CN103159668B - 2-羟基-4-氧-2-丁烯酸类化合物及其制药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗流感作用的通式(I)化合物或其药学可接受盐的药物活性成分及其制备方法：通式(I)上述通式(I)化合物针对PA_N靶点，直接抑制其核酸内切酶的活性，能从根本上杀死流感病毒，用于抗流感药物的制备用途。
Description
技术领域
本发明涉及一种2-羟基-4-氧-2-丁烯酸类化合物以及药学上可接受的盐，作为针对PA_N靶点，抑制核酸内切酶活性的化合物与抗流感制剂的用途，以及单独使用或与其它活性化合物合用抗流感的制药用途。本发明进一步涉及这些化合物的制备方法，关于通式(VIII)化合物，其充作制备式(I)化合物的中间物或前药。
背景技术
流感病毒属正黏病毒科，是一种有包膜的单链RNA病毒，自外而内可分为包膜、基质蛋白(M protein)以及核心三部分。流感病毒基因组含有8个RNA片段，已知可以编码11种病毒蛋白质。其中，由PA、PB1和PB2这3个亚基组成的聚合酶复合体是负责病毒基因组RNA复制以及病毒mRNA转录的关键组分，同时由于它的高度保守性、低突变率，成为抗流感病毒药物设计的重要靶点。
PA_N蛋白是流感病毒聚合酶其中一个亚基PA的N端，是有256个氨基酸残基构成的，流感病毒聚合酶是高度保守的，在病毒的生活周期中聚合酶在复制和转录过程中起到重要的作用。聚合酶复合体是负责病毒基因组RNA复制以及病毒mRNA转录，同时由于它的高度保守性、低突变率，成为抗流感病毒药物的重要靶点。而且很少化合物报道针对流感病毒聚合酶，而PA亚基不仅参与病毒复制过程，而且还参与病毒RNA转录、内切核酸酶活性、具有蛋白酶活性以及参与病毒粒子组装等多种病毒活动过程。文献报道显示，PA_N的功能最为重要。它能维持蛋白的稳定，是RNA依赖的RNA聚合酶功能的正常发挥的提前，具有核酸内切酶活性及蛋白酶活性等多种功能，其中核酸内切酶的活性位点是Asp108，Lys134。正因为具备这些特性，核酸内切酶可作为一个理想的靶点，用于设计、合成抑制剂作为广谱抗流感(包括人流感和禽流感)药物。
目前针对流感类的药物设计主要针对蛋白血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuramini-dases，NA)，以及M2离子通道为靶点。但是由于这几个靶点都在流感病毒的外围，并不真正制约流感病毒的转录复制，变异性较大，因此几十年来，只有4个抗流感病毒药物通过美国FDA批准。
PA_N作为一个全新的靶点，目前针对PA_N靶点的流感类药物还是一块空白，有报道的只有一些具有抑制核酸内切酶活性的化学合成化合物以及一些中药分离产物。对于化学合成的化合物，大多存在重现性差，合成困难等问题，另一方面中药成分复杂多变，从单一中药中提取的化合物可达到几百种，抗禽流感的活性成分往往是几十种，作用机制不明确。
发明内容
本发明提供一种2-羟基-4-氧-2-丁烯酸衍生物，能够针对PA_N靶点，具有抑制核酸内切酶，抗流感的生物活性。
本发明的另一个目的是提供一种合成2-羟基-4-氧-2-丁烯酸衍生物的方法。
本发明提供一种以PA_N靶点，通过抑制核酸内切酶起效的药物或药物组合物。
本发明提供一种抗流感病毒的活性成分，针对人流感和禽流感病毒的药物或药物组合物。
本发明提供一种药物组合物，其中包括2-羟基-4-氧-2-丁烯酸衍生物或其药学上可接受的盐以及其它的活性药物。
本发明申请人通过创造性劳动，对现有的核酸内切酶抑制剂进行深入分析和结构设计改造，优化得到一类2-羟基-4-氧-2-丁烯酸衍生物。其结构为通式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐：
式(I)
在上述通式中，其中R1可以选择为Boc、苄基、C1-C4烃基链、C1-C4烷酰基，被羟基或氨基取代的C1-C4烃基；卤素取代的C1-C4烃基，被C1-C4烃基或C1-C4烷氧基取代的芳基，被C1-C4烷基或C1-C4烷氧基取代的芳杂基，未取代或被取代的C3-C14环烷基，未取代或被取代C3-C14杂环基，芳基取代的C1-C4烃基；
R2为未取代或被取代的苯环、未取代或被取代的联苯基、未取代或被取代的2-4个环组成的稠合环基、未取代或被取代的萘基，被取代或未取代的C3-C14杂环基，被取代或未取代的C3-C14芳杂基，其中，苯环、联苯、稠合环、萘环、杂环以及芳杂环上的取代基团包括：C1-C4烃基链、C1-C4烷酰基，被羟基或氨基取代的C1-C4烃基；卤素取代的C1-C4烃基，氨基、羟基，C1-C4烷氧基，羧基，磺酸基，硝基，卤素，-COOR，-COX，-CONH2，-CONR3R4，-COR3，-CN，-NR3R4。其中R3，R4独立地选自C1-C4烃基链、羟基或氨基取代的C1-C4烃基；卤素取代的C1-C4烃基。
其中，C1-C4烃基，单独或与其它基团并用，意谓饱和或不饱和、分枝状或直链基团，具有一至四个碳原子。C1-C4烷基的实例为甲基、乙基、乙烯基、丙烯基、烯丙基、正丙基、异丙基、1-烯丁基、2-烯丁基、4-烯丁基、3-烯丁基、二烯丁基、正丁基及异丁基等。
C1-C4烷氧基一词，单独或与其它基团并用，意谓R-O基团，其中R为C1-C4烷基。C1-C4烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基及异丁氧基，较佳为甲氧基、乙氧基、丙氧基及异丙氧基。
分子式中的X，即卤素，即氟基、氯基、溴基或碘基，较佳为氟基或氯基，最佳为氯基。
分子式中Boc即叔丁氧羰基，Bz即苄基。
本发明所述化合物可通过以下工艺制备得到：
A.分别将含有R1基团的原料和式(II)化合物哌啶酸乙酯溶于亲脂性有机溶剂、水和盐的混合溶液中、加热回流，有机溶剂萃取，干燥浓缩得式(III)化合物。
B.将新鲜配制的二异丙基氨基锂(LDA)以及式(III)化合物溶于有机溶剂中，低温搅拌反应，然后加入R2-磺酰卤，室温下搅拌反应，氯化铵终止反应，有机溶剂萃取，柱层析分离，得式(IV)化合物。
C.式(IV)化合物在碱性条件下水解，有机溶剂萃取，洗涤干燥，得到式(V)化合物。
D.将式(V)化合物溶于有机溶剂中，加入N，N羰基二咪唑(CDI)加热搅拌，然后加入二甲羟胺盐酸盐搅拌，再降至室温搅拌反应，有机溶剂萃取，洗涤干燥，得到式(VI)化合物。
