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CN102391255A - 作为β3肾上腺素能受体激动剂的羟甲基吡咯烷 - Google Patents

作为β3肾上腺素能受体激动剂的羟甲基吡咯烷 Download PDF

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CN102391255A
CN102391255A CN2011102656702A CN201110265670A CN102391255A CN 102391255 A CN102391255 A CN 102391255A CN 2011102656702 A CN2011102656702 A CN 2011102656702A CN 201110265670 A CN201110265670 A CN 201110265670A CN 102391255 A CN102391255 A CN 102391255A
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Abstract

本发明提供式(I)的化合物、其药物组合物和使用其治疗或预防由β3-肾上腺素能受体激活介导的疾病的方法。

Description

作为β3肾上腺素能受体激动剂的羟甲基吡咯烷
本申请是国际申请日为2009年4月2日、申请号为200980121149.2、发明名称“作为β3肾上腺素能受体激动剂的羟甲基吡咯烷”的中国专利申请的分案申请。
发明背景
下尿路的功能是储存和定期释放尿液。这需要储存和排尿反射的配合，涉及各种传入和传出神经通路，导致中枢和外周神经效应器机制的调节，和所造成的自主神经系统以及躯体运动通路的交感神经和副交感神经成分的协作调节。这些近端调节膀胱(逼尿肌)和尿道平滑肌以及尿道括约肌横纹肌的收缩状态。
β肾上腺素能受体(βAR)存在于各种物种，包括人、大鼠、豚鼠、兔、雪貂、狗、猫、猪和非人灵长类动物的逼尿肌平滑肌中。但是，药理学研究表明，介导该独立逼尿肌的舒张的受体亚型存在显著的物种差异；在猫和豚鼠中以β1AR为主，在大鼠中以β2AR为主，在狗、大鼠、雪貂、猪、短尾猴和人逼尿肌中β3AR发挥作用或占主导地位。已通过各种技术检查βAR亚型在人和大鼠逼尿肌中的表达，并使用原位杂交和/或反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实β3AR的存在。在来自经受根治性膀胱切除术的患者的膀胱组织中，β1AR、β2AR和β3AR mRNAs的实时定量PCR分析揭示β3AR mRNA的优势(97％，与此相比，β1ARmRNA为1.5％，β2AR mRNA为1.4％)。此外，在对照和梗阻的人膀胱中，β3AR mRNA表达相当。这些数据表明，膀胱出口梗阻不会造成β3AR下调或β3AR-介导的逼尿肌舒张的改变。也已经在由被判断为具有正常膀胱功能的患者和由具有逼尿肌反射减弱或反射亢进的患者在膀胱切除术或肠膀胱成形术过程中获得的膀胱条中比较β3AR响应性。没有观察到β3AR激动剂介导的舒张程度或效力的差异，符合β3AR激活是在正常和致病状态中舒张逼尿肌的有效方式的概念。
证实β3AR在储尿中的重要作用的功能证据来自体内研究。在静脉给药于大鼠后，啮齿动物选择性β3AR激动剂CL316243降低膀胱压力并在膀胱(cystomeric)研究中提高膀胱容量，以致排尿间隔延长且不提高残余尿量。
膀胱过度活动症以尿急症状为特征，伴以或未伴以急迫性尿失禁，其通常与频尿和夜尿症联系在一起。在美国和欧洲，在超过18岁的女性和男性中，OAB的发病率估计为16至17％。膀胱过度活动症最常被归类为是自发性的，但也可以是神经症状、膀胱出口梗阻和其它原因继发的。从病理生理角度看，膀胱过度活动症候群，尤其是在与急迫性尿失禁相关联时，暗示着逼尿肌过度活动。伴以或未伴以失禁的尿急症已表明不利地影响社交和医疗健康，并在每年的直接和间接保健支出方面构成显著负担。重要地，尿急症(伴以或未伴以失禁)的目前医学疗法未达到最佳，因为许多患者没有表现出对现有治疗的充分响应，和/或不能忍受现有治疗(例如与抗胆碱能疗法相关联的口干症)。因此，需要作为单一疗法或与有用的疗法结合地有效治疗尿频、尿急和失禁的新的耐受良好的疗法。舒张膀胱平滑肌的药剂，如β3AR激动剂预计有效治疗此类泌尿疾病。
发明概述
本发明涉及新型β3AR激动剂、含有它们的药物组合物以及使用此类新型化合物治疗或预防经β3AR介导的病症的方法。
发明描述
本发明描述了结构式I的化合物或其可药用盐
Figure BSA00000571400400021
其中
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3、4或5；
p是0、1或2；
q是0、1、2、3或4；
t是0、1、2、3、4或5；
X是-CO-或-SO2-；
Y选自：
(1)C1-C5链烷二基、C2-C5链烯二基和C2-C5炔二基，其中链烷二基、链烯二基和炔二基各自任选被1至3个独立地选自卤素、-ORa、S(O)p-C1-C3烷基的基团取代；
(2)-(CRaRa)j-Q-(CRaRa)k，其中j和k是独立地选自0、1和2的整数，
(3)键，和
(4)任选被1至3个独立地选自R1的基团取代的亚苯基；
Z选自：
(1)苯基、
(2)具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环、
(3)稠合到C5-C10碳环上的苯环、
(4)稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，和
(5)稠合到C5-C10碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环；
R1选自：
(1)任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基、
(2)C3-C6环烷基、
(3)卤素、
(4)硝基、
(5)氰基、
(6)-C(O)Ra、
(7)-C(O)2Ra、
(8)-C(O)NRaRb和
(9)-QRb；
R2选自卤素和C1-C5烷基；
R3选自：
(1)任选被1至5个独立地选自卤素、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb的基团取代的C1-C6烷基、
(2)-(CH2)t-苯基或-(CH2)t-O-苯基，且其中各自中的所述苯基任选被1至3个独立地选自卤素、任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基和-ORa的基团取代，
(3)氧代、
(4)硫代、
(5)卤素、
(6)-CN、
(7)C3-C6环烷基、
(8)-(CH2)t-杂环或-(CH2)t-O-杂环，且其中各自中的杂环是具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元环，且其中所述杂环任选邻位稠合到苯环上并任选被1至3个独立地选自卤素、任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基和-ORa的基团取代，
(9)-ORa、
(10)-C(O)ORa、
(11)-C(O)Ra、
(12)-C(O)NRaRb、
(12)-NRaRb、
(13)-NRaC(O)Rb、
(14)-NRaC(O)ORb和
(15)-NRaC(O)NRaRb；
Ra选自氢和任选被1至5个卤素原子取代的C1-C6烷基；
Rb选自：
(1)氢，
(2)任选被1至5个选自下列基团的基团取代的C1-C6烷基：
(a)羟基、
(b)卤素、
(c)-CO2Ra、
(d)-S(O)p-C1-C3烷基；
(e)C3-C8环烷基、
(f)任选被1至5个卤素取代的C1-C6烷氧基，和
(g)任选被1至5个独立地选自卤素、硝基、-NRaRa、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C5烷基和-ORa的基团取代的苯基，
(3)C3-C8环烷基，和
(4)任选被1至5个选自下列基团的基团取代的苯基：
(a)卤素、
(b)硝基、
(c)-NRaRa、
(d)-OH、
(e)任选被1至5个卤素取代的C1-C6烷氧基、
(f)-S(O)p-C1-C6烷基；和
(g)任选被最多5个选自羟基、卤素、三氟甲基、氰基、-CO2Ra、C3-C8环烷基和-QRc的基团取代的C1-C6烷基；
Rc选自：
(1)任选被最多5个选自卤素、三氟甲基、氰基、C1-C5烷基和C1-C5烷氧基的基团取代的Z，和
(2)C1-C6烷基；且
Q选自
(1)-N(Ra)-、
(2)-O-和
(3)-S(O)p-。
式I的化合物的一个实施方案是式Ia的化合物：
其中Y、Z、R3和n如式I下所定义。
式I和Ia的一个实施方案是其中Y是亚甲基、-CH(CH3)-或键的化合物。在其一个子集中，Y是亚甲基。在其另一子集中，Y是键。
式I和Ia的另一实施方案是其中Y是亚苯基的化合物。
式I和Ia的另一实施方案是如下化合物，其中Z选自：
(1)具有一个氮原子和0至3个独立地选自氮、氧和硫的附加杂原子的5-元杂环、
(2)具有1、2或3个氮原子或1个氮原子和一个氧或硫原子的6-元杂环，和
(3)稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，和
(4)稠合到C5-C10碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环。
式I和Ia的另一实施方案是其中Z是具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环的化合物。在一个子集中，Z是具有一个氮原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环，在另一子集中，Z是具有1、2或3个氮原子或1个氮原子和氧或硫原子的6-元杂环。在再一子集中，Z选自噻唑基、
Figure BSA00000571400400061
唑基、吡啶基、二氢吡啶基、三唑基(包括1，2，4-三唑基和1，2，3-三唑基)、四唑基、嘧啶基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、吡嗪基、二氢吡嗪基、哒嗪基、二氢哒嗪基、吡咯烷基、咪唑基、吡唑基和
Figure BSA00000571400400062
二唑基(包括1，2，4-
Figure BSA00000571400400063
二唑基和1，2，5-二唑基)。在此实施方案的一个子集中，Y是亚甲基。在此实施方案的另一子集中，Y是键。
式I和Ia的另一实施方案是其中Z是稠合到C5-C10碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环的化合物。在一个子集中，该碳环具有5或6个碳原子。在另一子集中，该杂环是具有一个氮原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环或具有1、2或3个氮原子或1个氮原子和氧或硫原子的6-元杂环，且该碳环具有5或6个碳原子。在再一子集中，Z选自：吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并吡喃基、苯并三唑基、
Figure BSA00000571400400065
其中虚线键是指符合环原子的化合价规则的单键或双键。在此实施方案的一个子集中，Y是亚甲基。在此实施方案的另一子集中，Y是键。
式I和Ia的另一实施方案是其中Z是稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环的化合物。在一个子集中，该稠合的环具有2至5个杂原子，其中至少一个是氮。在另一子集中，该稠合的环具有2至4个氮原子且没有其它杂原子。在再一子集中，该稠合的环具有一个氧或硫原子和1至3个氮原子。在再一子集中，Z选自
和
Figure BSA00000571400400073
且其中r是1或2。在此实施方案的一个子集中，Y是亚甲基。在此实施方案的另一子集中，Y是键。
在式I和Ia的化合物中，R3(当n不是0时)的实例包括，但不限于，-NRaRa、任选被卤素或-ORa取代的C1-C6烷基、-ORa、C3-C6环烷基、任选被卤素取代的苯基、苄基、吡啶基、吡咯基、噻唑基、氧代、卤素、氰基、任选卤代的C1-C6烷酰基、(C1-C6烷基)NHC(O)NH-和-C(O)NRaRa。R3的更特别实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、三氟甲基、氧代、氟、氯、吡啶基和吡咯基。
式I和Ia的另一实施方案是如下化合物，其中R3选自：
(1)任选被1至5个独立地选自卤素、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb的基团取代的C1-C6烷基、
(2)氧代、
(3)卤素、
(4)-ORa、
(5)-C(O)Ra、
(6)-C(O)NRaRb和
(7)-NRaRb；
其中Ra和Rb如上定义。
在此实施方案的一个子集中，R3选自：
(1)任选被1至5个独立地选自卤素、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb的基团取代的C1-C6烷基
(2)氧代、
(3)卤素和
(4)-NRaRb；
其中Ra和Rb各自选自氢和任选被1至5个卤素原子取代的C1-C6烷基。
在此实施方案的另一子集中，R3选自：
(1)C1-C6烷基、
(2)氧代和
(3)-NH2。
在此实施方案的另一子集中，R3是甲基或乙基。在另一子集中，R3是氧代。在再一子集中，R3是-NH2。
式I和Ia的另一实施方案是在所示手性中心具有指定立体构型的化合物：
Figure BSA00000571400400081
式I和Ia的另一实施方案是在所示手性中心具有指定立体构型的化合物，用星号标注的手性中心为R或S：
Figure BSA00000571400400082
在一个子集中，在用星号标注的手性中心处的构型是S。
式I和Ia的一个实施方案是如下列实施例1-313中所述的化合物。
在另一实施方案中，式I或Ia的化合物选自：
Figure BSA00000571400400091
Figure BSA00000571400400111
Figure BSA00000571400400121
或其可药用盐或其可药用的立体异构体或其立体异构体的可药用盐。
在再一实施方案中，该化合物选自：
Figure BSA00000571400400131
或其可药用盐或其可药用的立体异构体或其立体异构体的可药用盐。
本文所用的“烷基”意在包括具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基，例如，甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(Pr)、正丁基(Bu)、正戊基、正己基及其异构体，如异丙基(i-Pr)、异丁基(i-Bu)、仲丁基(s-Bu)、叔丁基(t-Bu)、异戊基、异己基等。“环烷基”是指具有指定碳原子数的单环饱和碳环，例如，3、4、5或6个碳原子。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
术语“链烷二基”是指具有指定碳原子数的直链或支链二价烃基。“链烯二基”和“炔二基”是指直链或支链不饱和二价烃基。“链烯二基”以碳-碳双键为特征，“炔二基”以碳-碳三键为特征。“链烷二基”的实例包括，但不限于，亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、1，1-乙烷二基(-CH(CH3)-)、1，2-丙烷二基(-CH(CH3)CH2-)、2-甲基-1，1-丙烷二基(-CH[C(CH3)2]-)；“链烯二基”的实例包括，但不限于，1，1-乙烯二基(-C(＝CH2)-)、1，2-乙烯二基(-CH＝CH-)和2-丙烯-1，1-二基(-CH(CH＝CH2)-)；“炔二基”的实例括，但不限于，1，2-乙炔二基(-C≡C-)和3-丁炔-1，1-二基(-CH(CH2C≡CH)-)。卤素取代的链烷二基的实例是-C(CH3)(F)-。
术语“任选取代”是指“未取代或取代的”，因此本文所述的结构通式包括含有指定的任选取代基的化合物以及不含任选取代基的化合物。各变量于其在该结构通式的定义中每次出现时独立地定义。
除非另行指明，术语“卤代”或“卤素”意在包括氟、氯、溴和碘。氟和氯是优选的。
术语“碳环”或“碳环的”是指仅有环碳原子的饱和、部分饱和和芳族环。实例包括，但不限于环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基和苯基。术语“芳基”是指芳族碳环。在Z的定义内，术语“稠合到C5-C10碳环上的苯环”包括，但不限于，萘基、二氢萘基、四氢萘基、茚满基、茚基、苯并环庚烯、四氢苯并环庚烯等；苯优选稠合到C5-C6碳环上。此类稠环可经由任一环上的碳原子连接到该分子的其余部分上。
术语“杂环”或“杂环的”是指具有至少一个环杂原子和至少一个环碳原子的饱和、部分不饱和和芳族环；该杂环可经由环碳原子或环氮原子连接到该分子的其余部分上。术语“杂芳基”或“杂芳族”是指芳族杂环。在Z的定义内，术语“具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环”包括，但不限于，吡咯基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、
Figure BSA00000571400400141
唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、
Figure BSA00000571400400143
二唑基、噻二唑基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、嘧啶基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、吡嗪基、二氢吡嗪基、四氢吡嗪基、哒嗪基、二氢哒嗪基、四氢哒嗪基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡喃基等。
在Z的定义内，术语“稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环”包括，但不限于，二氮杂萘基、二氢二氮杂萘基、四氢二氮杂萘基、咪唑并吡啶基、蝶啶基、嘌呤基、喹嗪基、中氮茚基、四氢喹嗪基、四氢中氮茚基、
Figure BSA00000571400400144
Figure BSA00000571400400151
其中r是1或2。此类稠环可经由任一环上的碳原子或氮原子连接到该分子的其余部分上。为避免任何疑问，本文所用的术语“稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环”包括在氮位于桥头时仅含一个氮作为唯一杂原子的化合物。
在Z的定义内，术语“稠合到C5-C10碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环”包括，但不限于，吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并三唑基、苯并
Figure BSA00000571400400152
唑基、苯并异
Figure BSA00000571400400153
唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、吲唑基、四氢喹啉基、四氢吲唑基、二氢吲唑基、苯并吡喃基、苯并二氢吡喃基、
此类稠环可经由任一环上的碳原子或氮原子连接到该分子的其余部分上。
对于术语(R1)m、(R2)q、(R3)n以及任何其它类似的符号，当m或q或n是0时，R1、R2或R3是氢；当m、q或n大于1时，R1、R2或R3在每一处分别与其它处的R1、R2或R3独立地选择。例如，当n为2时，两个R3取代基可以相同或不同。
光学异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体
本文所述的化合物可含有不对称中心，因此可作为对映体存在。当本发明化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们还可作为非对映体存在。当在本发明的式中以直线描绘键合到手性碳上时，要理解的是，手性碳的(R)和(S)构型和因此这两种对映体及其混合物都包含在该式中。本发明包括所有这样的可能的立体异构体，如基本纯的拆分的对映体、它们的外消旋混合物以及非对映体的混合物。上式I和Ia以在某些位置无确定立体化学的形式显示。本发明包括式I和Ia的所有立体异构体及其可药用盐。
可以通过例如从合适的溶剂中分馏结晶来分离对映体的非对映异构体对，由此获得的对映体对可通过常规方式，例如通过使用旋光性酸或碱作为拆分剂或在手性HPLC柱上分离成独立的立体异构体。此外，可以通过立体有择合成法使用具有已知构型的光学纯的原材料和/或试剂获得通式I或Ia的化合物的任何对映体或非对映体。
当本文所述的化合物含有烯属双键时，除非另行指明，此类双键意在包括E和Z几何异构体。
本文所述的一些化合物可以具有不同的氢连接点，被称作互变异构体。例如，包括羰基-CH2C(O)-基团的化合物(酮形式)可发生互变异构以形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇形式)。单独以及混合的酮和烯醇形式都包括在本发明的范围内。
盐
术语“可药用盐”是指由可药用的无毒碱或酸制成的盐。当本发明的化合物是酸性的时，可以方便地由可药用的无毒碱，包括无机碱和有机碱制备其相应的盐。衍生自此类无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜(正(ic)铜和亚(ous)铜)、铁、亚铁、锂、镁、锰(正锰和亚锰)、钾、钠、锌和类似的盐。优选的是铵、钙、镁、钾和钠的盐。由可药用的有机无毒碱制成的盐包括衍生自天然生成和合成来源的伯胺、仲胺和叔胺的盐。可用于形成盐的可药用的有机无毒碱包括，例如，精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、氨基葡萄糖(glucosamine)、组氨酸、哈胺、异丙胺、二环己胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的盐。
当本发明的化合物是碱性的时，可方便地由可药用的无毒无机和有机酸制备其相应的盐。这类酸包括，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、丁二酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。优选的是柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
溶剂合物
本发明在其范围内包括式I和Ia的化合物的溶剂合物。本文所用的术语“溶剂合物”是指由溶质(即式I或Ia的化合物)或其可药用盐和不干扰该溶质的生物活性的溶剂形成的具有可变的化学计算量的络合物。溶剂的实例包括，但不限于水、乙醇和乙酸。当溶剂是水时，该溶剂合物被称作水合物；水合物包括，但不限于，半水合物、单水合物、倍半水合物、二水合物和三水合物。
前药
本发明在其范围内包括本发明的化合物的使用前药。通常，此类前药是容易体内转化成所需化合物的本发明的化合物的功能衍生物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“给药”应包括用式I或Ia的化合物或用可以不是式I或Ia的化合物但在给予患者后体内转化成式I或Ia的化合物的化合物治疗所述各种症状。例如在″Design of Prodrugs，″编辑H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述了合适的前药衍生物的选择和制备的常规程序。
用途
本发明的化合物是β3-肾上腺素能受体的有力激动剂并因此可用于治疗或预防由β3-肾上腺素能受体激活介导的疾病、病症或症状。因此，本发明的一个方面提供治疗、控制或预防哺乳动物的此类疾病、病症或症状的方法，包括给予此类哺乳动物治疗有效量的式I或Ia的化合物。术语“哺乳动物”包括人和非人动物，如狗和猫等。本发明的化合物可用于治疗或预防的疾病、病症或症状包括，但不限于，(1)膀胱过度活动症，(2)尿失禁，(3)急迫性尿失禁，(4)尿急，(5)糖尿病，(6)高血糖症，(7)肥胖症，(8)高脂血症，(9)高甘油三酯血症，(10)高胆固醇血症，(11)冠状动脉、脑血管动脉和外周动脉的动脉粥样硬化，(12)肠胃失调，包括消化性溃疡、食管炎、胃炎和十二指肠炎(包括由H.pylori诱发的)、肠溃疡(包括炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和直肠炎)和肠胃溃疡，(13)气道的神经源性炎症，包括咳嗽、哮喘，(14)抑郁，(15)前列腺病，如良性前列腺增生症，(16)肠易激综合征和需要降低的肠活动性的其它病症，(17)糖尿病视网膜病，(18)早产和(19)高眼压和青光眼。
任何合适的给药途径都可用于向哺乳动物，尤其是人提供有效剂量的本发明的化合物。例如，可采用口服给药、直肠给药、局部给药、非肠道给药、经眼给药、经肺给药、经鼻给药等。剂型包括片剂、锭剂、分散体、悬浮液、溶液、胶囊、霜剂、膏剂、气雾剂等。优选地，式I的化合物口服给药。
所用活性成分的有效剂量可随所用的特定化合物、给药方式、治疗的症状和治疗的症状严重程度而变。本领域技术人员容易确定这种剂量。
在与其它抗-OAB药剂一起或单独治疗膀胱过度活动症(OAB)时，通常在将本发明的化合物以每千克动物体重0.01毫克至大约100毫克日剂量给药时获得令人满意的结果，优选作为单剂量或每天二到六次的分剂量给药，或以缓释剂型给药。在70千克成年人的情况下，总日剂量通常为大约0.7毫克至大约3500毫克，或更具体地，大约0.7毫克至大约2000毫克。可以调节这种剂量给药方案以提供最佳治疗响应。
当与糖尿病和/或高血糖症一起治疗肥胖症或单独治疗肥胖症时，通常在将本发明的化合物以每千克动物体重0.01毫克至大约100毫克日剂量给药时获得令人满意的结果，优选作为单剂量或每天二到六次的分剂量给药，或以缓释剂型给药。在70千克成年人的情况下，总日剂量通常为大约0.7毫克至大约3500毫克。可以调节这种剂量给药方案以提供最佳治疗响应。
在治疗糖尿病和/或高血糖症以及式I和Ia的化合物适用的其它疾病或病症时，通常在将本发明的化合物以每千克动物体重大约0.001毫克至大约100毫克日剂量给药时获得令人满意的结果，优选作为单剂量或每天二到六次的分剂量给药，或以缓释剂型给药。在70千克成年人的情况下，总日剂量通常为大约0.07毫克至大约350毫克。可以调节这种剂量给药方案以提供最佳治疗响应。
在一个实施方案中，本发明的化合物用于制造治疗或预防由β3-肾上腺素能受体激活介导的疾病或病症的药剂。
本发明的另一方面提供包含式I或式Ia的化合物和可药用载体的药物组合物。本发明的药物组合物包含作为活性成分的式I或Ia的化合物或其可药用盐，还含有可药用载体和任选的其它治疗成分。术语“可药用盐”是指由可药用的无毒碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制成的盐。
该组合物包括适于口服给药、膀胱内给药、直肠给药、局部给药、非肠道给药(包括皮下、肌肉内和静脉内)、经眼给药(眼用)、经肺给药(经鼻或口颊吸入)或经鼻给药的组合物，但在任何给定情况中最适合的途径取决于所治疗症状的性质和严重程度和活性成分的性质。它们可方便地以单位剂型存在并通过药学领域公知的任何方法制备。
在实际应用中，可根据常规药学配制技术将式I和Ia的化合物作为活性成分与药用载体密切混合。载体可为多种形式，取决于给药，例如，口服或非肠道(包括静脉内)给药所需的制剂形式。在制备口服剂型的组合物时，可使用任何普通药学介质，例如，在口服液体制剂如悬浮液、酏剂和溶液的情况下使用水、二醇、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂等；或在口服固体制剂如粉剂、硬胶囊和软胶囊及片剂的情况下使用载体如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，其中固体口服制剂优于液体制剂。
由于它们易于给药，片剂和胶囊代表最有利的口服单位剂型，在这种情况下，显然使用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准的含水或非水技术进行包衣。这类组合物和制剂应含有至少0.1％的活性化合物。当然，这些组合物中活性化合物的百分比可以变化并可以方便地为该单元的重量的大约2％至大约60％。这种治疗有用的组合物中活性化合物的量为获得有效剂量的量。活性化合物也可作为例如液体滴剂或喷雾剂鼻内给药。
片剂、丸剂、胶囊等还可以含有粘合剂，如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、乳糖或糖精。当单位剂型为胶囊时，其除上述类型的材料外还可以含有液体载体，如脂肪油。
可存在各种其它材料作为包衣或用于改变单位剂型的物理形式。例如，片剂可用虫胶和/或糖进行包衣。糖浆剂或酏剂除活性成分外还可以含有作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂，如樱桃调味剂或橙调味剂。
式I和Ia的化合物也可非肠道给药。可以在与表面活性剂如羟丙基纤维素适当混合的水中制备这些活性化合物的溶液或悬浮液。也可在甘油、液体聚乙二醇及其在油类中的混合物中制备分散体。在普通的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。
适于注射用的药物剂型包括无菌水溶液或分散体以及用于临时配制无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在所有情况中，剂型必须是无菌的，且流动性必须达到容易注射的程度。其必须在制造和储存条件下稳定并且必须防腐以防止微生物，如细菌和真菌的污染。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其适当的混合物，以及植物油。
式I和Ia的化合物可以与用于治疗/预防/抑制或改善式I和Ia的化合物适用的疾病或症状的其它药物联用。这些其它药物可通过其常用的途径和量与式I或Ia的化合物同时或相继给药。当式I或Ia的化合物与一种或多种其它药物同时使用时，含有这类其它药物以及式I或Ia的化合物的药物单位剂型是优选的。因此，本发明的药物组合物包括除式I或Ia的化合物外还含有一种或多种其它活性成分的那些。可以与式I或Ia的化合物联用(分开给药或在相同药物组合物中给药)的其它活性成分的实例包括但不限于：
(a)膀胱过度活动症药物，包括(i)毒蕈碱受体拮抗剂(例如托特罗定、奥昔布宁，包括S-奥昔布宁、莨菪碱、丙胺太林、丙哌维林、trospium包括曲司氯铵、索非那新、达非那新、咪达那新、非索罗定、替米维林、SVT-40776、GlaxoSmithKline的202405、TD6301、RBX9841、DDP200、PLD179和其它抗胆碱药物。参见例如US 5,382,600；US3,176,019；US 3,480,626；US 4,564,621；US 5,096,890；US 6,017,927；US 6,174,896；US 5,036,098；US 5,932,607；US 6,713,464；US 6,858,650；和DD 106643。也参见US 6,103,747；US 6,630,162；US 6,770,295；US6,911,217；US 5,164,190；US 5,601,839；US 5,834,010；US 6,743,441；WO2002000652；WO200400414853。如本领域技术人员理解的那样，这些药物可以以标准或缓释形式经口或局部给药，如缓释托特罗定、缓释奥昔布宁和经皮奥昔布宁)、(ii)NK-1或NK-2拮抗剂(例如阿瑞吡坦、西唑来汀、WO2005/073191、WO2005/032464中公开的化合物和其它报道的NK-1拮抗剂)、(iii)α肾上腺素能受体拮抗剂(例如阿夫唑嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、坦索罗辛、特拉唑嗪等等)、(iv)钾通道开放剂(例如克罗卡林、吡那地尔等等)、(v)辣椒素和其它传入神经调节剂-激动剂和拮抗剂(例如辣椒辣素(capsaicin)、resiniferatoxin等等)、(vi)多巴胺D1受体激动剂(例如pergolinde)、(vii)血清素能和/或去甲肾上腺素再吸收抑制剂(例如度洛西汀)、(viii)乙酰胆碱释放的神经肌肉接头抑制(例如肉毒杆菌毒素)、(ix)钙通道阻滞剂(例如地尔硫卓、硝苯地平、维拉帕米等等)、(x)前列腺素合成抑制剂(例如氟比洛芬)、(xi)γ氨基丁酸受体拮抗剂(例如巴氯芬)、(xii)阴道雌激素制品(xiii)选择性去甲肾上腺素再吸收抑制剂、(xiv)5-HT2C激动剂、(xv)电压门控性钠通道阻滞剂、(xvi)P2X嘌呤受体拮抗剂(例如P2X1或P2X3拮抗剂)、(xvii)PAR2抑制剂、(xviii)磷酸二酯酶抑制剂(例如PDE1、PDE4和PDE5抑制剂)；和(xix)ATP敏感性钾离子开放剂，
(b)胰岛素增敏剂，包括(i)PPARγ激动剂，如格列酮类(例如曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、BRL49653等)和WO97/27857、97/28115、97/28137和97/27847中公开的化合物；(ii)双胍，如二甲双胍和苯乙双胍；
(c)胰岛素或胰岛素模拟物；
(d)磺酰脲类，如甲苯磺丁脲和格列吡嗪；
(e)α-葡糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖)，
