CN102552916B - 水杨酸钠的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了水杨酸钠的新用途，为将水杨酸钠作为外用制剂中促渗剂的用途，所述外用制剂为以重组链激酶为主要药效成分的治疗痔类疾病的外用制剂。本发明还进一步公开了一种治疗痔类疾病的外用制剂，其主药成分是浓度为80000IU—180000IU/g的重组链激酶，外用制剂还含有重量百分比含量为0.01—3%的水杨酸钠作为促渗剂。本发明采用水杨酸钠作为促渗剂制备的重组链激酶软膏，透皮效果佳，制备的外用制剂可用于治疗痔类疾病。

Description

水杨酸钠的新用途

技术领域

本发明涉及生物技术与医学应用领域，具体涉及水杨酸钠作为重组链激酶外用制剂中促渗剂的用途及相关应用。

背景技术

水杨酸钠作为一种常用的解热镇痛及非甾体抗炎镇痛药，其作用机制与阿司匹林相似，通过抑制环氧合酶，减少前列腺素的合成，起到抗炎、抗风湿和解热镇痛作用。其抗炎抗风湿作用与阿司匹林相似，但解热、镇痛作用较弱。

重组链激酶是一种采用重组DNA技术制备的蛋白类药物，其作用机理是与纤溶酶原以1∶1克分子比结合成复合物，然后把纤溶酶原激活成纤溶酶，纤溶酶催化血栓主要基质纤维蛋白水解，从而有效、特异地溶解血栓，达到治疗血栓性疾病的效果。目前临床使用剂型为冻干粉针剂，用于急性心肌梗塞、深静脉血栓等血管再通，尚无其经皮给药的相关报道。

痔是最常见影响人们健康和生活质量的疾病之一，也是世界范围内发病率最高的直肠疾病之一，近年来我国的发病率每年大约以16％的幅度上升。目前，90％以上的痔疮通常采用非手术疗法进行治疗。用于治疗痔疮的药物种类较多，化学合成类药物多为口服剂型而易导致全身性不良反应的发生；中药类栓剂或软膏剂不良反应轻，主要通过清热解毒、止血生肌而达到消肿止痛的效果，但由于疗程较长且停药后易反复，而致患者必须长期用药方可显效；且栓剂尚有使用不适、用药时间局限等不便，相比而言，软膏剂或膜剂等外用制剂更易为患者所接受。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中的缺陷，提供一种水杨酸钠的新用途及相关应用。

本发明首先公开了水杨酸钠作为外用制剂中促渗剂的用途，所述外用制剂为以重组链激酶为主要药效成分的治疗痔类疾病的外用制剂。

其中，重组链激酶系由高效表达链激酶基因的大肠肝菌，经发酵、分离和高度纯化后制得，纯度＞95％(HPLC法、电泳法)。

所述痔类疾病是指人体直肠末端粘膜下和肛管皮肤下静脉丛发生扩张和屈曲所形成的柔软静脉团，包括内痔、外痔、混合痔，是肛门直肠底部及肛门粘膜的静脉丛发生曲张而形成的一个或多个柔软的静脉团的一种慢性疾病。

进一步的，所述水杨酸钠在外用制剂中的含量为0.01-3％，优选0.1-2.5％。

本发明还进一步公开了一种治疗痔类疾病的外用制剂，其主药成分是浓度为80000IU-180000IU/g的重组链激酶，优选100000IU-150000IU/g。所述外用制剂还含有重量百分比含量为0.01-3％的水杨酸钠作为促渗剂，优选0.1-2.5％。

所述外用制剂可以为经皮给药制剂或经腔道粘膜给药制剂，进一步的，所述外用制剂为软膏剂或栓剂。

由于重组链激酶蛋白存在分子量大、易失活、易降解、不易经皮渗透等缺陷，配制外用制剂在稳定性、渗透性、吸收率等方面不易达到要求，经研究，优化的辅料配方是将十八醇、单甘酯、凡士林、液状石蜡、甘油、司盘、水杨酸钠和尼泊金乙酯共同作为辅料，其中，水杨酸钠作为促渗剂，该优化配方的外用制剂在稳定性、渗透性、吸收率方面均表现出色，且局部刺激性、过敏性等不良反应发生率极低。

