CN103355109B - 一种利用大豆离体叶片检测大豆抗蚜性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用大豆离体叶片检测大豆抗蚜性的方法，在密闭的装置中通过营养液供给大豆离体叶片营养，繁殖大豆蚜虫，鉴定大豆品种的抗蚜性。主要步骤包括：大豆离体叶片装置的制造技术；大豆营养液配方的配备技术；大豆离体叶采摘技术；大豆蚜虫抗性鉴定技术；大豆蚜虫环境控制技术，该方法简单易操作，不受季节限制，能大量、准确鉴定大豆的蚜虫抗性。
Description
技术领域
本发明涉及一种大豆品种培育方法，具体涉及一种利用离体叶片检测蚜虫抗性的方法。
背景技术
大豆蚜虫是世界范围的农业害虫，培育抗性大豆品种是解决这一虫害的有效途径，而育种上杂交后代需要大量的抗性检测和筛选。据目前文献介绍，大豆蚜虫的繁殖都是在完整植株上，完整植株繁殖蚜虫有不易控制等缺点。杨振宇等在《吉林农业科学》2004年第29卷第5期第3-6页“中国东北抗蚜野生大豆重复检测的研究”中评述：在人工气候箱内可进行抗蚜虫重复检测，但是由于大豆植株较大，该方法不适合进行大批量大豆品种的抗蚜性检测。如何解决这一困难对大豆抗蚜虫育种具有重要意义。
发明内容
本发明针对现有技术存在的不足，提供一种新的大豆离体叶片装置检测蚜虫抗性的方法。本发明实施简便，可以更加方便、有效、准确的检测大豆抗蚜性。主要包括：大豆离体叶片装置的制造技术；大豆营养液配方的配备技术；大豆离体叶采摘技术；大豆蚜虫抗性鉴定技术；大豆蚜虫环境控制技术。该发明解决了大豆抗蚜虫鉴定受环境条件影响的技术难点，达到在可以控制的实验室条件下大量、准确鉴定大豆的抗蚜性。本发明建立了一种大豆离体叶片装置检测大豆蚜虫抗性的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种利用大豆离体叶片检测大豆抗蚜性的方法，包括以下步骤：
1）待植株生长至2-4复叶期时，采集刚展开的复叶，用手术刀紧贴植株主茎切割，将具有全部叶柄的复叶片迅速插入装有营养液的离体叶片装置中，所述装置为一端封闭的容器，所述容器内部空间由隔板分成上、下两层，所述营养液装载于所述容器内部空间的下层，所述营养液用于提供离体叶片的生长营养；
2）接种2-4头无翅蚜虫于所述装置中的正面叶片上；
3）把所述装置放置于23-25℃的培养室，光照强度300μmolm-2s-1，控制昼/夜为18/6h，试验鉴定时间为13天。
较佳地，所述装置为玻璃管（直径10cm，高15-17cm），所述隔板为直径×厚度为9cm×2cm的泡沫板，所述泡沫板上钻有0.5cm×0.5cm的小孔，优选所述营养液高度约3-5cm，优选所述没有封闭的一端用封口膜密封。
较佳地，所述复叶为大豆复叶，所述营养液为大豆营养液，优选所述大豆营养液的配方（克/升水）为：蔗糖10-12g，硫酸铵0.237g，硫酸镁0.537g，硝酸钙1.26g，硫酸钾0.25g，磷酸钾0.35g，乙二铵四乙酸二钠20mg，硫酸亚铁15mg；硼酸6mg，硫酸锰4mg，硫酸锌1mg，硫酸铜0.5mg，钼酸铵0.5mg。
本发明的优点在于：可以让蚜虫在一个可控、密封的环境里繁殖；大豆营养液配方的配备技术能够使大豆保持正常生长；采集合适的大豆离体叶可以使试验材料处在统一的生长时间，并且大豆蚜虫在幼嫩的大豆叶上生长快速；大豆抗蚜虫性鉴定技术可以准确统计蚜虫的繁殖数量，鉴定区分大豆品种的抗蚜性；蚜虫培养环境条件的控制技术，调节和控制蚜虫生长。用本发明方法鉴定大豆品种的抗蚜性，能够大量、快速、准确区分品种间大豆抗蚜性间的差异。
