CN102584780B - 一种蓝萼甲素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种蓝萼甲素衍生物及其制备方法和应用，该蓝萼甲素衍生物为蓝萼甲素的7α，14β-位的2个羟基与各种醛(酮)缩醛(酮)化的衍生物。本发明提供的衍生物目标产物明确，无其它异构体产生，产物容易纯化，产率高。

Description

一种蓝萼甲素衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药发明领域，具体涉及蓝萼甲素(glaucocalyxin A，GLA)的缩醛(酮)化衍生物，还涉及该衍生物的制备方法及应用。

背景技术

恶性肿瘤是当前危害人类生命和健康的严重疾病之一，据世界卫生组织(WTO)统计，全世界每年约有600万人被其夺去生命，并把1000万人置于死亡边缘，其引起的死亡率占所有疾病死亡率的第二位，仅次于心血管疾病。我国癌症死亡人数从70年代约70万人，到现在发病人数在120万左右，死亡增至约90万人，且仍呈现急剧上升趋势。

到目前为止，化疗是肿瘤综合治疗主要手段之一，抗癌药物研究一直受到各国政府，大型制药企业及广大医药研究工作者的重视。但是，现有抗肿瘤药大多数是化学合成药，存在着毒副作用大、易产生耐药性等问题。因此，从自然界中寻找高效低毒的天然抗癌肿瘤活性化合物并进行结构改造合成其衍生物，成为当前抗肿瘤药物研究的重要趋势。

唇形科(Labiatae)香茶菜属(Isodon)植物资源丰富，种类繁多，广泛分布于亚洲东部和非洲西部，在我国约有90余种，除新疆、青海及内蒙古外，几乎遍布全国，该属植物具有清热解毒、活血化瘀的功效，可用于抗菌消炎、抗肿瘤、治疗各种肝炎等。

蓝萼甲素(glaucocalyxin A，GLA)，化学名称为：(5β，7α，9β，10α)-7，14-二羟基贝壳杉-16-烯-3，15-二酮；又名leukamenin F，分子式为C₂₀H₂₈O₄，分子量：332.43，CAS登记号：79498-31-0，密度：1.22g/cm³，熔点：513.4℃，易溶于甲醇、乙醇。

蓝萼甲素(glaucocalyxinA，GLA)是唇形科香茶菜属药用植物蓝萼香茶菜(Isodonjaponica var.glaucocalyx)的主要药效成分，1981年许云龙等人(许云龙，孙西昌，孙汉董.云南植物研究.1981，3(03)：1-3)首次从蓝萼香茶菜中分离得到蓝萼甲素，并用波谱方法鉴定了其结构。

蓝萼甲素在蓝萼香茶菜的干燥叶子中含量高达1.03％[张元桐，沙东旭，沙明等.中国中药杂志，1991，16(11)：679]。其结构与冬凌草甲素(oridonin)类似，属于对映-贝壳杉烷类二萜，且结构中也具有类似冬凌草甲素的抗肿瘤药效基团α，β-不饱和环戊酮结构单元。体内外抗肿瘤实验表明，其对多种人癌瘤细胞株如CE-1、U87、A549、MCF-7、Hela、K562、Hep G2、NCI-H460、KB、JEG-3、K562、HL-60等具有显著的抑制增殖作用，特别对非激素依赖性前列腺癌(DU-145)、直肠癌(Lovo)细胞最为敏感，抗瘤谱广；能抑制Lewis肺癌、S180实体型以及HCA实体型等实体瘤的生长，明显增加荷腹水型S180腹水型和荷HCA腹水型小鼠的生命延长率，其抗肿瘤的强弱呈剂量依赖关系。2011年最新文献[Li Wen Gao，Jian Zhang，Wen Hua Yang，BinWang，Jian Wen Wang.Toxicology in Vitro 2011，25：51-63]报道了蓝萼甲素通过线粒体-调节死亡途径诱导凋亡，抑制人早幼粒白血病细胞增殖，是一种很有前景的具有抗肿瘤活性的先导化合物。

但是，蓝萼甲素，极性小，水溶性差，不适合直接作为药物给药；体外具有较强的抗肿瘤作用，但体内需要大剂量长时间才能产生药效。药物在体内消除快、半衰期短、生物利用度低，尚不能直接作为药物使用。因此在保留药效基团α，β-不饱和环戊酮的前提下，对其7位和14位羟基进行结构修饰，合成抗肿瘤药效更强的衍生物，是一条解决其作为药物存在的缺陷的有效途径。

已有中国专利申请200910056458.8(公开号为CN 101993359A)、200910056457.3(公开号为CN 101993370A)、200910056459.2(公开号为CN 101993373A)报道了其7位和14位羟基的脂肪酸和芳香酸酯、二元酸酯及多肽类修饰。但7位和14位两个羟基均可酯化，可能有2个一取代产物和一个二取代产物，产物复杂。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一类对肿瘤细胞增殖具有良好抑制活性、结构修饰的蓝萼甲素的缩醛(酮)化衍生物，解决其极性小、难溶于水、半衰期短、体内消除快等缺陷，作为治疗癌症的药物使用。

本发明提供的一种蓝萼甲素的缩醛(酮)化衍生物，如通式I所示：

其中，R₁和R₂为H或C1-C10的直链或支链烃基；

或，R₁和R₂为

其中n为1-3；X为C、N、O、S；R为单取代或多取代羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基、C1-C10直链或支链单取代或双取代氨基或酰氨基、硝基、氰基、卤素、羧基及其盐等；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

n为0-6，X₁和X₂为C或N，R₃为单取代或多取代羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基及其盐、C1-C10直链或支链单取代或双取代氨基及其盐或酰氨基、硝基、氰基、卤素、羧基及其盐等；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

