CN1033638C - 新型α-甘露糖苷酶和岩藻糖苷酶抑制剂 - Google Patents

Abstract

取代的(1α，2β，3α或β，4α，5β或β)-2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊胺为α-甘露糖苷酶和α-岩藻糖苷酶抑制剂，可用做免疫刺激剂、抗病毒和抗转移剂。

Description

新型α-甘露糖苷酶和岩藻糖苷酶抑制剂

此为系列号为07/508,875的、1990年4月12日所提申请的部分继续申请。

苦马豆碱是从苦马豆属和大麻以及从丝核菌真菌和绿僵菌科种中分离的物质。据报导，其为强的α-甘露糖苷酶抑制剂，并可阻止糖蛋白合成(Colegate等人，Aust.J.Chem.32：2257-2264，1979)。最近，据报道苦马豆碱可阻碍从带肿瘤小鼠中得到的免疫抑制因子，如环磷酰胺和丝裂霉素C的免疫抑制活性。(Kino等人，J.Antibiotics，38(7)，926-935，1985)。同时，苦马豆碱抑制肺B16黑瘤细胞转移生长的作用也有报导，见Kino et al.，J.Antibiotics，38(7)，936-940，1985。这些结果建议应用苦马豆碱改善受到肿瘤或感染破坏了的免疫应答

据信，α-甘露糖苷酶抑制剂如苦马豆碱，由于其干扰糖蛋白形成的作用，具有免疫调节剂的功能，并且减少肿瘤转移，糖蛋白形成为复杂的细胞内过程，从其中早已形成的更加复杂的低聚糖中剪切下特定的糖。此干扰作用严重地影响到细胞壁的糖蛋白形成，继而影响到靶细胞和病毒膜的病毒受体，同时影响到细胞与其它物质的结合，因而防止或减少了病毒细胞融合及病毒膜的形成，从而起到抗病毒作用。同样，依靠肿瘤细胞结合于其它肿瘤细胞和其它物质进行的转移也受到干扰，从而起到抗转移作用。

α-岩藻糖苷酶为分解糖蛋白的溶菌酶，其在肝癌患者体内增加显著(Deugnier，Y.等人，Hepatology4：889-892，(1984))，测定病人血清中该酸的增高水平，为诊断该病提供了适用的指标，据报道，糖尿病，肝硬变和胃癌患者血清中α-岩藻糖苷酶活性水平升高显著(Reglero，A.等人，Clin.Chem.Acta 103：155-158，(1980))，给大鼠皮下注射用岩藻糖苷酶治疗的转移大鼠乳腺癌细胞时，仅20％细胞转移，而未治疗的细胞80％转移(Wright，L.C.等人，J.Cell Biochem.37：49-59(1988))。α-L-岩藻糖在抑制巨噬细胞移行过程中起主要作用，因此肿瘤中岩藻糖苷酶活性增高可说明一个可能的机理，即癌细胞直接干扰巨噬细胞的活化过程，因此促进了异形生长，因此α-岩藻糖苷酶的抑制为抗转移的适用的方法。

申请人发现了一类新的α-甘露糖苷酶和岩藻糖苷酶抑制剂，其可用作免疫调节剂和抗转移剂。

本发明涉及式I的新型的α-甘露糖苷酶和岩藻糖苷酶抑制剂

其中R为一个或两个羟基取代的(C₁-C₆)烷基，糖基或式

-(-(CH₂)_n-Ar的基团，其中n为1到4的整数，

Ar为由一或两个下列基团：(C₁-C₄)烷基，(C₁-

C₄)烷氧基，F，Cl，Br，I，氨基，单(C₁-

C₄)烷基氨基，或二(C₁-C₄)烷基氨基，取代的苯

基，或其药用盐，其为α-甘露糖苷露糖苷酶和α-岩藻糖苷酶抑制剂，并做为免疫刺激剂和抗转移剂，适用于治疗某些病毒病。

一般的立体化学规律用来表示接于环上基团的相对空间取向，因此，从环上一点向外扩散的黑实线表示所接基团为β-构象，即基团在环平面之上，同时，虚线表示所接基团为α-构象，即基团在环平面之下，用普通直线(非扩散状或虚线)所接基团表示其空间取向可以是α-或β-。

本发明的(C₁-C₆)烷基可以是直链、支链或环形，例如：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、环戊基、正己基、及环己基。

