CN103351437A

CN103351437A - Lingo结合分子及其制药用途

Info

Publication number: CN103351437A
Application number: CN2013102559773A
Authority: CN
Inventors: A·沃姆斯利; W·L·维沙尔特; M·科特斯-克罗斯; J·普拉斯勒; I·克拉格
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2006-11-17
Filing date: 2007-11-15
Publication date: 2013-10-16
Also published as: NO20092331L; CL2007003303A1; ES2363622T3; ZA200902409B; US20140255415A1; DE602007013445D1; US20130071400A1; BRPI0718406A2; JP2013056888A; EP2084190B1; TN2009000190A1; MA30965B1; JP2010509906A; EP2395022A9; AR063829A1; CR10756A; RU2009122514A; GT200900121A; CO6180433A2; CA2669181A1

Abstract

本发明提供了能结合到大鼠、食蟹猴和人LINGO多肽的结合分子，编码这样的结合分子的多核苷酸；包含所述多核苷酸的表达载体；包含能产生结合分子的多核苷酸的表达系统；包含如上所述的表达系统的分离的宿主细胞；这样的结合分子作为药物，特别是在促进轴突再生/可塑性的治疗中的用途；包含所述结合分子的药物组合物；及治疗与轴突变性和脱髓鞘相关的疾病的方法。

Description

LINGO结合分子及其制药用途

本申请是发明名称为“LINGO结合分子及其制药用途”的PCT申请PCT/EP2007/009880的分案申请，所述PCT申请的申请日2007年11月15日，进入中国国家阶段的日期为2009年5月8日，申请号为200780041583.0。

本发明涉及LINGO结合分子，如单抗或其Fab片段及该结合分子用于治疗具有中枢神经系统损伤的患者的用途。

发明背景

成年高等脊椎动物中枢神经系统(CNS)受伤后的功能恢复格外有限，这导致持久的神经性缺乏，如丧失肢体运动和感觉。迄今还缺乏有效治疗具有CNS损伤如脊髓损伤(SCI)和脑皮质损伤的人的方法。尽管成体CNS神经元一般在轴突切断术后仍能存活，但轴突再生却短暂且仅在有限区域中发生，因此减缓了功能相关的突触接触的再形成。此外，成体CNS可塑性能力也有限，因此妨碍了未损伤通路的再组织以功能性补偿由损伤所除去的通路。矛盾的是，外周神经系统(PNS)中由轴突切除术切除的轴突具有高的长距离再生并经常建立富有功能意义的连接的能力(Schwab(2004)Curr Opin Neurobiol14，118-124)。轴突再生/可塑性的此局限部分归因于在生成髓鞘的少突胶质细胞中多种蛋白质的表达，已显示所述蛋白质是神经突突起的有力抑制子，所述蛋白质为Nogo-A(Chen等人(2000)Nature403，434-439；GrandPre等人(2000)Nature403，439-444；Prinjha等人(2000)Nature403，383-384)、髓磷脂相关糖蛋白(MAG)和少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)(McKerracher等人(1994)Neuron13，805-811；Wang等人(2002)Nature417：941-944)(图1A)。

Nogo-A含有暴露于少突胶质细胞表面的多个神经突突起抑制性结构域：两个位于氨基末端区域(氨基末端Nogo-A)，一个位于C末端区域(Nogo-66)(Oertle等人(2003)J Neurosci23，5393-5406)。Nogo-66通过神经元表面称为Nogo-66受体(NgR)的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定的包含富含亮氨酸的重复单位(LRR)的受体进行结合和信号传递(Fournier等人(2001)Nature409，341-346)。尽管在结构上不相关，但MAG和OMgp也通过NgR进行结合和信号传递(Domeniconi等人(2002)Neuron35，283-290；Liu等人(2002)Science297，1190-1193；Wang等人(2002)Nature417：941-944)。通过NgR进行的信号传递激活了小GTP酶RhoA，其依次激活导致肌动蛋白细胞骨架固化和轴突延长抑制的Rho相关激酶(ROCK)(

等人(2002)J Neurosci22，10368-10376；Schweigreiter等人(2004)Mol Cell Neurosci27：163-174)。所有三个配体均在NgR的LRR区域内结合并具有部分重叠的结合位点(Fournier等人(2002)J Neurosci22，8876-8883；Liu等人(2002)Science297，1190-1193；Wang等人(2002)Nature417：941-944；Barton等人(2003)EMBO J22，3291-3302)。尚未知晓针对氨基末端Nogo-A内抑制性结构域的受体但据显示，其与NgR不同(Schweigreiter等人(2004)Mol Cell Neurosci27：163-174)。已发现MAG通过称为NgR2的NgR密切类似物进行信号传递(Pignot等人(2003)J Neurochem85，717-728；Venkatesh等人(2005)J Neurosci25，808-822)。

因为NgR缺少胞质结构域，所以它利用多个跨膜蛋白进行信号传导，即低亲和力神经营养蛋白受体p75^NTR、TROY(也称为TAJ)和LINGO-1(LRR和含Ig结构域的Nogo受体相互作用蛋白质，也称为LRRN6A或LERN1)(Wang等人(2002)Nature420，74-78；Carim-Todd等人(2003)Eur J Neurosci18，3167-3182；Mi等人(2004)Nat Neurosci7，221-228；Park等人(2005)Neuron45：345-351；Shao等人(2005)Neuron45，353-359)。TROY和p75^NTR能在NgR受体复合物中彼此功能性地相互替换，然而，LINGO-1的存在是信号传递发生的绝对先决条件。因此，视为NgR受体复合物是包含作为配体结合亚基的NgR和作为与p75^NTR或TROY相呼应起作用的一般信号传导亚基LINGO-1的三元复合物。

LINGO-1是唯一在CNS中、主要在神经元和少突胶质细胞上表达的单跨膜蛋白质。LINGO-1表达峰在产后早期并经由损伤在成体脊髓中上调。LINGO-1的胞外结构域含有两端是N末端亚结构域和C末端亚结构域的12个串联的LRR，然后是碱性区域和Ig结构域(图1B)。倘若结合到表达NgR或p75^NTR或二者的COS-7细胞的LINGO-1胞外结构域的AP融合及类似地，LINGO-1在表达所有三种蛋白质的细胞中与NgR或p75^NTR共沉淀，LINGO-1最可能通过与NgR和p75^NTR同时相互作用而与二者形成三元复合物。

除了在神经元上表达，LINGO-1也在成体CNS的少突胶质细胞中表达(Mi等人(2005)Nat Neurosci8，745-751)。利用LINGO-1-Fc处理、用RNAi下调蛋白质或过表达DN-LINGO-1抑制少突胶质细胞培养物中的LINGO-1信号传递，增强了OPC分化为生成髓鞘的少突胶质细胞。此外，遗传性去除小鼠中的LINGO-1增加了脊髓中成熟少突胶质细胞及相应地，有髓鞘的轴突的数目。抑制LINGO-1信号传递降低了RhoA的活化作用并增加了Fyn激酶的活性，二者均被报道为促进了少突胶质细胞的分化，尽管还未例证负责激活LINGO-1信号传递的实际配体/目互作用。这导致了LINGO-1是髓鞘化负调控物的结论。

多发性硬化症(MS)是CNS的慢性炎性疾病，其特征为脱髓鞘和轴突变性，其导致多发神经性缺乏。尽管轴突的再髓鞘化能在疾病的早期发生，但在某些方面，再髓鞘化完全失败导致加速的轴突脱髓鞘及不可逆损伤。再髓鞘化最可能产生于成体少突胶质细胞前体细胞(OPC)的分化中，其移行到活动性损害的边缘。因为LINGO-1负调节髓鞘形成，阻断LINGO-1可增加再髓鞘化，减弱轴突变性，促进轴突再生，及因此减弱、停止或甚至逆转脱髓鞘疾病如MS的发展。

也已显示阻断LINGO-1提高了啮齿类动物帕金森病动物模型的多巴胺能神经元的存活并减少了行为异常(Inoue等人(2007)Proc Natl Acad SciUSA104，14430-14435)。

发明概述

现在惊奇地发现，新的抗LINGO-1单克隆人抗体(在下文称为抗体4784和抗体4785)在体外于亚纳摩尔(sub-nM)浓度显著抑制了LINGO-1与NgR的联合并显著降低了成年大鼠脊髓髓磷脂的神经突突起抑制性活性。此外，所述抗体在体外显著增加了原代少突胶质细胞的分化并已显示出显著下调活细胞的细胞表面LINGO-1。期望用这些抗体进行治疗以增加轴突再生/可塑性并提高严重CNS损伤如SCI和脑皮质损伤后功能的恢复。此外，使用所述抗体阻断少突胶质细胞中的LINGO-1信号传递具有增强脱髓鞘疾病如MS中轴突再髓鞘化的潜力，这减缓了疾病发展。一致地，预期用所述抗体抑制神经元中的LINGO-1信号传递提高了轴突再生和神经可塑性并促进了在病程中丧失的神经功能的恢复。最后，预期用所述抗体阻断LINGO-1减缓了帕金森病的发病。

此外，本发明提供了结合到LINGO-1特定表位的结合分子。

该抗体具有抗大鼠、食蟹猴和人LINGO-1胞外结构域的亚纳摩尔的K_D，在亚纳摩尔浓度显著降低成年大鼠脊髓髓磷脂的神经突突起抑制性活性并在体外显著增加少突胶质细胞的分化。此外，现在可能构建具有与所述抗体相同的可变区的其他LINGO-1结合分子。

发明详述

因此，本发明提供了针对LINGO-1特定区域或表位的结合分子(下文称为“本发明的结合分子”或简称为“结合分子”)。

本发明的结合分子以解离常数(K_D)小于1000nM，更优选以K_D小于100nM，最优选以K_D小于10nM结合大鼠LINGO-1(SEQ ID NO：1)、食蟹猴LINGO-1(SEQ ID NO：2)和人LINGO-1(SEQ ID NO：3)的成熟胞外结构域(残基34-550)。可利用标准方法(定性分析)显示结合反应，包括例如实施例中公开的FACS方法。此外，也可以如下所述的神经突突起分析及少突胶质细胞测定显示与大鼠、食蟹猴和人LINGO-1的结合以及效率。

因此，在进一步优选的具体实施方案中，与用不结合大鼠、食蟹猴和人LINGO-1胞外结构域的对照抗体处理的大鼠小脑颗粒细胞的每个细胞的平均神经突长度相比，结合分子(浓度为100nM，优选10nM，更优选1nM，更优选0.1nM)增加了在成年大鼠脊髓髓磷脂底物上生长的大鼠小脑颗粒细胞的每个细胞的平均神经突长度至少20％，优选50％，最优选60％。

通过使用肽微阵列，根据本领域公知的方法测定了本发明结合分子结合的特定表位。因此，在另一个具体实施方案中，本发明提供了结合到至少一个如SEQ ID NO：46-51所限定的LINGO-1表位的结合分子。SEQ IDNO：46：KIVILLDYMFQD，SEQ ID NO：47：AIRDYSFKRLYR，SEQ IDNO：48：LKVLEISHWPYL，SEQ ID NO：49：NLTAVPYLAVRHLVY，SEQ ID NO：50：YFTCRRARI或SEQ ID NO：51：DVLLPNYFTCRRARI。

在另一个具体实施方案中，本发明的结合分子包含一个或多个下述CDR序列，如下面提及的抗体4784序列的所有序列或抗体4785序列的所有序列：

SEQ ID NO：12

(抗体4784CDR-H1)

SSGVGVG

SEQ ID NO：13

(抗体4784CDR-H2)

HIGSDDDKYYSTSLKT

SEQ ID NO：14

(抗体4784CDR-H3)

NQQYGDGYPGYFDY

SEQ ID NO：15

(抗体4784CDR-L1)

SGDNIGNYYVY

SEQ ID NO：16

(抗体4784CDR-L2)

EDTNRPS

SEQ ID NO：17

(抗体4784CDR-L3)

QSYDNLHEQV

SEQ ID NO：18

(抗体4785CDR’-H1)

DNSAAWS

SEQ ID NO：19

(抗体4785CDR’-H2)

LIYLRSKWDNDYAVSVKS

SEQ ID NO：20

(抗体4785CDR’-H3)

TGRADEFDV

SEQ ID NO：21

(抗体4785CDR’-L1)

SGSSSNIGNNYVS

SEQ ID NO：22

(抗体4785CDR’-L2)

RNSKRPS

SEQ ID NO：23

(抗体4785CDR’-L3)

STYDTFSIV

更优选地，结合分子包含上面为抗体4784给出的序列SEQ ID NO：12、13、14、15、16和/或17或为抗体4785给出的序列SEQ ID NO：18、19、20、21、22和/或23中的一个或多个。

本领域技术人员理解可对4784或4785做出改变，尽管它们改变了上面给出的CDR(特别是在它们的一个或多个或全部中，例如它们的一个或两个)中多个，更优选一个或多个氨基酸，优选至多3个，例如一个或2个，或提供产物形式备选的翻译后修饰，产生显示相同的或基本相似的抗Lingo-1结合行为的治疗剂。

在另一个具体实施方案中，本发明的结合分子包含至少一个抗原结合位点，其选自与SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性的序列和与SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性或其直接等同物。

在一个具体实施方案中，结合分子包含至少一个结合位点，其选自SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6。

本发明进一步提供一种结合分子，其包含与SEQ ID NO：5至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性的第一序列和与SEQ ID NO：4至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性的第二序列或其直接等同物。

本发明进一步提供一种结合分子，其包含与SEQ ID NO：7至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性的第一序列和与SEQ ID NO：6至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性的第二序列或其直接等同物。

在一个具体实施方案中，本发明提供根据权利要求1到7的结合分子，其至少包含：

a)一条免疫球蛋白重链或其片段，其包含

(i)包含SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：7的可变结构域，及

(ii)人重链的恒定部分或其片段；及

b)一条免疫球蛋白轻链或其片段，其包含

(i)包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6的可变结构域，及

(ii)人轻链的恒定部分或其片段；或

其直接等同物；例如，a)或b)中给出的每条链的2个或3个。

序列可与SEQ ID NO：4-7具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同源性。重要因素在于，这样的变种在每一种情况优选如实施例或说明书其他部分公开的情况下保留了与LINGO-1的结合能力、去抑制效应(特别是在亚纳摩尔浓度降低成年大鼠脊髓髓磷脂的神经突突起抑制性活性的能力)和/或促进SCI(特别是在大鼠模型中)的功能恢复。

在一个具体实施方案中，本发明提供一种结合分子，其是包含一条或多条根据SEQ ID NO：4-7或SEQ ID NO：12-23的序列的抗体或其片段或其直接等同物。

在另一个具体实施方案中，结合分子作为抗体具有γ4型人重链的恒定区或其片段及λ型人轻链的恒定区或其片段。

在另一个具体实施方案中，结合分子作为抗体具有γ4型人重链的恒定区或其片段及κ型人轻链的恒定区或其片段。

在另一个具体实施方案中，结合分子是人或嵌合或人源化单克隆抗体。

在另一个具体实施方案中，结合分子是humaneered抗体。

本发明也提供编码如上所述的结合分子的多核苷酸。

多核苷酸选自SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9或选自SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11。

本发明也提供包含根据SEQ ID NO：8-11的一条或多条多核苷酸的表达载体。

此外，本发明提供包含根据SEQ ID NO：8-11的多核苷酸的表达系统，其中当所述表达系统或其部分存在于相容的宿主细胞时能生产如上所述的结合分子。本发明也提供包含这样的表达系统的分离宿主细胞。

本发明也提供如上所述的结合分子作为药物的用途。

本发明也提供如上所述的结合分子在制备用于治疗CNS损伤的药物中的用途。

本发明也提供包含如上所述的结合分子及至少一种可药用载体或稀释剂的药物组合物。

此外，本发明提供治疗与促进轴突再生/可塑性有关的疾病的方法，其包含给予需要这样治疗的受试者有效量的如上所述的结合分子。

本发明也提供治疗与促进轴突再生/可塑性有关的疾病的方法，其包含给予需要这样治疗的受试者有效量的根据权利要求1到10中任一项的结合分子。

当抗原结合位点包含第一和第二结构域时，这些可能位于相同的多肽分子上，或优选地，每一个结构域可位于不同的链上，第一结构域是免疫球蛋白重链或其片段的一部分且第二结构域是免疫球蛋白轻链或其片段的一部分。

本发明结合分子的例子包括如噬菌体展示所生产的抗体及人或嵌合人源化或进一步humaneered抗体或其任何片段，例如F(ab’)₂；及Fab片段，以及单链或单结构域抗体。术语“抗体”指包括这样的结合分子。

单链抗体由抗体重链和轻链的可变区组成，其通过一般由10-30个氨基酸，优选15-25个氨基酸组成的肽接头共价结合。因此，这样的结构不包括重链和轻链的恒定区，并且据认为，小肽间隔区(spacer)比完整的恒定部分具有更少的抗原性。“嵌合抗体”指重链或轻链或二者的恒定区是人源的而重链和轻链的可变区是非人源(如鼠类)的抗体。“人源化抗体”指高变区(CDR)是非人源(如鼠类)的而免疫球蛋白的所有或者基本上所有其他部分(例如恒定区和可变区的高保守部分，即框架区)是人源的。然而，人源化抗体在靠近高变区的部分框架区中保留了鼠类序列的少数氨基酸。

高变区可与任何类型的框架区结合，优选鼠类或人类起源的。合适的框架区公开在“具有免疫学性质的蛋白质的序列”(Sequences of proteinsof immunological interest)(Kabat E.A.等人，美国卫生及公共服务部，公共卫生署，国立卫生研究所，优选通过引用合并于本文，特别是关于框架区的内容)。优选地，结合分子的人重链的恒定部分是包括亚型的γ4型，优选地，人轻链的恒定部分是κ或λ型，更优选是λ型。

自然产生的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)的糖蛋白。每条重链包含重链可变区(本文简称V_H)和重链恒定区。重链恒定区包含CH1、CH2和CH3三个结构域。每条轻链包含轻链可变区(本文简称V_L)和轻链恒定区。轻链恒定区包含C_L一个结构域。能将V_H和V_L区进一步分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其被更保守的称为框架区(FR)的区域隔开。每个V_H和V_L包含3个CDR和4个FR，从氨基末端到羧基末端其按下述顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白结合到宿主组织或因子，包括免疫系统的多种细胞(如效应细胞)及经典补体系统的第一成分(C1q)。

如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”(或简称“抗原部分”)指全长抗体或保留了特异性结合抗原(例如，LINGO-1和/或LINGO-2)能力的抗体的一个或多个片段。已显示，抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段完成。包括在术语抗体的“抗原结合部分”的结合片段的例子包括Fab片段，其是由V_L、V_H、C_L和CH1结构域组成的单价片段；F(ab’)₂片段，其是包含由铰链区二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；由V_H和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的V_L和V_H结构域组成的Fv片段；dAb片段(Ward等人.，1989Nature341：544-546)，其由V_H结构域组成；及分离的互补决定区(CDR)。

如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”指具有单一分子组成的抗体分子的制备物(即，由于它们由为单个亲本细胞所有克隆的一种类型的免疫细胞所产生，所以其是相同的)。单克隆抗体组合物显示了(基本上)针对特定表位的单一结合特异性和亲合力。

如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区均源自人类来源的序列。此外，如果抗体包括恒定区，该恒定区也源自这样的人类序列，例如人种系序列或人种系序列的突变形式。本发明的人抗体包括不是由人类序列编码的氨基酸残基(例如在体外通过随机或定点诱变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不包括已将源自其他哺乳动物物种如小鼠种系的CDR序列移植到人框架序列上的抗体。

术语“人单克隆抗体”指显示(基本上)单一结合特异性的抗体，其具有框架区和CDR区均源自人类序列的可变区。在一个具体实施方案中，利用杂交瘤生产人单克隆抗体，所述杂交瘤包括B细胞，其来自于具有包含融合到永生化细胞的人重链转基因和轻链转基因的基因组的非人转基因动物，如转基因小鼠。

如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、创制或分离的所有人抗体，如分离自转基因或转染色体人免疫球蛋白基因的动物(如小鼠)或由其制备的杂交瘤的抗体，分离自被转化以表达人抗体的宿主细胞(如分离自转染瘤)的抗体，分离自重组的、组合的人抗体文库的抗体及利用所有其他涉及剪接全部或部分人免疫球蛋白基因、序列到其他DNA序列的手段制备、表达、创制或分离的抗体。这样的重组人抗体具有框架区和CDR区均源自人种系免疫球蛋白序列的可变区。然而，在某些具体实施方案中，可将这样的重组人抗体进行体外诱变(或当使用转基因了人Ig序列的动物时的体内诱变)，因此所述重组抗体的V_H和V_L区的氨基酸序列是源自人种系V_H和V_L序列且与人种系V_H和V_L序列相关但并不天然存在于体内的人抗体种系所有组成成分中的序列。

如本文所用，“同种型”指由重链恒定区基因提供的抗体种类(如IgM、IgE、IgG如IgG1或IgG4)。

如本文所用，术语“亲合力”指抗体和抗原在单个抗原位点上相互作用的强度。在每一个抗原位点中，抗体“臂”的可变区通过弱的非共价力与抗原在许多位点相互作用；相互作用越多，亲合力越强。

如本文所用，术语“K_D”旨在指解离常数，其由K_d和K_a的比率(结合速率比解离速率)(即K_d/K_a)而获得并表示为摩尔浓度(M)。可使用本领域公知方法测定抗体的K_D值。一种测定抗体K_D的方法是通过使用表面等离子共振或通过使用生物传感器系统如

系统。

本发明的结合分子优选是“分离的抗体”，如本文所用，其指基本不含其他具有不同抗原特异性的抗体的抗体(例如，特异性结合LINGO-1、LINGO-2或LINGO-1和LINGO-2的分离的抗体基本不含特异性结合不是这些所提及抗原的抗原的抗体)。然而，特异性结合的分离的抗体可具有与其他抗原如来自于其他物种的LINGO-1或LINGO-2分子的交叉反应性。此外，分离的抗体优选基本不含其它细胞物质和/或化学物。

本发明也提供这样的结合分子，其可选自包含抗体4784的抗原结合位点(特别是具有上述针对抗体4784的CDR)的单链结合分子，其包含

a)包含具有氨基酸序列(SEQ ID NO：5)的重链可变序列的第一结构域，

b)包含具有氨基酸序列(SEQ ID NO：4)的轻链可变序列的第二结构域，

c)肽键接头，其结合第一结构域的N末端端点和第二结构域的C末端端点或结合第一结构域的C末端端点和第二结构域的N末端端点；

或其直接等同物。

本发明的结合分子可选自包含抗体4785的抗原结合位点(特别是具有上述针对抗体4785的CDR)的单链结合分子，其包含

a)包含具有氨基酸序列(SEQ ID NO：7)的重链可变序列的第一结构域，

b)包含具有氨基酸序列(SEQ ID NO：6)的轻链可变序列的第二结构域，

或其直接等同物。

众所周知，氨基酸序列的较小改变如删除、添加或取代一个或几个氨基酸可导致原蛋白质的等位形式，其具有基本相同的性质，因此，术语“其直接等同物”指本发明的任何单一结构域结合分子(X分子)

(i)其中该结合分子的可变区(如SEQ ID NO：4、5、6或7)与分别包含SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5的直接等同物的轻链和重链或分别包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7的直接等同物的轻链和重链的等同可变区具有至少50或80％同源性，优选至少90％同源性，更优选至少95、96、97、98、99％同源性。

(ii)其能优选以解离常数(K_D)小于1000nM，更优选以K_D小于100nM，最优选以K_D小于10nM结合大鼠LINGO-1(SEQ NO NO：1)、食蟹猴LINGO-1(SEQ ID NO：2)和人LINGO-1(SEQ ID NO：3)的胞外结构域(残基34-550)，或每个结合位点具有至少2个结构域的任何本发明的结合分子(X’分子)。

因此，例如，本发明的另一个具体实施方案是能以解离常数小于1000nM结合大鼠、食蟹猴和/或人LINGO-1的胞外结构域并包含至少一个抗原结合位点的结合分子，所述抗原结合位点在序列中包含与4784的轻链和重链的等同可变区(分别为SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5)或4785的轻链和重链的等同可变区(分别为SEQ ID No：6和SEQ ID NO：7)具有至少50％，优选80、90、95、96、97、98、99％同源性的可变区。

在另一个具体实施方案中，结合分子包含至少一条选自SEQ ID NO：12-23的氨基酸序列，或与这些序列具有至少50％，优选80、90、95、96、97、98、99％同源性的序列。

可以多种测定方法方便地测定该解离常数，包括例如实施例中公开的FACS方法。此外，可以生物测定显示结合分子的结合和功能效应，如下面公开的神经突突起测定。

人重链的恒定部分可以是γ1、γ2、γ3、γ4、α1、α2、6或ε型，优选是γ型，更优选是γ4型，然而，人轻链的恒定部分是κ或λ型(其包括λ1、λ2和λ3亚型)但优选是λ型。在Kabat等人(上述)中给出了所有这些恒定部分的氨基酸序列。

本发明结合分子的缀合物，如酶、毒素或放射性同位素缀合物也包括在本发明的范围内。

如果在本文中未另外指定，“多肽”包括包含彼此通过肽键结合的氨基酸并具有起自N末端端点终自C末端端点的氨基酸序列的任何肽或蛋白质。优选地，本发明的多肽是单克隆抗体，更优选是嵌合的(也称为V移植的)或人源化的(也称为CDR移植的)单克隆抗体。人源化的(CDR移植的)单克隆抗体可包括或不包括引入受体抗体的框架(FR)序列中的其他突变。

如本文所用，多肽的功能性衍生物包括与本发明多肽具有相同的定性生物活性的分子，即，具有结合到大鼠、食蟹猴和人LINGO-1的胞外结构域的能力的分子。

功能性衍生物包括本发明多肽的片段和肽类似物。它也包括术语“直接衍生物”。

片段包含本发明多肽序列(例如指定序列)中的区域。结合分子，特别是抗体的片段是功能性片段，即，它们包含至少一个能结合到LINGO-1和/或LINGO-2，特别是结合到至少一个SEQ ID NO：46、47、48、49、50和51给出的表位的部分，优选以上述或实施例中所述，特别是上述优选的结合亲合力(K_D)结合。

术语“衍生物”用来定义本发明多肽(例如指定序列)的氨基酸序列变种及共价修饰。本发明多肽(例如指定序列，例如轻链和重链的高变区)的功能性衍生物与本发明多肽(例如指定序列)优选具有至少大约65％，更优选至少大约75％，甚至更优选至少大约85％，最优选至少大约95、96、97、98、99％的全序列同源性并基本保留了结合大鼠、食蟹猴和人LINGO-1(及可选地加上LINGO-2)的胞外结构域的能力。