其中R₄为H，或C1-C10直链或支链烃基，或取代芳基、苄基、芳烃基；所述取代基为单取代或多取代羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基及其盐、C1-C10直链或支链氨基及其盐或酰胺基、硝基、氰基、卤素、羧基及其盐等；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为其中X₃为C或N，X₄为N、O或S，R₆为H，或C1-C10直链或支链烃基，或取代芳基、苄基、芳烃基；所述的取代基为单取代或多取代羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基及其盐、C1-C10直链或支链氨基及其盐或酰胺基、硝基、氰基、卤素、羧基及其盐等；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

n为0-30。

优选地，所述通式I中，R₁和R₂为

n＝2，X＝C，R＝H或CH₃，该衍生物为式II a或式II b所示化合物：

优选地，所述通式I中，R₁＝H，R₂＝CH₃，该衍生物为式III所示化合物：

优选地，所述通式I中，R₁＝H，

R₃＝H，CH₃，OMe，NO₂，Cl，F，COOH，该衍生物为式IVa、式IVb、式IVc、式IVd、式IVe、式IVf或式IVg所示化合物：

优选地，所述通式I中，R₁＝H，

R₃＝Cl或F，该衍生物为式Va或式Vb所示化合物：

本发明还涉及所述的蓝萼甲素衍生物的制备方法，该方法包括以下步骤：

将蓝萼甲素与醛或酮按照摩尔比为1∶1.2～1∶1.7溶于有机溶剂，在酸性条件下，加热回流，发生脱水反应，经层析分离，得到蓝萼甲素衍生物。

上述反应中：

所述醛或酮选自环己酮、取代环己酮、脂肪族醛酮、单取代苯甲醛或多取代苯甲醛、五元及六元杂环醛酮、聚乙二醇醛；

所述有机溶剂选自四氢呋喃(THF)、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、1，4-二氧六环、乙酸乙酯、己烷、环己烷、二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯中的一种或两种以上的混合物；

所述酸性条件是添加无机酸、有机酸或非质子Lweis酸。其中无机酸选自干燥氯化氢气体、磷酸或浓硫酸；有机酸选自三氟乙酸、芳香酸、对甲苯磺酸或氨基磺酸；非质子Lweis酸选自三氯化铁、硫酸铁铵、硫酸铝或甲基磺酸铜；

所述层析分离包括柱层析、制备薄层层析、制备或半制备高效液相色谱等。

所述蓝萼甲素可以在市场上购买，也可通过以下步骤制备：

取唇形科香茶菜属植物的地上部分，干燥粉碎后，加入其重量2-5倍量的提取溶剂浸提，浸提液减压浓缩过滤后，滤液用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩得30℃时相对密度为1.05-1.25的浸膏。取浸膏溶解后，以大孔吸附树脂层析脱色，以80％甲醇-水洗脱，洗脱液减压浓缩得黄色粉末，然后以200-300目硅胶柱层析，用氯仿/甲醇以50∶1、30∶1梯度洗脱，对氯仿/甲醇30∶1洗脱部位进行纯化得到目标化合物。

其中：

所述香茶菜属植物为蓝萼香茶菜(Isodon japonica var.glaucocalyx)；

所述提取溶剂为50-70％丙酮-水溶液；

所述浸提为室温下浸泡2-3次，每次3-5天；

所述萃取为采用2-4倍量的乙酸乙酯萃取2-3次；

所述纯化为对氯仿/甲醇30∶1的洗脱部位进行硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯以5∶1洗脱，浓缩后甲醇中重结晶，得到目标化合物。

本发明提供了上述蓝萼甲素衍生物的药物组合物，该药物组合物由所述任一蓝萼甲素衍生物与药学上可接受的载体或赋形剂组成。

所述剂型，包括但不限于片剂、胶囊剂、软胶剂、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓释制剂或控释制剂。

所述药学上可接受的载体或赋形剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。

所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等；

所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；

所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；

所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁；

所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；

所述润湿剂选自甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；

所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；

所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；

所述甜味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠。

本发明涉及了所述蓝萼甲素衍生物任一化合物，或任一种药物组合在制备抗癌药物中的应用，以及其应用于癌症患者。特别是用于治疗肝癌、肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、食管癌、绒癌、口腔表皮样癌、前列腺癌、直肠癌、急性粒细胞白血病及慢性粒细胞白血病的应用。

本发明关于蓝萼甲素衍生物在治疗癌症中的使用剂量取决于许多因素，如肿瘤的种类、肿瘤的发展状态，病人的年龄、性别，给药途径，以及临床医生的具体诊断。通常，有效剂量为0.01-100mg/Kg体重。

本发明提供的蓝萼甲素衍生物具有以下优点：

1、该衍生物是一类对映-贝壳杉烷型四环二萜物质，具有对映-贝壳杉烷型二萜结构骨架、孤立羰基、与环外双键共轭的环戊酮药效基团。是蓝萼甲素的7α和14β-位的2个羟基与各种醛(酮)缩醛(酮)化的衍生物。

2、蓝萼甲素的缩醛(酮)化反应，目标产物明确，无其它异构体产生，产物容易纯化，产率高。

3、蓝萼甲素通过缩醛(酮)化修饰，引入羧基或氨基，可制备成相应的盐，提高水溶性，制备水溶剂型；或引入烃基、烃氧基、芳香基等脂溶性基团，提高脂溶性，制备油溶剂型。提高了体内的生物利用度。

附图说明

图1A：蓝萼甲素的环己酮衍生物2a的¹H-NMR；

图1B：蓝萼甲素的环己酮衍生物2a的¹³C-NMR

图1C：蓝萼甲素的环己酮衍生物2a的HR-ESI-MS；

图2A：蓝萼甲素的乙醛衍生物3的¹H-NMR；

图2B：蓝萼甲素的乙醛衍生物3的¹³C-NMR；

图2C：蓝萼甲素的乙醛衍生物3的HR-ESI-MS；

图3A：蓝萼甲素的苯甲醛衍生物4a的¹H-NMR；

图3B：蓝萼甲素的苯甲醛衍生物4a的¹³C-NMR；

图3C：蓝萼甲素的苯甲醛衍生物4a的HR-ESI-MS；

图4A：蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物4g的¹H-NMR；

图4B：蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物4g的¹³C-NMR；

图4C：蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物4g的HR-ESI-MS；

图5A：蓝萼甲素与2，6-二氯苯甲醛的衍生物5a的¹H-NMR；

图5B：蓝萼甲素与2，6-二氯苯甲醛的衍生物5a的¹³C-NMR；

图5C：蓝萼甲素与2，6-二氯苯甲醛的衍生物5a的HR-ESI-MS。

其中附图中：图1C中S1为蓝萼甲素的环己酮衍生物2a，图2C中S12为蓝萼甲素的乙醛衍生物3，图3C中的S7为蓝萼甲素的苯甲醛衍生物4a，图4C中的S4为蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物4g，图5C中的S8为蓝萼甲素与2，6-二氯苯甲醛的衍生物5a。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

