CN102432663B - 雷公藤红素衍生物及其制备和在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及雷公藤红素及衍生物和雷公藤红素衍生物的制备方法，还涉及以雷公藤红素衍生物为原料制备的生物盐，以及雷公藤红素衍生物在治备抗肿瘤药物中的应用，所述雷公藤红素衍生物具有如式I所示的结构：其中，R1为H、C1-C6直链或支链烷基、苄基及苯环上有取代苄基；R2或R3各自独立为C5-C6的环状烃基、C1-C6的链状烷基、苯基及取代苯基，或者R2、R3与N成环，所述的环为含N或O的六元环状杂环，所述雷公藤红素衍生物具有良好的抗肿瘤活性、稳定性及水溶性。且可与医学上可接受的无机酸(如盐酸、硫酸和磷酸)或有机酸(柠檬酸、肉桂酸和琥珀酸等)的一种成盐，该盐具有很好的水溶性。
Description
（一）技术领域
本发明涉及雷公藤红素及衍生物和雷公藤红素衍生物的制备方法，还涉及以雷公藤红素衍生物为原料制备的生物盐，以及雷公藤红素衍生物在治备抗肿瘤药物中的应用。
（二）背景技术
恶性肿瘤严重危害人们的健康，据WHO统计，在全世界50多亿人口中平均每年死于恶性肿瘤者达690万人，新发病例为870万例，且数字还在逐年增加。抗肿瘤药物治疗是癌症治疗的主要方法之一，天然产物是发现新型抗肿瘤药物的宝库，许多抗肿瘤药物的先导化合物都是从天然中获得，如长春碱、长春新碱、喜树碱、紫杉醇等，但这些天然化合物往往由于毒副作用、溶解性、稳定性等，需要进行结构修饰或改造，才能成为临床使用的抗肿瘤药物。
雷公藤红素(Celastrol)，又名南蛇藤素，为来源于中药雷公藤根皮的五环三萜化合物。雷公藤红素药理活性丰富，在传统中药中作用广泛，尤其是抗肿瘤方面。近期研究表明其抗肿瘤作用靶点可能是新生血管内皮细胞、热休克蛋白Hsp90和蛋白酶体等。新生血管内皮细胞：许多原发肿瘤的生长和转移依赖于血管。肿瘤实体既可通过新生血管从宿主获取营养和氧气，又可通过新生血管源源不断地向宿主输送转移细胞，并在机体的其他部位继续生长和诱导血管形成，导致肿瘤转移。血管的新生依赖于宿主和肿瘤细胞释放的多种分子的平衡，由上调血管产生的刺激因子和下调血管形成的抑制因子共同作用的结果。这为血管生成抑制剂以肿瘤内皮细胞为作用靶点提供了理论依据。相比其他抗肿瘤药物，血管生成抑制剂具有以下优势：(1)几乎不产生耐药性：肿瘤细胞具有较高的突变性而使其易于产生耐药性，血管生成抑制剂以内皮细胞为靶点，而该细胞几乎无突变，也就不会产生耐药作用；(2)用药剂量小；(3)毒副作用小：正常人体中，除了伤口愈合及生殖周期外，几乎所有的新生血管都是病理性，如风湿关节炎、肿瘤和糖尿病等。血管生成抑制剂直接作用于新生血管，自然不会产生诸如肠胃反应、肾毒性等毒副反应；(4)联合用药效果好：肿瘤的成因极其复杂，单一靶点的药物治疗难达预期，理想的治疗方案是联合多靶点药物用药。新生血管抑制剂特异作用于远离肿瘤细胞的血管，如联合肿瘤细胞靶点的药物用药，必将取得更好的疗效。蛋白酶体：是一种高度保守的多价催化蛋白酶复合物，广泛存在于真核细胞的核内和细胞质内。这种复合物能催化水解连接有多聚泛素链的蛋白，是泛素-蛋白酶体通路的主要组分。泛素-蛋白酶体通路主要通过以下多种途径对恶性肿瘤产生影响：(1)细胞的增殖需要周期蛋白进行调控，在细胞周期的不同阶段依赖特异的周期蛋白，而不需要的周期蛋白被及时降解，他们正是蛋白酶体的底物。(2)NF-kB转录因子与肿瘤发生、生长、转移和放化疗抵抗密切相关。正常状态下，NF-kB与其抑制蛋白IkB在细胞质中结合，以无活性的复合物形式存在，当蛋白酶体水解IkB后，便会释放出具有活性的NF-kB。(3)p53肿瘤抑制因子在正常细胞中低水平表达，能很快被蛋白酶体降解，抑制后者能提高p53的表达水平。热休克蛋白90(HSP90)：广泛存在于细胞内，占正常细胞总蛋白的1%～2%,它参与客户蛋白的活化、折叠等过程,发挥其分子伴侣的作用。Hsp90的客户蛋白包括酪氨酸激酶(Her2、EGFR)、亚稳信号蛋白(Akt、Raf-1和IKK)、突变信号蛋白(p53、v-Src)、嵌合信号蛋白(Bcr-Abl)、细胞周期调节蛋白(Cdk4、Cdk6)、类固醇受体（雄激素受体、雌激素受体及孕酮）等临床确证的抗肿瘤靶点及其他一些与细胞信号转导通路相关的蛋白。抑制Hsp90会导致客户蛋白构象异常，而形态异常的蛋白会被细胞通过泛素-蛋白酶体通路快速排除。Hsp90抑制剂的主要优点是它们可以同时阻断癌细胞形成的多个通路,避免了单一抑制某一通路时肿瘤细胞易产生耐药性的弊端。Hsp90在正常细胞内主要以潜在的非复合物状态存在,而在肿瘤细胞内Hsp90与多种辅分子伴侣形成复合物,以活化状态存在,使得Hsp90抑制剂具有特异性和选择性。与传统细胞毒作用机制相比，这类靶点抑制剂的抗肿瘤药物主要作用于在正常细胞和肿瘤细胞中差别巨大的调控细胞增殖生长的关键分子及其信号转导通路，提高了对肿瘤的选择性、降低了对正常组织的毒性因对应用前景十分好。