作为优选方案之一，本发明的治疗痔类疾病的外用制剂为经皮给药软膏剂，其主药成分为浓度为100000IU-150000IU/g的重组链激酶，所述软膏剂中包括下列重量百分含量的辅料组分(以软膏剂的总重量为基准计)：

十八醇        5-20％

单甘酯        3-15％

凡士林        2-20％

液状石蜡      2-10％

甘油          5-10％

司盘          0.5-2％

尼泊金乙酯    0.05-0.5％

水杨酸钠      0.1-2.5％。

注射用水      余量

本发明的软膏剂的制备方法为：

1)按处方量称取已灭菌的十八醇、单甘酯、凡士林、液状石蜡、司盘、尼泊金乙酯，加热使完全熔融，搅匀，过筛去杂质，作为分散相I；

2)另取一容器，称取已灭菌的甘油、水杨酸钠与注射用水混匀，水浴加热溶解，过筛，作为分散相II。

3)然后，将温度控制在70-80℃，采用真空均质的方法，使1)，2)两相混匀并乳化且微粒的粒径控制在200nm-3μm；

4)将重组链激酶进行蛋白保护后，经除菌处理；

5)将上述步骤3)获得的乳化物继续搅拌并冷却至30-35℃时，加入步骤4)中已经过处理的主药成分重组链激酶，使其混匀，继续搅拌并自然冷却至室温即得产品。

以上制备方法得到的软膏剂微粒的粒径极细，易于穿透皮肤，提高吸收率；且本发明中使用了更适宜于重组链激酶的促渗剂水杨酸钠，使得主药到达作用部位的浓度大大提高，药效显著增强。

作为优选方案之二，本发明的治疗痔类疾病的外用制剂为栓剂，其主药成分为浓度为100000IU-150000IU/g的重组链激酶，所述栓剂中还包括下列重量百分含量的辅料组分(以栓剂的总重量为基准计)：

氢化椰油甘油混合酯    75-95％

司盘                  0.5-2.0％

尼泊金乙酯            0.05-0.5％

水杨酸钠              0.1-2.5％

注射用水              余量

本发明的栓剂的制备方法为：

1)按处方量称取已灭菌的氢化椰油甘油混合酯、司盘、尼泊金乙酯，加热使完全熔融，搅匀，过筛去杂质，备用。

2)将水杨酸钠溶于注射用水，水浴加热溶解后，将此溶液加入上述1)中的混合物中，搅匀。

3)将重组链激酶进行蛋白保护后，经除菌处理；

4)将上述步骤2)获得的混合物继续搅拌并冷却至30-35℃时，加入步骤3)中已经过处理的主药成分重组链激酶，搅拌使其混匀，然后灌装入栓剂模具中，使其自然冷却至室温即得产品。

本发明的外用制剂采用基因工程技术制备的重组链激酶为原料，经加入适宜的促渗剂，制成吸收良好疗效显著的外用制剂，经皮或粘膜给药用于痔类疾病的治疗。

本发明中，发明人应用不同的促渗剂制备的重组链激酶软膏进行了经皮渗透试验，并与未加促渗剂进行对照研究。结果表明，采用水杨酸钠作为促渗剂制备的重组链激酶软膏，透皮效果最佳。

本发明的软膏剂，通过局部涂布于痔疮表面，经药物渗透，可定向作用于痔核，使血栓溶解、血肿消融、疼痛减轻，具有疗程短、疗效显著、不良反应率低的优点。由于采用了真空均质的方法，使得该软膏剂的微粒极为细小，而采用蛋白保护剂进行预处理的重组链激酶，在制剂中则更为稳定，在促渗剂水杨酸钠的协同作用下，极易穿透皮肤屏障，直达作用部位，发挥良好的药效。