术语“共价修饰”包括用有机蛋白质性质或非蛋白质性质衍生剂对本发明多肽(例如指定序列)；或其片段进行的修饰，融合到异源多肽序列的，及翻译后修饰。共价修饰的多肽(如共价修饰的指定序列)仍具有结合到大鼠、食蟹猴和人LINGO-1的胞外结构域的能力。一般通过将靶标氨基酸残基与能与选定侧链或末端残基反应的有机衍生剂反应或通过在选定重组宿主细胞中起作用的翻译后修饰的工作机理而引入共价修饰。某些翻译后修饰是重组宿主细胞对表达的多肽作用的结果。谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基通常被翻译后脱酰胺基为相应的谷酰基和天冬氨酰基残基。可选地，在温和的酸性条件下将这些残基脱酰胺基。其他翻译后修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酸、酪氨酸或苏氨酸残基羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链α-氨基的甲基化，参见例如T.E.Creighton，Proteins：Structure and Molecular Properties，W.H.Freeman& Co.，San Francisco，第79-86页(1983)。共价修饰例如包括融合蛋白，其包含本发明多肽(例如指定序列和其氨基酸序列变种，如免疫粘附素)N末端融合到异源信号序列。

关于天然多肽及其功能性衍生物的“同源性”(或“同一性”)在本文定义为在比对序列和必要时引入空位以获得最大的百分比同源性，并且不将任何保守替换考虑为序列同一性的部分后，候选序列中氨基酸残基与相应天然多肽的残基相同的百分比。不应将N或C末端延伸和插入视为降低了同一性或同源性。序列比对的方法和计算机程序是公知的。

优选地，如本文所用，两条氨基酸序列或两条核苷酸序列间的百分比同源性与该两条序列间的百分比同一性是等同的。两条序列间百分比同一性是在考虑空位(需要引入其以最佳化两条序列间比对的数目)及每个空位的长度后，序列所共有相同位置的数目的函数(即％同源性＝相同位置数/位置的总数×100)。通过使用数学算法，如在下述非限制性实施例中公开的算法完成序列的比较和两条序列间百分比同一性的测定。

可通过使用E.Meyers和W.Miller算法(Comput.Appl.Biosci.，4：11-17，1988)测定两条氨基酸序列间的百分比同一性，该算法已经并入ALIGN程序(2.0版本)，使用PAM120权重残基表，12的空位长度罚分和4的空位罚分。此外，可通过使用Needleman和Wunsch算法(J.Mol，Biol.48：444-453，1970)测定两条氨基酸序列间的百分比同一性，该算法已并入GCG软件包的GAP程序(在http：//www.gcg.com可获得)，使用Blossom62矩阵或PAM250矩阵，16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重。

此外或备选地，本发明的蛋白质序列可进一步用作“查询序列”以进行面向公共数据库的搜索以(例如)鉴定相关序列。可通过使用Altschul等人，1990J.Mol.Biol.215：403-10的XBLAST程序(2.0版本)进行这样的搜索。可使用XBLAST程序，得分＝50，字长＝3进行BLAST蛋白质搜索以获得与本发明抗体分子同源的氨基酸序列。为获得用于比较目的的空位化比对，可使用如Altschul等人，1997Nucleic Acids Res.25(17)：3389-3402中所述的空位化BLAST。当使用BLAST和空位化BLAST程序时，可使用各个程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见http：www.ncbi.nhn.nih.gov。

“氨基酸”指所有天然产生的L-α-氨基酸，例如并包括D-氨基酸。通过公知的单字母或三字母命名表述氨基酸。

术语“氨基酸序列变种”指与本发明多肽，例如指定序列的多肽相比在其氨基酸序列中有一些不同的分子。本发明的多肽，例如指定序列的多肽的氨基酸序列变种仍具有与大鼠、食蟹猴和人LINGO-1的胞外结构域结合的能力。取代型变种是指在本发明的多肽，例如指定序列中的多肽的同一位置上具有至少一个氨基酸残基被移除并将不同的氨基酸插入在该位置的那些变种。这些取代可是单个的，其中在分子中仅有一个氨基酸被取代，或可以是多个的，其中在同一分子中有2个或更多个，例如1到10个，优选1到5个，更优选1到3个氨基酸被取代。插入型变种是指那些在本发明的多肽，例如指定序列多肽的紧邻特定位置的氨基酸插入一个或多个，例如1到100个，例如1到10个氨基酸的变种。紧邻氨基酸指连接到氨基酸的α-羧基或α-氨基官能团。删除型变种是指那些在本发明的多肽，例如指定序列的多肽中移除了一个或多个，例如1到100个，例如1到10个或1到5个氨基酸的变种。通常，删除型变种在分子的特定区域删除了1或2个氨基酸。

可利用重组DNA技术生产本发明的结合分子。考虑到这一点，必须在适当的调控序列下构建、放置编码结合分子的一个或多个DNA分子并将其转染入适当的宿主生物中以用于表达。

以非常通用的方式相应提供了

(i)编码本发明的单一结构域结合分子、本发明的单链结合分子、本发明结合分子的重链或轻链或其片段的DNA分子；及

(ii)本发明的DNA分子在通过重组方式生产本发明的结合分子中的用途。

本领域现有技术为，技术人员能合成给出本文提供的信息(即高变区的氨基酸序列及编码它们的DNA序列)的DNA分子。构建可变区基因的方法例如公开在EP 239 400(允许通过引用并入本文，特别是关于构建可变区基因的方法)并可简述如下：克隆编码具有无论哪一种特异性的单克隆抗体可变区的基因。测定编码框架区和高变区的DNA片段并移除编码高变区的DNA片段，以使携带合适限制性位点的编码框架区的DNA片段在接点融合。可在适当的位点用标准程序诱变DNA分子产生限制性位点。利用DNA合成技术及上面给出的序列制备双链合成可变区盒。提供有粘末端的这些盒以使它们能利用标准方法在接点连接到框架以获得编码免疫球蛋白可变区的DNA分子。

此外，利用来自生产性杂交瘤细胞系的mRNA以获得编码本发明单克隆抗体的DNA构建物不是必要的。因此，PCT申请WO 90/07861(优选通过引用并入本文，特别是关于生产单克隆抗体的内容)给出了利用重组DNA技术生产仅给出关于基因核苷酸序列书面信息的单克隆抗体的全部说明。

本方法包含合成大量寡核苷酸、利用PCR方法扩增它们并剪接它们以给出目标DNA序列。

包含合适启动子或编码重链和轻链恒定部分基因的表达载体公开可得。因此，一旦制备了本发明的DNA分子即可容易地将其转移到合适的表达载体中。

也可利用标准方法制备编码单链抗体的DNA分子，例如，如在WO88/1649(优选通过引用并入本文，特别是关于编码单链抗体的DNA分子的内容)中公开的。

在本发明的特定具体实施方案中，生产本发明一些结合分子的重组手段包括如下所述的第一和第二DNA构建物：

编码重链或其片段的第一DNA构建物，其包含：

a)编码抗体4784、DNA-4784V_H(SEQ ID NO：8)或抗体4785、DNA-4785V_H(SEQ ID NO：9)的重链可变区的第一部分；该第一部分以编码可变区的第一个氨基酸的密码子起始并以编码可变区的最后一个氨基酸的密码子终止；及

b)编码重链恒定部分或其片段的第二部分，其以编码重链恒定部分的第一个氨基酸的密码子起始并以编码恒定部分或其片段的最后一个氨基酸的密码子终止，然后是无义密码子。

优选地，第二部分编码人重链恒定部分，更优选编码人γ4链恒定部分。该第二部分可以是基因组起源(包含内含子)的DNA片段或cDNA片段(不含内含子)。

编码轻链或其片段的第二DNA构建物，其包含：

a)编码抗体4784、DNA-4784V_L(SEQ ID NO：10)或抗体4785、DNA-4785V_L(SEQ ID NO：11)的轻链可变区的第一部分；该第一部分以编码可变区的第一个氨基酸的密码子起始并以编码可变区的最后一个氨基酸的密码子终止；及

b)编码轻链恒定部分或其片段的第二部分，其以编码轻链恒定部分的第一个氨基酸的密码子起始并以编码恒定部分或其片段的最后一个氨基酸的密码子终止，然后是无义密码子。

优选地，第二部分编码人轻链的恒定部分，更优选地编码人κ链的恒定部分。

每个DNA构建物均置于合适调控序列的控制下，特别地，在合适启动子的控制下。可使用任何种类的启动子，只要它适合DNA构建物将要转移到其中以进行表达的宿主生物。然而，假如在哺乳动物细胞中进行表达，特别优选使用免疫球蛋白基因的启动子。

可在细胞培养物或转基因动物中生产目标抗体。可根据标准方法获得合适的转基因动物，所述方法包括将在合适调控序列下的第一和第二DNA构建物微注射入卵中，转移由此制备的卵到合适的假孕雌性动物并选择表达目的抗体的后代。

当抗体链必须在细胞培养物中生产时，DNA构建物必须首先插入单一表达载体或两个单独的但相容的表达载体中，优选后一种可能。

因此，本发明也提供能在原核或真核细胞系中复制的表达载体，其包含至少一个上述的DNA构建物。

然后，将含有DNA构建物的每一个表达载体转移到合适的宿主生物中。当将DNA构建物单独地插到两个表达载体时，可将它们单独地转移(即每个细胞一种类型的载体)或共转移，优选后一种可能。合适的宿主生物可以是细菌、酵母或哺乳动物细胞系，优选后者。更优选地，哺乳动物细胞系是淋巴起源但不表达任何内源性抗体重链或轻链的细胞系，例如骨髓瘤、杂交瘤或常规永生化B-细胞。

也优选宿主生物的每个细胞含有大量载体拷贝。假如宿主生物是哺乳动物细胞系，可根据标准方法扩增该数目的拷贝达到该目标。扩增方法通常由选择对药物的抗药性增加所组成，所述抗药性被表达载体所编码。

在本发明的另一个方面，提供了生产本发明的多链结合分子的方法，其包含(i)培养转化含有本发明第一和第二DNA构建物的生物及(ii)从培养物中回收本发明活性结合分子。

备选地，可单独回收重链和轻链并在体外重折叠后重构为活性结合分子。重构方法是本领域公知的；方法例子特别提供在EP 120 674或EP 125023中。因此，方法也包含：

(i)培养转化含有本发明第一DNA构建物的第一生物并从培养物中回收所述重链或其片段，及

(ii)培养转化含有本发明第二DNA构建物的第二生物并从培养物中回收所述轻链或其片段，及

(iii)在体外将在(i)中获得的重链或其片段和在(ii)中获得的轻链或其片段重构为本发明活性结合分子。

也以相似的方式提供了生产本发明单链或单一结构域结合分子的方法，其包含：

(i)培养转化有分别编码本发明单链或单一结构域结合分子的DNA构建物的生物，及

(ii)从培养物回收所述分子。

如下所例证的，本发明的结合分子在体外显著抑制LINGO-1同NgR的结合，以亚nM浓度显著降低成年大鼠脊髓髓磷脂的神经突突起抑制性活性并显著增加少突胶质细胞分化。

附图说明

图1.Fab4784和4785对AP-LINGO-1与NgR：SH-SY5Y细胞结合的作用

将在悬液中的NgR：SH-SY5Y细胞与1nM AP或AP-LINGO-1在缺乏或存在2μM标明的抗LINGO-1Fab或抗鸡溶菌酶Fab3207的情况下进行孵育。在用1-Step^TM PNPP孵育30分钟后，以405nm处的吸光度测定细胞上结合的AP活性。AP-LINGO-1的特异性结合计算为AP-LINGO-1结合的总量和仅有AP结合的量间的差异。特异性结合的平均抑制百分比(n＝3，±STD)计算为存在Fab3207时和存在抗LINGO-1Fab时AP-LINGO-1特异性结合的量间的百分比差异。

图2.抗LINGO-1IgG4抗体4784和4785对脊髓髓磷脂的去抑制

A)在没有包被脊髓髓磷脂(无SC，白条)的或包被有脊髓髓磷脂但不存在抗LINGO-1IgG4抗体(SC，红条)，或存在抗LINGO-1IgG4抗体，或存在对照抗溶菌酶IgG4抗体3207(绿条)或1μm的ROCK抑制剂Y27632(黄条)的孔中孵育P7CGN细胞16小时。ROCK是在大多数但不是所有髓磷脂相关神经突突起抑制剂(包括那些不通过NgR受体复合物进行信号转导的)的信号通路中的第二信使，并且按照这样，将Y27632处理用作降低脊髓髓磷脂神经突突起抑制性活性的阳性对照(图1)。在每个平板具有SC和无SC条件的三个96孔板中进行实验，其中以10份平行比较在该平板上的抗体作用并计算每个孔中500个神经元的每个神经元的平均神经突长度(μm)。抑制百分比(白色文字)计算为铺在包被和未包被SC的孔中细胞间平均神经突长度/神经元的差异百分比。去抑制百分比(黑色斜体文字)计算为铺在包被SC的存在和缺乏抗LINGO-1抗体时细胞间平均神经突长度的差异与铺在包被和不包被SC的孔中细胞间差异的百分比。^*p＜0.05，^**p＜0.01(单向方差分析，对铺在脊髓髓磷脂上且缺少抗体的细胞的平均神经突长度/神经元进行Holm-Sidak比较)。

B)孵育在不包被脊髓髓磷脂(无SC)的孔中和孵育在包被有脊髓髓磷脂、不存在(SC)或存在1nM对照IgG43207或抗LINGO-1IgG44784的孔中细胞的代表性视野的荧光照片。在存在4784的脊髓髓磷脂上生长的细胞比那些在不含抗体或存在对照抗体3207中生长的细胞具有可见的更长的神经突及每个细胞更多的神经突。

图3.抗LINGO-1IgG4抗体对脊髓髓磷脂的去抑制II

A)在不包被脊髓髓磷脂(无SC，白条)的孔中或包被有脊髓髓磷脂、不含有(SC，红条)或含有抗LINGO-1IgG4抗体或对照的抗溶菌酶IgG4抗体3207的孔中孵育P7CGN细胞8小时。在每个平板具有SC和无SC条件的三个96孔板中进行实验，其中以10份平行比较在该平板上的抗体作用并计算每个孔中500个神经元的每个神经元的平均神经突长度(μm)。按上述方法计算抑制百分比(白色文字)和去抑制百分比(黑色斜体文字)。^**p＜0.01(单向方差分析，对铺在脊髓髓磷脂上且缺少抗体的细胞的平均神经突长度/神经元进行Holm-Sidak比较)。

图4.抗LINGO-1IgG4抗体对脊髓髓磷脂的去抑制III

在不包被脊髓髓磷脂(无SC)的孔中或包被有脊髓髓磷脂、不含有抗LINGO-1IgG4抗体4784或4785(SC)或含有标明浓度的抗LINGO-1IgG4抗体4784或4785、或对照抗溶菌酶IgG4抗体3207或1μM Y27623(ROCK)的孔中孵育P7CGN细胞8小时。在每个平板具有SC和无SC条件的三个96孔板中进行实验，其中以10份平行比较在该平板上的抗体作用并计算每个孔中500个神经元的每个神经元的平均神经突长度(μm)。按上述方法计算抑制百分比(白色文字)和去抑制百分比(黑色斜体文字)。^＊p＜0.05，^**p＜0.01(单向方差分析，对铺在脊髓髓磷脂上且缺少抗体的细胞的平均神经突长度/神经元进行Holm-Sidak比较)。

图5.抗LINGO-1抗体显著增强了未成熟少突胶质细胞的分化

A)将新鲜分离的OPC在DMEM/CNTF/T3培养基中用100nM4784、4785或对照IgG43207处理3天，然后用抗O4抗体染色以可视化未成熟和成熟的少突胶质细胞(更大，更发散的标记)并用核酸染料DAPI(4’，6-二脒基-二苯基-吲哚-二盐酸盐)染色以可视化细胞核(更小的圆形点)。认为具有高度分枝的和延长的突起及髓磷脂层状结构的少突胶质细胞具有成熟形态并用白箭头标明。抗LINGO-1抗体处理导致具有成熟形态的O4-阳性细胞比例的增加，而用对照IgG43207处理没有作用。

B)在三个独立的实验(1、2、3)中定量了总的(左图)和成熟(右图)少突胶质细胞的比例。左侧的条状图描述了与O4染色联合的DAPI染色的细胞核的百分比，右侧的条状图描述了具有成熟形态的O4阳性细胞的百分比(三个平行的平均值±STD)。在每一个条状图中，最左侧的条没有任何处理，左侧第二个条为用对照IgG处理的对照，接下来的代表用4784处理的，最右侧的是用4785处理的。抗LINGO-1抗体对少突胶质细胞的细胞比例没有影响，但显著增加了具有成熟形态的少突胶质细胞的比例。^＊p＜0.05，^**p＜0.01，单向方差分析和存在对照IgG43207时成熟少突胶质细胞比例的Holm-Sidak比较。

图6.抗LINGO-1抗体下调了细胞表面LINGO-1

A)在37℃将未转染的CHO-K1或CHO-K1-hLINGO-1细胞用100nM4784、4785和3207孵育24小时，然后在室温用抗V5抗体继续孵育30分钟，并在细胞表面检测LINGO-1。用4％PFA固定细胞，用BSA封闭，并使用抗小鼠-IgG(Fc特异的)-POD缀合物检测结合的抗V5抗体，其然后使用1-Step^TM Turbo TMB ELISA试剂盒显色。450nm处的吸光度作为细胞表面LINGO-1量的测量值(三个平行的平均值±STD)。观察到非常低水平的抗V5抗体结合到未转染的CHO-K1细胞。用抗LINGO-1抗体但不用对照IgG43207孵育CHO-K1-hLINGO-1细胞导致显著降低了细胞表面LINGO-1的量。^**p＜0.01，单向方差分析和用对照IgG43207孵育后吸收度的Holm-Sidak比较。

B)在4℃将未转染的CHO-K1或CHO-K1-hLINGO-1细胞上的细胞表面蛋白生物素化，在37℃用或不用100nM4784、4785和3207孵育该细胞指定的时间。在孵育期间结束时，通过使用偶联到琼脂糖珠子的抗V5抗体从细胞裂解物中沉淀LINGO-1，生物素化的(细胞表面)LINGO-1通过使用抗生物素抗体并利用Western印迹分析进行检测。在未转染的CHO-K1细胞中未检测到生物素化的LINGO-1信号。用抗LINGO-1抗体孵育CHO-K1-hLINGO-1细胞增加了细胞表面LINGO-1的降解速率。

图7.利用ELISA表征抗LINGO-1Fab的特征

以相对荧光单位(RFU)的平均值形式给出了ELISA分析的值。利用FACS饱和测定表征这些克隆的结合亲合力。

本发明也提供本发明结合分子在促进哺乳动物神经系统，特别是人神经系统的轴突再生/可塑性中的用途。

本发明也提供促进哺乳动物神经系统，特别是人神经系统的轴突再生/可塑性的方法，其包含将有效量的本发明结合分子施用到需要这样治疗的患者。

本发明也提供用于促进哺乳动物神经系统，特别是人神经系统的轴突再生/可塑性的药物组合物，其包含本发明结合分子及可药用载体或稀释剂。

特别地，本发明的结合分子用于促进CNS损伤后的轴突再生和可塑性(术语损伤在本申请中特别是指由机械或化学影响导致的或归因于疾病或失调的损伤，该疾病或失调例如导致神经元降解，特别是其结构或形式，例如在神经性疾病如阿尔茨海默病或帕金森症或其他下面提及的失调或疾病中)。因此，本发明分子具有广泛的用途，特别是对人类患者具有广泛的用途。例如，本发明的结合分子用于治疗各种外周神经系统(PNS)和中枢神经系统(CNS)的疾病，即更特别是用于治疗神经变性疾病如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、露易体样病状或其他一般痴呆，颅、大脑或脊椎创伤和中风后的疾病。此外，由于LINGO-1是髓鞘化的负调节因子，本发明结合分子用于促进再髓鞘化及促进脱髓鞘疾病中的轴突再生/可塑性，所述脱髓鞘疾病包括但不限于多发性硬化症、单相(monophasic)脱髓鞘、脑脊髓炎、多病灶性脑白质病、全脑炎、马-比病、脑桥myelmolysis、肾上腺脑白质营养不良、佩-梅病、海绵状变性、亚历山大病、卡纳万病、异染色性脑白质营养不良及克拉伯病。在一个实施例中，可将表达本发明结合分子的细胞移植到脊髓损伤位点以促进轴突生长贯穿受损失的位点。这样的移植细胞将提供损伤或创伤后恢复脊髓功能的手段。这样的细胞包括嗅鞘细胞和不同谱系胚胎神经或组织移植物的干细胞。

此外，本发明的结合分子用于治疗退化性眼病，其可直接或间接涉及视网膜或角膜细胞退化，包括一般缺血性视网膜病变、眼前部缺血性视神经病变、所有形式的视神经炎、老年性黄斑病变、糖尿病性视网膜病变、囊样黄斑水肿(CME)、色素性视网膜炎、视网膜黄斑变性、百斯特氏卵黄样视网膜变性、莱伯先天性黑矇及其他遗传性视网膜变性、病理性近视、早产儿视网膜病变、莱伯氏遗传性视神经病、角膜移植或角膜屈光性手术后的影响、疱疹性角膜炎。

此外，本发明结合分子用于治疗精神病状况，特别是精神分裂症和抑郁。

当然，对于这些适应症，合适的剂量将依赖于例如本发明待使用的特定分子、给药方式及需治疗的病症的性质和严重性而变化。一般而言，剂量优选范围为1μg/kg/天到1mg/kg/天。本发明结合分子作为治疗剂通过泵或注射方便地施用在损伤位点或其附近，例如，可将它们直接经颅内施用到CNS，或经鞘内施用脊柱以到达损伤位点。然而，本发明并不排除全身给药。可单独地、或与其他试剂联合地、或先后与其它试剂联合地提供本发明结合分子。例如，可在中风或脊髓损伤后将本发明结合分子与抗Nogo-A抗体或抗炎剂(例如但不限于皮质类固醇)联合给药以作为阻断进一步神经元损伤及轴突再生抑制的手段，神经营养因子如NGF、BDNF或其他用于神经变性疾病的药物如Exelon^TM或左旋多巴。其他适于治疗中风的联合药物是阿替普酶和去氨普酶(DSPA，例如在WO90/09438中所公开的)。在一个具体实施方案中，本发明提供了包含本发明的结合分子及去氨普酶的联合，特别用于治疗中风以及提供了包含所述联合的药物组合物。如本文所用，当将两种试剂同时给药或以使所述试剂在同一时间作用的方式独立给药时，该两种试剂被称为联合给药。

通过代号、非专利的或商标名鉴定的活性成分的结构可从“默克索引”(The Merck Index)标准一览表的现行版本或从数据库(例如国际专利例如，IMS国际公开(World Publications))或IMS Health提供的其他数据库中获得。其相应内容通过引用合并于本文。任何本领域技术人员都能完全鉴定活性成分，并且基于这些文献，也能在体外和体内在标准试验模型中制造和检测药物指症和性质。

本发明的药物组合物可以常规方式进行制造。例如，包含本发明分子的本发明组合物优选以冻干形式提供。对于即时给药，将其溶于合适的水性载体中，如灭菌注射用水或灭菌缓冲生理盐水。

为帮助制备合适的组合物，本发明结合分子及可选地增强本发明结合分子作用的第二药物可在同一容器中单独包装，该容器中带有混合或同时给药的说明书。可选的第二药物候选在上面提供。

本发明结合分子与生长因子(如NGF)的联合协同效应可通过脊髓损伤模型在体内进行证实。

参考下述实施例将能更全面地理解本发明。然而，不应将其视为限制了本发明的范围。

实施例中目标单克隆抗体是本发明的结合分子，其针对4784包含抗体4784轻链的可变部分(SEQ ID NO：4)及重链的可变部分(SEQ ID NO：5)，及针对4785包含4785轻链的可变部分(SEQ ID NO：6)及重链可变部分(SEQ ID NO：7)。

使用了下述缩写：

AP 人胎盘碱性磷酸酶

CDR 互补决定区

cDNA 互补DNA

ELISA 酶联免疫吸附测定

FACS 荧光活化的细胞分选系统

FBS 胎牛血清

HCMV 人巨细胞病毒启动子

IgG 免疫球蛋白同种型G

PBS 磷酸盐缓冲液

PCR 聚合酶链式反应

PFA 低聚甲醛

PNPP 对-硝基苯基磷酸盐

实施例1：产生表达全长大鼠、食蟹猴或人LINGO-1和人LINGO-2的CHO-K1细胞

通过使用随机引物和寡聚dT引物的通用人类参考RNA(Stratagen)的RT-PCR产生人cDNA文库。通过使用随机引物和寡聚dT引物，利用从冷冻食蟹猴脑分离的polyA RNA的RT-PCR产生食蟹猴脑cDNA文库。从Clontech获得Marathon即用型大鼠脑cDNA文库。编码人LINGO-1(SEQ ID NO：27)、食蟹猴LINGO-1(SEQ ID NO：28)和大鼠LINGO-1(SEQ ID NO：29)的成熟序列(残基34-614)并且其两端是5’-Xbal和3’-XhoI位点的cDNA从各自的文库使用正向引物DM14，5′-CTACGTCTAGAACGGGCTGCCCGCC CCGCT-3′(SEQ ID NO：30)，反向引物DM15，5′-GGTTTCTCGAGTCATATCATCTTCATGTTGAACTTGCGG-3′(SEQ ID NO：31)PCR扩增而来。用XbaI和XhoI酶切PCR产物并将其插入载体pSecTag2-V5(SEQ ID NO：32)的各自位点以分别产生hLINGO-1-pSecTag2-V5、cmLINGO-1-pSecTag2-V5及rLINGO-1-pSecTag2-V5。预期的蛋白质产物是通过2个氨基酸残基的接头在N末端融合有14个氨基酸残基的V5表位标签的LINGO-1成熟序列。编码人LINGO-2(SEQ ID NO：33)成熟序列(残基26-606)并且其两端是5’-XbaI和3’-XhoI位点的cDNA通过使用正向引物DM16，5′-CTACGTCTAGAATTGGCTGCCCCGCTCGCT-3′(SEQ ID NO：34)和反向引物DM17，5′-GGTTTCTCGAGTCAAATCATTTTCATGTTGAACCTCCTG-3′(SEQ ID NO：35)从Marathon即用型人脑cDNA文库(Clontech)PCR扩增而来。用XbaI和XhoI酶切PCR产物并将其插入载体pSecTag2-V5的各自位点以产生hLINGO-2-pSecTag2-V5。预期的蛋白质产物是通过2个氨基酸残基的接头在N末端融合有14个氨基酸残基的V5表位标签的LINGO-2的成熟序列。通过分别用hLINGO-1-pSecTag2-V5、cmLINGO-1-pSecTag2-V5、rLINGO-1-pSecTag2-V5和hLINGO-2-pSecTag2-V5并根据厂商说明书使用lipofectamine-2000(Invitrogen)转染CHO-K1细胞产生稳定表达人LINGO-1(CHO-K1-hLINGO-1)、食蟹猴LINGO-1(CHO-K1-cmLINGO-1)、大鼠LINGO-1(CHO-K1-rLINGO-1)和人LINGO-2(CHO-K1-hLINGO-2)的CHO-K1细胞。用1mg/ml zeocin(Invitrogen)选择稳定表达的转染子，并通过在96孔板中连续稀释或通过使用克隆环分离单个克隆。通过使用抗V5抗体(Invitrogen)的免疫荧光分析确定构建物在细胞表面的表达。