Nakanishi等研究表明雷公藤红素分子结构中，C-3羟基处于共轭体系中，如同酚羟基一样具有弱酸性，易氧化，接触酸碱都会产生复杂的重排反应，致使该化合物稳定性差。同时由于α-羟基醌甲基结构对酸很敏感，提示经口服给药时，酸性的胃酸会破坏部分雷公藤红素，致使药效降低。另一方面，雷公藤红素属于三萜类化合物，为脂溶性成分，在水中几乎不溶，体内生物利用度低，且难以直接以静脉注射方式给药，这极大得限制了其开发成药的可能。
随着研究的深入，雷公藤红素的高度毒性的观点广泛传播，成为抗肿瘤药物开发的一大难点。鲍一笑等研究表明雷公藤红素可以诱导HMC-1细胞凋亡，凋亡主要发生在S期。Sifeng Wang等研究发现雷公藤红素选择性差，直接给药易产生较大的副作用，在微摩尔浓度下即可影响正常发育状态下的斑马鱼胚胎的生长。
公开号为CN101041684A的中国专利公开了一种雷公藤红素葡甲胺盐化合物及其制备方法；公开号为CN101279995A的中国专利提供了一种雷公藤红素盐，具体为雷公藤红素与医学上可接受的碱性氨基酸或有机胺或无机碱的一种所成的盐；公开号为CN101496804A的中国专利公开了一种雷公藤红素与精氨酸盐的组合物、制备方法及其用途，以上三篇中国专利仅以成盐的方式来提高水溶性，并未对雷公藤红素的抗肿瘤活性和毒性做修饰改善。公开号为CN101311187A的中国专利公开了一种雷公藤红素长链醇酯及其制备方法与用途，该长链醇酯具有显著的前列腺靶向性，并且抗肿瘤及抗炎活性强于雷公藤红素，但此专利忽略了雷公藤红素的水溶性问题，在成药问题上未作相关考虑。公开号为CN101352444A的中国专利公开了雷公藤红素在制备治疗表达CIP2A蛋白的癌症的药物中的应用，所述的雷公藤红素有以下特点：不具有细胞系特异性的显著下调CIP2A蛋白，能时间和剂量依赖性的降低肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌中癌蛋白CIP2A的表达，具有广泛的应用前景。目前国内专利的研究主要集中在雷公藤红素通过简单成盐的方式改善水溶性，以成酯的方式提高活性，以及药理活性研究方面。
（三）发明内容
本发明的目的是提供一种雷公藤红素及衍生物和雷公藤红素衍生物的制备方法，还涉及以雷公藤红素衍生物为原料制备的生物盐，以及雷公藤红素衍生物的应用。
一种如式（Ⅰ）所示的雷公藤红素及衍生物。
其中，R1为H、C1-C6直链或支链烷基、苄基及苯环上有取代基的苄基，苯环上的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基；R2或R3各自独立为C5-C6的环状烃基、C1-C6的链状烷基、苯基及取代苯基，所述的取代苯基的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基，或者R2、R3与N成环，所述的环为含N或含N和O的六元环状杂环。
所述的R1为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、正戊基或正己基。
所述的R1为H、苄基及苯环上有取代的苄基，所述的苯环上有取代的苄基的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基。
所述的R2、R3与N成环，所述的环为吗啉基、哌嗪基、N-取代哌嗪基、哌啶基。
所述的R2或R3各自独立为甲基、乙基、正丙基、苯基或取代苯基，所述取代苯基的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基。
一种式如（Ⅰ）所示的雷公藤红素衍生物的制备方法，所述的雷公藤红素衍生物按如下方法制备：将三光气溶于二氯甲烷配成浓度为0.1～0.5mol/L的三光气溶液，冰浴下在三光气溶液中滴加浓度为0.1～0.5mol/L的含氮化合物二氯甲烷溶液和三乙胺后，室温搅拌1～2h后滴加浓度为0.1～0.5mol/L的如式（Ⅱ）所示的含雷公藤红素化合物二氯甲烷溶液，继续搅拌20～48h，点板检测，待如式（Ⅱ）的雷公藤红素化合物反应完后停止反应，在反应液A中加入3～6倍反应液A体积的去离子水，再用乙酸乙酯萃取，取有机层，以饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗产物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集含有在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物；所述雷公藤红素化合物：三光气：含氮化合物：三乙胺的物质的量比为1：1.2～1.5:1.4～2.0:3～5；所述含氮化合物为C5-C6的环状胺、C1-C6的链状胺、苯环上有取代的苯胺，所述苯环上的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基，或者含N或含N和O的六元杂环；所述的六元杂环为吗啉、哌嗪、N-取代哌嗪、哌啶；
