CN102725303A - 作为抗hcv化合物的4‘-叠氮基-核苷 - Google Patents

Abstract

其中R¹、R²和R³如本文所定义的式I的化合物是丙型肝炎病毒NS5b聚合酶抑制剂。还公开了用于治疗HCV感染和抑制HCV复制的组合物和方法。

Description

作为抗HCV化合物的4‘-叠氮基-核苷

发明领域

本发明提供了酰化的核苷，其是丙型肝炎病毒(HCV)RNA依赖性RNA病毒聚合酶抑制剂的前体药物。当口服施用时这些化合物从胃肠道被容易地吸收并且在血液中被有效地转变成原始的核苷。这些前体药物是RNA依赖性RNA病毒复制的抑制剂，并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制剂、用作HCV复制的抑制剂以及用于治疗哺乳动物的丙型肝炎感染。具体而言，本发明涉及酰化的嘧啶核苷化合物的应用，当所述核苷被口服施用时其提供改善的药物吸收。

发明背景

丙型肝炎病毒是全世界慢性肝疾病的主要原因。(Boyer，N.等，J.Hepatol.200032：98-112)。感染HCV的患者有发生肝硬化以及随后发生肝细胞癌的风险，因此HCV感染是肝移植的主要指征。

HCV已经被分类为黄病毒科病毒家族的成员，该病毒家族包括黄病毒属、瘟病毒属和包括丙型肝炎病毒的丙型肝炎病毒属(hapaceivirus)(Rice，C.M.，黄病毒科：病毒和它们的复制(Flaviviridae：The viruses and theirreplication)，Fields Virology，编辑：B.N.Fields，D.M.Knipe和P.M.Howley，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，Pa.，第30章，931-959，1996)。HCV是一种包膜病毒，含有约9.4kb的正义单链RNA基因组。该病毒基因组由一个高度保守的5’非翻译区(UTR)、一个编码约3011个氨基酸的多蛋白前体的长可读框和一个短3’UTR组成。

HCV的遗传学分析已经鉴定了6种主要基因型，其DNA序列的30％以上不同。超过30种亚型已被鉴别。在美国约70％的受感染个体具有1a型和1b型感染。1b型是亚洲最为普遍的亚型。(X.Forns和J.Bukh，Clinicsin Liver Disease 19993：693-716；J.Bukh等，Semin.Liv.Dis.1995 15：41-63)。不幸的是，1型感染比2型或3型基因型更难以治疗(N.N.Zein，Clin.Microbiol.Rev.，200013：223-235)。

病毒结构蛋白包括一种核壳核心蛋白(C)和两种包膜糖蛋白-E1和E2。HCV还编码两种蛋白酶-被NS2-NS3区编码的锌依赖性金属蛋白酶和在NS3区编码的丝氨酸蛋白酶。这些蛋白酶是前体多蛋白的特定区域裂解为成熟的肽所必需的。非结构蛋白5(NS5B)的羧基半段含有RNA依赖性RNA聚合酶。其余非结构蛋白NS4A和NS4B的功能以及NS5A(非结构蛋白5的氨基端半段)的功能依然是未知的。人们认为HCV RNA基因组编码的大多数非结构蛋白参与RNA复制。

目前，对于治疗HCV感染，可用的被批准的治疗数量有限。新的和现存的治疗HCV感染和抑制HCV NS5B聚合酶活性的治疗方法已被综述：R.G.Gish，Sem.Liver.Dis，199919：5；Di Besceglie，A.M.和Bacon，B.R.，Scientific American，10月：199980-85；G.Lake-Bakaar，慢性丙型肝炎病毒肝疾病的目前的和将来的疗法(Current and Future Therapy forChronic Hepatitis C Virus Liver Disease)，Curr.Drug Targ.Infect. Dis.20033(3)：247-253；P.Hoffmann等，最近的关于丙型肝炎病毒感染的实验性疗法的专利(1999-2002)(Recent patent on experimental therapy forhepatitis C virus infection(1999-2002))，Exp.Opin.Ther.Patents 200313(11)：1707-1723；M.P.Walker等，治疗慢性丙型肝炎的有前景的候选物(Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitis C)，Exp.Opin.Investing.Drugs 200312(8)：1269-1280；S.-L.Tan等，丙型肝炎治疗：目前的状况和新出现的策略(Hepatitis C Therapeutics：Current Status andEmerging Strategies)，Nature Rev.Drug Discov.20021：867-881；J.Z.Wu和Z.Hong，靶向于NS5B RNA依赖性RNA聚合酶的抗-HCV化学治疗(Targeting NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCVChemotherapy)，Currr.Drug Targ.-Infect.Dis.20033(3)：207-219。

目前，对于治疗HCV感染，可用的被批准的治疗数量有限。新的和现存的治疗HCV感染和抑制HCV NS5B聚合酶活性的治疗方法已被综述：R.G.Gish，Sem.Liver.Dis.，199919：5；Di Besceglie，A.M.和Bacon，B.R.，Scientific American，10月：199980-85；G.Lake-Bakaar，慢性丙型肝炎病毒肝疾病的目前的和将来的疗法(Current and Future Therapy forChronic Hepatitis C Virus Liver Disease)，Curr.Drug Targ.Infect.Dis.20033(3)：247-253；P.Hoffmann等，最近的关于丙型肝炎病毒感染的实验性疗法的专利(1999-2002)(Recent patent on experimental therapy forhepatitis C virus infection(1999-2002))，Exp.Opin.Ther.Patents 200313(11)：1707-1723；F.F.Poordad等，2000-2002年期间丙型肝炎治疗的发展(Developments in hepatitis C therapy during 2000-2002)，Exp.Opin.Emerging Drugs 20038(1)：9-25；M.P.Walker等，治疗慢性丙型肝炎的有前景的候选物(Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitisC)，Exp.Opin.Investing.Drugs 200312(8)：1269-1280；S.-L.Tan等，丙型肝炎治疗：目前的状况和新出现的策略(Hepatitis C Therapeutics：Current Status and Emerging Strategies)，Nature Rev.Drug Discov.20021：867-881；R.De Francesco等，接近丙型肝炎病毒治疗的新纪元：NS3-4A丝氨酸蛋白酶和NS5B RNA依赖性RNA聚合酶的抑制剂(Approaching anew era for Hepatitis C virus therapy：inhibitors of the NS3-4A serineprotease and the NS5B RNA-dependent RNA polymerase)，Antiviral Res.200358：1-16；Q.M.Wang等，丙型肝炎病毒编码的蛋白质：抗病毒治疗的靶标(Hepatitis C virus encoded proteins：targets for antiviral therapy)，Drugs of the Future 200025(9)：933-8-944；J.Z.Wu和Z.Hong，靶向于NS5B RNA依赖性RNA聚合酶的抗-HCV化学治疗(Targeting NS5BRNA-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCV Chemotherapy)，Curr.Drug Targ.-Infect.Dis.20033(3)：207-219。这些综述引用了目前在开发过程的各个阶段的化合物。与两种或三种针对相同或不同靶标的物质的组合治疗已经成为避免或减慢病毒抗药株发展的标准疗法，上述综述中所公开的化合物可与本发明的化合物一起用在组合治疗中，且通过引用的方式将这些综述全文合并入本文。

利巴韦林(1a；1-((2R，3R，4S，5R)-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-1H-[1，2，4]三唑-3-甲酰胺；

)是一种合成的非干扰素诱导的广谱抗病毒核苷类似物。利巴韦林具有对抗包括黄病毒科在内的多种DNA和RNA病毒的体外活性(Gary L.Davis.Gastroenterology 2000 118：S104-S114)。尽管在单一药物治疗中利巴韦林在40％患者中将血清氨基转移酶降低至正常水平，但它不降低血清HCV-RNA水平。利巴韦林还表现出显著的毒性并且已知会诱发贫血。利巴韦林是肌苷一磷酸脱氢酶的抑制剂。尽管利巴韦林未被批准在单一药物治疗中用于对抗HCV，但该化合物被批准与干扰素α-2a和干扰素α-2b一起用在组合治疗中。Viramidine 1b是一种前体药物，其在肝细胞中被转变为1a。

