CN102670951B - 一种中药组合物中橙皮苷的含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种中药组合物中橙皮苷含量测定的方法，本发明中药组合物由酸枣仁、陈皮、茯苓、桑椹、菊花等9味中药组成，本发明方法采用高效液相色谱法测定其中橙皮苷的含量，符合药物制剂质量控制的要求，可有效控制该中药组合物中橙皮苷的含量。

Description

一种中药组合物中橙皮苷的含量测定方法

技术领域

本发明涉及到一种中药组合物中橙皮苷的含量测定方法，特别地，涉及一种中药组合物中橙皮苷含量的高效液相色谱法外标法测定的方法。

背景技术

由于中药组合物成份复杂，因此，不同中药组合物难以采用相同的方法测定，不同的中药组合物需要根据其组合物特点建立其特有的检测方法，且需要严格的方法学研究，才可以用于控制该中药组合物的含量测定。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物中橙皮苷的含量测定方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：酸枣仁300-500、桑椹300-500、菊花100-160、茯苓50-80、山楂100-160、百合50-80、陈皮50-80、荷叶50-80、灵芝100-160，该方法采用高效液相色谱法外标法测定，测定条件如下：

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为10-20:90-80，流速为1.0ml/min；

供试品溶液的制备方法：取所述中药组合物制剂或制剂内容物1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备方法：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本发明中药组合物中橙皮苷的含量测定方法中所使用的色谱柱规格优选为4.6×150mm、填料粒径优选为5μm，流动相优选为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比优选为18:82，理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；供试品溶液的制备方法中所述聚酰胺柱填料粒径优选为100-200目，内径优选为1.0cm，填料重量优选为1.5g，所述微孔滤膜规格优选为0.45μm。

本发明提供的中药组合物中的橙皮苷的含量测定方法，其目的是作为该中药组合物的质量控制方法，为更好实现发明目的，本发明中的中药组合物进一步优选为如下重量份的原料药制成：

酸枣仁375、桑椹375、菊花125、茯苓62.5、山楂125、百合62.5、陈皮62.5、荷叶62.5、灵芝125。

该中药组合物还优选为由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁300、桑椹500、菊花100、茯苓80、山楂100、百合80、陈皮50、荷叶80、灵芝100。

该中药组合物还优选为由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁500、桑椹300、菊花160、茯苓50、山楂160、百合50、陈皮80、荷叶50、灵芝160。

该中药组合物还优选为由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁375、桑椹500、菊花125、茯苓80、山楂125、百合80、陈皮62.5、荷叶80、灵芝125。

该中药组合物还优选为由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁300、桑椹375、菊花100、茯苓62.5、山楂100、百合62.5、陈皮50、荷叶62.5、灵芝100。

该中药组合物还优选为由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁400、桑椹400、菊花130、茯苓65、山楂130、百合65、陈皮65、荷叶65、灵芝130。

本发明的橙皮苷含量测定方法适用于上述中药组合物制成的各种制剂剂型，进一步优选为胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂或丸剂。

本发明方法测定橙皮苷的含量从多个方面评价该方法的可行性，评价方法如下：

1、仪器与试药

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪；METTLERTOLEDOAT201分析天平；试药：本发明颗粒剂（石家庄以岭药业股份有限公司，批号：030201，030202，030203；按照实施例2的制备方法制备）；橙皮苷对照品（批号：110721-200211）；乙腈（Fisher，色谱纯）；其他试剂均为分析纯。

2、检测波长的选择对橙皮苷对照品进行光谱检测，光谱图上可见，在283nm、328nm处均有最大吸收，但在283nm处吸收较大，所以选择283nm为本样品的检测波长。

3、专属性实验按处方比例取陈皮以外的其它原料药材，依照制备工艺制得阴性样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照液，吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，进样，测定，结果阴性样品不干扰橙皮苷的测定。空白试验见图1。

4、标准曲线：精密吸取不同浓度的对照品溶液，注入高效液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），绘制标准曲线。得回归方程：Y=1.69832177X-1.7400625，r=1.00000，表明橙皮苷进样量在136.32-2453.76ng范围内具有良好的线性关系。

5、精密度试验：吸取对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样5次，测定峰面积，结果对照品峰面积的RSD为0.14%，说明仪器性能良好。

