CN102786934B - 一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种益生菌型土壤调理剂的生产方法，包括：（1）将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到各自的种子液，（2）将生产用培养基加入发酵罐内进行灭菌、冷却；（3）将所述巨大芽孢杆菌种子液接入发酵罐，在通氧搅拌条件下培养，再接入所述枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，继续培养，获得所述益生菌型土壤调理剂。本发明还公开了通过以上方法得到的益生菌型土壤调理剂。本发明所采用的方法科学合理，生产工艺步骤简单易行，具有很强的工业化实施性。对促进农业生产的发展有重要的意义。
Description
技术领域
本发明属于农业生物工程技术领域，涉及农用微生物肥料或生物有机肥料生产技术，尤其涉及一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法。
背景技术
上世纪五、六十年代，化学肥料和农药的使用使我国农业的发展取得了长足的进步，也给农民带来了巨大的效益。但是，化学肥料和农药的大量和超量使用，已经给土壤、环境乃至生态系统造成了不可逆转的伤害。比如土壤板结；土壤持水力下降；土壤中肥力不均衡，肥力下降；投入与产出比例下降。更为严重的是，这些化学性物质会在动植物体内蓄积，造成动植物原料有毒有害物质超标，严重影响农产品品质。与此同时，残留的化学物质通过土壤的地下水系统，污染水资源，在生态系统循环中造成不可逆转的破坏。
化学肥料造成的损害已众所周知，在此情况下，生物肥料的应用成为农业发展中的热点。其中微生物肥料是近几十年发展起来的一种新型肥料。微生物肥料是指含有活性微生物的特定制品。微生物肥料的主要优点是能改良土壤、不污染环境、无毒副作用，是生产“绿色食品”的理想肥料。将微生物肥料应用于生产，可增进土壤肥力，协助植物吸收营养，增强植物抗病及抗旱能力，节约能源，降低生产成本，减少环境污染。
巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)是一种植物根系促生细菌，也是微生物肥料中的常用菌种。它是一种解磷促钾细菌，对卵磷脂、土壤中植物无法直接利用的吸附态有机磷、无机磷有明显的分解作用，能提高土壤肥力，对固氮具有增效作用，促进作物增产。巨大芽孢杆菌可降低水体中的有机氮、磷，还能一定程度降解工业废水中的氰化物等，对水体环境中的生态平衡起到一定的作用。另外，巨大芽孢杆菌可产亚硝酸还原酶，降低食品中亚硝酸盐含量。所以，巨大芽孢杆菌的应用前景非常广阔。
枯草芽孢杆菌(Bacillus substilus)是一种被美国食品与药品管理局(FDA)认定为GRAS(一般公认安全)的革兰氏阳性细菌,广泛存在于自然界,是植物根际微生态的优势菌株,能分泌多种对植物病原真菌具有拮抗作用的次生代谢产物，如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；同时自身生长过程中合成多种活性酶以及有机酸、维生素、氨基酸类物质，具有促进作物生长，分解释放土壤中结合养分，降低土壤pH，提高作物抗性等优点，是一种极具应用价值的生防菌。
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是一种革兰氏阳性细菌,在自然界中分布非常广泛，生理特性也丰富多样，是土壤和植物微生态优势种群之一。在一定条件下可以产生抗逆性内生孢子的化能异养型菌。能够产生肽类拮抗物质，因此命名为杆菌肽，是一种强杀菌剂，能强烈抑制G+菌，同时对部分G-菌也具有较强的抑制作用。它可产生多种抗生素、抗菌蛋白、小分子细菌素、溶菌酶等，对多种动、植物及人类病原菌都起到很好的抑制作用，而且地衣芽孢杆菌还具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶类活性，国外还有报道指出，地衣芽孢杆菌可以产生苯乙酸一类的抗菌性物质。地衣芽孢杆菌在医药方面的研究最为成熟，已形成了较完整的生产工艺，而且在医药商品整肠生的应用也已较为成熟。但在防止农作物病害、饲料的加工、环境污染治理等方面的研究，处于刚刚起步阶段，发展空间将会非常广阔。
目前阻碍微生物菌剂工农业应用的瓶颈问题是，利用传统的微生物发酵方法，获得的微生物菌剂有效活菌数偏低，菌种单一，功能单一，应用于工农业生产中效果不明显，如果要提高有效活菌数量，需要冻干、浓缩等方法，设备等成本的投入偏高，最终产品价位高，不容易被使用者接受；制作成颗粒应用，造粒时烘干温度高，导致活菌大量死亡，应用效果差。