在近十年干扰素(IFN)已经被用于治疗慢性肝炎。IFN是在对病毒感染的应答中由免疫细胞产生的糖蛋白。确认了两种不同类型的干扰素：1型包括多种干扰素α和一种干扰素β，2型包括干扰素γ。1型干扰素主要由受感染的细胞产生并保护邻近细胞免受新感染。IFN抑制包括HCV在内的许多病毒的病毒复制，并且当用作丙型肝炎感染的唯一治疗时，IFN抑制血清HCV-RNA至不能被检测到的水平。此外，IFN使血清氨基转移酶水平正常化。不幸的是，IFN的作用是暂时性的。停止治疗导致70％的复发率，仅10％-15％表现出具有正常的血清丙氨酸转移酶水平的持久病毒学应答。(L.-B.Davis，同上)

早期IFN治疗的一个局限是蛋白质从血液中迅速清除。用聚乙二醇(PEG)对IFN进行的化学衍生化导致蛋白质具有大幅改善的药动学性质。

是轭合的干扰素α-2a和40kD分支单甲氧基PEG，

是轭合的α-2b和12kD单甲氧基PEG。(B.A.Luxon等，Clin.Therap.200224(9)：13631383；A.Kozlowski和J.M.Harris，J.Control.Release 200172：217-224)。

干扰素α-2a和干扰素α-2b目前已被批准作为单一药物治疗用于治疗HCV。

(Roche)是干扰素α-2a的重组形式。

(Roche)是干扰素α-2a的聚乙二醇化(即聚乙二醇修饰的)形式。

(Schering Corporation)是干扰素α-2b的重组形式，

(Schering Corporation)是α-2b的聚乙二醇化形式。

其它形式的干扰素α以及干扰素β、γ、τ和ω目前正处于用于治疗HCV的临床开发中。例如，正在开发的有InterMune的

(干扰素alphacon-1)、Viragen的

(天然干扰素)、HumanGenome Sciences的Ares-Serono的(干扰素β-1a)、BioMedicine的ω干扰素、Amarillo Biosciences的口服干扰素α以及InterMune的干扰素γ、干扰素τ和干扰素γ-1b。

用利巴韦林和干扰素α组合治疗HCV目前是最佳的疗法。组合利巴韦林和PEG-IFN(同下)在54％-56％的患者中导致持续的病毒应答。对于2型和3型HCV，SVR接近80％。(Walker，同上)不幸的是，该组合也产生造成临床挑战的副作用。抑郁、流行性感冒样症状和皮肤反应与皮下注射INF-α相关，溶血性贫血与用利巴韦林持续治疗相关。

目前处于临床前或临床开发中的用于治疗丙型肝炎病毒感染的其它大分子化合物包括：Schering-Plough的白介素-10、Intemeuron的IP-SO1、Vertex的Merimebodib(VX-497)、RPI的

Idun Pharma的IDN-6556、XTL的XTL-002、Chiron的HCV/MFS9、NABI的

(丙型肝炎免疫球蛋白)、SciClone的

(胸腺素α-1)、SciClone的胸腺素加聚乙二醇化的干扰素

Innogenetics的针对E2的治疗性疫苗、Intercell的治疗性疫苗、Epimmune/Genencor的治疗性疫苗、Merix的治疗性疫苗、Tripep的治疗性疫苗Chron-VacC。

其它大分子方法包括靶向于HCV RNA的核酶。核酶是短的天然存在的分子，具有催化RNA的序列特异性裂解的核酸内切酶活性。一种可供选择的方法是应用反义寡核苷酸结合RNA并刺激RNaseH介导的裂解。

现在已经鉴定了许多潜在的分子靶标来进行抗HCV疗法的药物开发，包括但不限于NS2-NS3自体蛋白酶(autoprotease)、NS3蛋白酶、N3解旋酶和NS5B聚合酶。RNA依赖性RNA聚合酶对于单链正义RNA基因组的复制是绝对必需的，该酶在药物化学工作者中已经引起了极大兴趣。

核苷抑制剂能用作链终止剂或用作干扰核苷酸与聚合酶结合的竞争性抑制剂。为了作为链终止剂发挥作用，核苷类似物必须被细胞摄取并在体内被转化为其三磷酸化形式，以便在聚合酶核苷酸结合位点作为底物进行竞争。这种向三磷酸化形式的转化通常由细胞激酶介导，所述细胞激酶造成了对任意核苷的另外的结构限制。核苷聚合酶在正常的细胞分裂中也是必需的组分，为了限制潜在毒性副作用，核苷抑制剂应当选择性抑制病毒聚合酶，而不通过抑制宿主的聚合酶而破坏必需的细胞生长和修复。因此，对被内源性激酶磷酸化和在内源性聚合酶方面的选择性的要求为可能的核苷治疗设定了严格的结构要求。

核苷前体药物

虽然核苷经常是强的抗病毒和化学疗法物质，但它们的实际应用经常被两个因素限制。第一，差的药动学性质常限制核苷从肠道吸收；第二，欠佳的物理性质限制了制剂选择，所述制剂选择能被用于增强活性成分的递送。

Albert引入了术语前体药物来描述缺乏固有生物学活性、但能代谢转化为活性药物的化合物(A.Albert，Selective Toxicity，Chapman and Hall，伦敦，1951)。前体药物最近已被综述(P.Ettmayer等，J.Med Chem.200447(10)：2393-2404；K.Beaumont等，Curr.Drug Metab.20034：461-485；H.Bundgaard，Design of predrugs：Bioreversible derivatives for variousfunctional groups and chemical entities in Design of predrugs，H.Bundgaard(编辑)Elsevier Science Publishers，Amersterdam 1985；G.M.Pauletti等，Adv.Drug Deliv.Rev.199727：235-256；R.J.Jones和N.Bischofberger，Antiviral Res.199527：1-15以及C.R.Wagner等，Med.Res.Rev.200020：417-45)。代谢转化能被特异性酶(经常是水解酶)催化，同时，活性化合物也能通过非特异性化学过程被再生。

药学上可接受的前体药物指在宿主中被代谢(例如被水解或氧化)从而形成本发明的化合物的化合物。生物转化应当避免形成具有毒性倾向的碎片。前体药物的典型实例包括具有与活性化合物的功能部分连接的生物学上不稳定的保护基的化合物。糖部分上的羟基的烷基化、酰化或其它亲脂性修饰已经被用在前体核苷酸(pronucleotide)的设计中。这些前体核苷酸能在体内被水解或脱烷基化，从而生成活性化合物。

限制口服生物利用度的因素往往是从胃肠道的吸收以及肠壁和肝脏的首过排泄。优化通过胃肠道的跨细胞吸收要求D_(7.4)大于零。然而，优化分配系数并不会确保成功。前体药物必须避免肠上皮细胞中的主动流出转运蛋白。在肠上皮细胞中的细胞内代谢可导致代谢物被流出泵被动转运或主动转运回肠腔。前体药物还必须抵抗在到达靶细胞或受体之前在血液中的不希望的生物转化。

抗病毒药物的高循环水平往往是必要的，以维持足够高的API血液浓度，从而将产生抗性种群的风险最小化。例如，最近的试验已经使用了高达1500mg BID和QID剂量的异丁酸(2R，3R，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-氟-2-异丁酰基氧基甲基-4-甲基-四氢-呋喃-3-基酯异丁酸(II：R7128)。(S.Le Pogam等，″在治疗GT1、2和3丙型肝炎病毒感染的个体长达4周后没有R7128药物抗性的证据(No Evidence of R7128 DrugResistance After Up To 4Weeks Treatment of GT1，2and 3Hepatitis CVirus Infected Individuals)″，第44届欧洲肝脏研究协会(EASL)年会(44thAnnual Meeting of the European Association for the Study of the Liver(EASL))，Copenhagen，Denmark，4月22日-4月26日，2009)。这经常导致高的日剂量，其需要大的丸剂或胶囊尺寸或者更频繁的剂型施用。当需要高剂量的活性药物成分时，添加稀释剂或赋形剂以提高生物利用度的机会常受到限制。因此新HCV聚合酶抑制剂的设计要求鉴别出生物可利用的、被转变为相应的三磷酸化形式并且是HCV聚合酶的强抑制剂的化合物。

