）。如果组合的观察到的抗真菌活性（O，以%计）超出组合的预期抗真菌活性（E，以%计）并且因而协同因子O/E>1.0，那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。
表2（每12个创口的总数中长有霉菌的创口数）和表3（抗真菌活性）中的结果清楚地证明，与单独的那他霉素或丙环唑相比，包含500ppm那他霉素和150ppm丙环唑二者的组合物更有效地降低香蕉上的霉菌生长。
孵育26天后，用对照组合物处理的所有12个创口均显示霉菌生长，而单独用那他霉素处理的12个创口中的8个有霉菌生长，单独用丙环唑处理的12个创口中9个有霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理的12个创口中没有霉菌生长（见表2）。另外，对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高8%，这导致>1.0的协同因子（见表3）。
孵育27、28、29、31和32天后，用对照组合物或丙环唑单独处理的所有12个创口均显示霉菌生长，单独用那他霉素处理的12个创口中8个有霉菌生长。然而，使用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理时，在第27、28和29天12个创口中均未观察到霉菌生长，第31和32天时12个创口中仅有1个观察到霉菌生长（见表2）。另外，孵育27和32天之间，对那他霉素和丙环唑二者的活性成分组合所观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性超出8%到18%，并且获得了>1.0的协同因子（见表3）。
因此，500ppm那他霉素和150ppm丙环唑的组合应用协同降低了香蕉上的霉菌生长。
实施例5
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含250ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、500ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。孵育期间，根据实施例4中所述的两种方法评价香蕉创口上的霉菌生长程度。
表4（每12个创口总数中长有霉菌的创口数）和表5（抗真菌活性）中的结果显示，在减少香蕉上霉菌生长方面，包含250ppm那他霉素以及500ppm丙环唑二者的抗真菌组合物优于单独包含那他霉素或单独包含丙环唑的组合物。
孵育34和36天后，用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口中均观察到霉菌生长，用丙环唑单独处理的所有12个创口中的10个观察到霉菌生长。然而，用那他霉素和丙环唑的活性成分组合处理时，34天后12个创口中仅7个长有霉菌，36天后12个创口中仅8个长有霉菌（见表4）。另外，孵育34天和36天后，对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性分别超出11%和21%。因此，得到>1.0的协同因子（见表5）。
孵育39和42天后，针对包含那他霉素和丙环唑的组合物观察的抗真菌活性比预期的抗真菌活性分别高32%和38%。因此，协同因子从第34天的1.1提高至第39天的1.8和第42天的2.1（见表5）。
总而言之，该实施例的结果清楚地证明，应用在香蕉上时250ppm那他霉素和500ppm丙环唑的组合的抗真菌活性是协同的。
实施例6
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含250ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、50ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。根据实施例4中所述方法测定经处理的香蕉创口上个体和组合的活性成分的抗真菌活性（以%计）。
表6中的结果显示，包含250ppm那他霉素和50ppm丙环唑二者的抗真菌组合物具有比单独的那他霉素或丙环唑更强的抗真菌活性。
孵育23、27和29天后，针对那他霉素和丙环唑的活性成分组合所实际观察的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高8%到18%，这导致>1.0的协同因子。
因此，该实施例的结果清楚地证明香蕉上250ppm那他霉素和50ppm丙环唑的协同抗真菌活性。
实施例7
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含50ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、250ppm丙环唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。根据实施例4中所述的两种方法评价香蕉创口上的霉菌生长程度。
表7（每12个创口总数中长有霉菌的创口数）和表8（抗真菌活性）中的结果显示，与单独包含那他霉素或单丙环唑的组合物相比，包含50ppm那他霉素以及250ppm丙环唑二者的组合抗真菌组合物保护香蕉更有效地抵抗香蕉上的霉菌生长。