E.将格式试剂与式(VI)化合物溶于有机溶剂中，加热回流，有机溶剂萃取，干燥，得到中间产物(VII)。
F.将中间产物(VII)与草酸二甲酯溶于有机溶剂中，加入强碱，加热回流，倒入盐溶液，然后有机溶剂萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化得到式(VIII)化合物。
G.将化合物(VIII)溶于有机溶剂中，加入无机酸，加热回流，有机溶剂洗涤过滤，重结晶得最终产物式(I)化合物。
上述反应中，基团R1，R2分别与通式(I)结构中的定义相同。
上述反应中，有机溶剂包括：乙醚、DMF、DMSO、甲醇、异丙醇、丙醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、正丁醇、四氢呋喃、环己烷、正己烷。
常用的干燥试剂包括：无水硫酸钠、无水硫酸镁、氯化镁、氯化钙、分子筛。
常规的盐溶液包括：饱和氯化钠溶液、饱和或稀碳酸氢钠溶液、碳酸镁溶液、氯化铵溶液。
常用的酸包括：盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、三氟甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、乙二酸。
碱包括：氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、二乙胺、氨水、氢氧化镁、甲醇钠等常规碱试剂。
本发明所述的制备方法中，步骤A)中优选盐溶液优选氯化钠，氯化钾，氯化钙、氯化镁或其混合盐溶液。亲脂性有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、环己烷、正己烷。萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤B)中溶解LDA以及式(III)化合物的有机溶剂优选四氢呋喃、DMSO、DMF或其混合溶剂。低温搅拌反应的温度优选-50℃至-90℃之间，更优选-70℃至-80℃，本发明优选具体的-78℃。萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤C)中可选择使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、二乙胺、氨水、氢氧化镁等物质加入有机溶剂中达到碱性条件，且反应溶剂可选择DMF、DMSO、甲醇、异丙醇、丙醇、乙醇、四氢呋喃等与水的混合溶剂，萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤D)中溶解式(V)化合物的有机溶剂优选四氢呋喃、DMSO、DMF或其混合溶剂。加热的范围优选45℃-80℃，再优选50℃-70℃，更优选60℃。萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤E)中格式试剂优选甲基溴化镁，溶解格式试剂与式(VI)化合物的有机溶剂优选四氢呋喃、DMSO、DMF或其混合溶剂。萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤F)溶解中间产物(VII)与草酸二甲酯的有机溶剂优选四氢呋喃、DMSO、DMF、乙醚、石油醚、环己烷、正己烷、乙酸乙酯或其混合溶剂。强碱选自氢化钠、氢化钾、甲醇钠、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂。萃取使用的有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚或乙酸乙酯等常规溶剂。
步骤G)中反应的有机溶剂优选四氢呋喃、DMSO、DMF、乙醚、石油醚、环己烷、正己烷、乙酸乙酯或其混合溶剂。无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸、碳酸、硝酸。重结晶使用溶剂优选异丙醇、丙醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚或环己烷等。
上述反应过程可通过以下反应式表示：
本发明公开的通式化合物(I)或其药学上可接受的盐作为一种抗感冒活性成分，可与其它的药物活性成分联合使用。
其中，所述的药学上可接受的盐是指：使用本领域公知的标准技术可获得药学可接受的盐，例如通过用提供生理学可接受的阴离子的合适的酸与具有足够碱性的化合物(例如胺)反应。
根据本领域的常识，本发明也包括通式化合物(I)在药学上可接受的“前药”，立体异构和多晶型结构。前药指在宿主中代谢(例如水解或氧化)以形成本发明的化合物的化合物。前药的典型实例包括在所述活性化合物的官能团(fuctional moiety)上具有生物学不稳定的保护基的化合物。前药包括可以被氧化、还原、氨化、脱氨基化、羟基化、脱羟基化、水解、脱水、烷基化、脱烷基化、酰基化、脱酰基化、磷酸化、脱磷酸化以产生所述活性化合物的化合物。例如，合适的前药可以是被水解以形成酸的羧酸的酯或酰胺。前药的非限制性实例包括但不限于烷基或芳烷基酯或酰胺，包括甲基、乙基、丙基、苄基和取代苄基的酯或酰胺。
立体异构和多晶型
具有手性中心的本发明的化合物可存在旋光和外消旋形式，并以旋光和外消旋形式分离。本发明涵盖任何的外消旋、旋光、非对映异构、多晶型或立体异构形式的本发明的化合物或其混合物，其具有本文描述的有用性质。
术语“药学可接受的盐”和“前药”用于整个说明书以描述化合物的任何药学可接受的形式(例如盐、酯或相关的基团的盐)，当其一旦向患者给药时，就提供本说明书描述的化合物。在其中化合物具有足够的碱性或酸性以形成稳定的无毒性的酸或碱的盐的情况下，给药作为盐的化合物可能是合适的。术语药学可接受的盐或复合物指保留本发明的化合物的预期生物活性并表现出最小的非预期的毒理学效应的盐或复合物。
本发明“药学可接受的盐”包括由以下碱形成的加成盐：金属阳离子(例如锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾、锂以及类似金属阳离子)或由氨、N，N-二苄基乙二胺、D-葡糖胺、四乙铵或乙二胺形成的阳离子；或者(c)(a)和(b)的组合；例如丹宁酸锌盐或类似盐。所述定义还包括本领域技术人员所知的药学可接受的季盐，其具体包括式-NR+A-的季铵盐，其中R如上文定义且A是反离子，包括氯化物、溴化物、碘化物、-O-烷基、甲苯磺酸盐、甲基磺酸盐、磺酸盐、磷酸盐或羧酸盐(例如苯甲酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐(cinnamoate)、扁桃酸盐(mandeloate)、苄酸盐(benzyloate)和二苯基乙酸盐)。
