CN103172643B

CN103172643B - 黄皮咔唑生物碱及其制备方法和其药物组合物与用途

Info

Publication number: CN103172643B
Application number: CN201110441430.3A
Authority: CN
Inventors: 张东明; 陈乃宏; 柳航; 宁娜
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS and PUMC
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS and PUMC
Priority date: 2011-12-26
Filing date: 2011-12-26
Publication date: 2016-03-02
Anticipated expiration: 2031-12-26
Also published as: CN103172643A

Abstract

本发明公开了黄皮咔唑生物碱及其制备方法和其药物组合物与用途。具体而言，本发明公开了从黄皮Clausena？lansium(lour.)skeels中发现的十个新咔唑生物碱(1-10)，这类新咔唑生物碱的通过植物化学的制备方法，含有新咔唑生物碱的药物组合物，及它们在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用；特别是脑卒中或痴呆。

Description

黄皮咔唑生物碱及其制备方法和其药物组合物与用途

技术领域

本发明公开了黄皮Clausenalansium(lour.)skeels有效成分十个新咔唑生物碱(1-10)的制备方法，含有新咔唑生物碱的药物组合物，及它们在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用。

背景技术

黄皮Clausenalansium(lour.)skeels是芸香科Rutaceae黄皮属Clausena植物，主产于我国南部，在福建、广东、台湾、广西、云南等地均有大量种植，以其根、枝叶、果及种子入药。黄皮枝叶性味属辛凉(陆川本草)，常用于治疗风湿痹痛、黄疸、热毒疥癣等疾病。

随着我国老龄化社会进程的加快，老年人口数量不断增加。据统计，截止至2020年，我国老龄化水平将达到17.17％，各种老年病患者人数也呈上升趋势。在发达国家，脑卒中和老年痴呆症作为最常见的神经退行性疾病，分别成为了仅次于心血管病、癌症的第三、四大死亡杀手。而我国神经退行性疾病患者的人数，已位居世界各国之首。目前尚未有防治神经退行性疾病的特效药物可供选择，因此开发出有靶向性，副作用小，能有效控制并逆转病情的药物势在必行。我国中药资源丰富，毒副作用小，从中药中寻找新型神经退行性疾病治疗药物是新药开发研究的重要途径之一。但是中药成分复杂，有效成分不明确，疗效不稳定，作用机理不清楚，严重影响了临床上的使用以及中药进入国际主流市场，因此从传统药物的天然资源中寻找构型、机制明确的特效神经退行性疾病治疗药物是医药科研工作者今后相当长时间内的迫切任务。

发明内容

发明人的研究首次发现黄皮茎提取物具有治疗神经退行性疾病的作用，从有效部位中分离得到十个新咔唑生物碱，药效学评价显示它们具有很好的治疗神经退行性疾病的作用。

本发明解决的技术问题在于提供了十个新咔唑生物碱(1-10)；

本发明解决的另一技术问题在于提供了十个新咔唑生物碱(1-10)的制备方法；

本发明解决的又一技术问题在于提供一种药物组合物，其含有十个新咔唑生物碱(1-10)中的至少一种；

本发明解决的再一技术问题在于提供一种药物组合物，其含有十个新咔唑生物碱(1-10)作为治疗神经退行性疾病的应用。

具体讲，本发明涉及的化合物1-10的结构式如下所示

本发明提供的十个新咔唑生物碱(1-10)的制备方法，具体如下：

黄皮茎6.4Kg，95％乙醇回流2次，每次2小时，60℃减压浓缩得到浸膏609g。此浸膏加水2L混悬，分别用等体积的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每部分萃取3次，萃取液减压浓缩，得到氯仿萃取物195g，乙酸乙酯萃取物7.3g，正丁醇萃取物56.9g。其中氯仿萃取物经过多次柱层析(正反相硅胶、凝胶)，最后用HPLC纯化，得到十个新咔唑生物碱(1-10)。