国家发明专利：一种液态复合微生物菌肥及其生产方法(公开号：CN1397521A)公开了一种液体剂型，含有圆褐固氮菌、巨大芽孢杆菌和硅酸盐细菌，有效活菌数量为8亿个/毫升。此发明中，直接将三种菌剂的浓缩液与营养物质按一定比例混合，包装形成产品。那么问题是三种菌剂的浓缩液如何获得，菌剂的活菌浓度能够达到多少，造成此发明专利可实施性不强，而且其中活菌数量也偏低，使用效果会受到影响。另一项国家发明专利：多元复合微生物菌肥(专利号：ZL200610134541.9)，含有10种微生物，共接种5次，培养52h，获得最终产品。此发明的问题一是反复接种容易造成菌液污染，一旦污染菌大量繁殖，势必影响目标菌种的活力与数量，导致产品质量问题；二是培养时间长，获得最后的菌液需要52h的发酵，时间与能耗成本均偏高。
针对上述问题，本发明提供一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法，在低能耗条件下，短时间发酵，获得高密度的益生菌型复合微生物菌肥。
发明内容
本发明提供一种益生菌型土壤调理剂及其生产方法，解决当前微生物菌肥领域菌剂浓度低，菌种单一，功能单一，应用效果差的问题。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种益生菌型土壤调理剂的生产方法，包括：
(1)生产用益生菌种子液的制备：将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为8-12h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为6-10h；
(2)生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，115-121℃灭菌30-45分钟，冷却至30-35℃；
(3)接种及发酵：将所述巨大芽孢杆菌种子液按照与所述生产用培养基的体积比为2-5％的比例接入发酵罐，在29-33℃，通氧搅拌条件下培养10-18h；然后将发酵温度调整至33-36℃，接入所述枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与所述生产用培养基总体积比为4-10％的浓缩灭菌培养基，继续培养7-16h，获得所述益生菌型土壤调理剂。
具体操作如下：
(1)生产用益生菌种子液的制备：以牛肉膏蛋白胨培养基作为种子发酵培养基，将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为8-14h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为6-12h；备用。
作为优选种子培养时间，巨大芽孢杆菌种子培养10h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌种子分别培养8h。
(2)生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，115-121℃灭菌30-45分钟，冷却至30-35℃；
所述生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖5-15g，乳糖5-12g，麦芽糖1-5g，可溶性淀粉1-5g，蛋白胨5-15g，酵母膏2-9g，尿素1-5g，NaCl 3-8g，K2SO4 0.4-1.0g，K2HPO4 0.5-1.5g，MgSO4·7H2O 2-3.5g，CaCl2 0.8-1.5g，CaCO3 4-6.5g，余量为水；pH7.5-8.2。
作为优选，所述生产用培养基配方为，每升生产用培养基中含有：蔗糖9-11g，乳糖7-8g，麦芽糖2-3g，可溶性淀粉2-3g，蛋白胨9-11g，酵母膏5-6g，尿素2-3g，NaCl 5-6g，K2SO4 0.6-0.75g，K2HPO4 0.9-1.1g，MgSO4·7H2O2.5-2.75g，CaCl2 1.0-1.2g，CaCO3 5-5.25g，余量为水；pH7.9-8.1。
优选培养基既能给菌种生长提供足够的碳源、氮源以及无机盐，同时通过加入的CaCO3控制发酵过程中的pH不至于过低，加入的CaCl2，同时具有促进菌体生长及产芽孢作用，使得获得的产品有效活菌数高，孢子量大，保证后期加工，以及应用到工农业生产中的良好效果。
