CN103030713A - 一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法，属于生物化学领域。本发明通过环氧氯丙烷等活化剂活化β-葡聚糖2000，并将之与烟酸及烟酸衍生物甲氧吡嗪偶联，在小鼠实验中具有显著的降血脂能力。本发明易操作、成本低、环境污染小、适于大规模应用。

Description

一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法，属于生物化学领域。

背景技术

葡聚糖，又称右旋糖酐，为一种多糖。其存在于某些微生物在生长过程中分泌的粘液中。葡聚糖在输血过程中可代替一部分全血，作为血浆体积的扩充剂（称为代血浆）。其在医药、食品、化工等诸多领域的应用研究取得了重大进展。针对患者，葡聚糖降血脂的作用已有研究报告。

烟酸也称作维生素B3，它是人体必需的13种维生素之一，是一种水溶性维生素，属于维生素B族。烟酸在人体内转化为烟酰胺，烟酰胺是辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ的组成部分，参与体内脂质代谢，组织呼吸的氧化过程和糖类无氧分解的过程。当其用量超过作为维生素作用的剂量时，可有明显的调节血脂的作用。烟酸调节血脂的疗效及剂量与服药前的血脂水平有关，血脂水平异常较明显，服药剂量宜大，疗效也更明显。此外，烟酸衍生物如甲氧吡嗪及烟酸肌醇酯等也被广泛的用作降血脂药物。

环氧氯丙烷是一种常用的活化试剂，能够作用于羟基、氨基、羧酸基、巯基等活性基团。本发明中使用环氧氯丙烷活化葡聚糖的羟基，使用环氧基与烟酸类化合物进行交联。

发明内容

本发明的目的是提供制备小分子葡聚糖-烟酸聚合物的方法，本发明设计巧妙、条件温和、易操作、成本低、环境污染小、适于大规模应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案：一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）环氧氯丙烷法活化β-葡聚糖2000；

（2）利用烟酸类化合物对活化的β-葡聚糖2000进行修饰；

（3）修饰后产物使用Sephadex G-50进行分子筛层析去除未反应物质；得到低分子量葡聚糖-烟酸聚合物，所得产物在小鼠实验中具有显著的降血脂能力，均比原始的未修饰β-葡聚糖及烟酸类物质具有较高的降血脂能力。

较佳地，在步骤（1）中，环氧氯丙烷与葡聚糖羟基摩尔比例为6︰1。

较佳地，步骤（1）所述反应在0.8M NaOH溶液中进行，温度为40℃。

较佳地，在步骤（2）中，烟酸类化合物与β-葡聚糖2000环氧基摩尔比例为2︰1。

较佳地，步骤（2）所述反应pH值维持在12，温度为50℃。

所述制备的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物在小鼠实验中具有显著的降血脂能力，降血脂能力均优于未修饰的β-葡聚糖及烟酸类化合物。

本发明的有益效果：

1、本发明以天然葡聚糖为基质，通过环氧氯丙烷对其羟基进行活化；

2、本发明通过对葡聚糖的修饰，优化了其降血脂的能力。

具体实施方式

为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明。

    实施例1  环氧氯丙烷与葡聚糖羟基比例对修饰后环氧基密度的影响：

将β-葡聚糖2000溶解于0.8M NaOH溶液，达到20g/L，按照葡聚糖与环氧氯丙烷羟基摩尔比 (1:1、1:2、1:4、1:6、1:8、1:10) 加入环氧氯丙烷，40℃、50 r/min振荡固定1-4小时。混合物加入预冷的乙醇，静止10 min后12000 rpm离心5 min，取出沉淀后，用预冷的乙醇清洗3次后真空干燥，活化的葡聚糖用三蒸水溶解，测定环氧基密度，结果见表1

表1环氧氯丙烷与葡聚糖羟基摩尔比例对修饰后环氧基密度的影响

β-葡聚糖2000与环氧氯丙烷羟基摩尔比	环氧基密度(μmol/g)
		1:1	0.3
1:2	0.7
		1:4	1.1
1:6	1.5
		1:8	1.4
1:10	1.3