那些用两个羟基取代的烷基中，两个羟基不接于用一个碳原子上，同时，羟基也不接在连有氨基氮原子的碳原子上。

本发明的糖基可以是单糖、二聚糖或三聚糖基团，糖基可以通过戊糖基或己糖环的外向环的或环碳原子接于氨基氮原子上，为各糖基形成各种可能的位置异构物，相似或不同的戊糖或己糖基可以通过配糖氧桥相连，其中桥氧原子接于戊糖或己糖的外向环的和/或桥环碳原子，由此形成糖基，同时，所有位置异构物也在本发明范围内。

本发明中的糖基包括：单糖类如：葡糖基，半乳糖基，甘露糖基，岩藻糖基，核糖基、2-脱氧葡糖基，3-O-甲基葡糖基，木糖基，和阿糖基，二糖类如：α-和β-纤维素二糖基，异麦芽糖基、海藻糖基、麦芽糖基，三糖类如：麦芽三糖基和纤维素三糖基，特别优选的化合物中R为甘露糖基、葡糖基、L-岩藻糖基、N-乙酰葡糖基或纤维素二糖基。

前面所述的与药用酸所形成的酸加成盐在本发明中与胺相同，这类盐包括：与无机酸所形成的盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等；与有机羧酸形成的盐，如：醋酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸和二羟基马来酸、苯甲酸、苯乙酸，4-氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、氨茴酸、内桂酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙氧基苯甲酸、扁桃酸等。以及与有机磺酸形成盐，如：甲磺酸和对甲苯磺酸，这些盐可以由本发明的酰胺与相应的酸按标准方法得到。

在式1的化合物中，其中R为甲基或乙基、2，3-二羟丙基，2-羟丙基，葡糖基和甘露糖基的那些化合物为优选，同时优选羟甲基处于β-构象的式1化合物，优选的化合物还包括：3位取代基为β且5位取代基为β，以及3位取代基为α且5位取代基为β的。

式1的化合物(3β-构象)通过除去式2化合物的保护基来制备，其中R如前定义，当R为烷基时，优选环羟基用苄基(Bn)保护，其可按通常的方法，如催化氢化除去，随后，氨基用叔丁氧羰基(BOC)保护，其可按通常方法如温和酸水解除去。

羟甲基为α-构象的式2化合物，即式2a的化合物

通过还原式3的3H-环戊〔c〕异噁唑进行制备，

其中R为(C₁-C₆)烷基，还原可按还原氧-氮键的任何已知方法进行，只要反应条件不影响基团的相对的立体化学，如：式3的化合物可与过量的(2-5摩尔)的活化的锌粉和酸如醋酸反应，通常反应在大约室温到混合物的回流温度内进行，酸本身通常做为溶剂，且优选醋酸水溶液，如85％醋酸水溶液，反应通常在约半小时到约2或3小时内完成，反应完成后，经标准技术分离后的仲胺产物用叔丁氧羰基酐((BOC)₂O)处理，得到所需的式2a的化合物。

羟甲基为β-构象的式2化合物，即式2b的化合物

由式2a的化合物进行异构化制备，这可按任何不影响其它位置立体化学的方法进行，如：适宜的式2a化合物经小心氧化，如用Dess-Martin Periodinane处理，所得的甲酰基于α-构象的式4a的醛用非亲核性碱如1，8-二氮二杂环(5，4，0)十一-7-烯

(DBU)在降低的温度下(优选-78℃，以防消除反应)处理，根据酸性检查，得到式4b的醛，其中甲酰基处于β-构象，随后，用硼氢化钠还原醛基官能团，得到所需的式2b的化合物。

式3的3H-环戊〔c〕异噁唑从以前的文献中可知，如：B.Bernet和A.Vasella，Helv，ChimActa 62：2400(1979)，或可按类似方法制备。

R为(C₁-C₆)烷基或(CH₂)nAr基的式1化合物物可以由相应的R为氢的结构1的化合物制备。用NaBH₃CN和R¹为糖基或保护的羟基烷基的醛R¹ CHO：如甘油醛丙酮化合物还原活化，得到式1的化合物或其保护的衍生物。除去保护基后，例如：酸水、如果R¹ CHO为甘油醛丙酮化合物，按上述方法得到了所需的式1的产品(β，β构象)。