(3)接种及发酵：将所述巨大芽孢杆菌种子液按照与所述生产用培养基的体积比为2-5％的比例接入发酵罐，在29-33℃，通氧搅拌条件下培养10-18h；然后将发酵温度调整至33-37℃，接入所述枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与所述生产用培养基总体积比为4-10％的浓缩灭菌培养基，继续培养7-16h，获得所述益生菌型土壤调理剂；
接入的所述枯草芽孢杆菌种子液与所述地衣芽孢杆菌种子液体积比为1:0.25-4；所述枯草芽孢杆菌种子液与所述地衣芽孢杆菌种子液的接入总量与所述生产用培养基体积比为4-8％；
加入的所述浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖30-50g，乳糖30-40g，麦芽糖5-15g，可溶性淀粉5-15g，蛋白胨25-35g，酵母膏20-30g，NaCl 5-10g，K2HPO4 0.8-1.8g，MgSO4·7H2O 2-4g，CaCO35-15g，余量为水；pH7.5-8.2。
作为优选，所述巨大芽孢杆菌种子液接入所述生产用培养基的体积比为3-4％，培养温度为30-31℃，培养时间为11-12h。
所述将发酵温度调整至33-37℃，作为优选，将发酵温度调整至34-35℃。
作为优选，所述枯草芽孢杆菌种子液与所述地衣芽孢杆菌种子液的接入总量与所述生产用培养基体积比为5-6％，加入的所述浓缩灭菌培养基与所述生产用培养基总体积比为6-7％，继续培养时间为9-11h。
作为优选，加入的所述浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖40-42g，乳糖34-35g，麦芽糖7-8g，可溶性淀粉7-8g，蛋白胨29-31g，酵母膏24-26g，NaCl7-7.5g，K2HPO4 1.2-1.4g，MgSO4·7H2O 3-3.2g，CaCO3 7-7.5g，余量为水；pH7.8-8.0。
在所述接种及发酵条件下培养，保证最终获得的产品中三种益生菌的数量，同时保证三种芽孢杆菌都会产生大量的芽孢，确保最终产品的应用效果。
本发明还提供了一种所述的益生菌型土壤调理剂的生产方法制备的益生菌型土壤调理剂，所述益生菌型土壤调理剂中有效活菌数总数为50-100亿个/毫升，芽孢率在90-100％。每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
本发明的优点：
1.所使用的微生物均为益生菌，产品绿色无公害，适宜于绿色可持续农业生产施用。
2.采用混菌发酵，获得的复合型微生物菌肥-益生菌型土壤调理剂，有效活菌数高，功能强大，应用效果好。
3.益生菌型土壤调理剂产品应用于农业生产，除了具有增强土壤肥力，改善土壤环境的作用外，还具有强大的解药害，抗重迎茬，抗盐碱，提高农作物抗病性的特点，应用前景广阔。
4.工艺步骤简单，生产周期短，获得的菌肥活力强，降低成本，适宜于工厂化生产。
具体实施方式
实施例1：
生产用益生菌种子液的制备：以牛肉膏蛋白胨培养基作为种子发酵培养基，将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为12h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为10h。
生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖15g，乳糖12g，麦芽糖5g，可溶性淀粉5g，蛋白胨15g，酵母膏9g，尿素5g，NaCl 8g，K2SO4 1.0g，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 3.5g，CaCl2 1.5g，CaCO3 6.5g，余量为水；pH8.0。121℃灭菌45分钟，冷却至34℃。
接种及发酵：将培养12h的巨大芽孢杆菌的种子液按照与生产用培养基体积比为5％的比例接入发酵罐，在33℃，通氧搅拌条件下培养16h；然后将发酵温度调整至35℃，接入枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与生产用培养基总体积比为10％的浓缩灭菌培养基，继续培养12h；接入的枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，二者体积比例为3:7，接入总量与生产用培养基体积比为8％；加入的浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖50g，乳糖40g，麦芽糖15g，可溶性淀粉15g，蛋白胨35g，酵母膏30g，NaCl 10g，K2HPO4 1.8g，MgSO4·7H2O 4g，CaCO3 15g，余量为水；pH8.2。