本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。

为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-150mg/Kg体重，优选为0.1-100mg/Kg体重，更优选为1-60mg/Kg体重，最优选为2-30mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。

本发明对黄皮新咔唑生物碱进行了神经保护相关的药理实验。氧化应激是导致神经元凋亡丢失的重要原因，是神经退行性疾病的共性特征。引起氧化应激的原因有很多种，如脑缺血，神经炎症，兴奋性递质释放重摄取机制障碍，重金属暴露，神经毒性剂暴露等，表现为细胞内自由基增加，引起脂质过氧化，线粒体功能障碍继而激活凋亡通路等。谷氨酸，硝普钠虽然引发神经元凋亡丢失的机制不一，但都是近年来许多国内外学者倡导的神经元损伤模型的诱发剂。研究认为，脑内兴奋性递质谷氨酸过量通常引起神经元膜上NMDA受体过度激活，从而导致神经元发生氧化应激并丢失，而硝普钠是一种NO的供体，NO可传递氧自由基透过线粒体膜，使线粒体功能失调继而发生凋亡，其发生机制，病理生理改变与临床老年痴呆患者脑内表现具有相似性。应用谷氨酸，硝普钠制作神经元损伤模型条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，因此在本研究中，采用谷氨酸过载，硝普钠(SNP)暴露制作神经元损伤模型。

发明人发现本发明提供的一类新的咔唑生物碱在体外谷氨酸，硝普钠诱发的大鼠大脑皮层神经元死亡的试验中均显示出优良的神经保护作用。

阳性对照药物为依达拉奉(edaravone)，依达拉奉是以自由基清除为主要作用机制的新型抗老年痴呆药物，能有效抑制因脑缺血导致的脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化应激损伤。

对硝普钠诱发大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用体外研究中，将本发明化合物与硝普钠(350μM)用神经元培养基稀释，和大鼠大脑皮层神经元温孵24小时后，MTT法测定细胞存活率，同时进行正常对照组和阳性对照组试验。实验结果表明，正常对照组加入硝普钠后570nm处吸光度值(OD₅₇₀)明显降低，阳性对照组和本发明化合物OD₅₇₀明显回升，与依达拉奉(edaravone)的细胞存活率相当，部分新化合物的细胞存活率比依达拉奉高。

对谷氨酸诱发大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用体外研究中，将本发明化合物与谷氨酸(20mM)用完全培养基稀释，和大鼠大脑皮层神经元温孵24小时后，MTT法测定细胞存活率，同时进行正常对照组和阳性对照组试验。实验结果表明，正常对照组加入谷氨酸后570nm处吸光度值(OD₅₇₀)明显降低，阳性对照组和本发明化合物OD₅₇₀明显回升，与依达拉奉(edaravone)的细胞存活率相当，部分新化合物的细胞存活率比依达拉奉高。

因此本发明的化合物在可用于制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物。

优选的神经退行性疾病选自脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。

优选的痴呆选自早老性痴呆、血管性痴呆。

附图说明

图1黄皮茎的提取流程图

图2黄皮茎氯仿萃取物的分离流程图

具体实施方式

下面的实施例及药理活性实验进一步说明本发明，但并不意味着对本发明的任何限制。

提取分离实验(见附图1和图2)

