CN102552875B - 一种双功能vegf受体融合蛋白制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种稳定的可溶性双功能VEGF受体融合蛋白液体制剂，该液体制剂中含有双功能VEGF受体融合蛋白5～50mg/ml，表面活性剂0.1～2mg/ml，溶液稳定剂0～10mg/ml，等渗调节剂0～10mg/ml，缓冲液5～25mmol/l，该液体制剂中含有等渗调节剂和/或溶液稳定剂。使用本发明公开的液体制剂可以明显的减少药品长期放置后产生的颗粒，稳定性很好，省去了药品使用前过滤的烦琐步骤，同时也可以使用药更安全。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种双功能VEGF受体融合蛋白制剂。
背景技术
肿瘤尤其是恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，在各种疾病所致死亡中高居第二位。而且近年来，其发病率呈明显上升趋势。恶性肿瘤治疗效果差，晚期转移率高，预后大多不佳。
研究显示，肿瘤的生长有两个明显不同的阶段，分别是无血管的缓慢生长期和有血管的快速增殖期，血管的生成使肿瘤能获得足够的营养而完成血管切换期，如果没有血管的生成，原发肿瘤的生长不超过1～2mm，转移则无法实现，因而抑制肿瘤血管生成被认为是当前最具有前途的肿瘤治疗方法之一。
在肿瘤组织中，肿瘤细胞、肿瘤侵入的巨噬细胞和肥大细胞能分泌高水平的VEGF，以旁分泌的形式刺激肿瘤血管内皮细胞，促进内皮细胞增殖、迁移，诱导血管形成，促进肿瘤持续生长，并提高血管通透性，引起周围组织纤维蛋白沉着，促进单核细胞、成纤维细胞内皮细胞侵润，有利于肿瘤基质形成和肿瘤细胞进入新生血管，促进肿瘤转移。针对该点，Genentech公司提供了抗癌新药Avastin(抗VEGF人源化抗体)，用于一线治疗转移性结直肠癌，并有望用于其它肿瘤，包括非小细胞肺癌和肾癌的治疗；Regeneron制药公司提供了VEGFR-Fc融合蛋白，以与血管内皮细胞表面的VEGFR竞争性结合VEGF和VEGF-B，从而抑制VEGF和VEGF-B的生物活性，阻断新生血管的形成。但上述2种药物均不能与VEGF-C或VEGF-D相结合(VEGF-C和VEGF-D可诱导肿瘤内淋巴管生成，进而促进肿瘤淋巴结转移)，因此不能抑制肿瘤淋巴结转移。
为克服该缺陷，上海中信国健药业股份有限公司在专利申请号为：200710193861.6、发明名称为：“可溶性VEGFR双功能融合受体、其制备方法及用途”的中国专利申请中公开了一种可溶性VEGFR双功能融合受体，该融合受体既能与血管内皮细胞表面的VEGFR竞争性结合VEGF和VEGF-B，还能与VEGF-C或VEGF-D相结合，从而不仅抑制VEGF和VEGF-B的生物活性，阻断新生血管的形成，还能阻断VEGF-C和VEGF-D对肿瘤内淋巴管生成的诱导，防止肿瘤淋巴结转移。但在该专利中，发明人未提供合适的可溶性VEGFR双功能融合受体药物制剂。
由于该VEGFR双功能融合受体为一种蛋白，因此，需要配制成合适的制剂，才能有利于保存、使用，否则蛋白容易失活或需要严苛的保存条件，从而提高了该蛋白药物的生产/使用成本，既不利于企业生产、保持该蛋白药物，也不利于患者使用该蛋白药物，因此，有必要对此进行研究，以克服其缺陷。
发明内容
为寻找到合适的制剂，本发明的发明人进行了长期研究，经大量试验，终于发现了一种稳定的可溶性双功能VEGF受体融合蛋白液体制剂。
本发明提供的稳定的可溶性双功能VEGF受体融合蛋白液体制剂含有双功能VEGF受体融合蛋白5～50mg/ml，表面活性剂0.1～2mg/ml，溶液稳定剂0～10mg/ml，等渗调节剂0～10mg/ml，缓冲液5～25mmol/l，该液体制剂中含有等渗调节剂和/或溶液稳定剂。
根据本发明的一个优选实施例，使用的溶液稳定剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖之一或其组合，更优选的溶液稳定剂为蔗糖。
根据本发明的一个优选实施例，使用的表面活性剂为吐温-80。
根据本发明的一个优选实施例，使用的等渗调节剂为氯化钠。
根据本发明的一个优选实施例，使用的缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris、组氨酸缓冲液之一或其组合，优选的缓冲液为由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠组成的磷酸盐缓冲液。
根据本发明的一个优选实施例，液体制剂中含有双功能VEGF受体融合蛋白20mg/ml，溶液稳定剂10mg/ml，等渗调节剂8mg/ml，缓冲液15mmol/l，表面活性剂0.7mg/ml；或含有双功能VEGF受体融合蛋白5mg/ml，溶液稳定剂1mg/ml，等渗调节剂5mg/ml，缓冲液5mmol/l，表面活性剂0.1mg/ml；或含有双功能VEGF受体融合蛋白15mg/ml，溶液稳定剂3mg/ml，等渗调节剂1mg/ml，缓冲液10mmol/l，表面活性剂0.5mg/ml 或含有双功能VEGF受体融合蛋白40mg/ml，溶液稳定剂5mg/ml，等渗调节剂10mg/ml，缓冲液20mmol/l，表面活性剂1.5mg/ml；或含有双功能VEGF受体融合蛋白50mg/ml，溶液稳定剂8mg/ml，等渗调节剂3mg/ml，缓冲液25mmol/l，表面活性剂2.0mg/ml；或含有双功能VEGF受体融合蛋白5mg/ml，等渗调节剂5mg/ml，缓冲液25mmol/l，表面活性剂1.0mg/ml；或含有双功能VEGF受体融合蛋白10mg/ml，溶液稳定剂3mg/ml，缓冲液25mmol/l，表面活性剂1.5mg/ml。。