附图说明
图1为离体叶片装置的结构图。
本发明中所用的大豆感蚜品种Williams82为大豆公开测序品种，抗蚜品种Dowling为已经公开具有Rag1基因的品种，都可以在种子公司通过购买方式获得。
具体实施方式
本发明实施例中，利用大豆离体叶片检测大豆抗蚜性的装置如图所示，包括一端封闭的玻璃管身1，设有小孔的泡沫隔板2，玻璃管1中，泡沫隔板2下方为营养液3，大豆离体叶片3的叶柄自泡沫隔板2上的小孔插入浸入营养液3中，蚜虫6接种在大豆叶片上，用封口膜4封闭玻璃管。
实施例1
对田间抗性测验筛选得到的抗蚜品种P203和感蚜品种Williams82杂交，F2代利用大豆离体叶片装置检测抗蚜性的方法进行鉴定。试验采用每个F2单株3次重复，随机放置。
1）大豆离体叶片装置的制造技术。装置玻璃管身（直径10cm，高15cm），内有一个直径×厚度为9cm×2cm的泡沫板，泡沫板上钻有0.5cm×0.5cm的小孔（如图1），营养液高度约3-5cm，装置用封口膜密封。
2）大豆营养液配方的配备技术。营养液配方（克/升水）为：蔗糖10g，硫酸铵0.237g，硫酸镁0.537g，硝酸钙1.26g，硫酸钾0.25g，磷酸钾0.35g，乙二铵四乙酸二钠20mg，硫酸亚铁15mg，硼酸6mg，硫酸锰4mg，硫酸锌1mg，硫酸铜0.5mg，钼酸铵0.5mg。
3）大豆离体叶采摘技术。播种大豆品种，待植株生长至2复叶期，采集刚展开的复叶，用手术刀紧贴大豆主茎切割，具有全部叶柄的复叶片，迅速插入离体叶片装置中。
4）大豆蚜虫抗性鉴定技术。用毛笔接种2头无翅蚜虫于正面叶片上。
5）大豆蚜虫环境控制技术。把大豆离体叶片装置放置温度23℃的培养室，光照强度300μmolm-2s-1，控制昼/夜为18/6h。试验鉴定时间为13天。
鉴定结果：统计每个单株大豆蚜虫的繁殖数量，筛选得到的抗性品系的蚜虫数量是起始蚜虫数量的3倍，感蚜品种蚜虫数量是起始蚜虫数量的100倍以上，大豆品种抗蚜性表现显著的差异。
实施例2
对田间抗性测验筛选得到的抗蚜品种P203和感蚜品种Williams82杂交，F2代利用大豆离体叶片装置检测抗蚜性的方法进行鉴定。试验采用每个F2单株3次重复，随机放置。
1）大豆离体叶片装置的制造技术。装置玻璃管身（直径10cm，高16cm），内有一个直径×厚度为9cm×2cm的泡沫板，泡沫板上钻有0.5cm×0.5cm的小孔（如图1），营养液高度约3-5cm，装置用封口膜密封。
2）大豆营养液配方的配备技术。营养液配方（克/升水）为：蔗糖10g，硫酸铵0.237g，硫酸镁0.537g，硝酸钙1.26g，硫酸钾0.25g，磷酸钾0.35g，乙二铵四乙酸二钠20mg，硫酸亚铁15mg，硼酸6mg，硫酸锰4mg，硫酸锌1mg，硫酸铜0.5mg，钼酸铵0.5mg。
3）大豆离体叶采摘技术。播种大豆品种，待植株生长至3复叶期，采集刚展开的复叶，用手术刀紧贴大豆主茎切割，具有全部叶柄的复叶片，迅速插入离体叶片装置中。
4）大豆蚜虫抗性鉴定技术。用毛笔接种3头无翅蚜虫于正面叶片上。
5）大豆蚜虫环境控制技术。把大豆离体叶片装置放置温度24℃的培养室，光照强度300μmolm-2s-1，控制昼/夜为18/6h。试验鉴定时间为13天。