黄皮茎6.4Kg，95％乙醇回流2次，每次2小时，60℃减压浓缩得到浸膏640g。此浸膏加水2L混悬，分别用等体积的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每部分萃取3次，萃取液减压浓缩，得到氯仿萃取物195g，乙酸乙酯萃取物6.4g，正丁醇萃取物61.3g。氯仿层萃取物195g经硅胶柱色谱石油醚-丙酮(3∶1)为洗脱剂，洗脱7个柱体积后(0.5个柱体积为一份，共14份)，干法柱色谱得Fr.1～Fr.7。洗脱下来的部分7-10(7.301g)合并后，硅胶柱色谱石油醚-丙酮(6∶1-4∶1)梯度洗脱23份，极性稍大的后段Fr.13-19(3.122g)合并通过中压柱色谱法(50-90％的甲醇梯度洗脱4小时)分为164个流份(70ml为1份)，按体积约500ml合并，通过制备液相从Fr.90-99得到化合物7(10mg)、8(7mg)，从Fr.113-117得到化合物9(5mg)。洗脱下来的部分11-14(6.483g)合并后，硅胶柱色谱石油醚-丙酮(5∶1-3∶1)梯度洗脱15份，其中的Fr.3-9(2.125g)合并通过中压柱色谱法(45-80％的甲醇梯度洗脱4小时)分为144个流份(70ml为1份)，按体积约500ml合并，通过制备液相从Fr.122-128得到化合物6(13mg)，从Fr.132-136得到化合物1(20mg)。干法柱色谱中得到的Fr.2和Fr.3合并(39.9g)，氯仿-甲醇(20∶1-4∶1)梯度洗脱得到28份，其中的Fr.14-19(5.133g)合并后通过中压柱色谱法(25-60％的甲醇梯度洗脱4小时)分为153个流份(70ml为1份)，按体积约500ml合并，通过制备液相从Fr.76-81得到化合物10(13mg)，从Fr.81-84得到化合物3(3mg)，从Fr.85-88得到化合物4(2mg)，从Fr.95-99得到化合物2(5mg)和化合物5(1mg)。

化合物1ClaulansineA的理化、波谱数据如下：

白色粉末，EIMSm/z309[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：7.60(1H，s，H-4)，8.01(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.13(1H，t，J＝7.5Hz，H-6)，7.36(1H，dt，J＝8.0，0.5Hz，H-7)，7.47(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，3.21(1H，dd，J＝18.0，5.5Hz，H-1′)，3.01(1H，d，J＝17.5Hz，H-1′)，4.49(1H，d，J＝5.0Hz，H-2′)，1.26(3H，s，4′-CH₃)，1.15(3H，s，5′-CH₃)，11.29(1H，brs，N-H)，3.91(3H，s，1-OCH₃)，6.09(1H，s，3-OCHO-)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：142.4(C-1)，120.1(C-2)，130.1(C-3)，111.7(C-4)，122.8(C-4a)，119.8(C-5)，122.1(C-5a)，118.7(C-6)，125.3(C-7)，111.2(C-8)，139.8(C-8a)，132.3(C-9a)，25.5(C-1′)，79.2(C-2′)，79.8(C-3′)，29.4(C-4′)，23.6(C-5′)，100.3(3-OCHO-)。

化合物2ClaulansineB的理化、波谱数据如下：

白色粉末，EIMSm/z325[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：7.62(1H，s，H-4)，8.04(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.14(1H，t，J＝7.5Hz，H-6)，7.38(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.50(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，4.77(1H，d，J＝7.5Hz，H-1′)，4.30(1H，s，H-2′)，1.27(3H，s，4′-CH₃)，1.04(3H，s，5′-CH₃)，11.38(1H，brs，N-H)，4.00(3H，s，1-OCH₃)，6.11(1H，s，3-OCHO-)，5.34(1H，d，J＝8.0Hz，1′-OH)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：144.3(C-1)，123.2(C-2)，129.1(C-3)，111.2(C-4)，122.7(C-4a)，120.1(C-5)，123.6(C-5a)，118.8(C-6)，125.8(C-7)，111.4(C-8)，140.1(C-8a)，132.6(C-9a)，61.2(C-1′)，86.0(C-2′)，76.9(C-3′)，29.7(C-4′)，23.2(C-5′)，100.3(3-OCHO-)。