获得最终益生菌型土壤调理剂菌肥产品：产品中有效活菌数总数63亿个/毫升，芽孢率96.5％。每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
实施例2：
生产用益生菌种子液的制备：以牛肉膏蛋白胨培养基作为种子发酵培养基，将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为8h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为6h。
生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖8g，乳糖8g，麦芽糖2g，可溶性淀粉3g，蛋白胨6g，酵母膏5g，尿素3g，NaCl 4g，K2SO4 0.44g，K2HPO4 0.8g，MgSO4·7H2O 2g，CaCl2 0.8g，CaCO3 4g，余量为水；pH8.2。115℃灭菌45分钟，冷却至31℃。
接种及发酵：将培养8h的巨大芽孢杆菌的种子液按照与生产用培养基体积比3％的比例接入发酵罐，在30℃，通氧搅拌条件下培养10h；然后将发酵温度调整至33℃，接入枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与生产用培养基总体积比为5％的浓缩灭菌培养基，继续培养8h；接入的枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，二者体积比例为7:3，接入总量与生产用培养基体积比为4％；加入的浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖30g，乳糖30g，麦芽糖5g，可溶性淀粉5g，蛋白胨25g，酵母膏20g，NaCl 5g，K2HPO4 0.8g，MgSO4·7H2O 2g，CaCO35g，余量为水；pH8.2。
获得最终益生菌型土壤调理剂菌肥产品：产品中有效活菌数总数55亿个/毫升，芽孢率96.7％。每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
实施例3：
生产用益生菌种子液的制备：以牛肉膏蛋白胨培养基作为种子发酵培养基，将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为10h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为8h。
生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖10g，乳糖10g，麦芽糖3g，可溶性淀粉3g，蛋白胨10g，酵母膏6g，尿素2g，NaCl 5g，K2SO4 0.7g，K2HPO4 1.0g，MgSO4·7H2O 2.5g，CaCl2 1.1g，CaCO3 5g，余量为水；pH8.0。121℃灭菌30分钟，冷却至32℃。
接种及发酵：将培养10h的巨大芽孢杆菌的种子液按照与生产用培养基体积比4％的比例接入发酵罐，在31℃，通氧搅拌条件下培养13h；然后将发酵温度调整至34℃，接入枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与生产用培养基总体积比为5％的浓缩灭菌培养基，继续培养10h；接入的枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，二者体积比例为1:1，接入总量与生产用培养基体积比为6％；加入的浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖40g，乳糖35g，麦芽糖10g，可溶性淀粉10g，蛋白胨30g，酵母膏25g，NaCl 7g，K2HPO4 1.2g，MgSO4·7H2O3g，CaCO3 10g，余量为水；pH8.0。
获得最终益生菌型土壤调理剂菌肥产品：产品中有效活菌数总数72亿个/毫升，芽孢率94.8％。每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
实施例4：
生产用益生菌种子液的制备：以牛肉膏蛋白胨培养基作为种子发酵培养基，将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为8h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为8h。