体内磷酸化的强制性要求最近已经导致了对含有掩蔽的磷酸基的核苷一磷酸前体药物的兴趣，所述掩蔽的磷酸基易于被分子内酶促活化，从而生成核苷一磷酸。由于形成核苷三磷酸的限速步骤是第一个步骤，该步骤生成一磷酸化形式，随后的第二个和第三个磷酸基的添加容易地从一磷酸化形式形成。(例如，P.Perrone等，J.Med.Chem.2007，50(8)：1840；S.J.Hecker和M.D.Erion，J.Med Chem.200851(8)：2328)。

提供可能的前体药物的活性化合物的化学修饰产生出全新的分子实体，其可能表现出母体化合物所不具有的不希望的物理、化学和生物学性质。如果多个通路导致多种代谢物，则管理当局对代谢物鉴定的要求可能造成挑战。因此，前体药物的鉴定仍然是不确定的、具有挑战性的活动。另外，评价可能的前体药物的药动学性质是一项具有挑战性的、昂贵的工作。来自动物模型的药动学结果可能难以外推到人。

本发明的目的是提供用于治疗被丙型肝炎病毒感染的宿主的新的化合物、方法和组合物。

发明概述

目前没有用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的预防性治疗或广泛有效的疗法。目前批准的疗法(其仅对抗HCV)具有有限的有效性，并且与严重的副作用相关。因此，设计和开发新的更有效且毒性更小的疗法是必需的。

本发明涉及式I的化合物，其中：

R¹和R²(i)每次出现时独立地选自氢、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基羰基和C_1-6氨基烷基羰基或(ii)R¹和R²基团一起是C(＝O)；

R³是氢、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基羰基或C_1-6氨基烷基羰基，其药学上可接受的盐，条件是R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

本发明还提供了一种通过给需要其的患者施用治疗有效量的式I化合物来治疗丙型肝炎病毒(HCV)病毒感染疾病的方法。化合物可以被单独施用或与其它抗病毒化合物或免疫调节剂共同施用。

本发明还提供了一种通过以抑制HCV有效的量施用式I化合物来抑制细胞中HCV复制的方法。

本发明还提供了一种药物组合物，其包含式I化合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

附图简要说明

图1a描绘了HCV复制子细胞中4′-AU(4’-叠氮基-尿嘧啶)的磷酸化特性。图1b描绘了人肝细胞中4′-AU的磷酸化特性。

图2a描绘了PBMC中4′-AU的磷酸化特性。图2b和图2c分别描绘了孵育1h和孵育120h后PBMC中4′-叠氮基-胞苷(4′-AC)的磷酸化特性。

图3a和3b提供了原代人肝细胞、骨髓细胞和PBMC中4′-AU的磷酸化特性的比较。在3个供体中获得了相似的特性。

图4描绘了人肝细胞中4′AU和4′AC的效能对比。

发明详述

4’-叠氮基-胞苷(4′-AC)的三酰基衍生物已经作为NS5B HCV聚合酶的抑制剂被研究(K.Klumpp等，J.Bio.Chem.2008283(4)：2167-2176)。不幸的是，尽管4′-AC是病毒复制的强抑制剂，但临床研究却因不可接受的副作用的发生被停止。有关的嘧啶核苷4’-叠氮基-尿苷(4′-AU)在广泛用于评价潜在聚合酶抑制剂的复制子测定法中无活性。(V.Lohmann等，J.Virol.2003 77：3007-3019，K.J.Blight等，Science 2000290(5498)：1870-1871)。当三磷酸化形式被化学制备并在HCV聚合酶测定法中评价时，其以0.038±8μM的Ki抑制该酶，而4’-叠氮基-胞苷三磷酸的Ki为0.040±25μM。(D.Smith等，Bioorg.Med.Chem.Lett.200717：2570)。因此，在复制子测定法中缺乏活性被认为表示4′-AU在体内未被磷酸化。该解释得到了以下证据的支持：尽管4′-AC被PBMC(外周血单核细胞)磷酸化，但4′-AU不转变为相应的磷酸化核苷(图1)。

现在，令人惊奇的是，已经发现在原代人肝细胞中4′-AU的磷酸化确实有效地发生。(图2)由于细胞特异性磷酸化在HCV复制的靶组织中发生，因此用选择性磷酸化的核苷进行治疗是可能的，这进一步提示其它细胞中的有限的磷酸化可能导致更少的产生不利毒性的机会。

本文所用的短语“一个(种)”实体是指一个(种)或多个(种)该实体；例如，“一个(种)化合物”或“化合物”是指一个(种)或多个(种)化合物或至少一个(种)化合物。因此，术语“一个(种)”、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可以互换使用。

短语“上文所定义的”、“如上文所定义”是指在发明概述或最宽的权利要求中提供的对于每个基团最宽的定义。在下文提供的所有其它实施方案中，能存在于每个实施方案中的和没有明确定义的取代基具有在发明概述中所提供的最宽的定义。

无论是在过渡性短语中，还是在权利要求书的主体中，本申请中所用的术语“包含”应解释为具有开放性含义。即，该术语应被解释为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的语境中使用时，术语“包含”意指该方法至少包括列举出的步骤，但还可以包括另外的步骤。当在化合物或组合物的语境中使用时，术语“包含”意指化合物或组合物至少包括列举出的特征或组分，但还可以包括另外的特征或组分。

术语“独立地”在本文中表示变量适用于任何一种情况，不考虑在同一化合物中是否存在具有相同或不同定义的变量。因此，在其中R”出现两次并被定义为“独立地是碳或氮”的化合物中，两个R”可以均是碳，两个R”可以均是氮，或者一个R”可以是碳且另一个R”是氮。

当任何变量(例如，R¹、R^4a、Ar、X¹或Het)在描绘和描述本发明中使用或要求保护的化合物的任何部分或结构式中出现一次以上时，每次出现时它的定义相对于每次其它出现时它的定义是独立的。此外，取代基和/或变量的组合只有当这样的化合物是稳定的化合物时才被允许。

在价键末端的符号“*”或穿过价键所画的符号“------”各自是指官能团或其它化学基团与其作为组成部分的分子的剩余部分的连接点。因此，例如：

MeC(＝O)OR⁴，其中

画入环系统的价键(与在一个明确的顶点连接相反)表示该价键可以与任何合适的环原子连接。

本文所用的术语“任选的”或“任选”意指随后描述的事件或情况可以发生，但不必需发生，该描述包括所述事件或情况发生的情形和所述事件或情况不发生的情形。例如，“任选被......取代”或“任选被取代”意指任选被取代的基团可以引入氢或取代基。

术语“约”在本文中用于意指近似、在......左右、大致或在......周围。当术语“约”与数值范围联用时，它通过将界限扩展至高于或低于所给出的数值来调整该范围。一般而言，术语“约”在本文中用于将所给出的数值调整至高于或低于该数值20％。

如本文所用的那样，对于变量的数值范围的列举是为了表达本发明可以用等于该范围内的任何数值的变量进行实施。因此，对于本质上是非连续的变量，该变量可以等于数值范围的任何整数值，包括该范围的端点。类似地，对于本质上是连续的变量，该变量可以等于该数值范围的任何实值(real value)，包括该范围的端点。举例来说，被描述为具有0至2的值的变量，对于本质上是非连续的变量可以是0、1或2，对于本质上是连续的变量可以是0.0、0.1、0.01、0.001或任何其它实值。

式I化合物表现出互变异构现象。互变异构化合物可以以两种或更多种可相互转化的种类存在。质子转移型互变异构体由两个原子之间的共价键合的氢原子的迁移产生。互变异构体一般以平衡方式存在，分离单个互变异构体的尝试通常产生混合物，其化学和物理性质与化合物的混合物一致。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在许多脂肪族的醛和酮如乙醛中，酮形式占优势；而在酚中，烯醇形式占优势。常见的质子转移型互变异构体包括酮/烯醇

酰胺/亚胺酸

和脒

互变异构体。后两者在杂芳基和杂环基的环中特别常见，本发明包括所述化合物的所有互变异构形式。

在本发明的第一个实施方案中，提供了式I的化合物，其中R¹、R²和R³如上文所述。

在本发明的第二个实施方案中，提供了式I的化合物，其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基。

在本发明的第三个实施方案中，提供了式I的化合物，其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基，R³是氢。