化合物3ClaulansineC的理化、波谱数据如下：

白色粉末，EIMSm/z341[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.55(1H，s，H-4)，8.23(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.22(1H，t，J＝8.0Hz，H-6)，7.46(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.56(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，5.38(1H，d，J＝6.0Hz，H-1′)，4.44(1H，s，H-2′)，0.74(3H，s，4′-CH₃)，1.14(3H，s，5′-CH₃)，11.84(1H，brs，N-H)，4.04(3H，s，1-OCH₃)，5.71(1H，d，J＝6.0Hz，1′-OH)，4.79(1H，s，3′-OH)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：141.1(C-1)，129.2(C-2)，116.3(C-3)，118.0(C-4)，124.1(C-4a)，120.8(C-5)，122.7(C-5a)，119.8(C-6)，126.6(C-7)，111.6(C-8)，140.5(C-8a)，135.8(C-9a)，57.0(C-1′)，90.4(C-2′)，70.3(C-3′)，25.6(C-4′)，28.0(C-5′)，164.0(3-COO-)。

化合物4ClaulansineD的理化、波谱数据如下：

白色粉末，EIMSm/z341[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.37(1H，s，H-4)，8.27(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.22(1H，t，J＝8.0Hz，H-6)，7.47(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.55(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，6.16(1H，s，H-1′)，3.90(1H，d，J＝7.5Hz，H-2′)，1.22(3H，s，4′-CH₃)，1.26(3H，s，5′-CH₃)，11.79(1H，brs，N-H)，4.06(3H，s，1-OCH₃)，4.79(1H，d，J＝7.5Hz，2′-OH)，4.78(1H，s，3′-OH)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：138.6(C-1)，135.1(C-2)，118.8(C-3)，112.7(C-4)，122.6(C-4a)，121.0(C-5)，126.3(C-5a)，119.6(C-6)，126.7(C-7)，111.7(C-8)，140.8(C-8a)，136.3(C-9a)，77.6(C-1′)，75.9(C-2′)，71.6(C-3′)，28.5(C-4′)，24.7(C-5′)，170.8(3-COO-)。

化合物5ClaulansineE的理化、波谱数据如下：

白色粉末，EIMSm/z267[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.19(1H，s，H-4)，8.23(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.20(1H，t，J＝8.0Hz，H-6)，7.44(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.53(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，5.60(1H，m，H-1′)，3.11(1H，dd，J＝18.5，6.5Hz，H-2′)，2.49(1H，overlappedbysolvent)，11.75(1H，brs，N-H)，4.18(3H，s，1-OCH₃)，5.64(1H，d，J＝7.0Hz，1′-OH)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：141.9(C-1)，140.4(C-2)，129.6(C-3)，110.0(C-4)，125.9(C-4a)，121.0(C-5)，122.9(C-5a)，119.5(C-6)，126.6(C-7)，111.7(C-8)，140.9(C-8a)，137.3(C-9a)，65.2(C-1′)，47.9(C-2′)，202.7(3-CO-)。

化合物6ClaulansineF的理化、波谱数据如下：

黄色针晶。HR-ESIMSm/z330.1119[M+Na](calcdforC₁₉H₁₇NO₃Na330.1106)。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.35(1H，s，H-4)，7.74(1H，d，J＝2.5Hz，H-5)，6.98(1H，dd，J＝8.5，2.5Hz，H-7)，7.35(1H，d，J＝8.5Hz，H-8)，6.93(1H，d，J＝10.0Hz，H-1′)，5.91(1H，d，J＝10.0Hz，H-2′)，1.49(6H，s，CH₃×2-4′、5′)，10.35(1H，s，3-CHO)，11.59(1H，s，N-H)，3.82(3H，s，6-OCH₃)。¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ：104.0(C-1)，153.6(C-2)，117.2(C-3)，119.6(C-4)，117.7(C-4a)，103.5(C-5)，123.8(C-5a)，154.0(C-6)，114.5(C-7)，111.7(C-8)，135.2(C-8a)，141.0(C-9a)，116.9(C-1′)，129.7(C-2′)，77.0(C-3′)，27.1(C-4′)，27.1(C-5′)，55.6(6-OCH₃)，187.8(3-CHO)。