鉴定结果：统计每个单株大豆蚜虫的繁殖数量，筛选得到的抗性品系的蚜虫数量是起始蚜虫数量的3倍，感蚜品种蚜虫数量是起始蚜虫数量的100倍以上，大豆品种抗蚜性表现显著的差异。
实施例3
对田间抗性测验筛选得到的抗蚜品种P203和感蚜品种Williams82杂交，F2代利用大豆离体叶片装置检测抗蚜性的方法进行鉴定。试验采用每个F2单株3次重复，随机放置。
1）大豆离体叶片装置的制造技术。装置玻璃管身（直径10cm，高17cm），内有一个直径×厚度为9cm×2cm的泡沫板，泡沫板上钻有0.5cm×0.5cm的小孔（如图1），营养液高度约3-5cm，装置用封口膜密封。
2）大豆营养液配方的配备技术。营养液配方（克/升水）为：蔗糖12g，硫酸铵0.237g，硫酸镁0.537g，硝酸钙1.26g，硫酸钾0.25g，磷酸钾0.35g，乙二铵四乙酸二钠20mg，硫酸亚铁15mg，硼酸6mg，硫酸锰4mg，硫酸锌1mg，硫酸铜0.5mg，钼酸铵0.5mg。
3）大豆离体叶采摘技术。播种大豆品种，待植株生长至4复叶期，采集刚展开的复叶，用手术刀紧贴大豆主茎切割，具有全部叶柄的复叶片，迅速插入离体叶片装置中；
4）大豆蚜虫抗性鉴定技术。用毛笔接种4头无翅蚜虫于正面叶片上。
5）大豆蚜虫环境控制技术。把大豆离体叶片装置放置温度25℃的培养室，光照强度300μmolm-2s-1，控制昼/夜为18/6h。试验鉴定时间为13天。
鉴定结果：统计每个单株大豆蚜虫的繁殖数量，筛选得到的抗性品系的蚜虫数量是起始蚜虫数量的3倍，感蚜品种蚜虫数量是起始蚜虫数量的100倍以上，大豆品种抗蚜性表现显著的差异。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域的技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (4)
1.一种利用大豆离体叶片检测大豆抗蚜性的方法，包括以下步骤：
(1)待植株生长至2-4复叶期时，采集刚展开的复叶，用手术刀紧贴植株主茎切割，将具有全部叶柄的复叶片迅速插入装有营养液的离体叶片装置中，所述装置为一端封闭的容器，所述容器内部空间由钻有小孔的隔板分成上、下两层，所述营养液装载于所述容器内部空间的下层，所述营养液用于提供离体叶片的生长营养；
(2)接种2-4头无翅蚜虫于所述装置中的正面叶片上；
(3)把所述装置没有封闭的一端用封口膜密封后放置于23-25℃的培养室，光照强度300μmolm-2s-1，控制昼和夜的时间分别为18和6h，时间为13天；
其中，所述装置为玻璃管体；所述隔板为泡沫板；所述小孔的直径为0.5cm；所述营养液为大豆营养液，一升所述大豆营养液的组分含量为：蔗糖10-12g、硫酸铵0.237g、硫酸镁0.537g、硝酸钙1.26g、硫酸钾0.25g、磷酸钾0.35g、乙二铵四乙酸二钠20mg、硫酸亚铁15mg、硼酸6mg、硫酸锰4mg、硫酸锌1mg、硫酸铜0.5mg和钼酸铵0.5mg。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述装置直径为10cm，高为15-17cm。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述泡沫板的直径为9cm，厚度为2cm。
4.如权利要求2或3所述的方法，其中，所述营养液高度为3-5cm。
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