在本发明的第四个实施方案中，提供了式I的化合物，其中R¹和R²是氢，R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基。

在本发明的第五个实施方案中，提供了选自表1中的化合物I-1至I-6的化合物。

在本发明的第六个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中R¹、R²和R³如上文所定义。在下文提供的所有其它实施方案中，能存在于每个实施方案中的和没有明确定义的取代基具有在发明概述中所提供的最宽的定义。

在本发明的第七个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基。

在本发明的第八个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基，R³是氢。

在本发明的第九个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的式I的化合物，其中R¹和R²是氢，R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基。

在本发明的第十个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I的化合物以及共同施用至少一种免疫系统调节剂和/或至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂。

在本发明的第十一个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I的化合物以及共同施用至少一种选自干扰素、白介素、肿瘤坏死因子和集落刺激因子的免疫系统调节剂。

在本发明的第十二个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I的化合物以及共同施用至少一种免疫系统调节剂，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。

在本发明的第十三个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I的化合物以及共同施用至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂。

在本发明的第十四个实施方案中，提供了一种治疗HCV感染的方法，其包含给需要其的患者施用治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I的化合物以及共同施用至少一种抗病毒剂，所述抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、另外的核苷HCV聚合酶抑制剂、非核苷HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂和HCV融合抑制剂。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所定义的式I化合物用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所定义的式I化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗HCV感染。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基的式I化合物用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基的式I化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗HCV感染。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基且R³是氢的式I化合物用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基且R³是氢的式I化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗HCV感染。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹和R²是氢且R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基的式I化合物用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹和R²是氢且R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基的式I化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗HCV感染。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物与至少一种免疫系统调节剂和/或至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂组合用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物与至少一种选自干扰素、白介素、肿瘤坏死因子和集落刺激因子的免疫系统调节剂组合用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物与至少一种免疫系统调节剂组合用于治疗HCV感染的用途，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物与至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂组合用于治疗HCV感染的用途。

在本发明的另一个实施方案中，提供了其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物与至少一种抗病毒剂组合用于治疗HCV感染的用途，所述抗病毒剂选自HCV蛋白酶抑制剂、另外的核苷HCV聚合酶抑制剂、非核苷HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂和HCV融合抑制剂。

在本发明的另一个实施方案中，提供了药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合的治疗有效量的其中R¹、R²和R³如上文所述的式I化合物。

本文所用的术语“烷基羰基”表示式C(＝O)R的基团，其中R是本文所定义的烷基。术语C_1-6酰基[或“烷酰基”]是指含有1-6个碳原子的-C(＝O)R基团。C₁酰基[或“烷酰基”]是甲酰基，其中R＝H，当烷基链无支链时C₆酰基是指己酰基。本文所用的术语“芳基羰基”或“芳酰基”意指式C(＝O)R的基团，其中R是芳基；本文所用的术语“苯甲酰基”是指其中R是苯基的“芳基羰基”或“芳酰基”。

本文所用的术语“烷氧基羰基”和“芳基氧基羰基”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R分别是烷基或芳基，且烷基和芳基如本文所定义。

本文所用的术语“氨基烷基羰基”是指其中一个氢被氨基代替的本文所定义的烷基羰基。术语C_1-6氨基烷基羰基是对C_1-6烷基羰基的列举。氨基烷基羰基的实例包括但不限于甘氨酰基[COCH₂NH₂]、丙氨酰基[COCH(NH₂)Me]、缬氨酰基[COCH(NH₂)CHMe₂]、亮氨酰基[COCH(NH₂)CH₂CHMe₂]、异亮氨酰基[COCH(NH₂)CHMeEt]和正亮氨酰基[COCH(NH₂)(CH₂)₃Me]等。该定义不限于天然存在的氨基酸。

常用的缩写包括：乙酰基(Ac)、水性或含水或水溶液(aq.)、4AC(4-叠氮胞苷)、4AU(4-叠氮基尿苷)、4AU-MP(4-叠氮基尿苷一磷酸)、4AU-DP(4-叠氮基尿苷二磷酸)、4AU-TP(4-叠氮基尿苷三磷酸)、大气压(Atm)、叔丁氧基羰基(Boc)、焦碳酸二叔丁酯或boc酸酐(BOC₂O)、苄基(Bn)、丁基(Bu)、化学文摘登记号(CASRN)、苄氧基羰基(CBZ或Z)、羰基二咪唑(CDI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、1，2-二氯乙烷(DCE)、二氯甲烷(DCM)、偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)、二异丁基氢化铝(DIBAL或DIBAL-H)、二异丙基乙基胺(DIPEA)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、4-N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、乙基(Et)、乙醇(EtOH)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、乙酸乙酯(EtOAc)、2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ)、乙醚(Et₂O)、乙酸(HOAc)、1-N-羟基苯并三唑(HOBt)、高压液相色谱(HPLC)、异丙醇(IPA)、甲醇(MeOH)、熔点(mp)、MeSO₂-(甲磺酰基或Ms)、甲基(Me)、乙腈(MeCN)、间氯过苯甲酸(MCPBA)、质谱(ms)、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基吗啉(NMM)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、苯基(Ph)、丙基(Pr)、异丙基(i-Pr)、磅/平方英寸(psi)、吡啶(pyr)、室温(rt或RT)、satd.(饱和的)、叔丁基二甲基硅烷基或t-BuMe₂Si(TBDMS)、三乙胺(TEA或Et₃N)、三氟甲磺酸酯基或CF₃SO₂-(Tf)、三氟乙酸(TFA)、四氟硼酸O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲

(TBTU)、薄层色谱(TLC)、四氢呋喃(THF)、四甲基乙二胺(TMEDA)、三甲基硅烷基或Me₃Si(TMS)、对甲苯磺酸一水合物(TsOH或pTsOH)、4-Me-C₆H₄SO₂-或甲苯磺酸酯基(Ts)、N-尿烷-N-羧基环内酸酐(N-urethane-N-carboxyanhydride，UNCA)。包括前缀正(n-)、异(i-)、仲(sec-)、叔(tert-)和新(neo-)的常规命名法当与烷基一起使用时具有它们的惯常含义。(J.Rigaudy和D.P.Klesney，Nomenclature in Organic Chemistry，IUPAC 1979 PergamonPress，Oxford.)。

化合物和制备

在下面的表中提供了本发明所包括的和在本发明范围内的代表性化合物的实例。提供接下来的这些实例和制备以使本领域技术人员能更清楚地理解和实施本发明。它们不应被认为是限制本发明的范围，而仅作为其举例说明和代表。

一般而言，在本申请中使用的命名法均基于AUTONOM^TM4.0版，其是一种用于产生IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机系统。如果所描绘的结构与针对该结构给出的名称之间有差异，则所描绘的结构更为准确。此外，如果结构或结构的一部分的立体化学没有用例如粗线或虚线标明，则该结构或该结构部分应当被解释为包括其所有立体异构体。

本发明的化合物可通过下文所示的和所述的举例说明性的合成反应流程中所描绘的各种方法来制备。制备这些化合物所用的起始材料和试剂一般可从商业供应商如Aldrich Chemical Co.获得，或者是通过本领域技术人员已知的方法按照参考文献中给出的操作制备的，所述参考文献例如Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis；Wiley & Sons：NewYork，第1-21卷；R.C.LaRock，Comprehensive Organic Transformations，第2版Wiley-VCH，New York 1999；Comprehensive Organic Synthesis，B.Trost和I.Fleming(编辑)第1-9卷Pergamon，Oxford，1991；Comprehensive Heterocyclic Chemistry，A.R.Katritzky和C.W.Rees(编辑)Pergamon，Oxford 1984，第1-9卷；Comprehensive Heterocyclic ChemistryII，A.R.Katritzky和C.W.Rees(编辑)Pergamon，Oxford 1996，第1-11卷；和Organic Reactions，Wiley & Sons：New York，1991，第1-40卷。下面的合成反应流程仅仅是可用于合成本发明的化合物的一些方法的举例说明，可以对这些合成反应流程进行各种修改，对于已参考了本申请所包含的公开内容的本领域技术人员而言已经具有了进行所述修改的提示。