如上述普通化学制备了式1化合物，其中3位取代基为β构象，3位取代基为α-构象的式1的相应化合物可按类似方法，由具有适宜的立体化学的结构3化合物进行制备。

本发明的化合物为α-甘露糖苷酶和α-岩藻糖苷酶抑制剂，这可由化合物抑制刀豆甘露糖苷酶或甘露糖苷酶II的活性说明如下：甘露糖苷酶筛选检测(Kang，等，Plant Physiol.71：551-554(1984)。甘露糖苷酶的活性首先用刀豆酶对硝基苯基底物进行如下筛选，用96孔培养板，总Rxnmix 200λ。1.加试验化合物用H₂O稀释到100λ。2.加25λ的PH4.5的含有10mMZncl₂的1M乙酸钠缓冲液。3.加25λ的酶(1mu)或约0.05ug蛋白质。4.混合并在标准强度下培养30分钟。5.加50λ的10mM对硝苯基-α-吡喃甘露糖苷水溶液，开始Rxn，于37℃培养30分钟。加入100λ的0.2M(2％)碳酸钠溶液(ph～12)终止反应，读405nm的吸收度。甘露糖苷酶II检测(Elbein等，Methods Enz.Vol.179，P.468)，具有抗刀豆活性的化合物被检测其对抗纯化的α-甘露糖苷梅II的活性，用100λ，总Rxn体积，如下方法进行。1.加试验化合物，用水稀释加60λ。2.加10λ的0.5MMES缓冲液，PH6.0。3.加10λ的1％三硝基甲苯X-100，4.加10λ的纯化的酶，并在标准强度下培养5分钟，5.加5000CPM的GlcNAcMan₅-GlcNAc底物，开始Rxn，并在37℃培养60分钟。6.用20λ的醋酸终止反应，加1ml的ConA缓冲液B，通过ConA柱层析测定释放的放射性，用上述方法，得到表1和表2中的数据。

              表1

化合物对抗α-甘露糖苷酶II，

糖蛋白合成酶(纯化的)的IC₅₀测定化合物                IC₅₀ug/ml   uM苦马豆碱                0.007      0.041，3β，5β，R＝CH₃    0.173      1.0

             表2

α-甘露糖苷酶(刀豆)的IC₅₀测定化合物                       IC₅₀ug/ml苦马豆碱                       0.0151，3β，5β，R＝CH₃           0.0111，3β，5β，R＝1-甲基甘       0.1露糖基和甲露糖基(3∶1)

实现本发明的方法时，本发明化合物的有效量为产生免疫刺激、抗病毒或抗转移作用所需要的壁。当病人的免疫系统受到破坏时，如感染了HIV的患者，AIDS和ARC的致病介质，当病人经骨髓移植时，患有各种癌症及其它病毒性疾病的患者需要免疫刺激剂。本发明的化合物对于包膜病毒如逆病毒、流感病毒、细胞区病毒、疱疹病毒、所引起的病毒性疾病都具有直接抗病毒作用，最后，本发明的化合物可用于防止或治疗肿瘤转移。

需要免疫刺激，抗病毒或抗转移治疗的病人治疗所需的具体剂量取决于这些因素，如：体重、疾病类型、患者的年龄以及病程的严重性，这些因素通常是诊断治疗患者的医师所熟悉和考虑的。通常给患者的口服剂量为每天0.2-20mg/公斤患者体重，且0.5-5mg/公斤患者体重的剂量更为理想。化合物优选在用餐时间以含有25mg-250mg所选化合物的单剂量或多剂量口服给药。

在实现本发明的方法时，活性成分优选给合干由药剂载体构成的组合物中，而且其重量占本发明化合物或其药用盐的约5％＿90％。术语“药剂载体”指用于药剂活性化合物配制为间隔动物给药的已知药剂赋形剂，其在使用条件下一般无毒、无致敏性、组合物可按已知技术制备，用于制备片剂，胶囊、酏剂、糖浆、乳剂、分散剂、可湿性及泡腾粉剂，可含有已知的用于制备所需特殊类型组合物的适宜的赋形剂。

优选的给药途径为口服给药，为口服给药，式1化合物可配制成固体或液体制剂，如胶囊、丸剂、片剂、锭剂、糖锭、熔融剂、粉剂、溶液剂、悬浮剂或乳剂。固体剂可以是普通的硬—或软明胶胶囊，其中含有如：表面活性剂、润滑剂，及惰性填料如乳糖，蔗糖、磷酸钙、和玉米淀粉，本发明的化合物还可用常规片剂基质压片，如：乳糖、蔗糖、玉米淀粉与粘合剂：如：阿拉伯胶、玉米淀粉、或明胶混合崩解剂用于帮助用药后片剂的崩解和溶出。如马铃署淀粉、藻酸、玉米淀粉、及瓜耳胶，润滑剂用于改善片剂颗粒的流动性、并防止片材粘附于片剂冲垫和冲表面，如滑石、硬脂酸、或硬脂酸镁，硬脂酸钙或硬脂酸锌。染料、着色剂、加香剂、用来增加片剂的美观，使其更易于被病人接受。用于口服液体剂型的适宜的赋形剂包括稀释剂如水和一些醇，如：乙醇、苄醇、及聚乙二醇，可以加或不加药用表面活性剂，助悬剂，或乳化剂。