其中，R1为H时，所述的雷公藤红素化合物即为雷公藤红素；
R1不为H时，所述的雷公藤红素化合物即为雷公藤红素酯。
本发明所述的方法，所述的雷公藤红素酯按如下方法制备：所述的雷公藤红素酯按如下方法制备：式（Ⅲ）所示的雷公藤红素溶于N,N-二甲基甲酰胺制成浓度为0.1～0.3mol/L的雷公藤红素溶液，以碳酸氢钠为催化剂，加入卤代烃R1X，所述的X为Br或I，所述的R1为H、C1-C6直链或支链烷基、苄基及苯环上有取代基的苄基，所述的苯环上的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基，室温搅拌12～24小时，在反应液B中加入3～6倍反应液B体积的去离子水，乙酸乙酯萃取，取有机层，用饱和硫代硫酸钠洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，再用无水Na2SO4干燥，抽滤，有机相浓缩得红色油状物，经正己烷：乙酸乙酯体积比为3：1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集含有目标雷公藤红素酯的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；所述的雷公藤红素：卤代烃：碳酸氢钠的物质的量比为1：1.2～2.0：3.0～5.0。
优选的，一种式如（Ⅰ）所示的雷公藤红素衍生物的制备方法，所述的雷公藤红素衍生物按如下方法制备：将三光气溶于二氯甲烷配成浓度为0.12mol/L的三光气溶液，冰浴下在三光气溶液中滴加浓度为0.35mol/L的含氮化合物二氯甲烷溶液和三乙胺后，室温搅拌1h后滴加浓度为0.2mol/L的如式（Ⅱ）所示的含雷公藤红素化合物二氯甲烷溶液，继续搅拌24h，点板检测，待如式（Ⅱ）的雷公藤红素化合物反应完后停止反应，在反应液A中加入3.75倍反应液A体积的去离子水，再用乙酸乙酯萃取，取有机层，以饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗产物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集含有在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物；所述雷公藤红素化合物：三光气：含氮化合物：三乙胺的物质的量比为1：1.2:1.75:3.75；所述含氮化合物为C5-C6的环状胺、C1-C6的链状胺、苯环上有取代的苯胺，所述苯环上的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基，或者含N或含N和O的六元杂环；所述的六元杂环为吗啉、哌嗪、N-取代哌嗪、哌啶。
优选的，所述的雷公藤红素酯按如下方法制备：式（Ⅲ）所示的雷公藤红素溶于N,N-二甲基甲酰胺制成浓度为0.15mol/L的雷公藤红素溶液，以碳酸氢钠为催化剂，加入卤代烃R1X，所述的X为Br或I，所述的R1为H、C1-C6直链或支链烷基、苄基及苯环上有取代基的苄基，所述的苯环上的取代基为氟、氯、甲氧基或硝基，室温搅拌12h，在反应液B中加入3～6倍反应液B体积的去离子水，乙酸乙酯萃取，取有机层，用饱和硫代硫酸钠洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，再用无水Na2SO4干燥，抽滤，有机相浓缩得红色油状物，经正己烷：乙酸乙酯体积比为3：1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集含有雷公藤红素酯的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；所述的雷公藤红素：卤代烃：碳酸氢钠的物质的量比为1：1.6：5.0。
一种如权利要求1所述的由雷公藤红素衍生物制备得到的式（Ⅳ）所示生物盐，式（Ⅳ）所示生物盐由如式（Ⅰ）所述的雷公藤红素及衍生物与药用可接受的无机酸或有机酸成盐制成水溶性衍生物；所述无机酸为盐酸、硫酸和磷酸；所述有机酸为柠檬酸、苹果酸和福马酸；