实施例2：人LINGO-1-Fc和人LINGO-1ΔLRR-Fc的产生和表达

使用编码人LINGO-1的MGC mRNA(克隆MGC：17422IMAGE：4214343)作为PCR扩增的模板。使用Pwo1聚合酶(Roche Diagnostics)和引物利用PCR扩增在胞外结构域序列前有人LINGO-1天然信号序列(氨基酸1-550)的胞外结构域(ECD)，所述引物在目标序列的5’端加上HindIII限制性位点和Kozak共有序列，在目标序列3’端最后一个密码子后紧接着加上XhoI限制性位点。用HindIII和XhoI消化PCR产物，凝胶纯化并将其插入已经用相同酶消化的质粒pRS5a-IgG(SEQ ID NO：36)中。通过DNA测序确定所获得的表达克隆(natleader-hsLINGO-1-Fc/pRS5a，SEQ ID NO：37)中的插入序列、完整Fc及旁侧区的准确性。

使用相同的MGC克隆作为利用基因重叠延伸拼接法构建缺少LRR结构域(氨基酸34-65+氨基酸354-550)的人LINGO-1表达质粒的模板。使用引物通过PCR扩增人ECD LINGO-1(氨基酸34-65)的N末端区，所述引物在5’端延伸编码融合到成熟LINGO-1的异源分泌信号的部分序列并在3’端加上编码C末端片段前7个氨基酸的序列。使用引物利用PCR扩增人ECD LINGO-1的C末端区(氨基酸354-550)，所述引物在5’端延伸具有编码N末端片段的后7个氨基酸的序列并在3’端的目标序列最后一个密码子后紧接着加上XhoI位点。将两个PCR产物凝胶纯化、混合并作为第二个PCR扩增的模板，所述PCR扩增使用在5’端加上HindIII限制性位点、Kozak共有序列并互补异源分泌信号序列的引物，在3’端使用先前用于扩增C末端片段的外部引物。将PCR产物用HindIIII和XhoI消化、凝胶纯化并插入先前已经用相同酶消化的质粒pRS5a-IgG中。利用DNA测序确定所获得的表达克隆(Igleader-hsLINGO-1-ΔLRR-Fc/pRS5a，SEQ ID NO：38)中的插入序列、完整Fc和旁侧区的准确性。

在小规模实验中检测两个构建物的初始表达评估。在组织培养培养瓶中以贴壁方式培养HEK.EBNA细胞(Invitrogen，以前的目录号为R620-07)，培养基为用25mM Hepes(Gibco/Life Technologies目录号为42430-025)缓冲并另外加入10％胎牛血清的达尔贝科改良伊戈尔培养基(DMEM)；在37℃、湿润的含5％CO₂的环境下进行培养。对于小规模转染实验，在转染前一天将4×10⁵个细胞接种到多聚-D-赖氨酸包被的6孔(板)。基本按照厂商描述的方法使用每孔3μg的质粒DNA和6μl的Lipofectamine²⁰⁰⁰试剂(Invitrogen目录号为11668-019)进行转染。转染3天后收集细胞上清并将不含细胞的上清进行蛋白质分析，即在G蛋白柱上进行免疫-亲合力HPLC分析。测定了范围在8mg/l(对于构建物natleader-hsLINGO-1-Fc/pRS5a)和40mg/l(对于构建物Igleader-hsLINGO1ΔLRR-Fc/pRS5a)间的滴度。随后，大规模制备了这两种质粒以能在数升规模的HEK.EBNA悬浮培养物中进行瞬时转染。

对于放大规模的natleader-hsLINGO-1-Fc的生产，将密度为1.4×10⁶个细胞/ml的2.9L的HEK.EBNA细胞培养物与1.1L DNA：PEI溶液(每毫升1μg DNA：2μg PEI)混合。在将细胞孵育4小时后，在培养物中加入4L的ExCell VPRO培养基(SAFC，先前的JRH，Lenexa，KS)。在培养6天后收集细胞培养物上清并使用截留分子量为10kDa的一次性Hemoflow F10HPS滤膜(Fresenius Medical Care，德国)将上清透析过滤浓缩到1L。以相似方式完成用来产生Igleader-hsLINGO-1-ΔLRR-Fc蛋白质的第二个相关蛋白质产品。大规模转染、DNA：PEI比率、细胞密度、补料和收集的详情与上述方法完全相同。

a)natleader-hsLINGO-1-Fc

在20ml蛋白A Sepharose上将1L浓缩物(来源于8L培养物上清)进行层析。在用100mM pH7.3的NaPi基线洗柱后，用50mM柠檬酸盐、140mM NaCl、pH2.7洗脱结合物质，中和，过滤除菌。将洗脱级分进一步浓缩并在PBS中的Superdex75上凝胶过滤，得到浓度为1.2mg/ml的8.2mg产物。

b)Igleader-hsLINGO-1-ΔLRR-Fc

在20ml蛋白A Sepharose上将1L浓缩物(来源于8L培养物上清)进行层析。在用100mM pH7.3的NaPi基线洗柱后，用50mM柠檬酸盐、140mM NaCl、pH2.7洗脱结合物质，中和，过滤除菌，得到浓度为1.5mg/ml的52.5mg产物。

在还原/烷基化和胰蛋白酶消化后通过N末端测序和MALDI肽质量分析广泛鉴定了纯化的蛋白质的性质。

实施例3：AP-LINGO-1结合实验

预计阻断LINGO-1与NgR的结合将阻止神经突突起的三个髓磷脂相关抑制剂(即Nogo-66、MAG和OMgp)的信号传递，并因此降低CNS髓磷脂的神经突突起抑制性活性，从而导致增加的轴突再生/可塑性并改善严重CNS损伤后的功能恢复。为了证实抗LINGO-1抗体阻断了LINGO-1与NgR的结合，可使用一个实验，该实验测量了人胎盘碱性磷酸酶(AP)-标记的大鼠LINGO-1胞外结构域(AP-LINGO-1)与稳定表达NgR的SH-SY5Y细胞(NgR-SH-SY5Y，Walmsley等人(2004)J Cell Sci117，4591-4602)的结合。

使用正向引物DM22，5′-GGTTATCTCGAGACCGGCTGCCCGCCCC-3′(SEQ ID NO：24)和反向引物DM23，5′-GGCCCTTCTAGATCACTCGCCTGGCTGGTTGGAGATG-3′(SEQ ID NO：25)从rLINGO-1-pSecTag2-V5PCR扩增编码两端带有5’-XhoI和3’-XbaI位点的大鼠LINGO-1胞外结构域大部分(残基34-532)的cDNA。用XhoI和XbaI切割PCR产物并将其插入载体APtag-5-NHIS(SEQ ID NO：26)的各自位点，以产生APtag-5-NHIS-solrLINGO-1。预测的蛋白质产物是通过3个氨基酸残基的接头在N末端融合有人胎盘碱性磷酸酶残基23-511的大鼠LINGO-1胞外结构域的大部分。根据厂商说明书使用lipofectamine²⁰⁰⁰用APtag-5-NIHS-solrLINGO-1转染HEK293T细胞。在转染4小时后移除转染培养基并用不含酚红的OptiMEM I(Invitrogen)替换。24小时后收集培养基，替换并在另一个24小时后再次收集。在13000×g离心5分钟澄清培养基，按照厂商说明使用Centriprep过滤装置(Millipore)浓缩上清大约15倍。使用1-Step^TM PNPP(Pierce)并以405nm处吸光度随时间的变化测量浓缩上清的AP活性，并使用下述公式将其转换为浓度(应用于200μl PNPP/孔的96孔板形式)：

将浓缩的上清按照所述方法进行SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹(Walmsley等人(2004)J Cell Sci117，4591-4602)。用0.1％(v/v)抗五-组氨酸抗体(Qiagen)，然后用0.02％(v/v)过氧化物酶缀合的抗小鼠IgG抗体(Sigma)使用ECL^TM系统(GE Healthcare)检测AP-LINGO-1。AP-LINGO-1显示为大约110kDa的条带，与其预测的112kDa分子量相似。未观察到N末端降解的产物。

用不含酶的解离缓冲液(Invitrogen)收集50％融合度的NgR：SH-SY5Y细胞，以保护细胞表面蛋白质如NgR。在OptiMEM(Invitrogen)中预孵育存在2μM抗LINGO-1Fab或抗来源于鸡卵清的溶菌酶的对照Fab3207的1nM AP、1nM AP-LINGO-1或1nM AP-LINGO-1，然后在恒定搅拌下与悬液中的NgR：SH-SY5Y细胞孵育1.5小时。用HBH(在Hanks平衡盐中的20mM HEPES pH7.4/1％牛血清白蛋白)洗涤细胞6次并在PBS中的4％低聚甲醛(PFA)/5％蔗糖中固定15分钟。在Hanks平衡盐中的20mM HEPES pH7.4中65℃孵育1小时灭活内源性AP活性后，在孵育30分钟后按照厂商说明书用1-Step^TM PNPP(Pierce)，以405nm处的吸光度定量细胞结合的AP活性。

为了用结合的Fab饱和AP-LINGO-1，使用2μM浓度的Fab并因此最小化它们的亲合力对它们抑制结合能力的影响。其原因为从下一步研究中排除过早清除由于Fab的低亲合力而非其结合位点的位置所导致的不能抑制结合的Fab的可能性，因为此类Fab亲合力能在后期通过亲合力成熟作用和IgG4转变而增加。将1nM AP-LINGO-1与对照Fab3207或抗LINGO-1Fab4784和4785预孵育，然后在存在Fab的情况下允许其与悬液中的NgR：SH-SY5Y细胞结合(图1)。将存在抗LINGO-1Fab时特定AP-LINGO-1结合的抑制百分比相对Fab3207的抑制百分比标准化。4784和4785对AP-LINGO-1与细胞的结合有显著抑制(P小于0.01，单向方差分析，在存在对照Fab3207时对特定AP-LINGO-1结合的Holm-Sidak比较)。

预测阻断LINGO-1与NgR的结合阻止了髓磷脂相关的抑制子Nogo-66、MAG和OMgp的信号传递，这导致了CNS髓磷脂神经突突起抑制性活性的降低。在这一点上，将4784和4785Fab转变成最终的IgG形式(参见实施例8)并评估它们降低生长于成年大鼠脊髓髓磷脂上的出生后7天大鼠小脑颗粒神经元的神经突突起的抑制能力。

实施例4：神经突突起抑制实验

最相关的预测抗LINGO-1抗体对体内轴突再生/可塑性效应的体外实验是它们降低CNS髓磷脂的神经突突起抑制性活性的能力。在该实验中，使出生后第7天的大鼠小脑颗粒神经元(CGN)生长在包被有从成年大鼠抽提的全脊髓髓磷脂的孔内，利用自动HCS Reader(Cellomics)定量神经突突起。

抗LINGO-1IgG4抗体4784和4785的去抑制活性在所述神经突突起实验中进行评估(图2)。

在3倍体积(w/v)抽提缓冲液(60mM Chaps，20mM Tris pH8.0，1mM EDTA，蛋白酶抑制剂混合物(cocktail))中将来源于成年大鼠的新鲜大鼠脊髓组织均质化，在4℃孵育30分钟并在4℃以170000×g离心30分钟以进行澄清。将96孔板的每个孔均包被在MeOH中的5μl硝酸纤维素(5cm²硝酸纤维素在12ml MeOH中)，空气干燥并于37℃孵育4小时包被100μl5μg/ml的多聚-D-赖氨酸。用水洗涤3次后将板空气干燥1小时，然后于37℃过夜孵育包被60μg/cm²的脊髓抽提物。按在先方法(Schweigreiter等人，2004)从出生第7天的大鼠小脑组织的胰蛋白酶裂解物新鲜制备CGN细胞。在来源于表达V5-标记的大鼠LINGO-1的CHO-K1细胞或P7CGN细胞的裂解物上使用2μg/ml(或13.3nM)抗LINGO-1多克隆抗体(Upstate)，然后使用0.02％(v/v)缀合过氧化物酶的抗兔IgG抗体(Sigma)进行Western印迹分析以检测LINGO-1。加入0-100nM抗LINGO-1IgG4抗体或对照3207IgG4抗体前，在不包被或包被脊髓髓磷脂的孔上于37℃将CGN细胞(35000个细胞/孔)孵育30分钟。于37℃孵育8-16小时后，用4％PFA固定细胞并用Hoechst3342(Invitrogen)染色以可视化细胞核和抗β-微管蛋白III抗体(R&DSystems)，然后用Alexa Fluor546缀合的抗小鼠IgG抗体(Invitrogen)染色以特异性可视化神经元。使用HCS Reader(Cellomics)测定神经突突起的参数。

II自动定位、聚焦和暴光96-孔微孔板中细胞的视野。

由高分辨率光学系统、具有匹配的单片感光滤光片的多带通发射滤光片(XF100)、具有帧接收器的CCD相机和专有应用软件组成。在该实验中，使用扩展的神经突突起生物应用(ExtendedNeurite Outgrowth Bioapplication)。使用感光滤光片轮和多带通发射滤光片以能进行来源于相同细胞的两个荧光团的多通道荧光成像。需要Hoechst33342标记的细胞核的带通图像以鉴定分散的细胞，然后需要Alexa Fluor488的带通图像以鉴定用抗微管蛋白抗体(使用缀合到AlexaFluor488的二抗)标记的细胞的范围。将细胞内不合适的细胞体自动从分析中排除，以便仅分析Hoechst和β-微管蛋白重叠的细胞。双发射成像需要平板的每个孔中5个分离的350μm²视野。使用10×物镜产生每个所分析孔的400-500个细胞。然后，扩展的神经突突起生物应用报告单细胞神经元形态的多个定量测量，包括每个细胞的神经突的神经突长度数目、细胞体面积、分支和交叉点。以10个平行计算每个孔中500个神经元的每个神经元的神经突平均长度(μm)。

在上述神经突突起实验中，抗LINGO-1IgG4抗体4784和4785在1和10nM具有去抑制作用，而对照抗溶菌酶IgG4在两个浓度无去抑制作用(图2)。在以两个浓度的4784和4785存在的情况下，脊髓髓磷脂上的每个神经元的神经突平均长度在统计学上高于不含抗体情况下的神经突长度。预计与抗LINGO-1抗体4784和4785相比，用ROCK抑制剂Y27632获得更高水平的去抑制是因为该化合物除了抑制那些通过NgR受体复合物进行信号传递的信号传递途径之外还抑制其它髓磷脂相关的神经突突起抑制剂的信号传递途径。

为确定上述结果，重复了神经突突起实验(图3)。抗LINGO-1抗体4784和4785再-次在1nM和10nM具有去抑制作用，而对照抗溶菌酶IgG4在两个浓度均未有去抑制作用。在以两个浓度的4784和4785存在的情况下，脊髓髓磷脂上的每个神经元的神经突平均长度在统计学上高于不含抗体情况下的神经突长度。

为进一步建立抗LINGO-1抗体4784和4785的能力，评估了所述抗体在亚纳摩尔浓度对神经突突起抑制的效应(图4)。4784和4785在低至0.1nM的浓度给出了脊髓髓磷脂的显著去抑制(分别为38-51％和51-57％)，而对照抗溶菌酶抗体没有效应。如所预计的，ROCK抑制剂Y27632再一次给出了比抗LINGO-1IgG4抗体更高程度的去抑制(65-74％)。

实施例5：原代少突胶质细胞分化实验

据报道，利用遗传手段或用受体-体(body)拮抗剂处理阻断LINGO-1功能增加了来源于纯化的OPC培养物的成熟少突胶质细胞的比例(Mi等人(2005)Nat Neurosci8，745-751)。为了评估抗LINGO-1抗体阻断在OPC培养物中LINGO-1功能及促进少突胶质细胞熟化的能力，在DMEM/CNTF/T3培养基中用4784、4785或对照的IgG43207孵育新鲜分离的大鼠OPC3天，然后用抗O4抗体染色以标记未成熟和成熟的少突胶质细胞(图5)。少突胶质细胞成熟的程度测量为展示成熟形态的O4阳性细胞的比例。

富集的OPC群分离自OFA P3大鼠。简言之，切开脑并将端脑置于冰冷的含0.15％MgSO₄的Hank氏缓冲盐水溶液中(HBSS，Invitrogen)。在37℃将该组织与1：1的HBBS/胰蛋白酶-EDTA(Invitrogen)和100μg/ml的DNA酶I(Roche)孵育10分钟，通过加入FCS(Invitrogen)至终浓度10％将胰蛋白酶灭活。在890转/分钟离心组织悬液10分钟并将沉淀重悬于含10％马血清(Invitrogen)的伊格尔基本培养基中(BME，Invitrogen)。用40μm的细胞滤网(BD Falcon)过滤悬液，以1个脑/瓶的量将细胞铺于预包被多聚-D-赖氨酸的80cm²组织培养瓶中(BDFalcon)。在BME/10％马血清中于37℃培养细胞11天。通过加入5mM的L-亮氨酸-甲基酯杀死小神经胶质细胞，将培养瓶于140转/分钟摇动2小时。通过在37℃、200转/分钟将培养瓶摇动过夜收集OPC，通过在10cm细菌培养皿上于37℃预吸附2小时从OPC中进一步分离保留在上清中的任何星形细胞。收集非贴壁细胞，在890转/分钟离心10分钟，以大约3×10⁴个细胞/孔的量将细胞铺在多聚-D-赖氨酸包被的8孔腔室中的盖玻片(BD Falcon)上。将培养物在由DMEM(Invitrogen)、10ng/ml的睫状神经营养因子(R&D System)和15nM的三碘甲状腺原氨酸(Sigma)组成的DMEM/T3/CNTF培养基或在由DMEM(Invitrogen)、10μg/ml的转铁蛋白(Sigma)、10μg/ml的胰岛素(Sigma)、100μM的腐胺(Sigma)、200nM的孕酮(Sigma)、520nM的甲状腺素(Sigma)、500pM的三碘甲状腺原氨酸(Sigma)、220nM的亚硒酸钠(Sigma)、25μg/ml的庆大霉素(Sigma)和1％的HS(Invitrogen)组成的SATO培养基中维持3天。为了评估培养物关于少突胶质细胞谱系的纯度，在培养物在SATO培养基中培养7天后定量用抗O4抗体染色的细胞的百分比。一般地，80-95％的细胞由抗O4抗体染色证明培养物中的大多数细胞是少突胶质细胞谱系。

为了评估基于少突胶质细胞形态的少突胶质细胞的成熟作用，在存在或不存在100nM4784、4785或对照IgG43207的情况下将新鲜分离的OPC培养物在DMEM/T3/CNTF培养基中孵育3天，然后用抗O4抗体染色以标记不成熟和成熟的少突胶质细胞，用DAPI染色以标记细胞核。认为具有清楚确定的短突起的O4-阳性细胞代表了未成熟少突胶质细胞，而认为具有伸展的、高度分枝的、具有髓磷脂层状结构的O4-阳性细胞代表了成熟的少突胶质细胞。以每个处理三个平行中大约300-1300个细胞定量具有成熟形态的O4-阳性细胞的比例，使用单向方差分析和存在对照IgG43207时成熟少突胶质细胞的比例的Holm-Sidak比较测定显著性。为了评估抗体处理对培养物中总(未成熟和成熟)少突胶质细胞的比例的影响，定量了与O4-染色相关的DAPI细胞核的比例。

在3个独立实验中，用抗LINGO-1抗体4784和4785进行的处理显著增加了具有成熟形态的少突胶质细胞(由含有伸展了广大面积的高度分枝突起且髓磷脂层状结构的细胞所代表)的比例(图5)。用对照IgG4抗体3207进行的处理对培养物中成熟少突胶质细胞的比例没有影响。与O4染色相关的DAPI染色的细胞核的比例在所有处理中均是相似的，这证明抗LINGO-1抗体对相应于未成熟和成熟少突胶质细胞的细胞的比例没有影响。

因为抗LINGO-1抗体处理对总少突胶质细胞的比例没有影响，成熟少突胶质细胞比例的增加最有可能归因于未成熟少突胶质细胞向成熟少突胶质细胞分化速率的增加而不是OPC向未成熟少突胶质细胞分化速率的提高。

实施例6：抗LINGO-1抗体介导的细胞表面LINGO-1下调

多价抗体与细胞表面靶标的结合能导致抗体靶标复合物的内化及随后的靶标在胞吞途径中的降解(Weinmann等人(2006)Mol Cell Neurosci32，161-173)。

为了测定抗LINGOO-1抗体对细胞表面LINGO-1数量的影响，用100nM4784、4785或3207在37℃孵育未转染CHO-K1或CHO-K1-hLINGO-1细胞(参见实施例1)24小时，随后用抗V5抗体，然后是抗小鼠IgG(Fc特异的)-POD缀合物，用1-Step^TM TurboTMB-ELISA试剂盒(Pierce)显影而检测细胞表面LINGO-1(图6A)。

在用抗LINGO-1抗体4784和4785孵育24小时后，CHO-K1-hLINGO-1细胞中细胞表面LINGO-1的量被显著降低，而用对照IgG43207进行孵育的没有影响。此外，用4785进行的孵育比用4784进行的孵育更大程度地降低了细胞表面LINGO-1。

为了评估抗LINGO-1抗体对细胞表面LINGO-1降解的影响，按所述方法在4℃将未转染CHO-K1或CHO-K1-hLINGO-1细胞上的细胞表面蛋白质生物素化(Walmsley等人(2004)J Cell Sci117，4591-4602)，且细胞在存在或不存在100nM的4784、4785或3207的情况下于37℃在180分钟期间内孵育细胞不同的时间(图6B)。在孵育期间结束，使用偶联到琼脂糖珠子的抗V5抗体从细胞裂解物中免疫沉淀LINGO-1，使用抗生物素抗体(Sigma)利用Western印迹分析检测沉淀中生物素化的LINGO-1。

相应于生物素化(及由此的细胞表面)LINGO-1条带的强度在用抗LINGO-1抗体4784和4785孵育的CHO-K1-hLINGO-1细胞中比在不含抗体或用对照IgG43207孵育的细胞中更迅速地减少。此外，用4785孵育比用4784孵育更大程度地增加了细胞表面LINGO-1的降解速率。

这些结果总体表明，抗LINGO-1抗体4784和4785最可能通过扩大内化和蛋白质降解而显著下调细胞表面的LINGO-1。预期该性质促成了这些抗体阻断LINGO-1功能的效力。

实施例7：酶联免疫吸附实验(ELISA)和FACS技术

将人重组LINGO-1-Fc融合蛋白通过由直接固定的山羊抗人IgG Fc抗体(以溶于PBS的10μg/ml的100μl或20μl所包被)捕获Fc部分间接在室温固定到Maxisorp96孔板或384孔板1小时。

在溶于PBS的5μg/ml的20μl抗原包被后，在室温用PBS/0.05％Tween(PBS-T)/5％奶粉封闭孔1小时。在用PBS-T洗涤细胞后，将BEL抽提物纯化的Fab或对照IgG稀释于PBS中，再加到孔中并在室温孵育1小时。为了检测一抗，使用下述二抗：碱性磷酸酶(AP)-缀合的AffiniPure山羊F(ab’)₂片段抗人IgG或抗小鼠IgG(Jackson ImmunoResearch)。为了检测AP-缀合物，按厂商说明书使用荧光底物如AttoPhos(Roche)。在所有的孵育步骤间，微孔板的孔用PBS-T洗涤5次，在用二抗最后孵育后再洗涤5次。用TECAN Spectrafluor平板阅读器上测量荧光。

与在转染的CHO-K1细胞的细胞表面表达的LINGO-1结合的抗体的 FACS分析

在圆底96孔微孔板(NUNC^TM，Wiesbaden，德国)中用2×10⁵个细胞/孔进行所有的染色。将各个细胞系的细胞重悬在PBS/3％FCS/0.02％NaN₃(FACS缓冲液)中并用a)来自于周质抽提物或BEL裂解物的抗体、或b)纯化的Fab片段、或c)纯化的稀释在FACS缓冲液的IgG混合并在4℃孵育30-60分钟。然后将细胞用150μl FACS缓冲液/孔洗涤一次，吸入100μl藻红蛋白标记的二抗(R-PE缀合的山羊抗人IgG(H+L)(JacksonImmunoResearch)，其已经用FACS缓冲液稀释了200倍。在4℃孵育30-60分钟后，细胞用FACS缓冲液洗涤一次，重悬于100μl FACS缓冲液中，通过FACSCalibur^TM或FACSArray^TM(Becton Dickinson)中细胞的FL2荧光强度测量了LINGO-1特异性抗体的结合。

为了鉴定LINGO-1特异性抗体，使用CHO-K1-cmLINGO-1或CHO-K1-rLINGO-1平行进行染色。未转染CHO-K1细胞充当额外的对照。选择食蟹猴和大鼠LINGO-1表达细胞来进行筛选，因为这些物种直系同源物仅在少数几个氨基酸上与人LINGO-1蛋白质不同。

只有那些在未转染CHO-K1细胞上是阴性的并且在表达LINGO-1细胞系上比背景大于等于5倍的克隆才能被鉴定为是LINGO-1特异的。通过测序检测了同人LINGO-1和其他直系同源物(食蟹猴LINGO-1，大鼠LINGO-1)和同人LINGO-2旁系同源物的交叉反应性。