以下实施例所述制备过程，所采用的所有化学试剂如无特别标注均为分析纯。

实施例1：蓝萼甲素的制备

1、提取

1)取蓝萼香茶菜(Isodon japonica var.glaucocalyx)药材地上部分粉碎至20目-50目，备用；

2)取地上部分的粉碎物10Kg，用40Kg的70％的丙酮/水混合溶剂(丙酮与水的体积比为7∶3)室温下浸泡5天，过滤后得滤液和剩余物，滤液减压浓缩至无丙酮味，得到提取液；

3)将步骤2)所得剩余物，用25Kg 70％的丙酮/水混合溶剂室温下浸泡5天，过滤后得滤液和剩余物，滤液减压浓缩至无丙酮味，得到提取液，过滤后剩余物重复步骤3)操作1-2次；

4)合并步骤2)和3)所得的提取液；

2、溶剂处理

1)将1所得的提取液低温4-6℃静置，弃下层固体叶绿素得到上清液；

2)将所得的上清液与其体积的2-4倍量的乙酸乙酯混合，室温条件下，以60转/分的转速搅拌10分钟，静置8-12小时，溶液分层，上层乙酸乙酯减压浓缩，回收乙酸乙酯，得到固体浓缩物，下层进一步处理；

3)将步骤2)的下层与2-4倍量的乙酸乙酯混合，室温条件下，以60转/分的转速搅拌10分钟，静置8-12小时，溶液分层，上层乙酸乙酯部分减压浓缩，回收乙酸乙酯，得到固体浓缩物，下层水部分重复步骤3)2-3次；

4)合并步骤2)和3)所得的固体浓缩物310g；

3、大孔吸附树脂脱色

将2所得的固体浓缩物加入1000mL的70％甲醇-水(甲醇与水的体积比为7∶3)，然后加热至完全溶解，得到溶液，溶液缓慢加到大孔吸附树脂柱中，观察树脂的颜色，采用80％甲醇-水30L洗脱，收集流出液，TLC检测至无蓝萼甲素，减压浓缩，得黄色固体粉末；

4、硅胶柱层析分离

将3所得的淡黄色固体粉末用甲醇全部溶解并拌入硅胶(100-200目)，室温溶剂挥发至干，将得到拌硅胶样品，加到硅胶柱(200-300目)上端，用氯仿/甲醇(50∶1，30∶1)溶剂对硅胶柱进行梯度洗脱，分别收集不同梯度的洗脱液。氯仿/甲醇30∶1洗脱部分，减压浓缩得到淡黄色固体粉末；

5、纯化

将4所得淡黄色固体粉末进一步进行硅胶柱层析，用石油醚(60-90℃)/乙酸乙酯(5∶1)20L洗脱，收集洗脱液，TLC检测至无目标物，减压浓缩，得到白色固体粉末。白色固体粉末在甲醇溶剂中重结晶，得到针状晶体蓝萼甲素。

实施例2：蓝萼甲素的衍生物

实施例2.1：蓝萼甲素的环己酮衍生物II a(如反应式I所示化合物2a)

按照反应式I所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用环己酮进行衍生化，得到蓝萼甲素的环己酮衍生物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在664mg蓝萼甲素(2mmol)和294mg环己酮(3mmol)的甲苯(25mL)溶液中，加入14mg对甲苯磺酸(0.074mmol)，在氮气保护下加热回流5小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含II a的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1，R_f＝0.6)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的环己酮衍生物II a，产率为56％。

蓝萼甲素的环己酮衍生物II a：白色粉末。对其结构进行HR-ESI-MS、¹³C-NMR和¹H-NMR检测，结果见图1A、1B、1C，得出II a具有以下结构特征：分子式：C₂₆H₃₆O₄；ESI-HR-MS：m/z 435.2513[M+Na]⁺(calcd.for C₂₆H₃₆O₄Na，435.2511)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δH 5.38 and 4.57(each 1H，s，2H-17)，4.53(1H，s，H-14)，4.22(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.07(1H，s，H-13)，1.17，1.11 and 1.06(each 3H，s，3×Me)，6.15(1H，s，H-1′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δC 215.90(s，C-3)，205.94(s，C-15)，146.67(s，C-16)，117.67(t，C-17)，70.55(d，C-14)，70.45(d，C-7)，55.03(s，C-8)，51.45(d，C-9)，51.40(d，C-5)，47.27(s，C-4)，43.23(d，C-13)，39.64(s，C-10)，38.41(t，C-1)，34.20(t，C-2)，30.56(t，C-12)，23.24(t，C-6)，26.12(q，C-18)，21.67(q，C-19)，17.03(q，C-20)，18.24(t，C-11)，97.84(s，C-1′)，37.99(t，C-2′)34.83(t，C-6′)，28.86(t，C-3′)，25.64(t，C-5′)，22.73(t，C-4′)。

实施例2.2：蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物IIb(如反应式I所示化合物2b)

按照反应式I所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对甲基环己酮进行衍生化，得到蓝萼甲素的对甲基环己酮产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在664mg蓝萼甲素(2mmol)和336mg对甲基环己酮(3mmol)的甲苯(25mL)溶液中，加入15mg对甲苯磺酸(0.079mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含II b的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1，R_f＝0.5)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物II b，产率为51％。

蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物(IIb)：白色粉末。对其结构进行HR-ESI-MS、13C-NMR和¹H-NMR检测，得出II b的结构特征如下：分子式：C₂₇H₃₈O₄；ESI-HR-MS：m/z 449.2667[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₈O₄Na，449.2668)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ_H 5.37 and 4.62(each 1H，s，2H-17)，4.46(1H，s，H-14)，4.20(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.06(1H，s，H-13)，1.17，1.13，1.09 and 1.06(each 3H，s，4×Me)，6.14(1H，s，H-1′)¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ_C 215.84(s，C-3)，205.88(s，C-15)，146.78(s，C-16)，117.13(t，C-17)，70.60(d，C-14)，70.39(d，C-7)，55.01(s，C-8)，51.53(d，C-9)，51.44(d，C-5)，47.28(s，C-4)，43.22(d，C-13)，38.89(s，C-10)，38.41(t，C-1)，34.20(t，C-2)，30.57(t，C-12)，23.24(t，C-6)，26.09(q，C-18)，21.68(q，C-19)，17.06(q，C-20)，18.26(t，C-11)，97.84(s，C-1′)，34.00(t，C-2′)31.96(t，C-6′)，31.61(t，C-3′)，29.37(t，C-5′)，21.87(d，C-4′)。

实施例2.3：蓝萼甲素的乙醛衍生物III(如反应式II所示化合物3)

按照反应式II所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用乙醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的乙醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

50mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和132mg乙醛(3mmol)的甲苯(15mL)溶液中，加入10mg对甲苯磺酸(0.053mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含III的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1，R_f＝0.4)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的乙醛衍生物III，产率为65％。

蓝萼甲素的乙醛衍生物(III)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，结果见图2A、2B、2C，得知III的结构特征为：分子式：C₂₂H₃₀O₄；ESI-HR-MS：m/z 381.2041[M+Na]⁺(calcd.for C₂₂H₃₀O₄Na，381.2042)。¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.37 and 4.62(each 1H，s，2H-17)，4.46(1H，s，H-14)，4.20(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.06(1H，s，H-13)，1.17，1.13，1.09 and 1.06(each3H，s，4×Me)，6.14(1H，s，H-1′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.81(s，C-3)，205.78(s，C-15)，146.48(s，C-16)，117.87(t，C-17)，72.00(d，C-14)，71.80(d，C-7)，55.15(s，C-8)，51.53(d，C-9)，50.99(d，C-5)，47.33(s，C-4)，43.27(d，C-13)，38.27(s，C-10)，37.99(t，C-1)，34.07(t，C-2)，30.96(t，C-12)，23.26(t，C-6)，26.52(q，C-18)，21.22(q，C-19)，17.09(q，C-20)，18.22(t，C-11)，91.24(d，C-1′)，21.51(t，C-2′)。

实施例2.4：蓝萼甲素的苯甲醛衍生物IVa(如反应式III所示化合物4a)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和238mg苯甲醛(2.25mmol)的苯(20mL)溶液中，加入11mg对甲苯磺酸(0.058mmol)，在氮气保护下加热回流7小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVa的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1，R_f＝0.5)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的苯甲醛衍生物IVa，产率为62％。

蓝萼甲素的苯甲醛衍生物(IVa)的性状为白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，结果见图3A、3B、3C，得知IVa的结构特征为：分子式：C₂₇H₃₂O₄;ESI-HR-MS：m/z 443.2197[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₂O₄Na，443.2198)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.87and 5.41(each 1H，s，2H-17)，4.74(1H，s，H-14)，4.44(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.21(1H，s，H-13)，1.24，1.14and 1.13(each3H，s，3×Me)，6.21(1H，s，H-1′)，7.34(5H，m，H-Ar)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.78(s，C-3)，205.55(s，C-15)，146.52(s，C-16)，117.95(t，C-17)，77.90(d，C-14)，72.64(d，C-7)，55.38(s，C-8)，51.80(d，C-9)，51.13(d，C-5)，47.41(s，C-4)，43.37(d，C-13)，38.39(s，C-10)，38.06(t，C-1)，34.11(t，C-2)，31.04(t，C-12)，23.26(t，C-6)，26.57(q，C-18)，21.62(q，C-19)，17.22(q，C-20)，18.32(t，C-11)，93.19(d，C-1′)，138.13(d，C-2′)129.32(d，C-5′)，128.52(d，C-4′，6′)，126.55(d，C-3′7′)。

实施例2.5：蓝萼甲素的对甲苯甲醛衍生物IVb(如反应式III所示化合物4b)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对甲基苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的对甲苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg，蓝萼甲素(1.5mmol)和270mg，对甲苯甲醛(2.25mmol)的苯(20mL)溶液中，加入12mg对甲苯磺酸(0.063mmol)，在氮气保护下加热回流7小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVb的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1，R_f＝0.47)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对甲苯甲醛衍生物IVb，产率为67％。

蓝萼甲素的对甲苯苯甲醛衍生物(IVb)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知IVb的结构特征为：分子式：C₂₈H₃₄O₄；ESI-HR-MS：m/z 457.2357[M+Na]⁺(calcd.for C₂₆H₃₆O₄Na，457.2355)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.87and 5.41(each 1H，s，2H-17)，4.74(1H，s，H- 14)，4.44(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.21(1H，s，H-13)，1.24，1.14and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.21(1H，s，H-1′)，7.34(5H，m，H-Ar)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.80(s，C-3)，205.61(s，C-15)，146.56(s，C-16)，117.86(t，C-17)，77.81(d，C-14)，72.40(d，C-7)，55.34(s，C-8)，51.77(d，C-9)，51.11(d，C-5)，47.39(s，C-4)，43.36(d，C-13)，38.36(s，C-10)，38.05(t，C-1)，34.11(t，C-2)，31.01(t，C-12)，23.24(t，C-6)，26.55(q，C-18)，21.60(q，C-19)，17.19(q，C-20)，18.31(t，C-11)，93.13(d，C-1′)，139.09(d，C-2′)135.32(d，C-5′)，126.41(d，C-4′，6′)，129.13(d，C-3′，7′)，21.43(q，C-8′)。