本发明还涉及所述的雷公藤红素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明所述的的应用，其特征在于所述的雷公藤红素衍生物在制备治疗肝癌或肺癌药物中的应用。
本发明的有益效果是：
1.通过对C-3位羟基的修饰，破坏了该羟基与C-2位羰基分子内氢键作用，使得该衍生物在水溶性得到极大的提高。同时在C-3位羟基上引入含氮的亲水性基团，不仅极大得提高该衍生物的水溶性，而且使其可与医学上可接受的无机酸（如盐酸、硫酸和磷酸）或有机酸（柠檬酸、苹果酸和福马酸等）的成盐进一步提高其水溶性，与化合物雷公藤红素相比，其生物利用度有明显的改善，同时增加制剂的选择性。
2.通过对C-3位羟基的修饰，将雷公藤红素结构中稳定性差的烯醇进行了保护，提高化合物的稳定性，更加有利于质量的控制。
3.本发明涉及的雷公藤红素衍生物体内外抗肿瘤活性评价表明：体外的抗肿瘤活性表明其中大部分雷公藤红素衍生物对人肝癌、肺癌细胞株表现出较强的体外抗肿瘤活性，但均低于雷公藤红素，而在体内活性却强于雷公藤红素。这说明本发明提示经结构修饰后，一方面降低了雷公藤红素的细胞毒作用，提高用药安全性；另一方面，在其C-3羟基上引入一些亲水性基团，显著改善了其药代性质，提高生物利用度，同时会在体内代谢出原药，具有前药的性质，这既提高了药物的生物利用度，同时可降低药物的全身副作用，提高了安全性。另外本发明涉及的雷公藤红素衍生物3位羟基的保护基均为异氰酸酯。该类化合物与3位酯类衍生物比较在体内更容易代谢成原药，因而具有更好的抗肿瘤作用。
（四）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：雷公藤红素衍生物CLS-1的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气（BTC）(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的吗啉(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺（0.99mmol），室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h，停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，取滤液浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-1为98.0mg，产率87%。CLS-1：1HNMR(CDCl3,500MHz):7.01(1H,dd,J=1.5,7.5Hz,H-6),6.51(1H,d,J=1.5Hz,H-1),6.35(1H,d,J=7.5Hz,H-7),3.37-3.71(8H,m,H-吗啉环),2.21(3H,s,4-CH3),1.47(3H,s,9-CH3),1.31(3H,s,13-CH3),1.28(3H,s,14-CH3),1.03(3H,s,17-CH3),0.77(3H,s,20-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z564.3。
表1 雷公藤红素衍生物的不同基团
雷公藤红素衍生物CLS-1～CLS-10的合成路线：
实施例2雷公藤红素衍生物CLS-2的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷（DCM）中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺(0.99mmol)，室温搅拌1h，再加入1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.30），收集含有在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-2为101.6mg，产率88%。CLS-2:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.51-3.63(2H,m,H-2′),3.36-3.46(2H,m,H-3′),2.45(2H,br s,H-4′),2.42(2H,br s,H-5′),2.31(3H,s,N-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z577.4.