孵育29天后，用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口均显示霉菌生长，单独用丙环唑处理的12个创口中5个有霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理的12个创口中没有霉菌生长（见表7）。另外，对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高7%，这导致>1.0的协同因子（见表8）。
孵育32天后，用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口均显示霉菌生长，单独用丙环唑处理的12个创口中8个有霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理的12个创口中仅2个有霉菌生长（见表7）。另外，对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高7%，获得了>1.0的协同因子（见表8）。
孵育34天后，用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口均显示霉菌生长，单独用丙环唑处理的12个创口中10个有霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物处理的12个创口中仅4个有霉菌生长（见表7）。另外，对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高10%。因此，协同因子超过1.0（见表8）。
孵育36、39和42天后，用对照组合物、那他霉素或丙环唑单独处理的所有12个创口中均有霉菌生长。然而，在创伤上应用包含那他霉素和丙环唑二者的组合物时，第36天12个创口中仅5个观察到霉菌生长，第39天12个创口中仅8个观察到霉菌生长，第42天12个创口中仅10个观察到霉菌生长（见表7）。另外，孵育36、39和42天后，对那他霉素和丙环唑的活性成分组合所观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性分别超出10%、30%和37%。因此，协同因子从第29、32和34天的1.1提高至第36天的1.2、第39天的1.5和第42天的1.8（见表8）。
因此，50ppm那他霉素和250ppm丙环唑的组合应用导致对香蕉上霉菌生长的令人惊讶的强协同减少。
实施例8
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含500ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、250ppm丙硫菌唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。使用不含那他霉素和丙硫菌唑的组合物作为对照。孵育27天和29天后通过计数每12个创口总数中长有霉菌的创口数，来测定香蕉上的霉菌生长程度。
表9中的结果显示，与单独的那他霉素或丙硫菌唑相比，包含500ppm那他霉素和250ppm丙硫菌唑二者的组合物更加成功地限制了香蕉上的霉菌生长。
孵育27、28和29天后，用对照组合物处理的所有12个创口均长有霉菌。另外，单独用那他霉素处理的创口中8个观察到霉菌生长，单独用丙硫菌唑处理的创口中10个观察到霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙硫菌唑的组合物处理的12个创口中仅2个长有霉菌（见表9）。
总而言之，香蕉上500ppm那他霉素和250ppm丙硫菌唑的活性成分组合具有协同的抗真菌活性。
实施例9
处理香蕉
如实施例3中所述进行实验，不同之处是用100μl新鲜制备的包含250ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、100ppm丙硫菌唑或二者兼有的水性抗真菌组合物处理每个接种的香蕉创口。使用不含那他霉素和丙硫菌唑的组合物作为对照。如实施例8中所述测定霉菌生长程度。
表10中的结果证明，与单独的那他霉素或丙硫菌唑相比，包含250ppm那他霉素和100ppm丙硫菌唑二者的组合物更好地保护香蕉抵抗霉菌生长。
孵育27、28和29天后，用对照组合物或那他霉素单独处理的所有12个创口均长有霉菌。单独用丙硫菌唑处理的12创口中，11个在第27天显示霉菌生长，12个在第28天和29天显示霉菌生长。然而，孵育27、28和29天后，用包含那他霉素和丙硫菌唑的组合物处理的12个创口中仅9个长有霉菌（见表10）。
该实施例清楚地显示，作为活性成分组合应用在香蕉上时，250ppm那他霉素和100ppm丙硫菌唑之间存在协同的抗真菌活性。
实施例10
处理草莓