本发明的式1化合物也可非胃肠道给药，即：皮下、静脉、肌内或腹腔内注射剂，即化合物于药用稀释剂中与药剂载体混合，药物载体可以是无菌的液体或液体混合物如：水、生理盐水、葡萄糖水溶液，及有关的糖溶液，醇如乙醇、异丙醇、十六烷醇，二醇如丙二醇、或聚乙二醇，甘油酮缩醇，如：2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇，醚如：聚乙二醇400，油，脂肪酸，脂肪酸酯，或甘油酯，或乙酰化脂肪酸甘油酯，可加或不加药用表面活性剂如肥皂或洗涤剂，助悬剂如果胶，Carbomers，甲基纤维素、羟丙甲基纤维基素、或羧甲基纤维素、乳化剂及其它药用助剂。用于本发明非胃肠道处方的油包括：石油、动物油、植物油或合成原料如：花生油、豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、矿脂、及液体石蜡、适宜的脂肪酸包括：油酸、硬脂酸、及异硬脂酸，适宜的脂肪酸酯包括如：油酸乙酯，肉豆蔻酸异丙酯，适宜的肥皂包括：脂肪族碱金属，铵及三乙醇胺盐，及适宜的洗涤剂包括阳离子洗涤剂，如：二甲基二烷基铵卤化物，烷基吡啶卤化物；阴离子洗涤剂如：烷基、芳基及烯烃磺酸盐、烷基、烯烃醚、及单甘油酯的硫酸酯，硫代琥珀酸酯；非离子洗涤剂，如：脂肪族胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺、及聚氧乙烯聚丙烯共聚物；及两性洗涤剂，如：β-氨基丙酸烷基酯，和2-烷基咪唑烷季胺盐，以及其混合物，本发明的非胃肠给药组合物通常为含有约0.5-25％(重量)式1化合物的溶液，也可使用防腐剂和缓冲液，为减少或消除注射部位的刺激性，该组合物含有亲水亲脂平衡常数(HLB)约为12-17的非离子表面活性剂，该处方中表面活性剂的含量通常为约5-15％(重量)。表面活性剂可以是具有上述HLB的单一组分、亦可以是具有所需HLB的两种或多种组分的混合物，用于非胃肠道给药制剂中的表面活性剂为聚乙烯山梨醇脂肪酸酯，如：山梨醇单油酸酯，及环氧乙烷与疏水碱的高分子量加合物，由1，2-环氧丙烷与1，2-丙二醇缩合所得。

                 实例

下列实例用于描述本发明，然而其并不限制本发明。实例1(1α，2β，3β，4α，5β)-甲基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺的制备1a.(+)-(1α，2β，3β，4α，5β)-甲基(5＿(羟甲基)＿2，3，4-三(苯甲氧基)环戊基)氨基甲酸，1，2-二甲基乙基酯(2a，R＝CH₃)

含有5.641g(12.66mmol)的3H-环戊〔c〕异噁唑的(式3(R＝CH)化合物)(B.Bernet和A.Vasella，Helv.Chem.Acta 62：2400(1979))和2.98g(45.6mmol)的活化的锌粉(用20％盐酸、水洗至滤液呈中性，用丙酮、无水醚洗)的混合物的75ml 85％乙酸水溶液在50-55℃搅拌加热1小时，30到45分钟后，加一小份锌粉，混合物经减压部分浓缩，随后用水稀释，将水溶液从残余物锌上倾出，随后用水、稀氢氧化钾溶液和乙酸乙酯洗锌粉，洗液合并，分离有机层，水层用乙酸乙酯提取两次，合并的有机提取液用氢氧化钾水溶液、稀氨水，盐水洗，干燥(MgSO₄)，减压浓缩得到5.68g无色油状物，将其溶于含有3.50ml(15.2mmol，1.20当量)的(Boc)₂O的75ml温热的(50℃)THF中，立即放出气体，溶液回流加热2小时，随后减压浓缩，经闪式层析用70/30环己烷/乙酸乙酯洗脱，得到6.2g粘稠的油状物，用戊烷研制得到6.031g(87％)的所需的白色固体化合物。