(f)降胆固醇药，如(i)HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀和其它他汀)、(ii)螯合剂(消胆胺、考来替泊、和交联葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物)、(iii)烟醇、烟酸或其盐、(iii)增殖子-活化体受体α激动剂，如非诺贝特酸衍生物(吉非贝齐、clofibrat、非诺贝特和苯扎贝特)、(iv)胆固醇吸收抑制剂，例如β-谷甾醇和依泽替米贝和(酰基CoA：胆甾醇酰基转移酶)抑制剂，例如甲亚油酰胺、(v)普罗布可、(vi)维生素E和(vii)拟甲状腺素药；
(g)PPARδ激动剂，如WO97/28149中公开的那些；
(h)抗肥胖症化合物，如芬氟拉明、右芬氟拉明、苯丁胺、西布曲明、奥利司他和其它β3肾上腺素能受体激动剂；
(i)摄食行为改良剂，如神经肽Y拮抗剂(例如神经肽Y5)，如WO 97/19682、WO 97/20820、WO 97/20821、WO 97/20822和WO97/20823中公开的那些；
(j)如Glaxo在WO 97/36579中描述的PPARα激动剂；
(k)如WO97/10813中描述的PPARγ拮抗剂；和
(l)5-羟色胺再吸收抑制剂，如氟西汀和舍曲林。
在一个实施方案中，本发明的化合物和上述第二活性剂用于制造治疗或预防由β3-肾上腺素能受体激活介导的疾病或病症的药物。
本发明的式I和Ia的化合物可根据下列流程图和实施例的程序使用适当的材料制备并通过下列具体实施例进一步举例说明。此外，通过采用本文所述的程序，本领域普通技术人员容易制备本文中要求保护的本发明的其它化合物。但是，实施例中例举的化合物不应被解释为构成被视为本发明的唯一类属。实施例进一步例举本发明的化合物的制备细节。本领域技术人员容易理解，下列制备程序的条件和方法的已知变动可用于制备这些化合物。该化合物通常以它们的可药用盐，如上文描述的那些可药用盐形式分离。可通过用合适的碱，如碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠和氢氧化钾水溶液中和并将释放的胺游离碱萃取到有机溶剂中、接着蒸发来生成与该分离的盐对应的游离胺碱。由此分离的胺游离碱可通过溶解在有机溶剂中接着添加适当的酸和随后蒸发、沉淀或结晶来进一步转化成另一可药用盐。除非另行指明，所有温度是摄氏度。通过电子-喷雾离子质谱法测量质谱(MS)。
在该化合物的制备中可以使用各种色谱技术。这些技术包括，但不限于：高效液相色谱法(HPLC)，包括正相、反相和手性相HPLC；中压液相色谱法(MPLC)、超临界流体色谱法；制备性薄层色谱法(prepTLC)；使用硅胶或反相硅胶的快速色谱法；离子交换色谱法；和径向色谱法。除非另行指明，所有温度是摄氏度。
术语“标准肽偶联反应条件”是指在惰性溶剂，如二氯甲烷中在催化剂，如HOBT和HOAT存在下用酸活化剂，如EDC、DCC和BOP使羧酸与胺偶联。在文献中充分说明了使用胺和羧酸官能团的保护基促进所需反应和使不想要的反应最小化。在标准教科书，如Greene，T和Wuts，P.G.M.，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY，1991中找到除去保护基所需的条件。MOZ和BOC是有机合成中常用的保护基，它们的去除条件是本领域技术人员已知的。例如，可以通过在质子溶剂，如甲醇或乙醇中在贵金属或其氧化物，如活性炭载钯存在下的催化氢化除去MOZ。在由于其它潜在反应性官能团的存在而不允许催化氢化的情况下，也可以通过在溶剂，如二氯甲烷、甲醇或乙酸乙酯中用三氟乙酸、盐酸溶液或氯化氢气体处理来实现MOZ基团的去除。在溶剂，如二氯甲烷、甲醇或乙酸乙酯中用强酸，如三氟乙酸、盐酸或氯化氢气体进行BOC保护基的去除。
在本申请通篇中，除非另行指明，下列术语具有所示含义：
Figure BSA00000571400400231
Figure BSA00000571400400241
Figure BSA00000571400400251
下列反应流程图阐述了式Ia的本发明的化合物的合成中所用的方法。除非另行指明，所有取代基如上定义。通过几个类似途径中的一个或多个实现作为本发明的主题的式Ia的新型化合物的合成。
在流程图I中，在0℃的温度下用乙烯基格氏试剂在无水THF或醚中的1至2M溶液处理市售I-1并使其经1至4小时升温至室温。通常在惰性有机溶剂，如THF中和在惰性气氛，如氮气下进行反应。该产物是结构式I-2的烯丙醇。可以通过选择所需甲硅烷基保护剂，如叔丁基二甲基氯和弱有机碱，如咪唑和在室温下混合4至16小时来实现I-2向I-3的转化。通过鼓入臭氧气体一段时间来氧化双键直至蓝色不变，随后通过添加过量二甲硫来还原臭氧化物以提供醛I-4。随后在也充当干燥剂的路易斯酸，如硫酸铜或四氯化钛存在下用R-(+)-或S-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺处理I-4。通常在惰性有机溶剂，如二氯甲烷中在室温至40℃之间进行反应6-36小时，产物是结构式I-5的亚磺酰胺。如I-1那样，在类似条件和时间下用乙烯基格氏试剂处理I-5以提供烯丙基亚磺酰胺I-6。为了选择性除去该亚磺酰胺，用4M HCl在二氧杂环己烷中的无水溶液处理I-6不多于15分钟。随后用甲苯稀释该反应并浓缩至干以提供I-7。最后，通过在惰性有机溶剂，如DCM中在无水有机碱，如三乙胺或二异丙基乙基胺存在下在0℃用氯甲酸苄酯处理、经1至3小时升温至室温，将I-7转化成I-8。
流程图I
Figure BSA00000571400400261
或者，可以如流程图II中所示制备醛I-4。在N-甲基吗啉N-氧化物存在下用四氧化锇处理I-3提供了二醇I-9。该反应通常在水和丙酮的混合物中进行并在浓缩该溶液之前小心地后处理以除去有毒的四氧化锇。随后将残留物I-9溶解在丙酮/水(8∶1)中并如流程图I中所示在室温下用高碘酸钠处理8至24小时以提供醛I-4。这随后使用流程图I中所述的相同程序转化成最终所需中间体I-8。
流程图II
Figure BSA00000571400400262
流程图III描述了使用流程图I和II中描述的CBz-保护的烯丙基酰胺I-8合成吡咯烷核。该乙烯基化合物I-8可以使用本领域技术人员已知的烯烃复分解中可用的适当的催化剂在烯烃交叉复分解中与乙烯基酮中间体I-10反应。合适的催化剂包括，但不限于，″Grubbs″和″Zhan″催化剂和被称作Grubbs-II和Zhan I或II的类型的催化剂，以制造至结构式I-11的化合物。通过在氢气氛下在溶剂，如乙酸乙酯或乙醇中用10％载钯碳催化剂处理2-16小时以将这种中间体I-11氢化，除通过在游离胺和酮之间形成分子内亚胺和将该亚胺还原形成通用结构I-12的吡咯烷环来闭环外，还与任何Cbz-保护基的除去一起实现烯烃的氢化。根据溶剂的选择，此时根据最终中间体的优选情况保留或除去芳基上的卤素取代基。通过在无水有机碱，如三乙胺(TEA)存在下向I-12中添加1当量二碳酸叔丁酯(Boc2O)，可以实现吡咯烷的选择性Boc保护。该反应通常在惰性有机溶剂，如THF中和在惰性气氛，如氮气下进行，以提供结构式I-13的产物。根据酰胺、磺酰胺或脲的选择，可以使用本领域技术人员已知用于形成那些所需化合物的适当方法将I-13转化成各化合物。对于磺酰胺、可以用含R6的所需磺酰氯在合适的碱，如吡啶存在下处理I-13。
如本文所用，R6选自：
(1)氢，
(2)任选被1至5个独立地选自卤素、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb的基团取代的C1-C10烷基，
(3)任选被1至3个独立地选自卤素、任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基和-ORa的基团取代的苯基，
(4)具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，且其中所述杂环任选邻位稠合到苯环上并任选被1至3个独立地选自卤素、任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基和-ORa的基团取代。
该反应通常在惰性有机溶剂，如DMF中在室温至80℃下进行12-24小时，且产物是结构式I-14的磺酰胺。对酰胺而言，可以用所需含R6的乙酰氯在合适的有机碱，如TEA或DIEA存在下处理I-13。该反应通常在惰性有机溶剂，如DMF中在室温下进行12-24小时，且产物是结构式I-15的酰胺。最后，可以通过在室温下在含R6的胺存在下用CDI或光气处理I-13达1至24小时来形成脲，以提供结构式I-16的脲。通过在室温下用在甲醇水溶液中的6M HCl处理12-24小时来同时除去I-14、I-15和I-16的Boc和甲硅烷基保护基以提供结构通式I-17、I-18和I-19中所示的各种含R6的酰胺、磺酰胺和脲的最终所需产物。
如果在该R6部分上有本领域技术人员已知的使该化学反应易于进行所必需的有用的保护基，可以包括附加的脱保护步骤。这些保护基可包括三苯甲基、氨基甲酸叔丁酯基团或本领域技术人员已知的适用于保护杂环化合物或连接到R6基团上的官能团(如胺、羟基、羧酸)的其它基团。
流程图III
Figure BSA00000571400400281
如流程图IV中所示的另一途径阐述了同时提供顺式-和反式-吡咯烷的合成方法，它们在制备最终化合物之前分离。
原料2-氨基-芳基丙烷-1，3-二醇(I-20)首先在合适的溶剂，如甲苯中在酸，如对甲苯磺酸存在下使用丙酮作为半缩醛保护，随后通过用二碳酸叔丁酯处理，保护该胺以产生中间体I-21。使用标准Swern氧化条件，将游离伯羟基转化成醛I-22。随后与(三苯基膦烯)乙醛的维蒂希反应将该醛延长两个碳，并用载钯碳通过氢化还原所得双键以提供I-23。这种中间体随后与(4-硝基苄基)三苯基-溴化
Figure BSA00000571400400291
发生第二维蒂希反应以产生中间体I-24，其能在除去保护基后使该化合物通过跨双键的迈克尔加成环化。用二碳酸叔丁酯保护氨基有助于底物的提纯和分离以分别提供顺式和反式异构体I-25a和I-25b。硝基氢化成游离胺产生所需中间体I-26a和I-26b。当使用EDC时，中间体I-26a和I-26b可用于标准酰胺偶联，但是，需要在用酰基氯或磺酰氯或用光气(在转化成脲时)处理前选择性保护羟基。
流程图IV
Figure BSA00000571400400292
流程图V阐述了吡咯烷核的合成，其将流程图I、III和IV途径互连以便为吡咯烷核提供对顺式2S，5R吡咯烷的非对映异构选择性。
维蒂希反应用于通过用甲基三苯基溴化
Figure BSA00000571400400293
处理来将来自流程图IV的醛I-22转化成乙烯基类似物I-27。在经由中间体I-28看出的保护基操作后，该流程图经由中间体I-8汇入流程图III。使用如流程图III中所述的类似程序，随后可获得中间体I-11。通过引入盐酸和以0.15至0.30M浓度的稀释因数优化该氢化，主要提供顺式2S，5R吡咯烷核I-13a。
流程图V
Figure BSA00000571400400301
流程图VI阐述经由醇醛化学合成乙炔中间体以设定该吡咯烷的羟基和左手部分的手性的方法。由此，这种乙炔中间体可用于合成顺式和反式吡咯烷。
首先在弱有机碱，如三乙胺存在下在-25℃下用三甲基乙酰氯处理市售I-29达2小时。向该混合物中相继加入无水氯化锂和(S)-(-)-4-苄基或(S)-(-)-4-苯基-2-唑烷酮，接着经12至24小时逐渐升温至室温以提供酰亚胺I-30。通常在惰性有机溶剂，如THF中在惰性气氛，如氮气下进行该反应。根据公开出版的程序(参见Evans等人，J.Am.Chem.Soc.2002、124，392-394)制备醇I-32。例如，在室温下用无水氯化镁、三乙胺、适当的醛I-31，如3-氯-苯甲醛或苯甲醛和氯三甲基硅烷处理I-30达72小时产生醇醛产物的三甲基甲硅烷基醚I-32。通常在有机溶剂，如乙酸乙酯中在惰性气氛，如氮气下进行该反应。用三氟乙酸和甲醇混合物处理该三甲基甲硅烷基醚中间体以提供所需醇I-32。通过在0℃下用过氧化锂处理15-18小时，实现酰亚胺I-32的水解。随后用亚硫酸钠水溶液还原该过酸以提供羧酸I-33。通常在惰性有机溶剂，如THF和水的混合物中在惰性气氛，如氮气下进行该反应。可以通过选择所需甲硅烷基保护剂，如二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸叔丁酯和使其在弱有机碱，如DBU存在下在0℃下反应12至16小时，实现I-33向I-34的转化。随后在室温下在弱有机碱，如三乙胺存在下用二苯基磷酰基叠氮处理I-34达6小时。在加热至100℃达12至16小时的同时添加适当的醇，如4-甲氧基苄基醇产生相应的氨基甲酸酯I-35。通常在惰性有机溶剂，如甲苯中，在惰性气氛，如氮气下进行该反应。这种材料构成可合成吡咯烷核的基础。
流程图VI
流程图VII阐述I-35用于吡咯烷核的转化。通过闭环剂经由分子内还原性胺化形成吡咯烷，以形成顺式和反式吡咯烷。顺式和反式吡咯烷分离并随后将硝基还原成胺以产生用于合成类似物的最终所需吡咯啉苯胺。
炔I-35可以在Sonagashira型交叉偶联反应中使用本领域技术人员已知的适当反应条件与相应的市售芳基卤I-36反应以提供I-37。反应条件可包括使用催化剂，如在有机碱，如三乙胺存在下的含或不含碘化铜(I)的四(三苯基膦)-钯(0)，或与有机碱，如四丁基乙酸铵一起的乙酸钯(II)，在有机溶剂，如乙腈或DMF中，在惰性气氛，如氮气下。可以通过炔I-37与吡咯烷在80℃在溶剂，如DMF中反应3-6小时来制备酮I-38。随后在室温下用10％乙酸水溶液处理15-60分钟以产生酮I-38。可以使用本领域技术人员已知的适当反应条件除去I-38的氨基甲酸酯保护基以提供相应的胺，其随后用该酮进行分子内闭环以提供亚胺I-39。反应条件可包括在有机溶剂，如二氯甲烷中的三氟乙酸，和在有机溶剂，如醚中的氢氯酸。通过在有机溶剂，如甲醇中在0℃下在惰性气氛，如氮气下用氰基硼氢化钠处理18-24小时，实现亚胺I-39的还原。这提供顺式-吡咯烷(I-40a)和反式-吡咯烷(I-40b)中间体，它们可通过硅胶色谱法分离。I-40a是该反应中制成的主要非对映体并且是最先从该柱中洗脱出的非对映体。通过在弱有机碱，如三乙胺存在下用二碳酸叔丁酯处理，实现用Boc基团保护I-40a或I-40b的吡咯烷氮。通常在有机溶剂，如二氯甲烷中，在惰性气氛，如氮气下进行该反应以提供结构式I-41a或I-41b的产物。通过在溶剂，如乙酸乙酯或乙醇中在15至50psi的氢气氛下在氯化氢存在下用10％载钯碳处理8-12小时，中间体I-41a或I-41b氢化产生I-42a或I-42b。根据条件的选择，此时可以根据最终中间体的优选情况保留或除去卤素取代基X。
流程图VII
Figure BSA00000571400400321
在一些情况下，可以改变进行前述反应流程的次序以促进反应或避免不想要的反应产物。提供下列实施例以便可更充分理解本发明。这些实施例仅是示例性的，无论如何不应被视为限制本发明。
中间体1
[3-(2-氧代丁-3-烯-1-基)苯基]氨基甲酸苄酯(i-1)：
Figure BSA00000571400400331
步骤A：(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯基)乙酸乙酯
Figure BSA00000571400400332
向(3-氨基苯基)乙酸甲酯(25克，140毫摩尔)在250毫升无水DCM中的溶液中加入DIEA(28.5毫升，155毫摩尔)，将所得溶液冷却至0℃并置于氮气氛下。随后向这种冷却溶液中加入氯甲酸苄酯(21.1毫升，148毫摩尔)并将所得混合物搅拌整夜以便升温至室温。该反应物用1MHCl、水和随后盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。不必进一步提纯，该材料(44克，99％)原样用于下一步骤反应。LC-MS：m/z(ES)314(MH)+，336(MNa)+。
步骤B：(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯基)乙酸
向44.0克(140毫摩尔)(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯基)乙酸)乙酯(来自步骤A)在THF、乙醇和水(1∶1∶1，1500毫升)中的溶液中加入固体LiOH(16.8克，700毫摩尔)并经油浴将所得溶液加热至60℃达3小时。将该混合物冷却至室温整夜，随后缓慢添加40毫升浓HCl，保持温度低于25℃，直至该溶液为大约2-3pH。用乙酸乙酯(3x750毫升)萃取，随后合并有机物，并用水和随后盐水洗涤。经硫酸钠干燥有机物，过滤和真空浓缩。标题化合物(24.7克，87％)不经进一步提纯即用于下一步骤反应。LC-MS：m/z(ES)286(MH)+，308(MNa)+。
步骤C：(3-{2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)氨基甲酸苄酯
向24.7克(87毫摩尔)(3-{[(苄氧基)羰基]氨基}苯基)乙酸在200毫升二氯甲烷中的悬浮液(来自步骤B)中加入三乙胺(30.2毫升，173毫摩尔)，这造成一定的放热(+5℃)且该悬浮液变成溶液。冷却10分钟后，将HOBt(13.2克，87毫摩尔)、N，O-二甲基羟胺HCl(8.5克，87毫摩尔)添加到该溶液中，接着加入EDC(16.6克，87毫摩尔)并将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌整夜。将该溶液转移到分液漏斗中并用1M HCl洗涤，这产生乳状液。添加甲醇以分散该乳状液，并分离出水相。有机物经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。残留物从1000毫升在乙酸乙酯中的70％己烷中重结晶(加热至回流，然后冷却至室温整夜)以提供白色固体状的标题化合物(21克，74％)。LC-MS：m/z(ES)329(MH)+。
步骤D：[3-(2-氧代丁-3-烯-1-基)苯基]氨基甲酸苄酯(i-1)
经套管向在氮气氛下经冰/水浴冷却至0℃的15克(45.7毫摩尔)(3-{2-[甲氧基(甲基)氨基]-2-氧代乙基}苯基)氨基甲酸苄酯(来自步骤C)在1000毫升无水THF中的溶液中逐滴加入1.0M乙烯基溴化镁溶液(100毫升在THF中，100毫摩尔)并将所得溶液在0℃下搅拌1小时。通过缓慢添加500毫升1M HCl(保持温度低于5℃)，猝灭该反应，并搅拌30分钟。该混合物随后用乙酸乙酯萃取，合并的有机物用水，接着盐水洗涤。有机物随后经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。通过用己烷中的30％乙酸乙酯快速洗脱的Biotage 75M提纯该残留物，以提供浅黄色固体状的标题化合物(11克，78％)。LC-MS：m/z(ES)310(MH)+，332(MNa)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.44-7.36(m，7H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.70(br s，1H)，6.44(dd，J＝10.5，17.6Hz，1H)，6.32(dd，J＝1.1，17.6Hz，1H)，5.85(dd，J＝1.1，10.5Hz，1H)，5.22(s，2H)，3.86(s，2H)。
中间体2
((1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基)(3-氯苯基)甲基]丙-2-烯-1- 基}氨基甲酸酯(i-2)
Figure BSA00000571400400351
步骤A：1-(3-氯苯基)丙-2-烯-1-醇
Figure BSA00000571400400352
经注射器在惰性气氛下向3-氯苯甲醛(22.5克，160毫摩尔)在100毫升无水THF中的冷却溶液中缓慢加入乙烯基氯化镁在THF中的1.6M溶液(100毫升，160毫摩尔)并将该溶液搅拌3小时以便升温至室温。用氯化铵饱和溶液猝灭该反应，分离有机层，用乙酸乙酯(2x200毫升)萃取并合并有机层，经硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。借助40M+硅胶柱，使用在己烷中0-40％乙酸乙酯的梯度洗脱剂通过Horizon MPLC提纯提供标题化合物(22.4克，44％)。m/z(ES)168，170(M，M+2)+，190，192(MNa，MNa+2)+。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.38(s，1H)，7.35-7.22(m，3H)，5.90(ddd，J＝7.3，10.0，17.4Hz，1H)，5.38(d，J＝17.5Hz，1H)，5.18(d，J＝7.2Hz，1H)，5.15(d，J＝10.1Hz，1H)，0.96(s，9H)，0.18(s，3H)，0.08(s，3H)。
步骤B：叔丁基{[1-(3-氯苯基)丙-2-烯-1-基]氧基}二甲基硅烷
Figure BSA00000571400400353
向22.4克(133毫摩尔)1-(3-氯苯基)丙-2-烯-1-醇在90毫升无水DMF(来自步骤A)中的溶液中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(20.0克，133毫摩尔)和咪唑(18.1克，266毫摩尔)，并将所得溶液在氮气下在室温下搅拌整夜。用水洗涤和用乙酸乙酯萃取。分离有机物，经硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。通过用己烷中0-15％乙酸乙酯的梯度洗脱剂洗脱的快速硅胶柱提纯该残留物以提供标题化合物(16.6克，46％)。m/z(ES)282，284(M，M+2)+；151，153(M-OTBS，M-OTBS+2)+。
步骤C：{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)乙醛
Figure BSA00000571400400361
向经干冰/丙酮浴冷却至-78℃的4.0克(14.2毫摩尔)叔丁基{[1-(3-氯苯基)丙-2-烯-1-基]氧基}二甲基硅烷在二氯甲烷中的溶液(来自步骤B)中鼓入臭氧直至该溶液保持浅蓝色。随后将氮气鼓入该溶液直至其变清澈。将二甲硫添加到该溶液中并将所得混合物在室温下搅拌整夜。该材料在真空下浓缩，残留物用40M+硅胶柱通过Horizon MPLC提纯，用己烷中0-50％乙酸乙酯的梯度洗脱剂洗脱，以提供产物(3.57克，89％)。
步骤D：N-[(1E)-2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(3-氯苯基)亚乙 基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BSA00000571400400362
向3.0克(10.6毫摩尔){[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)乙醛(来自步骤C)和1.3克(10.6毫摩尔)(R或S)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺在50毫升无水二氯甲烷中的溶液中加入硫酸铜(II)(3.4克，21.2毫摩尔)并将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时。用水洗涤反应物并用二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥有机物，过滤和真空浓缩。残留物用40M+硅胶柱通过Horizon MPLC提纯，用己烷中0-25％乙酸乙酯的梯度洗脱剂体系洗脱以提供标题化合物(3.26克，80％)。％).m/z(ES)387，390(M，M+2)+。
步骤E：N-{1-[{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)甲基]-丙-2- 烯-1-基}2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BSA00000571400400371
经注射器向在氮气氛下冷却至0℃的2.4克(6.20毫摩尔)N-[(1E)-2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2-(3-氯苯基)亚乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺在20毫升无水THF中的溶液(来自步骤D)中加入乙烯基氯化镁在THF中的1.6M溶液(3.90毫升，6.2毫摩尔)并将所得混合物搅拌1小时。使该混合物升温至室温并再搅拌1小时。用氯化铵饱和溶液猝灭该反应并用乙酸乙酯萃取。合并有机物，经硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。残留物用40M+硅胶柱通过Horizon MPLC提纯，用己烷中0-35％乙酸乙酯的梯度洗脱剂体系洗脱以提供作为单异构体的所有四种非对映体。
通过NMR，所得四种产物是彼此的非对映体。异构体以它们从硅胶柱中洗脱出来的状态标注。洗脱出的第一异构体被称作异构体1，随后异构体2、3，最后异构体4。
Figure BSA00000571400400372
异构体1：m/z(ES)416，418(M，M+2)+，438，440(MNa，MNa+2)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.32(s，1H)，7.30(br d，J＝7.5，1H)，7.26(brd，J＝6.2Hz，2H)，7.22-7.18(m，1H)，5.60(ddd，J＝7.3，10.3，17.4Hz，1H)，5.15(d，J＝10.3Hz，1H)，5.00(d，J＝17.3Hz，1H)，4.57(d，J＝7.4Hz，1H)，3.98-3.94(m，2H)，1.64(br s，1H)，1.23(s，9H)，0.91(s，9H)，0.08(s，3H)，-0.18(s，3H)。
异构体2：m/z(ES)416，418(M，M+2)+，438，440(MNa，MNa+2)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.33-7.31(m，2H)，7.26(br d，J＝5.0Hz，2H)，7.20-7.16(m，1H)，5.44(ddd，J＝7.2，10.0，17.4Hz，1H)，5.26(重叠d，J＝7.3Hz，1H)，5.25(重叠d，J＝17.3Hz，1H)，4.84(d，J＝4.4Hz，1H)，4.02(dt，J＝4.4，7.8Hz，1H)，3.80(d，J＝4.4Hz，1H)，1.20(s，9H)，0.94(s，9H)，0.14(s，3H)，-0.12(s，3H)。
异构体3：m/z(ES)416，418(M，M+2)+，438，440(MNa，MNa+2)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.32-7.29(m，2H)，7.26-7.24(m，2H)，7.22-7.20(m，1H)，6.04(ddd，J＝7.1，10.4，17.4Hz，1H)，5.40(d，J＝10.2Hz，1H)，5.32(d，J＝17.3Hz，1H)，4.80(d，J＝4.0Hz，1H)，3.88-3.80(m，1H)，3.55(d，J＝9.4Hz，1H)，1.09(s，9H)，0.95(s，9H)，0.09(s，3H)，-0.10(s，3H)。
异构体4：m/z(ES)416，418(M，M+2)+，438，440(MNa，MNa+2)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.32(s，1H)，7.30(br d，J＝7.5，1H)，7.27-7.25(m，2H)，7.21-7.18(m，1H)，5.92(ddd，J＝7.1，10.3，17.4Hz，1H)，5.23(d，J＝10.4Hz，1H)，5.18(d，J＝17.4Hz，1H)，4.75(d，J＝4.2Hz，1H)，3.88-3.82(m，1H)，3.33(d，J＝9.4Hz，1H)，1.19(s，9H)，0.94(s，9H)，0.09(s，3H)，-0.14(s，3H)。
步骤F：((1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基)(3-氯苯基)甲基] 丙-2-烯-1-基}氨基甲酸酯(i-2)
向异构体1(510毫克，2.22毫摩尔)N-{1-[{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)甲基]-丙-2-烯-1-基}2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(来自步骤E)中加入5毫升在二氧杂环己烷中的无水4M HCl并将该溶液在室温下搅拌15分钟。将该溶液浓缩至干并与甲苯(2x5毫升)共沸以除去过量HCl。该残留物随后溶解在无水二氯甲烷中，置于氮气氛下，用冰/水浴冷却至0℃，随后经注射器缓慢加入氯甲酸苄酯(0.32毫升，2.22毫摩尔)，接着加入二异丙基乙胺(1.19毫升，6.66毫摩尔)并将所得溶液在0℃下搅拌2小时。该溶液在真空下浓缩至干，残留物经制备板提纯(4x1000μM)，用己烷中20％乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(703毫克，71％)。m/z(ES)446，448(M，M+2)+，468，470(MNa，MNa+2)+。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.32(s，1H)，7.30(br d，J＝7.5，1H)，7.27-7.25(m，2H)，7.21-7.18(m，1H)，5.92(ddd，J＝7.1，10.3，17.4Hz，1H)，5.23(d，J＝10.4Hz，1H)，5.18(d，J＝17.4Hz，1H)，4.75(d，J＝4.2Hz，1H)，3.88-3.82(m，1H)，3.33(d，J＝9.4Hz，1H)，1.19(s，9H)，0.94(s，9H)，0.09(s，3H)，-0.14(s，3H)。
可以使用上述程序由适当的原材料制备具有各种立体化学的与上述那些相关的中间体。
Figure BSA00000571400400391
中间体3
(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基] 吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-3)
Figure BSA00000571400400392
步骤A：{4-[(3E，5R，6R)-5-{[(苄氧基)羰基]氨基-6-{[叔丁基(二甲基) 甲硅烷基]氧基}-6-(3-氯苯基)-2-氧代己-3-烯-1-基]苯基}氨基甲酸苄酯
Figure BSA00000571400400393
向[3-(2-氧代丁-3-烯-1-基)苯基]氨基甲酸苄酯(i-1)(820毫克，2.80毫摩尔)和((1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基)(3-氯苯基)甲基]丙-2-烯-1-基}氨基甲酸酯(i-2)(500毫克，1.12毫摩尔)在7毫升无水二氯甲烷中的溶液中加入Zhan I催化剂(740毫克，1.12毫摩尔)，并将所得绿色溶液在氮气氛下加热至40℃整夜。将该溶液浓缩至干且残留物经制备板(4x1000μM)提纯，用己烷中40％乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(348毫克，50％)。m/z(ES)713，715(M，M+2)+，735，737(MNa，MNa+2)+。
步骤B：4-({(5R)-5-[(R)-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基] 吡咯烷-2-基}甲基)苯胺
Figure BSA00000571400400401
向328毫克(0.46毫摩尔){4-[(3E，5R，6R)-5-{[(苄氧基)羰基]氨基-6-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6-(3-氯苯基)-2-氧代己-3-烯-1-基]苯基}氨基甲酸苄酯(来自步骤A)在25毫升乙醇中的溶液中加入10％载钯碳并经由氢气囊将该悬浮液置于氢气氛下。该反应在氢气下在室温下搅拌1小时。TLC证实反应完全。使用Gilmen 0.45μM PTFE针筒式过滤器滤出催化剂并用乙醇(4x5毫升)洗涤。滤液在真空下浓缩至干且残留物通过制备板(3x1000μM)提纯，用二氯甲烷中5％甲醇洗脱以提供标题化合物(121毫克，66％)。m/z(ES)397(MH)+。
步骤C：(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-3)
向121毫克(0.315毫摩尔)4-({(5R)-5-[(R)-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯胺在5毫升无水THF中的溶液(来自步骤B)中加入碳酸叔丁酯(69毫克，0.315毫摩尔)，接着加入TEA(44微升，0.315毫摩尔)并将所得溶液在室温下在氮气氛下搅拌整夜。将反应混合物直接置于制备板(1500μM)上并用己烷中30％乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(100毫克，64％)。m/z(ES)497(MH)+，397(M-Boc)+。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.40-7.30(m，5H)，6.75-6.68(m，2H)，6.56-6.51(m，2H)，5.52-5.48(m，1H)，5.32-5.28(m，1H)，4.16-4.06(m，2H)，3.88-3.82(m，1H)，3.76-3.70(m，1H)，3.55-3.48(m，2H)，2.74(br d，J＝11.8Hz，1H)，2.44(br d，J＝11.8Hz，1H)，2.05-1.94(m，1H)，1.90-1.82(m，1H)，1.60(s，9H)，1.50-1.42(m，1H)，1.32-1.22(m，2H)，1.10-1.02(m，1H)，0.95(s，9H)，0.08(s，3H)，-0.15(s，3H)。