本发明通式(I)化合物以足以在没有严重毒性效应下将体内治疗量的化合物递送给患者的量包含于药学可接受的载体或稀释剂中。可用于这些药物组合物的药学可接受的载体通常为本领域所知。它们包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、溶剂、盐或电解质(例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸盐)、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、油、聚乙烯-聚氧基丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。药学可接受的媒介物可包含多于一种赋形剂的混合物，其中可选择组分和比率从而优化制剂的预期特征，包括但不限于储存期、稳定性、药物装载、递送部位、溶出度、自乳化、释放速率和释放部位的控制以及代谢。
通过本领域已知的多种技术可制备制剂。制剂技术的实例可参见文献出版物和教科书。如果静脉内给药，载体可以是生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。本发明的无菌可注射形式的组合物可以是水或油的悬浮液。根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂可配制这些悬浮液。所述无菌可注射制品还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇的溶液。可使用的属于可接受的媒介物和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油方便地用作溶剂或助悬介质。为此目的，可使用任何温和的不挥发油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。脂肪酸(例如油酸)和其甘油酯衍生物用于制备可注射制剂，由于其为天然药学可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙基化的形式。这些油溶液或悬浮液还可包含长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或相似的分散剂，其通常用于药学可接受的剂量形式(包括乳剂和混悬剂)的配制。还可为了制剂而使用其他通常使用的表面活性剂(例如吐温、司盘和其他的表面活性乳化剂)或者通常用于药学可接受的固体、液体或其他剂量形式的制备的生物利用度增强剂。
药物组合物中活性化合物的浓度依赖于药物的吸收、失活和排泄的速率以及本领域技术人员所知的其他因素。应注意，剂量值还将依据待改善的疾患的严重性而变化。应进一步了解，对于任何特定的个体，应根据个体的需要以及管理或监督组合物给药的人的专业判断，随时调整具体的剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅为示例并且无意限制要求保护的组合物的范围或实践。所述活性成分可一次给药或可分为多个较小剂量以变化的时间间隔给药。
口服是用于全身递送的给药所述活性化合物的一种模式。口服组合物通常会包括惰性稀释剂或可食用的载体。它们可密封于明胶胶囊剂中或压制成片剂。为了口服治疗给药，可将所述活性化合物与赋形剂掺在一起，并用于片剂、锭剂或胶囊剂的形式。可包含药学相容的粘合剂和/或辅剂材料作为组合物的部分。
片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂以及类似剂型可含有任何以下的成分或相似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或者矫味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橘子香料(orangeflavoring)。
当剂量单位形式是胶囊剂时，除了以上类型的材料，其还可含有液体载体，例如脂肪油。此外，剂量单位形式可含有改良剂量单位的物理形式的多种其他的材料，例如糖包衣、紫胶或其他的肠溶剂。
所述化合物或其盐可作为酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafer)、口香糖或类似药剂的组分来给药。除所述活性化合物以外，糖浆还可含有作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和着色剂和矫味剂。
在优选的实施方案中，所述活性化合物与载体一起制备，所述载体会保护所述化合物免于从体内快速消除，例如控释制剂，包括植入剂和微胶囊化递送系统。可使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备这样的制剂的方法对本领域技术人员是明显的。所述材料还可从Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals，Inc商购。还优选脂质体悬浮液(包括靶向用病毒抗原的单克隆抗体感染的细胞的脂质体)作为药学可接受的载体。这些可根据本领域技术人员已知的方法制备，例如参见美国专利4,522,811(其通过整体引用在此并入)。例如，脂质体制剂可如下制备：将合适的脂质(例如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、arachadoyl磷脂酰胆碱(arachadoylphosphatidyl choline)和胆固醇)溶解于无机溶剂，然后蒸发所述无机溶剂，在容器表面上留下干燥脂质的薄膜。然后将所述化合物的水溶液引入容器。然后手动旋转所述容器从而使脂质材料离开所述容器的边缘并且分散脂质聚集体(lipid aggregates)，由此形成脂质体悬浮液。