mp74.5-77℃；IR(KBr)ν_max 3512，2936，1682，1454，1400，1368，1346，1148，1126，1098，1072，740，698cm^-1：¹H NMR(CDCl₃)δ7.4-7.2(m，15H)，4.72-4.42(m，7H，包括4.52(d，J＝12Hz)and 4.44(d，J＝12Hz))，4.32-4.17(m，1H)，4.01(d，0.5H，J＝2Hz)，3.99(d，0.5H，J＝2Hz)，3.96-3.86(m，1H)，3.63-3.54(m，2H)，2.8(m，1H)，2.79 and 2.74(2s，3H)，2.63(m，0.5H)，2.17(m，0.5H)，1.47(s，9H)；质谱，m/z 548(M⁺+1)，490，476，474，449，448(100)；[α]_D ²⁵+56.3°(c0.27，CHCl₃).元素分析：计算值C₃₃H₄₁NO₆：C，72.37；H，7.55；N，2.56.实测值C，72.22；H，7.58；N，2.52.1b.(1α，2α，3α，4β，5β)-(2-甲酰基-3，4，5-三(苯甲氧基)环戊基)甲基氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(4a，R＝CH₃)

往搅拌着的含有2.603g(6.16mmol)的Dess-Martin Periodinane试剂的70ml CH₂cl₂混悬液中加含有1.83g(3.34mmol)1a的产物的20ml CH₂cl₂溶液(+2×5ml CH₂Cl₂洗)，混合物搅拌1.25小时，用醚稀释，随后倾入含有13g(130mmol)的KHCO₃和6g(38mmol)的Na₂S₂O₃.5H₂O的水中，当两层均澄清时，有机层分离，用盐水洗，干燥(MgSO₄)，减压浓缩，得到1.85g(100％)的所需的油状化合物：1c.(1α，2β，3α，4β，5β)-(2-甲酰基-3，4，5-三(苯甲氧基)环戊基)甲基氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(4b，R＝CH₃)

往搅拌着的含有1.85g(3.34mmol)的1b产物的45ml CH₂cl₂于-78℃在氮条件下用注射器滴加0.27ml(1.8mmol)的1，8-二氮二杂环(5，4，00)十一碳-7-烯(DBU)，37分钟后，溶液于-78℃加0.20ml(3.5mmol)的乙酸使骤冷，溶液倾入醚中，用水、稀KHCO₃，和盐水洗，用MgSO₄干燥，减压浓缩得到1.87g(100％，含微量的CH₂Cl₂和醚)所需的无色油状化合物：

¹H NMR(CDCl₃)δ9.69(s，1H)，7.4-7.23(…，15H)，4.86(t，1H，J＝8.4Hz)，4.6-4.4(m，6H)，4.15-4.05(m，2H)，3.87(bs，1H)，2.74(bs，4H)，1.45(s，9H).1d.(+)-(1α，2β，3β，4α，5β)-甲基(5-(羟甲基)-2，3，4-三(苯甲氧基)环戊基)氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(2b，R＝CH₃)

往搅拌着的含202mg(0.370mmol)的1c化合物的10ml无水乙醇中加16mg(0.42mmol)的NaBH₄，15分钟后，加乙酸使反应混合物骤冷，随后用NaHCO₃中和，混合物减压部分浓缩，用NaOH水溶液稀释，分次用醚提取，合并的提取液用盐水洗，干燥(MgSO₄)，减压浓缩得到184mg(91％)的所需的近无色的油状化合物，闪式层析，用含22.5％乙酸乙酯的环己烷洗脱，得到无色油状化合物：

IR(纯)ν_max 3458，2976，2930，2870，1692，1668，1454，1392，1366，1152，1090，1074，1028，736，698cm^-1；¹H NMR(CDCl₃)δ7.38-7.25(m，15H)，4.65-4.37(m，7H)，3.98(dd，1H，J＝8.9，5Hz)，3.84(dd，1H，J＝5，2.5Hz)，3.81-3.54(m，4H)，2.70 and 2.64(2sin～1∶2.5 ratio，3H)，1.98 and1.88(2bs in 3∶8 ratio，1H)，1.48(s，9H)；质谱，m/z 548(M⁺+1)，493，492(100)，476，449，448，384，91；[α]_D ²⁵+44.8°(c1.02，CHCl₃).元素分析：计算值C₃₃H₄₁NO₆：C，72.37；H，7.55；N，2.56实测值：C，72.42；H，7.70；N，2.35.1e(+)-(1α，2β，3β，4α，5β)-甲基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)＿环戊基)氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯

将含有2.723g(4.97mmol)的1d的产品的

50mlCH₃OH溶液，用0.30g钯黑做催化剂，在帕尔氢

化装置中进行氢化4天，得到1.51g浅黄色油状物，闪式层

析，用含12％CH₃OH的乙酸乙酯洗脱，得到1.294g

(94％)的所需白色结晶化合物：

mp81-83℃；IR(KBr)ν_max 3420，2974，2930，1690，1666，1368，1158，1046，886 cm^-1；¹H NMR(CDCl₃)δ5.22(bd，2H，J＝5.6Hz)，4.64(bs，1H)，4.58(bs，1H)，4.15(bs，2H)，3.94(bs，1H)，3.73(bs，1H)，3.54(bs，1H)，2.81(s，3H)，1.78(bs，1H)，1.44(s，9H)；FABMS(甘油)，m/z 278(M⁺+1，100)，222(100)，204，178；[α]_D ²⁵+30.8°(c1.06，CHCl₃).元素分析：计算值C₁₂H₂₃NO₆：C，51.97；H，8.36；N，5.05.实测值C，52.03；H，9.59；N，4.83.1f(1α，2β，3β，4α，5β)-甲基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺(1，R＝CH₃，3β，5β-构象)

从冰浴冷却的含1.255g(4.53mmol)1e产品的125ml醚/CH OH中冒出氯化氢气体20分钟，溶液温至25℃过夜，随后减压浓缩，残余物层析，用3∶1∶2CH₃OH∶浓NH₄OH∶CH₂Cl₂洗脱，氨基醇溶于乙醇中，减压除去溶剂，将该物质重新溶于乙醇，用助滤剂过滤，减压浓缩得到淡黄色玻璃状物，将其溶于水中用活性炭处理，通过助滤剂过滤，减压浓缩得到0.686g(85％)的7，该无色玻璃状物在储存中缓慢结晶：¹H NMR(D₂O)δ3.86-3.59(m，5H)，2.61(dd，1H，J＝7.3，2.9Hz)，2.31(s，3H)，1.55(m，1H)；¹³C NMR(D₂O)δ79.34，78.16，75.94，67.98，64.28，52.10，35.92.

                   实例2

制备(1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺(1，R＝H，3β，5β-构象)2a 3H-环戊(c)异噁唑(3，R＝CH₂ph)

按与报导方法类似的方法制备出收率为71％的所需化合物(B.Bernet和A.Vasella，Helv.Chim.Acta 62：2400(1979))，用乙烷/环己烷重结晶得到白色结晶：from hexane/cyclohexane gave white crystals：mp 68.5-70.5℃；IR(KBr)ν_max 3436，2874，1454，1138，1114，1088，1026，1014，752，730，698cm^-1；¹H NMR(CDCl₃)δ7.37-7.24(m，18H)，7.18-7.14(m，2H)，4.72(d，1H，J＝12.0Hz)，4.57(d，1H，J＝12.0Hz)，4.54(d，1H，J＝12.0Hz)，4.52(d，1H，J＝12.0Hz)，4.36(d，1H，J＝12.2Hz).4.26(d，1H，J＝12.2Hz)，4.24(t，1H，J＝8Hz)，4.19(dd，1H，J＝9.0，3.5Hz)，4.02(d，1H，J＝12.5Hz)，3.93(dd，1H，J＝8.8，4.8Hz)，3.89(dd，1H，J＝9.0，7.9Hz)，3.71(d，1H，J＝12.5Hz)，3.67(dd，1H，J＝4.8，1.1Hz)，3.47(bd，1H，J＝8.3Hz)，3.26(qd，1H，J＝8.1，3.5Hz)；¹³C NMR(CDCl₃)138.60，138.54，138.07，136.86，129.25，128.50，128.34，128.27，128.24，127.96，127.62，127.55，127.52，127.42，82.53，81.35，79.40，72.62，72.37，71.61，70.28，65.54，60.53，45.60；质谱，m/z 550(M⁺+29)，523，522(M⁺+1，100)，444，432，91；[α]_D ²⁰-69.0°(c1.05，CHCl₃).元素分析：计算值C₃₄H₃₅NO₄：C，78.28；H，6.76；N，2.69.  实测值：C，78.41；H，6.83；N，2.62.2b(+)-(1α，2β，3β，4α，5α)-苯甲基(5-(羟甲基)-2，3，4-三(苯甲氧基)环戊基)氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(2a，R＝CH₂ph)