中间体4a和中间体4b的分离
(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基) 甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)；
(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基) 甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4b)
Figure BSA00000571400400411
步骤A：(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)和(2R，5R)-2-(4-氨基苄 基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(i-4b)
将中间体i-3((5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯)(顺式和反式的4∶1混合物)置于甲醇中并经由Berger Multigram SFC(超临界)使用30％甲醇∶60％二氧化碳洗脱剂提纯以分离这两种非对映体。该柱的第一异构体被标作次要异构体1，第二异构体被标作主要异构体2。
i-4a：m/z(ES)497(MH)+，397(M-Boc)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.40-7.30(m，5H)，6.75-6.68(m，2H)，6.56-6.51(m，2H)，5.52-5.48(m，1H)，5.32-5.28(m，1H)，4.16-4.06(m，2H)，3.88-3.82(m，1H)，3.76-3.70(m，1H)，3.55-3.48(m，2H)，2.74(br d，J＝11.8Hz，1H)，2.44(brd，J＝11.8Hz，1H)，2.05-1.94(m，1H)，1.90-1.82(m，1H)，1.60(s，9H)，1.50-1.42(m，1H)，1.32-1.22(m，2H)，1.10-1.02(m，1H)，0.95(s，9H)，0.92(d，J＝11.8Hz，1H)，0.12(br d，J＝14.0Hz，3H)，-0.04(s，3H)。在SFC上8.70分钟洗脱，异构体2
i-4b：m/z(ES)497(MH)+，397(M-Boc)+.1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.40-7.30(m，5H)，6.76-6.68(m，2H)，6.56-6.51(m，2H)，5.52-5.48(m，1H)，5.32-5.28(m，1H)，4.16-4.06(m，2H)，3.88-3.82(m，1H)，3.76-3.70(m，1H)，3.60-3.46(m，2H)，2.72(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.44(brd，J＝12.2Hz，1H)，2.05-1.94(m，1H)，1.90-1.82(m，1H)，1.64(s，9H)，1.50-1.42(m，1H)，1.32-1.22(m，2H)，1.10-1.02(m，1H)，0.95(s，9H)，0.14(br d，J＝13.8Hz，3H)，0.09(s，3H)。在SFC上7.78分钟洗脱，异构体1。
中间体4a和中间体4b的合成
(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基) 甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)；
(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基) 甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4b)
步骤A：(4S)-3-己-5-炔酰基-4-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400422
唑烷-2-酮
在-25℃下在氮气氛下经20分钟向69.0克(615毫摩尔)5-己炔酸和214毫升(1540毫摩尔)三乙胺在1.0升无水四氢呋喃中的溶液中加入83.0毫升(677毫摩尔)三甲基乙酰氯。在添加后形成白色沉淀物并将所得悬浮液搅拌2小时。接着，相继加入28.7克(677毫摩尔)无水氯化锂和100.0克(615.0毫摩尔)(4S)-4-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400424
唑烷-2-酮并使该混合物经12小时逐渐升温至环境温度。真空除去所有挥发物，残留物用水(1升)稀释并用乙酸乙酯(3x300毫升)萃取。合并的有机层用盐水(250毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中5-50％乙酸乙酯梯度洗脱以提供无色固体状的标题化合物(135克，85.4％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.40-7.37(m，2H)，7.36-7.32(m，1H)，7.31-7.28(m，2H)，5.42(dd，J＝8.9，3.7Hz，1H)，4.69(t，J＝8.9Hz，1H)，4.28(dd，J＝9.2，3.7Hz，1H)，3.13-3.02(m，2H)，2.24-2.21(m，2H)，1.94(t，J＝2.6Hz，1H)，1.84(五重峰，J＝7.1Hz，2H).LC-MS：m/z(ES)258.2(MH)+。
步骤B：(4S)-3-{(2R)-2-[(S)-羟基(苯基)甲基]己-5-炔酰基}-4-苯基 -1，3- 唑烷-2-酮
在环境温度下在氮气氛下向56.8克(221毫摩尔)来自上述步骤A的(4S)-3-己-5-炔酰基-4-苯基-1，3-唑烷-2-酮在265毫升无水乙酸乙酯中的搅拌溶液中加入6.31克(66.2毫摩尔)无水氯化镁、61.5毫升(442毫摩尔)三乙胺、26.9毫升(265毫摩尔)苯甲醛和42.3毫升(331毫摩尔)氯三甲基硅烷，并将所得混合物搅拌72小时。通过用另外1升乙酸乙酯洗脱的300毫升硅胶柱过滤该多相反应混合物。将该滤液在真空中蒸发至干并将残留物悬浮在265毫升甲醇和10毫升三氟乙酸中。将所得混合物在环境温度下在氮气下搅拌5小时，在此过程中该反应变均匀。随后真空除去所有挥发物且残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中5-15％乙酸乙酯梯度洗脱以提供白色固体状的标题化合物(65.0克，81.2％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.30-7.28(m，8H)，7.09-7.07(m，2H)，5.42(dd，J＝8.7，3.7Hz，1H)，4.76-4.72(m，1H)，4.72-4.67(m，1H)，4.65(t，J＝8.7Hz，1H)，4.18(dd，J＝8.7，3.7Hz，1H)，3.05(d，J＝7.8Hz，1H)，2.24(td，J＝7.1，2.5Hz，2H)，2.00-1.93(m，2H)，1.67-1.61(m，1H).LC-MS：m/z(ES)346.1(MH-H2O)+，386.0(MNa)+。
步骤C：(2R)-2-[(S)-羟基(苯基)甲基]己-5-炔酸
Figure BSA00000571400400441
在0℃下在氮气氛下，以慢到足以保持低于3℃的内部温度的速率向65.0克(179毫摩尔)来自上述步骤B的(4S)-3-{(2R)-2-[(S)-羟基(苯基)甲基]己-5-炔酰基}-4-苯基-1，3-唑烷-2-酮在1050毫升无水四氢呋喃∶水的20∶1混合物中的搅拌溶液中加入77.0毫升(894毫摩尔)35％过氧化氢水溶液。接着，以慢到足以保持低于5℃的内部反应温度的速率加入395毫升(395毫摩尔)1.0M氢氧化锂水溶液，并将所得混合物在0℃下搅拌3小时。用755毫升(984毫摩尔)1.3M亚硫酸钠水溶液以慢到足以保持低于5℃的混合物内部温度的速率猝灭该反应。真空除去所有挥发物，且残留水相用乙酸乙酯(3x200毫升)萃取。随后将该水相冷却至0℃并用6M氯化氢水溶液酸化直至实现pH 3。随后用乙酸乙酯(3x300毫升)萃取水相，该合并的有机物用盐水(100毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中5-10％乙酸乙酯和3％乙酸梯度洗脱以提供无色胶状的标题化合物(32.0克，82.0％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.39-7.28(m，5H)，4.85(d，J＝8.2，1H)，3.03-2.97(m，1H)，2.29-2.15(m，2H)，1.97(t，J＝2.5Hz，1H)，1.93-1.82(m，1H)，1.62-1.55(m，1H).LC-MS：m/z(ES)201.0(MH-H2O)+。
步骤D：(2R)-2-[(S)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]己-5- 炔酸
Figure BSA00000571400400443
在环境温度下在氮气氛下向32.0克(147毫摩尔)来自上述步骤C的(2R)-2-[(S)-羟基(苯基)甲基]己-5-炔酸在500毫升无水乙腈中的搅拌溶液中经10分钟分三份加入77.0毫升(513毫摩尔)1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯、22毫升，接着66.3克(440毫摩尔)叔丁基二甲基甲硅烷基氯。将该反应混合物搅拌4小时，随后真空蒸发以除去所有挥发物。用300毫升二氯甲烷和100毫升水稀释该残留物。将1.0M氯化氢水溶液添加到该混合物中直至在水层中实现pH 3。分离相，并用二氯甲烷(2x100毫升)萃取水相。该合并的有机物用水(50毫升)、盐水(50毫升)洗涤，随后经硫酸镁干燥。在过滤和真空蒸发后，将该残留物溶解在350毫升甲醇中并加入350毫升(280毫摩尔)0.8M碳酸钾水溶液。将所得混合物搅拌1.5小时，随后真空蒸发以除去所有挥发物。用300毫升二氯甲烷稀释该残留物，并用5.0M氯化氢水溶液酸化该水相直至实现pH 3。分离相并用二氯甲烷(2x100毫升)萃取水相。合并的有机物用水(50毫升)、盐水(50毫升)洗涤，随后经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中3-15％乙酸乙酯梯度洗脱以提供无色固体状的标题化合物(42.3克，86.6％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ7.36-7.27(m，5H)，4.78(d，J＝8.7，1H)，2.90-2.86(m，1H)，2.19-2.11(m，1H)，2.10-2.03(m，1H)，1.90(t，J＝2.6Hz，1H)，1.75-1.67(m，1H)，1.41-1.34(m，1H)，0.83(s，9H)，0.02(s，3H)，-0.27(s，3H).LC-MS：m/z(ES)333.2(MH)+。
步骤E：{(1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]戊 -4-炔-1-基}氨基甲酸4-甲氧基苄基酯
在环境温度下在氮气氛下向40.0克(120毫摩尔)来自上述步骤D的(2R)-2-[(S)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]己-5-炔酸和33.5毫升(241毫摩尔)三乙胺在400毫升无水甲苯中的溶液中加入37.5毫升(132毫摩尔)二苯基磷酰基叠氮。将该混合物搅拌5小时，随后加入37.5毫升(301毫摩尔)4-甲氧基苄基醇。将所得混合物加热至105℃达16小时，冷却至环境温度，随后用250毫升饱和碳酸氢盐水溶液稀释。分离相并用乙酸乙酯(2x150毫升)萃取水相。合并的有机物用水(100毫升)、盐水(100毫升)洗涤，随后经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中3-10％乙酸乙酯洗脱以提供无色油状的标题化合物(50.9克，90.5％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：7.28-7.21(m，7H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.92(s，2H)，4.77-4.59(m，2H)，3.89-3.84(m，1H)，3.81(s，3H)，2.30-2.22(m，2H)，1.95(m，1H)，1.91-1.85(m，1H)，1.57-1.50(m，1H)，0.89(s，9H)，0.06(s，3H)，-0.15(s，3H).LC-MS：m/z(ES)468.1(MH)+，490.0(MNa)+。
步骤F：[(1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲 基]-5-(4-硝基苯基)戊-4-炔-1-基]氨基甲酸4-甲氧基苄基酯
Figure BSA00000571400400461
向乙炔(来自步骤E，40克，80毫摩尔)和4-碘硝基苯(21.8克，88毫摩尔)在无水DMF(500毫升)中的溶液中加入三乙胺(111毫升，797毫摩尔)。加入Pd(dppf)Cl2(1.95克，2.39毫摩尔)和碘化铜(I)(910毫克，4.78毫摩尔)并用氮气将该混合物脱气(鼓泡15分钟)并将所得溶液在室温下搅拌5小时。将该混合物倒入水(1200m)中并用EtOAc(3x300毫升)萃取。合并的有机物随后用水(2x500毫升)、饱和NaCl(200毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。残留物通过MPLC(Horizon Biotage 2x Flash 65i)提纯，用己烷中0-30％乙酸乙酯梯度洗脱以产生41克(84％)深红色油。％).1H NMR(500MHz，CDCl3)：8.11-8.04(m，2H)，7.94-8.01(m，1H)，7.38-7.21(m，8H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.98(s，2H)，4.77-4.59(m，2H)，4.00-3.95(m，3H)，3.81(s，3H)，2.56(t，J＝7.1Hz，H＝2H)，2.00-1.95(m，1H)，1.66-1.61(m，1H)，0.93(s，9H)，0.10(s，3H)，-0.10(s，3H).LC-MS：m/z(ES)589.3(MH)+，611.2(MNa)+。
步骤G：[(1R)-1-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲 基]-5-(4-硝基苯基)-4-氧代戊基]氨基甲酸4-甲氧基苄基酯
Figure BSA00000571400400471
向硝基苯基乙炔(来自步骤F，41克，65.5毫摩尔)在DMF(40毫升)中的溶液中加入吡咯烷(14毫升，196.5毫摩尔)并将所得混合物在80℃下加热3小时。将该混合物冷却至室温，加入10％乙酸水溶液(110毫升)并将所得溶液在室温下再搅拌3小时。将该混合物倒入水(300毫升)中并用EtOAc(3x250毫升)萃取；合并的EtOAc层用水(2x250毫升)、饱和NaCl(100毫升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。通过Horizon Flash 75提纯该残留物，用从100％己烷升至己烷中50％ EtOAc的梯度洗脱以产生34克(81％)深橙色油。1H NMR(500MHz，CDCl3)：8.17-8.14(m，2H)，7.32-7.23(m，9H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，4.96(d，J＝12.2Hz，1H)，4.90(d，J＝12.1Hz，1H)，4.72(d，J＝3Hz，1H)，4.16-4.13(m，1H)，3.81(s，3H)，3.71-3.77(m，2H)，2.65-2.52(m，2H)，1.97-1.92(m，1H)，1.72-1.60(m，1H)，0.93(s，9H)，0.05(s，3H)，-0.13(s，3H)。
步骤H：(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲 基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷
Figure BSA00000571400400472
向MOZ保护的酮胺(来自步骤G，34克，56毫摩尔)在DCM(350毫升)中的溶液中加入TFA(256毫升)，所得混合物在室温下搅拌1.5小时。将该溶液真空蒸发并使残留物在DCM和饱和NaHCO3之间分相。有机层经MgSO4干燥，过滤和蒸发。将该残留物溶解在MeOH(750毫升)中并经冰/水浴冷却至0℃。随后加入氰基硼氢化钠(21.2克，337毫摩尔)并将所得混合物搅拌整夜以升温至室温。通过添加水来猝灭该混合物并在真空下除去有机物。随后用EtOAc萃取水层(x2)并用饱和NaCl洗涤该合并的EtOAc层，经MgSO4干燥，过滤和真空蒸发。残留物通过在二氧化硅上的柱色谱法提纯(洗脱剂：从100％己烷升至己烷中35％ EtOAc的梯度)以产生16.4克(63.4％)第一异构体(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷和3.1克(12％)第二异构体(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷。
异构体1：LC-MS：m/z(ES)427.3(MH)+
异构体2：LC-MS：m/z(ES)427.3(MH)+
步骤I：(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲 基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400400481
向(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(12克，42.5毫摩尔)在无水THF中的溶液中加入Boc酐(9.3克，42.5毫摩尔)，接着加入TEA(17.76毫升，127.4毫摩尔)，并将所得溶液在室温下在氮气氛下搅拌2小时。用水(100毫升)洗涤该混合物并用乙酸乙酯(2x200毫升)萃取。有机物经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。该残留物通过Horizon BiotageMPLC(65i硅胶柱)提纯，用己烷中20-75％乙酸乙酯的梯度洗脱以提供所需产物。LC-MS：m/z(ES)527.3(MH)+，549.2(MNa)+。
步骤J：(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲 基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400400491
以与步骤I相同的方式制备但将顺式吡咯烷异构体换成反式异构体(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]-5-(硝基苄基)吡咯烷。LC-MS：m/z(ES)527.3(MH)+，549.2(MNa)+。
步骤K：(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)；
在500毫升parr摇振烧瓶中装入10％ Pd/c(4.75克)并向其中加入100毫升甲醇以覆盖该催化剂。随后将来自步骤I的硝基中间体(8.5克，18.5毫摩尔)在甲醇(80毫升)中的溶液添加到该悬浮液中，接着加入15.4毫升1.0M氯化氢的甲醇溶液。将反应容器置于50 PSI氢气下并将该混合物搅拌整夜。提取等分试样并通过LC-MS分析，其表明完全反应。
使用硅藻土滤出催化剂并用甲醇(2x100毫升)洗涤。将该滤液浓缩至干，产物通过Horizon MPLC(65i二氧化硅柱)提纯，用己烷中从0％升至30％乙酸乙酯的梯度洗脱以提供标题化合物(6.2g，72％)。m/z(ES)497(MH)+，397(M-Boc)+。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.38-7.29(m，5H)，6.76-6.68(m，2H)，6.55-6.50(m，2H)，5.52-5.49(m，1H)，5.30-5.27(m，1H)，4.15-4.05(m，2H)，3.86-3.81(m，1H)，3.76-3.71(m，1H)，3.55-3.47(m，2H)，2.74(br d，J＝11.7Hz，1H)，2.44(br d，J＝11.7Hz，1H)，2.05-1.93(m，1H)，1.90-1.83(m，1H)，1.60(s，9H)，1.50-1.42(m，1H)，1.31-1.21(m，2H)，1.10-1.02(m，1H)，0.95(s，9H)，0.92(d，J＝11.8Hz，1H)，0.13(br d，J＝14.0Hz，3H)，-0.05(s，3H)
步骤L：(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4b)
Figure BSA00000571400400501
以与步骤K相同的方式制备，但将顺式吡咯烷异构体换成反式异构体(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。m/z(ES)497(MH)+，397(M-Boc)+。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.41-7.30(m，5H)，6.73-6.67(m，2H)，6.56-6.50(m，2H)，5.52-5.48(m，1H)，5.33-5.28(m，1H)，4.15-4.06(m，2H)，3.86-3.81(m，1H)，3.76-3.70(m，1H)，3.59-3.46(m，2H)，2.72(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.44(br d，J＝12.0Hz，1H)，2.05-1.93(m，1H)，1.90-1.82(m，1H)，1.64(s，9H)，1.49-1.42(m，1H)，1.32-1.20(m，2H)，1.10-1.02(m，1H)，0.95(s，9H)，0.14(br d，J＝13.7Hz，3H)，0.10(s，3H)。
使用上文对中间体i-4a描述的程序由适当的原材料制备下列中间体。
表1
Figure BSA00000571400400502
使用上文对中间体i-4b描述的程序由适当的原材料制备下列中间体。
表2
Figure BSA00000571400400512
中间体5
(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基) 甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-5)
Figure BSA00000571400400521
步骤A：4-({(5R)-5-[(R)-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)甲 基]吡咯烷-2-基}甲基)苯胺
Figure BSA00000571400400522
向100毫克(0.15毫摩尔){4-[(3E，5R，6R)-5-{[(苄氧基)羰基]氨基-6-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6-(3-氯苯基)-2-氧代己-3-烯-1-基]苯基}氨基甲酸苄酯(来自步骤A，i-3)在8毫升乙酸乙酯中的溶液中加入10％载钯碳，并经由氢气囊将该悬浮液置于氢气氛下。该反应在氢气下在室温下搅拌8小时。使用Gilmen 0.45uM PTFE针筒式过滤器滤出催化剂并用乙酸乙酯(4x2毫升)洗涤。滤液在真空下浓缩至干且残留物通过制备板(1000μM)提纯，用二氯甲烷中5％的甲醇洗脱以提供标题化合物(33毫克，51％)。m/z(ES)430，432(M，M+2)+。
步骤B：(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧 基}(3-氯苯基)甲基]吡咯烷-羧酸叔丁酯(i-5)
向33毫克(0.07毫摩尔)4-({(5R)-5-[(R)-([叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氯苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯胺在1毫升无水THF中的溶液(来自步骤A)中加入碳酸叔丁酯(15.3毫克，0.07毫摩尔)，接着TEA(13微升，0.07毫摩尔)，并将所得溶液在室温下在氮气氛下搅拌整夜。将反应混合物直接置于制备板(500uM)上并用己烷中30％乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(25毫克，78％)。m/z(ES)530，532(M，M+2)+，430，432(M-Boc，M-Boc+2)+。
中间体6
4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰氯(i-6)
Figure BSA00000571400400531
可以根据公开的程序，例如Ikemoto等人，Tetrahedron 2003，59，1317-1325制备中间体6。
中间体7
2-甲基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸(i-7)
Figure BSA00000571400400532
步骤A：2-甲基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400533
经～20分钟向在0℃下冷却的2-氧代环戊烷-2-羧酸乙酯(56克，359毫摩尔)在氯仿(500毫升)中的溶液中加入溴(18.5毫升，359毫摩尔)。在完全添加后，使混合物升温至室温并搅拌整夜。将氮气鼓过混合物90分钟以除去大部分HBr。用水(500毫升)、饱和NaHCO3(250毫升)、饱和NaCl(200毫升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物溶解在EtOH(500毫升)中，加入硫代乙酰胺(26.9克，359毫摩尔)，将混合物在室温下搅拌1小时，随后回流整夜。将该混合物冷却和蒸发，并使残留物在DCM和饱和NaHCO3之间分相，有机层用饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC(BiotageHorizon：2x FLASH 65i)提纯，洗脱剂：100％己烷(450毫升)，梯度从100％己烷升至己烷中25％ EtOAc(1400毫升)，随后己烷中25％EtOAc，以产生深色油状的标题化合物(32克，42％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：4.22(q，J＝7.0Hz，2H)，3.96(m，1H)，3.04(m，1H)，2.88(m，1H)，2.76(m，2H)，2.70(s，3H)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H)。
步骤B：2-甲基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸(i-7)
向31.5克(149毫摩尔)2-甲基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯在THF(450毫升)和甲醇(100毫升)中的溶液(来自步骤A)中加入氢氧化锂溶液(149毫升1M溶液，149毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌3小时。蒸发除去有机物，水性残留物用Et2O(2x250毫升)萃取和通过添加1M HCl(～170毫升)来酸化至pH 3并用固体NaCl饱和。用DCM(3x250毫升)萃取，合并的DCM层经MgSO4干燥，过滤和蒸发。用DCM(3x250毫升)萃取，合并的DCM层经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物用乙腈研制，过滤和干燥以产生灰白色固体状的标题化合物(7.1克，26％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：11.75(br s，1H)，4.02(m，1H)，3.00(m，1H)，2.90-2.66(m，6H)。
中间体8
2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸(i-8)
Figure BSA00000571400400541
步骤A：2-氨基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400542
以与中间体(i-7)相同的方式制备，将步骤A中的硫代乙酰胺换成硫脲。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：5.30(br s，2H)，4.21(q，J＝7.0，2H)，3.81(m，1H)，2.91(m，1H)，2.78(m，1H)，2.66(m，2H)，1.30(t，J＝7.0，3H)。
步骤B：2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧 酸乙酯
Figure BSA00000571400400551
向230毫克(1.08毫摩尔)2-氨基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯在二氯甲烷(5毫升)中的溶液(来自步骤A)中加入二碳酸二叔丁酯(236毫克，1.08毫摩尔)、三乙胺(0.15毫升，1.08毫摩尔)和DMAP(13毫克，0.11毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌2小时。混合物用1N HCl(10毫升)、饱和NaCl(5毫升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC(Biotage Horizon：FLASH 25+S)提纯，洗脱剂：100％己烷(100毫升)，梯度为己烷中0-15％ EtOAc(900毫升)，随后己烷中15％ EtOAc(500毫升)以产生白色泡沫状的标题化合物(160毫克，47％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：9.23(br s，1H)，4.17(q，J＝7.1Hz，2H)，3.95(t，J＝6.6Hz，1H)，3.04(m，1H)，2.86(m，1H)，2.76(m，2H)，1.55(s，9H)，1.23(t，J＝7.1Hz，3H)。
步骤C：2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸 (i-8)
使用与中间体(i-7)步骤B中类似的程序由2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯(来自步骤B)制备。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：3.96(m，1H)，3.06(m，1H)，2.88(m，2H)，2.71(m，1H)，1.55(s，9H)。
中间体9
2-(4-氟苯基)-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸(i-9)
使用与中间体7(i-7)中类似的程序制备，在步骤A中将硫代乙酰胺换成4-氟硫代苯甲酰胺。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ：7.90(m，2H)，7.29(t，J＝8.7，2H)，3.81(m，1H)，2.99(m，1H)，2.86(m，1H)，2.70-2.58(m，2H)。
中间体10
2-甲基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸(i-10)
Figure BSA00000571400400561
步骤A：2-甲基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400562