实施例2.6：蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物IVc(如反应式III所示化合物4c)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对甲氧基苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和306mg对甲氧基苯甲醛(2.25mmol)的苯(20mL)溶液中，加入12mg对甲苯磺酸(0.063mmol)，在氮气保护下加热回流5小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVc的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1，R_f＝0.45)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物IVc，产率为69％。

蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物(IVc)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知IVc的结构特征为：分子式：C₂₈H₃₄O₅；ESI-HR-MS：m/z 473.2302[M+Na]⁺(calcd.for C₂₈H₃₄O₅Na，473.2304)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.82and 5.40(each 1H，s，2H-17)，4.72(1H，s，H-14)，4.43(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.20(1H，s，H-13)，1.23，1.14and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.20(1H，s，H-1′)，6.84(2H，d，H-3′，7′)，7.30(2H，d，H-4′，6′)，3.77(3H，s，H-8′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.80(s，C-3)，205.63(s，C-15)，146.58(s，C-16)，117.90(t，C-17)，77.84(d，C-14)，72.48(d，C-7)，55.33(s，C-8)，51.79(d，C-9)，51.15(d，C-5)，47.42(s，C-4)，43.39(d，C-13)，38.39(s，C-10)，38.08(t，C-1)，34.13(t，C-2)，31.04(t，C-12)，23.29(t，C-6)，26.58(q，C-18)，21.63(q，C-19)，17.23(q，C-20)，18.33(t，C-11)，94.02(d，C-1′)，130.71(s，C-2′)，160.40(s，C-5′)，113.92(d，C-4′，6′)，127.87(d，C-3′，7′)，55.53(s，C-8′)

实施例2.7：蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物IVd(如反应式III所示化合物4d)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对硝基苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的对硝基甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和340mg对硝基苯甲醛(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入13mg对甲苯磺酸(0.068mmol)，在氮气保护下加热回流7小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVd的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1，R_f＝0.4)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物IVd，产率为70％。

蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物(IVd)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知IVd的结构特征为：分子式：C₂₇H₃₁NO₆；ESI-HR-MS：m/z 488.2050[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₁NO₆Na，488.2049)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.95 and 5.44(each 1H，s，2H-17)，4.77(1H，s，H-14)，4.47(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.32(1H，s，H-13)，1.24，1.16and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.21(1H，s，H-1′)，7.57(2H，d，H-3′，7′)，8.17(2H，d，H-4′，6′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.48(s，C-3)，202.54(s，C-15)，146.36(s，C-16)，118.32(t，C-17)，78.12(d，C-14)，72.61(d，C-7)，55.43(s，C-8)，51.80(d，C-9)，51.10(d，C-5)，47.39(s，C-4)，43.34(d，C-13)，38.40(s，C-10)，38.02(t，C-1)，34.07(t，C-2)，31.05(t，C-12)，23.32(t，C-6)，26.64(q，C-18)，21.62(q，C-19)，17.24(q，C-20)，18.28(t，C-11)，92.62(d，C-1′)，144.62(s，C-2′)，146.18(s，C-5′)，127.68(d，C-4′，6′)，123.67(d，C-3′，7′)。

实施例2.8：蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物IVe(如反应式III所示化合物4e)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对氯苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的对氯苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和317mg对氯苯甲醛(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入12mg对甲苯磺酸(0.063mmol)，在氮气保护下加热回流7小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVe的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1，R_f＝0.4)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物IVe，产率为58％。

蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物(IVe)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知IVe的结构特征为：分子式：C₂₇H₃₁ClO₄；ESI-HR-MS：m/z 477.1610[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₁ClO₄Na，477.1809)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.84and 5.41(each 1H，s，2H-17)，4.73(1H，s，H-14)，4.43(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.20(1H，s，H-13)，1.23，1.14and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.20(1H，s，H-1′)，7.29(2H，d，H-3′，7′)，7.30(2H，d，H-4′，6′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.65(s，C-3)，205.38(s，C-15)，146.39(s，C-16)，118.07(t，C-17)，77.92(d，C-14)，72.50(d，C-7)，55.36(s，C-8)，51.78(d，C-9)，51.12(d，C-5)，47.40(s，C-4)，43.35(d，C-13)，38.39(s，C-10)，38.04(t，C-1)，34.09(t，C-2)，31.04(t，C-12)，23.25(t，C-6)，26.60(q，C-18)，21.61(q，C-19)，17.21(q，C-20)，18.30(t，C-11)，92.38(d，C-1′)，135.07(s，C-2′)，136.71(s，C-5′)，128.67(d，C-4′，6′)，128.01(d，C-3′，7′)。

实施例2.9：蓝萼甲素的对氟苯甲醛衍生物IVf(如反应式III所示化合物4f)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用对氟苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的对氟苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和279mg对氟苯甲醛(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入12mg对甲苯磺酸(0.063mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVf的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1，R_f＝0.45)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的对氟苯甲醛衍生物IVf，产率为55％。

蓝萼甲素的对氟甲醛衍生物(IVf)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知式IVf所示化合物：分子式：C₂₇H₃₁FO₄；ESI-HR-MS：m/z 461.2103[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₁FO₄Na，461.2104)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.84and 5.41(each 1H，s，2H-17)，4.73(1H，s，H-14)，4.43(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.20(1H，s，H-13)，1.23，1.14and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.20(1H，s，H-1′)，7.29(2H，d，H-3′，7′)，7.30(2H，d，H-4′，6′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.69(s，C-3)，205.45(s，C-15)，146.37(s，C-16)，118.06(t，C-17)，77.87(d，C-14)，72.49(d，C-7)，55.31(s，C-8)，51.74(d，C-9)，51.08(d，C-5)，47.38(s，C-4)，43.31(d，C-13)，38.35(s，C-10)，38.01(t，C-1)，34.08(t，C-2)，31.00(t，C-12)，23.23(t，C-6)，26.54(q，C-18)，21.60(q，C-19)，17.19(q，C-20)，18.27(t，C-11)，93.47(d，C-1′)，128.49(s，C-2′)，128.41(s，C-5′)，115.49(d，C-4′，6′)，115.27(d，C-3′，7′)。