本发明的栓剂，通过腔道给药，在机体正常体温下，能迅速软化熔融，或溶解于分泌液，逐渐释放药物而产生治疗作用，更便于内痔及混合痔的治疗。

具体实施方式

以下列举具体实施例以进一步阐述本发明，应理解，实例并非用于限制本发明的保护范围。

实施例1  小鼠透皮吸收试验研究

取健康雄性昆明种小鼠，体重20-25g，将其断颈处死，用剪刀将腹部的毛剪去，并用刮刀刮净，取下腹部皮肤，去除皮下组织及脂肪，检查鼠皮完整性(不得有任何破损)，用生理盐水洗净，平铺于铝箔上，-20℃条件下保存备用。

采用双室渗透扩散装置，离体皮肤角质层面向上，固定于两室之间。接收室内加入适量的蛋白稳定缓冲液，以300转/分的速度进行磁力搅拌，一侧连接上倾管道，使取样后可补充接收液。扩散室内加入1×10⁵IU重组链激酶和不同的促渗剂(见表1)，均匀涂布于皮肤表面。整个装置置于33℃恒温水浴中，分别于第1，2，3，4，6，8h从接收室取样3ml，并补充等量预热至33℃的缓冲液，将样品进行蛋白含量测定。结果显示，采用水杨酸钠作为促渗剂时，重组链激酶透皮渗透效果最好。

表1  不同配方的经皮累积透过量(mg/ml)

实施例2  小鼠耳廓肿胀的阳性对照药效学研究

取普通级昆明种小鼠48只，每组12支，雌雄各半，随机分为三个试验组，分别为重组链激酶加上三种不同促渗剂和生理盐水组(阴性对照)，取二甲苯0.05ml均匀涂于小鼠左耳前后两面致炎，0.5h后，在各试验组的小鼠致炎耳廓上分别均匀涂上等量重组链激酶和三种不同的促渗剂，促渗剂浓度同实施例1(见表2)，阴性对照组涂上生理盐水，2小时后，将小鼠颈椎离断处死，沿耳廓基线剪下左右双耳，用9mm打孔器分别在同一部位取下一耳片，在电子天平上称重，计算两耳片重量差为肿胀度，肿胀抑制率＝(生理盐水组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/生理盐水组平均肿胀度×100％

结果显示，重组链激酶加上不同促渗剂的三个试验组均有消肿作用，其中，水杨酸钠组的肿胀程度改善明显优于其他试验组。

表2  不同配方的消肿效果

配方	配方A	配方B	配方C	阴性对照组
					促渗剂	水杨酸钠	氮酮	薄荷醇	/
肿胀抑制率	1.84±0.21	1.70±0.24	1.35±0.22	0

实施例3  重组链激酶软膏剂的制备

按下表配方制备软膏剂

制备工艺：

1)按处方量称取已灭菌的十八醇、单甘酯、凡士林、液状石蜡、司盘、尼泊金乙酯，加热使完全熔融，搅匀，过筛去杂质，作为分散相I；

2)另取一容器，称取已灭菌的甘油与水杨酸钠混匀，水浴加热，过筛，作为分散相II。

3)然后，将温度控制在70-80℃，采用真空均质的方法，使1)，2)两相混匀并乳化且微粒的粒径控制在200nm-3μm；

4)将重组链激酶进行蛋白保护后，经除菌处理；

5)将上述第3)项中的乳化物继续搅拌并冷却至30-35℃时，加入第4)项中已经过处理的主药成分，使其混匀，继续搅拌并自然冷却至室温即得。

实施例4  大鼠角叉菜胶所致足跖肿胀模型的药效学研究

取大鼠40只，体重130-150g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，分别在右后足跖部涂布给予实施例3中的四种制剂(处方A、B、C、D)3次，每次间隔5分钟。末次给药后，测量各鼠足跖厚度，然后于其右后足跖皮下注射1％角叉菜胶0.1ml/只，致炎后分别于1、2、3、4小时测足跖厚度，肿胀度＝(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)。