利用相同的方法，闪式层析，用2∶1的环己烷/乙酸乙酯洗脱、得到所需化合物，收率为89.5％的澄清玻璃状物：

              IR(CHCl₃)ν_max 3460，2930，1690，1454，1366，1168，1122，736，698 cm^-1；¹H NMR(CDCl₃)δ7.43-7.05(m，20H)，4.80-4.45(m，7H)，4.28-3.85(m，5H)，3.65-3.31(m，4H)，2.75-2.64(m，1H)，1.43 and 1.24(2s in 1∶2 ratio，9H)；质谱(51.9°(c1.07，CHCl₃).元素分析：计算值₉H₄₅NO₆：C，spectrum，m/z 624 (M⁺+1)，552，525，524(100)，91；[α]_D ²⁰+75.09；H，7.27；N，2.25.实测值：C，75.42；H，7.36；N，2.20.2c，(1α，2α，3α，4β，5β)-(2-甲酰基-3，4，5-三(苯甲氨基)环戊基)苯甲基氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(4a，R＝CH₂ph)

用相同方法，得到所需的浅黄色粘稠油状粗化合物：和

                                      ¹H NMR(CDCl₃)δ 9.77and 9.66(2 bs in 3∶1 ratio，1H)，7.43-7.18(m，18H)，7.16-7.10(m，2H)，4.8-3.75(m，12H)，3.24-3.15(m，1H)，1.42(s，9H).2d(+)-(1α，2β，3β，4α，5β)-苯甲基(5-羟甲基)-2，3，4-三(苯甲氧基)环戊基)氨基甲酸，1，1-二甲乙基酯(2b，R＝CH₂ph)

用相同的方法，将4a(R＝CH₂ph)部分差向异构表异构化成为4a和4b(R＝CH₂ph)的混合物，并将该混合物用NaBH₄还原，经闪式硅胶层析，用含20％乙酸乙酯的环己烷洗脱，得到50％的2b(R＝CH₂ph)和22％的极性更强的2a(R＝CH₂ph)，得到的化合物为澄清的粘稠糖浆：

                                         IR(CHCl₃膜)ν_max 3458，2930，1690，1454，1366，1166，1128，1090，1074，752，736，698 cm-1；¹H NMR(CDCl₃)δ7.38-7.15(m，20H)，4.80(t，1H，J＝5Hz)，4.59-3.80(m，12H)，3.60-3.52(m，1H)，3.4-3.3(m，1H obscured by H₂O peak)，2.04-1.93(m，1H)，1.39 and 1.26(2s in 1∶2 ratio，9H)；质谱，m/z 624(M⁺+1)，568，524，460，93，92，91(100)；[α]_D ²⁰+57.1°(c 1.05，CHCl₃).元素分析，计算值C₃₉H₄₅NO₆：C，75.09；H，7.27；N，2.25.实测值：

C，75.25；H，7.30；N，2.32.2e(1α，2β，3β，4α，5β)-苯甲基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺(1，R＝CH₂ph，3β，5β-构象)和2f(1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺(1，R＝H，3β，5β-构象)

将含有1.31g(2.1mmol)的2b(R＝CH₂ph)的40ml乙酸溶液中加349mg钯黑在帕尔振荡器中氢化4天，分离出的粗产品溶于12ml 3∶1的乙醇/环己烯中，加105mg氧化钯、搅拌的混合物在氮条件下加热回流2天，粗混合物用20ml乙酸为溶剂加185mg钯黑再经催化氢化(帕尔)4天，最后，用含有1ml浓盐酸的20ml乙醇为溶剂，加165mg钯黑催化氢化3天。粗混合物经硅胶层析用3∶1∶2的甲醇∶浓氨水二氯甲烷洗脱，得到234mg部分纯化的1(R＝CH₂ph，β，β-构象)(用甲醇研制除去一些不溶物质后)和168mg部分纯化的极性更强的1(R＝H，β，β-构象)。对于1(R＝CH₂ph，β，β-构象)，¹H NMR(D₂O，no DSS)δ7.48-7.41(m，5H)，4.78(HOD)，4.35(t，1H，J＝5.8Hz)，4.34(d，1H，J＝12.9Hz)，4.25(d，1H，J＝12.9Hz)，3.95(t，1H，J＝5.9Hz)，3.81(t，1H，J＝6.4Hz)，3.76(dd，1H，J＝11.5，5.4Hz)，3.64(dd，1H，J＝11.5，6.4Hz)，3.32(dd，1H，J＝8.0，5.2Hz)，2.02(m，1H).For 1(R＝H，β，β-configuration)：¹H NMR(D₂O，no DSS)δ4.80(HOD)，3.9-3.63(m，5H)，3.05-2.97(m，1H)，1.71-1.6(m，1H).