如果需要，可使用常规技术分离和纯化合成反应流程中的起始材料和中间体，所述常规技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。这类材料可使用常规方法表征，包括物理常数和光谱数据。

除非有相反的规定，否则本文所述的反应优选在惰性气氛下、在大气压力下、在约-78℃至约150℃、更优选约0℃至约125℃的反应温度范围、最优选且方便地在约室温(或环境温度)、例如约20℃进行。

下面的流程中的一些化合物是用概括的取代基描绘的；然而，本领域技术人员立即能理解的是，R基团的性质可以变化以提供本发明所包括的各种化合物。另外，反应条件是举例性的，作为替代选择的条件是公知的。下面的实施例中的反应顺序不用于限制权利要求书中所给出的本发明的范围。

本发明的化合物可通过4-叠氮基-尿嘧啶(CASRN 139442-01-6)或其被保护的衍生物例如2′，3′-缩酮(2′，3′-acetonide，CASRN 690271-27-3)的酰化来制备。用活化的羧酸衍生物如酰氯或酸酐处理4′AU，得到三酰基衍生物。处理相应的缩酮，得到5′-酰基衍生物，随后将其脱保护。

本文所用的术语“保护基”是指一种化学基团，其(a)有效地与分子中的反应性基团结合；(b)防止反应性基团参与不希望的化学反应；且(c)在反应性基团的保护不再需要时能被容易地除去。保护基在合成中用于暂时掩蔽官能团的特征性化学性质，因为它干扰其它反应。引入和除去保护基的试剂和方案是公知的，已经在众多文献中被综述(例如，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley &Sons，New York，1999，以及Harrison和Harrison等，Compendium ofSynthetic Organic Methods，第1-8卷John Wiley and Sons，1971-1996)。化学领域的技术人员能理解的是，有时必须针对特定的分子对方案进行优化，这种优化完全在本领域技术人员的能力范围内。

2′，3′-二酰基-4′-AU衍生物是通过酶促方法制备的。5′-酰基-4′-AU衍生物是通过4′-AU的2′，3′-缩酮的乙酰化(实施例3)或通过4′-AU的选择性的酶催化的酰化制备的。

剂量与施用

本发明的化合物可以被配制在多种多样的口服施用剂型和载体中。口服施用可以是片剂、包衣片、糖衣丸(dragée)、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或混悬剂的形式。当通过其它施用途径施用时本发明的化合物是有效的，在其它施用途径中包括连续(静脉内滴注)局部胃肠外施用、肌内施用、静脉内施用、皮下施用、透皮施用(其可包括渗透促进剂)、口含施用、鼻施用、吸入施用和栓剂施用。优选的施用方式一般是使用方便的每天给药方案的口服施用，所述给药方案可以根据疾患的程度和患者对活性成分的响应而调整。

本发明的一种或多种化合物以及它们的可药用盐与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起可以被置于药物组合物形式和单位剂型中。药物组合物和单位剂型可以包含常规比例的常规成分，包含或不包含另外的活性化合物或成分，且单位剂型可以含有与预期使用的日剂量范围相称的任何合适的有效量的活性成分。药物组合物可以以下列形式使用：用于口服使用的固体如片剂或填充胶囊、半固体、粉末、持续释放制剂或液体如溶液、混悬液、乳剂、酏剂或填充胶囊；或用于直肠或阴道施用的栓剂；或用于胃肠外使用的无菌注射液。典型的制剂将含有约5％至约95％活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”既包括活性化合物的固体制剂，也包括活性化合物的液体制剂，本领域技术人员应当理解的是，活性成分能存在于不同的制剂中，这取决于靶器官或组织以及所需的剂量和药动学参数。

本文所用的术语“赋形剂”是指在制备药物组合物中有用的化合物，其通常是安全的、无毒的并且在生物学方面和其它方面不具有不希望的性质，包括兽医用途以及人药学用途可接受的赋形剂。本发明的化合物能单独施用，但一般与一种或多种基于预期的施用途径和标准制药实践而选择的合适的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。

“药学上可接受的”意指在制备药物组合物中有用，通常是安全的、无毒的并且在生物学方面和其它方面不具有不希望的性质，包括对人药学用途是可接受的。

活性成分的“药学上可接受的盐”形式也可以首先赋予活性成分合乎需要的非盐形式不具备的药动学性质，甚至可以在活性成分的体内治疗活性方面对活性成分的药效学产生积极影响。短语化合物的“药学上可接受的盐”意指药学上可接受的并具有所需的母体化合物的药理学活性的盐。所述盐包括：(1)与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成的酸加成盐；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子代替时所形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等的配位化合物。

固体形式制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种也可用作稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料的物质。在散剂中，载体一般是精细粉碎的固体，它是与精细粉碎的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分一般与具有必要粘合能力的载体以合适的比例混合并压制成所需的形状和大小。合适的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。除活性组分之外，固体形式制剂还可含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造的和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

液体制剂也适合用于口服施用，液体制剂包括乳剂、糖浆、酏剂、水溶液、水性混悬液。这些包括旨在在使用前即刻转化为液体形式的制剂的固体形式的制剂。乳剂可以在溶液中、例如在丙二醇水溶液中制备，或者可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可以通过将活性组分溶于水并加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性混悬液可以通过将精细粉碎的活性组分分散在含有粘性材料如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的助悬剂的水中来制备。

本发明的化合物可以被配制用于胃肠外施用(例如，通过注射，例如推注或连续输注)，可以是在安瓿、预填充注射器、小容量输液中的单位剂量形式或处于其中加入了防腐剂的多剂量容器中。组合物可以采取在油性或水性介质中的混悬剂、溶液或乳剂，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或介质的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如，橄榄油)和注射用有机酯(例如，油酸乙酯)，可以含有制剂物质如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。作为替代选择，活性成分可以是粉末形式，其通过将无菌固体进行无菌分装或通过将溶液冷冻干燥而得到，在使用前用合适的介质例如无菌无热原的水进行重构。

本发明的化合物可以被配制为软膏剂、乳膏剂或洗剂或被配制为透皮贴剂用于局部施用于表皮。软膏剂和乳膏剂可以例如使用水性或油性基质、加入合适的增稠剂和/或胶凝剂来配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，一般还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适用于在口中局部施用的制剂包括：在经矫味的基质中包含活性剂的锭剂，所述经矫味的基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶；在惰性基质中含有活性成分的软锭剂，所述惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。

本发明的化合物可以被配制用于以栓剂形式施用。首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂熔化，并将活性组分均匀分散，例如通过搅拌均匀分散。然后将熔化的均匀混合物倒入合适大小的模具中，使其冷却并固化。

本发明的化合物可以被配制用于阴道施用。阴道栓(pessaries)、卫生栓、乳膏剂、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂除活性成分外还含有本领域公知适宜的所述载体。本发明的化合物可以被配制用于鼻施用。溶液或混悬剂通过常规方法直接应用于鼻腔，例如，用滴管、吸管或喷雾器应用。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在后者的滴管或吸管情况下，这可以通过对患者施用适宜的、预设体积的溶液或混悬剂而实现。在喷雾器的情况下，这可以例如借助计量雾化喷雾器泵实现。

本发明的化合物可以被配制用于气雾剂施用，特别是施用于呼吸道，包括鼻内施用。化合物一般具有小粒度，例如五(5)微米或更小级别的粒度。这样的粒度可以通过本领域已知的方法获得，例如通过微粉化获得。活性成分与合适的抛射剂一起在加压包装中提供，所述抛射剂如含氯氟烃(CFC)例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其它合适的气体。气雾剂也可方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀控制。作为替代选择，活性成分可以以干粉形式提供，例如化合物在合适的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式提供，例如以胶囊或药筒、例如明胶胶囊或药筒或泡罩包装的形式提供，借助吸入器可从中施用粉末。

在需要时，制剂可以用适于持续或控制释放施用活性成分的肠溶包衣制备。例如，本发明的化合物可以配制在透皮或皮下药物递送装置中。当必须持续释放化合物时和当患者对治疗方案的依从性至关重要时，这些递送系统是有利的。透皮递送系统中的化合物经常附着在皮肤粘着性固体支撑物上。所关注的化合物也可以与渗透促进剂例如月桂氮