结果显示，四种制剂均可对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有抑制作用，但处方A组(水杨酸钠组)的肿胀程度改善明显优于其他试验组。

表3  不同配方的药效比较

实施例5  重组链激酶软膏剂的制备

按照下表采用实施例3的方法配制软膏剂

实施例6  重组链激酶栓剂的制备

按照下表处方制备栓剂

本发明的栓剂的制备方法为：

1)按处方量称取已灭菌的氢化椰油甘油混合酯、司盘、尼泊金乙酯，加热使完全熔融，搅匀，过筛去杂质，备用。

2)将水杨酸钠溶于注射用水，水浴加热溶解后，将此溶液加入上述1)中的混合物中，搅匀。

3)将重组链激酶进行蛋白保护后，经除菌处理；

4)将上述步骤2)获得的混合物继续搅拌并冷却至30-35℃时，加入步骤3)中已经过处理的主药成分重组链激酶，搅拌使其混匀，然后灌装入栓剂模具中，使其自然冷却至室温即得产品。

实施例7  大鼠巴豆油肛门肿胀模型的药效学研究

取大鼠50只，体重200-250g，随机分为5组，每组10支，雌雄各半，将巴豆油混合液插入大鼠肛门，留置一定时间，然后于致炎后不同时间观察，以确定最优选生物模型的各项参数。经混合液用量、棉球插入肛门留置时间、大鼠周龄等不同条件筛选，确认最优选条件如下：巴豆油混合液的配比为，蒸馏水∶吡啶∶乙醚∶6％巴豆油＝1∶4∶5∶10，用量为0.16ml，浸润棉球后插入用乙醚浅麻醉的6周龄大鼠肛门内10秒钟，6小时后肛周肿胀明显，组织学观察可见，组织水肿，粘膜下浆膜周围亦显著肿胀，正常粘膜皱壁消失，粘膜上皮细胞活性降低，粘膜下血管扩张，并有白细胞与纤维蛋白浸润。

采用以上生物模型造模后，分别给予实施例6中的四种制剂(处方E、F、G、H)，同时以空白基质作为阴性对照。在给药前、给药后1、2、4、6、8、10、12、24小时测整个肛门周围组织肿胀的直径，取其长短二直径的均值作为所测量肿胀程度的指标，与空白基质对照组进行比较。

结果显示，四种制剂均可对巴豆油所致大鼠肛周肿胀有显著的抑制作用(P＜0.05)，但处方E组(水杨酸钠组)的肿胀程度改善明显优于其他试验组。

实施例8  重组链激酶栓剂的制备

按照下表采用实施例6的方法配制栓剂

Claims (4)

1.水杨酸钠作为外用制剂中促渗剂的用途，所述外用制剂为以重组链激酶为主要药效成分的治疗痔类疾病的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂为经皮给药制剂。

2.如权利要求1所述水杨酸钠的用途，其特征在于所述外用制剂为软膏剂。

3.一种治疗痔类疾病的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂为经皮给药软膏剂，其主药成分为浓度为100000IU—150000IU/g的重组链激酶，所述软膏剂中包括下列重量百分含量的辅料组分：

4.如权利要求3所述外用制剂，其特征在于，所述经皮给药软膏剂采用包括下列步骤的方法制得：

1)按配方称取已灭菌的十八醇、单甘酯、凡士林、液状石蜡、司盘、尼泊金乙酯，加热使完全熔融，搅匀，过筛去杂质，作为分散相I；

2)另取一容器，称取已灭菌的甘油、水杨酸钠与注射用水混匀，水浴加热溶解，过筛，作为分散相II；

3)然后，将温度控制在70—80℃，采用真空均质的方法，使I，II两相混匀并乳化且微粒的粒径控制在200nm-3μm；

4)将重组链激酶进行蛋白保护后，经除菌处理；

5)将上述步骤3)获得的乳化物继续搅拌并冷却至30—35℃时，加入步骤4)中已经过处理的主药成分重组链激酶，使其混匀，继续搅拌并自然冷却至室温获得产品。