CN103040746B

CN103040746B - 一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂

Info

Publication number: CN103040746B
Application number: CN201210549714.9A
Authority: CN
Inventors: 王平
Original assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HAINAN SHENGXIN MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2014-07-02
Anticipated expiration: 2032-12-17
Also published as: CN103040746A

Abstract

本发明涉及一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂及其制法。该脂质体注射剂由特定重量配比的盐酸帕洛诺司琼、大豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、大豆甾醇、吐温80和海藻糖制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；本发明提高了制剂产品的质量，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，减少了毒副作用，明显提高了疗效；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

Description

一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂及其制法，属于药物制剂技术领域。

背景技术

盐酸帕洛诺司琼，化学名称：2-[(S)-1-氮杂双环[2.2.2]辛烷-3-基]-2，3，3a(S)，4，5，6-六氢-1H-苯并异喹啉-1-酮盐酸盐，分子式：C₁₉H₂₄N₂O·HCl，分子量：332.87，其结构式如下：

酸帕洛诺司琼为白色或类白色结晶性粉末，无嗅无味；在水中溶解，难溶于乙醇。其是一种高效、高选择性的5-HT3受体拮抗剂，是FDA批准的第四个用于治疗化疗药物引起的急性恶心与呕吐的5-HT3受体拮抗剂，是第一个批准可用于中度致呕药物引起的延迟性恶心与呕吐的药物。该药由瑞士Helsinn Healthcare开发成功，于2003年7月获得美国FDA批准上市。

国家专利CN 1965829A公开了一种帕洛诺司琼注射液，含有帕洛诺司琼的可药用盐及药用辅料，同时加入注射用水制得。所述的药用辅料为氯化钠。在该注射液中帕洛诺司琼的浓度为0.01-20mg/ml，优选0.05mg/ml。注射液的PH范围是6.00-8.00.制备方法是将盐酸帕洛诺司琼和辅料氯化钠，同时加入一定量的注射用水，经过超滤、除热源、滤膜过滤、灌封、灭菌得成品。

国家专利CN 101057827A公开了一种帕洛诺司琼注射液及其制备方法。该注射液的主要组成为：盐酸帕洛诺司琼0.01-0.05mg/ml、葡萄糖45-55mg/ml、甘氨酸0.2-10mg/ml。所述注射液的制备方法包括如下步骤：(1)甘氨酸溶解于适量的注射用水中，调节PH值，加注射用水至所需量；(2)将所得溶液用微孔滤膜滤过；(3)将无菌滤过后的溶液进行分装，充入惰性气体或二氧化碳，压塞，加盖。

由专利可看出，处方与工艺都做了精心研究和筛选，但是依然逃脱不了普通注射液制剂稳定性低的问题。

本发明开发了一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射液，不仅能提高其稳定性，还能提高其生物利用度，降低毒副作用。

脂质体是将药物包封于磷脂亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：

（1）具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；

（2）增加药物的溶解性，提高制剂质量；

（3）具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；

（4）具有对活性药物成分的保护作用；

（5）降低了药物毒性。

脂质体（Liposome）最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层都是均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和单室脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

由于目前普通盐酸帕洛诺司琼注射液的许多不足，所以对于盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂存在着需求。

发明内容

为了形成品质优良的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，重要的是寻找能与盐酸帕洛诺司琼良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的盐酸帕洛诺司琼、大豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、大豆甾醇、吐温80和海藻糖能制成盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的盐酸帕洛诺司琼的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的盐酸帕洛诺司琼相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

本发明的目的在于提供一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其由以下重量配比的成份制成：

其中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为2∶1-3∶1，

大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为5∶1-7∶1。

本发明的另一目的在于提供上述盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）将胆固醇、大豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、大豆甾醇和吐温80溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸帕洛诺司琼，不断搅拌下加入海藻糖；

（4）快速冷冻，然后恢复到室温，定容搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，即得盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂。

根据本发明提供的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂通过选择适当的原料成分并采用合适的制备方法获得，其中脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高，所得盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的品质优良。