实施例3雷公藤红素衍生物CLS-3的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷（DCM）中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-乙基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.33），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-3为99.2mg，产率84%。CLS-3:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.53-3.60(2H,m,H-2′),3.39-3.45(2H,m,H-3′),2.39-2.50(4H,m,H-4′,5′,6′),1.07(3H,t,J=6.0,6′-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z591.4.
实施例4雷公藤红素衍生物CLS-4的合成
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的乙酰哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液，三乙胺(100μL)，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-4为99.0mg，产率82%。CLS-4:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.36-3.61(8H,m,H-哌嗪环),2.11(3H,s,6′-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z605.4.
实施例5雷公藤红素衍生物CLS-5的合成
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的丙酰哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.40），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-5为84.0mg，产率68%。CLS-5:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.37-3.64(8H,m,H-哌嗪环),1.17(3H,t,J=6.0Hz,7′-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z619.4.
实施例6雷公藤红素衍生物CLS-6的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的苄基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.44），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-6为70.4mg，产率54%。CLS-6:1H NMR(CDCl3,500MHz):7.28-7.33(5H,m,H-苯环),3.78(2H,brs,H-6′),3.52(2H,brs,H-2′),3.39(2H,brs,H-3′),2.41-2.45(4H,br s,H-4′,5′).MS(ESI)[M+H]+m/z653.4.
实施例7雷公藤红素衍生物CLS-7的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的哌啶(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.42），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-7为94.4mg，产率84%。CLS-7:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.49(2H,m,H-2′),3.33(2H,m,H-3′).MS(ESI)[M+H]+m/z562.3.
实施例8雷公藤红素衍生物CLS-8的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的2-甲基哌啶(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.47），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-8为74.8mg，产率65%。CLS-8:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.39(1H,m,H-2′),3.29(1H,m,H-2′),1.26(3H,d,J=7.5Hz,2′-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z576.3.
实施例9雷公藤红素衍生物CLS-9的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的二乙胺(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-9为59.6mg，产率49%。CLS-9:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.34(2H,m,H-2′),3.19(2H,m,H-3′),1.27(3H,m,2′-CH3),1.16(3H,m,3′-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z550.3.
实施例10雷公藤红素衍生物CLS-10的合成（合成路线图如图1所示）
将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷(DCM)中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基苯胺(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=2:1；Rf值0.47），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-10为60.0mg，产率51%。CLS-10:1H NMR(CDCl3,500MHz):7.18-7.39(5H,m,H-苯环),3.30(3H,s,N-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z584.3.
实施例11雷公藤红素衍生物CLS-11的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h后停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3：1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的吗啉(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.45），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-11为98.0mg，产率87%。CLS-11:1H NMR(CDCl3,500MHz):7.28-7.35(5H,m,H-苯环),4.99(2H,dd,J=12.5,25.5Hz,H-1′),3.58-3.78(8H,m,H-吗啉环),2.19(3H,s,4-CH3),0.52(3H,s,20-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z654.4.
雷公藤红素衍生物CLS-11～CLS-30的合成路线：
实施例12雷公藤红素衍生物CLS-12的合成（合成路线图如图2所示）
将135mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴。室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基哌嗪(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.40），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-12为101.2mg，产率88%。CLS-12:MS(ESI)[M+H]+m/z667.4.
实施例13雷公藤红素衍生物CLS-13的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-乙基哌嗪(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.42），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-13为100.0mg，产率84%。CLS-13:MS(ESI)[M+H]+m/z681.4.
实施例14雷公藤红素衍生物CLS-14的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的乙酰哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.35mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.49），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-14为99.2mg，产率82%。CLS-14:MS(ESI)[M+H]+m/z695.4.
实施例15雷公藤红素衍生物CLS-15的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的丙酰哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.50），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-15为84.0mg，产率68%。CLS-15:MS(ESI)[M+H]+m/z709.4.
实施例16制备雷公藤红素衍生物CLS-16的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的苄基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.55），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-16为70.6mg，产率54%。CLS-16:MS(ESI)[M+H]+m/z743.4.