每个处理组使用十二个新鲜的、有机的草莓。用0.5mm长的切口对每个草莓造成创伤，用10μl含有1×105孢子/ml的Botrytiscinerea悬浮液接种每个创口。在20℃下孵育2小时后，在新鲜制备的含有250ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、500ppm丙硫菌唑或二者兼有的水性抗真菌组合物中将每个草莓各自浸渍1分钟。抗真菌组合物还包含1.00%（w/w）甲基羟乙基纤维素（MHEC）、0.40%（w/w）黄原胶、0.20%（w/w）消泡剂、0.30%（w/w）柠檬酸、0.39%（w/w）乳酸和0.11%（w/w）山梨酸钾。组合物的pH为4.0。使用不含那他霉素和丙硫菌唑的组合物作为对照。将经处理的草莓在闭合箱中于暗中和20℃下孵育3天。
在孵育2和3天后，以双重方式评价草莓上的霉菌生长：（i）计数每12个草莓总数中长有霉菌的草莓数量；和（ii）根据实施例4中所述的Colby方法（Colby，1967），通过计算与用对照组合物处理的草莓上的霉菌生长相比，用抗真菌组合物处理的草莓上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体和组合的活性成分的抗真菌活性（以%计）。
表11（每12个草莓总数中长有霉菌的草莓数）和表12（抗真菌活性）中的结果证实，与单独的那他霉素或丙硫菌唑相比，包含250ppm那他霉素和500ppm丙硫菌唑的抗真菌组合物在草莓上具有更强的抗真菌活性。
孵育2天后，用对照组合物或丙硫菌唑单独处理的所有12个草莓均显示霉菌生长，而用那他霉素单独处理的12个草莓中10个长有霉菌。然而，用包含那他霉素和丙硫菌唑二者的组合物处理的12个草莓中仅6个观察到霉菌生长（见表11）。另外，对包含那他霉素和丙硫菌唑二者的组合物观察的抗真菌活性比预期的抗真菌活性超出14%，这导致>1.0的协同因子（见表12）。
孵育3天后，用对照组合物、那他霉素或丙硫菌唑任一单独处理的所有12个草莓显示霉菌生长。然而，用包含那他霉素和丙硫菌唑的组合物处理的12个草莓中仅有8个观察到霉菌生长（见表11）。另外，对包含那他霉素和丙硫菌唑的组合的组合物所观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高出10%，获得了>1.0的协同因子（见表12）。
因此，250ppm那他霉素和500ppm丙硫菌唑的组合应用协同减少了草莓上的霉菌生长。
实施例11
处理蜜桔（mandarins）
每个处理组使用十个新鲜的有机蜜桔。根据deLapeyredeBellaireandDubois（1987）所述方法，使用木塞钻孔器对每个蜜桔的皮造成一次创伤。随后，用10μl含有1×104孢子/ml的Penicilliumitalicum悬浮液接种每个创口。在20℃下孵育2小时后，在新鲜制备的包含500ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、600ppm丙硫菌唑或二者兼有的水性抗真菌组合物中将蜜桔各自浸渍1分钟。另外，抗真菌组合物包含3.1%（w/w）蜂蜡、0.76%（w/w）甘油、0.66%（w/w）聚氧乙烯山梨聚糖单硬脂酸酯（Tween60）、0.03%（w/w）甲基羟乙基纤维素（MHEC）、0.02%（w/w）黄原胶、0.02%（w/w）消泡剂、0.15%（w/w）柠檬酸和0.01%（w/w）山梨酸钾。组合物的pH为4.0。使用不含那他霉素和丙硫菌唑的组合物作为对照。
将经处理的蜜桔在闭合箱中于暗中、20℃下孵育，并在孵育25、28、31和34天后评价霉菌生长。根据实施例4中所述的Colby方法（Colby，1967），通过计算与用对照组合物处理的蜜桔上的霉菌生长相比，用抗真菌组合物处理的蜜桔上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体和组合的活性成分的抗真菌活性（以%计）。
表13中的结果证明，在预防蜜桔上霉菌生长方面，包含500ppm那他霉素和600ppm丙硫菌唑的抗真菌组合物优于单独包含那他霉素或单独包含丙环唑的组合物。
孵育25、28、31和34天后，针对包含那他霉素和丙环唑二者的组合物观察到的抗真菌活性分别比预期的抗真菌活性高6%、12%、32%和38%。因此，协同因子从第25天的1.1提高至第34天的1.4（见表13）。
因此，500ppm那他霉素和600ppm丙环唑的组合应用协同地减少了蜜桔上的霉菌生长。
实施例12
处理蜜桔
如实施例11中所述进行实验，不同之处在于在新鲜制备的包含250ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties，Delft，荷兰）、150ppm丙硫菌唑或二者兼有的水性抗真菌组合物中将每个有创口的经接种的蜜桔各自浸渍1分钟。根据实施例4中所述的Colby方法，在孵育13、16、21、26、29和34天后评价蜜桔上个体活性成分和组合活性成分的抗真菌活性（以%计）。
结果（见表14）显示，与单独的那他霉素或单独的丙硫菌唑相比，包含250ppm那他霉素和150ppm丙硫菌唑的抗真菌组合物更有效地降低蜜桔上的霉菌生长。
孵育13、16、21、26、29和34天后，针对那他霉素和丙硫菌唑的活性成分组合所观察的抗真菌活性比预期的抗真菌活性分别超出10%、15%、17%、28%、35%和38%。协同因子从第13天的1.1提高至第34天的2.4（见表14）。