实施例2.10：蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物IVg(如反应式III所示化合物4g)

按照反应式III所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用4-甲酰苯甲酸缩醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和337mg 4-甲酰苯甲酸(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入13mg对甲苯磺酸(0.068mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含IVg的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，R_f＝0.45)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的-甲酰苯甲酸衍生物IVg，产率为50％。

蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物(IVg)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，结果见图4A、4B、4C，得知IVg的结构特征为：分子式：C₂₈H₃₂O₆；ESI-HR-MS：m/z 487.2099[M+Na]⁺(calcd.for C₂₈H₃₂O₆Na，487.2097)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：5.93and 5.43(each 1H，s，2H-17)，4.77(1H，s，H-14)，4.47(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.23(1H，s，H-13)，1.24，1.15 and 1.14(each3H，s，3×Me)，6.22(1H，s，H-1′)，7.49(2H，s，H-3′，7′)，8.05(2H，s，H-4′，6′)，10.13(1H，s，H-8′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.70(s，C-3)，208.20(s，C-15)，146.32(s，C-16)，118.21(t，C-17)，78.06(d，C-14)，74.77(d，C-7)，55.44(s，C-8)，51.81(d，C-9)，51.12(d，C-5)，47.42(s，C-4)，43.36(d，C-13)，38.40(s，C-10)，38.04(t，C-1)，34.10(t，C-2)，31.06(t，C-12)，23.23(t，C-6)，26.61(q，C-18)，21.63(q，C-19)，17.24(q，C-20)，18.31(t，C-11)，93.35(d，C-1′)，143.52(s，C-2′)129.79(s，C-5′)，130.44(d，C-4′，6′)，126.79(d，C-3′，5′)，170.54(s，C-8′)。

实施例2.11：蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物V a(如反应式IV所示化合物5a)

按照反应式IV所示的反应方程式，将实施例1制备的蓝萼甲素，采用2，6-二氯苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和394mg 2，6-二氯苯甲醛(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入13mg对甲苯磺酸(0.068mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含Va的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，R_f＝0.4)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物V a，产率为53％。

蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物(Va)的性状为白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，结果见图5A、5B、5C，得知V a的结构特征为：分子式：C₂₇H₃₀Cl₂O₄；ESI-HR-MS：m/z 511.1418[M+Na]⁺(calcd.forC₂₇H₃₀Cl₂O₄Na，511.1419)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：6.59and 5.43(each 1H，s，2H-17)，4.76(1H，s，H-14)，4.46(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.24(1H，s，H-13)，1.25，1.15and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.22(1H，s，H-1′)，7.13(1H，t，H-5′)，7.24(2H，d，H-4′，6′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.73(s，C-3)，205.50(s，C-15)，146.76(s，C-16)，117.68(t，C-17)，78.51(d，C-14)，72.65(d，C-7)，55.36(s，C-8)，51.88(d，C-9)，51.06(d，C-5)，47.38(s，C-4)，43.38(d，C-13)，38.34(s，C-10)，38.03(t，C-1)，34.10(t，C-2)，30.90(t，C-12)，22.74(t，C-6)，26.51(q，C-18)，21.56(q，C-19)，17.25(q，C-20)，18.30(t，C-11)，91.97(d，C-1′)，131.90(s，C-2′)，130.55(d，C-5′)，129.59(d，C-4′，6′)，135.39(s，C-3′，7′)。

实施例2.12：由蓝萼甲素制备其2，6-二氟苯甲醛衍生物Vb(反应式IV所示化合物5b)

按照反应式IV所示的反应方程式，将实施例1做制备的蓝萼甲素，采用2，6-二氟苯甲醛进行衍生化，得到蓝萼甲素的2，6-二氟苯甲醛产物，所述衍生化步骤进一步包括：

100mL的圆底烧瓶中，在498mg蓝萼甲素(1.5mmol)和320mg 2，6-二氟苯甲醛(2.25mmol)的苯(25mL)溶液中，加入13mg对甲苯磺酸(0.068mmol)，在氮气保护下加热回流6小时。停止反应，过滤，滤液在30-40℃减压浓缩得粗产品。粗产品硅胶柱层析分离，以石油醚(60-90℃)/二氯甲烷(1∶3)为洗脱剂洗脱，收集含Vb的组分(TLC检测，254nm紫外吸收，石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1，R_f＝0.3)，减压浓缩，真空干燥，得到蓝萼甲素的2，6-二氟苯甲醛衍生物V a，产率为59％。

蓝萼甲素的2，6-二氟苯甲醛衍生物(Vb)：白色粉末。对其结构进行¹³C-NMR、HR-ESI-MS、¹H-NMR检测，得知Vb的结构特征为：分子式：C₂₇H₃₀F₂O₄；ESI-HR-MS：m/z 479.2013[M+Na]⁺(calcd.for C₂₇H₃₀F₂O₄Na，479.2010)；¹H-NMR(CDCl₃，400MHz，ppm)：δ：6.59 and 5.43(each 1H，s，2H-17)，4.76(1H，s，H-14)，4.46(1H，d，J＝12.4Hz，H-7)，3.24(1H，s，H-13)，1.25，1.15and 1.13(each 3H，s，3×Me)，6.22(1H，s，H-1′)，7.13(1H，t，H-5′)，7.24(2H，d，H-4′，6′)；¹³C-NMR(CDCl₃，100MHz，ppm)：δ：215.66(s，C-3)，205.06(s，C-15)，146.35(s，C-16)，117.70(t，C-17)，77.79(d，C-14)，72.54(d，C-7)，55.20(s，C-8)，51.62(d，C-9)，51.05(d，C-5)，47.31(s，C-4)，43.28(d，C-13)，38.29(s，C-10)，37.95(t，C-1)，34.03(t，C-2)，30.83(t，C-12)，22.74(t，C-6)，26.45(q，C-18)，21.58(q，C-19)，17.15(q，C-20)，18.21(t，C-11)，87.75(d，C-1′)，131.09(s，C-2′)，131.00(d，C-5′)，111.88(d，C-4′，6′)，112.12(s，C-3′，7′)。