实施例17制备雷公藤红素衍生物CLS-17的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的哌啶(25.6mg,0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.47），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-17为94.6mg，产率84%。CLS-17:MS(ESI)[M+H]+m/z652.4.
实施例18制备雷公藤红素衍生物CLS-18的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的2-甲基哌啶(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.43），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-18为75.0mg，产率65%。CLS-18:MS(ESI)[M+H]+m/z666.4。
实施例19雷公藤红素衍生物CLS-19的合成（合成路线图如图2所示）
将135mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的二乙胺(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-19为45.0mg，产率49%。CLS-19:MS(ESI)[M+H]+m/z640.4。
实施例20雷公藤红素衍生物CLS-20的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.48mmol苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基苯胺(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-19为60.0mg，产率51%。CLS-20:MS(ESI)[M+H]+m/z674.4。
实施例21雷公藤红素衍生物CLS-21的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol），加入碘甲烷（0.6mmol）。室温下搅拌12h后停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基哌嗪(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素甲酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.36），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-21为101.2mg，产率78%。CLS-21:1H NMR(CDCl3,500MHz):3.68(3H,s,1’-CH3).MS(ESI)[M+H]+m/z591.4.
实施例22制备雷公藤红素衍生物CLS-22的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.6mmol溴乙烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素乙酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-22为101.2mg，产率76%。CLS-22:MS(ESI)[M+H]+m/z605.4.
实施例23制备雷公藤红素衍生物CLS-23的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.6mmol溴丙烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-甲基哌嗪(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素正丁酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.44），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-23为101.2mg，产率69%。CLS-23:MS(ESI)[M+H]+m/z619.4
实施例24雷公藤红素衍生物CLS-24的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.6mmol溴代异丙烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的2-甲基哌啶(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素异丙酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.42），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-24为74.0mg，产率65%。CLS-24:MS(ESI)[M+H]+m/z619.4
实施例25雷公藤红素衍生物CLS-25的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.5mmol溴丁烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的2-甲基哌啶(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素正戊酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.44），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-25为74.0mg，产率65%。CLS-25:MS(ESI)[M+H]+m/z633.4.
实施例26制备雷公藤红素衍生物CLS-26的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.6mmol溴代异丁烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的吗啉(30.5mg,0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素异丁酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.42），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-26为98.0mg，产率77%。CLS-26:MS(ESI)[M+H]+m/z633.4.
实施例27制备雷公藤红素衍生物CLS-27的合成（合成路线图如图2所示）
将135mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.6mmol溴戊烷，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的吗啉(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素正己酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.48），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-27为100.0mg，产率76%。CLS-27:MS(ESI)[M+H]+m/z647.4.
实施例28制备雷公藤红素衍生物CLS-28的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mLN,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.4mmol4-硝基苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-乙基哌嗪(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素4硝基苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.33），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-28为101.4mg，产率84%。CLS-28:MS(ESI)[M+H]+m/z712.4.
实施例29雷公藤红素衍生物CLS-29的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.4mmol4-甲基苄溴，室温下搅拌12h后停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯。将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的N-乙基哌嗪(0.35mmol)二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素4甲基苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.40），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-29为100.2mg，产率80%。CLS-29:MS(ESI)[M+H]+m/z681.4.
实施例30雷公藤红素衍生物CLS-30的合成（合成路线图如图2所示）
将135.0mg雷公藤红素（0.3mmol）溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入126mg碳酸氢钠（1.5mmol）和0.5mmol3-氯苄溴，室温下搅拌12h，停止反应，加入10mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，用饱和硫代硫酸钠洗4mL*3次，然后饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得红色油状物。经正己烷：乙酸乙酯体积比为3:1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；将72.8mg三光气BTC(0.24mmol)溶于2mL二氯甲烷中，冰浴下滴加1mL浓度为0.35mol/L的哌啶(0.35mmol)的二氯甲烷溶液和100μL三乙胺，室温搅拌1h，再滴加1mL浓度为0.2mol/L的雷公藤红素3氯苄酯(0.2mmol)二氯甲烷溶液，继续搅拌24h后停止反应，加入15mL去离子水，乙酸乙酯萃取4mL*3次，合并有机层，饱和NaCl溶液洗4mL*3次，无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗提物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测（展开剂石油醚：丙酮=3:1；Rf值0.38），收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式（Ⅱ）的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物CLS-30为97.3mg，产率75%。CLS-30:MS(ESI)[M+H]+m/z701.4.