生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖8g，乳糖10g，麦芽糖4g，可溶性淀粉2g，蛋白胨8g，酵母膏8g，尿素3g，NaCl 7g，K2SO4 0.4g，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 2g，CaCl2 1.0g，CaCO3 6.5g，余量为水；pH7.8。115℃灭菌42分钟，冷却至34℃。
接种及发酵：将培养8h的巨大芽孢杆菌的种子液按照与生产用培养基体积比5％的比例接入发酵罐，在33℃，通氧搅拌条件下培养12h；然后将发酵温度调整至34℃，接入枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与生产用培养基总体积比为8％的浓缩灭菌培养基，继续培养8h；接入的枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，二者体积比例为2:1，接入量与生产用培养基体积比为7％；加入的浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖35g，乳糖32g，麦芽糖7g，可溶性淀粉7g，蛋白胨28g，酵母膏20g，NaCl 5g，K2HPO4 1.5g，MgSO4·7H2O 3.3g，CaCO38g，余量为水；pH8.1。
获得最终益生菌型土壤调理剂菌肥产品：产品中有效活菌数总数67.5亿个/毫升，芽孢率96.7％。每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
实施例5：
田间使用效果：2011年-2012年分别在黑龙江省哈尔滨市香坊区光明村，黑龙江省绥化市宝山镇永发村，黑龙江省青冈县芦河镇拥军村，黑龙江省海伦市真理马铃薯种植合作社，黑龙江省双城市同心乡同德村等地做实验使用本发明的益生菌型土壤调理剂，供试作物为玉米、大豆、水稻、马铃薯、番茄、甜瓜、辣椒。
1、试验方法：
处理组：将发酵得到的益生菌型土壤调理剂原液稀释300倍，随种子浇灌种植，每亩用量800mL。其他田间管理正常进行。
对照组：不使用菌肥。其他田间管理与处理组一致。
随机区组设置，处理组与对照组均设置3次重复。玉米、大豆、水稻每组面积667m2；马铃薯、番茄、甜瓜、辣椒每组面积200m2。
2、测定指标
在作物生长过程中观察作物形态、生长势、病虫害情况，最后测产量。
3、结果
玉米
品种：先玉335。播种日期：2011年5月1日。收获日期：处理组，2011年9月20日；对照组，2011年9月30日。试验地点：黑龙江省青冈县芦河镇拥军村；土壤特点：盐碱地。
结论：处理组玉米5月9日出苗，出苗整齐，幼苗长势茁壮；比对照组生长速度快；且茎粗叶色深；生长期病害少；生长后期与对照组植株差别不大。处理组果实穗大且长，籽粒饱满，无秃尖。处理组比对照组早采收10天。产量调查，处理组产量为693kg/667m2，对照组为598kg/667m2；增产率为15.9％。
大豆
品种：东农42。播种日期：2011年5月8日。收获日期：处理组：2011年9月25日；对照组：2011年9月30日。试验地点：黑龙江省绥化市宝山镇永发村；土壤特点：重茬3年。
结论：处理组大豆5月18日出苗，出苗整齐，幼苗生长茁壮，且茎粗叶色深；开花期提前3天，花后结荚紧密；籽粒饱满。生长期病害少。处理组比对照组采收早5天。产量调查，处理组产量为257kg/667m2，对照组为222kg/667m2；增产率为15.8％。
水稻
品种：东农425。育苗日期：2011年4月9日。定植日期：2011年5月27日。收获日期：2011年9月30日。试验地点：黑龙江省绥化市宝山镇永发村；土壤特点：重茬3年。
结论：处理组水稻定植后，缓苗快，根系发达、分蘖多；植株健壮，叶色浓绿，病虫害少；产量调查，处理组产量为601kg/667m2，对照组为558kg/667m2；增产率为7.7％。
辣椒
品种：景椒1号。育苗日期：2011年3月9日。定植日期：2011年5月21日。开始采收日期：2011年7月27日。试验地点：黑龙江省双城市同心乡同德村；土壤特点：重茬7年。
结论：处理组辣椒定植后，缓苗快，幼苗快速转入生长状态；叶色深绿，且茎粗较对照组粗；单株面积大；首花期比对照早2天；果实开始采摘处理组比对照组早4天；坐果率高；结果期长；处理组果实商品性好，果实颜色浓绿、色泽光亮、外形整齐；处理组病害少；比对照组结束收获期晚10天。产量调查，处理组产量为2882kg/667m2，对照组为2331kg/667m2；增产率为23.6％。
马铃薯
品种：克新12。播种日期：2011年4月30日。收获期：2011年9月27日。试验地点：黑龙江省海伦市真理马铃薯种植合作社；土壤问题：上茬药害严重。