酮(1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮)组合使用。持续释放递送系统通过手术或注射被皮下植入到真皮层。皮下植入物将化合物包封在脂溶性膜例如硅橡胶或生物可降解的聚合物例如聚乳酸中。

合适的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂在E.W.Martin编辑的Remington：The Science and Practice of Pharmacy 1995，Mack PublishingCompany，第19版，Easton，Pennsylvania中有描述。制剂领域的技术人员可以在本说明书的教导内对制剂进行调整以提供多种制剂用于特定的施用途径，而不使本发明的组合物不稳定或损害它们的治疗活性。

为了使它们在水或其它介质中具有更大溶解性而对本发明的化合物进行的修饰例如可以容易地通过微小的修饰(成盐、酯化等)来完成，这些完全在本领域的普通技能范围内。为了在患者中达到最大的有益作用而调整特定化合物的施用途径和剂量方案以控制本发明的化合物的药动学也完全在本领域的普通技能范围内。

本文所用的术语“治疗有效量”意指在个体中减轻疾病症状所需要的量。剂量将在每个特定的病例中根据个体需要加以调整。剂量可以在宽限度内变化，这取决于多种因素，如被治疗的疾病的严重程度、患者的年龄和一般健康状况、正用于治疗患者的其它药物、施用的途径和形式以及所涉及的医师的偏好和经验。对于口服施用，在单一药物治疗和/或组合治疗中，约0.01至约1000mg/kg体重/天的日剂量应是适宜的。优选的日剂量为每天约0.1至约500mg/kg体重，更优选0.1至约100mg/kg体重，最优选1.0至约10mg/kg体重。因此，对于70kg的人的施用，剂量范围将是约7mg至0.7g/天。日剂量可以以单剂量的形式或以多个分剂量、典型地每天1至5个剂量的形式施用。一般而言，治疗以小于化合物最佳剂量的较小剂量开始。之后，剂量以小的增幅增加，直到达到单个患者的最佳效果。在治疗本文所述的疾病时，普通技术人员将无需过度的实验并且依靠个人的知识、经验和本申请所公开的内容就能够确定本发明的化合物用于给定的疾病或患者的治疗有效量。

在本发明的实施方案中，活性化合物或盐可以与另外的抗病毒剂如利巴韦林、核苷HCV聚合酶抑制剂、另外的HCV非核苷聚合酶抑制剂或HCV蛋白酶抑制剂组合施用。当活性化合物或其衍生物或盐与另外的抗病毒剂组合施用时，活性可超过母体化合物。当治疗是组合治疗时，所述施用可以与核苷衍生物的施用并行或相继进行。因此本文所用的“并行施用”包括在同一时间或在不同时间施用活性剂。两种或更多种活性剂在同一时间的施用可以通过含有两种或更多种活性成分的单个制剂或通过基本上同时施用含有单一活性剂的两种或更多种剂型来实现。

应当理解的是，本文所述的治疗涵盖预防以及现有病症的治疗。此外，本文所用的术语“治疗”HCV感染还包括治疗或预防与HCV感染相关的或由HCV感染介导的疾病或病症或者其临床症状。

本文所用的术语“治疗有效量”意指在个体中减轻疾病症状所需要的量。剂量将在每个特定的病例中根据个体需要加以调整。剂量可以在宽限度内变化，这取决于多种因素，如被治疗的疾病的严重程度、患者的年龄和一般健康状况、正用于治疗患者的其它药物、施用的途径和形式以及所涉及的医师的偏好和经验。对于口服施用，在单一药物治疗和/或组合治疗中，约0.01至约1000mg/kg体重/天的日剂量应是适宜的。优选的日剂量为每天约0.1至约500mg/kg体重，更优选0.1至约100mg/kg体重，最优选1.0至约10mg/kg体重。因此，对于70kg的人的施用，剂量范围将是约7mg至0.7g/天。日剂量可以以单剂量的形式或以多个分剂量、通常每天1至5个剂量的形式施用。一般而言，治疗以小于化合物最佳剂量的较小剂量开始。之后，剂量以小的增幅增加，直到达到单个患者的最佳效果。在治疗本文所述的疾病时，普通技术人员将无需过度的实验并且依靠个人的知识、经验和本申请所公开的内容就能够确定本发明的化合物用于给定的疾病或患者的治疗有效量。

治疗有效量的本发明的化合物和任选的一种或多种另外的抗病毒剂是有效降低病毒载量或实现病毒对治疗持续响应的量。除了病毒载量外，持续响应的有用的指示物还包括但不限于肝纤维化、血清转氨酶水平升高和肝脏中的炎性坏死活动(necroinflammatory activity)。一个旨在举例而非限制的常见的标记物的例子是血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)，其通过标准临床测定法测量。在本发明的一些实施方案中，有效的治疗方案是将ALT水平降低至小于约45IU/mL血清的方案。

为了使它们在水或其它介质中具有更大溶解性而对本发明的化合物进行的修饰例如可以容易地通过微小的修饰(成盐、酯化等)来完成，这些完全在本领域的普通技能范围内。为了在患者中达到最大的有益作用而调整特定化合物的施用途径和剂量方案以控制本发明的化合物的药动学也完全在本领域的普通技能范围内。

下列实施例举例说明了本发明范围内的化合物的制备和生物学评价。提供以下这些实施例和制备是为了使本领域技术人员能更清楚地理解和实施本发明。它们不应被认为是对本发明的范围的限制，而仅是其举例说明和代表。

实施例1

方法A：2′，3′，5′-三酰基核苷衍生物的制备

乙酸3，4-二乙酰氧基-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲基酯(22)

向搅拌着的含有4’-叠氮基尿苷(0.330g，1.15mmol)、吡啶(2mL)和乙酸酐(2mL)的溶液中加入DMAP(0.010g，0.08mmol)。12h后，将反应混合物在减压下蒸发至干。将残余物溶解于二氯甲烷中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥并蒸发至干，得到0.42g(88％)2’，3’，5’-三-乙酰氧基-4’-叠氮基尿苷(22：R＝CH3，I-4)。

(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-4-乙氧基羰基氧基-2-乙氧基羰基氧基甲基-四氢-呋喃-3-基-碳酸酯乙酯(22R＝OEt)可以类似地得到制备，不同的是乙酸酐被氯甲酸乙酯代替。

实施例2

方法B：5′-酰基核苷衍生物的制备

丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲基酯(I-6)

在装配了磁力搅拌棒的250mL圆底烧瓶中装入20(5.94g)、丙酸乙烯酯(15mL)和THF(150mL)。加入在Immobead 150上固定化的南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶B(0.74g，Sigma-Aldrich，源自米曲霉(Aaspergillus oryzae)的重组体，5865 U/g)，将反应在氩气气氛下加热至60℃。2天后，加入另外的丙酸乙烯酯(6mL)和酶(1.11g)以及

筛。另外的一天后，将反应过滤以除去固定化的酶并真空浓缩。将粗产物通过SiO₂色谱纯化，用EtOAc/己烷梯度(50％至100％EtOAc)洗脱。在除去溶剂并在高真空下干燥后，得到白色泡沫(4g)。将该物质(3.25g)混悬于3/1己烷/IPA中，并在室温下搅拌3h。通过过滤收集生成的结晶物质，在真空干燥箱中于75℃干燥，得到3.18g I-6：m.p.148-150℃。

本领域技术人员将理解制备5′-酰基衍生物的另一种通用操作包括将4′-C-叠氮基-2′，3′-O-(1-甲基亚乙基)-尿苷(CASRN 690271-27-3)用酰氯和酸酐酰化，随后在温和的酸性条件下除去亚异丙基保护基，所述温和的酸性条件例如在醇水溶液中的HCl(J.A.Martin等，WO2004/046159，2004年6月3日公布，通过引用的方式将其全文合并入本文)。