本发明公开的液体制剂可以明显的减少药品长期放置后产生的颗粒，稳定性很好，省去了药品使用前过滤的烦琐步骤，同时也可以使用药更安全。
具体实施方式
以下结合实施例、实验例进一步说明本发明，下述实施例、实验例不应理解为对本发明的限制。
在本发明的下述实施例、实验例中，使用的双功能VEGF受体融合蛋白的制备参考专利申请号为：200710193861.6、发明名称为：“可溶性VEGFR双功能融合受体、其制备方法及用途”的中国专利申请中的方法。
双功能VEGF受体融合蛋白制剂的体内抑制肿瘤生长和体内抑制肿瘤转移活性的检测方法参考专利申请号为：200710193861.6、发明名称为：“可溶性VEGFR双功能融合受体、其制备方法及用途”的中国专利申请中的方法。
其它辅料均为市售药用级别。
在本发明的下述实施例、实验例中，虽然仅使用了磷酸盐缓冲液，但使用其他的pH合适的常规缓冲液，如Tris、组氨酸缓冲液等，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例、实验例中，虽然仅使用了蔗糖作为稳定剂，但使用其他的常规稳定剂，如海藻糖、麦芽糖之一或海藻糖、麦芽糖、蔗糖中的2种或3种的组合，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例、实验例中，虽然仅使用了吐温-80作为表面活性剂，但使用其他的常规稳定剂，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例、实验例中，虽然仅使用了NaCl作为等渗调节剂，但使用其他的常规等渗调节剂，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
实施例1-10、可溶性VEGFR双功能融合受体的液体制剂的制备
按表1的配方分别配制可溶性VEGFR双功能融合受体的液体制剂，获得半成品产品。
表1、可溶性VEGFR双功能融合受体的液体制剂配方
将半成品产品无菌分装入西林瓶中，加盖橡胶塞及铝塑盖，获得成品产品。
实验例、稳定性实验
按表2和表3的保存条件将实施例1-10的产品进行保存，并分别检测其体内抑制肿瘤生长和体内抑制肿瘤转移的活性，活性实验结果分别如表2和表3所示，其中，将保存前的产品作为对照，将保存后的产品活性与保存前的产品的活性的百分比值定义为保存后产品的活性，NO.1-10为实施例1-10得到的各三批样品进行稳定性实验后结果的平均值。
表2、抑制肿瘤生长检测结果
| 保存条件 | No.1 | NO.2 | NO.3 | NO.4 | NO.5 |
| 4℃，避光，3年 | 98％ | 97％ | 103％ | 98％ | 95％ |
| 30℃，避光，1年 | 96％ | 94％ | 99％ | 96％ | 97％ |
| 保存条件 | No.6 | NO.7 | NO.8 | NO.9 | NO.10 |
| 4℃，避光，3年 | 94％ | 94％ | 64％ | 71％ | 81％ |
| 30℃，避光，1年 | 93％ | 92％ | 58％ | 66％ | 69％ |
表3、抑制肿瘤转移检测结果
| 保存条件 | No.1 | NO.2 | NO.3 | NO.4 | NO.5 |
| 4℃，避光，3年 | 97％ | 98％ | 99％ | 95％ | 97％ |
| 30℃，避光，1年 | 96％ | 95％ | 97％ | 93％ | 95％ |
| 保存条件 | No.6 | NO.7 | NO.8 | NO.9 | NO.10 |
| 4℃，避光，3年 | 92％ | 93％ | 58％ | 67％ | 79％ |
| 30℃，避光，1年 | 90％ | 93％ | 55％ | 63％ | 72％ |
同时，对按表2和表3的保存条件保存后的液体制剂进行目测，检测其外观，根据目测结果，按表2和表3的保存条件保存后，No.1-7液体制剂溶液清澈；而No.8-10液体制剂溶液出现浑浊，有1瓶制剂的瓶底出现颗粒。
实验结果表明，本发明提供的制剂在4℃保存3年或30℃保存1年生物活性保持在90％以上，且明显的减少药品长期放置后产生的颗粒，稳定性很好，省去了药品使用前过滤的烦琐步骤，同时也可以使用药更安全，达到了本发明的目的。
Claims (1)
1.一种稳定的可溶性双功能VEGF受体融合蛋白液体制剂，其特征在于，所述液体制剂含有双功能VEGF受体融合蛋白20mg/ml，蔗糖10mg/ml，氯化钠8mg/ml，磷酸盐缓冲液15mg/ml，土温-800.7mg/ml；所述双功能VEGF受体融合蛋白按照申请号为200710193861.6的中国发明专利申请中的方法制备。
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