因此可以得出结论：250ppm那他霉素和150ppm丙硫菌唑的组合应用导致蜜桔上霉菌生长的协同降低。
实施例13
体外（Invitro）抗真菌活性
为了证实那他霉素与丙环唑或丙硫菌唑的组合针对Botrytiscinerea的协同抗真菌活性，使用96孔微量滴定板进行体外实验。测试以下的组合物：
-对照（无活性成分），
-0.63或1.25ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties,Delft，荷兰），
-0.50或1.00ppm丙环唑，
-0.13ppm丙硫菌唑，
-0.63ppm那他霉素+1.00ppm丙环唑，
-1.25ppm那他霉素+0.50ppm丙环唑，
-1.25ppm那他霉素+0.13ppm丙硫菌唑。
用92μlPCB培养基填充微量滴定板的每个孔后，从制备于PCB培养基或甲醇中的单独的储备溶液中添加活性成分，这导致每孔100μl的中间体积。随后，使用制备于PCB培养基中的100μlBotrytiscinerea悬浮液，以2.5x103孢子/ml接种每个孔。因此，每个孔含有200μl的终体积和<1%的甲醇，这不影响Botrytiscinerea的生长（数据未展示）。
将微量滴定板在25℃下孵育5和10天后，通过计算与无活性成分时观察到的霉菌生长相比，存在活性成分时观察到的霉菌生长的减少，来评价个体活性成分的体外抗真菌活性（以%计）。根据Colby方程（Colby，1967）计算活性成分组合的预期抗真菌活性（E，以%计）：
E=X+Y–[（X·Y）/100]
其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性（以%计）。如果组合的观察到的抗真菌活性（O，以%计）超出组合的预期抗真菌活性（E，以%计）并且因而协同因子O/E>1.0，那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。
结果（见表15）证明，与单独的那他霉素、丙环唑或丙硫菌唑相比，那他霉素+丙环唑的组合和那他霉素+丙硫菌唑的组合均具有强得多的针对Botrytiscinerea的抗真菌活性。另外，针对那他霉素+丙环唑的组合和那他霉素+丙硫菌唑的组合观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性高50%到100%。因此，得到大于1.0的协同因子。
因此，那他霉素和丙环唑的组合应用以及那他霉素和丙硫菌唑的组合应用协同地抑制了Botrytiscinerea的生长。
实施例14
体外抗真菌活性
如实施例13中所述进行实验，不同之处在于测试以下的组合物：
-对照（无活性成分），
-2.5ppm那他霉素（DSMFoodSpecialties,Delft，荷兰），
-7.5或10.0ppm丙环唑，
-0.5ppm丙硫菌唑，
-2.5ppm那他霉素+7.5ppm丙环唑，
-2.5ppm那他霉素+10.0ppm丙环唑，
-2.5ppm那他霉素+0.5ppmof丙硫菌唑。
另外，使用Fusariumproliferatum接种。根据实施例13中所述方法测定个体活性成分和组合的活性成分的抗真菌活性（以%计）。
结果（见表16）揭示了那他霉素+丙环唑的活性成分组合和那他霉素+丙硫菌唑的活性成分组合比个体的那他霉素、丙环唑或丙硫菌唑更有效地抑制Fusariumproliferatum的生长。活性成分组合那他霉素+丙环唑和活性成分组合那他霉素+丙硫菌唑的观察到的抗真菌活性比预期的抗真菌活性超出50%到100%，这导致大于1.0的协同因子。
因此，那他霉素和丙环唑的组合应用以及那他霉素和丙硫菌唑的组合应用显示抵抗Fusariumproliferatum的强烈协同抗真菌活性。
表1.用包含500ppm那他霉素、1000ppm丙环唑或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
表2.用包含500ppm那他霉素、150ppm丙环唑或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数（%）。
表3.在20℃孵育后，包含500ppm那他霉素、150ppm丙环唑或二者兼有的组合物在香蕉上的抗真菌活性（%）。
表4.用包含250ppm那他霉素、1000ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
表5.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、500ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物在香蕉上的抗真菌活性（%）。
表6.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、50ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物在香蕉上的抗真菌活性（%）。
表7.用包含50ppm那他霉素、250ppm丙环唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