附图说明

图1示出盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。

其中：

上市例

实施例1

实施例2

实施例3

对比例1对比例2

对比例3

具体实施方式

以下对本发明进行详细描述，本发明的特点和优点会随着这些描述而变得更为清楚。

根据本发明的一方面，提供一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其由以下重量配比的成份制成：

优选地，提供一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其由以下重量配比的成份制成：

更优选地，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为2∶1-5∶2，

大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为6∶1-7∶1。

在本发明中，根据活性成分盐酸帕洛诺司琼的特点，本发明人通过研究发现，豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油的组合特别适于作为基础磷脂成膜材料，通过同时它们与大豆甾醇和吐温80结合，能够得到包封率高、稳定性高的脂质体注射剂。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质劣化。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸帕洛诺司琼而言，大豆磷脂酰丝氨酸的用量为10-50重量份。如果大豆磷脂酰丝氨酸的用量低于10重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果大豆磷脂酰丝氨酸的用量高于50重量份，则作为药物活性成分的盐酸帕洛诺司琼的包封率下降，注射液的品质以及疗效降低。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸帕洛诺司琼而言，磷脂酰甘油的用量为10-20重量份。如果磷脂酰甘油的用量低于10重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果磷脂酰甘油的用量高于20重量份，则作为药物活性成分的盐酸帕洛诺司琼的包封率下降，注射液的品质以及疗效降低。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，大豆甾醇以及吐温80用于调节脂质体的膜稳定性。

大豆甾醇（soybean sterol，SS）是大豆甾醇葡萄糖苷去葡萄糖残基的水解产物，所述大豆甾醇葡萄糖苷是从经提炼豆油的大豆残渣中分离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物。作为一种天然产物，大豆甾醇来源丰富，价格便宜。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸帕洛诺司琼而言，大豆甾醇的用量为5-20重量份。如果大豆甾醇的用量低于5重量份，所得脂质体的稳定性明显降低；如果大豆甾醇的用量高于5重量份，则药物活性成分盐酸帕洛诺司琼的包封率也会随之下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为3∶1-2∶1，在此范围内能形成稳定的盐酸帕洛诺司琼脂质体。如果大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比低于2∶1，膜稳定性降低，盐酸帕洛诺司琼易于渗漏；如果大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比高于3∶1，脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的盐酸帕洛诺司琼易于释放。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，相对于1重量份的盐酸帕洛诺司琼而言，吐温80的用量为4-10重量份。如果吐温80的用量低于4重量份，无法形成稳定的脂质体；如果吐温80的用量高于10重量份，则脂质体的易于渗漏。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为5∶1-7∶1。如果大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量低于5∶1，膜稳定性过低，盐酸帕洛诺司琼易于渗漏；如果大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量高于7∶1，脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的盐酸帕洛诺司琼易于释放。

特别地，当大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为2∶1-5∶2，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为6∶1-7∶1时，脂质体的膜稳定性最强，毒性最低。

在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，使用海藻糖作为赋形剂，用于形成稳定的注射剂。在本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂中，海藻糖能有效保护脂质体颗粒的形态和稳定性，进一步提高脂质体注射剂的稳定性。

在本发明中，当使用上述特定量的盐酸帕洛诺司琼、大豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、大豆甾醇、吐温80和海藻糖时，可以得到品质优良的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其包封率和稳定性都很高，粒径均一，毒性低，生物利用度高。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

本发明的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其盐酸帕洛诺司琼的规格为：5ml∶0.25mg（注射液体积：盐酸帕洛诺司琼重量）。

根据本发明的另一方面，提供上述盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

在根据本发明的方法中，在步骤（1）中，所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种，优选为pH为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液。

在根据本发明的方法中，在步骤（3）中，所述的熔融状态脂质体的温度为60℃。

在根据本发明的方法中，在步骤（4）中，所述的快速冷冻的温度为-40℃。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

实施例

以下通过示例性具体实例进一步描述本发明。不过，这些示例性实例仅是说明性的，并不对本发明的范围构成限制。

实施例1 盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将大豆磷脂酰丝氨酸6.5g、磷脂酰甘油2.5g、大豆甾醇3.25g和1.5g吐温80溶于500ml pH为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸帕洛诺司琼0.25g，不断搅拌下加入3.25g海藻糖；