化合物7ClaulansineG的理化、波谱数据如下：

淡黄色针晶。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.23(1H，s，H-4)，8.21(1H，d，J＝7.5Hz，H-5)，7.19(1H，t，J＝8.0Hz，H-6)，7.42(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.52(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，3.85(2H，s，H-1′)，2.01(3H，s，CH₃-4′)，2.39(3H，s，CH₃-5′)，11.66(1H，s，N-H)，4.08(3H，s，1-OCH₃)。¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ：140.6(C-1)，133.5(C-2)，133.2(C-3)，111.4(C-4)，125.0(C-4a)，120.8(C-5)，123.1(C-5a)，119.5(C-6)，126.4(C-7)，111.6(C-8)，140.7(C-8a)，136.7(C-9a)，29.1(C-1′)，130.7(C-2′)，147.2(C-3′)，24.1(C-4′)，19.8(C-5′)，59.9(6-OCH₃)，192.4(3-C＝O-)。

化合物8ClaulansineH的理化、波谱数据如下：

黄色针晶。HR-ESIMSm/z326.1383[M+H](calcdforC₁₉H₂₀NO₄326.1387)。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.17(1H，s，H-4)，7.60(1H，s，H-5)，6.93(1H，s，H-8)，3.49(1H，d，J＝7.0Hz，H-1′)，5.27(1H，t，J＝7.0Hz，H-2′)，1.78(3H，s，CH₃-4′)，1.63(3H，s，CH₃-5′)，11.48(1H，s，2-OH)，9.87(1H，s，3-CHO)，3.84(3H，s，6-OCH₃)，9.18(1H，s，7-OH)，11.18(1H，s，N-H)。¹³C-NMR(DMSO-d₆，125MHz)δ：108.7(C-1)，155.6(C-2)，114.3(C-3)，124.1(C-4)，117.8(C-4a)，103.4(C-5)，114.4(C-5a)，143.6(C-6)，146.6(C-7)，98.2(C-8)，135.8(C-8a)，144.4(C-9a)，22.7(C-1′)，121.8(C-2′)，131.7(C-3′)，17.9(C-4′)，25.4(C-5′)，195.9(3-CHO)，56.2(6-OCH₃)。

化合物9ClaulansineI的理化、波谱数据如下：

黄色粉末，EIMSm/z279[M]。¹H-NMR(DMSO-d₆，500MHz)δ：8.21(1H，s，H-4)，8.13(1H，d，J＝8.0Hz，H-5)，7.20(1H，t，J＝8.0Hz，H-6)，7.40(1H，t，J＝8.0Hz，H-7)，7.56(1H，d，J＝8.0Hz，H-8)，3.93(2H，d，J＝7.0Hz，H-1′)，5.15(1H，t，J＝7.0Hz，H-2′)，1.77(3H，s，4′-CH₃)，1.61(3H，s，5′-CH₃)，11.38(1H，brs，N-H)，9.36(1H，brs，1-OH)，10.14(1H，s，3-CHO)。¹³C-NMR(DMSO，125MHz)δ：139.9(C-1)，126.1(C-2)，126.9(C-3)，118.7(C-4)，121.4(C-4a)，120.4(C-5)，123.1(C-5a)，119.6(C-6)，126.0(C-7)，111.7(C-8)，139.9(C-8a)，134.5(C-9a)，23.3(C-1′)，124.2(C-2′)，130.2(C-3′)，17.9(C-4′)，25.9(C-5′)，192.3(3-CHO)。

化合物10ClaulansineJ的理化、波谱数据如下：

棕色粉末。HR-ESIMSm/z280.0580[M+Na](calcdforC₁₄H₁₁NNaO₄280.0580)。¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：6.78(1H，s，H-1)，8.26(1H，s，H-4)，7.61(1H，s，H-5)，6.85(1H，s，H-8)，10.87(1H，s，2-OH)，10.07(1H，s，3-CHO)，3.84(3H，s，6-OCH₃)，9.14(1H，s，7-OH)，11.16(1H，s，N-H)。¹³C-NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ：96.0(C-1)，158.9(C-2)，115.2(C-3)，123.0(C-4)，117.8(C-4a)，103.6(C-5)，114.1(C-5a)，143.5(C-6)，146.5(C-7)，98.0(C-8)，135.6(C-8a)，145.6(C-9a)，192.5(3-CHO)，56.3(6-OCH₃)。