局部应用的合适的媒介物或载体可通过常规技术制备，例如应用于直肠、阴道、鼻或口腔粘膜的洗剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、酊剂、喷雾剂、散剂、糊剂、缓释透皮药贴、栓剂。除了以上列举的用于全身施用的其他材料外，可使用增稠剂、软化剂和稳定剂制备局部用组合物。增稠剂的实例包括凡士林、蜂蜡、黄原胶或聚乙烯，湿润剂诸如山梨醇、软化剂诸如矿物油、羊毛脂和其衍生物或角鲨烯。
附图说明
图1示出了根据本发明的实施例在标准溶液浓度下化合物对H5N1型流感病毒RNA聚合酶亚型PA_N蛋白酶活曲线。
图2示出了根据本发明的实施例的化合物对BH5N1型流感病毒RNA聚合酶亚型PA_N蛋白抑制的IC50值曲线图。
具体实施方式
下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
以下列举目标化合物的制备实施例：
实施例1
化合物4-[(1-叔丁氧羰基-4-苯磺酰基)-哌啶-4-基]-2-羟基-4-氧-2-丁烯酸的制备
A.氯化钠(4.2g，0.105mmol)溶于10ml氯仿和12.5ml水中，向混合物中分别加入哌啶酸乙酯(2.48g，15.8mmol)和二碳酸二叔丁基酯(3.63g，16.6mmol)，加热回流搅拌2.5h，冷却至室温，分离出有机相，水相以氯仿(2×35ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠过夜干燥，减压浓缩得到淡黄色油状液体1。
B.制备新鲜的LDA。加入一定量的干燥的二异丙胺溶剂，冷却至-78℃，加入等量的正丁基锂，继续在该温度下搅拌0.5h，反应过程中可适当加入一定量干燥的四氢呋喃。新制的LDA(2.31mmol)，溶于10ml干燥的四氢呋喃中，冷却至-78℃，加入溶于10ml四氢呋喃的1-叔丁基氧羰基哌啶酸乙酯(2.1mmol，510mg)，保持在该温度搅拌0.5-1h，然后滴加入溶于10ml四氢呋喃的苯磺酰氟(2.1mmol，336mg)，缓慢升至室温，在室温下搅拌16h，然后以饱和的氯化铵溶液终止反应，以乙酸乙酯萃取反应液，有机相用饱和氯化钠溶液洗，然后以无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析得到目标产物2。
C.将化合物2(0.88mmol，0.349g)混合氢氧化锂(1.32mmol，32mg)溶于四氢呋喃、甲醇、水(3ml∶3ml∶2ml)混合溶液中，在55℃搅拌反应15h，反应结束后以1N的盐酸调至pH3-5，乙酸乙酯萃取，有机相以饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得到目标产物3。
D.将化合物3(10mmol，3.69g)，溶于20ml干燥的DMF中，加入CDI(12mmol，1.95g)，加热到60℃，搅拌15min，加入二甲羟胺盐酸盐(24mmol，2.34g)，继续在60℃搅拌15min，然后冷却至室温搅拌1h，反应结束后，反应液倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸钠干燥，旋蒸得目标产物4。
E.将化合物4(12mmol，4.94g)，溶于30ml干燥的四氢呋喃溶液中，加入36mmol甲基溴化镁，加热回流反应30min，冷至室温，倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸得目标产物5。
F.将化合物5(1.44mmol，0.528g)，与草酸二甲酯(1.7mmol，201mg)溶于20ml干燥的乙醚中，加入140mg氢化钠，加热回流反应5h，冷却至室温，倒入100ml饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸，柱层析得目标化合物6。
G.将化合物6溶于四氢呋喃和3N盐酸(5ml∶20ml)的混合液中，加热回流反应1h，冷至室温，减压旋蒸，所得物以四氢呋喃洗涤过滤，异丙醇重结晶得最终产物7。
中间产物1-6及目标产物7的核磁数据如下所示：
中间产物1：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：4.16(q，J＝7.2Hz，2H)，4.03(d，J＝12Hz，2H)，2.86(t，J＝12Hz，2H)，2.45(m，1H)，1.88(m，2H)，1.64(m，2H)，1.47(s，9H)，1.27(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z 258.26([M+H+]).
中间产物2：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.82(d，J＝7.6Hz，2H)，7.70(d，J＝7.6Hz，1H)，7.58(t，J＝8Hz，2H)，4.20(m，4H)，2.64(s，2H)，2.08(m，2H)，1.68(m，2H)，1.48(s，9H)，1.25(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z398.26([M+H+]).
中间产物3：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.81(d，J＝7.6Hz，2H)，7.53(d，J＝8Hz，1H)，7.32(t，J＝8Hz，2H)，4.03(m，2H)，3.88(m，2H)，1.94(m，2H)，1.68(m，2H)，1.50(s，9H)，ESI-MS m/z 368.21([M-H+]).
中间产物4：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.86(d，J＝8Hz，2H)，7.66(d，J＝7.6Hz，1H)，7.59(t，J＝8Hz，2H)，3.88(m，4H)，3.69(s，3H)，3.10(s，3H)，2.78(m，2H)，2.08(m，2H)，1.39(s，9H)，ESI-MS m/z 413.21([M+H+]).
中间产物5：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.78(d，J＝6.0Hz，2H)，7.57(m，3H)，4.13(q，J＝6.8Hz，2H)，3.62(m，2H)，2.77(m，2H)，2.24(s，3H)，1.48(s，9H)，ESI-MS m/z 368.16([M+H+]).