6、稳定性试验：吸取供试品溶液，于0，2，6，12，24h进样，测定峰面积，结果供试品峰面积的RSD为0.37%，说明24h内供试品溶液稳定。

7、重复性试验：取同一批样品，分别取高中低三个样品量，每个样品量3份，按供试品的制备方法制备，测定，结果样品的含量（mg/g）平均值为0.9224，RSD为0.62%，说明方法精密度良好。

8、回收率试验：采用加样回收试验，取同一批样品9份，分三组，分别加入高、中、低3种量的橙皮苷对照品溶液，按供试品的制备方法处理后，依法测定，计算回收率，结果见表1。结果橙皮苷的平均回收率为96.69%，RSD为1.10%（n=9），说明方法的准确度良好。

表1回收率试验结果

序	样品中橙皮	添加橙皮苷	测出橙皮苷	回收率		RSD
							号	苷的量（mg）	的量（mg）	的量（mg）	（%）	（%）	（%）
1	0.6958	0.5391	1.2119	95.73
							2	0.6946	0.5391	1.2098	95.57
3	0.6965	0.5391	1.2194	96.99
							4	0.6968	0.6888	1.3580	95.99
5	0.6961	0.6888	1.3633	96.86	96.69	1.10
							6	0.6948	0.6888	1.3547	95.80
7	0.6968	0.8386	1.5066	96.57
							8	0.6949	0.8386	1.5194	98.32
9	0.6954	0.8386	1.5201	98.34

2.11样品的测定结果：按上述色谱条件，依法测定十批样品中橙皮苷的含量，结果见表2。

表2样品中橙皮苷含量测定结果

样品批号	橙皮苷含量（mg/袋）
		030101	6.254
030102	5.726
		030103	5.871
030201	6.745
		030202	7.047
030203	7.376
		030204	6.472
030401	8.852
		030402	7.334
030403	8.421

为实现本发明技术方案，发明人还解决了如下难点：

1、对洗脱溶剂用量进行了考察，发现提取物残渣用10ml水溶解后上1.5g聚酰胺柱，再加10ml水冲洗，不但除去了诸多杂质，而且不影响橙皮苷的含量测定，从而有利于保护色谱柱。

2、对洗脱溶剂进行了考察，发现：使用50％甲醇和30％甲醇都能将橙皮苷洗脱完全，但50%甲醇洗脱时，在紧邻橙皮苷位置有一杂质峰。为避免其对橙皮苷的含量测定造成影响，所以采用30%甲醇洗脱。经过优化后不仅提高了橙皮苷的分离度，增加了峰容量，还缩短了分析时间。

3、由于提取溶剂、提取溶剂用量、超声时间对橙皮苷的溶出均有一定的影响，因此对这些因素进行了考察，结果发现选定的条件最适合橙皮苷的提取，并且重复性和回收率试验均表明所选的条件能够保证橙皮苷含量测定的准确度。

附图说明

图1橙皮苷含量测定专属性实验色谱图。

具体实施方式

实施例1

处方：

酸枣仁300g、桑椹500g、菊花100g、茯苓80g、山楂100g、百合80g、陈皮50g、荷叶80g、灵芝100g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70—80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，加苯甲酸钠0.1%，调节PH值至规定范围；加水至1000ml，搅均，静置，滤过，灌封，灭菌即得口服液。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为10:90，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取口服液1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为100目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.45微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.41	0.73	1.27	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例2

处方：

酸枣仁375g、桑椹375g、菊花125g、茯苓62.5g、山楂125g、百合62.5g、陈皮62.5g、荷叶62.5g、灵芝125g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，加入1.5倍量的蔗糖，制粒，烘干，封装，即得颗粒剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×250mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为18:82，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取研细的颗粒细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为200目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.45微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.37	0.62	1.10	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例3

处方：

酸枣仁300g、桑椹500g、菊花100g、茯苓80g、山楂100g、百合80g、陈皮50g、荷叶80g、灵芝100g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，用80%乙醇制粒，烘干，填充胶囊，即得胶囊剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为20:80，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取研细的胶囊内容物细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为150目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.38微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.27	0.93	1.59	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例4