              实例3

制备(1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三羟基)环戊基)-(1′-3′二羟丙-2′-基)胺(1，R＝1，3-二羟丙-2-基；3β，5β-构象)3a制备(1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三(苯甲氧基)-5(羟甲基)环戊基)-(1′，3′-二羟丙-2′-基)胺

将含有1.15g(2.65mmol)的((1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三(苯甲氧基-5-(羟甲基)环戊胺)，497mg(2.76mmol)的2，5-二羟基-(2，5-二羟甲基)二噁烷和202mg(3.21mmol)的NaBH₃CN的混合物的17ml甲醇于室温下搅拌，17小时后，加42mg(0.23mmol)的2，5-二羟基-2，5-(二羟甲基)二噁烷，反应4天后，反应混合物用氢氧化钾水溶液/乙酸乙酯处理，提取液用盐水洗，用MgSO₄干燥，减压干燥，得到1.42g琥珀色油状物，经闪式硅胶层析，用10％甲醇/1％氨水/二氯甲烷洗脱，得到368mg产物(27％)；m/z 508(M⁺H⁺，100)3b制备(1α，2β，3β，4α，5β)-(2，3，4-三羟基)-5-(羟甲基)环戊基)-1′，3′-(二羟丙-2′-基)胺

将含有366mg(0.721mmol)实例3a的产品和50mg钯黑混合物的10ml乙酸于帕尔氢化装置中振荡8天，除去催化剂(用乙酸洗)，将滤液减压浓缩，经离子交换层析分离出产品，过(AG 50 W-X8(Bio-Rad))柱，用0.1N氨水洗脱，随后经离子交换层析，用0.1N HCl，随后用0.5N Hcl洗脱，经水中冷冻干燥得到125mg无色玻璃状物。

             实例4

制备(1α，2β，3β，4α，5β)-6-脱氧-6-甘露糖基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺和(1α，2β，3β，4α，5β)-6-脱氧-1-O-甲基-6-甘露糖基(2，3，4-三羟基-5-(羟甲基)环戊基)胺，(1，R＝6-脱氧-6-甘露糖基和R＝6-脱氧-1-O-甲基-6-甘露糖基)4a将含有228mg(0.526mmol)(1，2，3，4，5)-2，3，4-三(苯甲氧基)-5-(羟甲基)环戊胺和312mg(0.592mmol)6-溴-6-脱氧-1-O-甲基-2，3，4-三(苯甲氧基)甘露糖和0.77g(7.7mmol)KHCO₃的混合物的6ml甲苯在N条件下加热回流搅拌6天，用KOH水溶液/乙酸乙酯处理，盐水洗，用MgSO₄干燥，得到粗产品，其经闪式硅胶层析纯化，用70/30乙酸乙酯/环己烷洗脱，得到147mg(32％)浅黄色油状物。4b将含有386mg(0.439mmol)的4a的产品和65mg钯黑的混合物的10ml乙酸于帕尔振荡器中氢化9天。产品减压浓缩并经离子交换层析(AG 50W-X8(Bio-Rad))，用0.1N，随后用0.5N Hcl洗脱，得到142mg淡黄色泡沫胶/玻璃状物，NMR和高分辨质谱m/z表明为-1∶3所需的化合物的混合物，C₁₂H₂₃NO₉·HCl∶M/Z(M+1)′326和C₁₃H₂₅NO₉.HClm/z(M+1)⁺340。

Claims (4)

1.制备下式的化合物或其药用盐的方法，

其中R为用一或两个羟基取代的(C₁-C₆)烷基，糖基，式

-(CH₂)_n＿Ar的基团，其中，n为1-4的整数，Ar

为一或两个下列基团取代的苯基，取代基包括：(C₁-

C₄)烷基，(C₁-C₄)烷氧基，氟、氯、溴、碘、氨

基、单(C₁-C₄)烷基氨基或二(C₁-C₄)烷基氨基，

该方法包括：

i)还原式3的3H-环戊〔c〕异噁唑，

其中，R如上定义，得羟甲基为α构型的式2a化合物

其中R如上定义；

ii)将式2a化合物异构化得羟甲基为β构型的式2b化合物其中R如上定义，该异构化包括：

(a)用下式Dess-Martin periodinane氧化式2a化合物，得式4a醛

(b)在还原温度下，用非亲核碱处理式4a醛，得式4b醛；

(c)还原式4b醛，得2b化合物；

(iii)还原式2a或式2b化合物，得式1化合物。

2.权利要求1的方法，其中R为甲基，乙基，2，3-二羟丙基，或甘露糖基。

3.权利要求1的方法，其中羟甲基为β-构象。

4.权利要求2的方法，其中羟甲基为β-构象。