中间产物6：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.19(s，1H)，7.74(d，J＝8Hz，2H)，7.48(m，3H)，7.19(s，1H)，4.02(m，4H)，3，89(s，3H)，2.69(m，2H)，2.14(m，2H)，1.38(s，9H)，ESI-MS m/z 454.16([M+H+]).
中间产物7：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.27(s，1H)，10.49(s，1H)，7.81(d，J＝8Hz，2H)，7.45(m，3H)，7.17(s，1H)，4.12(m，4H)，2.64(m，2H)，2.22(m，2H)，1.48(s，9H)，ESI-MS m/z 438.15([M-H+]).
具体的分子反应结构过程如下：
a.(Boc)2O，CHCl3，H2O，NaCl，reflux；b.LDA，Phenylsulfonyl fluoride，-78℃；c.LiOH，THF∶MeOH∶H2O＝3∶3∶2；d.DMF，CDI，MeNHOMe，60℃；e.CH3MgBr，THF，reflux；f.Et2O，Dimethyl oxalate，NaH；g.THF，3N HCl，reflux
实施例2：
化合物4-[(1-苯甲基-4-苯磺酰基)-哌啶-4-基]-2-羟基-4-氧-2-丁烯酸的制备
A.氯化钠(4.2g，0.105mmol)溶于10ml氯仿和12.5ml水中，向混合物中分别加入哌啶酸乙酯(2.48g，15.8mmol)和二碳酸二叔丁基酯(3.63g，16.6mmol)，加热回流搅拌2.5h，冷却至室温，分离出有机相，水相以氯仿(2×35ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠过夜干燥，减压浓缩得到淡黄色油状液体1。
B.制备新鲜的LDA。加入一定量的干燥的二异丙胺溶剂，冷却至-78℃，加入等量的正丁基锂，继续在该温度下搅拌0.5h，反应过程中可适当加入一定量干燥的四氢呋喃。新制的LDA(2.31mmol)，溶于10ml干燥的四氢呋喃中，冷却至-78℃，加入溶于10ml四氢呋喃的1-叔丁基氧羰基哌啶酸乙酯(2.1mmol，510mg)，保持在该温度搅拌0.5-1h，然后滴加入溶于10ml四氢呋喃的苯磺酰氟(2.1mmol，336mg)，缓慢升至室温，在室温下搅拌16h，然后以饱和的氯化铵溶液终止反应，以乙酸乙酯萃取反应液，有机相用饱和氯化钠溶液洗，然后以无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析得到目标产物2。
C.将化合物2(0.88mmol，0.349g)溶于乙酸乙酯中，在0℃下通入HCl气5min。旋转蒸发得到白色盐酸盐。将盐酸盐溶于3mL DMF中并加入K2CO3(1.76mmol，0.099g)，然后加入苄基溴(0.88mmol，0.0151g)。室温下反应5h，乙酸乙酯稀释，并用水、饱和食盐水洗涤，分液保留有机相，并用MgSO4干燥过夜。柱层析得到化合物3。
D.将化合物3(0.88mmol，0.349g)混合氢氧化锂(1.32mmol，32mg)溶于四氢呋喃、甲醇、水(3ml∶3ml∶2ml)混合溶液中，在55℃搅拌反应15h，反应结束后以1N的盐酸调至pH3-5，乙酸乙酯萃取，有机相以饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得到目标产物4。
E.将化合物4(10mmol，3.69g)，溶于20ml干燥的DMF中，加入CDI(12mmol，1.95g)，加热到60℃，搅拌15min，加入二甲羟胺盐酸盐(24mmol，2.34g)，继续在60℃搅拌15min，然后冷却至室温搅拌1h，反应结束后，反应液倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸钠干燥，旋蒸得目标产物5。
F.将化合物5(12mmol，4.94g)，溶于30ml干燥的四氢呋喃溶液中，加入36mmol甲基溴化镁，加热回流反应30min，冷至室温，倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸得目标产物6。
G.将化合物6(1.44mmol，0.528g)，与草酸二甲酯(1.7mmol，201mg)溶于20ml干燥的乙醚中，加入140mg氢化钠，加热回流反应5h，冷却至室温，倒入100ml饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸，柱层析得目标化合物7。
H.将化合物7溶于四氢呋喃和3N盐酸(5ml∶20ml)的混合液中，加热回流反应1h，冷至室温，减压旋蒸，所得物以四氢呋喃洗涤过滤，异丙醇重结晶得最终产物8。
中间产物1：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：4.16(q，J＝7.2Hz，2H)，4.03(d，J＝12Hz，2H)，2.86(t，J＝12Hz，2H)，2.45(m，1H)，1.88(m，2H)，1.64(m，2H)，1.47(s，9H)，1.27(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z 258.26([M+H+]).
中间产物2：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.82(d，J＝7.6Hz，2H)，7.70(d，J＝7.6Hz，1H)，7.58(t，J＝8Hz，2H)，4.20(m，4H)，2.64(s，2H)，2.08(m，2H)，1.68(m，2H)，1.48(s，9H)，1.25(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z398.26([M+H+]).
中间产物3：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.7(d，J＝8.5Hz，2H)，7.56(m，3H)，7.23(m，3H)，7.15(m，2H)，3.98(q，J＝6.8Hz，2H)，3.65(m，2H)，2.78(s，2H)，2.35(d，J＝12Hz，2H)，2.19(d，J＝12Hz，2H)，1.61(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z 388.26([M+H+]).
中间产物4：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.67(m，5H)，7.21(m，3H)，7.06(m，2H)，3.55(m，2H)，2.72(s，2H)，2.15(t，J＝12Hz，2H)，1.98(d，J＝12Hz，2H)，1.50(t，J＝12Hz，2H)，ESI-MS m/z 358.16([M-H+]).