经15分钟向在0℃下冷却的2-氧代环己烷羧酸乙酯(15克，88毫摩尔)在无水二乙醚(40毫升)中的溶液中逐滴加入溴(4.5毫升，88毫摩尔)。在完全添加后，使混合物经90分钟升温至室温。混合物用EtOAc(100毫升)稀释并用饱和NaHCO3、饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。将残留物置于乙醇(100毫升)中并加入硫代乙酰胺(6.6克，88毫摩尔)。混合物在室温下搅拌1小时，随后回流整夜。混合物蒸发，且残留物在饱和NaHCO3和DCM之间分相。有机层经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC(Biotage Horizon：FLASH65i)提纯，洗脱剂：100％己烷(500毫升)，梯度为己烷中0至25％ EtOAc(1200毫升)，随后己烷中25％ EtOAc(1200毫升)以产生浅橙色油状的标题化合物(6.14克，31％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：4.22(q，J＝7.1，2H)，3.84(t，J＝5.5，1H)，2.80(m，1H)，2.73(m，1H)，2.65(s，3H)，2.18(m，1H)，2.11-1.95(m，2H)，1.85(m，1H)，1.29(t，J＝7.1，3H)。
步骤B：2-甲基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸(i-10)
根据中间体(i-7)步骤B中阐述的程序由2-甲基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸乙酯(来自步骤A)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：9.26(br s，1H)，3.81(q，J＝7.3和5.9，1H)，2.75(m，2H)，2.68(s，3H)，2.24(m，1H)，2.18-2.01(m，2H)，1.82(m，1H)。
中间体11
2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸(i-11)
Figure BSA00000571400400571
步骤A：2-氨基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400572
根据中间体10(i-10)步骤A中阐述的程序制备，将硫代乙酰胺换成硫脲。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ：9.28(br s，2H)，4.11(q，J＝7.3，2H)，3.71(t，J＝5.0，1H)，2.57-2.39(m，2H)，1.90(m，2H)，1.78(m，1H)，1.59(m，1H)，1.17(t，J＝7.3，3H)。
步骤B：2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸 (i-11)
根据中间体8(i-8)步骤B和C中阐述的程序由2-氨基-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-4-羧酸乙酯(来自步骤A)制备。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：3.70(t，J＝5.2，1H)，2.74(m，1H)，2.64(m，1H)，2.25(m，1H)，2.10-1.94(m，2H)，1.87(m，1H)，1.55(s，9H)。
中间体12
茚满-1-羧酸(i-12)
Figure BSA00000571400400581
根据文献程序Journal of Organic Chemistry(2000)，65(4)，1132-1138制备。
中间体13a和中间体13b
(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 (i-13a)；
(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 (i-13b)
Figure BSA00000571400400582
步骤A：(4R，5R)-2，2-二甲基-4-[(1E)-3-氧代丙-1-烯-1-基]-5-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400583
唑烷-3-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400400584
向(4S，5R)-4-甲酰基-2，2-二甲基-5-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400585
唑烷-3-羧酸叔丁酯(20.9，89.1毫摩尔)在CH2Cl2(150毫升)中的溶液中加入(三苯基膦烯)乙醛(27.1克，89.1毫摩尔)并将所得混合物在环境温度下搅拌40小时。在除去1/3溶剂后，加入大量己烷并滤出所得固体。在Biotage
Figure BSA00000571400400586
系统上的快速色谱法(硅胶，己烷中0至20％乙酸乙酯梯度，随后己烷中20％乙酸乙酯)产生16.3克(72％)黄色油状的标题化合物。LC/MS 354.3(M+23)。
步骤B：(4R，5R)-2，2-二甲基-4-(3-氧代丙基)-5-苯基-1，3- 唑烷-3-羧酸 叔丁酯
Figure BSA00000571400400591
向(4R，5R)-2，2-二甲基-4-[(1E)-3-氧代丙-1-烯-1-基]-5-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400592
唑烷-3-羧酸叔丁酯(19.6克，59.1毫摩尔)(来自步骤A)在丙酮(150毫升)中的溶液中加入1.9克10％ Pd/C并将所得悬浮液在氢气囊下在环境温度下搅拌24小时。在硅藻土上滤除固体，将滤液真空浓缩。残留物通过在Biotage系统上的快速色谱法提纯(硅胶，己烷中0至20％乙酸乙酯梯度，随后己烷中20％乙酸乙酯)以提供11.5克(58％)无色油状的标题化合物。LC/MS 356.3(M+23)。
步骤C：(4R，5R)-2，2-二甲基-4-[(3E)-4-(4-硝基苯基)丁-3-烯-1-基]-5-苯 基-1，3-
Figure BSA00000571400400594
唑烷-3-羧酸叔丁酯和(4R，5R)-2，2-二甲基-4-[(3Z)-4-(4-硝基苯 基)丁-3-烯-1-基]-5-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400595
唑烷-3-羧酸叔丁酯
向来自步骤B的(4R，5R)-2，2-二甲基-4-(3-氧代丙基)-5-苯基-1，3-
Figure BSA00000571400400597
唑烷-3-羧酸叔丁酯(10.0克，30.0毫摩尔)在CH2Cl2(200毫升)中的溶液中加入(4-硝基苄基)三苯基-溴化
Figure BSA00000571400400598
(21.5克，45.0毫摩尔)，接着Et3N(8.36毫升，60.0毫摩尔)。该红色反应混合物在环境温度下搅拌48小时。将己烷(200毫升)倒入反应混合物中并滤除固体。在Biotage
Figure BSA00000571400400599
系统上的快速色谱法(硅胶，己烷中0至10％乙酸乙酯梯度，随后己烷中10％乙酸乙酯)提供10.7克(79％)浅黄色泡沫状的标题化合物(顺式反式混合物)。LC/MS 475.4(M+23)。
步骤D：(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯和(2R，5R)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
Figure BSA00000571400400601
向来自步骤C的上述顺式/反式混合物(7.86克，17.4毫摩尔)在乙酸乙酯(100毫升)中的溶液中加入50毫升2N HCl溶液并将所得混合物在环境温度下搅拌2小时，随后加热至45℃达3小时。在减压下除去挥发物。将所得白色固体溶解在N，N-二甲基甲酰胺(100毫升)中并加入15.1毫升(86.7毫摩尔)iPr2Net。将反应混合物在环境温度下搅拌7小时。随后加入二碳酸二叔丁酯(4.55克，20.8毫摩尔)并将反应混合物在环境温度下搅拌整夜。加入水(200毫升)，其用乙酸乙酯(200毫升x3)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤和减压浓缩。残留物通过在Biotage
Figure BSA00000571400400602
系统上的快速色谱法提纯(硅胶，己烷中0至30％乙酸乙酯梯度)以提供1.61克(22％)标题化合物(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(顺式)和3.9克(54％)(2R，5R)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(反式)。LC/MS 435.4(M+23)。
步骤E：(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(i-13a)
向来自步骤D的上述(顺式)(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.51克，3.66毫摩尔)在乙醇(20毫升)中的溶液中加入0.15克10％ Pd/C并将所得悬浮液在氢气囊下在环境温度下搅拌5小时。经硅藻土过滤和除去溶剂以产生1.40克(100％)白色泡沫状的标题化合物，其不经进一步提纯即使用。LC/MS 405.3(M+23)。
步骤F：(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(i-13b)
向来自步骤D的(反式)(2R，5R)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-硝基苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.90克，9.46毫摩尔)在乙醇(40毫升)中的溶液中加入0.4克10％Pd/C并将所得悬浮液在氢气囊下在环境温度下搅拌6小时。经硅藻土滤除固体。除去溶剂后，在Biotage系统上的快速色谱法(硅胶，己烷中0至30％乙酸乙酯梯度，随后己烷中30％乙酸乙酯)提供2.30克(64％)白色泡沫状的标题化合物。LC/MS405.3(M+23)。
中间体14
(2S)-1-(1，3-苯并噻唑-2-基)吡咯烷-2-羧酸(i-14)：
Figure BSA00000571400400612
在环境温度下向28毫克(0.24毫摩尔)L-脯氨酸在N，N-二甲基甲酰胺(3毫升)中的溶液中加入51毫克(0.24毫摩尔)2-溴苯并噻唑、100毫克(0.72毫摩尔)碳酸钾和6毫克(0.03毫摩尔)碘化铜。该反应混合物在100℃下搅拌整夜。随后将其过滤并通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-60％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/0.1％在水中的三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜以产生35毫克60％浅棕色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.78(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.08(t，J＝7.8Hz，1H)，4.48(d，J＝7.3Hz，1H)，3.52-3.61(m，2H)，2.37(m，1H)，2.01-2.11(m，3H).LC/MS 249.3(M+1)
中间体15-22
使用上述程序和本领域已知的程序由适当的原材料制备下列N-取代的L-脯氨酸中间体。
表3：
Figure BSA00000571400400613
Figure BSA00000571400400621
中间体23
(6-氧代哒嗪-1(6H)-基)乙酸(i-23)
向3-氯-6-氧代哒嗪-1(6H)-基)乙酸(1克，5.30毫摩尔，ChemBridge)在40毫升甲醇中的溶液中加入100毫克10％载钯碳并将所得悬浮液置于氢气氛下并在室温下剧烈搅拌4小时。经由Gilmen 0.45μM PFTE针筒式过滤器滤除催化剂，将滤液真空浓缩。该残留物不经进一步提纯即使用。1H NMR(D2O)：δ9.07(dd，J＝1.6，3.9Hz，1H)，7.59(dd，J＝4.1，9.4Hz，1H)，7.14(dd，J＝1.6，9.3Hz，1H)，4.97(s，2H).LC/MS 155.09(M+1)
中间体24
2-溴-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸(i-24)的制备
Figure BSA00000571400400631
步骤A：2-溴-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400632
向亚硝酸叔丁酯(4.2毫升，35.3毫摩尔)和溴化铜(II)(6.3克，28.3毫摩尔)在乙腈(100毫升)中的溶液中逐份加入2-氨基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯(5克，23.6毫摩尔)。一旦添加完成，该混合物在室温下搅拌3小时。将混合物倒入2M HCl(600毫升)中并用EtOAc(3x200毫升)萃取，合并的EtOAc层用1M HCl(500毫升)、水(250毫升)、饱和NaHCO3(200毫升)、饱和NaCl(150毫升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC提纯(BiotageHorizon：FLASH 40M)洗脱剂：100％己烷(100毫升)，梯度从100％己烷升至己烷中25％EtOAc(750毫升)，随后己烷中25％EtOAc(700毫升)以产生1.87克(29％)浅橙色油。1H NMR(500MHz CDCl3)δ：4.22(q，J＝7.1，2H)，4.00(m，1H)，3.04-3.11(m，1H)，2.88-2.94(m，1H)，2.77(q，J＝7.3，2H)，1.31(t，J＝7.1，3H)。
步骤B：2-溴-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸
Figure BSA00000571400400641
将来自步骤A的产物的溶液(4.92克，17.82毫摩尔)溶解在甲醇(20毫升)中并逐滴添加到5N NaOH(4.25毫升，21.25毫摩尔)、水(16毫升)和甲醇(30毫升)的混合物中。在添加完成后，将该混合物搅拌2小时。蒸发除去甲醇并用浓HCl将残留水相的pH值调节至～2.5。该混合物用固体NaCl饱和并用EtOAc萃取(x3)；合并的EtOAc层用饱和NaCl洗涤，经Na2SO4干燥并用活性炭处理整夜。将过滤过的混合物蒸发。该残留物用EtOAc研制并过滤固体以产生1.94克所需产物。蒸发母液并使用从100％己烷升至己烷中100％ EtOAc的梯度通过MPLC提纯以产生灰白色固体状的另外0.82克标题产物(总共2.76克，62％)。1H NMR(500MHz CDCl3)δ：4.04(m，1H)，3.02-3.08(m，1H)，2.88-2.94(m，1H)，2.78-2.83(m，2H)。
中间体25
2-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-4-氟丁酸(i-25)的制备
Figure BSA00000571400400642
步骤A：(2E)-2-[(叔丁氧基羰基)亚胺基(inimo)]-4-(2-乙氧基-2-氧代乙 基)-1，3-噻唑-3(2H)-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400400643
向2-氨基噻唑-4-乙酸乙酯(8克，43毫摩尔)在DCM(75毫升)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(20.63克，95毫摩尔)、Hunig’s碱(16.51毫升，95毫摩尔)和DMAP(1.57克，12.89毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌整夜。该混合物用水、饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。该残留物通过MPLC使用从100％己烷升至己烷中50％EtOAc的梯度提纯以产生白色固体状的标题化合物12.5克(75％)。1HNMR(500MHz CDCl3)δ：7.02(s，1H)，4.17(q，J＝7.3，2H)，3.73(s，2H)，1.51(s，18H)，1.25(t，J＝7.3，3H)。
步骤B：2-(2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基)-4-氟丁酸乙酯
向在-78℃下冷却的来自步骤A的产物(7.5克，19.4毫摩尔)在无水THF(100毫升)中的溶液中加入丁基锂(8.54毫升2.5M溶液(soln)，21.35毫摩尔)，接着1-碘-2-氟乙烷(6.75克，38.8毫摩尔)并将该混合物在-78℃下搅拌1小时，随后升温至室温。加入10％ w/w柠檬酸溶液(21毫升)并将所得混合物在室温下搅拌整夜。蒸发该混合物以除去THF并用水(100毫升)稀释和用EtOAc萃取(x3)。合并的EtOAc层用水、饱和NaCl洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC提纯，洗脱剂：从100％己烷升至己烷中25％ EtOAc的梯度。在C18柱上使用从100％水升至在水+0.05％ TFA中95％乙腈的梯度通过PREP-HPLC进一步提纯产生标题化合物500毫克(7％)。1H NMR(500MHz CDCl3)6.75(s，1H)，4.32-4.57(m，2H)，4.12-4.25(m，2H)，3.95(t，J＝7.5，1H)，2.40-2.52(m，1H)，2.18-2.31(m，1H)，1.56(s，9H)，1.25(t，J＝7.1，3H)。
步骤C：2-{2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1，3-噻唑-4-基}-4-氟丁酸
Figure BSA00000571400400653
向来自步骤B的产物(100毫克，0.3毫摩尔)在THF(1毫升)和甲醇(0.3毫升)的混合物的溶液中加入氢氧化锂溶液(0.3毫升1M溶液(soln)，0.3毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌90分钟。加入1N HCl(0.3毫升，0.3毫摩尔)并将该混合物蒸发至干。所得粗产物不经提纯立即使用。
中间体26
2-氟-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]-噻唑-4-羧酸(i-26)的制备
Figure BSA00000571400400661
步骤A：2-氟-5，6-二氢-4H-环戊[d]噻唑-4-羧酸乙酯
将2-氨基-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸乙酯[来自步骤A，中间体8](2克，9.4毫摩尔)溶解在氟硼酸(5.17克，28.3毫摩尔)中并将该混合物冷却至正好高于其冷冻点(～5℃)。逐份添加四氟硼酸亚硝
Figure BSA00000571400400663
(1.1克，9.4毫摩尔)并将该混合物在0℃下搅拌20分钟。加入二乙醚(60毫升)并将该混合物在-50℃下搅拌30分钟。过滤，用二乙醚洗涤固体并风干。将该固体置于甲苯(70毫升)中并升温到90℃达30分钟。将该混合物冷却和蒸发，粗制残留物通过MPLC提纯(洗脱剂：从100％己烷升至己烷中40％ EtOAc的梯度)以产生黄色油状的标题化合物390毫克(19％)。1H NMR(500MHz CDCl3)
Figure BSA00000571400400664
3.93(dd，J＝7.0和5.0，1H)，3.08(m，1H)，2.91(m，1H)，2.71(m，2H)，1.31(t，J＝7.1，3H)。
步骤B：2-氟-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]-噻唑-4-羧酸
Figure BSA00000571400400671
向来自步骤A的产物(100毫克，0.456毫摩尔)在THF(1.5毫升)和甲醇(0.5毫升)的混合物中的溶液中加入氢氧化锂溶液(0.558毫升1M溶液(soln)，0.588毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌90分钟。加入1N HCl(0.558毫升，0.558毫摩尔)并将该混合物蒸发至干。所得粗产物不经提纯立即使用。
中间体27
6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-d]四唑-5-羧酸(i-27)的制备
Figure BSA00000571400400672
步骤A：5-甲氧基-3，4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸甲酯
Figure BSA00000571400400673
使用参考资料：Wick，A.，Bartlett，P.和Dolphin，D；Helvetica ChimicaVol.54 Fasc.2(1971)中所述的方法制备5-甲氧基-3，4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸甲酯。
步骤B：6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-d]四唑-5-羧酸甲酯
Figure BSA00000571400400674
向原料5-甲氧基-3，4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸甲酯(900毫克，6.04毫摩尔)在4毫升乙酸中的溶液中加入叠氮化钠(975毫克，12.08毫摩尔)，将所得悬浮液加热至60℃并剧烈搅拌48小时。将该溶液冷却至室温并用35毫升乙醚稀释。将固体碳酸钾添加到该溶液中，将其在室温下搅拌20分钟。经烧结漏斗滤出固体，用冷乙醚洗涤并在真空下浓缩。固体在浓缩过程中沉淀并在浓缩至1/5体积后滤出。固体用冷醚(3毫升)洗涤一次，并在高真空下干燥整夜以提供标题化合物(308毫克，31％)。LC-MS：m/z(ES)＝169(MH)+。
步骤C：6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-d]四唑-5-羧酸
Figure BSA00000571400400681
向6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-d]四唑-5-羧酸甲酯(300毫克，1.78毫摩尔)在THF/水/MeOH中的溶液中加入LiOH(214毫克，8.92毫摩尔)并经油浴将所得溶液加热至60℃达16小时。(圆底配有冷凝器)将该溶液冷却至室温并浓缩除去有机溶剂。随后用2N HCl将水层酸化至pH～5。该混合物在真空下浓缩至干，与甲苯(2x20毫升)共沸以确保除去所有水。该材料不经进一步提纯即使用，氯化锂为副产物。LC-MS：m/z(ES)＝155(MH)+。
中间体28
3-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，2，4]三唑-7-羧酸(i-28)的制备
Figure BSA00000571400400682
步骤A：3-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，2，4]-三唑-7-羧酸乙酯
Figure BSA00000571400400683
参考：Lawson，Edward C等人，Tet.Lett.41(2000)第4533-4536页在50毫升圆底烧瓶中将市售2-氧代吡咯烷-3-羧酸乙基酯(2.50克，15.91毫摩尔)溶解在30毫升二氯甲烷中。向该溶液中加入固体状的四氟硼酸三甲基
Figure BSA00000571400400691
(2.59克，17.5毫摩尔)并用20毫升二氯甲烷漂洗。所得混合物在室温下搅拌2小时，LC/MS表明已形成中间体5-甲氧基-3，4-二氢-2H-吡咯-4-羧酸甲酯。此时，将乙酰肼(1.18克，15.91毫摩尔)以固体形式引入该混合物中并将所得溶液在室温下搅拌3小时。该溶液随后在真空下浓缩以除去所有二氯甲烷，随后将该残留物置于100毫升正丁醇中，将其在设定在120℃下的油浴中加热至回流整夜。将该溶液冷却至室温并在真空下浓缩。残留物经16个1500μm硅胶制备板提纯，用90∶10二氯甲烷∶甲醇溶剂体系洗脱。使用85∶15二氯甲烷∶甲醇从该硅胶中萃取产物，这提供标题化合物(454毫克，11％)。1H NMR(500MHz DMSO-d6)δ：4.16-4.06(m，1H)，4.00-3.88(m，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.29(s，3H)，1.55(dt，J＝6.7，13.9Hz，2H)，1.32(dt，J＝6.7，14.0Hz，2H)，0.88(t，J＝7.5Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)＝196(MH)+。
步骤B：3-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，2，4]三唑-7-羧酸
Figure BSA00000571400400692
向乙基6，7-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，2，4]-三唑-7-羧酸(400毫克，2.05毫摩尔)在THF/水/MeOH中的溶液中加入LiOH(250毫克，10.25毫摩尔)并经油浴将所得溶液加热至60℃达16小时。(圆底配有冷凝器)将该溶液冷却至室温并浓缩除去有机溶剂。随后用2N HCl将水层酸化至pH～5。该混合物在真空下浓缩至干，与甲苯(2x20毫升)共沸以确保除去所有水。该材料不经进一步提纯即使用，氯化锂为副产物。LC-MS：m/z(ES)＝168(MH)+。
中间体29
3-甲基-5，6，7，8-四氢-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-8-羧酸(i-29)的制备
Figure BSA00000571400400701
使用与上述中间体28(i-28)中类似的程序制备，将2-氧代吡咯烷-3-羧酸乙酯换成2-氧代哌啶-3-羧酸乙酯。LC-MS：m/z(ES)＝182(MH)+。
中间体30
3-甲基-6，7-二氢-5H-吡咯并[2，1-c][1，2，4]三唑-5-羧酸(i-30)的制备
Figure BSA00000571400400702
使用与上述中间体28(i-28)中类似的程序制备，将2-氧代吡咯烷-3-羧酸乙酯换成5-氧代吡咯烷-2-羧酸甲酯。LC-MS：m/z(ES)＝168(MH)+。
中间体31
[6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸(i-31)的制备
Figure BSA00000571400400703
向在甲醇(40毫升)中的3-氯-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸(1.00克，5.30毫摩尔)中加入100毫克10％ Pd/C。在环境温度下在H2气囊下搅拌反应混合物1小时后，经硅藻土滤除Pd。将该滤液真空浓缩并通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中0.1％的三氟乙酸/在水中0.1％的三氟乙酸梯度)。真空除去挥发物以提供白色晶体状的标题化合物。1H NMR(D2O)：δ8.06(dd，J＝3.9，1.4Hz，1H)，7.56(dd，J＝9.4，3.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝9.4，1.5Hz，1H)，4.95(s，2H)。LC/MS 155.2(M+1)。
中间体32
[2-氧代嘧啶-1(2H)-基]乙酸(i-32)的制备
向2-羟基嘧啶盐酸盐(1.00克，7.54毫摩尔)和氯乙酸(0.713克，7.54毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(4.5毫升)。该反应混合物在105℃下加热2小时。在冷却至环境温度并用2M盐酸(3.8毫升)中和后，通过结晶和过滤收集浅黄色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ13.2(s，1H)，8.59(dd，J＝3.9，3.0Hz，1H)，8.16(dd，J＝6.4，2.8Hz，1H)，6.46(dd，J＝6.4，4.1Hz，1H)，4.58(s，2H).LC/MS 155.2(M+1)。
中间体33
2-[2-氧代嘧啶-1(2H)-基]丙酸(i-33)的制备
Figure BSA00000571400400712
向2-羟基嘧啶盐酸盐(1.27克，9.54毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(5.7毫升)，接着(2S)-2-溴丙酸(0.95毫升，11毫摩尔)。该反应混合物在80℃下加热4小时。冷却至环境温度后，其用2N盐酸(4.8毫升)中和，随后通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-50％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。真空除去挥发物以提供白色固体状的标题化合物。LC/MS 169.1(M+1)。
中间体34
[6-氧代嘧啶-1(6H)-基]乙酸(i-34)的制备
Figure BSA00000571400400713
向嘧啶-4(3H)-酮(0.608克，6.33毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(2.5毫升)，接着氯乙酸(0.598克，6.33毫摩尔)。该反应混合物在105℃下加热2小时。冷却至环境温度后，其用2N盐酸(3.2毫升)中和，随后通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。真空除去挥发物以提供白色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ13.2(s，1H)，8.43(s，1H)，7.94(d，J＝6.7Hz，1H)，6.43(d，J＝6.6Hz，1H)，4.63(s，2H).LC/MS 155.1(M+1)。
中间体35
2-[6-氧代嘧啶-1(6H)-基]丙酸(i-35)的制备
Figure BSA00000571400400721
向嘧啶-4(3H)-酮(0.908克，9.45毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(3.8毫升)，接着(2R)-2-溴丙酸(0.95毫升，11毫摩尔)。该反应混合物在85℃下加热1小时。冷却至环境温度后，其用2M盐酸(5.2毫升)中和，随后通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。真空除去挥发物以提供白色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.48(d，J＝2.7Hz，1H)，7.88(dd，J＝7.8，2.8Hz，1H)，6.12(d，J＝7.6Hz，1H)，5.04(q，J＝7.3Hz，1H)，1.64(d，J＝7.5Hz，3H).LC/MS 169.1(M+1)。
中间体36
[5-氧代-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]乙酸(i-36)的制备
Figure BSA00000571400400722
向1，6-二氮杂萘-5(6H)-酮(0.625克，4.28毫摩尔)中加入5M氢氧化钠溶液(1.7毫升)，接着氯乙酸(0.404克，4.28毫摩尔)。该反应混合物在100℃下加热2小时。在冷却至环境温度和用2N盐酸(2.1毫升)中和后，过滤收集黄色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ13.1(s，1H)，8.94(dd，J＝4.6，1.8Hz，1H)，8.51(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.72(d，J＝7.6Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.0，4.6Hz，1H)，6.72(d，J＝7.6Hz，1H)，4.72(s，2H).LC/MS 205.2(M+1)。
中间体37
[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸(i-37)的制备
Figure BSA00000571400400731
步骤A：[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯
Figure BSA00000571400400732
5-羟基-4-甲基呋喃-2(5H)-酮(1.19克，10.4毫摩尔)和肼基乙酸乙酯盐酸盐(1.61克，10.4毫摩尔)在95％乙醇(20毫升)中回流2小时。真空除去溶剂接着使用Biotage
Figure BSA00000571400400733