在序列分析后，鉴定了三十一(31)个独特的克隆，其在FACS分析中显示了对细胞表面表达的人LINGO-1的强烈结合。十二个(12)结合物在ELISA中显示了对捕获的人LINGO-1-Fc的强烈结合(信号：噪声比率大于10：1)，七个(7)在ELISA中显示了中等的结合(信号：噪声比率大于5：1)。4个结合物在ELISA中显示了对捕获的人NgR-Fc融合蛋白(R＆D Systems)的强烈结合并不再继续研究。另三个(3)结合物与所有三种LINGO-1无交叉反应并不再继续研究。将剩下的24个与人/食蟹猴/大鼠LINGO-1交叉反应但不与人NgR-Fc交叉反应的克隆表达、纯化并检测它们显著抑制LINGO-1与NgR结合的能力(参见图1)及在体外去抑制脊髓髓磷脂神经突突起抑制性活性的能力(参见图2-4)，由此选出了Fab4784和4785用于进一步的分析。在ELISA中，4784和4785与捕获的人LINGO-1-Fc结合但与不相关Fc对照相比，没有观察到同人LINGO-1-ΔLRR-Fc或人NgR-Fc的结合(参见表1和图7)。这表明4784和4785具有位于LINGO-1的LRR区(残基66-353)内的表位。

表1：利用ELISA鉴定抗LINGO-1-Fab的特征

以相对荧光单位的平均值形式给出ELISA分析的值。

使用FACS饱和分析测定选择的抗LINGO-1Fab的亲合力

利用FACS饱和结合实验测定基于细胞的抗LINGO-1特异性抗体的亲合力。因为存在于待染色样品中的抗原浓度影响了表观K_D值，与2×10⁵个细胞/孔相比，仅使用了1.25×10⁴个细胞/孔以降低FACS饱和实验中抗原浓度。除此之外，该染色步骤以与上述FACS染色步骤相同的步骤完成。

细言之，利用乙二胺四乙酸将CHO-K1-hLINGO-1、CHO-K1-cmLINGO-1或CHO-K1-rLINGO-1从培养瓶上脱壁，用FACS缓冲液洗涤并重悬于FACS缓冲液中。将纯化的抗LINGO-1Fab在FACS缓冲液中连续稀释并转至圆底96孔微孔板中(NUNC^TM，Wiesbaden，德国)。对于每个浓度进行二个平行，在总体积为100μl中用1.25×10⁴个细胞与孔冰上孵育30-60分钟。在使用150μl FACS缓冲液进行的洗涤步骤和在400×g离心5分钟后，将细胞沉淀重悬于100μl藻红蛋白标记的二抗中(R-PE缀合的山羊抗人IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch)，其已经用FACS缓冲液稀释了200倍。在4℃孵育30-60分钟后，将细胞用FACS缓冲液洗涤一次，重悬于100μl FACS缓冲液中，通过FACSArrasy^TM(Becton Dickinson)中细胞的FL2荧光强度测量LINGO-1特异性抗体的结合。使用GraphPad Prism v3.03软件或GraphPad Prism v4.03并应用非线性回归曲线拟合从饱和结合曲线测定表观K_D值/EC50值。

通过使用该实验，测定了下述表观K_D值(表2)。在Fab形式时，克隆4784与人LINGO-1、食蟹猴LINGO-1和大鼠LINGO-1具有相当弱的亲合力(分别为14.07nM、27.11和24.03nM)。然而，在Fab形式时，克隆4784不与人LINGO-2结合。在Fab形式时，克隆4785显示了与人LINGO-1、食蟹猴LINGO-1和大鼠LINGO-1亚纳摩尔的结合亲合力(即表观K_D值低于1×10^-9M)。在Fab形式时，克隆4785显示了与人LINGO-2具有低纳摩尔到亚纳摩尔亲合力的交叉反应性。在完成本发明时尚不能评估与LINGO-2交叉反应性的结果，因为LINGO-2功能和分布仍未所知。然而，不能排除其有益效果。

表2：抗LINGO-1Fab同CHO-K1细胞表达的LINGO-1或LINGO-2的表观K_D值

给出的值是以nM为单位的表观K_D的平均值。nb，没有结合。

实施例8：IgG4的克隆、表达和纯化

转变为IgG形式

为了表达全长的免疫球蛋白(Ig)，从

(SEQ ID NO：39)Fab表达载体亚克隆重链可变区片段(V_H)和轻链可变区片段(V_L)到用于人IgG4的

(SEQ ID NO：40-42)或

(SEQ ID NO：43-45)载体系列。

将限制酶EcoRI、MfeI和BlpI用于亚克隆VH结构域片段到

(SEQ ID NO：40)：通过EcoRI/BlpI消化和移出6400bp片段产生载体骨架，而通过用MfeI和BlpI消化和随后的纯化产生V_H片段(350bp)。通过分别用EcoRI和MfeI消化产生的相容突出端并通过BlpI位点连接载体和插入物。借此，破坏了EcoRI和MfeI限制性位点。

使用限制酶MfeI和BlpI亚克隆V_H结构域片段入

(SEQ ID NO：43)。在产生该新IgG载体中，在其他修饰之后，EcoRI位点(其仅允许经由相容突出端进行亚克隆)被MfeI位点取代，从而允许用MfeI/BlpI消化载体和插入物。

通过EcoRV和BsiWI位点进行V_L结构域片段到

(SEQ ID NO：42)和

(SEQ ID NO：45)的亚克隆，而使用EcoRV和HpaI进行到(SEQ ID NO：41)和

(SEQ ID NO：43)的亚克隆。

人IgG的瞬时表达和纯化

用等摩尔量的IgG重链表达载体和轻链表达载体转染HEK293细胞。在转染后第4或5天，收细胞培养物上清。在调整上清pH到8.0并无菌过滤后，将溶液进行标准蛋白A柱层析(Poros20A，PE Biosystems)。

实施例9：使用FACS饱和分析测定选择的抗LINGO-1IgG4的亲合力

利用FACS饱和结合实验测定抗LINGO-1特异性抗体的基于细胞的亲合力。通过使用抗LINGO-1Fab抗体并按照与上述方法相同的方法测定表观K_D值。

细言之，利用乙二胺四乙酸将CHO-K1-hLINGO-1、CHO-K1-cmLINGO-1或CHO-K1-rLINGO-1从培养瓶上脱壁，用FACS缓冲液洗涤并重悬在FACS缓冲液中。将纯化的抗LINGO-1IgG4用FACS缓冲液连续稀释并转至圆底96孔微孔板(NUNC^TM，Wiesbaden，德国)。对于每个浓度进行二个平行，在总体积100μl中用1.25×10⁴个细胞与孔冰上孵育30-60分钟。在使用150μl FACS缓冲液进行洗涤步骤和在400×g离心5分钟后，将细胞沉淀重悬于100μl藻红蛋白标记的二抗中(R-PE缀合的山羊抗人IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch)，其已经用FACS缓冲液稀释了200倍。在4℃孵育30-60分钟后，将细胞用FACS缓冲液洗涤一次，重悬于100μl FACS缓冲液中，通过FACSArrasy^TM(BectonDickinson)中细胞的FL2荧光强度测量LINGO-1特异性抗体的结合。使用GraphPad Prism v3.03软件或GraphPad Prism v4.03并应用非线性回归曲线拟合从饱和结合曲线测定表观K_D值/EC50值。通过使用该实验，测定了下述表观K_D值(表3)。

通过使用

载体系列生产的4784和4785IgG4抗体的亲合力显示在表3中。IgG4形式的4784和4785对于人、食蟹猴和大鼠LINGO-1具有明显低于1nM的表观K_D值。4784具有比4785低得多的同人LINGO-2的交叉反应性。

表3：抗LINGO-1IgG4与CHO-K1细胞表达的LINGO-1或LINGO-2的表观K_D值

给出的值是以nM为单位的表观K_D值的平均值。

实施例10：通过使用FACS分析测定人脑脊髓液对选择的抗LINGO-1IgG4和人LINGO-1结合的影响

利用FACS饱和结合实验检测人脑脊髓液对抗LINGO-1IgG4和人LINGO-1结合的影响。制备4784和4785的连续稀释物。在存在50％人脑脊髓液时检查与CHO-K1-hLINGO-1的结合。按上述的FACS染色方法在存在人CSF时用这些IgG4抗体染色该细胞。

细言之，利用乙二胺四乙酸将CHO-K1-hLINGO-1从培养瓶上脱壁，用FACS缓冲液洗涤并重悬于FACS缓冲液中。用含50％人血清的FACS缓冲液连续稀释纯化的抗LINGO-1IgG4，并在4℃孵育60分钟。作为对照，于4℃在FACS缓冲液中孵育IgG4形式的候选结合物的连续稀释物，FACS缓冲液含有类似于人脑脊髓液蛋白质含量的2.6％BSA。孵育后，将连续稀释物转到圆底96-孔微孔板(NUNC^TM，Wiesbaden，德国)。对于每个浓度进行二个平行，在总体积为100μl中，将1.25×10⁴个细胞与孔冰上孵育30-60分钟。在通过使用150μl FACS缓冲液的三个洗涤步骤和400×g离心5分钟后，将细胞沉淀重悬于100μl藻红蛋白标记的二抗(R-PE缀合的山羊抗人IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch)中，其已经用FACS缓冲液稀释200倍。在4℃孵育30-60分钟后，将细胞用FACS缓冲液洗涤一次，重悬于100μl FACS缓冲液中，通过FACSArrasy^TM(BectonDickinson)中细胞的FL2荧光强度测量LINGO-1特异性抗体的结合。使用GraphPad Prism v3.03软件或GraphPad Prism v4.03并应用非线性回归曲线拟合从饱和结合曲线测定表观K_D值/EC50值。

通过使用该实验，能将50％人脑脊髓液的影响与对照比较(表4)。在50％人脑脊髓液中的孵育导致与受不同影响的所有结合物结合的亲合力降低。在4784中观察到存在的人脑脊髓液对结合亲合力最强的影响，其显示了73％的亲合力降低，从0.43nM降低到1.57nM。

表4：人脑脊髓液对抗LINGO-1IgG4与CHO-K1细胞表达的LINGO-1的表观K_D值的影响

给出的值是以nM为单位的表观K_D的平均值。

实施例11：通过使用FACS分析检测人血清对选择的抗LINGO-1IgG4与人LINGO-1的结合的影响

利用FACS饱和结合实验检测人血清对抗LINGO-1IgG4和人LINGO-1结合的影响。在存在50％v/v人血清时制备4784和4785的连续稀释物。在孵育60分钟后，按上述的FACS染色方法用这些预孵育的IgG4抗体染色该细胞。

细言之，利用乙二胺四乙酸将CHO-K1-hLINGO-1从培养瓶上脱壁，用FACS缓冲液洗涤并重悬于FACS缓冲液中。用含50％人血清的FACS缓冲液连续稀释纯化的抗LINGO-1IgG4，并在4℃孵育60分钟。作为对照，于4℃在含类似于人血清蛋白质含量的2.6％BSA的FACS缓冲液中孵育IgG4形式候选结合物的连续稀释物60分钟或仅在FACS缓冲液中孵育60分钟。孵育后，将连续稀释物转到圆底96-孔微孔板(NUNC^TM，Wiesbaden，德国)。对于每个浓度进行二个平行，在总体积为100μl中将1.25×10⁴个细胞与孔冰上孵育30-60分钟。在通过使用150μl FACS缓冲液的三个洗涤步骤和400×g离心5分钟后，将细胞沉淀重悬于100μl藻红蛋白标记的二抗(R-PE缀合的山羊抗人IgG(H+L)(JacksonImmunoResearch)中，其已经用FACS缓冲液稀释200倍。在4℃孵育30-60分钟后，将细胞用FACS缓冲液洗涤一次，重悬于100μl FACS缓冲液中，经由FACSArrasy^TM(Becton Dickinson)中细胞的FL2荧光强度测量LINGO-1特异性抗体的结合。使用GraphPad Prism v3.03软件或GraphPad Prism v4.03并应用非线性回归曲线拟合从饱和结合曲线测定表观K_D值/EC50值。

通过使用该实验，能将50％人血清预孵育的影响与对照比较(表5)。在存在人血清时孵育1小时对4784和4785的K_D值没有影响。因此，这些抗体在这个时间期限内在血清中是稳定的，此外，因为它们的K_D没有改变，它们看起来不与血清成分交叉反应。

表5：人血清对抗LINGO-1IgG4与CHO-K1细胞表达的LINGO-1的表观K_D值的影响

给出的值是以nM为单位的表观K_D的平均值。

具有简短描述的序列表

SEQ ID NO：1

大鼠成熟LINGO-1胞外结构域(残基34-550)

TGCPPRCECSAQDRAVLCHRKRFVAVPEGIPTETRLLDLGKNRIKTLNQDEFASFPH

LEELELNENIVSAVEPGAFNNLFNLRTLGLRSNRLKLIPLGVFTGLSNLTKLDISEN

KIVILLDYMFQDLYNLKSLEVGDNDLVYISHRAFSGLNSLEQLTLEKCNLTSIPTEA

LSHLHGLIVLRLRHLNINAIRDYSFKRLYRLKVLEISHWPYLDTMTPNCLYGLNLTS

LSITHCNLTAVPYLAVRHLVYLRFLNLSYNPIGTIEGSMLHELLRLQEIQIVGGQLA

VVEPYAFRGLNYLRVLNVSGNQLTTLEESAFHSVGNLETLILDSNPLACDCRLLWVF

RRRWRLNFNRQQPTCATPEFVQGKEFKDFPDVLLPNYFTCRRAHIRDRKAQ QVEVDE

GHTVQFVCRADGDPPPAILWLSPRKHLVSAKSNGRLTVFPDGTLEVRYAQVQDNGTY

LCIAANAGGNDSMPAHLHVRSYSPDWPHQPNKTFAFISNQPGEGEANSTRATVPFPF

DIKT

SEQ ID NO：2

食蟹猴成熟LINGO-1胞外结构域(残基34-550)

TGCPPRCECSAQDRAVLCHRKRFVAVPEGIPTETRLLDLGKNRIKTLNQDEFASFPH

LEELELNENIVSAVEPGAFNNLFNLRTLGLRSNRLKLIPLGVFTGLSNLTKLDISEN

KIVILLDYMFQDLYNLKSLEVGDNDLVYISHRAFSGLNSLEQLTLEKCNLTSIPTEA

LSHLHGLIVLRLRHLNINAIRDYSFKRLYRLKVLEISHWPYLDTMTPNCLYGLNLTS

LSITHCNLTAVPYLAVRHLVYLRFLNLSYNPISTIEGSMLHELLRLQEIQLVGGQLA

MVEPYAFRGLNYLRVLNVSGNQLTTLEESVFHSVGNLETLILDSNPLACDCRLLWVF

RRRWRLNFNRQQPTCATPEFVQGKEFKDFPDVLLPNYFTCRRARIRDRKAQ QVFVDE

GHTVQFVCRADGDPPPAILWLSPRKHLVSAKSNGRLTVFPDGTLEVRYAQVQDNGTY

LCIAANAGGNDSMPAHLHVRSYSPDWPHQPNKTFAFIPNQPGEGEANSTRATVPFPF

DIKT

SEQ ID NO：3

人成熟LINGO-1胞外结构域(残基34-550)

TGCPPRCECSAQDRAVLCHRKRFVAVPEGIPTETRLLDLGKNRIKTLNQDEFASFPH

LEELELNENIVSAVEPGAFNNLFNLRTLGLRSNRLKLIPLGVFTGLSNLTKLDISEN

KIVILLDYMFQDLYNLKSLEVGDNDLVYISHRAFSGLNSLEQLTLEKCNLTSIPTEA

LSHLHGLIVLRLRHLNINAIRDYSFKRLYRLKVLEISHWPYLDTMTPNCLYGLNLTS

LSITHCNLTAVPYLAVRHLVYLRFLNLSYNPISTIEGSMLHELLRLQEIQLVGGQIA

VVEPYAFRGLNYLRVLNVSGNQLTTLEESVFHSVGNLETLILDSNPLACDCRLLWVF

RRRWRLNFNRQQPTCATPEFVQGKEFKDFPDVLLPNYFTCRRARIRDRKAQQVEVDE

GHTVQFVCRADGDPPPAILWLSPRKHLVSAKSNGRLTVFPDGTLEVRYAQVQDNGTY

LCIAANAGGNDSMPAHLHVRSYSPDWPHQPNKTFAFISNQPGEGEANSTRATVPFPF

DIKT

SEQ ID NO：4

4784V_L

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGNYYVYWYQQKPGQAPVLVIYEDTNRPSGI

PERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSYDNLHEQVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO：5

4784V_H

QVQLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSSSGVGVGWIRQPPGKALEWLAHIGSDD

DKYYSTSLKTRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARNQQYGDGYPGYFDYW

GQGTLVTVSS

SEQ ID NO：6

4785V_L

DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLISRNSKRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQSEDEADYYCSTYDTFSIVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO：7

4785V_H

QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSDNSAAWSWIRQSPGRGLEWLGLIYLRS

KWDNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARTGRADEFDVWGQG

TLVTVSS

SEQ ID NO：8

DNA-4784V_H

CAGGTGCAATTGAAAGAAAGCGGCCCGGCCCTGGTGAAACCGACCCAAACCCTGACC

CTGACCTGTACCTTTTCCGGATTTAGCCTGTCTTCTTCTGGTGTTGGTGTGGGTTGG

ATTCGCCAGCCGCCTGGGAAAGCCCTCGAGTGGCTGGCTCATATCGGTTCTGATGAT

GATAAGTATTATAGCACCAGCCTGAAAACGCGTCTGACCATTAGCAAAGATACTTCG

AAAAATCAGGTGGTGCTGACTATGACCAACATGGACCCGGTGGATACGGCCACCTAT

TATTGCGCGCGTAATCAGCAGTATGGTGATGGTTATCCTGGTTATTTTGATTATTGG

GGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

SEQ ID NO：9

DNA-4785V_H

CAGGTGCAATTGCAACAGTCTGGTCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAAACCCTGAGC

CTGACCTGTGCGATTTCCGGAGATAGCGTGAGCGATAATTCTGCTGCTTGGTCTTGG

ATTCGCCAGTCTCCTGGGCGTGGCCTCGAGTGGCTGGGCCTTATCTATCTTCGTAGC

AAGTGGGATAACGATTATGCGGTGAGCGTGAAAAGCCGGATTACCATCAACCCGGAT

ACTTCGAAAAACCAGTTTAGCCTGCAACTGAACAGCGTGACCCCGGAAGATACGGCC

GTGTATTATTGCGCGCGTACTGGTCGTGCTGATGAGTTTGATGTTTGGGGCCAAGGC

ACCCTGGTGACGGTTAGCTCA

SEQ ID NO：10

DNA-4784V_L

GATATCGAACTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGCGTTGCACCAGGTCAGACCGCGCGT

ATCTCGTGTAGCGGCGATAATATTGGTAATTATTATGTTTATTGGTACCAGCAGAAA

CCCGGGCAGGCGCCAGTTCTTGTGATTTATGAGGATACTAATCGTCCCTCAGGCATC

CCGGAACGCTTTAGCGGATCCAACAGCGGCAACACCGCGACCCTGACCATTAGCGGC

ACTCAGGCGGAAGACGAAGCGGATTATTATTGCCAGTCTTATGATAATCTTCATGAG

CAGGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

SEQ ID NO：11

DNA-4785V_L

GATATCGTGCTGACCCAGCCGCCTTCAGTGAGTGGCGCACCAGGTCAGCGTGTGACC

ATCTCGTGTAGCGGCAGCAGCAGCAACATTGGTAATAATTATGTGTCTTGGTACCAG

CAGTTGCCCGGGACGGCGCCGAAACTTCTGATTTCTCGTAATTCTAAGCGTCCCTCA

GGCGTGCCGGATCGTTTTAGCGGATCCAAAAGCGGCACCAGCGCGAGCCTTGCGATT

ACGGGCCTGCAAAGCGAAGACGAAGCGGATTATTATTGCTCTACTTATGATACTTTT

TCTATTGTGTTTGGCGGCGGCACGAAGTTAACCGTTCTTGGCCAG

SEQ ID NO：12

抗体4784CDR-H1

SSGVGVG

SEQ ID NO：13

抗体4784CDR-H2

HIGSDDDKYYSTSLKT

SEQ ID NO：14

抗体4784CDR-H3

NQQYGDGYPGYFDY

SEQ ID NO：15

抗体4784CDR-L1

SGDNIGNYYVY

SEQ ID NO：16

抗体4784CDR-L2

EDTNRPS

SEQ ID NO：17

抗体4784CDR-L3

QSYDNLHEQV

SEQ ID NO：18

抗体4785CDR’-H1

DNSAAWS

SEQ ID NO：19

抗体4785CDR’-H2

LIYLRSKWDNDYAVSVKSSEQ ID NO：20

抗体4785CDR’-H3

TGRADEFDV

SEQ ID NO：21

抗体4785CDR’-L1

SGSSSNIGNNYVS

SEQ ID NO：22

抗体4785CDR’-L2

RNSKRPS

SEQ ID NO：23

抗体4785CDR’-L3

STYDTFSIV

SEQ ID NO：24

正向引物DM22

GGTTATCTCGAGACCGGCTGCCCGCCCC

SEQ ID NO：25

反向引物DM23

GGCCCTTCTAGATCACTCGCCTGGCTGGTTGGAGATG

SEQ ID NO：26

APtag-5-NHIS载体

gacggatcgggagatctcccgatcccctatggtcgactctcagtacaatctgctctg

atgccgcatagttaagccagtatctgctccctgcttgtgtgttggaggtcgctgagt

agtgcgcgagcaaaatttaagctacaacaaggcaaggcttgaccgacaattgcatga

agaatctgcttagggttaggcgttttgcgctgcttcgcgatgtacgggccagatata

cgcgttgacattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattag

ttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctg

gctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatag

taacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggactatttacggtaaactg

cccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtacgccccctattgacgtca

atgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttatgggactttc

ctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtgatgcggtttt

ggcagtacatcaatgggcgtggatagcggtttgactcacggggatttccaagtctcc

accccattgacgtcaatgggagtttgttttggcaccaaaatcaacgggactttccaa

aatgtcgtaacaactccgccccattgacgcaaatgggcggtaggcgtgtacggtggg

aggtctatataagcagagctctctggctaactagagaacccactgcttactggctta

tcgaaattaatacgactcactatagggagacccaagctggctagccaccatggagac

agacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgacgc

ggcccagccggcccatcatcatcatcatcatgaagcttacgtaagatcttccggaat

catcccagttgaggaggagaacccggacttctggaaccgcgaggcagccgaggccct

gggtgccgccaagaagctgcagcctgcacagacagccgccaagaacctcatcatctt

cctgggcgatgggatgggggtgtctacggtgacagctgccaggatcctaaaagggca

gaagaaggacaaactggggcctgagatacccctggccatggaccgcttcccatatgt

ggctctgtccaagacatacaatgtagacaaacatgtgccagacagtggagccacagc

cacggcctacctgtgcggggtcaagggcaacttccagaccattggcttgagtgcagc

cgcccgctttaaccagtgcaacacgacacgcggcaacgaggtcatctccgtgatgaa

tcgggccaagaaagcagggaagtcagtgggagtggtaaccaccacacgagtgcagca

cgcctcgccagccggcacctacgcccacacggtgaaccgcaactggtactcggacgc

cgacgtgcctgcctcggcccgccaggaggggtgccaggacatcgctacgcagctcat

ctccaacatggacattgacgtgatcctaggtggaggccgaaagtacatgtttcgcat

gggaaccccagaccctgagtacccagatgactacagccaaggtgggaccaggctgga

cgggaagaatctggtgcaggaatggctggcgaagcgccagggtgcccggtatgtgtg

gaaccgcactgagctcatgcaggcttccctggacccgtctgtgacccatctcatggg

tctctttgagcctggagacatgaaatacgagatccaccgagactccacactggaccc

ctccctgatggagatgacagaggctgccctgcgcctgctgagcaggaacccccgcgg

cttcttcctcttcgtggagggtggtcgcatcgaccatggtcatcatgaaagcagggc

ttaccgggcactgactgagacgatcatgttcgacgacgccattgagagggcgggcca

gctcaccagcgaggaggacacgctgagcctcgtcactgccgaccactcccacgtctt

ctccttcggaggctaccccctgcgagggagctccatcttcgggctggcccctggcaa

ggcccgggacaggaaggcctacacggtcctcctatacggaaacggtccaggctatgt

gctcaaggacggcgcccggccggatgttaccgagagcgagagcgggagccccgagta

tcggcagcagtcagcagtgcccc tggacgaagagacccacgcaggcgaggacgtggc

ggtgttcgcgcgcggcccgcaggcgcacctggttcacggcgtgcaggagcagacctt

catagcgcacgtcatggccttcgccgcctgcctggagccctacaccgcctgcgacct

ggcgccccccgccggcaccaccgacgccgcgcacccgggttatctcgaggaagcgct

ctctctagaagggcccgaacaaaaactcatctcagaagaggatctgaatagcgccgt

cgaccatcatcatcatcatcattgagtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgcc

ttctagttgccagccatctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctgga

aggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtct

gagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggagga

ttgggaagacaatagcaggcatgctggggatgcggtgggctctatggcttctgaggc

ggaaagaaccagctggggctctagggggtatccccacgcgccctgtagcggcgcatt

aagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccct

agcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttcc

ccgtcaagctctaaatcggggcatccctttagggttccgatttagtgctttacggca

cctcgaccccaaaaaacttgattagggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctg

atagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactctt

gttccaaactggaacaacactcaaccctatctcggtctattcttttgatttataagg

gattttggggatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaa

cgcgaattaattctgtggaatgtgtgtcagttagggtgtggaaagtccccaggctcc

ccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtcagcaaccaggtgtgga

aagtccccaggctccccagcaggcagaagtatgcaaagcatgcatctcaattagtca

gcaaccatagtcccgcccctaactccgcccatcccgcccctaactccgcccagttcc

gcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgaggcc

gcctctgcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctaggc

ttttgcaaaaagctcccgggagcttgtatatccattttcggatctgatcagcacgtg

ttgacaattaatcatcggcatagtatatcggcatagtataatacgacaaggtgagga

actaaaccatggccaagttgaccagtgccgttccggtgctcaccgcgcgcgacgtcg

ccggagcggtcgagttctggaccgaccggctcgggttctcccgggacttcgtggagg

acgacttcgccggtgtggtccgggacgacgtgaccctgttcatcagcgcggtccagg

accaggtggtgccggacaacaccctggcctgggtgtgggtgcgcggcctggacgagc

tgtacgccgagtggtcggaggtcgtgtccacgaacttccgggacgcctccgggccgg

ccatgaccgagatcggcgagcagccgtgggggcgggagttcgccctgcgcgacccgg

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atcagggttattgtctcatgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaaataaac

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SEQ ID NO：27

人LINGO-1成熟DNA序列

acgggctgcccgccccgctgcgagtgctccgcccaggaccgcgctgtgctgtgccac

cgcaagcgctttgtggcagtccccgagggcatccccaccgagacgcgcctgctggac

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cacaacatcgagatcgagtatgtgccccgaaagtcggacgcaggcatcagctccgcc

gacgcgccccgcaagttcaacatgaagatgata

SEQ ID NO：28

食蟹猴LINGO-1成熟DNA序列

acgggctgcccgccccgctgcgagtgctccgcccaggaccgggctgtgctctgccac

cgcaagcgctttgtggcagtgcctgagggcatccccacggagacgcgcctgctggac

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ccgctgggcgtcttcactggcctcagcaacttgaccaagctggacatcagcgagaac

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atccgggactactccttcaagaggttgtaccgactcaaggtcttggagatctcccac

tggccctacttggacaccatgacacccaactgcctctacggcctcaacctgacgtcc

ctgtccatcacgcactgcaatctgaccgctgtgccctacctggccgtccgccacctg

gtctatctccgcttcctcaacctctcctacaaccccatcagcaccattgagggctcc

atgttgcatgagctgctccggctgcaggagatccagctggtgggcgggcagctggcc

atggtggagccctatgccttccgcggcctcaactacctgcgcgtgctcaatgtctct

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acgctcatcctggactccaacccactggcctgcgactgtcggctcctgtgggtgttc

cggcgccgctggcggctcaacttcaaccggcagcagcccacgtgcgccacgcccgag

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ggccacacggtgcagtttgtgtgccgggccgatggcgacccgccgcccgccatcctc

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gacatcaagaccctcatcatcgccaccaccatgggcttcatctctttcctgggcgtc

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cacaacatcgagatcgagtatgtcccccgaaagtcggacgcaggcatcagctccgcc

gacgcgccccgcaagttcaacatgaagatgata

SEQ ID NO：29

大鼠LINGO-1成熟DNA序列

accggctgcccgccccgctgcgagtgctcagcgcaggaccgagcagtgctctgtcac

cgcaagcgctttgtggcggtgcccgagggcatccccaccgagactcgcctgctggac

ctgggcaaaaaccgcatcaagacactcaaccaggacgagtttgccagtttcccacac

ctggaggagctagaactcaatgagaacattgtgagcgctgtggagccgggcgccttc

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ccgctgggcgtcttcaccggcctcagcaacttgaccaagctggacatcagcgagaac

aagatcgtcatcctgctagactacatgttccaagacctatacaacctcaagtcgctg

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gtctatctccgtttcctcaatctttcctacaaccccatcggtacaatcgagggctcc

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gtggtggagccctacgcctttcgtgggctcaattacctgcgtgtgctcaatgtttct

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gatgcaccccgcaagttcaacatgaagatgata

SEQ ID NO：30

正向引物DM14

CTACGTCTAGAACGGGCTGCCCGCCCCGCT

SEQ ID NO：31

反向引物DM15

GGTTTCTCGAGTCATATCATCTTCATGTTGAACTTGCGG

SEQ ID NO：32

pSecTag2-V5载体

gacggatcgggagatctcccgatcccctatggtcgactctcagtacaatctgctctg

atgccgcatagttaagccagtatctgctccctgcttgtgtgttggaggtcgctgagt

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ttccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctaggcttttgcaaaaagctcccg

ggagcttgtatatccattttcggatctgatcagcacgtgttgacaattaatcatcgg

catagtatatcggcatagtataatacgacaaggtgaggaactaaaccatggccaagt

tgaccagtgccgttccggtgctcaccgcgcgcgacgtcgccggagcggtcgagttct

ggaccgaccggctcgggttctcccgggacttcgtggaggacgacttcgccggtgtgg

tccgggacgacgtgaccctgttcatcagcgcggtccaggaccaggtggtgccggaca

acaccctggcctgggtgtgggtgcgcggcctggacgagctgtacgccgagtggtcgg

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tcgtggccgaggagcaggactgacacgtgctacgagatttcgattccaccgccgcct

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gtagcggtggtttttttgtttgcaagcagcagattacgcgcagaaaaaaaggatctc

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gttaccaatgcttaatcagtgaggcacctatctcagcgatctgtctatttcgttcat

ccatagttgcctgactccccgtcgtgtagataactacgatacgggagggcttaccat

ctggccccagtgctgcaatgataccgcgagacccacgctcaccggctccagatttat

cagcaataaaccagccagccggaagggccgagcgcagaagtggtcctgcaactttat

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cgtttggtatggcttcattcagctccggttcccaacgatcaaggcgagttacatgat

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ataccgcgccacatagcagaactttaaaagtgctcatcattggaaaacgttcttcgg

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aaacaggaaggcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaa

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tgagcggatacatatttgaatgtatttagaaaaataaacaaataggggttccgcgca

catttccccgaaaagtgccacctgacgtc

SEQ ID NO：33

人LINGO-2成熟DNA序列

attggctgccccgctcgctgtgagtgctctgcccagaacaaatctgttagctgtcac

agaaggcgattgatcgccatcccagagggcattcccatcgaaaccaaaatcttggac

ctcagtaaaaacaggctaaaaagcgtcaaccctgaagaattcatatcatatcctctg

ctggaagagatagacttgagtgacaacatcattgccaatgtggaaccaggagcattc

aacaatctctttaacctgcgttccctccgcctaaaaggcaatcgtctaaagctggtc

cctttgggagtattcacggggctgtccaatctcactaagcttgacattagtgagaat

aagattgtcattttactagactacatgttccaagatctacataacctgaagtctcta

gaagtgggggacaatgatttggtttatatatcacacagggcattcagtgggcttctt

agcttggagcagctcaccctggagaaatgcaacttaacagcagtaccaacagaagcc

ctctcccacctccgcagcctcatcagcctgcatctgaagcatctcaatatcaacaat

atgcctgtgtatgcctttaaaagattgttccacctgaaacacctagagattgactat

tggcctttactggatatgatgcctgccaatagcctctacggtctcaacctcacatcc

ctttcagtcaccaacaccaatctgtctactgtacccttccttgcctttaaacacctg

gtatacctgactcaccttaacctctcctacaatcccatcagcactattgaagcaggc

atgttctctgacctgatccgccttcaggagcttcatatagtgggggcccagcttcgc

accattgagcctcactccttccaagggctccgcttcctacgcgtgctcaatgtgtct

cagaacctgctggaaactttggaagagaatgtcttctcctcccctagggctctggag

gtcttgagcattaacaacaaccctctggcctgtgactgccgccttctctggatcttg

cagcgacagcccaccctgcagtttggtggccagcaacctatgtgtgctggcccagac

accatccgtgagaggtctttcaaggatttccatagcactgccctttctttttacttt

acctgcaaaaaacccaaaatccgtgaaaagaagttgcagcatctgctagtagatgaa

gggcagacagtccagctagaatgcagtgcagatggagacccgcagcctgtgatttcc

tgggtgacaccccgaaggcgtttcatcaccaccaagtccaatggaagagccaccgtg

ttgggtgatggcaccttggaaatccgctttgcccaggatcaagacagcgggatgtat

gtttgcatcgctagcaatgctgctgggaatgataccttcacagcctccttaactgtg

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gactccaatgacaccatttccaatggcaccaatgccaatactttttccctggacctt

aaaacaatactggtgtctacagctatgggctgcttcacattcctgggagtggtttta

ttttgttttcttctcctttttgtgtggagccgagggaaaggcaagcacaaaaacagc

attgaccttgagtatgtgcccagaaaaaacaatggtgctgttgtggaaggggaggta

gctggacccaggaggttcaacatgaaaatgatt

SEQ ID NO：34

正向引物DM16

CTACGTCTAGAATTGGCTGCCCCGCTCGCT

SEQ ID NO：35

反向引物DM17

GGTTTCTCGAGTCAAATCATTTTCATGTTGAACCTCCTG

SEQ ID NO：36

pRS5a-IgG

tcgacggatcgggagatccgggacatgtacctcccaggggcccaggaagactacggg

aggctacaccaacgtcaatcagaggggcctgtgtagctaccgataagcggaccctca

agagggcattagcaatagtgtttataaggcccccttgttaaccctaaacgggtagca

tatgcttcccgggtagtagtatatactatccagactaaccctaattcaatagcatat

gttacccaacgggaagcatatgctatcgaattagggttagtaaaagggtcctaagga

acagcgatatctcccaccccatgagctgtcacggttttatttacatggggtcaggat

tccacgagggtagtgaaccattttagtcacaagggcagtggctgaagatcaaggagc

gggcagtgaactctcctgaatcttcgcctgcttcttcattctccttcgtttagctaa

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tttcaggtgacgcccccagaataaaatttggacggggggttcagtggtggcattgtg

ctatgacaccaatataaccctcacaaaccccttgggcaataaatactagtgtaggaa

tgaaacattctgaatatctttaacaatagaaatccatggggtggggacaagccgtaa

agactggatgtccatctcacacgaatttatggctatgggcaacacataatcctagtg

caatatgatactggggttattaagatgtgtcccaggcagggaccaagacaggtgaac

catgttgttacactctatttgtaacaaggggaaagagagtggacgccgacagcagcg

gactccactggttgtctctaacacccccgaaaattaaacggggctccacgccaatgg

ggcccataaacaaagacaagtggccactcttttttttgaaattgtggagtgggggca

cgcgtcagcccccacacgccgccctgcggttttggactgtaaaataagggtgtaata

acttggctgattgtaaccccgctaaccactgcggtcaaaccacttgcccacaaaacc

actaatggcaccccggggaatacctgcataagtaggtgggcgggccaagataggggc

gcgattgctgcgatctggaggacaaattacacacacttgcgcctgagcgccaagcac

agggttgttggtcctcatattcacgaggtcgctgagagcacggtgggctaatgttgc

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ctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcct

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gctatcctaatttatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagca

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gtccttttcctgcatgcggatcttcaatattggccattagccatattattcattggt

tatatagcataaatcaatattggctattggccattgcatacgttgtatctatatcat

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SEQ ID NO：37

natleader-hsLINGO-1-Fc/pRS5a

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SEQ ID NO：38

Igleader-hsLINGO-1-ΔLRR-Fc/PRS5a

tcgacggatcgggagatccgggacatgtacctcccaggggcccaggaagactacggg

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catgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga

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cctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagc

cctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaacc

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gacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaa

tgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctc

cttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgt

cttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcct

ctccctgtctccgggtaaatgagatctggtacctcgcgatggcggccgctctagagg

gcccgtttaaacccgctgatcagcctcgactgtgccttctagttgccagccatctgt

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ttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattct

ggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggca

tgctggggatgcggtgggctctatggcttctgaggcggaaagaaccagctagctcga

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ccgcccattctccgccccatggctgactaattttttttatttatgcagaggccgagg

ccgcctctgcctctgagctattccagaagtagtgaggaggcttttttggaggcctag

gcttttgcaaaaagctcccgggagcttgtatatccattttcggatctgatcagcacg

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cgccggagcggtcgagttctggaccgaccggctcgggttctcccgggacttcgtgga

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ccagtctattaattgttgccgggaagctagagtaagtagttcgccagttaatagttt

gcgcaacgttgttgccattgctacaggcatcgtggtgtcacgctcgtcgtttggtat

ggcttcattcagctccggttcccaacgatcaaggcgagttacatgatcccccatgtt

gtgcaaaaaagcggttagctccttcggtcctccgatcgttgtcagaagtaagttggc

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atccgtaagatgcttttctgtgactggtgagtactcaaccaagtcattctgagaata

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ctcaaggatcttaccgctgttgagatccagttcgatgtaacccactcgtgcacccaa

ctgatcttcagcatcttttactttcaccagcgtttctgggtgagcaaaaacaggaag

gcaaaatgccgcaaaaaagggaataagggcgacacggaaatgttgaatactcatact

cttcctttttcaatattattgaagcatttatcagggttattgtctcatgagcggata

catatttgaatgtatttagaaaaataaacaaataggggttccgcgcacatttccccg

aaaagtgccacctgacgtcga

SEQ ID NO：39

Fab表达载体

CTAGATAACG AGGGCAAAAA ATGAAAAAGA CAGCTATCGC GATTGCAGTG

GCACTGGCTG GTTTCGCTAC CGTAGCGCAG GCCGATATCG TGCTGACCCA

GCCGCCTTCA GTGAGTGGCG CACCAGGTCA GCGTGTGACC ATCTCGTGTA

GCGGCAGCAG CAGCAACATT GGTAATAATT ATGTGTCTTG GTACCAGCAG

TTGCCCGGGA CGGCGCCGAA ACTTCTGATT TCTCGTAATT CTAAGCGTCC

CTCAGGCGTG CCGGATCGTT TTAGCGGATC CAAAAGCGGC ACCAGCGCGA

GCCTTGCGAT TACGGGCCTG CAAAGCGAAG ACGAAGCGGA TTATTATTGC

TCTACTTATG ATACTTTTTC TATTGTGTTT GGCGGCGGCA CGAAGTTAAC

CGTTCTTGGC CAGCCGAAAG CCGCACCGAG TGTGACGCTG TTTCCGCCGA

GCAGCGAAGA ATTGCAGGCG AACAAAGCGA CCCTGGTGTG CCTGATTAGC

GACTTTTATC CGGGAGCCGT GACAGTGGCC TGGAAGGCAG ATAGCAGCCC

CGTCAAGGCG GGAGTGGAGA CCACCACACC CTCCAAACAA AGCAACAACA

AGTACGCGGC CAGCAGCTAT CTGAGCCTGA CGCCTGAGCA GTGGAAGTCC

CACAGAAGCT ACAGCTGCCA GGTCACGCAT GAGGGGAGCA CCGTGGAAAA

AACCGTTGCG CCGACTGAGG CCTGATAAGC ATGCGTAGGA GAAAATAAAA

TGAAACAAAG CACTATTGCA CTGGCACTCT TACCGTTGCT CTTCACCCCT

GTTACCAAAG CCCAGGTGCA ATTGCAACAG TCTGGTCCGG GCCTGGTGAA

ACCGAGCCAA ACCCTGAGCC TGACCTGTGC GATTTCCGGA GATAGCGTGA

GCGATAATTC TGCTGCTTGG TCTTGGATTC GCCAGTCTCC TGGGCGTGGC

CTCGAGTGGC TGGGCCTTAT CTATCTTCGT AGCAAGTGGG ATAACGATTA

TGCGGTGAGC GTGAAAAGCC GGATTACCAT CAACCCGGAT ACTTCGAAAA

ACCAGTTTAG CCTGCAACTG AACAGCGTGA CCCCGGAAGA TACGGCCGTG

TATTATTGCG CGCGTACTGG TCGTGCTGAT GAGTTTGATG TTTGGGGCCA

AGGCACCCTG GTGACGGTTA GCTCAGCGTC GACCAAAGGT CCAAGCGTGT

TTCCGCTGGC TCCGAGCAGC AAAAGCACCA GCGGCGGCAC GGCTGCCCTG

GGCTGCCTGG TTAAAGATTA TTTCCCGGAA CCAGTCACCG TGAGCTGGAA

CAGCGGGGCG CTGACCAGCG GCGTGCATAC CTTTCCGGCG GTGCTGCAAA

GCAGCGGCCT GTATAGCCTG AGCAGCGTTG TGACCGTGCC GAGCAGCAGC

TTAGGCACTC AGACCTATAT TTGCAACGTG AACCATAAAC CGAGCAACAC

CAAAGTGGAT AAAAAAGTGG AACCGAAAAG CGAATTCGAG CAGAAGCTGA

TCTCTGAGGA GGATCTGAAC GGCGCGCCGC ACCATCATCA CCATCACTGA

TAAGCTTGAC CTGTGAAGTG AAAAATGGCG CAGATTGTGC GACATTTTTT

TTGTCTGCCG TTTAATTAAA GGGGGGGGGG GGCCGGCCTG GGGGGGGGTG

TACATGAAAT TGTAAACGTT AATATTTTGT TAAAATTCGC GTTAAATTTT

TGTTAAATCA GCTCATTTTT TAACCAATAG GCCGAAATCG GCAAAATCCC

TTATAAATCA AAAGAATAGA CCGAGATAGG GTTGAGTGTT GTTCCAGTTT

GGAACAAGAG TCCACTATTA AAGAACGTGG ACTCCAACGT CAAAGGGCGA

AAAACCGTCT ATCAGGGCGA TGGCCCACTA CGAGAACCAT CACCCTAATC

AAGTTTTTTG GGGTCGAGGT GCCGTAAAGC ACTAAATCGG AACCCTAAAG

GGAGCCCCCG ATTTAGAGCT TGACGGGGAA AGCCGGCGAA CGTGGCGAGA

AAGGAAGGGA AGAAAGCGAA AGGAGCGGGC GCTAGGGCGC TGGCAAGTGT

AGCGGTCACG CTGCGCGTAA CCACCACACC CGCCGCGCTT AATGCGCCGC

TACAGGGCGC GTGCTAGACT AGTGTTTAAA CCGGACCGGG GGGGGGCTTA

AGTGGGCTGC AAAACAAAAC GGCCTCCTGT CAGGAAGCCG CTTTTATCGG

GTAGCCTCAC TGCCCGCTTT CCAGTCGGGA AACCTGTCGT GCCAGCTGCA

TCAGTGAATC GGCCAACGCG CGGGGAGAGG CGGTTTGCGT ATTGGGAGCC

AGGGTGGTTT TTCTTTTCAC CAGTGAGACG GGCAACAGCT GATTGCCCTT

CACCGCCTGG CCCTGAGAGA GTTGCAGCAA GCGGTCCACG CTGGTTTGCC

CCAGCAGGCG AAAATCCTGT TTGATGGTGG TCAGCGGCGG GATATAACAT

GAGCTGTCCT CGGTATCGTC GTATCCCACT ACCGAGATGT CCGCACCAAC

GCGCAGCCCG GACTCGGTAA TGGCACGCAT TGCGCCCAGC GCCATCTGAT

CGTTGGCAAC CAGCATCGCA GTGGGAACGA TGCCCTCATT CAGCATTTGC

ATGGTTTGTT GAAAACCGGA CATGGCACTC CAGTCGCCTT CCCGTTCCGC

TATCGGCTGA ATTTGATTGC GAGTGAGATA TTTATGCCAG CCAGCCAGAC

GCAGACGCGC CGAGACAGAA CTTAATGGGC CAGCTAACAG CGCGATTTGC

TGGTGGCCCA ATGCGACCAG ATGCTCCACG CCCAGTCGCG TACCGTCCTC

ATGGGAGAAA ATAATACTGT TGATGGGTGT CTGGTCAGAG ACATCAAGAA

ATAACGCCGG AACATTAGTG CAGGCAGCTT CCACAGCAAT AGCATCCTGG

TCATCCAGCG GATAGTTAAT AATCAGCCCA CTGACACGTT GCGCGAGAAG

ATTGTGCACC GCCGCTTTAC AGGCTTCGAC GCCGCTTCGT TCTACCATCG

ACACGACCAC GCTGGCACCC AGTTGATCGG CGCGAGATTT AATCGCCGCG

ACAATTTGCG ACGGCGCGTG CAGGGCCAGA CTGGAGGTGG CAACGCCAAT

CAGCAACGAC TGTTTGCCCG CCAGTTGTTG TGCCACGCGG TTAGGAATGT

AATTCAGCTC CGCCATCGCC GCTTCCACTT TTTCCCGCGT TTTCGCAGAA

ACGTGGCTGG CCTGGTTCAC CACGCGGGAA ACGGTCTGAT AAGAGACACC

GGCATACTCT GCGACATCGT ATAACGTTAC TGGTTTCACA TTCACCACCC

TGAATTGACT CTCTTCCGGG CGCTATCATG CCATACCGCG AAAGGTTTTG

CGCCATTCGA TGCTAGCCAT GTGAGCAAAA GGCCAGCAAA AGGCCAGGAA

CCGTAAAAAG GCCGCGTTGC TGGCGTTTTT CCATAGGCTC CGCCCCCCTG

ACGAGCATCA CAAAAATCGA CGCTCAAGTC AGAGGTGGCG AAACCCGACA

GGACTATAAA GATACCAGGC GTTTCCCCCT GGAAGCTCCC TCGTGCGCTC

TCCTGTTCCG ACCCTGCCGC TTACCGGATA CCTGTCCGCC TTTCTCCCTT

CGGGAAGCGT GGCGCTTTCT CATAGCTCAC GCTGTAGGTA TCTCAGTTCG

GTGTAGGTCG TTCGCTCCAA GCTGGGCTGT GTGCACGAAC CCCCCGTTCA

GCCCGACCGC TGCGCCTTAT CCGGTAACTA TCGTCTTGAG TCCAACCCGG

TAAGACACGA CTTATCGCCA CTGGCAGCAG CCACTGGTAA CAGGATTAGC

AGAGCGAGGT ATGTAGGCGG TGCTACAGAG TTCTTGAAGT GGTGGCCTAA

CTACGGCTAC ACTAGAAGAA CAGTATTTGG TATCTGCGCT CTGCTGTAGC

CAGTTACCTT CGGAAAAAGA GTTGGTAGCT CTTGATCCGG CAAACAAACC

ACCGCTGGTA GCGGTGGTTT TTTTGTTTGC AAGCAGCAGA TTACGCGCAG

AAAAAAAGGA TCTCAAGAAG ATCCTTTGAT CTTTTCTACG GGGTCTGACG

CTCAGTGGAA CGAAAACTCA CGTTAAGGGA TTTTGGTCAG ATCTAGCACC

AGGCGTTTAA GGGCACCAAT AACTGCCTTA AAAAAATTAC GCCCCGCCCT

GCCACTCATC GCAGTACTGT TGTAATTCAT TAAGCATTCT GCCGACATGG

AAGCCATCAC AAACGGCATG ATGAACCTGA ATCGCCAGCG GCATCAGCAC

CTTGTCGCCT TGCGTATAAT ATTTGCCCAT AGTGAAAACG GGGGCGAAGA

AGTTGTCCAT ATTGGCTACG TTTAAATCAA AACTGGTGAA ACTCACCCAG

GGATTGGCTG AGACGAAAAA CATATTCTCA ATAAACCCTT TAGGGAAATA

GGCCAGGTTT TCACCGTAAC ACGCCACATC TTGCGAATAT ATGTGTAGAA

ACTGCCGGAA ATCGTCGTGG TATTCACTCC AGAGCGATGA AAACGTTTCA

GTTTGCTCAT GGAAAACGGT GTAACAAGGG TGAACACTAT CCCATATCAC

CAGCTCACCG TCTTTCATTG CCATACGGAA CTCCGGGTGA GCATTCATCA

GGCGGGCAAG AATGTGAATA AAGGCCGGAT AAAACTTGTG CTTATTTTTC

TTTACGGTCT TTAAAAAGGC CGTAATATCC AGCTGAACGG TCTGGTTATA

GGTACATTGA GCAACTGACT GAAATGCCTC AAAATGTTCT TTACGATGCC

ATTGGGATAT ATCAACGGTG GTATATCCAG TGATTTTTTT CTCCATTTTA

GCTTCCTTAG CTCCTGAAAA TCTCGATAAC TCAAAAAATA CGCCCGGTAG

TGATCTTATT TCATTATGGT GAAAGTTGGA ACCTCACCCG ACGTCTAATG

TGAGTTAGCT CACTCATTAG GCACCCCAGG CTTTACACTT TATGCTTCCG

GCTCGTATGT TGTGTGGAAT TGTGAGCGGA TAACAATTTC ACACAGGAAA

CAGCTATGAC CATGATTACG AATTT

SEQ ID NO：40

IgG4表达载体

AATTGCATGA AGAATCTGCT TAGGGTTAGG CGTTTTGCGC TGCTTCGCGA

TGTACGGGCC AGATATACGC GTTGACATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT

AGTAATCAAT TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC

GTTACATAAC TTACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC

CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT TCCCATAGTA ACGCCAATAG

GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGACT ATTTACGGTA AACTGCCCAC

TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTACGCCCC CTATTGACGT

CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT

GGGACTTTCC TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC

ATGGTGATGC GGTTTTGGCA GTACATCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA

CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT TGACGTCAAT GGGAGTTTGT

TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA CAACTCCGCC

CCATTGACGC AAATGGGCGG TAGGCGTGTA CGGTGGGAGG TCTATATAAG

CAGAGCTCTC TGGCTAACTA GAGAACCCAC TGCTTACTGG CTTATCGAAA

TTAATACGAC TCACTATAGG GAGACCCAAG CTGGCTAGCG CCACCATGAA

ACACCTGTGG TTCTTCCTCC TGCTGGTGGC AGCTCCCAGA TGGGTCCTGT

CCCAGGTGGA ATTGCAACAG TCTGGTCCGG GCCTGGTGAA ACCGAGCCAA

ACCCTGAGCC TGACCTGTGC GATTTCCGGA GATAGCGTGA GCGATAATTC

TGCTGCTTGG TCTTGGATTC GCCAGTCTCC TGGGCGTGGC CTCGAGTGGC

TGGGCCTTAT CTATCTTCGT AGCAAGTGGG ATAACGATTA TGCGGTGAGC

GTGAAAAGCC GGATTACCAT CAACCCGGAT ACTTCGAAAA ACCAGTTTAG

CCTGCAACTG AACAGCGTGA CCCCGGAAGA TACGGCCGTG TATTATTGCG

CGCGTACTGG TCGTGCTGAT GAGTTTGATG TTTGGGGCCA AGGCACCCTG

GTGACGGTTA GCTCAGCTTC CACCAAGGGA CCATCCGTCT TCCCCCTGGC

GCCCTGCTCC AGGAGCACCT CCGAGAGCAC AGCCGCCCTG GGCTGCCTGG

TCAAGGACTA CTTCCCCGAA CCGGTGACGG TGTCGTGGAA CTCAGGCGCC

CTGACCAGCG GCGTGCACAC CTTCCCGGCT GTCCTACAGT CCTCAGGACT

CTACTCCCTC AGCAGCGTGG TGACCGTGCC CTCCAGCAGC TTGGGCACGA

AGACCTACAC CTGCAACGTA GATCACAAGC CCAGCAACAC CAAGGTGGAC

AAGAGAGTTG AGTCCAAATA TGGTCCCCCA TGCCCATCAT GCCCAGCACC

TGAGTTCCTG GGGGGACCAT CAGTCTTCCT GTTCCCCCCA AAACCCAAGG

ACACTCTCAT GATCTCCCGG ACCCCTGAGG TCACGTGCGT GGTGGTGGAC

GTGAGCCAGG AAGACCCCGA GGTCCAGTTC AACTGGTACG TGGATGGCGT

GGAGGTGCAT AATGCCAAGA CAAAGCCGCG GGAGGAGCAG TTCAACAGCA

CGTACCGTGT GGTCAGCGTC CTCACCGTCC TGCACCAGGA CTGGCTGAAC

GGCAAGGAGT ACAAGTGCAA GGTCTCCAAC AAAGGCCTCC CGTCCTCCAT

CGAGAAAACC ATCTCCAAAG CCAAAGGGCA GCCCCGAGAG CCACAGGTGT

ACACCCTGCC CCCATCCCAG GAGGAGATGA CCAAGAACCA GGTCAGCCTG

ACCTGCCTGG TCAAAGGCTT CTACCCCAGC GACATCGCCG TGGAGTGGGA

GAGCAATGGG CAGCCGGAGA ACAACTACAA GACCACGCCT CCCGTGCTGG

ACTCCGACGG CTCCTTCTTC CTCTACAGCA GGCTAACCGT GGACAAGAGC

AGGTGGCAGG AGGGGAATGT CTTCTCATGC TCCGTGATGC ATGAGGCTCT

GCACAACCAC TACACACAGA AGAGCCTCTC CCTGTCTCTG GGTAAATGAG

GGCCCGTTTA AACCCGCTGA TCAGCCTCGA CTGTGCCTTC TAGTTGCCAG

CCATCTGTTG TTTGCCCCTC CCCCGTGCCT TCCTTGACCC TGGAAGGTGC

CACTCCCACT GTCCTTTCCT AATAAAATGA GGAAATTGCA TCGCATTGTC

TGAGTAGGTG TCATTCTATT CTGGGGGGTG GGGTGGGGCA GGACAGCAAG

GGGGAGGATT GGGAAGACAA TAGCAGGCAT GCTGGGGATG CGGTGGGCTC

TATGGCTTCT GAGGCGGAAA GAACCAGCTG GGGCTCTAGG GGGTATCCCC

ACGCGCCCTG TAGCGGCGCA TTAAGCGCGG CGGGTGTGGT GGTTACGCGC

AGCGTGACCG CTACACTTGC CAGCGCCCTA GCGCCCGCTC CTTTCGCTTT

CTTCCCTTCC TTTCTCGCCA CGTTCGCCGG CTTTCCCCGT CAAGCTCTAA

ATCGGGGCAT CCCTTTAGGG TTCCGATTTA GTGCTTTACG GCACCTCGAC

CCCAAAAAAC TTGATTAGGG TGATGGTTCA CGTAGTGGGC CATCGCCCTG

ATAGACGGTT TTTCGCCCTT TGACGTTGGA GTCCACGTTC TTTAATAGTG

GACTCTTGTT CCAAACTGGA ACAACACTCA ACCCTATCTC GGTCTATTCT

TTTGATTTAT AAGGGATTTT GGGGATTTCG GCCTATTGGT TAAAAAATGA

GCTGATTTAA CAAAAATTTA ACGCGAATTA ATTCTGTGGA ATGTGTGTCA

GTTAGGGTGT GGAAAGTCCC CAGGCTCCCC AGGCAGGCAG AAGTATGCAA

AGCATGCATC TCAATTAGTC AGCAACCAGG TGTGGAAAGT CCCCAGGCTC

CCCAGCAGGC AGAAGTATGC AAAGCATGCA TCTCAATTAG TCAGCAACCA

TAGTCCCGCC CCTAACTCCG CCCATCCCGC CCCTAACTCC GCCCAGTTCC

GCCCATTCTC CGCCCCATGG CTGACTAATT TTTTTTATTT ATGCAGAGGC

CGAGGCCGCC TCTGCCTCTG AGCTATTCCA GAAGTAGTGA GGAGGCTTTT

TTGGAGGCCT AGGCTTTTGC AAAAAGCTCC CGGGAGCTTG TATATCCATT

TTCGGATCTG ATCAAGAGAC AGGATGAGGA TCGTTTCGCA TGATTGAACA

AGATGGATTG CACGCAGGTT CTCCGGCCGC TTGGGTGGAG AGGCTATTCG

GCTATGACTG GGCACAACAG ACAATCGGCT GCTCTGATGC CGCCGTGTTC

CGGCTGTCAG CGCAGGGGCG CCCGGTTCTT TTTGTCAAGA CCGACCTGTC

CGGTGCCCTG AATGAACTGC AGGACGAGGC AGCGCGGCTA TCGTGGCTGG

CCACGACGGG CGTTCCTTGC GCAGCTGTGC TCGACGTTGT CACTGAAGCG

GGAAGGGACT GGCTGCTATT GGGCGAAGTG CCGGGGCAGG ATCTCCTGTC

ATCTCACCTT GCTCCTGCCG AGAAAGTATC CATCATGGCT GATGCAATGC

GGCGGCTGCA TACGCTTGAT CCGGCTACCT GCCCATTCGA CCACCAAGCG

AAACATCGCA TCGAGCGAGC ACGTACTCGG ATGGAAGCCG GTCTTGTCGA

TCAGGATGAT CTGGACGAAG AGCATCAGGG GCTCGCGCCA GCCGAACTGT

TCGCCAGGCT CAAGGCGCGC ATGCCCGACG GCGAGGATCT CGTCGTGACC

CATGGCGATG CCTGCTTGCC GAATATCATG GTGGAAAATG GCCGCTTTTC

TGGATTCATC GACTGTGGCC GGCTGGGTGT GGCGGACCGC TATCAGGACA

TAGCGTTGGC TACCCGTGAT ATTGCTGAAG AGCTTGGCGG CGAATGGGCT

GACCGCTTCC TCGTGCTTTA CGGTATCGCC GCTCCCGATT CGCAGCGCAT

CGCCTTCTAT CGCCTTCTTG ACGAGTTCTT CTGAGCGGGA CTCTGGGGTT

CGAAATGACC GACCAAGCGA CGCCCAACCT GCCATCACGA GATTTCGATT

CCACCGCCGC CTTCTATGAA AGGTTGGGCT TCGGAATCGT TTTCCGGGAC

GCCGGCTGGA TGATCCTCCA GCGCGGGGAT CTCATGCTGG AGTTCTTCGC

CCACCCCAAC TTGTTTATTG CAGCTTATAA TGGTTACAAA TAAAGCAATA

GCATCACAAA TTTCACAAAT AAAGCATTTT TTTCACTGCA TTCTAGTTGT

GGTTTGTCCA AACTCATCAA TGTATCTTAT CATGTCTGTA TACCGTCGAC

CTCTAGCTAG AGCTTGGCGT AATCATGGTC ATAGCTGTTT CCTGTGTGAA

ATTGTTATCC GCTCACAATT CCACACAACA TACGAGCCGG AAGCATAAAG

TGTAAAGCCT GGGGTGCCTA ATGAGTGAGC TAACTCACAT TAATTGCGTT

GCGCTCACTG CCCGCTTTCC AGTCGGGAAA CCTGTCGTGC CAGCTGCATT

AATGAATCGG CCAACGCGCG GGGAGAGGCG GTTTGCGTAT TGGGCGCTCT

TCCGCTTCCT CGCTCACTGA CTCGCTGCGC TCGGTCGTTC GGCTGCGGCG

AGCGGTATCA GCTCACTCAA AGGCGGTAAT ACGGTTATCC ACAGAATCAG

GGGATAACGC AGGAAAGAAC ATGTGAGCAA AAGGCCAGCA AAAGGCCAGG

AACCGTAAAA AGGCCGCGTT GCTGGCGTTT TTCCATAGGC TCCGCCCCCC

TGACGAGCAT CACAAAAATC GACGCTCAAG TCAGAGGTGG CGAAACCCGA

CAGGACTATA AAGATACCAG GCGTTTCCCC CTGGAAGCTC CCTCGTGCGC

TCTCCTGTTC CGACCCTGCC GCTTACCGGA TACCTGTCCG CCTTTCTCCC

TTCGGGAAGC GTGGCGCTTT CTCAATGCTC ACGCTGTAGG TATCTCAGTT

CGGTGTAGGT CGTTCGCTCC AAGCTGGGCT GTGTGCACGA ACCCCCCGTT

CAGCCCGACC GCTGCGCCTT ATCCGGTAAC TATCGTCTTG AGTCCAACCC

GGTAAGACAC GACTTATCGC CACTGGCAGC AGCCACTGGT AACAGGATTA

GCAGAGCGAG GTATGTAGGC GGTGCTACAG AGTTCTTGAA GTGGTGGCCT

AACTACGGCT ACACTAGAAG GACAGTATTT GGTATCTGCG CTCTGCTGAA

GCCAGTTACC TTCGGAAAAA GAGTTGGTAG CTCTTGATCC GGCAAACAAA

CCACCGCTGG TAGCGGTGGT TTTTTTGTTT GCAAGCAGCA GATTACGCGC

AGAAAAAAAG GATCTCAAGA AGATCCTTTG ATCTTTTCTA CGGGGTCTGA

CGCTCAGTGG AACGAAAACT CACGTTAAGG GATTTTGGTC ATGAGATTAT

CAAAAAGGAT CTTCACCTAG ATCCTTTTAA ATTAAAAATG AAGTTTTAAA

TCAATCTAAA GTATATATGA GTAAACTTGG TCTGACAGTT ACCAATGCTT

AATCAGTGAG GCACCTATCT CAGCGATCTG TCTATTTCGT TCATCCATAG

TTGCCTGACT CCCCGTCGTG TAGATAACTA CGATACGGGA GGGCTTACCA

TCTGGCCCCA GTGCTGCAAT GATACCGCGA GACCCACGCT CACCGGCTCC

AGATTTATCA GCAATAAACC AGCCAGCCGG AAGGGCCGAG CGCAGAAGTG

GTCCTGCAAC TTTATCCGCC TCCATCCAGT CTATTAATTG TTGCCGGGAA

GCTAGAGTAA GTAGTTCGCC AGTTAATAGT TTGCGCAACG TTGTTGCCAT

TGCTACAGGC ATCGTGGTGT CACGCTCGTC GTTTGGTATG GCTTCATTCA

GCTCCGGTTC CCAACGATCA AGGCGAGTTA CATGATCCCC CATGTTGTGC

AAAAAAGCGG TTAGCTCCTT CGGTCCTCCG ATCGTTGTCA GAAGTAAGTT

GGCCGCAGTG TTATCACTCA TGGTTATGGC AGCACTGCAT AATTCTCTTA

CTGTCATGCC ATCCGTAAGA TGCTTTTCTG TGACTGGTGA GTACTCAACC

AAGTCATTCT GAGAATAGTG TATGCGGCGA CCGAGTTGCT CTTGCCCGGC

GTCAATACGG GATAATACCG CGCCACATAG CAGAACTTTA AAAGTGCTCA

TCATTGGAAA ACGTTCTTCG GGGCGAAAAC TCTCAAGGAT CTTACCGCTG

TTGAGATCCA GTTCGATGTA ACCCACTCGT GCACCCAACT GATCTTCAGC

ATCTTTTACT TTCACCAGCG TTTCTGGGTG AGCAAAAACA GGAAGGCAAA

ATGCCGCAAA AAAGGGAATA AGGGCGACAC GGAAATGTTG AATACTCATA

CTCTTCCTTT TTCAATATTA TTGAAGCATT TATCAGGGTT ATTGTCTCAT

GAGCGGATAC ATATTTGAAT GTATTTAGAA AAATAAACAA ATAGGGGTTC

CGCGCACATT TCCCCGAAAA GTGCCACCTG ACGTCGACGG ATCGGGAGAT

CTCCCGATCC CCTATGGTCG ACTCTCAGTA CAATCTGCTC TGATGCCGCA

TAGTTAAGCC AGTATCTGCT CCCTGCTTGT GTGTTGGAGG TCGCTGAGTA

GTGCGCGAGC AAAATTTAAG CTACAACAAG GCAAGGCTTG ACCGAC

SEQ ID NO：41

IgGλ链表达载体

AATTGCATGA AGAATCTGCT TAGGGTTAGG CGTTTTGCGC TGCTTCGCGA

TGTACGGGCC AGATATACGC GTTGACATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT

AGTAATCAAT TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC

GTTACATAAC TTACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC

CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT TCCCATAGTA ACGCCAATAG

GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGACT ATTTACGGTA AACTGCCCAC

TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTACGCCCC CTATTGACGT

CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT

GGGACTTTCC TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC

ATGGTGATGC GGTTTTGGCA GTACATCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA

CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT TGACGTCAAT GGGAGTTTGT

TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA CAACTCCGCC

CCATTGACGC AAATGGGCGG TAGGCGTGTA CGGTGGGAGG TCTATATAAG

CAGAGCTCTC TGGCTAACTA GAGAACCCAC TGCTTACTGG CTTATCGAAA

TTAATACGAC TCACTATAGG GAGACCCAAG CTGGCTAGCG CCACCATGGC

CTGGGCTCTG CTGCTCCTCA CCCTCCTCAC TCAGGGCACA GGATCCTGGG

CTGATATCGT GCTGACCCAG CCGCCTTCAG TGAGTGGCGC ACCAGGTCAG

CGTGTGACCA TCTCGTGTAG CGGCAGCAGC AGCAACATTG GTAATAATTA

TGTGTCTTGG TACCAGCAGT TGCCCGGGAC GGCGCCGAAA CTTCTGATTT

CTCGTAATTC TAAGCGTCCC TCAGGCGTGC CGGATCGTTT TAGCGGATCC

AAAAGCGGCA CCAGCGCGAG CCTTGCGATT ACGGGCCTGC AAAGCGAAGA

CGAAGCGGAT TATTATTGCT CTACTTATGA TACTTTTTCT ATTGTGTTTG

GCGGCGGCAC GAAGTTAACC GTCCTAGGTC AGCCCAAGGC TGCCCCCTCG

GTCACTCTGT TCCCGCCCTC CTCTGAGGAG CTTCAAGCCA ACAAGGCCAC

ACTGGTGTGT CTCATAAGTG ACTTCTACCC GGGAGCCGTG ACAGTGGCCT

GGAAGGGAGA TAGCAGCCCC GTCAAGGCGG GAGTGGAGAC CACCACACCC

TCCAAACAAA GCAACAACAA GTACGCGGCC AGCAGCTATC TGAGCCTGAC

GCCTGAGCAG TGGAAGTCCC ACAGAAGCTA CAGCTGCCAG GTCACGCATG

AAGGGAGCAC CGTGGAGAAG ACAGTGGCCC CTACAGAATG TTCATAGGGG

CCCGTTTAAA CCCGCTGATC AGCCTCGACT GTGCCTTCTA GTTGCCAGCC

ATCTGTTGTT TGCCCCTCCC CCGTGCCTTC CTTGACCCTG GAAGGTGCCA

CTCCCACTGT CCTTTCCTAA TAAAATGAGG AAATTGCATC GCATTGTCTG

AGTAGGTGTC ATTCTATTCT GGGGGGTGGG GTGGGGCAGG ACAGCAAGGG

GGAGGATTGG GAAGACAATA GCAGGCATGC TGGGGATGCG GTGGGCTCTA

TGGCTTCTGA GGCGGAAAGA ACCAGCTGGG GCTCTAGGGG GTATCCCCAC

GCGCCCTGTA GCGGCGCATT AAGCGCGGCG GGTGTGGTGG TTACGCGCAG

CGTGACCGCT ACACTTGCCA GCGCCCTAGC GCCCGCTCCT TTCGCTTTCT

TCCCTTCCTT TCTCGCCACG TTCGCCGGCT TTCCCCGTCA AGCTCTAAAT

CGGGGCATCC CTTTAGGGTT CCGATTTAGT GCTTTACGGC ACCTCGACCC

CAAAAAACTT GATTAGGGTG ATGGTTCACG TAGTGGGCCA TCGCCCTGAT

AGACGGTTTT TCGCCCTTTG ACGTTGGAGT CCACGTTCTT TAATAGTGGA

CTCTTGTTCC AAACTGGAAC AACACTCAAC CCTATCTCGG TCTATTCTTT

TGATTTATAA GGGATTTTGG GGATTTCGGC CTATTGGTTA AAAAATGAGC

TGATTTAACA AAAATTTAAC GCGAATTAAT TCTGTGGAAT GTGTGTCAGT

TAGGGTGTGG AAAGTCCCCA GGCTCCCCAG GCAGGCAGAA GTATGCAAAG

CATGCATCTC AATTAGTCAG CAACCAGGTG TGGAAAGTCC CCAGGCTCCC

CAGCAGGCAG AAGTATGCAA AGCATGCATC TCAATTAGTC AGCAACCATA

GTCCCGCCCC TAACTCCGCC CATCCCGCCC CTAACTCCGC CCAGTTCCGC

CCATTCTCCG CCCCATGGCT GACTAATTTT TTTTATTTAT GCAGAGGCCG

AGGCCGCCTC TGCCTCTGAG CTATTCCAGA AGTAGTGAGG AGGCTTTTTT

GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA AAAGCTCCCG GGAGCTTGTA TATCCATTTT

CGGATCTGAT CAGCACGTGT TGACAATTAA TCATCGGCAT AGTATATCGG

CATAGTATAA TACGACAAGG TGAGGAACTA AACCATGGCC AAGTTGACCA

GTGCCGTTCC GGTGCTCACC GCGCGCGACG TCGCCGGAGC GGTCGAGTTC

TGGACCGACC GGCTCGGGTT CTCCCGGGAC TTCGTGGAGG ACGACTTCGC

CGGTGTGGTC CGGGACGACG TGACCCTGTT CATCAGCGCG GTCCAGGACC

AGGTGGTGCC GGACAACACC CTGGCCTGGG TGTGGGTGCG CGGCCTGGAC

GAGCTGTACG CCGAGTGGTC GGAGGTCGTG TCCACGAACT TCCGGGACGC

CTCCGGGCCG GCCATGACCG AGATCGGCGA GCAGCCGTGG GGGCGGGAGT

TCGCCCTGCG CGACCCGGCC GGCAACTGCG TGCACTTCGT GGCCGAGGAG

CAGGACTGAC ACGTGCTACG AGATTTCGAT TCCACCGCCG CCTTCTATGA

AAGGTTGGGC TTCGGAATCG TTTTCCGGGA CGCCGGCTGG ATGATCCTCC

AGCGCGGGGA TCTCATGCTG GAGTTCTTCG CCCACCCCAA CTTGTTTATT

GCAGCTTATA ATGGTTACAA ATAAAGCAAT AGCATCACAA ATTTCACAAA

TAAAGCATTT TTTTCACTGC ATTCTAGTTG TGGTTTGTCC AAACTCATCA

ATGTATCTTA TCATGTCTGT ATACCGTCGA CCTCTAGCTA GAGCTTGGCG

TAATCATGGT CATAGCTGTT TCCTGTGTGA AATTGTTATC CGCTCACAAT

TCCACACAAC ATACGAGCCG GAAGCATAAA GTGTAAAGCC TGGGGTGCCT

AATGAGTGAG CTAACTCACA TTAATTGCGT TGCGCTCACT GCCCGCTTTC

CAGTCGGGAA ACCTGTCGTG CCAGCTGCAT TAATGAATCG GCCAACGCGC

GGGGAGAGGC GGTTTGCGTA TTGGGCGCTC TTCCGCTTCC TCGCTCACTG

ACTCGCTGCG CTCGGTCGTT CGGCTGCGGC GAGCGGTATC AGCTCACTCA

AAGGCGGTAA TACGGTTATC CACAGAATCA GGGGATAACG CAGGAAAGAA

CATGTGAGCA AAAGGCCAGC AAAAGGCCAG GAACCGTAAA AAGGCCGCGT

TGCTGGCGTT TTTCCATAGG CTCCGCCCCC CTGACGAGCA TCACAAAAAT

CGACGCTCAA GTCAGAGGTG GCGAAACCCG ACAGGACTAT AAAGATACCA

GGCGTTTCCC CCTGGAAGCT CCCTCGTGCG CTCTCCTGTT CCGACCCTGC

CGCTTACCGG ATACCTGTCC GCCTTTCTCC CTTCGGGAAG CGTGGCGCTT

TCTCAATGCT CACGCTGTAG GTATCTCAGT TCGGTGTAGG TCGTTCGCTC

CAAGCTGGGC TGTGTGCACG AACCCCCCGT TCAGCCCGAC CGCTGCGCCT

TATCCGGTAA CTATCGTCTT GAGTCCAACC CGGTAAGACA CGACTTATCG

CCACTGGCAG CAGCCACTGG TAACAGGATT AGCAGAGCGA GGTATGTAGG

CGGTGCTACA GAGTTCTTGA AGTGGTGGCC TAACTACGGC TACACTAGAA

GGACAGTATT TGGTATCTGC GCTCTGCTGA AGCCAGTTAC CTTCGGAAAA

AGAGTTGGTA GCTCTTGATC CGGCAAACAA ACCACCGCTG GTAGCGGTGG

TTTTTTTGTT TGCAAGCAGC AGATTACGCG CAGAAAAAAA GGATCTCAAG

AAGATCCTTT GATCTTTTCT ACGGGGTCTG ACGCTCAGTG GAACGAAAAC

TCACGTTAAG GGATTTTGGT CATGAGATTA TCAAAAAGGA TCTTCACCTA

GATCCTTTTA AATTAAAAAT GAAGTTTTAA ATCAATCTAA AGTATATATG

AGTAAACTTG GTCTGACAGT TACCAATGCT TAATCAGTGA GGCACCTATC

TCAGCGATCT GTCTATTTCG TTCATCCATA GTTGCCTGAC TCCCCGTCGT

GTAGATAACT ACGATACGGG AGGGCTTACC ATCTGGCCCC AGTGCTGCAA

TGATACCGCG AGACCCACGC TCACCGGCTC CAGATTTATC AGCAATAAAC

CAGCCAGCCG GAAGGGCCGA GCGCAGAAGT GGTCCTGCAA CTTTATCCGC

CTCCATCCAG TCTATTAATT GTTGCCGGGA AGCTAGAGTA AGTAGTTCGC

CAGTTAATAG TTTGCGCAAC GTTGTTGCCA TTGCTACAGG CATCGTGGTG

TCACGCTCGT CGTTTGGTAT GGCTTCATTC AGCTCCGGTT CCCAACGATC

AAGGCGAGTT ACATGATCCC CCATGTTGTG CAAAAAAGCG GTTAGCTCCT

TCGGTCCTCC GATCGTTGTC AGAAGTAAGT TGGCCGCAGT GTTATCACTC

ATGGTTATGG CAGCACTGCA TAATTCTCTT ACTGTCATGC CATCCGTAAG

ATGCTTTTCT GTGACTGGTG AGTACTCAAC CAAGTCATTC TGAGAATAGT

GTATGCGGCG ACCGAGTTGC TCTTGCCCGG CGTCAATACG GGATAATACC

GCGCCACATA GCAGAACTTT AAAAGTGCTC ATCATTGGAA AACGTTCTTC

GGGGCGAAAA CTCTCAAGGA TCTTACCGCT GTTGAGATCC AGTTCGATGT

AACCCACTCG TGCACCCAAC TGATCTTCAG CATCTTTTAC TTTCACCAGC

GTTTCTGGGT GAGCAAAAAC AGGAAGGCAA AATGCCGCAA AAAAGGGAAT

AAGGGCGACA CGGAAATGTT GAATACTCAT ACTCTTCCTT TTTCAATATT

ATTGAAGCAT TTATCAGGGT TATTGTCTCA TGAGCGGATA CATATTTGAA

TGTATTTAGA AAAATAAACA AATAGGGGTT CCGCGCACAT TTCCCCGAAA

AGTGCCACCT GACGTCGACG GATCGGGAGA TCTCCCGATC CCCTATGGTC

GACTCTCAGT ACAATCTGCT CTGATGCCGC ATAGTTAAGC CAGTATCTGC

TCCCTGCTTG TGTGTTGGAG GTCGCTGAGT AGTGCGCGAG CAAAATTTAA

GCTACAACAA GGCAAGGCTT GACCGAC

SEQ ID NO：42

IgGκ链表达载体

AATTGCATGA AGAATCTGCT TAGGGTTAGG CGTTTTGCGC TGCTTCGCGA

TGTACGGGCC AGATATACGC GTTGACATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT

AGTAATCAAT TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC

GTTACATAAC TTACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC

CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT TCCCATAGTA ACGCCAATAG

GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA AACTGCCCAC

TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTACGCCCC CTATTGACGT

CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT

GGGACTTTCC TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC

ATGGTGATGC GGTTTTGGCA GTACATCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA

CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT TGACGTCAAT GGGAGTTTGT

TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA CAACTCCGCC

CCATTGACGC AAATGGGCGG TAGGCGTGTA CGGTGGGAGG TCTATATAAG

CAGAGCTCTC TGGCTAACTA GAGAACCCAC TGCTTACTGG CTTATCGAAA

TTAATACGAC TCACTATAGG GAGACCCAAG CTGGCTAGCG CCACCATGGT

GTTGCAGACC CAGGTCTTCA TTTCTCTGTT GCTCTGGATC TCTGGTGCCT

ACGGGGATAT CCAGATGACC CAGAGCCCGT CTAGCCTGAG CGCGAGCGTG

GGTGATCGTG TGACCATTAC CTGCAGAGCG AGCCAGTCTA TTTCTAATTG

GCTGAATTGG TACCAGCAGA AACCAGGTAA AGCACCGAAA CTATTAATTT

ATAAGGCTTC TACTTTGCAA AGCGGGGTCC CGTCCCGTTT TAGCGGCTCT

GGATCCGGCA CTGATTTTAC CCTGACCATT AGCAGCCTGC AACCTGAAGA

CTTTGCGACT TATTATTGCC AGCAGTATGG TAATATTCCT ATTACCTTTG

GCCAGGGTAC GAAAGTTGAA ATTAAACGTA CGGTGGCTGC ACCATCTGTC

TTCATCTTCC CGCCATCTGA TGAGCAGTTG AAATCTGGAA CTGCCTCTGT

TGTGTGCCTG CTGAATAACT TCTATCCCAG AGAGGCCAAA GTACAGTGGA

AGGTGGATAA CGCCCTCCAA TCGGGTAACT CCCAGGAGAG TGTCACAGAG

CAGGACAGCA AGGACAGCAC CTACAGCCTC AGCAGCACCC TGACGCTGAG

CAAAGCAGAC TACGAGAAAC ACAAAGTCTA CGCCTGCGAA GTCACCCATC

AGGGCCTGAG CTCGCCCGTC ACAAAGAGCT TCAACAGGGG AGAGTGTTAG

GGGCCCGTTT AAACCCGCTG ATCAGCCTCG ACTGTGCCTT CTAGTTGCCA

GCCATCTGTT GTTTGCCCCT CCCCCGTGCC TTCCTTGACC CTGGAAGGTG

CCACTCCCAC TGTCCTTTCC TAATAAAATG AGGAAATTGC ATCGCATTGT

CTGAGTAGGT GTCATTCTAT TCTGGGGGGT GGGGTGGGGC AGGACAGCAA

GGGGGAGGAT TGGGAAGACA ATAGCAGGCA TGCTGGGGAT GCGGTGGGCT

CTATGGCTTC TGAGGCGGAA AGAACCAGCT GGGGCTCTAG GGGGTATCCC

CACGCGCCCT GTAGCGGCGC ATTAAGCGCG GCGGGTGTGG TGGTTACGCG

CAGCGTGACC GCTACACTTG CCAGCGCCCT AGCGCCCGCT CCTTTCGCTT

TCTTCCCTTC CTTTCTCGCC ACGTTCGCCG GCTTTCCCCG TCAAGCTCTA

AATCGGGGGC TCCCTTTAGG GTTCCGATTT AGTGCTTTAC GGCACCTCGA

CCCCAAAAAA CTTGATTAGG GTGATGGTTC ACGTAGTGGG CCATCGCCCT

GATAGACGGT TTTTCGCCCT TTGACGTTGG AGTCCACGTT CTTTAATAGT

GGACTCTTGT TCCAAACTGG AACAACACTC AACCCTATCT CGGTCTATTC

TTTTGATTTA TAAGGGATTT TGCCGATTTC GGCCTATTGG TTAAAAAATG

AGCTGATTTA ACAAAAATTT AACGCGAATT AATTCTGTGG AATGTGTGTC

AGTTAGGGTG TGGAAAGTCC CCAGGCTCCC CAGCAGGCAG AAGTATGCAA

AGCATGCATC TCAATTAGTC AGCAACCAGG TGTGGAAAGT CCCCAGGCTC

CCCAGCAGGC AGAAGTATGC AAAGCATGCA TCTCAATTAG TCAGCAACCA

TAGTCCCGCC CCTAACTCCG CCCATCCCGC CCCTAACTCC GCCCAGTTCC

GCCCATTCTC CGCCCCATGG CTGACTAATT TTTTTTATTT ATGCAGAGGC

CGAGGCCGCC TCTGCCTCTG AGCTATTCCA GAAGTAGTGA GGAGGCTTTT

TTGGAGGCCT AGGCTTTTGC AAAAAGCTCC CGGGAGCTTG TATATCCATT

TTCGGATCTG ATCAGCACGT GTTGACAATT AATCATCGGC ATAGTATATC

GGCATAGTAT AATACGACAA GGTGAGGAAC TAAACCATGG CCAAGTTGAC

CAGTGCCGTT CCGGTGCTCA CCGCGCGCGA CGTCGCCGGA GCGGTCGAGT

TCTGGACCGA CCGGCTCGGG TTCTCCCGGG ACTTCGTGGA GGACGACTTC

GCCGGTGTGG TCCGGGACGA CGTGACCCTG TTCATCAGCG CGGTCCAGGA

CCAGGTGGTG CCGGACAACA CCCTGGCCTG GGTGTGGGTG CGCGGCCTGG

ACGAGCTGTA CGCCGAGTGG TCGGAGGTCG TGTCCACGAA CTTCCGGGAC

GCCTCCGGGC CGGCCATGAC CGAGATCGGC GAGCAGCCGT GGGGGCGGGA

GTTCGCCCTG CGCGACCCGG CCGGCAACTG CGTGCACTTC GTGGCCGAGG

AGCAGGACTG ACACGTGCTA CGAGATTTCG ATTCCACCGC CGCCTTCTAT

GAAAGGTTGG GCTTCGGAAT CGTTTTCCGG GACGCCGGCT GGATGATCCT

CCAGCGCGGG GATCTCATGC TGGAGTTCTT CGCCCACCCC AACTTGTTTA

TTGCAGCTTA TAATGGTTAC AAATAAAGCA ATAGCATCAC AAATTTCACA

AATAAAGCAT TTTTTTCACT GCATTCTAGT TGTGGTTTGT CCAAACTCAT

CAATGTATCT TATCATGTCT GTATACCGTC GACCTCTAGC TAGAGCTTGG

CGTAATCATG GTCATAGCTG TTTCCTGTGT GAAATTGTTA TCCGCTCACA

ATTCCACACA ACATACGAGC CGGAAGCATA AAGTGTAAAG CCTGGGGTGC

CTAATGAGTG AGCTAACTCA CATTAATTGC GTTGCGCTCA CTGCCCGCTT

TCCAGTCGGG AAACCTGTCG TGCCAGCTGC ATTAATGAAT CGGCCAACGC

GCGGGGAGAG GCGGTTTGCG TATTGGGCGC TCTTCCGCTT CCTCGCTCAC

TGACTCGCTG CGCTCGGTCG TTCGGCTGCG GCGAGCGGTA TCAGCTCACT

CAAAGGCGGT AATACGGTTA TCCACAGAAT CAGGGGATAA CGCAGGAAAG

AACATGTGAG CAAAAGGCCA GCAAAAGGCC AGGAACCGTA AAAAGGCCGC

GTTGCTGGCG TTTTTCCATA GGCTCCGCCC CCCTGACGAG CATCACAAAA

ATCGACGCTC AAGTCAGAGG TGGCGAAACC CGACAGGACT ATAAAGATAC

CAGGCGTTTC CCCCTGGAAG CTCCCTCGTG CGCTCTCCTG TTCCGACCCT

GCCGCTTACC GGATACCTGT CCGCCTTTCT CCCTTCGGGA AGCGTGGCGC

TTTCTCATAG CTCACGCTGT AGGTATCTCA GTTCGGTGTA GGTCGTTCGC

TCCAAGCTGG GCTGTGTGCA CGAACCCCCC GTTCAGCCCG ACCGCTGCGC

CTTATCCGGT AACTATCGTC TTGAGTCCAA CCCGGTAAGA CACGACTTAT

CGCCACTGGC AGCAGCCACT GGTAACAGGA TTAGCAGAGC GAGGTATGTA

GGCGGTGCTA CAGAGTTCTT GAAGTGGTGG CCTAACTACG GCTACACTAG

AAGAACAGTA TTTGGTATCT GCGCTCTGCT GAAGCCAGTT ACCTTCGGAA

AAAGAGTTGG TAGCTCTTGA TCCGGCAAAC AAACCACCGC TGGTAGCGGT

GGTTTTTTTG TTTGCAAGCA GCAGATTACG CGCAGAAAAA AAGGATCTCA

AGAAGATCCT TTGATCTTTT CTACGGGGTC TGACGCTCAG TGGAACGAAA

ACTCACGTTA AGGGATTTTG GTCATGAGAT TATCAAAAAG GATCTTCACC

TAGATCCTTT TAAATTAAAA ATGAAGTTTT AAATCAATCT AAAGTATATA

TGAGTAAACT TGGTCTGACA GTTACCAATG CTTAATCAGT GAGGCACCTA

TCTCAGCGAT CTGTCTATTT CGTTCATCCA TAGTTGCCTG ACTCCCCGTC

GTGTAGATAA CTACGATACG GGAGGGCTTA CCATCTGGCC CCAGTGCTGC

AATGATACCG CGAGACCCAC GCTCACCGGC TCCAGATTTA TCAGCAATAA

ACCAGCCAGC CGGAAGGGCC GAGCGCAGAA GTGGTCCTGC AACTTTATCC

GCCTCCATCC AGTCTATTAA TTGTTGCCGG GAAGCTAGAG TAAGTAGTTC

GCCAGTTAAT AGTTTGCGCA ACGTTGTTGC CATTGCTACA GGCATCGTGG

TGTCACGCTC GTCGTTTGGT ATGGCTTCAT TCAGCTCCGG TTCCCAACGA

TCAAGGCGAG TTACATGATC CCCCATGTTG TGCAAAAAAG CGGTTAGCTC

CTTCGGTCCT CCGATCGTTG TCAGAAGTAA GTTGGCCGCA GTGTTATCAC

TCATGGTTAT GGCAGCACTG CATAATTCTC TTACTGTCAT GCCATCCGTA

AGATGCTTTT CTGTGACTGG TGAGTACTCA ACCAAGTCAT TCTGAGAATA

GTGTATGCGG CGACCGAGTT GCTCTTGCCC GGCGTCAATA CGGGATAATA

CCGCGCCACA TAGCAGAACT TTAAAAGTGC TCATCATTGG AAAACGTTCT

TCGGGGCGAA AACTCTCAAG GATCTTACCG CTGTTGAGAT CCAGTTCGAT

GTAACCCACT CGTGCACCCA ACTGATCTTC AGCATCTTTT ACTTTCACCA

GCGTTTCTGG GTGAGCAAAA ACAGGAAGGC AAAATGCCGC AAAAAAGGGA

ATAAGGGCGA CACGGAAATG TTGAATACTC ATACTCTTCC TTTTTCAATA

TTATTGAAGC ATTTATCAGG GTTATTGTCT CATGAGCGGA TACATATTTG

AATGTATTTA GAAAAATAAA CAAATAGGGG TTCCGCGCAC ATTTCCCCGA

AAAGTGCCAC CTGACGTCGA CGGATCGGGA GATCTCCCGA TCCCCTATGG

TGCACTCTCA GTACAATCTG CTCTGATGCC GCATAGTTAA GCCAGTATCT

GCTCCCTGCT TGTGTGTTGG AGGTCGCTGA GTAGTGCGCG AGCAAAATTT

AAGCTACAAC AAGGCAAGGC TTGACCGAC

SEQ ID NO：43

IgG4表达载体

TAATACGACT CACTATAGGG AGACCCAAGC TGGCTAGCGC CACCATGAAA

CACCTGTGGT TCTTCCTCCT GCTGGTGGCA GCTCCCAGAT GGGTCCTGTC

CCAGGTGCAA TTGCAACAGT CTGGTCCGGG CCTGGTGAAA CCGAGCCAAA

CCCTGAGCCT GACCTGTGCG ATTTCCGGAG ATAGCGTGAG CGATAATTCT

GCTGCTTGGT CTTGGATTCG CCAGTCTCCT GGGCGTGGCC TCGAGTGGCT

GGGCCTTATC TATCTTCGTA GCAAGTGGGA TAACGATTAT GCGGTGAGCG

TGAAAAGCCG GATTACCATC AACCCGGATA CTTCGAAAAA CCAGTTTAGC

CTGCAACTGA ACAGCGTGAC CCCGGAAGAT ACGGCCGTGT ATTATTGCGC

GCGTACTGGT CGTGCTGATG AGTTTGATGT TTGGGGCCAA GGCACCCTGG

TGACGGTTAG CTCAGCTTCC ACCAAGGGAC CATCCGTCTT CCCCCTGGCG

CCCTGCTCCA GGAGCACCTC CGAGAGCACA GCCGCCCTGG GCTGCCTGGT

CAAGGACTAC TTCCCCGAAC CGGTGACGGT GTCGTGGAAC TCAGGCGCCC

TGACCAGCGG CGTGCACACC TTCCCGGCTG TCCTACAGTC CTCAGGACTC

TACTCCCTCA GCAGCGTGGT GACCGTGCCC TCCAGCAGCT TGGGCACGAA

GACCTACACC TGCAACGTAG ATCACAAGCC CAGCAACACC AAGGTGGACA

AGAGAGTTGA GTCCAAATAT GGTCCCCCAT GCCCATCATG CCCAGCACCT

GAGTTCCTGG GGGGACCATC AGTCTTCCTG TTCCCCCCAA AACCCAAGGA

CACTCTCATG ATCTCCCGGA CCCCTGAGGT CACGTGCGTG GTGGTGGACG

TGAGCCAGGA AGACCCCGAG GTCCAGTTCA ACTGGTACGT GGATGGCGTG

GAGGTGCATA ATGCCAAGAC AAAGCCGCGG GAGGAGCAGT TCAACAGCAC

GTACCGTGTG GTCAGCGTCC TCACCGTCCT GCACCAGGAC TGGCTGAACG

GCAAGGAGTA CAAGTGCAAG GTCTCCAACA AAGGCCTCCC GTCCTCCATC

GAGAAAACCA TCTCCAAAGC CAAAGGGCAG CCCCGAGAGC CACAGGTGTA

CACCCTGCCC CCATCCCAGG AGGAGATGAC CAAGAACCAG GTCAGCCTGA

CCTGCCTGGT CAAAGGCTTC TACCCCAGCG ACATCGCCGT GGAGTGGGAG

AGCAATGGGC AGCCGGAGAA CAACTACAAG ACCACGCCTC CCGTGCTGGA

CTCCGACGGC TCCTTCTTCC TCTACAGCAG GCTAACCGTG GACAAGAGCA

GGTGGCAGGA GGGGAATGTC TTCTCATGCT CCGTGATGCA TGAGGCTCTG

CACAACCACT ACACACAGAA GAGCCTCTCC CTGTCTCTGG GTAAATGAGG

GCCCGTTTAA ACGGGTGGCA TCCCTGTGAC CCCTCCCCAG TGCCTCTCCT

GGCCCTGGAA GTTGCCACTC CAGTGCCCAC CAGCCTTGTC CTAATAAAAT

TAAGTTGCAT CATTTTGTCT GACTAGGTGT CCTTCTATAA TATTATGGGG

TGGAGGGGGG TGGTATGGAG CAAGGGGCAA GTTGGGAAGA CAACCTGTAG

GGCCTGCGGG GTCTATTGGG AACCAAGCTG GAGTGCAGTG GCACAATCTT

GGCTCACTGC AATCTCCGCC TCCTGGGTTC AAGCGATTCT CCTGCCTCAG

CCTCCCGAGT TGTTGGGATT CCAGGCATGC ATGACCAGGC TCACCTAATT

TTTGTTTTTT TGGTAGAGAC GGGGTTTCAC CATATTGGCC AGGCTGGTCT

CCAACTCCTA ATCTCAGGTG ATCTACCCAC CTTGGCCTCC CAAATTGCTG

GGATTACAGG CGTGAACCAC TGCTCCCTTC CCTGTCCTTC TGATTTTAAA

ATAACTATAC CAGCAGGAGG ACGTCCAGAC ACAGCATAGG CTACCTGGCC

ATGCCCAACC GGTGGGACAT TTGAGTTGCT TGCTTGGCAC TGTCCTCTCA

TGCGTTGGGT CCACTCAGTA GATGCCTGTT GAATTGGGTA CGCGGCATCG

ATTCCACGCG CCCTGTAGCG GCGCATTAAG CGCGGCGGGT GTGGTGGTTA

CGCGCAGCGT GACCGCTACA CTTGCCAGCG CCCTAGCGCC CGCTCCTTTC

GCTTTCTTCC CTTCCTTTCT CGCCACGTTC GCCGGCTTTC CCCGTCAAGC

TCTAAATCGG GGGCTCCCTT TAGGGTTCCG ATTTAGTGCT TTACGGCACC

TCGACCCCAA AAAACTTGAT TAGGGTGATG GTTCACGTAG TGGGCCATCG

CCCTGATAGA CGGTTTTTCG CCCTTTGACG TTGGAGTCCA CGTTCTTTAA

TAGTGGACTC TTGTTCCAAA CTGGAACAAC ACTCAACCCT ATCTCGGTCT

ATTCTTTTGA TTTATAAGGG ATTTTGCCGA TTTCGGCCTA TTGGTTAAAA

AATGAGCTGA TTTAACAAAA ATTTAACGCG AATTAATTCT GTGGAATGTG

TGTCAGTTAG GGTGTGGAAA GTCCCCAGGC TCCCCAGCAG GCAGAAGTAT

GCAAAGCATG CATCTCAATT AGTCAGCAAC CAGGTGTGGA AAGTCCCCAG

GCTCCCCAGC AGGCAGAAGT ATGCAAAGCA TGCATCTCAA TTAGTCAGCA

ACCATAGTCC CGCCCCTAAC TCCGCCCATC CCGCCCCTAA CTCCGCCCAG

TTCCGCCCAT TCTCCGCCCC ATGGCTGACT AATTTTTTTT ATTTATGCAG

AGGCCGAGGC CGCCTCTGCC TCTGAGCTAT TCCAGAAGTA GTGAGGAGGC

TTTTTTGGAG GCCTAGGCTT TTGCAAAAAG CTCCCGGGAG CTTGTATATC

CATTTTCGGA TCTGATCAAG AGACAGGATG AGGATCGTTT CGCATGATTG

AACAAGATGG ATTGCACGCA GGTTCTCCGG CCGCTTGGGT GGAGAGGCTA

TTCGGCTATG ACTGGGCACA ACAGACAATC GGCTGCTCTG ATGCCGCCGT

GTTCCGGCTG TCAGCGCAGG GGCGCCCGGT TCTTTTTGTC AAGACCGACC

TGTCCGGTGC CCTGAATGAA CTGCAGGACG AGGCAGCGCG GCTATCGTGG

CTGGCCACGA CGGGCGTTCC TTGCGCAGCT GTGCTCGACG TTGTCACTGA

AGCGGGAAGG GACTGGCTGC TATTGGGCGA AGTGCCGGGG CAGGATCTCC

TGTCATCTCA CCTTGCTCCT GCCGAGAAAG TATCCATCAT GGCTGATGCA

ATGCGGCGGC TGCATACGCT TGATCCGGCT ACCTGCCCAT TCGACCACCA

AGCGAAACAT CGCATCGAGC GAGCACGTAC TCGGATGGAA GCCGGTCTTG

TCGATCAGGA TGATCTGGAC GAAGAGCATC AGGGGCTCGC GCCAGCCGAA

CTGTTCGCCA GGCTCAAGGC GCGCATGCCC GACGGCGAGG ATCTCGTCGT

GACCCATGGC GATGCCTGCT TGCCGAATAT CATGGTGGAA AATGGCCGCT

TTTCTGGATT CATCGACTGT GGCCGGCTGG GTGTGGCGGA CCGCTATCAG

GACATAGCGT TGGCTACCCG TGATATTGCT GAAGAGCTTG GCGGCGAATG

GGCTGACCGC TTCCTCGTGC TTTACGGTAT CGCCGCTCCC GATTCGCAGC

GCATCGCCTT CTATCGCCTT CTTGACGAGT TCTTCTGAGC GGGACTCTGG

GGTTCGAAAT GACCGACCAA GCGACGCCCA ACCTGCCATC ACGAGATTTC

GATTCCACCG CCGCCTTCTA TGAAAGGTTG GGCTTCGGAA TCGTTTTCCG

GGACGCCGGC TGGATGATCC TCCAGCGCGG GGATCTCATG CTGGAGTTCT

TCGCCCACCC CAACTTGTTT ATTGCAGCTT ATAATGGTTA CAAATAAAGC

AATAGCATCA CAAATTTCAC AAATAAAGCA TTTTTTTCAC TGCATTCTAG

TTGTGGTTTG TCCAAACTCA TCAATGTATC TTATCATGTC TGTATACCGT

CGACCTCTAG CTAGAGCTTG GCGTAATCAT GGTCATAGCT GTTTCCTGTG

TGAAATTGTT ATCCGCTCAC AATTCCACAC AACATACGAG CCGGAAGCAT

AAAGTGTAAA GCCTGGGGTG CCTAATGAGT GAGCTAACTC ACATTAATTG

CGTTGCGCTC ACTGCCCGCT TTCCAGTCGG GAAACCTGTC GTGCCAGCTG

CATTAATGAA TCGGCCAACG CGCGGGGAGA GGCGGTTTGC GTATTGGGCG

CTCTTCCGCT TCCTCGCTCA CTGACTCGCT GCGCTCGGTC GTTCGGCTGC

GGCGAGCGGT ATCAGCTCAC TCAAAGGCGG TAATACGGTT ATCCACAGAA

TCAGGGGATA ACGCAGGAAA GAACATGTGA GCAAAAGGCC AGCAAAAGGC

CAGGAACCGT AAAAAGGCCG CGTTGCTGGC GTTTTTCCAT AGGCTCCGCC

CCCCTGACGA GCATCACAAA AATCGACGCT CAAGTCAGAG GTGGCGAAAC

CCGACAGGAC TATAAAGATA CCAGGCGTTT CCCCCTGGAA GCTCCCTCGT

GCGCTCTCCT GTTCCGACCC TGCCGCTTAC CGGATACCTG TCCGCCTTTC

TCCCTTCGGG AAGCGTGGCG CTTTCTCATA GCTCACGCTG TAGGTATCTC

AGTTCGGTGT AGGTCGTTCG CTCCAAGCTG GGCTGTGTGC ACGAACCCCC

CGTTCAGCCC GACCGCTGCG CCTTATCCGG TAACTATCGT CTTGAGTCCA

ACCCGGTAAG ACACGACTTA TCGCCACTGG CAGCAGCCAC TGGTAACAGG

ATTAGCAGAG CGAGGTATGT AGGCGGTGCT ACAGAGTTCT TGAAGTGGTG

GCCTAACTAC GGCTACACTA GAAGAACAGT ATTTGGTATC TGCGCTCTGC

TGAAGCCAGT TACCTTCGGA AAAAGAGTTG GTAGCTCTTG ATCCGGCAAA

CAAACCACCG CTGGTAGCGG TGGTTTTTTT GTTTGCAAGC AGCAGATTAC

GCGCAGAAAA AAAGGATCTC AAGAAGATCC TTTGATCTTT TCTACGGGGT

CTGACGCTCA GTGGAACGAA AACTCACGTT AAGGGATTTT GGTCATGAGA

TTATCAAAAA GGATCTTCAC CTAGATCCTT TTAAATTAAA AATGAAGTTT

TAAATCAATC TAAAGTATAT ATGAGTAAAC TTGGTCTGAC AGTTACCAAT

GCTTAATCAG TGAGGCACCT ATCTCAGCGA TCTGTCTATT TCGTTCATCC

ATAGTTGCCT GACTCCCCGT CGTGTAGATA ACTACGATAC GGGAGGGCTT

ACCATCTGGC CCCAGTGCTG CAATGATACC GCGAGACCCA CGCTCACCGG

CTCCAGATTT ATCAGCAATA AACCAGCCAG CCGGAAGGGC CGAGCGCAGA

AGTGGTCCTG CAACTTTATC CGCCTCCATC CAGTCTATTA ATTGTTGCCG

GGAAGCTAGA GTAAGTAGTT CGCCAGTTAA TAGTTTGCGC AACGTTGTTG

CCATTGCTAC AGGCATCGTG GTGTCACGCT CGTCGTTTGG TATGGCTTCA

TTCAGCTCCG GTTCCCAACG ATCAAGGCGA GTTACATGAT CCCCCATGTT

GTGCAAAAAA GCGGTTAGCT CCTTCGGTCC TCCGATCGTT GTCAGAAGTA

AGTTGGCCGC AGTGTTATCA CTCATGGTTA TGGCAGCACT GCATAATTCT

CTTACTGTCA TGCCATCCGT AAGATGCTTT TCTGTGACTG GTGAGTACTC

AACCAAGTCA TTCTGAGAAT AGTGTATGCG GCGACCGAGT TGCTCTTGCC

CGGCGTCAAT ACGGGATAAT ACCGCGCCAC ATAGCAGAAC TTTAAAAGTG

CTCATCATTG GAAAACGTTC TTCGGGGCGA AAACTCTCAA GGATCTTACC

GCTGTTGAGA TCCAGTTCGA TGTAACCCAC TCGTGCACCC AACTGATCTT

CAGCATCTTT TACTTTCACC AGCGTTTCTG GGTGAGCAAA AACAGGAAGG

CAAAATGCCG CAAAAAAGGG AATAAGGGCG ACACGGAAAT GTTGAATACT

CATACTCTTC CTTTTTCAAT ATTATTGAAG CATTTATCAG GGTTATTGTC

TCATGAGCGG ATACATATTT GAATGTATTT AGAAAAATAA ACAAATAGGG

GTTCCGCGCA CATTTCCCCG AAAAGTGCCA CCTGACGTCG ACGGATCGGG

AGATCTCCCG ATCCCCTATG GTGCACTCTC AGTACAATCT GCTCTGATGC

CGCATAGTTA AGCCAGTATC TGCTCCCTGC TTGTGTGTTG GAGGTCGCTG

AGTAGTGCGC GAGCAAAATT TAAGCTACAA CAAGGCAAGG CTTGACCGAC

ATTTGCATGA AGAATCTGCT TAGGGTTAGG CGTTTTGCGC TGCTTCGCGA

TGTACGGGCC AGATATACGC GTTGACATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT

AGTAATCAAT TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC

GTTACATAAC TTACGGTAAA TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC

CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT TCCCATAGTA ACGCCAATAG

GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA AACTGCCCAC

TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTACGCCCC CTATTGACGT

CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT

GGGACTTTCC TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC

ATGGTGATGC GGTTTTGGCA GTACATCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA

CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT TGACGTCAAT GGGAGTTTGT

TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA CAACTCCGCC

CCATTGACGC AAATGGGCGG TAGGCGTGTA CGGTGGGAGG TCTATATAAG

CAGAGCTCTC TGGCTAACTA GAGAACCCAC TGCTTACTGG CTTATCGAAA

T

SEQ ID NO：44

IgGλ链表达载体

TAATACGACT CACTATAGGG AGACCCAAGC TGGCTAGCGC CACCATGGCC

TGGGCTCTGC TGCTCCTCAC CCTCCTCACT CAGGGCACAG GATCCTGGGC

TGATATCGTG CTGACCCAGC CGCCTTCAGT GAGTGGCGCA CCAGGTCAGC

GTGTGACCAT CTCGTGTAGC GGCAGCAGCA GCAACATTGG TAATAATTAT

GTGTCTTGGT ACCAGCAGTT GCCCGGGACG GCGCCGAAAC TTCTGATTTC

TCGTAATTCT AAGCGTCCCT CAGGCGTGCC GGATCGTTTT AGCGGATCCA

AAAGCGGCAC CAGCGCGAGC CTTGCGATTA CGGGCCTGCA AAGCGAAGAC

GAAGCGGATT ATTATTGCTC TACTTATGAT ACTTTTTCTA TTGTGTTTGG

CGGCGGCACG AAGTTAACCG TCCTAGGTCA GCCCAAGGCT GCCCCCTCGG

TCACTCTGTT CCCGCCCTCC TCTGAGGAGC TTCAAGCCAA CAAGGCCACA

CTGGTGTGTC TCATAAGTGA CTTCTACCCG GGAGCCGTGA CAGTGGCCTG

GAAGGCAGAT AGCAGCCCCG TCAAGGCGGG AGTGGAGACC ACCACACCCT

CCAAACAAAG CAACAACAAG TACGCGGCCA GCAGCTATCT GAGCCTGACG

CCTGAGCAGT GGAAGTCCCA CAGAAGCTAC AGCTGCCAGG TCACGCATGA

AGGGAGCACC GTGGAGAAGA CAGTGGCCCC TACAGAATGT TCATAGGGGC

CCGTTTAAAC GGGTGGCATC CCTGTGACCC CTCCCCAGTG CCTCTCCTGG

CCCTGGAAGT TGCCACTCCA GTGCCCACCA GCCTTGTCCT AATAAAATTA

AGTTGCATCA TTTTGTCTGA CTAGGTGTCC TTCTATAATA TTATGGGGTG

GAGGGGGGTG GTATGGAGCA AGGGGCAAGT TGGGAAGACA ACCTGTAGGG

CCTGCGGGGT CTATTGGGAA CCAAGCTGGA GTGCAGTGGC ACAATCTTGG

CTCACTGCAA TCTCCGCCTC CTGGGTTCAA GCGATTCTCC TGCCTCAGCC

TCCCGAGTTG TTGGGATTCC AGGCATGCAT GACCAGGCTC ACCTAATTTT

TGTTTTTTTG GTAGAGACGG GGTTTCACCA TATTGGCCAG GCTGGTCTCC

AACTCCTAAT CTCAGGTGAT CTACCCACCT TGGCCTCCCA AATTGCTGGG

ATTACAGGCG TGAACCACTG CTCCCTTCCC TGTCCTTCTG ATTTTAAAAT

AACTATACCA GCAGGAGGAC GTCCAGACAC AGCATAGGCT ACCTGGCCAT

GCCCAACCGG TGGGACATTT GAGTTGCTTG CTTGGCACTG TCCTCTCATG

CGTTGGGTCC ACTCAGTAGA TGCCTGTTGA ATTGGGTACG CGGCATCGAT

TCCACGCGCC CTGTAGCGGC GCATTAAGCG CGGCGGGTGT GGTGGTTACG

CGCAGCGTGA CCGCTACACT TGCCAGCGCC CTAGCGCCCG CTCCTTTCGC

TTTCTTCCCT TCCTTTCTCG CCACGTTCGC CGGCTTTCCC CGTCAAGCTC

TAAATCGGGG GCTCCCTTTA GGGTTCCGAT TTAGTGCTTT ACGGCACCTC

GACCCCAAAA AACTTGATTA GGGTGATGGT TCACGTAGTG GGCCATCGCC

CTGATAGACG GTTTTTCGCC CTTTGACGTT GGAGTCCACG TTCTTTAATA

GTGGACTCTT GTTCCAAACT GGAACAACAC TCAACCCTAT CTCGGTCTAT

TCTTTTGATT TATAAGGGAT TTTGGGGATT TCGGCCTATT GGTTAAAAAA

TGAGCTGATT TAACAAAAAT TTAACGCGAA TTAATTCTGT GGAATGTGTG

TCAGTTAGGG TGTGGAAAGT CCCCAGGCTC CCCAGGCAGG CAGAAGTATG

CAAAGCATGC ATCTCAATTA GTCAGCAACC AGGTGTGGAA AGTCCCCAGG

CTCCCCAGCA GGCAGAAGTA TGCAAAGCAT GCATCTCAAT TAGTCAGCAA

CCATAGTCCC GCCCCTAACT CCGCCCATCC CGCCCCTAAC TCCGCCCAGT

TCCGCCCATT CTCCGCCCCA TGGCTGACTA ATTTTTTTTA TTTATGCAGA

GGCCGAGGCC GCCTCTGCCT CTGAGCTATT CCAGAAGTAG TGAGGAGGCT

TTTTTGGAGG CCTAGGCTTT TGCAAAAAGC TCCCGGGAGC TTGTATATCC

ATTTTCGGAT CTGATCAGCA CGTGTTGACA ATTAATCATC GGCATAGTAT

ATCGGCATAG TATAATACGA CAAGGTGAGG AACTAAACCA TGGCCAAGTT

GACCAGTGCC GTTCCGGTGC TCACCGCGCG CGACGTCGCC GGAGCGGTCG

AGTTCTGGAC CGACCGGCTC GGGTTCTCCC GGGACTTCGT GGAGGACGAC

TTCGCCGGTG TGGTCCGGGA CGACGTGACC CTGTTCATCA GCGCGGTCCA

GGACCAGGTG GTGCCGGACA ACACCCTGGC CTGGGTGTGG GTGCGCGGCC

TGGACGAGCT GTACGCCGAG TGGTCGGAGG TCGTGTCCAC GAACTTCCGG

GACGCCTCCG GGCCGGCCAT GACCGAGATC GGCGAGCAGC CGTGGGGGCG

GGAGTTCGCC CTGCGCGACC CGGCCGGCAA CTGCGTGCAC TTCGTGGCCG

AGGAGCAGGA CTGACACGTG CTACGAGATT TCGATTCCAC CGCCGCCTTC

TATGAAAGGT TGGGCTTCGG AATCGTTTTC CGGGACGCCG GCTGGATGAT

CCTCCAGCGC GGGGATCTCA TGCTGGAGTT CTTCGCCCAC CCCAACTTGT

TTATTGCAGC TTATAATGGT TACAAATAAA GCAATAGCAT CACAAATTTC

ACAAATAAAG CATTTTTTTC ACTGCATTCT AGTTGTGGTT TGTCCAAACT

CATCAATGTA TCTTATCATG TCTGTATACC GTCGACCTCT AGCTAGAGCT

TGGCGTAATC ATGGTCATAG CTGTTTCCTG TGTGAAATTG TTATCCGCTC

ACAATTCCAC ACAACATACG AGCCGGAAGC ATAAAGTGTA AAGCCTGGGG

TGCCTAATGA GTGAGCTAAC TCACATTAAT TGCGTTGCGC TCACTGCCCG

CTTTCCAGTC GGGAAACCTG TCGTGCCAGC TGCATTAATG AATCGGCCAA

CGCGCGGGGA GAGGCGGTTT GCGTATTGGG CGCTCTTCCG CTTCCTCGCT

CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT GCGGCGAGCG GTATCAGCTC

ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA TAACGCAGGA

AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC

CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA

AAAATCGACG CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA

TACCAGGCGT TTCCCCCTGG AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC

CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG

CGCTTTCTCA ATGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT GTAGGTCGTT

CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG

CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT

TATCGCCACT GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT

GTAGGCGGTG CTACAGAGTT CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC

TAGAAGGACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT GCTGAAGCCA GTTACCTTCG

GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC CGCTGGTAGC

GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC

TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG

AAAACTCACG TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC

ACCTAGATCC TTTTAAATTA AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT

ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTACCA ATGCTTAATC AGTGAGGCAC

CTATCTCAGC GATCTGTCTA TTTCGTTCAT CCATAGTTGC CTGACTCCCC

GTCGTGTAGA TAACTACGAT ACGGGAGGGC TTACCATCTG GCCCCAGTGC

TGCAATGATA CCGCGAGACC CACGCTCACC GGCTCCAGAT TTATCAGCAA

TAAACCAGCC AGCCGGAAGG GCCGAGCGCA GAAGTGGTCC TGCAACTTTA

TCCGCCTCCA TCCAGTCTAT TAATTGTTGC CGGGAAGCTA GAGTAAGTAG

TTCGCCAGTT AATAGTTTGC GCAACGTTGT TGCCATTGCT ACAGGCATCG

TGGTGTCACG CTCGTCGTTT GGTATGGCTT CATTCAGCTC CGGTTCCCAA

CGATCAAGGC GAGTTACATG ATCCCCCATG TTGTGCAAAA AAGCGGTTAG

CTCCTTCGGT CCTCCGATCG TTGTCAGAAG TAAGTTGGCC GCAGTGTTAT

CACTCATGGT TATGGCAGCA CTGCATAATT CTCTTACTGT CATGCCATCC

GTAAGATGCT TTTCTGTGAC TGGTGAGTAC TCAACCAAGT CATTCTGAGA

ATAGTGTATG CGGCGACCGA GTTGCTCTTG CCCGGCGTCA ATACGGGATA

ATACCGCGCC ACATAGCAGA ACTTTAAAAG TGCTCATCAT TGGAAAACGT

TCTTCGGGGC GAAAACTCTC AAGGATCTTA CCGCTGTTGA GATCCAGTTC

GATGTAACCC ACTCGTGCAC CCAACTGATC TTCAGCATCT TTTACTTTCA

CCAGCGTTTC TGGGTGAGCA AAAACAGGAA GGCAAAATGC CGCAAAAAAG

GGAATAAGGG CGACACGGAA ATGTTGAATA CTCATACTCT TCCTTTTTCA

ATATTATTGA AGCATTTATC AGGGTTATTG TCTCATGAGC GGATACATAT

TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG CACATTTCCC

CGAAAAGTGC CACCTGACGT CGACGGATCG GGAGATCTCC CGATCCCCTA

TGGTCGACTC TCAGTACAAT CTGCTCTGAT GCCGCATAGT TAAGCCAGTA

TCTGCTCCCT GCTTGTGTGT TGGAGGTCGC TGAGTAGTGC GCGAGCAAAA

TTTAAGCTAC AACAAGGCAA GGCTTGACCG ACAATTGCAT GAAGAATCTG

CTTAGGGTTA GGCGTTTTGC GCTGCTTCGC GATGTACGGG CCAGATATAC

GCGTTGACAT TGATTATTGA CTAGTTATTA ATAGTAATCA ATTACGGGGT

CATTAGTTCA TAGCCCATAT ATGGAGTTCC GCGTTACATA ACTTACGGTA

AATGGCCCGC CTGGCTGACC GCCCAACGAC CCCCGCCCAT TGACGTCAAT

AATGACGTAT GTTCCCATAG TAACGCCAAT AGGGACTTTC CATTGACGTC

AATGGGTGGA CTATTTACGG TAAACTGCCC ACTTGGCAGT ACATCAAGTG

TATCATATGC CAAGTACGCC CCCTATTGAC GTCAATGACG GTAAATGGCC

CGCCTGGCAT TATGCCCAGT ACATGACCTT ATGGGACTTT CCTACTTGGC

AGTACATCTA CGTATTAGTC ATCGCTATTA CCATGGTGAT GCGGTTTTGG

CAGTACATCA ATGGGCGTGG ATAGCGGTTT GACTCACGGG GATTTCCAAG

TCTCCACCCC ATTGACGTCA ATGGGAGTTT GTTTTGGCAC CAAAATCAAC

GGGACTTTCC AAAATGTCGT AACAACTCCG CCCCATTGAC GCAAATGGGC

GGTAGGCGTG TACGGTGGGA GGTCTATATA AGCAGAGCTC TCTGGCTAAC

TAGAGAACCC ACTGCTTACT GGCTTATCGA AAT

SEQ ID NO：45

IgGκ链表达载体

TAATACGACT CACTATAGGG AGACCCAAGC TGGCTAGCGC CACCATGGTG

TTGCAGACCC AGGTCTTCAT TTCTCTGTTG CTCTGGATCT CTGGTGCCTA

CGGGGATATC CAGATGACCC AGAGCCCGTC TAGCCTGAGC GCGAGCGTGG

GTGATCGTGT GACCATTACC TGCAGAGCGA GCCAGTCTAT TTCTAATTGG

CTGAATTGGT ACCAGCAGAA ACCAGGTAAA GCACCGAAAC TATTAATTTA

TAAGGCTTCT ACTTTGCAAA GCGGGGTCCC GTCCCGTTTT AGCGGCTCTG

GATCCGGCAC TGATTTTACC CTGACCATTA GCAGCCTGCA ACCTGAAGAC

TTTGCGACTT ATTATTGCCA GCAGTATGGT AATATTCCTA TTACCTTTGG

CCAGGGTACG AAAGTTGAAA TTAAACGTAC GGTGGCTGCA CCATCTGTCT

TCATCTTCCC GCCATCTGAT GAGCAGTTGA AATCTGGAAC TGCCTCTGTT

GTGTGCCTGC TGAATAACTT CTATCCCAGA GAGGCCAAAG TACAGTGGAA

GGTGGATAAC GCCCTCCAAT CGGGTAACTC CCAGGAGAGT GTCACAGAGC

AGGACAGCAA GGACAGCACC TACAGCCTCA GCAGCACCCT GACGCTGAGC

AAAGCAGACT ACGAGAAACA CAAAGTCTAC GCCTGCGAAG TCACCCATCA

GGGCCTGAGC TCGCCCGTCA CAAAGAGCTT CAACAGGGGA GAGTGTTAGG

GGCCCGTTTA AACGGGTGGC ATCCCTGTGA CCCCTCCCCA GTGCCTCTCC

TGGCCCTGGA AGTTGCCACT CCAGTGCCCA CCAGCCTTGT CCTAATAAAA

TTAAGTTGCA TCATTTTGTC TGACTAGGTG TCCTTCTATA ATATTATGGG

GTGGAGGGGG GTGGTATGGA GCAAGGGGCA AGTTGGGAAG ACAACCTGTA

GGGCCTGCGG GGTCTATTGG GAACCAAGCT GGAGTGCAGT GGCACAATCT

TGGCTCACTG CAATCTCCGC CTCCTGGGTT CAAGCGATTC TCCTGCCTCA

GCCTCCCGAG TTGTTGGGAT TCCAGGCATG CATGACCAGG CTCACCTAAT

TTTTGTTTTT TTGGTAGAGA CGGGGTTTCA CCATATTGGC CAGGCTGGTC

TCCAACTCCT AATCTCAGGT GATCTACCCA CCTTGGCCTC CCAAATTGCT

GGGATTACAG GCGTGAACCA CTGCTCCCTT CCCTGTCCTT CTGATTTTAA

AATAACTATA CCAGCAGGAG GACGTCCAGA CACAGCATAG GCTACCTGGC

CATGCCCAAC CGGTGGGACA TTTGAGTTGC TTGCTTGGCA CTGTCCTCTC

ATGCGTTGGG TCCACTCAGT AGATGCCTGT TGAATTGGGT ACGCGGCATC

GATTCCACGC GCCCTGTAGC GGCGCATTAA GCGCGGCGGG TGTGGTGGTT

ACGCGCAGCG TGACCGCTAC ACTTGCCAGC GCCCTAGCGC CCGCTCCTTT

CGCTTTCTTC CCTTCCTTTC TCGCCACGTT CGCCGGCTTT CCCCGTCAAG

CTCTAAATCG GGGGCTCCCT TTAGGGTTCC GATTTAGTGC TTTACGGCAC

CTCGACCCCA AAAAACTTGA TTAGGGTGAT GGTTCACGTA GTGGGCCATC

GCCCTGATAG ACGGTTTTTC GCCCTTTGAC GTTGGAGTCC ACGTTCTTTA

ATAGTGGACT CTTGTTCCAA ACTGGAACAA CACTCAACCC TATCTCGGTC

TATTCTTTTG ATTTATAAGG GATTTTGGGG ATTTCGGCCT ATTGGTTAAA

AAATGAGCTG ATTTAACAAA AATTTAACGC GAATTAATTC TGTGGAATGT

GTGTCAGTTA GGGTGTGGAA AGTCCCCAGG CTCCCCAGGC AGGCAGAAGT

ATGCAAAGCA TGCATCTCAA TTAGTCAGCA ACCAGGTGTG GAAAGTCCCC

AGGCTCCCCA GCAGGCAGAA GTATGCAAAG CATGCATCTC AATTAGTCAG

CAACCATAGT CCCGCCCCTA ACTCCGCCCA TCCCGCCCCT AACTCCGCCC

AGTTCCGCCC ATTCTCCGCC CCATGGCTGA CTAATTTTTT TTATTTATGC

AGAGGCCGAG GCCGCCTCTG CCTCTGAGCT ATTCCAGAAG TAGTGAGGAG

GCTTTTTTGG AGGCCTAGGC TTTTGCAAAA AGCTCCCGGG AGCTTGTATA

TCCATTTTCG GATCTGATCA GCACGTGTTG ACAATTAATC ATCGGCATAG

TATATCGGCA TAGTATAATA CGACAAGGTG AGGAACTAAA CCATGGCCAA

GTTGACCAGT GCCGTTCCGG TGCTCACCGC GCGCGACGTC GCCGGAGCGG

TCGAGTTCTG GACCGACCGG CTCGGGTTCT CCCGGGACTT CGTGGAGGAC

GACTTCGCCG GTGTGGTCCG GGACGACGTG ACCCTGTTCA TCAGCGCGGT

CCAGGACCAG GTGGTGCCGG ACAACACCCT GGCCTGGGTG TGGGTGCGCG

GCCTGGACGA GCTGTACGCC GAGTGGTCGG AGGTCGTGTC CACGAACTTC

CGGGACGCCT CCGGGCCGGC CATGACCGAG ATCGGCGAGC AGCCGTGGGG

GCGGGAGTTC GCCCTGCGCG ACCCGGCCGG CAACTGCGTG CACTTCGTGG

CCGAGGAGCA GGACTGACAC GTGCTACGAG ATTTCGATTC CACCGCCGCC

TTCTATGAAA GGTTGGGCTT CGGAATCGTT TTCCGGGACG CCGGCTGGAT

GATCCTCCAG CGCGGGGATC TCATGCTGGA GTTCTTCGCC CACCCCAACT

TGTTTATTGC AGCTTATAAT GGTTACAAAT AAAGCAATAG CATCACAAAT

TTCACAAATA AAGCATTTTT TTCACTGCAT TCTAGTTGTG GTTTGTCCAA

ACTCATCAAT GTATCTTATC ATGTCTGTAT ACCGTCGACC TCTAGCTAGA

GCTTGGCGTA ATCATGGTCA TAGCTGTTTC CTGTGTGAAA TTGTTATCCG

CTCACAATTC CACACAACAT ACGAGCCGGA AGCATAAAGT GTAAAGCCTG

GGGTGCCTAA TGAGTGAGCT AACTCACATT AATTGCGTTG CGCTCACTGC

CCGCTTTCCA GTCGGGAAAC CTGTCGTGCC AGCTGCATTA ATGAATCGGC

CAACGCGCGG GGAGAGGCGG TTTGCGTATT GGGCGCTCTT CCGCTTCCTC

GCTCACTGAC TCGCTGCGCT CGGTCGTTCG GCTGCGGCGA GCGGTATCAG

CTCACTCAAA GGCGGTAATA CGGTTATCCA CAGAATCAGG GGATAACGCA

GGAAAGAACA TGTGAGCAAA AGGCCAGCAA AAGGCCAGGA ACCGTAAAAA

GGCCGCGTTG CTGGCGTTTT TCCATAGGCT CCGCCCCCCT GACGAGCATC

ACAAAAATCG ACGCTCAAGT CAGAGGTGGC GAAACCCGAC AGGACTATAA

AGATACCAGG CGTTTCCCCC TGGAAGCTCC CTCGTGCGCT CTCCTGTTCC

GACCCTGCCG CTTACCGGAT ACCTGTCCGC CTTTCTCCCT TCGGGAAGCG

TGGCGCTTTC TCAATGCTCA CGCTGTAGGT ATCTCAGTTC GGTGTAGGTC

GTTCGCTCCA AGCTGGGCTG TGTGCACGAA CCCCCCGTTC AGCCCGACCG

CTGCGCCTTA TCCGGTAACT ATCGTCTTGA GTCCAACCCG GTAAGACACG

ACTTATCGCC ACTGGCAGCA GCCACTGGTA ACAGGATTAG CAGAGCGAGG

TATGTAGGCG GTGCTACAGA GTTCTTGAAG TGGTGGCCTA ACTACGGCTA

CACTAGAAGG ACAGTATTTG GTATCTGCGC TCTGCTGAAG CCAGTTACCT

TCGGAAAAAG AGTTGGTAGC TCTTGATCCG GCAAACAAAC CACCGCTGGT

AGCGGTGGTT TTTTTGTTTG CAAGCAGCAG ATTACGCGCA GAAAAAAAGG

ATCTCAAGAA GATCCTTTGA TCTTTTCTAC GGGGTCTGAC GCTCAGTGGA

ACGAAAACTC ACGTTAAGGG ATTTTGGTCA TGAGATTATC AAAAAGGATC

TTCACCTAGA TCCTTTTAAA TTAAAAATGA AGTTTTAAAT CAATCTAAAG

TATATATGAG TAAACTTGGT CTGACAGTTA CCAATGCTTA ATCAGTGAGG

CACCTATCTC AGCGATCTGT CTATTTCGTT CATCCATAGT TGCCTGACTC

CCCGTCGTGT AGATAACTAC GATACGGGAG GGCTTACCAT CTGGCCCCAG

TGCTGCAATG ATACCGCGAG ACCCACGCTC ACCGGCTCCA GATTTATCAG

CAATAAACCA GCCAGCCGGA AGGGCCGAGC GCAGAAGTGG TCCTGCAACT

TTATCCGCCT CCATCCAGTC TATTAATTGT TGCCGGGAAG CTAGAGTAAG

TAGTTCGCCA GTTAATAGTT TGCGCAACGT TGTTGCCATT GCTACAGGCA

TCGTGGTGTC ACGCTCGTCG TTTGGTATGG CTTCATTCAG CTCCGGTTCC

CAACGATCAA GGCGAGTTAC ATGATCCCCC ATGTTGTGCA AAAAAGCGGT

TAGCTCCTTC GGTCCTCCGA TCGTTGTCAG AAGTAAGTTG GCCGCAGTGT

TATCACTCAT GGTTATGGCA GCACTGCATA ATTCTCTTAC TGTCATGCCA

TCCGTAAGAT GCTTTTCTGT GACTGGTGAG TACTCAACCA AGTCATTCTG

AGAATAGTGT ATGCGGCGAC CGAGTTGCTC TTGCCCGGCG TCAATACGGG

ATAATACCGC GCCACATAGC AGAACTTTAA AAGTGCTCAT CATTGGAAAA

CGTTCTTCGG GGCGAAAACT CTCAAGGATC TTACCGCTGT TGAGATCCAG

TTCGATGTAA CCCACTCGTG CACCCAACTG ATCTTCAGCA TCTTTTACTT

TCACCAGCGT TTCTGGGTGA GCAAAAACAG GAAGGCAAAA TGCCGCAAAA

AAGGGAATAA GGGCGACACG GAAATGTTGA ATACTCATAC TCTTCCTTTT

TCAATATTAT TGAAGCATTT ATCAGGGTTA TTGTCTCATG AGCGGATACA

TATTTGAATG TATTTAGAAA AATAAACAAA TAGGGGTTCC GCGCACATTT

CCCCGAAAAG TGCCACCTGA CGTCGACGGA TCGGGAGATC TCCCGATCCC

CTATGGTCGA CTCTCAGTAC AATCTGCTCT GATGCCGCAT AGTTAAGCCA

GTATCTGCTC CCTGCTTGTG TGTTGGAGGT CGCTGAGTAG TGCGCGAGCA

AAATTTAAGC TACAACAAGG CAAGGCTTGA CCGACAATTG CATGAAGAAT

CTGCTTAGGG TTAGGCGTTT TGCGCTGCTT CGCGATGTAC GGGCCAGATA

TACGCGTTGA CATTGATTAT TGACTAGTTA TTAATAGTAA TCAATTACGG

GGTCATTAGT TCATAGCCCA TATATGGAGT TCCGCGTTAC ATAACTTACG

GTAAATGGCC CGCCTGGCTG ACCGCCCAAC GACCCCCGCC CATTGACGTC

AATAATGACG TATGTTCCCA TAGTAACGCC AATAGGGACT TTCCATTGAC

GTCAATGGGT GGACTATTTA CGGTAAACTG CCCACTTGGC AGTACATCAA

GTGTATCATA TGCCAAGTAC GCCCCCTATT GACGTCAATG ACGGTAAATG

GCCCGCCTGG CATTATGCCC AGTACATGAC CTTATGGGAC TTTCCTACTT

GGCAGTACAT CTACGTATTA GTCATCGCTA TTACCATGGT GATGCGGTTT

TGGCAGTACA TCAATGGGCG TGGATAGCGG TTTGACTCAC GGGGATTTCC

AAGTCTCCAC CCCATTGACG TCAATGGGAG TTTGTTTTGG CACCAAAATC

AACGGGACTT TCCAAAATGT CGTAACAACT CCGCCCCATT GACGCAAATG

GGCGGTAGGC GTGTACGGTG GGAGGTCTAT ATAAGCAGAG CTCTCTGGCT

AACTAGAGAA CCCACTGCTT ACTGGCTTAT CGAAAT

Claims

1.一种抗体，其能以解离常数小于1000nM结合SEQ ID NO：1所示的大鼠LINGO-1、SEQ ID NO：2所示的食蟹猴LINGO-1和SEQ IDNO：3所示的人LINGO-1的成熟胞外结构域（残基34-550），以使得LINGO-1与NgR的结合得到抑制和以100nM浓度至少增加20%的大鼠小脑颗粒细胞每个细胞的平均神经突长度，其中

a.通过FACS饱和确定结合表达LINGO-1的CHO-K1细胞系的结合亲和性；

b．与用不结合大鼠、食蟹猴和人LINGO-1胞外结构域的对照抗体处理的大鼠小脑颗粒细胞的每个细胞的平均神经突长度相比，通过测量在成年大鼠脊髓髓磷脂底物上生长的大鼠小脑颗粒细胞的每个细胞的平均神经突长度，在神经突突起测定中确定平均神经突长度的增加。

2.权利要求1的抗体，其中所述抗体包含至少一个抗原结合位点，所述抗原结合位点在序列中包含可变轻链和重链区，所述可变轻链和重链区为：

i)分别与SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的可变轻链和重链区具有至少50%同源性的序列，或

ii)分别与SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示的可变轻链和重链区具有至少50%同源性的序列。

3.权利要求1或2的抗体，其中所述抗体具有小于100nM的解离常数。

4.权利要求3的抗体，其中所述抗体具有小于10nM的解离常数。

5.权利要求1或2的抗体，其中所述神经突长度的增加是在10nM的浓度获得的。

6.权利要求5的抗体，其中所述神经突长度的增加是在1nM的浓度获得的。

7.权利要求6的抗体，其中所述神经突长度的增加是在0.1nM的浓度获得的。

8.权利要求1-7中任一项所述的抗体，其结合至少一个由SEQ ID NO:46:KIVILLDYMFQD、SEQ ID NO:47:AIRDYSFKRLYR、SEQ ID NO:48:LKVLEISHWPYL、SEQ ID NO:49:NLTAVPYLAVRHLVY、SEQ IDNO:50:YFTCRRARI或SEQ ID NO:51:DVLLPNYFTCRRARI所定义的LINGO-1表位。

9.权利要求1-8中任一项所述的抗体，其是人、嵌合或人源化的单克隆抗体。

10.权利要求1-9中任一项所述的抗体，用作药物。

11.权利要求9的抗体，用于治疗CNS损伤。

12.权利要求1-9中任一项所述的抗体在制备用于治疗CNS损伤的药物中的用途。

13.包含权利要求1到11中任一项的抗体以及至少一种可药用载体或稀释剂的药物组合物。