实施例3：蓝萼甲素的缩醛(酮)衍生物的制剂及其制备方法

按照上述实施例2制备得到具有实施例2.1的分子结构的蓝萼甲素的环己酮衍生物(II a)，实施例2.2的分子结构的蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物(II b)，实施例2.3的分子结构的蓝萼甲素的乙醛衍生物(III)，实施例2.4的分子结构的蓝萼甲素的苯甲醛衍生物(IVa)，实施例2.5的分子结构的蓝萼甲素的对甲苯甲醛衍生物(IVb)，实施例2.6的分子结构的蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物(IVc)，实施例2.7的分子结构的蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物(IVd)，实施例2.8的分子结构的蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物(IVe)，实施例2.9的分子结构的蓝萼甲素的对氟苯甲醛衍生物(IVf)，实施例2.10的分子结构的蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物(IVg)，实施例2.11的分子结构的蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物(Va)，实施例2.12的分子结构的蓝萼甲素的2，6-二氟苯甲醛衍生物(Vb)。

将所得的的蓝萼甲素的缩醛(酮)衍生物，采用药剂学上的常规药物载体，并采用药剂学上的常规制备方法，制备成药剂学上的常规剂型，包括但不限于片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、软胶剂、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服剂、混悬剂、冲剂、贴剂、栓剂、软膏、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、缓释制剂或控释制剂。

实施例4：蓝萼甲素的缩醛(酮)衍生物针对人绒毛膜癌JEG-3肿瘤细胞、肝癌Hep G2肿瘤细胞、肺癌A549肿瘤细胞、口腔表皮样癌KB肿瘤细胞、急性(早幼)粒细胞白血病K562肿瘤细胞及慢性粒细胞白血病HL-60肿瘤细胞的生长抑制作用的药效学实验。

1、药物与试剂

受试样品，DMEM、1640培养基，10％灭活小牛血清(FBS)，PBS溶解液，二甲基亚砜(DMSO)，三联液(10％SDS+5％异丙醇+12mM HCl)，噻唑蓝(MTT)，阿霉素(阳性对照药)

2、仪器：

超净工作台，CO₂培养箱，多功能倒置显微镜，离心机，自动酶标仪，96孔培养板

3、细胞株

人绒癌JEG-3肿瘤细胞、人肝癌Hep G2肿瘤细胞、人肺癌A549肿瘤细胞、人口腔表皮样癌KB肿瘤细胞、人急性(早幼)粒细胞白血病K562肿瘤细胞及人慢性粒细胞白血病HL-60肿瘤细胞

4、样品配制

取按照上述实施例制备得到的蓝萼甲素的环己酮衍生物，对甲基环己酮衍生物，乙醛衍生物，苯甲醛衍生物，对甲苯甲醛衍生物，对甲氧基苯甲醛衍生物，对氟苯甲醛衍生物，对氯苯甲醛衍生物，对硝基苯甲醛衍生物，4-甲酰苯甲酸衍生物，2，6-二氯苯甲醛衍生物，2，6-二氟苯甲醛衍生物，用DMSO溶解化合物，超声溶解，浓度100mM/L，所得药物溶液可在-20℃条件下储存。

5、实验方法

步骤3：贴壁细胞的药物MTT实验，其进一步包括：

所述贴壁细胞包括人绒癌JEG-3肿瘤细胞、人肝癌Hep G2肿瘤细胞、人肺癌NCI-H460肿瘤细胞、人口腔表皮样癌KB肿瘤细胞。

步骤3.1：收集对数期细胞，用完全DMEM培养基悬浮，并调整细胞悬液浓度为3×10⁴/mL，接种96孔细胞培养板，100uL/孔。置37℃，5％CO₂培养箱培养24小时，弃去上清，加入新鲜完全DMEM培养基，90uL/孔，并加入不同浓度待测药物溶液，10uL/孔，每个浓度设3个复孔；空白孔加入DMEM培养基10uL/孔；本底孔加入不含细胞的培养基100uL/孔。

步骤3.2：置37℃，5％CO₂孵育48小时。

步骤3.3：每孔加入100uLMTT溶液(0.5mg/mL，不完全DMEM培养基配制)，继续置培养箱孵育4h。

步骤3.5：4h后终止培养，弃去上清，每孔加入150uL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡5min，使结晶物充分溶解。

步骤3.7：在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值。

步骤4：悬浮细胞的药物MTT实验，其进一步包括：

所述悬浮细胞包括人急性早幼粒细胞白血病HL-60肿瘤细胞及人红白血病K562肿瘤细胞。

步骤4.1：收集对数生长期细胞，用完全RPMI1640培养基悬浮，细胞计数，并调整细胞浓度为3×10⁵/mL，接种96孔细胞培养板，90uL/孔。加入不同浓度待测药物溶液，10uL/孔，每个浓度设3个复孔；空白孔加入1640培养基10uL/孔；本底孔加入不含细胞的培养基100uL/孔。

步骤4.2：置37℃，5％CO₂孵育48小时。

步骤4.3：每孔加入10uL MTT溶液(5mg/1mL，1640培养基配制)，继续置培养箱孵育4h。

步骤4.4：加入三联液(10％SDS+5％异丙醇+12mM HCl)，10uL/孔，37℃孵育12小时。

步骤4.5：在酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

6、实验结果

蓝萼甲素的缩醛(酮)衍生物对人绒癌JEG-3肿瘤细胞、肝癌Hep G2肿瘤细胞、肺癌A549肿瘤细胞、口腔表皮样癌KB肿瘤细胞、急性(早幼)粒细胞白血病K562肿瘤细胞及慢性粒细胞白血病HL-60肿瘤细胞的生长抑制作用如表1所示：