中间产物5：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.70(m，3H)，7.48(m，3H)，7.20(d，J＝8.5Hz，2H)，6.98(d，J＝8.5Hz，2H)，3.93(m，2H)，3.70(s，3H)，3.19(s，3H)，2.92(m，2H)，2.78(s，2H)，2.21(m，2H)，1.45(m，2H)，ESI-MS m/z 389.26([M-H+]).
中间产物6：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.65(m，5H)，7.51(m，3H)，7.16(m，2H)，3.93(m，2H)，2.92(m，2H)，2.89(s，2H)，2.10(s，3H)，2.05(m，2H)，1.39(m，2H)，ESI-MS m/z 358.26([M+H+]).
中间产物7：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.25(s，1H)，7.86(m，2H)，7.62(t，J＝7.2Hz，2H)，7.59(d，J＝7.2Hz，1H)，7.33(m，3H)，7.26(m，2H)，7.14(s，1H)，3，89(s，3H)，3.48(m，2H)，2.62(s，2H)，2.22(t，J＝12Hz，2H)，1.88(d，J＝12Hz，2H)，1.43(t，J＝12Hz，2H)，ESI-MS m/z 444.26([M+H+]).
中间产物8：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.17(s，1H)，11.03(s，1H)，7.69(m，5H)，7.588(m，3H)，7.22(m，2H)，7.08(s，1H)，3.78(m，2H)，2.66(s，2H)，2.25(t，J＝12Hz，2H)，1.95(d，J＝12Hz，2H)，1.46(t，J＝12Hz，2H)，ESI-MS m/z 428.06([M-H+]).
具体的分子反应结构过程如下：
a.(Boc)2O，CHCl3，H2O，NaCl，reflux；b.LDA，Phenylsulfonyl fluoride，-78℃；c.HCl，Benzyl bromide，K2CO3，room temperature；d.LiOH，THF∶MeOH∶H2O＝3∶3∶2；e.DMF，CDI，MeNHOMe，60℃；f.CH3MgBr，THF，reflux；g.Et2O，Dimethyl oxalate，NaH；h.THF，3N HCl，reflux
实施例3：
化合物4-[(1-叔丁氧羰基-4-对氟苯磺酰基)-哌啶-4-基]-2-羟基-4-氧-2-丁烯酸的制备
A.氯化钠(4.2g，0.105mmol)溶于10ml氯仿和12.5ml水中，向混合物中分别加入哌啶酸乙酯(2.48g，15.8mmol)和二碳酸二叔丁基酯(3.63g，16.6mmol)，加热回流搅拌2.5h，冷却至室温，分离出有机相，水相以氯仿(2×35ml)萃取，合并有机相，无水硫酸钠过夜干燥，减压浓缩得到淡黄色油状液体1。
B.制备新鲜的LDA。加入一定量的干燥的二异丙胺溶剂，冷却至-78℃，加入等量的正丁基锂，继续在该温度下搅拌0.5h，反应过程中可适当加入一定量干燥的四氢呋喃。新制的LDA(2.31mmol)，溶于10ml干燥的四氢呋喃中，冷却至-78℃，加入溶于10ml四氢呋喃的1-叔丁基氧羰基哌啶酸乙酯(2.1mmol，510mg)，保持在该温度搅拌0.5-1h，然后滴加入溶于10ml四氢呋喃的对氟苯基二硫化物(2.1mmol，336mg)，缓慢升至室温，在室温下搅拌16h，然后以饱和的氯化铵溶液终止反应，以乙酸乙酯萃取反应液，有机相用饱和氯化钠溶液洗，然后以无水硫酸钠干燥，减压旋蒸，柱层析得到目标产物2。
C.将化合物2(0.88mmol，0.349g)溶于10mL二氯甲烷中，冷却至0℃后加入MCPBA(1.76mmol，0.368g)，搅拌20h，反应完全后用水稀释，然后用二氯甲烷萃取，有机相依次用10％Na2SO3、水、以及饱和食盐水洗涤，并且用硫酸镁干燥过夜。柱层析的到目标产物3。
D.将化合物3(0.88mmol，0.349g)混合氢氧化锂(1.32mmol，32mg)溶于四氢呋喃、甲醇、水(3ml∶3ml∶2ml)混合溶液中，在55℃搅拌反应15h，反应结束后以1N的盐酸调至pH3-5，乙酸乙酯萃取，有机相以饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，减压旋蒸得到目标产物4。
E.将化合物4(10mmol，3.69g)，溶于20ml干燥的DMF中，加入CDI(12mmol，1.95g)，加热到60℃，搅拌15min，加入二甲羟胺盐酸盐(24mmol，2.34g)，继续在60℃搅拌15min，然后冷却至室温搅拌1h，反应结束后，反应液倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸钠干燥，旋蒸得目标产物5。
F.将化合物5(12mmol，4.94g)，溶于30ml干燥的四氢呋喃溶液中，加入36mmol甲基溴化镁，加热回流反应30min，冷至室温，倒入饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸得目标产物6。
G.将化合物6(1.44mmol，0.528g)，与草酸二甲酯(1.7mmol，201mg)溶于20ml干燥的乙醚中，加入140mg氢化钠，加热回流反应5h，冷却至室温，倒入100ml饱和的碳酸氢钠溶液中，乙酸乙酯萃取(3*100ml)，无水硫酸镁干燥，减压旋蒸，柱层析得目标化合物7。
H.将化合物7溶于四氢呋喃和3N盐酸(5ml∶20ml)的混合液中，加热回流反应1h，冷至室温，减压旋蒸，所得物以四氢呋喃洗涤过滤，异丙醇重结晶得最终产物8。
中间产物1：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：4.16(q，J＝7.2Hz，2H)，4.03(d，J＝12Hz，2H)，2.86(t，J＝12Hz，2H)，2.45(m，1H)，1.88(m，2H)，1.64(m，2H)，1.47(s，9H)，1.27(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z 258.26([M+H+]).