系统(0-50％乙酸乙酯/己烷混合物)提纯产生黄色晶体状的[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯。LC/MS 219.2(M+23)。
步骤B：[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸
Figure BSA00000571400400734
向在四氢呋喃(3毫升)、甲醇(2毫升)和水(2毫升)中的[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯(0.575克，2.93毫摩尔)中加入1N氢氧化锂溶液(2.9毫升)。该反应混合物在环境温度下搅拌1.5小时。用三氟乙酸中和后，反应混合物通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-PacC18；0-45％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜以产生标题化合物。LC/MS 169.2(M+1)。
中间体38
2-[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸(i-38)的制备
Figure BSA00000571400400741
在-78℃下向在四氢呋喃(4毫升)中的[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]乙酸乙酯(0.132克，0.673毫摩尔)中加入1M六甲基二硅氮烷锂溶液(0.74毫升)。该反应混合物在-78℃下搅拌15分钟，随后加入甲基碘(0.046毫升，0.74毫摩尔)。在-78℃下搅拌2小时后，使反应混合物经0.5小时升温至环境温度。真空除去挥发物，接着使用Biotage系统提纯(0-50％乙酸乙酯/己烷混合物)产生油状的2-[4-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸乙酯。向在四氢呋喃(0.3毫升)、水(0.2毫升)和甲醇(0.2毫升)中的88毫克(0.42毫摩尔)上述油中加入5N氢氧化钠溶液(0.2毫升)。该反应混合物在环境温度下搅拌3小时，随后用2N盐酸中和并通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。真空除去挥发物以提供白色固体状的标题化合物。LC/MS 183.2(M+1)。
中间体39和40
2-[6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸和2-(哒嗪-3-氧基)丙酸(i-39和i-40)的制 备
Figure BSA00000571400400743
向3(2H)-哒嗪酮(1.19克，12.3毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(4.9毫升)，接着(2S)-2-溴丙酸(1.11毫升，12.3毫摩尔)。该反应混合物在90℃下加热1小时。冷却至环境温度后，加入2M盐酸(6.2毫升)，反应混合物通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。该O-烷基化产物2-(哒嗪-3-氧基)丙酸最后洗脱。收集纯馏分并真空除去溶剂以提供均为浅黄色固体状的两种标题化合物。2-[6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸(i-39)：1H NMR(D2O)：δ8.07(dd，J＝4.1，1.6Hz，1H)，7.53(dd，J＝9.3，3.9Hz，1H)，7.09(dd，J＝9.4，1.6Hz，1H)，5.46(m，1H)，1.64(d，J＝7.3Hz，3H)。2-(哒嗪-3-氧基)丙酸(i-40)：1H NMR(D2O)：δ9.01(d，J＝5.3Hz，1H)，8.14(dd，J＝9.1，5.2Hz，1H)，7.64(d，J＝9.1Hz，1H)，5.45(q，J＝7.2Hz，1H)，1.86(d，J＝7.1Hz，3H)。
中间体41
[2-氧代吡嗪-1(2H)-基]乙酸(i-41)的制备
Figure BSA00000571400400751
向吡嗪-2(1H)-酮(0.333克，3.47毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(2.1毫升)，接着氯乙酸(0.524克，5.54毫摩尔)。该反应混合物在100℃下加热2小时。冷却至环境温度后，加入2N盐酸(3.5毫升)，反应混合物通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜以产生黄色固体状的标题化合物。LC/MS 155.2(M+1)。
中间体42和43
2-[3-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸和2-[(6-甲基哒嗪-3-基)氧基]丙酸 (i-42和i-43)的制备
Figure BSA00000571400400752
向6-甲基哒嗪-3(2H)-酮(0.510克，4.63毫摩尔)中加入5N氢氧化钠溶液(1.85毫升)，接着2-溴丙酸(0.709克，4.63毫摩尔)。该反应混合物在90℃下加热1小时。冷却至环境温度后，加入2M盐酸(5.0毫升)，反应混合物通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；8-20％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。该O-烷基化产物最后洗脱。收集纯馏分并冻干整夜以提供两种标题化合物。LC/MS183.2(M+1)。2-[3-甲基-6-氧代哒嗪-1(6H)-基]丙酸(i-42)：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.34(d，J＝9.7Hz，1H)，6.88(d，J＝9.4Hz，1H)，5.30(q，J＝7.3Hz，1H)，2.26(s，3H)，1.49(d，J＝7.3Hz，3H)。2-[(6-甲基哒嗪-3-基)氧基]丙酸(i-43)：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.36(d，J＝9.0Hz，1H)，7.90(d，J＝9.2Hz，1H)，6.00(q，J＝6.6Hz，1H)，2.90(s，3H)，1.73(d，J＝6.6Hz，3H)。
中间体44
[(6S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-]嘧啶-6-羧酸(i-44)的制备
Figure BSA00000571400400761
步骤A：[6(S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-]嘧啶-6-羧酸甲酯
Figure BSA00000571400400762
将(2S)-5-甲氧基-3，4-二氢-2H-吡咯-2-羧酸甲酯(4.19克，26.6毫摩尔)和3-氮杂三环[4.2.1.0.2，5]壬-7-烯-4-酮(2.4克，17.8毫摩尔)在110℃下加热整夜。使用Biotage
Figure BSA00000571400400763
系统(0-100％乙酸乙酯/己烷混合物)提纯产生标题化合物[6(S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-羧酸甲酯和中间体(7S)-9-氧代-3，8-二氮杂四环[9.2.1.02，10.04，8]十四烷-3，12-二烯-7-羧酸甲酯。不经进一步提纯，这些中间体在150℃下加热45分钟以提供标题化合物。LC/MS 195.2(M+1)。
步骤B：[(6S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-]嘧啶-6-羧酸
Figure BSA00000571400400771
将[6(S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-羧酸甲酯(9.95克，51.2毫摩尔)在四氢呋喃(60毫升)、甲醇(40毫升)和氢氧化锂(3.32克，77毫摩尔)的水(40毫升)溶液中在环境温度下搅拌1小时。添加2N盐酸(38.5毫升)以中和反应混合物，其随后通过反相HPLC直接提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。该O-烷基化产物最后洗脱。收集纯馏分并冻干整夜以提供浅黄色固体状的标题化合物。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.89(d，J＝6.6Hz，1H)，6.24(d，J＝6.6Hz，1H)，4.92(dd，J＝10.0，3.1Hz，1H)，3.12-2.99(m，2H)，2.52(m，1H)，2.11(m，1H).LC/MS 181.2(M+1)。
中间体45
5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-6-羧酸(i-45)
Figure BSA00000571400400772
步骤A：7-(三甲基甲硅烷基)-5-氧代庚-6-炔酸
Figure BSA00000571400400773
根据Nayyar，N.K.；Hutchison，D.R.；Martinelli，M.J.J.Org.Chem.1997，62，982中发现的程序制备这种中间体。
步骤B：(5Z)-5-[(叔丁氧基羰基)亚联氨基]-7-(三甲基甲硅烷基)庚-6-炔 酸
Figure BSA00000571400400781
在氮气氛下向54.0克(254毫摩尔)来自上述步骤A的7-(三甲基甲硅烷基)-5-氧代庚-6-炔酸在750毫升IPA中的搅拌溶液中加入33.6克(254毫摩尔)肼基甲酸叔丁酯。将该反应混合物在环境温度下搅拌4小时，随后真空蒸发以除去所有挥发物。这提供黄色胶状标题化合物，其不经进一步提纯即使用(77克，93％)。LC-MS：m/z(ES)327(MH)+。
步骤C：4-[1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-3-基]丁酸
Figure BSA00000571400400782
经30分钟向77.0克，236毫摩尔来自上述步骤B的(5Z)-5-[(叔丁氧基羰基)亚联氨基]-7-(三甲基甲硅烷基)庚-6-炔酸在500毫升THF中的搅拌溶液中加入350毫升(350毫摩尔)四丁基氟化铵在THF中的1.0M溶液。所得混合物在环境温度下搅拌48小时，随后在真空中蒸发至干。该残留物用1升5％乙酸水溶液稀释，并用乙酸乙酯(3x350毫升)萃取水相。合并的有机层用水(2x100毫升)和盐水(150毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用在己烷混合物中的3％乙酸和35％乙酸乙酯洗脱以提供黄色油状的标题化合物(60克，定量收率)。LC-MS：m/z(ES)255(MH)+。
步骤D：3-[4-(苄氧基)-4-氧代丁基]-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯
 向60.0克(236毫摩尔)来自上述步骤C的4-[1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-3-基]丁酸在400毫升DMF中的搅拌溶液中加入48.9克(354毫摩尔)碳酸钾，接着逐滴添加40.0毫升(300毫摩尔)苄基溴。将所得混合物搅拌24小时，用水猝灭并用乙酸乙酯(3x300毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中30％乙酸乙酯洗脱以提供黄色油状的标题化合物(55.6克，68.4％)。LC-MS：m/z(ES)345(MH)+。
步骤E：3-[4-(苄氧基)-3-溴-4-氧代丁基]-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯
在-78℃下在氮气氛下向27.5克(80.0毫摩尔)来自上述步骤D的3-[4-(苄氧基)-4-氧代丁基]-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯在250毫升无水THF中的搅拌溶液中加入88毫升(88毫摩尔)、双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠在无水THF中的1.0M溶液。将所得深黄色溶液在-78℃下搅拌1小时，随后经5分钟逐滴加入12毫升(96毫摩尔)氯三甲基硅烷。将所得混合物搅拌25分钟，在此过程中该反应物变成浅黄色。接着，一次性加入16克(88毫摩尔)固体N-溴代琥珀酰亚胺，并将所得混合物在-78℃下搅拌3小时，接着经1小时逐渐升温至0℃。用饱和氯化铵水溶液猝灭该反应并用乙酸乙酯(3x200毫升)萃取水相。合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干以提供黄色胶状的标题化合物。该粗产物通过NMR表明是原材料和所需产物的1∶1混合物且不经进一步提纯即用于下一步骤。LC-MS：m/z(ES)424(MH)+。
步骤F：5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-6-羧酸苄酯
Figure BSA00000571400400792
向16.9克(40.0毫摩尔)来自上述步骤E的3-[4-(苄氧基)-3-溴-4-氧代丁基]-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯在50毫升二氯甲烷中的搅拌溶液中加入50毫升TFA。将所得混合物在环境温度下搅拌2小时，随后真空蒸发所有挥发物。残留物随后用50毫升甲苯稀释，再真空蒸发以除去所有残留TFA。随后将该粗制材料溶解在125毫升无水丙酮中并经15分钟缓慢加入14.0克(100毫摩尔)固体碳酸钾，接着1.2克(8.0毫摩尔)碘化钠。随后将所得混合物在回流下加热16小时，冷却至室温并在真空中蒸发至干。残留物用100毫升饱和氯化铵水溶液稀释，随后用乙酸乙酯(3x100毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中10-80％乙酸乙酯梯度洗脱以提供透明胶状的标题化合物6.2克(64％收率)。LC-MS：m/z(ES)243(MH)+。
步骤G：5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-6-羧酸
Figure BSA00000571400400801
在氮气氛下在100毫升圆底烧瓶中装入0.600毫克(0.560毫摩尔)10重量％活性炭载钯并用10毫升乙醇润湿。接着，加入6.0克(0.025摩尔)来自上述步骤F的5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-6-羧酸苄酯在40毫升乙醇中的溶液，并将该混合物置于1个氢大气压下，将该反应搅拌3小时，随后经
Figure BSA00000571400400802
垫过滤。用20毫升乙醇洗涤该垫并将滤液真空蒸发以提供无色固体状的标题化合物(3.7克，定量收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ11.90(br s，1H)，7.44(s，1H)，5.98(s，1H)，4.87(dd，J＝8.9，3.7Hz，1H)，2.94-2.82(m，3H)，2.58-2.52(m，1H).LC-MS：m/z(ES)153(MH)+。
中间体46
(3S)-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酸(i-46)
Figure BSA00000571400400803
步骤A：(3S，9S)-5-氧代-1，2，3，5，6，8a-六氢中氮茚-3-羧酸甲基酯
Figure BSA00000571400400811
根据Hanessian，S.；Sailes，H.；Munro，A.；Therrien，E.J.Org.Chem.2003，68，7219和Vaswani，R.G.；Chamberlin，R.J.Org.Chem.2008，73，1661中发现的程序制备该中间体。
步骤B：(3S)-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酸甲酯
向0.850克(4.06毫摩尔)来自上述步骤A的(3S，9S)-5-氧代-1，2，3，5，6，8a-六氢中氮茚-3-羧酸甲酯在50毫升二氯甲烷中的搅拌溶液中加入6.30克(72.5毫摩尔)氧化锰(IV)，并将所得混合物在回流下搅拌12小时。将该反应冷却至环境温度，经
Figure BSA00000571400400813
垫过滤，随后用100毫升二氯甲烷洗涤该固体。将该滤液在真空中蒸发至干，残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中10-50％乙酸乙酯梯度洗脱以提供透明胶状的标题化合物(0.47克，55％收率)。LC-MS：m/z(ES)194(MH)+。
步骤C：(3S)-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酸
Figure BSA00000571400400814
向0.200毫克(1.00毫摩尔)来自上述步骤B的(3S)-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酸甲酯在3毫升THF中的搅拌溶液中加入1.5毫升(1.5毫摩尔)1.0M LiOH水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌2小时，随后用2.0毫升(2.0毫摩尔)1.0M氯化氢水溶液猝灭。真空蒸发所有挥发物并用30％ IPA在氯仿中的混合物(3x5毫升)萃取水相。该合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发以提供白色固体状的标题化合物(0.17克，92％)。1H NMR(500MHz，CD3OD)：δ7.53(dd，J＝8.9，7.1Hz，1H)，6.38-6.35(m，2H)，5.11(dd，J＝9.7，2.7Hz，1H)，3.23-3.12(m，2H)，2.62-2.53(m，1H)，2.35-2.30(m，1H).LC-MS：m/z(ES)180(MH)+。
中间体47
2-(2-(苄基氨基)-2-氧代乙基)-5，6-二氢-4H-环戊[d]噻唑-4-羧酸(i-47)
Figure BSA00000571400400821
根据用于i-7的程序制备标题化合物，只是使用3-氨基-N-苄基-3-thioxopanamide代替硫代乙酰胺。LC-MS：m/z(E/S)317(MH)+。
中间体48
4-氯-5-嘧啶基乙酸(i-48)
Figure BSA00000571400400822
步骤A：(4-氯-5-嘧啶基)乙酸乙酯
Figure BSA00000571400400823
根据Zymalkowski和Reimann等人Archiv.Der.Pharmazie 1966，299，362的程序合成该材料。
步骤B：4-氯-5-嘧啶基乙酸
向0.6克(3毫摩尔)来自上述步骤A的(4-氯-5-嘧啶基)乙酸乙酯在0.5毫升水和1.5毫升乙醇中的溶液中加入215毫克(5.11毫摩尔)水合氢氧化锂。该反应混合物在环境温度下搅拌2小时，随后真空浓缩以除去所有挥发物。该残留物用7毫升2.0M氯化氢水溶液稀释，随后真空浓缩以除去所有挥发物以产生标题化合物(0.43克，83％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.88(s，1H)，8.70(s，1H)，3.96(s，2H)。LC-MS：m/z(E/S)173(MH)+。
中间体49
4-甲氧基-5-嘧啶基乙酸(i-49)
Figure BSA00000571400400831
步骤A：(4-甲氧基-5-嘧啶基)乙酸甲酯
Figure BSA00000571400400832
向0.250克(1.25毫摩尔)(4-氯-5-嘧啶基)乙酸乙酯(见i-48，步骤A)在10毫升无水甲醇中的溶液中溶解0.060克(2.50毫摩尔)钠金属。所得溶液在微波条件下在120℃下加热10分钟。真空除去所有挥发物，残留物用饱和碳酸氢钠稀释并用二氯甲烷(3x10毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干以提供透明胶状的标题化合物(0.21克，93％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.72(s，1H)，8.35(s，1H)，3.96(s，2H)，4.01(s，3H)，3.70(s，3H)，3.57(s，2H).LC-MS：m/z(E/S)183(MH)+。
步骤B：4-甲氧基-5-嘧啶基乙酸
Figure BSA00000571400400833
向0.21克(1.14毫摩尔)来自上述步骤A的(4-甲氧基-5-嘧啶基)乙酸甲酯在0.5毫升水和1.5毫升乙醇中的搅拌溶液中加入81毫克(1.9毫摩尔)水合氢氧化锂。该反应混合物在环境温度下搅拌2小时，随后真空浓缩以除去所有挥发物。该残留物用3毫升2.0M氯化氢水溶液稀释，随后真空浓缩以除去所有挥发物以产生灰白色固体状的标题化合物(191毫克，90％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.72(s，1H)，8.35(s，1H)，4.01(s，3H)，3.57(s，2H).LC-MS：m/z(E/S)169(MH)+。
中间体50
2-(4-甲氧基嘧啶-5-基)丙酸(i-50)
Figure BSA00000571400400841
步骤A：2-(4-氯嘧啶-5-基)丙酸乙酯
Figure BSA00000571400400842
在氮气氛下向5.8克(29毫摩尔)(4-氯-5-嘧啶基)乙酸乙酯(参见i-48，步骤A)在75毫升无水THF中的搅拌的冷却(-78℃)溶液中加入15.2毫升(30.4毫摩尔)二异丙基氨基化锂在无水THF中的2.0M溶液。将所得混合物搅拌15分钟，随后经5分钟加入2.26毫升(36.1毫摩尔)碘甲烷。将该反应混合物搅拌15分钟，经45分钟升温至-20℃，随后升温至0℃达15分钟。该反应混合物随后用饱和氯化铵溶液猝灭并用50毫升二氯甲烷萃取。有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷混合物中的20％乙酸乙酯洗脱以提供标题化合物(1.9克，31％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.88(s 1H)，8.74(s，1H)，4.17(m，2H)，1.58(d，J＝7Hz，3H)，1.29(t，J＝7Hz，3H).LC-MS：m/z(E/S)215(MH)+。
步骤B：2-(4-甲氧基嘧啶-5-基)丙酸甲酯
Figure BSA00000571400400851
向0.250克(1.17毫摩尔)来自上述步骤A的2-(4-氯嘧啶-5-基)丙酸乙酯在5毫升无水甲醇中的溶液中溶解0.054克(2.34毫摩尔)钠金属。所得溶液在微波条件下在120℃下加热10分钟。真空除去所有挥发物，残留物用饱和碳酸氢钠稀释并用二氯甲烷(3x10毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干以提供透明胶状的标题化合物(0.21克，93％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.65(s 1H)，8.36(s，1H)，4.0(s，3H)，3.9(q，J＝7Hz，2H)，3.66(s，3H)，1.58(d，J＝7Hz，3H).LC-MS：m/z(E/S)197(MH)+。
步骤C：2-(4-甲氧基嘧啶-5-基)丙酸
向0.21克(1.06毫摩尔)来自上述步骤B的2-(4-甲氧基嘧啶-5-基)丙酸甲酯在0.5毫升水和1.5毫升乙醇中的搅拌溶液中加入81毫克(1.9毫摩尔)水合氢氧化锂。该反应混合物在环境温度下搅拌2小时，随后真空浓缩以除去所有挥发物。该残留物用3毫升2.0N氯化氢水溶液稀释，随后真空浓缩以除去所有挥发物以产生灰白色固体状的标题化合物(70毫克，36％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：8.67(s 1H)，8.4(s，1H)，4.07(s，3H)，3.9(q，J＝7Hz，2H)，1.58(d，J＝7Hz，3H).LC-MS：m/z(E/S)183(MH)+。
中间体51
2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(i-51)
Figure BSA00000571400400853
步骤A：2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸叔丁酯
向9.5克(0.10摩尔)2-羟基吡啶在250毫升DMF中的搅拌溶液中加入16.6克(0.120摩尔)碳酸钾，接着25.0克(0.120摩尔)2-溴丙酸叔丁酯。所得混合物在环境温度下搅拌7小时，随后用1升水稀释。用乙酸乙酯(3x200毫升)萃取水相，合并的有机物用水(2x100毫升)、盐水(100毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中25％乙酸乙酯洗脱以提供透明胶状的标题化合物16克(72％)。LC-MS：m/z(ES)224(MH)+
步骤B：2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸
在氮气氛下向16.6克(74.4毫摩尔)来自上述步骤A的2-(2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸叔丁酯在10毫升无水1，4-二氧杂环己烷中的搅拌的悬浮液中加入150毫升在1，4-二氧杂环己烷中的4.0M氯化氢溶液。所得溶液在环境温度下搅拌整夜，随后在真空中蒸发至干以提供白色固体状的标题化合物(12.4克，定量收率)。LC-MS：m/z(ES)168(MH)+
中间体52
2-(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400863
唑烷-3-基)丙酸(i-52)
Figure BSA00000571400400864
步骤A：(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400865
唑烷-3-基)乙酸苄酯
Figure BSA00000571400400871
向1.0克(6.9毫摩尔)(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400872
唑烷-3-基)乙酸在10毫升无水DMF中的搅拌溶液中加入1.0克(7.6毫摩尔)碳酸钾，接着1.0毫升(8.3毫摩尔)苄基溴。将该反应混合物搅拌3小时，随后用水猝灭。用乙酸乙酯(3x25毫升)萃取水相，合并的有机物用水(2x10毫升)、盐水(10毫升)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中50％乙酸乙酯洗脱以提供白色固体状的标题化合物0.50克(31％)。LC-MS：m/z(ES)236(MH)+。
步骤B：2-(2-氧代-1，3- 唑烷-3-基)丙酸苄酯
Figure BSA00000571400400874
在-78℃下在氮气氛下向0.50克(2.1毫摩尔)来自上述步骤A的(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400875
唑烷-3-基)乙酸苄酯在15毫升无水THF中的搅拌溶液中加入1.2毫升(2.4毫摩尔)二异丙基氨基化锂在无水THF中的2.0M溶液。将所得黄色溶液在-78℃下搅拌15分钟，随后加入0.0360克(2.55毫摩尔)碘甲烷。在逐渐升温至环境温度的情况下将所得混合物搅拌2小时，随后用饱和氯化铵水溶液猝灭。用乙酸乙酯(3x20毫升)萃取水相，合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中40％乙酸乙酯洗脱以提供透明胶状的标题化合物0.37克(70％)。LC-MS：m/z(ES)250(MH)+。
步骤C：2-(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400876
唑烷-3-基)丙酸
Figure BSA00000571400400877
在氮气氛下在25毫升圆底烧瓶中装入0.030克(0.028毫摩尔)10重量％活性炭载钯并用2毫升乙醇润湿。接着，加入0.37克(1.5毫摩尔)来自上述步骤B的2-(2-氧代-1，3-
Figure BSA00000571400400878
唑烷-3-基)丙酸苄酯在10毫升乙醇中的溶液并将该混合物置于1个氢气压下。将该反应搅拌3小时，随后经
Figure BSA00000571400400881
垫过滤。用20毫升乙醇洗涤该垫并将滤液真空蒸发以提供无色固体状的标题化合物(0.24克，定量收率)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：4.60-4.30(m，3H)，3.80-3.60(m，2H)，1.45(d，J＝3.5，3H).LC-MS：m/z(ES)160(MH)+。
中间体53
2-(2H-1，2，3-三唑-2-基)丙酸(i-53)
使用与用于制备i-51的类似的程序由2H-1，2，3-三唑-2-基乙酸制备中间体53。LC-MS：m/z(ES)142.2(MH)+。
142.2
中间体54
6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸，三氟乙酸盐(i-54)
向16毫升(25毫摩尔)1.6M正丁基锂在己烷中的冷却(0℃)溶液中加入3.9毫升(25毫摩尔)N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，接着3.0毫升(25毫摩尔)2，3-环戊烯吡啶在5毫升无水四氢呋喃中的溶液。经15分钟使所得混合物升温至环境温度，随后将无水二氧化碳气体鼓过该反应混合物1小时。接着过滤固体沉淀物且粗制固体通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-40％在乙腈中的0.01％三氟乙酸/在水中的0.01％三氟乙酸梯度)以产生黄色固体状的标题化合物(2.0克，50％)。LC-MS：m/z(ES)164.1(MH)+。
中间体55
2-氧代-2，5，6，7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-7-羧酸(i-55)
步骤A：6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯
在0℃下在氮气氛下向1.0克(6.1毫摩尔)中间体54在10毫升甲醇和10毫升二乙醚的混合物中的溶液中加入9.0毫升(18毫摩尔)(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷在二乙醚中的2.0M溶液。在搅拌5分钟后，用2毫升冰醋酸猝灭该反应。真空蒸发所有挥发物且残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中50％乙酸乙酯洗脱以提供黄色胶状的标题化合物(1.0克，92％)。LC-MS：m/z(ES)177.1(MH)+。
步骤B：6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯1-氧化物
向1.53克(8.47毫摩尔)来自上述步骤A的6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯在30毫升二氯甲烷中的冷却(0℃)溶液中加入1.61克(9.31毫摩尔)m-CPBA。使该溶液搅拌1小时，随后用50毫升饱和碳酸氢钠水溶液猝灭。分离层并用二氯甲烷(3x50毫升)萃取水相。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发以产生浅棕色固体状的标题化合物，其不经提纯即使用。LC-MS：m/z(E/S)194.2(MH)+。
步骤C：2-氯-6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯
经10分钟向0.21毫升(2.28毫摩尔)氧氯化磷在0.2毫升无水DMF中的冷却(0℃)溶液中逐滴加入1.1克(5.69毫摩尔)来自上述步骤B的6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯1-氧化物在15毫升氯仿中的溶液。使所得溶液升温至环境温度，随后回流4小时。将该混合物冷却和倒入30毫升冷水中。该水溶液用二乙醚(3x30毫升)萃取，接着用30毫升二氯甲烷单萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。所得棕色残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中50％乙酸乙酯洗脱以提供浅棕色固体状的标题化合物(0.30克，25％)。LC-MS：m/z(E/S)212.0(MH)+。
步骤D：2-氧代-2，5，6，7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-7-羧酸
Figure BSA00000571400400902