表1：实施例2的化合物II a-II b、III、IVa-IVg、V a-Vb对癌瘤细胞株增殖的影响

注：式II a表示是蓝萼甲素的环己酮衍生物；

式IIb表示是蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物；

式III表示是蓝萼甲素的乙醛衍生物；

式IVa表示是蓝萼甲素的苯甲醛衍生物；

式IVb表示是蓝萼甲素的对甲苯甲醛衍生物；

式IVc表示是蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物；

式IVd表示是蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物；

式IVe表示是蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物；

式IVf表示是蓝萼甲素的对氟苯甲醛衍生物；

式IVg表示是蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物；

式V a表示是蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物；

式Vb表示是蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物。

实施例5：蓝萼甲素的缩醛(酮)衍生物制剂的应用

按照上述实施例2制备得到具有实施例2.1的分子结构的蓝萼甲素的环己酮衍生物(式II a)，实施例2.2的分子结构的蓝萼甲素的对甲基环己酮衍生物(式IIb)，实施例2.3的分子结构的蓝萼甲素的乙醛衍生物(式III)，实施例2.4的分子结构的蓝萼甲素的苯甲醛衍生物(式IVa)，实施例2.5的分子结构的蓝萼甲素的对甲苯甲醛衍生物(式IVb)，实施例2.6的分子结构的蓝萼甲素的对甲氧基苯甲醛衍生物(式IVc)，实施例2.7的分子结构的蓝萼甲素的对硝基苯甲醛衍生物(式IVd)，实施例2.8的分子结构的蓝萼甲素的对氯苯甲醛衍生物(式IVe)，实施例2.9的分子结构的蓝萼甲素的对氟苯甲醛衍生物(式IVf)，实施例2.10的分子结构的蓝萼甲素的4-甲酰苯甲酸衍生物(式IVg)，实施例2.11的分子结构的蓝萼甲素的2，6-二氯苯甲醛衍生物(式Va)，实施例2.12的分子结构的蓝萼甲素的2，6-二氟苯甲醛衍生物(式Vb)。在制备抗癌药物中的应用，以及其应用于癌症患者。特别是用于治疗肝癌、肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、食管癌、绒癌、口腔表皮样癌、前列腺癌、直肠癌、急性粒细胞白血病及慢性粒细胞白血病的应用。

上述内容为本发明的具体实施例的例举，对于其中未详尽表述的试剂、设备、操作方法等，应当理解为采取本领域已有的普通及常规试剂、设备、操作方法等来予以实施。

虽然上文中已经用一般性说明及具体实施方案做了详尽的阐述，但本发明上述实施例仅为说明本发明技术方案之用，仅为本发明技术方案的例举，并不限于本发明的技术方案及其保护范围。在本发明基础上采用等同技术手段、等同试剂等对本发明权利要求书及说明公开书所公开的技术方案的一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的修改或改进均属于本发明要求保护的范围，应当认为是没有超出本发明权利要求书及说明书所公开的范围。

Claims (9)

1.一种蓝萼甲素衍生物，其特征在于，该衍生物如通式Ⅰ所示：

其中，R₁和R₂为其中n为1-3；X为C、N、O、S；R为羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基、C1-C10直链或支链单取代或双取代烷基胺基或酰胺基、硝基、氰基、卤素或羧基；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

n为0-6，X₁和X₂为N，R₃为羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基、C1-C10直链或支链单取代或双取代烷基胺基或酰胺基、硝基、氰基、卤素或羧基；

或，所述R₁=H，R₂=

R₃=H，OMe，NO₂或COOH，该衍生物为式Ⅳa、式Ⅳc、式Ⅳd或式Ⅳg所示化合物：

或，所述R₁=H,R₂=

R₃=Cl或F，该衍生物为式Ⅴa或式Ⅴb所示化合物：

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

其中R₄为H，或C1-C10直链或支链烃基，或取代芳基、苄基、芳烃基；取代芳基中所述取代基为羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基、C1-C10直链或支链烷基胺基或酰胺基、硝基、氰基、卤素或羧基；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为

其中X₃为C或N，X₄为N、O或S；R₆为H，或C1-C10直链或支链烃基，或取代芳基、苄基、芳烃基；取代芳基中所述取代基为羟基、C1-C10直链或支链烃氧基、C1-C10直链或支链烃基、乙酰氧基、氨基、C1-C10直链或支链烷基胺基或酰胺基、硝基、氰基、卤素或羧基；

或，R₁为H或C1-C10的直链或支链烷基；R₂为n为0-30。

2.根据权利要求1所述的衍生物，其特征在于，所述R₁和R₂为n=2，X=C，R=H或CH₃，该衍生物为式Ⅱa或式Ⅱb所示化合物：

3.根据权利要求1所述的衍生物，其特征在于，所述R₁=H，R₂=

R₃=H，OMe，NO₂或COOH，该衍生物为式Ⅳa、式Ⅳc、式Ⅳd或式Ⅳg所示化合物：

4.根据权利要求1所述的衍生物，其特征在于，所述R₁=H,R₂=R₃=Cl或F，该衍生物为式Ⅴa或式Ⅴb所示化合物：

5.一种制备权利要求1-4任一项所述的蓝萼甲素衍生物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将蓝萼甲素与醛或酮按照摩尔比为1:1.2～1:1.7溶于有机溶剂，在酸性条件下，加热回流，经脱水反应，分离，得到蓝萼甲素衍生物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、1,4-二氧六环、乙酸乙酯、己烷、环己烷、二氯甲烷、氯仿、苯或甲苯中的一种或两种以上的混合物。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酸性条件是添加无机酸、有机酸或非质子Lweis酸，其中无机酸选自干燥氯化氢气体、磷酸或浓硫酸；有机酸选自三氟乙酸、芳香酸、对甲苯磺酸或氨基磺酸；非质子Lweis酸选自三氯化铁、硫酸铁铵、硫酸铝或甲基磺酸铜。

8.权利要求1-4任一项所述的蓝萼甲素衍生物在制备抗肿瘤的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌、肺癌、脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、食管癌、绒毛膜癌、口腔表皮样癌、前列腺癌、直肠癌、急性粒细胞白血病及慢性粒细胞白血病。

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