中间产物2：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.03(2H，m)，6.92(2H，m)，4.06(m，4H)，2.72(s，2H)，2.07(m，2H)，1.68(m，2H)，1.48(s，9H)，1.25(t，J＝6.8Hz，3H)，ESI-MS m/z 384.26([M+H+]).
中间产物3：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.10(m，4H)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H)，4.16(m，2H)，2.63(m，2H)，2.32(m，2H)，2.03(m，2H)，1.44(s，9H)，1.26(t，J＝7.2Hz，3H).ESI-MS m/z 416.26([M+H+]).
中间产物4：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.16(m，4H)，3.55(m，2H)，2.15(t，J＝12Hz，2H)，1.98(d，J＝12Hz，2H)，1.50(t，J＝12Hz，2H)，1.39(s，9H)，ESI-MS m/z 386.26([M+H+]).
中间产物5：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.13(2H，m)，7.08(2H，m)，3.85(m，4H)，3.64(s，3H)，3.16(s，3H)，2.68(m，2H)，2.07(m，2H)，1.43(s，9H)，ESI-MS m/z 431.16([M+H+]).
中间产物6：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：7.24(m，4H)，4.11(q，J＝6.8Hz，2H)，3.64(m，2H)，2.81(m，2H)，2.14(s，3H)，1.43(s，9H)，ESI-MS m/z 386.26([M+H+]).
中间产物7：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.20(s，1H)，7.19(s，1H)，7.14(m，4H)，4.02(m，4H)，3，89(s，3H)，2.69(m，2H)，2.14(m，2H)，1.38(s，9H)，ESI-MS m/z 472.19([M+H+]).
中间产物8：1H NMR(400MHz，DMSO-d6，δin ppm)：14.32(s，1H)，10.22(s，1H)，7.22(2H，m)，7.18(s，1H)，7.04(2H，m)，3.78(m，2H)，2.25(t，J＝12Hz，2H)，1.95(d，J＝12Hz，2H)，1.46(t，J＝12Hz，2H)，ESI-MS m/z 456.16([M+H+]).
a.(Boc)2O，CHCl3，H2O，NaCl，reflux；b.LDA，p-fluorophenyl disulfide，-78℃；c.MCPBA 20h，d.LiOH，THF∶MeOH∶H2O＝3∶3∶2；e.DMF，CDI，MeNHOMe，60℃；f.CH3MgBr，THF，reflux；g.Et2O，Dimethyl oxalate，NaH；h.THF，3N HCl，reflux
二、本发明实施例1-3的化合物的生物活性的测定：
应用流感PA_N核酸内切酶的活性，底物为一段核酸，5′端加上荧光基团，3′端加上粹灭基团。当PA_N发挥核酸内切酶的活性是可以将3′端的粹灭基团切开，使荧光基团发射荧光。但假如一种物质抑制PA_N的活性时，底物不被切开，荧光基团不发射荧光。利用酶标仪检测发射荧光的强度，根据荧光的强度我们来推测药物的抑制能力。具体方法及流程详见专利《基于甲型流感病毒RNA聚合酶PAN片段核酸内切酶活性的抗甲型流感病毒物质筛选方法及应用》。
1.酶活测试原理
利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，FRET)技术测定针对PA_N蛋白的抑制剂的活性。根据PA_N蛋白所具有的核酸内切酶活性，设计一段核酸片段作为底物：5′FAM--AA--3′BHQ1，当抑制剂对PA_N蛋白没有作用时，PA_N蛋白可以发挥其核酸内切酶的活性将底物切割，淬灭基团(FMA)远离荧光基团(BHQ1)，荧光基团吸收494nm的发射光后，激发出526nm的光波，通过检测器检测荧光强度的变化；如果抑制剂对PA_N蛋白有抑制作用，淬灭基团则不会被切去，荧光基团吸收494nm的发射光波后一部分能量会转移给淬灭基团，526nm的激发光波强度就会减弱，以此来检测抑制剂对PA_N蛋白的抑制效果。
2.酶活测试方法
本发明采用的体外酶活评价体系组成见表1：
表1.体外酶活评价体系
其中，PA_N蛋白为禽流感病毒A/goose/Guangdong/1/1996(H5N1)毒株RNA聚合酶PA亚基1-256位氨基酸残基，PA_N蛋白储存溶液为：20mMTris pH 8.0，150mM NaCl，pH＝8.0，最终PA_N蛋白浓度为1mg/ml；底物为5′FAM--AA--3′BHQ1(购于上海生工生物工程有限公司)，溶于缓冲液(20mM Tris pH 8.0，150mM NaCl，pH＝8.0)中，浓度为50μM；EDTA的浓度为200mM，取14.97g EDTA溶于150ml双蒸水中，然后定容至200ml。
评价体系设定阴阳对照。阳性对照组为向体系中加入1.00μl 200mMEDTA溶液，阴性对照组为向体系中加入1.00μl 200mM Tris(pH＝8.0)溶液。实验组为向体系中加入1.00μl不同浓度的化合物溶液。
将表1所述体系在37℃下孵育10分钟后，利用酶标仪(FluoroskanAscent，Thermo Scientific公司，滤光片为机器自带)，测定所采用的激发光和发射光分别为494nm和526nm，每隔30秒记录一次荧光强度数值，共记录200次。根据所获荧光强度数值绘制酶活曲线，标准溶液浓度下测定的酶活曲线见图1，并计算PA_N蛋白的剩余活性，平行重复3次，取平均值。