向3∶1∶1比率的四氢呋喃、甲醇和1.0N LiOH水溶液的15毫升混合物中加入0.242克(1.14毫摩尔)来自上述步骤C的2-氯-6，7-二氢-5H-环戊[b]吡啶-7-羧酸甲酯。将所得混合物在环境温度下搅拌1小时。真空蒸发该溶液，所得浅棕色残留物通过反相HPLC提纯(YMC Pack Pro C18，100x20mm I.D.柱，0-60％在乙腈中的0.01％三氟乙酸/在水中的0.01％三氟乙酸梯度)以产生棕色油状的标题化合物(184毫克，90％)。LC-MS：m/z(E/S)180.0(MH)+。
中间体56
2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸(i-56)
步骤A：2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸叔丁酯
Figure BSA00000571400400911
向3-甲基-1H-1，2，4-三唑(7.3克，88毫摩尔)在DMF(75毫升)中的溶液中加入K2CO3(60.7克，439毫摩尔)和2-溴丙酸叔丁基酯(14.6毫升，88毫摩尔)。将该反应在室温下搅拌整夜。该混合物用EtOAc(500毫升)稀释，用水(x3)，随后盐水洗涤。经MgSO4干燥和浓缩。残留物通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用EtOAc/异己烷(20至100％)洗脱以产生13克作为位置异构体(regioisomers)的3∶1混合物的粗产物。该混合物通过Chiralcel OD以从4％到30％IPA/庚烷的梯度提纯。随后用Chiracel OD柱分离前两个峰，用4％ IPA/庚烷等度洗脱。收集第二峰作为所需的单立体异构体(R或S)(2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸叔丁酯(3.5克，19％)。1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，4.90(q，J＝7Hz，1H)，2.35(s，3H)，1.72(d，J＝7Hz，3H)，1.40(s，9H)。C10H17N3O2的ESI-MS计算值：精确质量：211.13；实测值156.05(-tBu)。
步骤B：2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸
Figure BSA00000571400400912
将来自步骤A的2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸叔丁酯(1.0克，4.7毫摩尔)溶解在二氧杂环己烷中的4M HCl(100毫升)中并在室温下搅拌整夜。将产物减压浓缩并在高真空下干燥以产生HCl盐形式的(R或S)2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸叔丁酯(850毫克)。C6H9N3O2的ESI-MS计算值：精确质量：155.07；实测值156.05。
中间体57
2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙酸(i-57)
Figure BSA00000571400400921
步骤A：丙炔酸苄酯向17.0克(233毫摩尔)丙炔酸在600毫升无水DMF中的溶液中加入39.9克(233毫摩尔)苄基溴，接着逐份加入76.0克(233毫摩尔)Cs2CO3。在室温下搅拌24小时后，用饱和氯化铵水溶液猝灭该反应并用EtOAc(3x200毫升)萃取。该合并的萃取物用水，随后盐水洗涤并经无水硫酸钠干燥。该混合物随后经硅胶垫过滤，用己烷洗涤，并减压蒸发滤液以提供粗产物。该粗产物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中0-20％乙酸乙酯梯度洗脱以提供无色油状的标题化合物(13.8克，35％)。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.41(m，5H)，5.25(s，2H)，2.92(s，1H)。
步骤B：2-(三丁基甲锡烷基)丙烯酸苄酯
向6.42克(40.1毫摩尔)来自上述步骤A的丙炔酸苄酯在25毫升无水THF中的溶液中加入0.93克(0.80毫摩尔)四(三苯基膦)钯(0)，接着经15分钟加入12.6克(42.1毫摩尔)三丁基氢化锡在25毫升无水THF中的溶液。在室温下搅拌整夜后，减压除去溶剂。该残留物经
Figure BSA00000571400400922
垫过滤，其随后用己烷洗涤。将该滤液真空浓缩且粗产物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中0-15％乙酸乙酯梯度洗脱以提供无色油状的标题化合物(13克，73％)。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.39(m，5H)，6.99(d，J＝2.7Hz，1H)，5.98(d，J＝2.7Hz，1H)，5.20(s，2H)，1.47(m，6H)，1.30(m，6H)，0.96(m，6H)，0.89(t，J＝7.4Hz，9H)。
步骤C：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烯酸苄酯
向0.30克(1.4毫摩尔)3-碘-1-甲基-1H-吡唑在3毫升无水THF中的溶液中加入0.82克(1.8毫摩尔)来自上述步骤B的2-(三丁基甲锡烷基)丙烯酸苄酯在1毫升无水THF中的溶液、0.18克(0.15毫摩尔)四(三苯基膦)钯(0)和0.14克(1.4毫摩尔)氯化铜(I)。将反应混合物加热至55℃达12小时，冷却和在减压下蒸发至干。将该残留物溶解在10毫升己烷和EtOAc的1∶1混合物中，随后经
Figure BSA00000571400400923
垫过滤。用15毫升己烷和EtOAc的1∶1混合物洗涤该垫并将合并的滤液蒸发至干。该粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中0-80％ EtOAc梯度洗脱以提供无色油状的标题化合物(0.23克，66％)。LC-MS：m/z(ES)265(M+Na)+。
步骤D：2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙酸
向0.10毫克(0.093毫摩尔)10％载钯碳中加入(0.23克，0.93毫摩尔)上述步骤C中制成的2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烯酸苄酯在6毫升甲醇中的溶液。将所得悬浮液在氢气氛(1个大气压)下搅拌整夜。该残留物经
Figure BSA00000571400400931
垫过滤并用冷甲醇洗涤该垫。将该合并的滤液减压蒸发以产生灰白色胶状的标题化合物(0.11克，76％)。LC-MS：m/z(ES)155(MH)+。
中间体58
2-(1，3-噻唑-2-基)丙酸(i-58)
Figure BSA00000571400400932
步骤A：2-(1，3-噻唑-2-基)丙酸乙酯
根据Dondoni，A.；Dall′Occo，T.；Giancarlo，F.；Fogagnolo，M.；Medici，A.Tetrahedron Letters，1984，25，3633-3636中阐述的程序制备2-(1，3-噻唑-2-基)丙酸乙酯。
步骤B：2-(1，3-噻唑-2-基)丙酸
向0.26克(1.5毫摩尔)来自上述步骤A的2-(1，3-噻唑-2-基)丙酸乙酯在15毫升甲醇中的溶液中加入3.0毫升(15毫摩尔)5.0M氢氧化钠水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌整夜。在真空中蒸发该反应混合物以除去甲醇，用2N盐酸溶液酸化水相直至实现pH 4。该水溶液通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-25％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜以提供白色固体状的标题化合物(0.17克，71％)。LC-MS：m/z(ES)158(MH)+。
中间体59
2-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)丙酸(i-59)
Figure BSA00000571400400941
步骤A：2-甲基-3，5-二氧代己酸乙酯
根据Solladie，G.；Gehrold，N.；Maignan，J.Eur.J.Org.Chem.，1999，2309-2314中阐述的程序制备2-甲基-3，5-二氧代己酸乙酯。
步骤B：2-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)丙酸乙酯
向18.6克(100毫摩尔)来自上述步骤A的2-甲基-3，5-二氧代己酸乙酯在200毫升THF和50毫升水中的溶液中加入3.45毫升(110毫摩尔)无水肼。将该双相反应混合物在环境温度下搅拌整夜，随后在真空中蒸发至干。将该粗制黄色残留物溶解在乙酸乙酯和水混合物中，并涌过50克硅胶柱，该滤液随后在真空中蒸发至干且残留物通过硅胶色谱法提纯，用己烷中0-100％乙酸乙酯梯度洗脱以提供黄色油状的标题化合物(1.89克，10％)。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.26(s，1H)，5.98(s，1H)，4.20-4.12(m，2H)，3.81(q，J＝7.3Hz，1H)，2.28(s，3H)，1.51(d，J＝7.3Hz，3H)，1.25(t，J＝7.1Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)183(MH)+。
步骤C：2-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)丙酸
向1.24克(6.8毫摩尔)来自上述步骤B的2-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)丙酸乙酯在20毫升甲醇和5毫升水中的溶液中加入1.5毫升(7.5毫摩尔)5.0M氢氧化钠水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌2.5小时，随后真空蒸发以除去甲醇。用乙酸乙酯(2x75毫升)萃取水相，随后用2N盐酸溶液酸化直至实现pH 4。用乙酸乙酯(5x50毫升)萃取该水溶液，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发以产生黄色胶状的标题化合物(0.80克，76％)。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ10.23(br s，1H)，7.26(s，1H)，5.97(s，1H)，3.87(q，J＝7.3Hz，1H)，2.26(s，3H)，1.59(d，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)155(MH)+。
中间体60
2-(1H-吡唑-5-基)丙酸(i-60)
Figure BSA00000571400400951
使用与用于制备中间体59的类似的程序由市售甲酸乙酯和2-甲基-3-氧代丁酸乙酯制备中间体60。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.50(s，1H)，7.13(br s，1H)，6.22(s，1H)，3.95(q，J＝7.3Hz，1H)，1.63(d，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)141(MH)+。
中间体61
(2-氧代-1，3-oxazinan-3-基)乙酸(i-61)
Figure BSA00000571400400952
步骤A：1，3-Oxazinan-2-酮
向4.75克(29.3毫摩尔)1，1′-羰基二咪唑在260毫升无水二氯甲烷中的溶液中加入4.6毫升(27毫摩尔)DIEA，接着2.00克(27毫摩尔)3-氨基丙-1-醇。将所得混合物在环境温度下搅拌整夜，随后用饱和氯化铵水溶液猝灭。分离层并用二氯甲烷(2x30毫升)萃取有机相。合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用乙酸乙酯5-15％甲醇梯度洗脱以提供透明胶状的标题化合物(0.20克，7.6％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：6.12(brs，1H)，4.29(t，J＝5.4Hz，2H)，3.36(td，J＝6.2，2.3Hz，2H)，2.00-1.95(m，2H)。
步骤B：(2-氧代-1，3-oxazinan-3-基)乙酸甲酯
将0.20克(2.0毫摩尔)来自上述步骤A的1，3-oxazinan-2-酮在2毫升无水DMF中的溶液在氮气氛下添加到含有0.13克(3.2毫摩尔)在矿物油中的60％氢化钠悬浮液的10毫升圆底烧瓶中。在搅拌10分钟后，一次性加入0.37克(2.4毫摩尔)溴乙酸甲酯并使反应混合物搅拌整夜。该反应混合物随后用5毫升饱和氯化铵水溶液猝灭并随后用20毫升水稀释。用乙酸乙酯(3x10毫升)萃取所得悬浮液且合并的有机物用水(2x3毫升)、盐水(1x3毫升)洗涤并经硫酸镁干燥。将该混合物过滤，蒸发和通过硅胶色谱法提纯，用乙酸乙酯中的5％甲醇混合物洗脱以提供清澈油状的标题化合物(0.068克，20％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：4.28(t，J＝5.4Hz，2H)，4.03(s，2H)，3.70(s，3H)，3.36(t，J＝6.2Hz，2H)，2.08-2.04(m，2H).LC-MS：m/z(ES)174(MH)+。
步骤C：(2-氧代-1，3-oxazinan-3-基)乙酸
向0.068克(0.39毫摩尔)来自上述步骤B的(2-氧代-1，3-oxazinan-3-基)乙酸甲酯在6毫升THF和2毫升水和2毫升甲醇中的溶液中加入0.60毫升(1.2毫摩尔)2.0M氢氧化钠水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌3小时，随后真空蒸发以除去甲醇和THF。水相用2N盐酸溶液酸化直至实现pH 2，随后用氯仿中的30％异丙基醇混合物(3x10毫升)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发以产生灰白色固体状的标题化合物(0.06克，99％)。1H NMR(CD3OD，500MHz)δ：4.32(t，J＝5.4Hz，2H)，4.03(s，2H)，3.41(t，J＝6.2Hz，2H)，2.10-2.05(m，2H).LC-MS：m/z(ES)160(MH)+。
中间体62
(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸(i-62)
Figure BSA00000571400400961
步骤A：1-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮
向10.1克(62.4毫摩尔)1，1′-羰基二咪唑在113毫升无水二氯甲烷中的溶液中加入10.0毫升(56.7毫摩尔)DIEA，接着加入5.00克(56.7毫摩尔)N-甲基丙烷-1，3-二胺。将所得混合物在环境温度下搅拌整夜，随后用饱和氯化铵水溶液猝灭。分离层并用二氯甲烷(2x50毫升)萃取有机相。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用乙酸乙酯中5-15％甲醇梯度洗脱以提供透明胶状的标题化合物(0.700克，10.0％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：4.69(br s，1H)，3.30-3.27(m，2H)，3.24(t，J＝6.0Hz，2H)，2.92(s，3H)，1.96-1.92(m，2H)。
步骤B：(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸叔丁酯
将0.30克(2.6毫摩尔)来自上述步骤A的1-甲基四氢嘧啶-2(1H)-酮在5毫升无水DMF中的溶液在氮气氛下添加到含有0.16克(4.2毫摩尔)在矿物油中的60％氢化钠悬浮液的10毫升圆底烧瓶中。在搅拌10分钟后，一次性加入0.62克(3.2毫摩尔)溴乙酸叔丁酯并使反应混合物搅拌整夜。该反应混合物随后用5毫升饱和氯化铵水溶液猝灭并随后用20毫升水稀释。用乙酸乙酯(3x10毫升)萃取所得悬浮液，合并的有机物用水(2x3毫升)、盐水(1x3毫升)洗涤并经硫酸镁干燥。将该混合物过滤，蒸发和通过硅胶色谱法提纯，用乙酸乙酯中0-5％甲醇梯度洗脱以提供清澈油状的标题化合物(0.090克，15％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：3.88(s，2H)，3.23(t，J＝6Hz，2H)，3.20(t，J＝6Hz，2H)，2.84(s，3H)，1.94-1.89(m，2H)，1.37(s，9H).LC-MS：m/z(ES)229(MH)+。
步骤C：(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸
向0.090克(0.39毫摩尔)来自上述步骤B的(3-甲基-2-氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)乙酸叔丁酯在4毫升无水二氯甲烷中的溶液中加入1毫升TFA。将所得混合物在环境温度下搅拌6小时，随后在真空中蒸发至干以提供灰白色胶状的标题化合物(0.68克，99％)。LC-MS：m/z(ES)173(MH)+。
中间体63
(3-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)乙酸(i-63)
使用与用于制备中间体62的类似的程序由市售N-甲基乙烷-1，2-二胺制备(3-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)乙酸。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.21(br s，1H)，3.96(s，2H)，3.48-3.42(m，2H)，3.39-3.59(m，2H)，2.80(s，3H)，.LC-MS：m/z(ES)159(MH)+。
中间体64
2-(3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-8-基)丙酸(i-64)
Figure BSA00000571400400981
步骤A：N′-(3-溴吡啶-2-基)乙酰肼
向0.800克(3.38毫摩尔)2，3-二溴吡啶在10毫升无水1，4-二氧杂环己烷中的溶液中加入0.325克(10.1毫摩尔)无水肼，并将所得混合物加热至85℃达8小时。将反应混合物冷却至环境温度，随后在真空中蒸发至干。将该粗制残留物溶解在无水二氯甲烷中并在干冰丙酮浴中在氮气氛下冷却至-78℃。接着，加入1.0毫升(6.8毫摩尔)三乙胺，接着0.210克(2.72毫摩尔)乙酰氯。使所得混合物经20分钟升温至环境温度，随后真空除去所有挥发物。将该残留物悬浮在20毫升水中并用乙酸乙酯(3x10毫升)萃取。该合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发以提供标题化合物(0.18克，23％)。LC-MS：m/z(ES)230，232(MH)+和188，190(MH-C℃H3)+。
步骤B：8-溴-3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶
向0.17克(0.74毫摩尔)来自上述步骤A的N′-(3-溴吡啶-2-基)乙酰肼在40毫升无水甲苯中的溶液中加入3毫升冰醋酸，并使用迪安斯塔克分水器将所得混合物加热至回流20小时。将该反应混合物冷却至环境温度，随后在真空中蒸发至干以提供标题化合物(0.13克，84％)LC-MS：m/z(ES)212，214(MH)+。
步骤C：2-(3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-8-基)丙烯酸苄酯
向0.13克(0.61毫摩尔)来自上述步骤B的8-溴-3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶在4毫升无水THF中的溶液中加入0.36克(0.80毫摩尔)2-(三丁基甲锡烷基)丙烯酸苄酯(参见中间体62，步骤B)在1毫升无水THF中的溶液、0.11克(0.09毫摩尔)四(三苯基膦)钯(0)和0.067克(0.67毫摩尔)氯化铜(I)。将反应混合物加热至60℃达6小时，冷却和经
Figure BSA00000571400400991
垫过滤。用15毫升二氯甲烷洗涤该垫并将合并的滤液蒸发至干。该粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用乙酸乙酯中0-6％甲醇梯度洗脱以提供标题化合物(0.13克，73％)。LC-MS：m/z(ES)294(MH)+。
步骤D：2-(3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-8-基)丙酸
向0.040克(0.038毫摩尔)10％载钯碳中加入(0.080克，0.27毫摩尔)上述步骤C中制成的2-(3-甲基[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶-8-基)丙烯酸苄酯在4毫升甲醇中的溶液。将所得悬浮液在氢气氛(1个大气压)下搅拌6小时。该残留物经
Figure BSA00000571400400992
垫过滤并用冷甲醇洗涤该垫。将该合并的滤液减压蒸发以产生标题化合物(0.043克，77％)。LC-MS：m/z(ES)206(MH)+。
中间体65
4-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸(i-65)
Figure BSA00000571400400993
步骤A：4-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯
在氮气氛下向1.32克(10.0毫摩尔)4-甲氧基丁酸甲酯在15毫升无水THF中的搅拌的冷却(-78℃)溶液中加入10.5毫升(10.5毫摩尔)LiHMDS在四氢呋喃中的1.0M溶液。将所得混合物搅拌1小时，随后加入1.09克(10毫摩尔)氯三甲基硅烷。在搅拌20分钟后，加入1.78克(10.0毫摩尔)固体N-溴代琥珀酰亚胺并将该混合物在-78℃下搅拌2小时，随后经40分钟缓慢升温至环境温度。用饱和氯化铵水溶液猝灭该反应，随后用乙酸乙酯(2x20毫升)萃取水相。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤和在真空中蒸发至干。将该粗制残留物溶解在15毫升DMF中并加入5.5克(40毫摩尔)碳酸钾，接着3.4克(50毫摩尔)1H-吡唑。将所得混合物加热至80℃达40分钟，随后冷却至环境温度。该反应物用75毫升水稀释并用乙酸乙酯(3x50毫升)萃取。该合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和在真空中蒸发至干。该粗制残留物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-75％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)以产生标题化合物(0.26克，13％)。LC-MS：m/z(ES)199(MH)+。
步骤B：4-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸
向0.045克(0.23毫摩尔)来自上述步骤A的4-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸甲酯在2毫升甲醇中的搅拌溶液中加入0.032克(0.57毫摩尔)氢氧化钾在0.5毫升水中的溶液。将该混合物在环境温度下搅拌1.5小时，随后用2 N盐酸溶液酸化直至实现pH 4。将该混合物蒸发除去所有挥发物，随后用乙酸乙酯萃取。该合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发至干以提供标题化合物(0.040克，95％)。LC-MS：m/z(ES)185(MH)+。
中间体66
(5S)-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三唑-5-羧酸(i-66)
Figure BSA00000571400401001
步骤A：(5S)-1-氨基-5-[(三苯甲氧基)甲基]吡咯烷-2-酮
Figure BSA00000571400401002
在氮气氛下向0.550克(1.54毫摩尔)(S)-三苯甲基羟甲基吡咯烷酮在10毫升1，2-二甲氧基乙烷中的冷却(0℃)溶液中加入0.123克(3.08毫摩尔)在矿物油中的60％氢化钠悬浮液。在搅拌30分钟后，经30分钟分小份加入0.828克(3.85毫摩尔)2-[(氨氧基)磺酰基]-1，3，5-三甲基苯在5毫升二乙醚中的溶液。使该反应混合物升温至环境温度整夜，随后过滤。该滤液用二乙醚洗涤，相继用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤滤液。该有机层随后经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发以提供无色固体状的标题化合物。该固体被来自该氢化钠的矿物油污染并称重为0.6克(定量收率)。LC-MS：m/z(ES)395(M+Na)+。
步骤B：(5S)-5-[(三苯甲氧基)甲基]-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三 唑
Figure BSA00000571400401011
向0.540克(1.45毫摩尔)来自上述步骤A的(5S)-1-氨基-5-[(三苯甲氧基)甲基]吡咯烷-2-酮在5毫升无水DMF中的搅拌溶液中加入0.327克(7.25毫摩尔)甲酰胺，接着加入0.050克(0.36毫摩尔)氯化锌(II)。将所得混合物加热至160℃达48小时，冷却至环境温度并用25毫升乙酸乙酯稀释。该溶液相继用碳酸氢钠水溶液、水和随后盐水洗涤，有机层经硫酸镁干燥。随后过滤该混合物，在真空中蒸发至干并通过硅胶色谱法提纯，用己烷中0-100％乙酸乙酯梯度洗脱以提供标题化合物(0.27克，49％)。LC-MS：m/z(ES)382(MH)+。
步骤C：(5S)-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三唑-5-基甲醇
将来自上述步骤B的产物0.27克(0.71毫摩尔)(5S)-5-[(三苯甲氧基)甲基]-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三唑溶解在35毫升氯化氢在无水1，4-二氧杂环己烷中的4.0M溶液中。将该反应混合物搅拌10分钟，用20毫升甲醇猝灭，随后在真空中蒸发至干。该残留物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-90％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)以产生标题化合物(0.050克，50％)。LC-MS：m/z(ES)140(MH)+。
步骤D：((5S)-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三唑-5-羧酸
Figure BSA00000571400401021
向0.025克(0.18毫摩尔)来自上述步骤C的(5S)-6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-b][1，2，4]三唑-5-基甲醇在1毫升pH 6.7磷酸盐水性缓冲液和1毫升乙腈中的搅拌溶液中加入0.0020克(0.013毫摩尔)2，2，6，6-四甲基哌啶1-氧基、0.033克(0.36毫摩尔)亚氯酸钠(33毫克，0.36毫摩尔)和0.0044毫升(0.0036毫摩尔)次氯酸钠。将所得混合物在35℃下搅拌72小时，随后在真空中浓缩至干。将该残留物溶解在1毫升(4毫摩尔)氯化氢在无水1，4-二氧杂环己烷中的4.0M溶液中并真空浓缩。该粗制残留物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-70％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)以产生TFA盐形式的标题化合物。随后将该产物溶解在1毫升(4毫摩尔)氯化氢在无水1，4-二氧杂环己烷中的4.0M溶液中并真空浓缩以提供氯化氢盐形式的标题化合物。LC-MS：m/z(ES)154(MH)+。
中间体67
2-(1，3-噻唑-4-基)丙酸(i-67)
Figure BSA00000571400401022
步骤A：2-(1，3-噻唑-4-基)丙酸乙酯
经30分钟向43.3克(300毫摩尔)2-甲基乙酰乙酸乙酯在270毫升氯仿中的冷却(0℃)溶液中逐滴加入15.5毫升(300毫摩尔)溴在30毫升氯仿中的溶液。在完全添加后，使该混合物升温至室温并搅拌整夜。将空气鼓过反应混合物70分钟，随后将该溶液经硫酸钠干燥，过滤和蒸发以产生66.0克(99.0％)浅橙色油。向40.0克(180毫摩尔)这种中间体和10.7毫升(269毫摩尔)甲酰胺在400毫升无水1，4-二氧杂环己烷中的冷却(0℃)混合物中加入15.0克(67.2毫摩尔)五硫化磷。将该混合物升温至室温并搅拌1.5小时，随后加热至93℃达2.5小时。冷却至环境温度整夜后，真空除去所有挥发物，并通过添加饱和碳酸氢钠水溶液来将残留物碱化。用二氯甲烷(3x300毫升)萃取水相，合并的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤，随后经硫酸镁干燥。将该混合物过滤，蒸发，且残留物通过MPLC提纯(Biotage Horizon 2xFLASH 65i)洗脱剂：100％己烷(450毫升)，随后从100％己烷梯度升至己烷中25％ EtOAc(2400毫升)，随后在己烷中25％ EtOAc(1200毫升)，以产生橙色油状的标题化合物(20.0克，60.0％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ：1.24(t，J＝7.1，3H)，1.58(d，J＝7.3，3H)，4.05(q，J＝7.3，1H)，4.17(m，2H)，7.18(d，J＝1.3，1H)，8.76(d，J＝1.6，1H)。
步骤B：2-(1，3-噻唑-4-基)丙酸
将5.0克(27毫摩尔)来自上述步骤A的2-(1，3-噻唑-4-基)丙酸乙酯在25毫升甲醇中的溶液逐滴添加到6.6毫升(33毫摩尔)5N NaOH水溶液、水(16毫升)和甲醇(30毫升)的混合物中。在添加完成后，将该混合物搅拌2小时。蒸发除去甲醇并用浓氯化氢溶液将残留水相的pH值调节至～2.5。该混合物用固体氯化钠饱和，并用EtOAc(3x100毫升)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并用活性炭处理整夜。将该混合物过滤和蒸发以提供灰白色固体状的标题化合物4.0克(95％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ：1.63(d，J＝7.3，3H)，4.11(q，J＝7.3)，7.25(d，J＝1.8，1H)，8.88(d，J＝1.8，1H)，10.25(br s，1H)。
中间体68和69
(4R)-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸(i-68)和(4S)-5，6-二氢-4H-环 戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸(i-69)
Figure BSA00000571400401031
使用与用于制备中间体47的类似的程序由2-氧代环戊烷羧酸乙酯制备中间体68和69。使用AD-H柱10％ MeOH/90％ CO2、2.1毫升/分钟、100巴40℃通过SFC CO2 S分离这两种对映体。最先洗脱的对映体(4S)-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸被标作中间体68(i-68)，第二洗脱的对映体(4R)-5，6-二氢-4H-环戊[d][1，3]噻唑-4-羧酸被标作中间体69(i-69)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ：2.59-2.68(m，1H)，2.71-2.79(m，1H)，2.83-2.90(m，1H)，2.92-3.00(m，1H)，3.86(m，1H)，8.82(s，1H)，12.45(s，1H)。
中间体70
2-(1，3-噻唑-4-基)丁酸(i-70)
使用与用于制备中间体26的类似的程序由市售1，3-噻唑-4-基乙酸和乙基碘制备2-(1，3-噻唑-4-基)丁酸。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ：0.95(t，J＝7.3，3H)，1.25(t，J＝7.3，3H)，1.95-2.05(m，1H)，2.08-2.17(m，1H)，3.88(t，J＝7.6，1H)，4.15-4.23(m，2H)，7.22(d，J＝1.8，1H)，8.77(d，J＝1.8，1H)。
中间体71