表8.在20℃下孵育后，包含50ppm那他霉素、250ppm丙环唑或二者兼有的组合物在香蕉上的抗真菌活性（%）。
表9.用包含500ppm那他霉素、250ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
表10.用包含250ppm那他霉素、100ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的香蕉上长有霉菌的创口数。
表11.用包含250ppm那他霉素、500ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的草莓数。
表12.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、500ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物在草莓上的抗真菌活性（%）。
表13.在20℃下孵育后，包含500ppm那他霉素、600ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物在蜜桔上的抗真菌活性（%）。
表14.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、150ppm丙硫菌唑任一或二者兼有的组合物在蜜桔上的抗真菌活性（%）。
表15.在25℃下孵育后，与丙环唑或丙硫菌唑组合的那他霉素针对Botrytiscinerea的体外抗真菌活性（%）。
表16.在25℃下孵育后，与丙环唑或丙硫菌唑组合的那他霉素针对Fusariumproliferatum的体外抗真菌活性（%）。
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Claims (9)
1.包含那他霉素和选自下组的至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的组合物，所述组由丙环唑和丙硫菌唑组成，其中所述那他霉素的量在从0.005g/l到100g/l的范围内，所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的量在从0.0001g/l到2000g/l的范围内。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种选自下组的额外的化合物，所述组由粘着剂、载剂、着色剂、保护性胶体、粘合剂、除草剂、肥料、增稠剂、掩蔽剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、洗涤剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、喷雾油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、湿润剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV-吸收剂和抗氧化剂组成。
3.包含那他霉素和选自下组的至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的试剂盒，所述组由丙环唑和丙硫菌唑组成，其中所述那他霉素的量在从0.005g/l到100g/l的范围内，所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的量在从0.0001g/l到2000g/l的范围内。
4.通过用那他霉素和选自下组的至少一种来自三唑杀真菌剂的抗真菌化合物处理产品来保护产品抵抗真菌的方法，所述组由丙环唑和丙硫菌唑组成，其中所述那他霉素的量在从0.005g/l到100g/l的范围内，所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的量在从0.0001g/l到2000g/l的范围内。
5.根据权利要求4所述的方法，其中用根据权利要求1到2中任一项所述的组合物或根据权利要求3所述的试剂盒来处理所述产品。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述产品选自由食品、饲料产品、药物产品、化妆品产品和农产品组成的组。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述产品是农产品。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述产品在收获后被处理。
9.包含那他霉素和选自下组的至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的产品，所述组由丙环唑和丙硫菌唑组成，其中所述产品选自由食品、饲料产品、药物产品和化妆品产品组成的组，其中所述那他霉素的量在从0.005g/l到100g/l的范围内，所述至少一种来自三唑杀真菌剂家族的抗真菌化合物的量在从0.0001g/l到2000g/l的范围内。
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