实施例2  制备得到的葡聚糖-烟酸聚合物对小鼠血脂的影响：

建立高血脂症小鼠模型，取雄性昆明种小鼠10 只，饲喂自行配制的高脂饲料(高脂饲料每kg配方：由840 g 基础饲料、100 g市售猪油、10 g胆固醇、50 g鸡蛋黄组成，另加适量的自来水充分搅拌混匀，制成颗粒状) 。 6周后在形态学上和血清中分别检测，结果与正常组小鼠相比，高脂血症模型组小鼠质量及血清中总胆固醇含量均明显升高。

将雄性昆明种小鼠随机分为4 组，分别为正常组：小鼠喂以基础饲料，并灌胃9 g / L NaCl溶液；高脂血症模型组：小鼠喂以自行配制的高脂饲料，并灌胃9 g/ L NaCl 溶液；烟酸对照组：小鼠喂以高脂饲料，并灌胃15 g/ L 烟酸水剂；甲氧吡嗪对照组：小鼠喂以高脂饲料，并灌胃15 g/ L 甲氧吡嗪水剂；葡聚糖对照组：小鼠喂以高脂饲料，并灌胃20 g/ L 葡聚糖水剂；葡聚糖-烟酸组：小鼠喂以高脂饲料，并灌胃15 g/ L 葡聚糖-烟酸水剂；葡聚糖-甲氧吡嗪组：小鼠喂以高脂饲料，并灌胃15 g/ L 葡聚糖-甲氧吡嗪水剂；每组10 只小鼠，各组小鼠均自由进食，水剂及NaCl 溶液灌胃量均为0.4 mL/ ( d 只) , 持续饲养6 周。各组小鼠饲养6 周末禁食12 h 后，眼球取血，分离出血清，测定各组小鼠血清中总胆固醇( T C) 、高密度脂蛋白胆固醇脂( HDL-C)结果见表2。

表2 葡聚糖-烟酸聚合物对小鼠血脂的影响

组别	TC/（mmol/L）	HDL-C/（mmol/L）
			正常组	3.25±0.19	2.09±0.14
高脂血症模型组	6.32±0.22	2.67±0.17
			烟酸对照组	5.74±0.25	2.51±0.15
葡聚糖对照组	5.87±0.16	2.59±0.13
			葡聚糖-烟酸组	4.43±0.21	2.32±0.24
葡聚糖-甲氧吡嗪组	4.51±0.18	2.39±0.19

从以上实施例可以看出，采用本发明的方法葡聚糖-烟酸聚合物在小鼠模型中的降血脂能力对比未修饰的葡聚糖以及烟酸类物质，得到了显著提高。TC（mmol/L）从6.32降至4.5左右。因此，采用本发明可以显著提葡聚糖的降血脂能力，为该其进一步应用提供了坚实的基础。

综上，本发明的葡聚糖-烟酸聚合物方法设计巧妙、条件温和、易操作、成本低、环境污染小、适于大规模应用。

在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书应被认为是说明性的而非限制性的。

Claims (1)

1.一种具有降血脂活性的低分子量葡聚糖-烟酸聚合物的制备方法，其特征在于步骤为：

（1）环氧氯丙烷法活化β-葡聚糖2000：使用6倍β-葡聚糖2000羟基的环氧氯丙烷，在0.8M NaOH的溶液中进行活化，温度为40℃；

（2）利用烟酸类化合物对活化的β-葡聚糖2000进行修饰：将步骤（1）所得的葡聚糖2000活化产物与两倍环氧基当量的烟酸或烟酸衍生物甲氧吡嗪偶联，修饰物与β-葡聚糖2000环氧基摩尔比例为2︰1，修饰反应条件为pH12，温度为50℃；

（3）修饰后产物使用Sephadex G-50进行分子筛层析去除未反应物质；得到低分子量葡聚糖-烟酸聚合物，所得产物在小鼠实验中具有显著的降血脂能力，均比原始的未修饰β-葡聚糖及烟酸类物质具有较高的降血脂能力。