（4）-40℃快速冷冻，然后恢复到室温，加注射用水定容到5000ml搅拌均匀，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装（5ml/瓶），即得1000瓶盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂。

实施例2 盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将大豆磷脂酰丝氨酸5g、磷脂酰甘油2.5g、大豆甾醇2.5g和1.25g吐温80溶于500ml pH为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸帕洛诺司琼0.25g，不断搅拌下加入2.5g海藻糖；

实施例3 盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备

所用原料如下：

制备过程如下：

（1）将大豆磷脂酰丝氨酸10g、磷脂酰甘油5g、大豆甾醇5g和2.5g吐温80溶于500ml pH为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸帕洛诺司琼0.25g，不断搅拌下加入3.75g海藻糖；

对比例1-3

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂：

表1 对比例1-3中所用成分

成份

对比例1

对比例2

对比例3

盐酸帕洛诺司琼	0.25g	0.25g	0.25g
				胆固醇	3.25g	2.5g	/
大豆磷脂酰丝氨酸	6.5g	/	20g
				磷脂酰甘油	3.5g	2.5g	5g
大豆甾醇	3.25g	/	6g
				蛋黄卵磷脂	/	5g	/
吐温80	2g	1.25g	3g
				海藻糖	3.25g	2.5g	6g

其中，“/”表示未使用。

试验例1 脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2 脂质体粒径检测结果

编号	平均粒径	外观
			实施例1	242.8nm	球状，均匀
对比例1	445.6nm	不均匀，杂乱
			实施例2	222.7nm	球状，均匀
对比例2	426.4nm	不均匀，杂乱
			实施例3	207.5nm	球状，均匀
对比例3	452.3nm	不均匀，杂乱

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得盐酸帕洛诺司琼脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的盐酸帕洛诺司琼脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得盐酸帕洛诺司琼脂质体的外观劣于本发明，平均粒径大出很多。

试验例2 包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，用乙腈水溶液溶解，HPLC法测盐酸帕洛诺司琼含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3 包封率测定结果

编号	实施例1	对比例1	实施例2	对比例2	实施例3	对比例3
							包封率	83.3%	51.4%	86.5%	50.9%	85.7%	51.6%

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3 稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和上市盐酸帕洛诺司琼注射液（批号：20101103，齐鲁制药（海南）有限公司，生产地址：海口市国家高新区南海大道273号-A）分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，结果示于下表4中。

表4 加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂和对比例的含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4 渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5 渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射液渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂具有更高的稳定性。

试验例5 血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射液，以及市售盐酸帕洛诺司琼注射液（批号：20101103，齐鲁制药（海南）有限公司，生产地址：海口市国家高新区南海大道273号-A），规格为5ml：0.25mg盐酸帕洛诺司琼注射液。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂、对比例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂和市售盐酸帕洛诺司琼注射液的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂和市售盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂相比，本发明实施例1-3中制备的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂具有以下优点：在体内的消除速度更慢，在体循环中分布时间延长，达到了缓释效果，生物利用度提高了。

工业实用性

本发明提供的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，因这些均落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims

1.一种盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其由以下重量配比的成份制成：

其中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为2:1-3:1，

大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为5:1-7:1。

2.根据权利要求1所述的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与大豆甾醇的重量比为2:1-5:2。

3.根据权利要求1或2所述的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂，其中，大豆磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油的重量之和与吐温80的重量比为6:1-7:1。

4.一种根据权利要求1至3中任一项所述的盐酸帕洛诺司琼脂质体注射剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）将胆固醇、大豆磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、大豆甾醇和吐温80溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体，所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种；

5.根据权利要求4所述的方法，在步骤（1）中，所述的缓冲盐溶液为pH为7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液。

6.根据权利要求4所述的方法，在步骤（3）中，所述的熔融状态脂质体的温度为60℃。

7.根据权利要求4所述的方法，在步骤（4）中，所述的快速冷冻的温度为-40℃。