4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基乙酸(i-71)
Figure BSA00000571400401042
步骤A：[4-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]乙酸乙酯
向2.0克(18毫摩尔)1-(三甲基甲硅烷基)-1-丙炔在甲苯(20毫升)中的溶液中加入2.3克(18毫摩尔)叠氮乙酸乙酯。将该反应混合物在120℃下加热整夜，随后冷却至环境温度。在减压下除去所有挥发物，残留物通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用己烷中5-25％丙酮梯度洗脱以产生无色油状的标题化合物(0.77克，18％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δ5.01(s，2H)，4.2(m，2H)，2.25(s，3H)，1.22(m，3H)，0.295(s，9H)。
步骤B：[4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-其]乙酸乙酯
向0.77克(3.2毫摩尔)来自上述步骤A的[4-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]乙酸乙酯在2毫升THF中的溶液中加入1.3毫升(32毫摩尔)50％氢氟酸水溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时，随后在真空中蒸发至干。接着，加入5毫升氨在甲醇中的2.0N溶液，随后将该混合物再在真空中蒸发至干。将该混合物溶解在二氯甲烷中，过滤，随后真空蒸发以提供透明胶状的标题化合物(0.51g.93％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：7.5(s，1H)，5.05(s，2H)，4.23(m，2H)，2.30(s，3H)，1.30(m，3H)。
步骤C：[4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基]乙酸
向0.51克(3.0毫摩尔)来自上述步骤B的[4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基]乙酸乙酯在四氢呋喃(10毫升)、甲醇(6毫升)中的溶液中加入6毫升(6毫摩尔)1.0M氢氧化锂水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌1小时。该反应混合物用8毫升2N盐酸溶液中和，其随后蒸发除去所有挥发物。用乙酸乙酯萃取水相，合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发至干以提供白色固体状的标题化合物(0.40克，95％)。LC/MS 142(M+1)。
中间体72：2-[4-(甲氧基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸(i-72)和中间体 73：2-[5-(甲氧基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸(i-73)
Figure BSA00000571400401051
步骤A：1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-羧酸甲酯 和1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-5-羧酸甲酯
向1.87克(22.3毫摩尔)丙-2-炔酸甲酯在40毫升甲苯中的溶液中加入1.9克(11毫摩尔)2-叠氮丙酸叔丁酯。将该反应混合物在100℃下加热3小时，随后冷却至环境温度。在减压下除去所有挥发物，粗制残留物通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用己烷中5至25％丙酮梯度洗脱以提供标题化合物。
1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-4-羧酸甲酯(较低Rf)(1.4克，50％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：8.30(s，1H)，5.46-5.41(m，1H)，4.11(s，3H)，1.83(d，3H)，1.47(s，9H).LC-MS：m/z(ES)256(MH)+。
1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-5-羧酸甲酯(较高Rf)(0.45克，16％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ：8.15(s，1H)，5.77-5.72(m，1H)，3.90(s，3H)，1.95(d，J＝7.3Hz，3H)，1.41(s，9H).LC-MS：m/z(ES)256(MH)+。
步骤B(i-72)：2-[4-(甲氧基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸
向0.55克(2.2毫摩尔)来自上述步骤A的1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-P4-羧酸甲酯在3毫升无水1，4-二氧杂环己烷中的搅拌溶液中加入2.7毫升(11毫摩尔)在1，4-二氧杂环己烷的4.0M氯化氢溶液。将所得混合物搅拌1小时，随后蒸发至干以提供灰白色固体状的标题化合物(0.40克，93％)。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：8.67(s，1H)，5.60(q，J＝7.3Hz，1H)，3.90(s，3H)，1.88(d，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)200(MH)+。
步骤B(i-73)：2-[5-(甲氧基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸
向0.40克(1.6毫摩尔)来自上述步骤A的1-(2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代乙基)-1H-1，2，3-三唑-5-羧酸甲酯在3毫升无水1，4-二氧杂环己烷中的搅拌溶液中加入2.7毫升(11毫摩尔)在1，4-二氧杂环己烷的4.0M氯化氢溶液。将所得混合物搅拌1小时，随后蒸发至干以提供灰白色固体状的标题化合物(0.27克，87％)。LC-MS：m/z(ES)200(MH)+。
中间体74
2-[4-(氨基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸(i-74)
Figure BSA00000571400401061
使用与用于制备中间体52的类似的程序由市售丙炔酰胺和2-叠氮丙酸叔丁酯制备2-[4-(氨基羰基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：8.48(s，1H)，5.50(q，J＝7.3Hz，1H)，1.85(d，J＝7.3Hz，3H).LC-MS：m/z(ES)185(MH)+。
中间体75和76
2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸(i-75)和2-(5-甲基-1H-1，2，3-三唑-1- 基)丙酸(i-76)
Figure BSA00000571400401071
步骤A：2-[4-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯和 2-[5-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯
向1.9克(17毫摩尔)三甲基(丙-1-炔-1-基)硅烷在20毫升甲苯中的溶液中加入2.3克(18毫摩尔)2-叠氮丙酸甲酯。将该反应混合物在120℃下加热3小时。冷却该混合物并在减压下蒸发溶剂。该残留物通过在硅胶上的柱色谱法提纯，用己烷中5-25％丙酮梯度洗脱以产生2-[4-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯与2-[5-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯的～6∶1混合物形式的标题化合物，并且是无色油(3.0克，80％)。LC-MS：m/z(ES)242(MH)+。
步骤B：2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸甲酯和2-(5-甲基-1H-1，2，3- 三唑-1-基)丙酸甲酯
向1.3克(5.4毫摩尔)来自上述步骤A的2-[4-甲基-5-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯和2-[5-甲基-4-(三甲基甲硅烷基)-1H-1，2，3-三唑-1-基]丙酸甲酯在2毫升THF中的溶液中加入2.2毫升(54毫摩尔)50％氢氟酸水溶液。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，随后在真空中蒸发至干。接着，加入8毫升氨在甲醇中的2.0N溶液，随后将该混合物再在真空中蒸发至干。将该混合物溶解在二氯甲烷中，过滤，随后真空蒸发以提供2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸甲酯与2-(5-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸甲酯的～8∶1混合物形式的标题化合物。该混合物是透明胶质(0.67克，73％)。LC-MS：m/z(ES)170(MH)+。
步骤C：2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸和2-(5-甲基-1H-1，2，3-三唑 -1-基)丙酸
向0.76克(4.5毫摩尔)来自上述步骤B的2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸甲酯和2-(5-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸甲酯在12毫升乙醇中的溶液中加入13.5毫升(13.5毫摩尔)1.0M氢氧化锂水溶液。将所得混合物在环境温度下搅拌1小时。用2N盐酸溶液酸化该反应混合物直至实现pH 4，随后蒸发除去所有挥发物。用乙酸乙酯萃取水相，该合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发至干以提供2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸和2-(5-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)丙酸的～8∶1混合物形式的标题化合物。该混合物是灰白色固体(0.50克，58％)。LC-MS：m/z(ES)156(MH)+。
中间体77
(2S，5R)-2-(4-{[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)羟基(苯基)甲基]吡 咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-77)
Figure BSA00000571400401081
步骤A：(2S，5R)-2-{4-[((2S)-2-{[(9H-芴-9-氧基)羰基]氨基}丙酰基)氨基] 苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
向1.85克(4.82毫摩尔)中间体i-13a在20毫升二氯甲烷中的溶液中加入1.0毫升(7.24毫摩尔)三乙胺，接着1.67克(5.07毫摩尔)市售[(1S)-2-氯-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸9H-芴-9-基酯。将所得混合物搅拌1.5小时，随后真空除去所有挥发物。将该残留物用水稀释随后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和蒸发以提供粗制标题化合物，其不经进一步提纯即使用(3.2克)。LC-MS：m/z(ES)676(MH)+。
步骤B：(2S，5R)-2-(4-{[(2S)-2-氨基丙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-羟基(苯 基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
向3.15克(4.65毫摩尔)来自上述步骤A的(2S，5R)-2-{4-[((2S)-2-{[(9H-芴-9-基氧基)羰基]氨基}丙酰基)氨基]苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯在3毫升无水THF中的搅拌溶液中加入0.396克(4.65毫摩尔)哌啶。将所得混合物在氮气氛下加热至35℃达2小时，随后真空除去所有挥发物以提供粗制标题化合物，其不经进一步提纯即使用。LC-MS：m/z(ES)454(MH)+。
中间体78
(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-{[(2S)-2-(甲基氨基)丙酰基]氨基}苄 基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-78)
Figure BSA00000571400401091
步骤A：(2S，5R)-2-[4-({(2S)-2-[[(9H-芴-9-基氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰 基}氨基)苄基]-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
在氮气氛下向0.192克(0.5毫摩尔)中间体17在4毫升二氯甲烷中的搅拌溶液中加入0.203克(0.625毫摩尔)市售(2S)-2-[[(9H-芴-9-基氧基)羰基](甲基)氨基]丙酸，接着0.014克(0.10毫摩尔)1-羟基-7-氮杂苯并三唑和0.144克(0.750毫摩尔)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。将所得悬浮液在环境温度下搅拌24小时。该粗制反应混合物用25毫升二氯甲烷稀释，用水洗涤，随后经硫酸镁干燥。将该混合物过滤和在真空中蒸发至干以提供粗制标题化合物，其不经进一步提纯即使用。LC-MS：m/z(ES)690(MH)+。
步骤B：(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-{[(2S)-2-(甲基氨基)丙酰 基]氨基}苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
向0.410克(0.593毫摩尔)来自上述步骤A的(2S，5R)-2-[4-({(2S)-2-[[(9H-芴-9-基氧基)羰基](甲基)氨基]丙酰基}氨基)苄基]-5-[(R)-羟基(吡啶-3-基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯在3毫升无水THF中的溶液中加入0.152克(1.78毫摩尔)哌啶。将所得混合物在环境温度下搅拌24小时，随后用25毫升二氯甲烷稀释。将该混合物用水洗涤，随后经硫酸镁干燥。将该混合物过滤和在真空中蒸发至干以提供粗制标题化合物，其不经进一步提纯即使用。LC-MS：m/z(ES)468(MH)+。
中间体79
(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-(4-{[(2R)-2-(甲基氨基)丙酰基]氨基} 苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-79)
Figure BSA00000571400401101
根据对中间体78的合成阐述的程序由中间体i-13a和市售(2R)-2-[[(9H-芴-9-基氧基)羰基](甲基)氨基]丙酸制备中间体79。LC-MS：m/z(ES)468(MH)+。
中间体80a和80b
(2S，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁 酯(i-80a)；
(2R，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁 酯(i-80b)
Figure BSA00000571400401102
步骤A：(2S，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯 烷-1-羧酸叔丁酯(i-80a)
Figure BSA00000571400401111
向经冰/水浴冷却至0℃的(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体i-13a，214毫克，0.559毫摩尔)在DMF(2毫升)中的溶液中加入NBS(100毫克，0.559毫摩尔)并将所得溶液搅拌1.5小时以便升温至室温。将该混合物在真空下蒸发，且残留物通过Biotage Horizon MPLC使用己烷中0-40％乙酸乙酯梯度提纯以提供白色泡沫状的产物(232毫克，90％)。LC-MS：m/z(ES)483(MNa)+和485(MNa+2)+。
步骤B：(2R，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1- 羧酸叔丁酯(i-80b)
Figure BSA00000571400401112
向经冰/水浴冷却至0℃的(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体i-13b，108毫克，0.282毫摩尔)在DMF(1.5毫升)中的溶液中加入NBS(55.3毫克，0.311毫摩尔)并将所得溶液搅拌3小时以便升温至室温。将该混合物在真空下蒸发且残留物通过Biotage Horizon MPLC使用己烷中0-40％乙酸乙酯梯度提纯以提供白色泡沫状的产物(83.9毫克，64％)。LC-MS：m/z(ES)483(MNa)+和485(MNa+2)+。
生物检定：下列体外检定法适用于筛选具有选择性β3激动剂活性的化合物：
功能检定：根据Barton，等人(1991，Agonist-induced desensitization ofD2 dopamine receptors in human Y-79 retinoblastoma cells。Mol.Pharmacol.v3229：650-658)(如下修改)测量响应配体的cAMP生成。使用均匀时间分辨的荧光共振能量转移免疫测定法(LANCETM，PerkinElmer)根据制造商的说明测量cAMP生成。在传代培养3天后获取用克隆β-肾上腺素能受体(β1、β2或β3)稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。用无酶离解培养基(Specialty Media)获取细胞。随后计数细胞并再悬浮在含有磷酸二酯酶抑制剂(IBMX，0.6mM)的分析缓冲剂(补充了5mM HEPES，0.1％ BSA的Hank′s平衡盐溶液)中。通过将在6μL中6,000个细胞与6μL Alexa Fluor标记的cAMP抗体(LANCETM试剂盒)混合，随后添加到含有12微升化合物(在分析缓冲剂中稀释至2X最终浓度)的检测孔中，引发该反应。该反应在室温下进行30分钟并通过添加24微升检测缓冲剂(LANCETM试剂盒)来终止。随后将该检测板在室温下培养1小时，并在Perkin Elmer Envision读数器或等效物上测量时间分辨的荧光。通过将荧光水平与cAMP标准曲线进行比较，测定未知cAMP水平。
在所有三种受体上使用非选择性的完全激动剂β-肾上腺素能配体异丙基肾上腺素测定最大刺激。在所有检定中使用人β3肾上腺素能受体(AR)选择性配体(S)-N-[4-[2-[[2-羟基-3-(4-羟基苯氧基)丙基]氨基]乙基]-苯基]-4-碘苯磺酰胺作为对照。异丙基肾上腺素在该检定中以10-10M至10-5的最终浓度滴定，并以10-10M至10-5M的浓度在β3受体上滴定选择性配体(S)-N-[4-[2-[[2-羟基-3-(4-羟基苯氧基)丙基]氨基]乙基]苯基]-4-碘苯磺酰胺。在该检定中在所有3β-肾上腺素能受体亚型上以10-10M至10-5M的最终浓度滴定未知配体以测定EC50。EC50是指实现其自身最大值的50％激活的化合物浓度。使用Microsoft Excel和Graphpad Prism或内部开发的数据分析软件包分析数据。
结合检定：也在β1和β2受体上检测化合物以测定选择性。所有结合检定使用由重组表达β1或β2受体的CHO细胞制成的膜运行。细胞在分裂后生长3-4天；用PBS洗涤附着的细胞，随后在冰上在1mM Tris，pH 7.2中溶胞10分钟。刮擦烧瓶以取下细胞，随后使用Teflon/玻璃匀浆器将细胞匀浆。通过在4℃下以38,000xg离心15分钟，收集膜。将成丸的膜以1毫克蛋白质/毫升的浓度再悬浮在TMF缓冲剂(50mM Tris，pH 7.4，5mM MgCl2，2mM EDTA)中。可以制备大批膜，等分，在-70℃下在效力无损的情况下储存最多一年。通过在最终体积200微升的含0.1％ BSA的TME缓冲剂中一起培养膜(2-5微克蛋白质)、放射性标记的示踪剂125I-cyanopindolol(125I-CYP，45pM)、200微克WGA-PVT SPA球(GE Healthcare)和最终浓度为10-10M至10-5M的受试化合物，进行该结合检定法。将检测板在室温下在摇振下培养1小时，随后置于Perkin Elmer Trilux闪烁计数器中。在计数之前，使板在Trilux计数器中在暗处放置大约10小时。使用标准4-参数非线性回归分析，使用Graphpad Prism软件或内部开发的数据分析包分析数据。IC50是指能够抑制放射性标记示踪剂(125I-CYP)的结合的50％的化合物浓度。通过计算比率(IC50β1 AR，β2AR)/(EC50 β3 AR)来测定化合物对β3受体的选择性。
实施例1
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(5R)-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷基}甲 基)苯基]乙酰胺
步骤A：(5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄 基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
Figure BSA00000571400401132
向10毫克(5∶1混合物顺式/反式，0.02毫摩尔)(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-3)和(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酸(3.18毫克，0.02毫摩尔)在0.5毫升无水DMF中的溶液中加入HOAt在DMF中的0.5M溶液(0.04毫升，0.02毫摩尔)，接着EDC(5.8毫克，0.03毫摩尔)和DIEA(3.5微升，0.02毫摩尔)。将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时。该混合物用水洗涤并用二氯甲烷(2x2毫升)萃取。合并有机物，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。该残留物通过制备TLC板(500uM)提纯，用二氯甲烷中5％ MeOH洗脱，以提供产物(10.3毫克，81％)。m/z(ES)637(MH)+，659(MNa)+。
步骤B：2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(5R)-[(R)羟基(苯基)甲基]吡咯 烷基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401141
向7毫克(0.01毫摩尔)(5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯在0.20毫升甲醇中的溶液(来自步骤A)中加入0.20毫升浓HCl并将反应混合物在室温下搅拌1小时。与甲苯共沸(2x)以除去水。将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(3.3毫克，71％)。m/z(ES)423(MH)+。(～5∶1混合物)1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：7.56(br d，J＝8.2Hz，2H)，7.44(d，7.8Hz，2H)，7.39(t，J＝7.6Hz，2H)7.35-7.32(m，0.8H)7.32-7.29(m，0.2H次要异构体)，7.26(d，J＝8.0Hz，1.7H)，7.14(d，J＝8.1Hz，0.3H次要异构体)6.67和6.66(br s，0.2/0.8H，总计1H).4.72(d，J＝8.5Hz，1H)，3.80-3.70(m，4H)3.14(dd，J＝6.1，13.8Hz，1H)，2.95(dd，J＝9.1，13.8Hz，1H)，2.08-2.00(m，1H)，1.86-1.74(m，3H)。
使用上述生物检定法，测得实施例1的人β3官能活性为1至10nM。
实施例2
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(2S，5R)-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷基} 甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401142
步骤A：(2S，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄 基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
Figure BSA00000571400401151
由(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)和(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酸根据实施例1，步骤A的程序制备标题化合物。该粗产物通过制备TLC板提纯，用二氯甲烷中5％ MeOH洗脱，以提供产物(4.1毫克，21％)。m/z(ES)637(MH)+，659(MNa)+。
步骤B：2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(2S，5R)-[(R)羟基(苯基)甲基] 吡咯烷基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401152
由4毫克(2S，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A)根据实施例1，步骤B的程序制备标题化合物。该粗产物在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(3.3毫克，71％)。m/z(ES)423(MH)+。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：7.55(brd，J＝8.2Hz，2H)，7.44(d，7.8Hz，2H)，7.39(t，J＝7.6Hz，2H)7.35-7.33(m，1H)，7.25(d，J＝8.0Hz，2H)，6.65(br s，1H).4.72(d，J＝8.5Hz，1H)，3.80-3.72(m，4H)3.14(dd，J＝6.1，13.8Hz，1H)，2.96(dd，J＝9.1，13.8Hz，1H)，2.07-2.00(m，1H)，1.85-1.73(m，3H)。
使用上述生物检定法，测得实施例2的人β3官能活性为1至10nM。
实施例3
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(5R)-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷基}甲 基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401161
步骤A：(2R，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄 基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
由(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4b)和(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酸根据实施例1，步骤A的程序制备标题化合物。该粗产物通过制备TLC板提纯，用二氯甲烷中5％ MeOH洗脱，以提供产物(7.5毫克，83％)。m/z(ES)637(MH)+，659(MNa)+。
步骤B：2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(2R，5R)-[(R)羟基(苯基)甲基] 吡咯烷基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401163
由7毫克(2R，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A)根据实施例1，步骤B的程序制备标题化合物。该粗产物在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(4.11毫克，89％)。m/z(ES)423(MH)+。δ：7.56(br d，J＝8.0Hz，2H)，7.42(d，7.8Hz，2H)，7.39(t，J＝7.8Hz，2H)7.32-7.29(m，1H)，7.16(d，J＝8.0Hz，1H)6.67(br s，1H).4.70(d，J＝8.5Hz，1H)，3.76-3.69(m，4H)3.16(dd，J＝6.3，13.8Hz，1H)，2.94(dd，J＝8.9，13.8Hz，1H)，2.08-2.00(m，1H)，1.86-1.74(m，3H)。
使用上述生物检定法，测得实施例3的人β3官能活性为11至100nM。
实施例4
2-氨基-N-[4-{((2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基)甲基)苯 基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酰胺
Figure BSA00000571400401171
步骤A：(2S，5R)-2-(4[({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α] [1，3]噻唑-4-基}羰基)氨基]苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯
Figure BSA00000571400401172
向220毫克(0.58毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-13a)和164毫克(0.58毫摩尔)2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酸(i-8)在无水DMF(5毫升)中的溶液中加入EDC(165毫克，0.86毫升)、HOBt(132毫克，0.86毫摩尔)和Hunig’s碱(0.3毫升，1.7毫摩尔)并将所得混合物在室温下搅拌整夜。倒入水(50毫升)并用EtOAc(3x30毫升)萃取，合并的EtOAc层用水(2x50毫升)、饱和NaCl(25毫升)洗涤，经MgSO4干燥，过滤和蒸发。残留物通过MPLC提纯(BiotageHorizon：FLASH 25+M)洗脱剂：100％己烷(100毫升)，梯度为己烷中0至35％ EtOAc(750毫升)，随后己烷中35％ EtOAc(600毫升)。在AD柱上通过手性HPLC分离非对映异构体(洗脱剂：在庚烷中25％IPA)，第一洗脱异构体(134毫克，36％)第二洗脱异构体(126毫克，34％)均为白色泡沫形式。
步骤B：2-氨基-N-[4-{((2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基)甲 基)苯基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-羧酰胺