药理实验

试验材料1、受试药：本发明单体化合物。2、阳性对照药：依达拉奉，由中国食品药品检定研究院提供。HPLC检测纯度＞98％。3、细胞：出生当天大鼠大脑皮层神经元。4、培养基：DMEM，FBS，美国Gibco公司生产；ES，美国Hyclone公司生产。5、硝普钠由中国食品药品检定研究院提供，谷氨酸由北京化工厂提供。

实验例1：本发明化合物对大鼠大脑皮层神经元存活状态的影响以及在硝普钠诱发的神经元凋亡模型中的保护作用

化合物对神经元存活状态的影响研究中，将原代培养大鼠皮层神经元(DIV-9)分为对照组和给药组(10μM)，n＝6；在化合物对硝普钠诱发神经元凋亡模型的保护作用研究中，将原代培养大鼠皮层神经元(DIV-7)分为对照组，硝普钠(350μM)造模组，硝普钠(350μM)+依达拉奉(100μM)给药组，硝普钠(350μM)+化合物(10μM)给药组，n＝6。给药后，细胞置于细胞孵箱中继续培养24小时，MTT法(570nm)测定细胞存活率。以对照组吸光度为标准，计算各组吸光度与对照组的比值。

表1化合物对大鼠皮层神经元存活状态的影响

组别	浓度	细胞存活率(％)
			对照	-	100±4.9
化合物1	10μM	91.6±1.4
			化合物2	10μM	90.2±1.3

化合物3	10μM	95.9±4.9
			化合物4	10μM	93.1±4.1
化合物5	10μM	98.0±3.3
			化合物6	10μM	92.8±6.6
化合物7	10μM	95.6±3.3
			化合物10	10μM	96.3±1.6

表2化合物对硝普钠诱发大鼠皮层神经元凋亡的作用效果

注：存活率以Mean±S.E.M表示

#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001vs对照组；^***P＜0.001，^*P＜0.05vs硝普钠造模组。

实验结果表明，硝普钠造模后，神经元存活率明显降低，而依达拉奉组和本发明化合物组有明显回升，其中化合物4、6、10(10μM)可显著抑制硝普钠诱发的大鼠皮层神经元凋亡，比依达拉奉(100μM)作用效果更加明显。

实验例2：化合物在谷氨酸诱发的大鼠皮层神经元凋亡模型中的保护作用

将原代培养大鼠皮层神经元(DIV-9)分为对照组，谷氨酸(20mM)造模组，谷氨酸(20mM)+依达拉奉(100μM)给药组，谷氨酸(20mM)+化合物(10μM)给药组，n＝6，于细胞孵箱中继续培养24小时后，MTT法测定细胞存活率。以对照组吸光度为标准，计算各组吸光度与对照组的比值。

表3化合物对谷氨酸诱发大鼠皮层神经元凋亡的作用效果

注：存活率以Mean±S.E.M表示

###P＜0.001vs对照组；^***P＜0.001，^**P＜0.01vs谷氨酸造模组。

实验结果表明，用谷氨酸造模后，神经元存活率明显降低，而依达拉奉组和本发明化合物组存活率明显回升，其中化合物3、4、6、9(10μM)可显著抑制谷氨酸诱发的大鼠皮层神经元凋亡，与依达拉奉(100μM)作用相当。

Claims

1.如式1-7所示的咔唑生物碱类化合物

2.一种药物组合物，其特征在于，含有至少一个权利要求1所示的化合物以及药效学上可接受的载体。

3.权利要求1的化合物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的应用。

4.根据权利要求3的应用，所述的神经退行性疾病选自脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。

5.根据权利要求4的应用，所述的痴呆选自早老性痴呆或血管性痴呆。