实施例31本发明合成的雷公藤红素衍生物的体外抗肿瘤活性实验
将Bel细胞(3×104cell/ml)分别接种于96孔培养板中(100ul/孔)，置于37℃、5%CO2温箱内培养4小时，加入含系列递比稀释浓度的雷公藤红素衍生物及阳性对照药依托泊苷、卡铂。置于37℃、5%CO2和饱和湿度的温箱内培养48小时。
将A549细胞(3×104cell/mL)分别接种于96孔培养板中(100μL/孔)，置于37℃、5%CO2温箱内培养4小时，加入含系列递比稀释浓度的雷公藤红素衍生物及阳性对照药依托泊苷、卡铂。置于37℃、5%CO2和饱和湿度的温箱内培养48小时。加入5mg/ml的MTT(20μL/孔)，混匀后37℃、5%CO2条件下孵育4小时。加入DMSO(150μL/孔)，溶解紫蓝色结晶，用酶标仪测定(570/490nm)吸光度(OD值)。计算出化合物对细胞的抑制率IC50(μM)
本发明取本发明实施例所得的表中所示的的雷公藤红素衍生物对Bel、A549的抗肿瘤活性结果见表2
表2 雷公藤红素衍生物的体外抗肿瘤活性测试
上述结果表明：从体外活性看出，本发明涉及的雷公藤红素衍生物均具有很好的抗肿瘤活性，其活性明显强于阳性对照。与雷公藤红素相比较，本发明涉及的化合物活性较弱。考虑到本发明涉及的化合物在体内均容易代谢成雷公藤红素，因而本发明涉及的化合物可能为雷公藤红素的前药，这一点经体内实验得到了充分的证明。因而本发明涉及的雷公藤红素衍生物与雷公藤红素比较具有以下优势：(1)该类衍生物破坏雷公藤红素结构中原有的分子内氢键，同时有引入含氮的极性官能团，因而水溶性有明显的改善，生物利用度会得到改善。同时该类还可以与酸成盐制成水溶性的盐，增加药物的给药方式。(2)由于本发明涉及的雷公藤红素的衍生物为雷公藤红素的前药，其细胞毒作用也明显的减弱了，对人体全身的副作用会较小，药物在体内到达靶向器官时通过体内代谢成原药从而发挥其药效。
实施例32本发明的雷公藤红素及其衍生物对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制作用
1.材料与受试动物
1.1材料：
实验样品1：雷公藤红素（6mg/kg）
实验样品2：CLS-12（高剂量4mg/kg；中剂量2mg/kg；低剂量1mg/kg；）
阳性对照：氟尿嘧啶(20mg/kg)
1.2受试动物：SPF级BALB/c裸鼠购自浙江医学科学院实验动物中心，许可证号：裸鼠4-6周龄，体重18±20g，雌雄各半.
2.实验方法
2.1肿瘤造模:取生长状态良好的Bel培养细胞，用D-Hanks液洗3次，0.25%胰酶消化，1000rpm离心8分钟，收集细胞，无血清培养液洗涤细胞两次，重悬细胞，细胞的浓度调整为5×107个/mL。以0.5%的碘伏消毒SPF级BALB/c裸鼠左侧腋下及右侧腹股沟右皮肤，用5号针头接种，每只裸鼠接种约0.2mL细胞。注射时可见局部出现皮丘，数天后接种裸鼠出现直径大于5mm的皮下结节，观察移植瘤成瘤率及均一性。
2.2分组及给药:
将模型组随机分为6组，每组10只，分别为溶剂对照组，雷公藤红素组(6mg/kg)，雷公藤前药组(高剂量:4mg/kg;中剂量2mg/kg；低剂量:1mg/kg),阳性药对照组(氟尿嘧啶，20mg/kg)。给药方式为每日一次腹腔注射，周日休息。连续给药3周。溶剂对照组腹腔注射等量溶剂。给药期间密切观察裸鼠的一般状况，包括精神状态、活动、饮食及大小便，每周记录两次裸鼠体重，每周两次使用游标卡尺测量瘤体体积。
(3)取材及测量:给药20天后称重，颈椎脱臼处死裸鼠，解剖观察裸鼠肿瘤的转移情况。取出肿瘤组织，电子天平称重。游标卡尺测量肿瘤长径(a)和短径(b)，求出肿瘤质量及肿瘤体积(TV=a×b2/2)，并计算抑瘤率
3.实验结果
表2 雷公藤红素、CLS-12对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制测试