3.剩余活性(RA)的计算方法：
在酶活曲线中，取阴性对照曲线斜率最大处值为V0，药物曲线斜率最大处为V，则PA_N蛋白的RA＝V/V0
4.IC50的计算
将稀释的化合物浓度除以相应化合物的分子量并取以10为底的对数值作为X轴，对应的剩余活性为Y轴，用GraphPad Prism 5作图并计算出相应的IC50值。IC50值曲线图见图2。
Claims (15)
1.一种具有通式(I)结构的化合物：
其中：
R1选自叔丁氧羰基、C1-C4烷基脂肪链、C1-C4烷酰基，被羟基或氨基取代的C1-C4烷基；卤素取代的C1-C4烷基；苯酰基；
R2选自取代或未取代苯环、取代或未取代联苯基或取代或未取代的萘基，其中，取代苯环、取代联苯基或取代萘基上的取代基团为C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基。
2.权利要求1所述通式(I)化合物，其特点在于：R1选自叔丁氧羰基、苯酰基、C1-C4烷基脂肪链、C1-C4烷酰基，被羟基或氨基取代的C1-C4烷基或卤素取代的C1-C4烷基。
3.权利要求1所述通式(I)化合物，其特点在于：R1选自叔丁氧羰基、苯酰基或C1-C4烷基脂肪链。
4.权利要求1所述通式(I)化合物，其特点在于：R1选自叔丁氧羰基或苯酰基。
5.权利要求1-4任一项所述通式(I)化合物，其特点在于：R2选自取代苯环或未取代苯环，取代苯环上的取代基团为C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基。
6.权利要求1-4任一项所述通式(I)化合物，其特点在于：R2选自取代苯环，取代苯环上的取代基团为C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基。
7.权利要求1-4任一项所述通式(I)化合物，其特点在于：R2选自未取代苯环。
8.权利要求1所述通式(I)化合物的制备方法，其特征在于：该制备工艺包括以下步骤：
A.分别将含有R1基团的原料和式(II)化合物哌啶酸乙酯
溶于亲脂性有机溶剂、水和盐的混合溶液中、加热回流，有机溶剂萃取，干燥浓缩得式(III)化合物
B.将新鲜配制的二异丙基氨基锂(LDA)以及式(III)化合物溶于有机溶剂中，低温搅拌反应，然后加入R2-磺酰卤，室温下搅拌反应，氯化铵终止反应，有机溶剂萃取，柱层析分离，得式(IV)化合物
C.式(IV)化合物在碱性条件下水解，有机溶剂萃取，洗涤干燥，得到式(V)化合物
D.将式(V)化合物溶于有机溶剂中，加入N，N羰基二咪唑(CDI)加热搅拌，然后加入二甲羟胺盐酸盐搅拌，再降至室温搅拌反应，有机溶剂萃取，洗涤干燥，得到式(VI)化合物
E.将格氏试剂与式(VI)化合物溶于有机溶剂中，加热回流，有机溶剂萃取，干燥，得到中间产物(VII)
F.将中间产物(VII)与草酸二甲酯溶于有机溶剂中，加入强碱，加热回流，倒入盐溶液，然后有机溶剂萃取，干燥，浓缩，柱层析纯化得到式(VIII)化合物
G.将化合物(VIII)溶于有机溶剂中，加入无机酸，加热回流，有机溶剂洗涤过滤，重结晶得最终产物式(I)化合物，其中，R1选自叔丁氧羰基、C1-C4烷基脂肪链、C1-C4烷酰基，被羟基或氨基取代的C1-C4烷基；卤素取代的C1-C4烷基，苯酰基；R2选自取代或未取代苯环、取代或未取代联苯基或取代或未取代萘基，其中，取代苯环、取代联苯基或取代萘基上的取代基团为C1-C4烷基，卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基。
9.权利要求8所述的制备方法，其特征在于：R1选自叔丁氧羰基、苯酰基或C1-C4烷基脂肪链。
10.权利要求8至9任一项所述的制备方法，其特征在于：R2选自取代苯环，取代苯环上的取代基团为C1-C4烷基、卤代C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、卤素、羟基。
11.权利要求8至9任一项所述的制备方法，其特征在于：R2为未取代苯环。
12.权利要求1-7任一项所述化合物在制备治疗由PA_N介导的疾病的药物中的用途。
13.权利要求1-7任一项所述化合物在制备抗感冒药物中的应用。
14.一种药物组合物，其特征在于：包含权利要求1-7任一项所述的化合物以及药学上的辅料，制成可用于给药的剂型。
15.权利要求14所述的药物组合物，其特点在于：所述剂型选自片剂、泡腾剂、胶囊、注射剂、冻干粉针剂、丸剂、颗粒剂、脂质体、贴剂、喷雾剂、吸入剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。
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|---|---|---|---|---|
| CN1354745A (zh) * | 1999-06-08 | 2002-06-19 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 乙磺酰基哌啶衍生物 |
| CN101027279A (zh) * | 2004-05-21 | 2007-08-29 | 哈佛大学校长及研究员协会 | 四环素及其类似物的合成 |
| WO2011113579A2 (en) * | 2010-03-16 | 2011-09-22 | European Molecular Biology Laboratory (Embl) | Influenza a 2009 pandemic h1n1 polypeptide fragments comprising endonuclease activity and their use |
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