实施例3

丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲基酯(I-6)-供替代选择的操作

在装配了打泡器、搅拌器、温度计和冰冷却浴的三颈圆底烧瓶中装入24(10g，30.7mmol，Eq：1.00，CASRN 139442-01-6)、DMAP(376mg，3.07mmol，Eq：0.1)、DIPEA(7.95g，10.7mL，61.5mmol，Eq：2.0)、乙腈(47.2g，60.0mL，Eq：-)。将浆液搅拌0.5h。历经10min于0-10℃加入丙酰氯(3.05g，2.86mL，32.3mmol，Eq：1.05)。反应混合物变为均相并温热至室温。将反应混合物在H₂O(30mL)和EtOAc(50mL)之间分配，将有机相用2NHCl(2×30mL)、饱和NaHCO₃水溶液(20mL)、盐水(10mL)洗涤、干燥、过滤并真空浓缩，得到15.2g油。15.2g.将由此获得的产物(5.37g)溶解于IPA(25mL)、6N HCl水溶液(12mL)和盐酸羟胺(0.8g)的溶液中。将反应混合物于室温搅拌。将反应搅拌5h，在H₂O(30mL)、DCM(50mL)之间分配。将有机层相继用饱和NaHCO₃水溶液(30mL)、水(10mL)洗涤、干燥、过滤并真空浓缩。将残余物用庚烷(30mL)研磨，得到泡沫形式的1.27g I-6。

实施例4

方法C：2′，3′-二酰基核苷衍生物的制备

丙酸(2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-2-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-5-羟基甲基-4-丙酰基氧基-四氢-呋喃-3-基酯(I-1)

如实施例1所述制备了丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-双-丙酰基氧基-四氢-呋喃-2-基甲基酯(28)，不同的是乙酸酐被丙酰氯或丙酸酐代替。

向溶解在热(约40℃)MTBE(20mL)中的28(4.42g)的溶液中加入磷酸盐缓冲液(27mL，pH＝6.5)和盐水(0.5mL)。加入Lipolase酶溶液(5ml)并将反应混合物于30-35℃搅拌约3h。发现水解速度非常慢。加入另外的酶溶液(6ml)，将反应混合物于30-35℃搅拌3天以实现约95％转化。将反应混合物用EtOAc(30mL)萃取。通过加入甲醇(约10mL)使萃取过程中形成的乳液再溶解。将有机萃取物用盐水和水洗涤，然后蒸发至干，得到5.7g油(89％粗产率，HPLC面积归一化显示约94％二丙酸酯)。将粘稠的油在真空干燥箱中于约50℃进一步干燥，得到泡沫。将粗产物通过SiO₂色谱进一步纯化，用MeOH/DCM梯度洗脱，得到蜡状固体形式的I-1，其经放置结晶。

实施例5

(R)-2-氨基-3-甲基-丁酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲基酯

步骤1-向搅拌着的在DMF(20mL)中的含有24(1.00g，3.07mmol)、Boc-(L)-缬氨酸(6.14mmol)和EDCI(6.14mmol)的溶液中加入DMAP(3.07mmol)。将得到的溶液于室温在氮气气氛下搅拌。12h后，将反应混合物在减压下蒸发至干。将粗产物通过SiO₂色谱纯化，用EtOAc/己烷梯度洗脱，得到24(R＝CH(NHBoc)CHMe₂)。

步骤2-Boc和缩酮保护基可以在TFA和DCM或HCl和二

烷或甲醇的溶液中被除去。

实施例6

血浆药动学

施用单次口服5mg/kg剂量的II的前体药物后，用药动学操作测定了4-氨基-1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟基甲基-四氢-呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(II)的血浆水平。剂型是在5mL适宜的介质中含有0.0176mmol前体药物的溶液/混悬剂。

给三只未禁食的雄性食蟹猴(6-9kg)装配隐静脉(saphenous)或臂脉(brachial)导管以帮助抽血。在研究期间的所有时间允许它们自由获得食物和水。在研究当天，从每只猴取给药前血样(2-3mL)。通过口服管饲法用1ml/kg的剂量溶液对猴进行给药。在给药后的以下每个时间点(0.25、0.5、1、3、5、7、10、24、32和48小时)，采集约0.5mL血液到肝素涂覆的锂试管中。将血液离心以获得血浆，将其冷冻直到分析。

用LC-MS测定法测定每个血浆样品中的Ia(R¹-R⁴＝H)浓度。在空白猴血浆中制备标准曲线。AUC代表浓度-时间曲线下总面积，其描述了作为时间的函数的体循环中的药物浓度(L.Z.Benet，D.L.Kroetz和L.B.Sheiner，Pharmacokinetics in Goodman & Gilman′s The PharmacologicalBasis of Therapeutics，J.G.Hardman & L.E.Limbird编辑，第9版，McGraw Hill，New York，第17-23页)。Cmax是测得的峰浓度。

实施例7

HCV NS5B RNA聚合酶活性

核苷一磷酸可根据M.Yoshikawa等，Tetrahedron Lett.196750：5065-5068中所述的通用操作来制备。制备核苷三磷酸的方法也已被综述(K.Burgess和Dan Cook，Chem.Rev.2000100：2047)。

以放射性标记的核苷酸一磷酸向酸不溶性RNA产物中的掺入的形式测量了HCV聚合酶(NS5B570n-Con1)的酶活性。通过过滤除去未掺入的放射性标记的底物，将闪烁剂加入洗涤并干燥的含有放射性标记的RNA产物的滤板中。反应结束时由NS5B570-Con1产生的RNA产物的量与闪烁剂发出的光的量成正比。

酶活力测定法中所用的HCV聚合酶是源自HCV Con1株基因型1b的去除21个氨基酸C-端的全长HCV聚合酶(GenBank登录号AJ242654)(NS5B570n-Con1)。将NS5B570n-Con1亚克隆至质粒表达构建体pET17b的下游并转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS用于蛋白质表达。用单个菌落开始接种37℃的补充有100μg/mL氨苄西林的在LB培养基中的10L培养物。当培养物在600nM处的光密度为0.8时，通过加入0.25mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达。蛋白质表达的诱导于30℃进行16小时，然后通过离心收获细胞。使用三柱纯化方案(包括依次在Ni-NTA、SP-Sepharose HP和Superdex 75树脂上进行柱色谱)将NS5B570n-Con1纯化至均质。

存在cIRES RNA模板(参见0004部分)的酶促反应含有20nM cIRESRNA、20nM NS5B570n-Con1酶、0.5μCi氚化UTP(Perkin Elmer目录号TRK-412；比活度：30至60Ci/mmol)、ATP、CTP和GTP各1μM、40mM Tris-HCl pH 8.0、40mM NaCl、4mM DTT(二硫苏糖醇)、4mMMgCl2、5μl在DMSO中系列稀释的化合物和加至50μL最终反应体积的无核酸酶的水。存在polyA RNA模板(参见0004部分)的酶促反应含有20nM预混合的Poly A：寡(rU)16(参见0004部分)、20nM NS5B570n-Con1酶、1μCi氚化UTP(Perkin Elmer目录号TRK-412；比活度：30至60Ci/mmol)、40mM Tris-HCl pH 8.0、40mM NaCl、4mM DTT(二硫苏糖醇)、4mM MgCl2、5μl在DMSO中系列稀释的化合物和加至50μL最终反应体积的无核酸酶的水。将反应混合物集合在96-孔滤板(目录号MADVN0B，Millipore Co.)中并于30℃孵育2小时。通过加入10％终浓度(v/v)的三氯乙酸停止反应，于4℃孵育40分钟。将反应过滤，用8倍反应体积的10％(v/v)三氯乙酸、4倍反应体积的70％(v/v)乙醇洗涤，风干，向每个反应孔中加入25μl闪烁剂(Microscint 20，Perkin-Elmer)。

使用了两个RNA模板来测试本文所述的化合物。cIRES RNA模板长度为337个核苷酸，包括核心蛋白的部分互补序列(36个核苷酸)，随后是341个核苷酸的内核糖体进入位点的互补序列。poly A RNA模板(GEAmersham目录号27-4110)是以3∶1的摩尔比预退火到寡(rU)16引物的均聚RNA(引物-模板)。

在

读板仪(Perkin-Elmer，能量范围：低，效能模式：正常，计数时间：1分钟，背景差：无，减少失真(Cross talk reduction)：关闭)上将闪烁剂发出的光的量转换为每分钟计数(CPM)。