结合表1和表2的数据，我们可以看出以下方面：（1）本发明对雷公藤红素衍生物在体内外均具有良好的抗肿瘤作用。（2）本发明的雷公藤红素衍生物在体内其抗肿瘤活性明显强于阳性对照药氟尿嘧啶。另外，在动物给药过程中，本发明的雷公藤红素衍生物给药组，动物精神状态良好，饮食正常，未出现老鼠死亡，体重也未见减轻。而阳性对照组在给药过程中，动物精神状态不好，活动明显减少，并出现老鼠死亡，未死亡老鼠体重也减轻，这说明本发明涉及的雷公藤红素衍生物在安全性方面也明显优于阳性对照药。（3）本发明对雷公藤红素衍生物在体内其抗肿瘤活性明显强于雷公藤红素组,但其体外活性却低于雷公藤红素。这说明本发明涉及的雷公藤红素衍生物应该是通过体内的代谢转化成雷公藤红素而发挥药效，由于本发明涉及的雷公藤红素衍生物与雷公藤红素比较具有较好的水溶性，改善了其生物利用度而产生更好的生物活性。另外本发明涉及的雷公藤红素衍生物由于细胞毒作用弱于雷公藤红素，因而在代谢之前将具有更好的安全性。总之，本发明涉及的雷公藤红素衍生物与原药相比较，在稳定性、水溶性、活性及安全性具有明显的改善，是一类更为理想的抗肿瘤药物。
Claims (3)
1.一种如式(Ⅰ)所示的雷公藤红素衍生物，
其中，R1为苄基；R2、R3与N成环，所述的环为N-取代哌嗪基；
如式(Ⅰ)所示的雷公藤红素衍生物的结构如下所示：
2.一种如权利要求1中的式(Ⅰ)所示的雷公藤红素衍生物的制备方法，其特征在于所述的雷公藤红素衍生物按如下方法制备：将三光气溶于二氯甲烷配成浓度为0.1～0.5mol/L的三光气溶液，冰浴下在三光气溶液中滴加浓度为0.1～0.5mol/L的甲基哌嗪二氯甲烷溶液和三乙胺后，室温搅拌1～2h后滴加浓度为0.1～0.5mol/L的如式(Ⅱ)所示的雷公藤红素化合物二氯甲烷溶液，继续搅拌20～48h，点板检测，待如式(Ⅱ)的雷公藤红素化合物反应完后停止反应，在反应液A中加入3～6倍反应液A体积的去离子水，再用乙酸乙酯萃取，取有机层，以饱和NaCl溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，抽滤，浓缩得暗红色油状的粗产物，然后将粗产物经正己烷：丙酮体积比为3：1的混合溶剂为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集在254nm下显强紫外且极性大于相应的如式(Ⅱ)的化合物的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的产物干燥后即得雷公藤红素衍生物；所述雷公藤红素化合物：三光气：甲基哌嗪：三乙胺的物质的量比为1：1.2～1.5:1.4～2.0:3～5；
其中，R1为苄基时，所述的雷公藤红素化合物即为雷公藤红素苄酯。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述的雷公藤红素苄酯按如下方法制备：式(Ⅲ)所示的雷公藤红素溶于N,N-二甲基甲酰胺制成浓度为0.1～0.3mol/L的雷公藤红素溶液，以碳酸氢钠为催化剂，加入R1X，所述的X为Br或I，所述的R1为苄基，室温搅拌12～24小时，在反应液B中加入3～6倍反应液B体积的去离子水，乙酸乙酯萃取，取有机层，用饱和硫代硫酸钠洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，再用无水Na2SO4干燥，抽滤，有机相浓缩得红色油状物，经正己烷：乙酸乙酯体积比为3：1为洗脱剂的快速柱层析法洗脱，点板检测，收集含有雷公藤红素酯的洗脱液，合并洗脱液，减压蒸去洗脱溶剂得到的红色固体即为雷公藤红素酯；所述的雷公藤红素：R1X：碳酸氢钠的物质的量比为1：1.2～2.0：3.0～5.0；
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