处方：

酸枣仁500g、桑椹300g、菊花160g、茯苓50g、山楂160g、百合50g、陈皮80g、荷叶50g、灵芝160g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，封装，即得散剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为10:90，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取散剂细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为200目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.22微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.32	0.63	1.84	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例5

处方：

酸枣仁375g、桑椹500g、菊花125g、茯苓80g、山楂125g、百合80g、陈皮62.5g、荷叶80g、灵芝125g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，加水泛制为丸，即得丸剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为15:85，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取研细的丸剂细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为200目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.45微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.51	0.71	1.94	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例6

处方：

酸枣仁300g、桑椹375g、菊花100g、茯苓62.5g、山楂100g、百合62.5g、陈皮50g、荷叶62.5g、灵芝100g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，加80%乙醇制粒，填充胶囊，即得胶囊剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为15:85，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取研细的胶囊内容物细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为200目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.45微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.22	1.01	1.38	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

实施例7

处方：

酸枣仁400g、桑椹400g、菊花130g、茯苓65g、山楂130g、百合65g、陈皮65g、荷叶65g、灵芝130g；

制备方法：

以上九味，混合粗碎；加水9倍量，浸泡1小时，加热煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，滤过，合并煎液，减压浓缩成相对密度1.2-1.25（60℃热测）清膏；加95%乙醇，边加边搅拌，至醇浓度70-80%；4℃以下静置24小时，过滤，减压回收乙醇至无醇味，喷雾干燥，加80%乙醇制粒，填充胶囊，即得胶囊剂。

橙皮苷含量测定方法：

色谱条件

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为17:83，流速为1.0ml/min；理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；

供试品溶液的制备：取研细的胶囊内容物细粉1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为100目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用0.45微米的微孔滤膜滤过，即得；

对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

评价结果：

评价结果表

	线性关系曲线相关系数	溶液稳定性RSD(%)	重复性RSD(%)	回收率RSD(%)	空白试验
						结果	1.0000	0.83	0.77	1.65	无干扰

结论：该方法用于测定该中药组合物中的橙皮苷含量，结果令人满意可以用于控制该中药组合物中的橙皮苷含量。

Claims (8)

1.一种中药组合物中橙皮苷的含量测定方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：酸枣仁300-500、桑椹300-500、菊花100-160、茯苓50-80、山楂100-160、百合50-80、陈皮50-80、荷叶50-80、灵芝100-160，其特征在于，该方法采用高效液相色谱法外标法测定，测定条件如下：

色谱条件：色谱柱：WatersSymmetryshieldRP18色谱柱，色谱柱为规格为4.6×150mm、填料粒径为5μm；检测波长：283nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，室温体积比为18:82，理论板数以橙皮苷峰计不低于2000；流速为1.0ml/min；供试品溶液的制备方法：取所述中药组合物制剂1.5g，精密称定，精密加入25ml甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，上聚酰胺柱，聚酰胺柱填料粒径为100-200目，填料重量1.5g，内径为1.0cm，先加水10ml洗脱，弃去，再用50ml30%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％的甲醇溶解并转移至25ml的容量瓶中，加50％的甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，所述微孔滤膜规格为0.45μm，即得；

对照品溶液的制备方法：精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含27μg的溶液，摇匀，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液15μl与供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

2.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁375、桑椹375、菊花125、茯苓62.5、山楂125、百合62.5、陈皮62.5、荷叶62.5、灵芝125。

3.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁300、桑椹500、菊花100、茯苓80、山楂100、百合80、陈皮50、荷叶80、灵芝100。

4.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁500、桑椹300、菊花160、茯苓50、山楂160、百合50、陈皮80、荷叶50、灵芝160。

5.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁375、桑椹500、菊花125、茯苓80、山楂125、百合80、陈皮62.5、荷叶80、灵芝125。

6.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁300、桑椹375、菊花100、茯苓62.5、山楂100、百合62.5、陈皮50、荷叶62.5、灵芝100。

7.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于该中药组合物由如下重量份的原料药制成：

酸枣仁400、桑椹400、菊花130、茯苓65、山楂130、百合65、陈皮65、荷叶65、灵芝130。

8.如权利要求1所述的橙皮苷的含量测定方法，其特征在于所述中药组合物制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、散剂或丸剂。