在和

中分析数据。在不存在酶的情况下的反应用于确定从酶促反应中减去的本底信号。阳性对照反应在不存在化合物的情况下进行，由其得到的经本底校正的活性被设定为100％聚合酶活性。所有数据均以阳性对照的百分比的形式表示。通过将数据用方程(i)拟合计算出了酶催化的RNA合成率降低50％的化合物浓度(IC₅₀)：

$Y=\%\mathrm{Min}+\frac{(\%\mathrm{Max}-\%\mathrm{Min})}{[1+\frac{X}{{\left({\mathrm{IC}}_{50}\right)}^S}]}---\left(i\right)$

其中“Y”是相对酶活性(单位是％)，“％Min”是在饱和化合物浓度下剩余的相对活性，“％Max”是最大相对酶活性，“X”是化合物浓度，“S”是Hill系数(或斜率)。

4′-AU三磷酸的IC₅₀的实验值是0.46±0.088μM，与4′-AC-三磷酸的29±0.13μM类似。

实施例8

人肝细胞、外周血单核细胞(PBMC)和骨髓细胞(BMC)中4AU-三磷酸 的形成如之前已公开的那样(Ma，H.等J.Biol.Chem.2007，282：29812-29820)进行原代人肝细胞中核苷类似物4AU的摄取和磷酸化的分析。将新鲜的人肝细胞铺板，与³H-标记的4AU一起孵育不同的时间跨度。在细胞收获的时候，吸出细胞培养物的培养基，将细胞用冷的磷酸盐缓冲的盐水洗涤一次。将细胞刮入1mL预冷的60％(v/v)含10mM EDTA的甲醇中，于-20℃在甲醇中萃取24h。然后将萃取的样品于10,000x g离心15min以去除细胞碎片。将上清液转移到新的试管中并于室温在速度真空装置(speed vaccum)中蒸发。将干燥的细胞提取物沉淀物(pellet)溶解于H₂O中。在HPLC分析之前，向细胞提取物样品中掺入未标记的标准参比物4AU以及4AU一磷酸、4AU二磷酸和4AU三磷酸衍生物。

4AU在人外周血单核细胞(PBMC)和骨髓细胞(BMC)中的摄取和磷酸化如下进行的：分别将2-4×10⁵个细胞/ml或5-6×10⁵个细胞/ml的PBMC或BMC细胞混悬液与³H-RO1080713一起孵育不同的时间长度。每24h一次重新补足含有³H-RO1080713的细胞培养物。在实验结束时收获了每个时间点相当于2×10⁶个活细胞的一式两份的样品，通过离心5min使其沉淀，用冷的PBS洗涤一次。将最终的细胞沉淀物在干冰上骤然冷却并于-80℃储存直到提取。如原代肝细胞的提取那样进行细胞沉淀物的提取。

通过离子交换HPLC分离4AU的磷酸化衍生物，所述HPLC具有与辐射探测器(radiometric detector)(β-RAM，IN/US Systems，Inc.)耦联的Whatman Partisil 10SAX(4.6×250mm)柱。在4-16分钟期间，流动相梯度从99％的缓冲液A(H₂O)和1％的缓冲液B(0.5M KH₂PO₄+0.8M KCl)线性改变至100％的缓冲液B。从16分钟到26分钟运行100％的缓冲液B，并在1分钟内改变回到100％的A。缓冲液A运行直到32分钟。在整个32分钟运行期间流速恒定在1ml/min。使用5∶1比例的Ultima-Flo^TM AP(PerkinElmer)：柱洗脱剂。

通过比较放射色谱图中放射性代谢物的保留时间与样品中掺入的非放射性参比标准物的保留时间鉴定了样品中的RO1080713衍生物。

图3用图说明了4′-AU的有效磷酸化，其大约比4′-AC高10倍。

实施例9

如本实施例中所述制备了用于通过多种途径施用的主题化合物的药物组合物。

用于口服施用的组合物(A)

将各成分混合并分配入胶囊中，每粒胶囊含有100mg；一粒胶囊近似为一个总日剂量。

用于口服施用的组合物(B)

将各成分混合并用溶剂如甲醇制粒。然后将配制物干燥并用适宜的压片机制成片剂(含有约20mg活性化合物)。

用于口服施用的组合物(C)

将各成分混合，从而形成用于口服施用的混悬液。

胃肠外制剂(D)

将活性成分溶解于一部分注射用水中。然后在搅拌下加入足够量的氯化钠使溶液等张。用剩余的注射用水将溶液补足重量，通过0.2微米膜过滤器过滤，在无菌条件下包装。

以它们的具体形式或者在执行所公开的功能的工具或实现所公开的结果的方法或工艺方面表达的在上面的描述或下面的权利要求中所公开的特征酌情可以被分别利用或以这些特征的任何组合的形式利用，用于以其多样的形式实现本发明。

为了清楚和理解的目的，已经通过举例说明和实例的方式详细地描述了上面的发明。可以在所附的权利要求的范围内实施变化和修改对于本领域技术人员是显而易见的。因此，应当理解的是，上述描述是举例说明性的，而非限制性的。因此，本发明的范围不应根据上述描述来确定，而是应当根据后面所附的权利要求以及与这些权利要求的等价方案的全部范围来确定。

本文所参考的专利、公开的申请和科学文献建立了本领域技术人员的认识，在此通过引用的方式将其全文合并入本文，就如同将它们各自具体地和逐一地通过引用合并入本文一样。在本文所引用的任何参考文献与本申请的具体教导之间有任何矛盾的情况下，应当以后者为准。同样地，在一个词或短语的本领域理解的定义与该词或短语在本说明书中具体教导的定义有任何矛盾的情况下，应当以后者为准。

Claims (18)

1.式I的化合物：

其中：

R¹和R²(i)每次出现时独立地选自氢、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基羰基和

C_1-6氨基烷基羰基或(ii)R¹和R²基团一起是C(＝O)；

R³是氢、C_1-6烷基羰基、C_1-6烷氧基羰基或C_1-6氨基烷基羰基，或其药学上可接受的盐，条件是R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基。

3.根据权利要求10所述的化合物，其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基，且R³是氢。

4.根据权利要求10所述的化合物，其中R¹和R²是氢，且R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：

丙酸(2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-2-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-5-羟基甲基-4-丙酰基氧基-四氢-呋喃-3-基酯；

异丁酸(2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-2-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-4-异丁酰基氧基-5-异丁酰基氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯；

丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-双-丙酰基氧基-四氢-呋喃-2-基甲基酯；

乙酸(2R，3R，4S，5R)-4-乙酰氧基-5-乙酰氧基甲基-5-叠氮基-2-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-3-基酯；

戊酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-双-戊酰基氧基-四氢-呋喃-2-基甲基酯；和

丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲基酯。

6.治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的方法，其包含：用治疗有效量的权利要求1的化合物治疗需要其的患者。

7.根据权利要求6所述的方法，其中R¹、R²和R³是C_1-6烷基羰基。

8.根据权利要求6所述的方法，其中R¹和R²是C_1-6烷基羰基，且R³是氢。

9.根据权利要求6所述的方法，其中R¹和R²是氢，且R³是C_1-6烷基羰基或C_1-6氨基烷基羰基。

10.根据权利要求7所述的方法，其进一步包含：施用至少一种免疫系统调节剂和/或至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述免疫系统调节剂选自干扰素、白介素、肿瘤坏死因子或集落刺激因子。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述免疫系统调节剂是干扰素或化学衍生化的干扰素。

13.根据权利要求10所述的方法，其进一步包含：施用至少一种其它抗病毒剂。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗病毒化合物选自HCV蛋白酶抑制剂、另外的核苷HCV聚合酶抑制剂、非核苷HCV聚合酶抑制剂、HCV解旋酶抑制剂、HCV引发酶抑制剂和HCV融合抑制剂。

15.其中R¹、R²和R³如权利要求1中所定义的式I化合物用于治疗HCV感染的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，与至少一种免疫系统调节剂和/或至少一种抑制HCV复制的抗病毒剂组合使用。

17.其中R¹、R²和R³如权利要求1中所定义的式I化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗HCV感染。

18.药物组合物，其包含与至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合的治疗有效量的权利要求1的化合物。

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