结论：处理组马铃薯幼苗出苗快，植株茁壮，叶片大，叶色深绿，且茎粗较对照组粗；首花期比对照早2天；生长期病害少；对照组受到上茬药害影响，苗弱，萎蔫，叶片黄；处理组结马铃薯多且大；果实商品性好，外形大且整齐；处理组与对照组同时采收。产量调查，处理组产量为2245kg/667m2，对照组为1783kg/667m2；增产率为25.9％。
西瓜
品种：景丰宝。播种日期：2011年5月15日。收获期：2011年8月12日。试验地点：黑龙江省双城市同心乡同德村；土壤问题：重茬2年。
结论：处理组西瓜，生长势强，抗病性强，座果率高；叶色深绿，茎粗较对照组粗；首花期比对照早3天；处理组果实商品性好，色泽光亮、外形整齐，糖度高。产量调查，处理组产量为5448kg/667m2，对照组为4305kg/667m2；增产率为26.6％。
番茄
品种：东农708。育苗日期：2012年1月5日，定植日期：2012年4月15日。开始采收期：2012年6月23日。试验地点：黑龙江省哈尔滨市香坊区光明村；土壤特征：大棚重茬7年。
结论：处理组番茄定植后，缓苗快，幼苗快速转入生长状态；叶色深绿，茎粗较对照组粗；单株面积大；首花期比对照早3天；果实开始采摘处理组比对照组早4天；坐果率高、果实大；处理组果实商品性好，果实颜色鲜艳、色泽光亮、外形整齐；处理组病害少。产量调查，处理组产量为7552kg/667m2，对照组为6281kg/667m2；增产率为20.2％。
本发明获得的益生菌型土壤调理剂产品不仅可以应用于调理土壤，同时也可以作为农作物叶面喷施抗病防病、微生物发酵启动剂、畜禽舍防病抗病脱臭等应用。
本发明不仅限于所述实施例的范围，凡依据本发明的生产方法进行适当演变，所得到的生产方法，均属本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种益生菌型土壤调理剂的生产方法，其特征在于，包括：
(1)生产用益生菌种子液的制备：将巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌分别接入种子培养基进行培养，得到巨大芽孢杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，其中巨大芽孢杆菌的培养时间为8-14h，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的培养时间均为6-12h；
(2)生产用培养基的制备及灭菌：将生产用培养基加入发酵罐内，115-121℃灭菌30-45分钟，冷却至30-35℃；
所述生产用培养基的配方如下，每升生产用培养基中含有：蔗糖5-15g，乳糖5-12g，麦芽糖1-5g，可溶性淀粉1-5g，蛋白胨5-15g，酵母膏2-9g，尿素1-5g，NaCl 3-8g，K2SO4 0.4-1.0g，K2HPO4 0.5-1.5g，MgSO4·7H2O 2-3.5g，CaCl2 0.8-1.5g，CaCO3 4-6.5g，余量为水；pH7.5-8.2；
(3)接种及发酵：将所述巨大芽孢杆菌种子液按照与所述生产用培养基的体积比为2-5％的比例接入发酵罐，在29-33℃，通氧搅拌条件下培养10-18h；然后将发酵温度调整至33-37℃，接入所述枯草芽孢杆菌种子液与地衣芽孢杆菌种子液，同时加入与所述生产用培养基总体积比为4-10％的浓缩灭菌培养基，继续培养7-16h，获得所述益生菌型土壤调理剂；
加入的所述浓缩灭菌培养基组成为：每升浓缩灭菌培养基含有：蔗糖30-50g，乳糖30-40g，麦芽糖5-15g，可溶性淀粉5-15g，蛋白胨25-35g，酵母膏20-30g，NaCl 5-10g，K2HPO4 0.8-1.8g，MgSO4·7H2O 2-4g，CaCO3 5-15g，余量为水；pH7.5-8.2。
2.如权利要求1所述的益生菌型土壤调理剂的生产方法，其特征在于：接入的所述枯草芽孢杆菌种子液与所述地衣芽孢杆菌种子液体积比为1:0.25-4。
3.如权利要求1所述的益生菌型土壤调理剂的生产方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌种子液与所述地衣芽孢杆菌种子液的接入总量与所述生产用培养基体积比为4-8％。
4.如权利要求1～3任一项所述的益生菌型土壤调理剂的生产方法制备的益生菌型土壤调理剂，其特征在于：所述益生菌型土壤调理剂中有效活菌数总数为50-100亿个/毫升，芽孢率在90-100％，每种菌的有效活菌数大于2亿个/毫升。
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