向126毫克(0.19毫摩尔)(2S，5R)-2-(4[({2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-5，6-二氢-4H-环戊[α][1，3]噻唑-4-基}羰基)氨基]苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯酯(来自步骤A，第二洗脱异构体)在DCM(3毫升)中的溶液中加入三氟乙酸(3.0毫升，38毫摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。蒸发该混合物并通过SCX筒，用在甲醇中的2M NH3洗脱以释放碱。产物通过PREP-TLC 2x[20x20cmx1000微米]提纯，洗脱剂：15％ MeOH(在DCM中)+1％ NH4OH并将产物冻干以产生(65毫克，75％)白色松软固体。m/z(ES)449(MH)+。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ：10.00(s，1H)，7.51(d，J＝8.2，2H)，7.30(m，4H)，7.21(t，J＝6.9，1H)，7.12(d，J＝8.2，2H)，6.86(s，1H)，4.23(d，J＝7.3，1H)，3.78(m，1H)，3.21(m，1H)，3.10(m，1H)2.78(m，1H)，2.66(m，2H)，2.57(m，2H)，2.49(m，1H)，1.59(m，1H)，1.40(m，1H)，1.39(m，2H)。
来自步骤A的产物[第一洗脱异构体](134毫克，0.207毫摩尔)以类似方式脱保护以产生(44毫克，48％)白色松软固体。m/z(ES)449(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例4的人β3官能活性小于1nM。
实施例5-96
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM  (+)；
1-10nM(++)；
11-100nM(+++)；
101-1000nM(++++)；和
大于1000nM但小于3000nM(+++++)。
表4
Figure BSA00000571400401191
Figure BSA00000571400401192
Figure BSA00000571400401201
Figure BSA00000571400401211
Figure BSA00000571400401221
Figure BSA00000571400401231
Figure BSA00000571400401241
Figure BSA00000571400401251
Figure BSA00000571400401261
Figure BSA00000571400401271
Figure BSA00000571400401281
实施例100
N-(4-(((2S，5R)-5-((R)-羟基(苯基)甲基)吡咯烷-2-基)甲基)苯基)-2-(3-甲基 -1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酰胺
将i-13a(2.00克，5.23毫摩尔)、2-(3-甲基-1H-1，2，4-三唑-1-基)丙酸i-56(1.00克，5.23毫摩尔)、HOAt(1.307毫升，0.784毫摩尔)和EDC(2.005克，10.46毫摩尔)在DMF(20毫升)中的混合物在室温下搅拌10分钟。该反应混合物用碳酸氢钠水溶液猝灭并用EtOAc萃取。该粗产物通过柱色谱法(在DCM中的0-3％ MeOH(10％ NH4OH))提纯。在蒸发后，该产物通过手性HPLC(AD柱，30％ IPA/庚烷)进一步提纯以产生纯boc保护的中间体，将其溶解在最低体积的二氧杂环己烷中并加入在二氧杂环己烷中的4M HCl。在室温下2小时后，将该反应混合物减压浓缩以产生标题化合物的HCl盐。碱性反相HPLC(0.1％NH4OH在H2O中，MeCN)产生标题化合物的所需游离碱。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ8.51(s，1H)，7.49(d，J＝13Hz，2H)7.35-7.29(m，4H)，7.26-7.20(m，4H)，5.20(q，J＝7.5Hz，1H)，4.20(d，J＝7.5Hz，1H)，3.27-3.22(m，2H)，2.80-2.72(m，2H)，2.34(s，3H)，1.82(d，J＝7.5Hz，3H)，1.79-173(m，1H)，1.52-1.48(m，3H)。C24H29N5O2的ESI-MS计算值：精确质量：419.23，实测值420.35。
使用上述生物检定法，测得实施例100的人β3官能活性为1至10nM。
实施例101和102
(3S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]-5-氧 代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酰胺(实施例101)和 (3R)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]-5- 氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酰胺(实施例102)
Figure BSA00000571400401292
步骤A：(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-[4-({[(3S)-5-氧代-1，2，3，5-四 氢中氮茚-3-基]羰基}氨基)苄基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(异构体1)和 (2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-[4-({[(3R)-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚 -3-基]羰基}氨基)苄基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(异构体2)
Figure BSA00000571400401301
在氮气氛下向0.610克(1.60毫摩尔)中间体i-13a和0.300克(1.67毫摩尔)中间体i-46在3.2毫升无水N，N-二甲基甲酰胺中的溶液中加入0.033克(0.24毫摩尔)1-羟基-7-氮杂苯并三唑，接着0.336克(1.75毫摩尔)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。将所得悬浮液在环境温度下搅拌30分钟，用水猝灭和用乙酸乙酯(3x10毫升)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发。粗制残留物通过硅胶色谱法提纯，用在己烷中50-100％梯度的乙酸乙酯洗脱以提供97∶3比率的非对映体混合物形式的标题化合物。通过使用Daicel
Figure BSA00000571400401302
柱(洗脱剂：在庚烷中的40％ IPA)的手性HPLC分离这两种非对映体。第一洗脱非对映体被标作异构体2并且是无色固体(0.020克，2.3％)。LC-MS：m/z(ES)544.2(MH)+。第二洗脱非对映体被标作异构体1并且是无色固体(0.650克，75％)。LC-MS：m/z(ES)544.2(MH)+。
步骤B(实施例101)：(3S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯 烷-2-基}甲基)苯基]-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酰胺
Figure BSA00000571400401303
在氮气氛下向0.500克(0.920毫摩尔)来自上述步骤A的异构体1在2毫升异丙醇中的溶液中加入4.0毫升无水氯化氢在1，4-二氧杂环己烷中的4.0M溶液。将该反应混合物搅拌1小时，随后在真空中蒸发至干。该粗制反应混合物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-75％在乙腈中的0.01％三氟乙酸/在水中的0.01％三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜，随后溶解在10毫升氯仿和4毫升饱和碳酸氢盐水溶液的混合物中。将该双相混合物剧烈搅拌10分钟，随后分离层。用氯仿(3x10毫升)萃取水相，合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤和真空蒸发以提供白色固体状的标题化合物(实施例101)(0.39克，95％)。1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ7.89(s，1H)，7.54(dd，J＝8.8，7.2Hz，1H)，7.50(d，J＝8.2Hz，2H)，7.34-7.29(m，4H)，7.26-7.23(m，1H)，7.20(d，J＝8.2Hz，2H)，6.38-3.36(m，2H)，5.24(dd，J＝9.4，2.8Hz，1H)，4.20(d，J＝7.8Hz，1H)，3.35-3.23(m，3H)，3.19-3.12(m，1H)，2.82-2.71(m，2H)，2.60-2.51(m，1H)，2.37-2.32(m，1H)，1.79-1.72(m，1H)，1.52-1.43(m，3H)。LC-MS：m/z(ES)444.0(MH)+。
步骤B(实施例102)：(3R)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯 烷-2-基}甲基)苯基]-5-氧代-1，2，3，5-四氢中氮茚-3-羧酰胺
Figure BSA00000571400401311
相同程序用于来自上述步骤A的异构体2的脱保护以提供单一非对映体形式的标题化合物(实施例102)。LC-MS：m/z(ES)444.0(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例101和102的人β3官能活性分别为1至10nM和小于1nM。
实施例103
(6S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]-4- 氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-羧酰胺
Figure BSA00000571400401321
步骤A：(2R，5S)-2-[(R)-羟基(苯基)甲基]-5-[4-({[(6S)-4-氧代-4，6，7，8-四 氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-基]羰基}氨基)苄基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯酯
在0℃下向i-13a(21.4克，55.9毫摩尔)在N，N-二甲基甲酰胺(100毫升)中的溶液中加入[(6S)-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-羧酸(11.1克，61.5毫摩尔)，接着1-羟基苯并三唑(i-44，7.55克，55.9毫摩尔)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(16.1克，84.0毫摩尔)和N，N-二异丙基乙胺(29.2毫升，168毫摩尔)。将反应混合物从0℃至环境温度搅拌2小时。加入水(600毫升)并将其用二氯甲烷(600毫升x2)萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥。除去挥发物后，使用Biotage系统提纯该残留物(0-5％，随后5％甲醇，以及10％氨/二氯甲烷混合物)以提供标题化合物，其含有8％次要非对映体。其通过超临界流体色谱法进一步提纯(手性AS柱，40％甲醇)以提供浅黄色固体状的标题化合物(22.0克，72％)。1H NMR(CDCl3)：δ9.61(s，1H)，7.93(d，J＝6.6Hz，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.35-7.28(m，5H)，7.13(d，J＝8.5Hz，2H)，6.40(d，J＝6.7Hz，1H)，5.36(d，J＝8.6Hz，1H)，4.38(m，1H)，4.12-4.04(m，2H)，3.46(m，1H)，3.15-3.06(m，2H)，2.91(dd，J＝13.1，9.0Hz，1H)，2.55(m，1H)，2.38(m，1H)，1.71-1.49(m，13H)。LC-MS 567.4(M+23)。
步骤B：(6S)-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基) 苯基]-4-氧代-4，6，7，8-四氢吡咯并[1，2-α]嘧啶-6-羧酰胺
向来自步骤A的中间体(2.50克，4.59毫摩尔)在二氯甲烷(40毫升)中的溶液中加入三氟乙酸(15毫升)。该反应混合物在环境温度下搅拌1.5小时。除去挥发物后，添加饱和NaHCO3以使PH值为8-9。随后用二氯甲烷萃取该混合物。合并的有机层经Na2SO4干燥。浓缩后，从甲醇/乙腈中结晶以提供白色固体状的标题化合物(1.23克，60％)。1H NMR(DMSO-d6)：δ10.40(s，1H)，7.91(d，J＝6.7Hz，1H)，7.49(d，J＝8.3Hz，2H)，7.32-7.26(m，4H)，7.21(m，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.23(d，J＝6.7Hz，1H)，5.11(dd，J＝9.6，2.9Hz，1H)，5.10(br，1H)，4.21(d，J＝7.1Hz，1H)，3.20-3.00(m，4H)，2.66-2.51(m，3H)，2.16(m，1H)，1.57(m，1H)，1.38(m，1H)，1.29-1.23(m，2H)。LC-MS 445.3(M+1)。
使用上述生物检定法，测得实施例103的人β3官能活性为11至100nM。
实施例104-224
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
方法B：通过使用ChiralCEL OD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
方法C：通过使用Pirkle(R，R)-WHELK-O柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
方法D：通过使用Daicel柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
方法E：通过使用Daicel
Figure BSA00000571400401341
柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；
11-100nM(+++)；
101-1000nM(++++)；和
大于1000nM但小于3000nM(+++++)。
表5
Figure BSA00000571400401342
Figure BSA00000571400401351
Figure BSA00000571400401361
Figure BSA00000571400401381
Figure BSA00000571400401401
Figure BSA00000571400401411
Figure BSA00000571400401421
Figure BSA00000571400401431
Figure BSA00000571400401441
Figure BSA00000571400401451
Figure BSA00000571400401461
Figure BSA00000571400401471
Figure BSA00000571400401481
Figure BSA00000571400401491
实施例225-232
使用与上述实施例中所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如上所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
11-100nM(+++)；
101-1000nM(++++)；和
大于1000nM但小于3000nM(+++++)。
表6
Figure BSA00000571400401501
Figure BSA00000571400401502
实施例233
N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯 基]-4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰胺
Figure BSA00000571400401512
步骤A：(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基 -5-(4-{[(4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯基)磺酰基]氨基}苄基) 吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400401521
向10毫克(0.02毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4a)(5∶1混合物顺式/反式)在无水DMF中的溶液中加入i-6(9.4毫克，0.02毫摩尔)，接着吡啶(3.2毫克，0.04毫摩尔)，将该反应在室温下在氮气氛下搅拌1小时。该反应用1N HCl(0.5毫升)猝灭并用二氯甲烷(2x2毫升)萃取。二氯甲烷层经硫酸镁干燥，过滤和浓缩。用己烷中40％乙酸乙酯洗脱的制备TLC板(500uM)提纯提供产物(16.2毫克，93％)。m/z(ES)865(MH)+，765(M-Boc)+。
步骤B：N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯 基]-4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰胺
Figure BSA00000571400401522
向16毫克(0.02毫摩尔)(2R，5S)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基-5-(4-{[(4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯基)磺酰基]氨基}苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A)在0.25毫升甲醇中的溶液中加入0.25毫升浓HCl并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。与甲苯共沸(2x)以除去水。将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(7.3毫克，61％)。m/z(ES)650(MH)+。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：8.22(br d，J＝7.8Hz，2H)，8.15-8.10(m，3H)，7.86(d，J＝7.8Hz，2H)，7.72(d，J＝7.8Hz，2H)，7.38-7.30(m，4H)，7.16(br d，J＝7.8Hz，2H)，7.09(br d，J＝7.8Hz，2H)，4.56(d，J＝8.1Hz，1H)，3.54-3.45(m，2H)，2.93(dd，J＝6.4，13.0Hz，1H)，2.82(dd，J＝7.7，13.0Hz，1H)，1.90-1.82(m，1H)，1.68-1.53(m，3H)。
使用上述生物检定法，测得实施例233的人β3官能活性为1至10nM。
实施例234
N-[4-({(2R，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯 基]-4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰胺
步骤A：(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基 -5-(4-{[(4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯基)磺酰基]氨基}苄基) 吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400401532
由(2R，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4b)和4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰氯(i-6)根据实施例212，步骤A的程序制备标题化合物。该粗产物通过用己烷中40％乙酸乙酯洗脱的制备TLC板提纯以提供产物(8.1毫克，81％)。m/z(ES)865(MH)+，765(M-Boc)+。
步骤B：N-[4-({(2R，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯 基]-4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯磺酰胺
Figure BSA00000571400401541
由8毫克(2R，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(苯基)甲基-5-(4-{[(4-{4-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-2-基}苯基)磺酰基]氨基}苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A)根据实施例233，步骤B的程序制备标题化合物。该粗产物在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(6.3毫克，71％)。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ：8.20(br d，J＝7.7Hz，2H)，8.16-8.10(m，3H)，7.88(d，J＝7.7Hz，2H)，7.70(d，J＝7.6Hz，2H)，7.30-7.25(m，4H)，7.14(br d，J＝7.7Hz，2H)，7.10(br d，J＝7.6Hz，2H)，4.58(d，J＝8.0Hz，1H)，3.55-3.44(m，2H)，2.90(dd，J＝5.9，12.4Hz，1H)，2.81(dd，J＝7.6，12.6Hz，1H)，1.88-1.83(m，1H)，1.69-1.52(m，3H)。
使用上述生物检定法，测得实施例234的人β3官能活性为11至100nM。
实施例235-250
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。
使用如上所述的生物检定(β3AR-cAMP)，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
11-100nM(+++)；
101-1000nM(++++)；和
大于1000nM但小于3000nM(+++++)。
表7
Figure BSA00000571400401551
Figure BSA00000571400401552
实施例251
N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]-N′-(3-甲 氧基苯基)脲
Figure BSA00000571400401562
步骤A：N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯 基]-N′-(3-甲氧基苯基)脲
向30毫克(0.078毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-13a)在CH2Cl2(0.5毫升)中的溶液中加入14毫克(0.094毫摩尔)1-异氰酸根-3-甲氧基苯。该反应混合物在环境温度下搅拌2.5小时。随后加入TFA(0.4毫升)并在环境温度下再搅拌3小时。除去挥发物后，其通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；10-80％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)。将纯馏分冻干整夜以产生白色固体状的标题化合物。LC/MS 432.3(M+1)。
使用上述生物检定法，测得实施例251的人β3官能活性为11至100nM。
实施例252-262
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
1-10nM(++)；
11-100nM(+++)；和
101-1000nM(++++)。
表8
Figure BSA00000571400401571
Figure BSA00000571400401572
Figure BSA00000571400401581
实施例263
2-氟-N-((1S)-2-{[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基) 苯基]氨基}-1-甲基-2-氧代乙基)苯甲酰胺
Figure BSA00000571400401591
步骤A：(2S，5R)-2-[4-({(2S)-2-[(2-氟苯甲酰基)氨基]丙酰基}氨基)苄 基]-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，三氟乙酸盐
Figure BSA00000571400401592
向0.090克(0.20毫摩尔)中间体77在2毫升二氯甲烷中的溶液中加入0.027毫升(0.20毫摩尔)三乙胺，接着0.032克(0.20毫摩尔)市售2-氟苯甲酰氯。将所得混合物搅拌1小时，随后真空除去所有挥发物。该粗制反应混合物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-90％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)，并将纯馏分冻干整夜以提供白色固体状的标题化合物(0.035克，30％)。LCMS：m/z(ES)576(MH)+。
步骤B：2-氟-N-((1S)-2-{[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-2- 基}甲基)苯基]氨基}-1-甲基-2-氧代乙基)苯甲酰胺，三氟乙酸盐
Figure BSA00000571400401593
向0.033克(0.057毫摩尔)来自上述步骤A的(2S，5R)-2-[4-({(2S)-2-[(2-氟苯甲酰基)氨基]丙酰基}氨基)苄基]-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，三氟乙酸盐在2.5毫升二氯甲烷中的搅拌溶液中加入0.5毫升三氟乙酸。将所得混合物搅拌1小时，随后真空除去所有挥发物。该粗制反应混合物通过反相HPLC提纯(TMCPro-Pac C18；0-70％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)并将纯馏分冻干整夜以提供白色固体状的标题化合物(0.027克，67％)。LCMS：m/z(ES)476(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例263的人β3官能活性小于1nM。
实施例264
(2S)-2-{[(4-氟苯基)磺酰基]氨基}-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基] 吡咯烷-2-基}甲基)苯基]丙酰胺
Figure BSA00000571400401601
步骤A：(2S，5R)-2-{4-[((2S)-2-{[(4-氟苯基)磺酰基]氨基}丙酰基)氨基] 苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，三氟乙酸盐
Figure BSA00000571400401602
向0.085克(0.19毫摩尔)中间体77在3毫升二氯甲烷中的溶液中加入0.039毫升(0.28毫摩尔)三乙胺，接着0.036克(0.19毫摩尔)市售4-氟苯磺酰氯。将所得混合物搅拌1小时，随后真空除去所有挥发物。该粗制反应混合物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-90％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)并将纯馏分冻干整夜以提供白色固体状的标题化合物(0.047克，35％)。LCMS：m/z(ES)612(MH)+。
步骤B：(2S)-2-{[(4-氟苯基)磺酰基]氨基}-N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基 (苯基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]丙酰胺
Figure BSA00000571400401611
向0.047克(0.065毫摩尔)来自上述步骤A的(2S，5R)-2-{4-[((2S)-2-{[(4-氟苯基)磺酰基]氨基}丙酰基)氨基]苄基}-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，三氟乙酸盐在2.5毫升二氯甲烷中的搅拌溶液中加入0.5毫升三氟乙酸。将所得混合物搅拌1小时，随后真空除去所有挥发物。该粗制反应混合物通过反相HPLC提纯(TMC Pro-Pac C18；0-70％在乙腈中的0.1％三氟乙酸/在水中的0.1％三氟乙酸梯度)并将纯馏分冻干整夜以提供白色固体状的标题化合物(0.030克，62％)。LCMS：m/z(ES)512(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例264的人β3官能活性为11至100nM。
实施例265-273
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；
11-100nM(+++)；和
101-1000nM(++++)。
表9
Figure BSA00000571400401612
Figure BSA00000571400401621
实施例274和275
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[4-({(5R)-[(R)-羟基(3-氟苯基)甲基]吡咯烷基} 甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401631
步骤A：(2S，5R)-2-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氟苯基)甲 基]-5-(4-{[2-(1，3-噻唑-4-基)丙酰基]氨基}苄基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400401632
向50毫克(0.10毫摩尔)(5R)-2-(4-氨基苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氟苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-4c)和2-(1，3-噻唑-4-基)丙酸(15毫克，0.10毫摩尔)在3毫升无水DMF中的溶液中加入HOAt在DMF中的0.5M溶液(0.2毫升，0.10毫摩尔)，接着EDC(25毫克，0.15毫摩尔)和DIEA(16.5微升，0.1毫摩尔)。将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时。该混合物用水洗涤并用二氯甲烷(2x5毫升)萃取。合并有机物，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。该残留物通过制备TLC板(500uM)提纯，用二氯甲烷中5％ MeOH洗脱，以产生非对映体混合物形式的产物。随后通过使用Daicel
Figure BSA00000571400401633
柱的手性HPLC(洗脱剂：在庚烷中的40％ IPA)分离这两种非对映体。第一洗脱非对映体被标作异构体1并且是无色固体。LC-MS：m/z(ES)655(MH)+，677(MNa)+。第二洗脱非对映体被标作异构体2并且也是无色固体。m/z(ES)654(MH)+，676(MNa)+。
步骤B：N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-(3-氟苯基)(羟基)甲基]吡咯烷-2-基}甲 基)苯基]-2-(1，3-噻唑-4-基)丙酰胺(异构体1))(实施例274)
Figure BSA00000571400401634
向来自步骤A的8毫克(0.01毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-{[2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)丙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氟苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(异构体1)在0.20毫升甲醇中的溶液中加入0.20毫升浓HCl并将反应混合物在室温下搅拌1小时。与甲苯共沸(2x)以除去水。将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(实施例274)(5.1毫克，88％)。m/z(ES)440(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例274的人β3官能活性为11至100nM。
步骤C：N-[4-({(2S，5R)-5-[(R)-(3-氟苯基)(羟基)甲基]吡咯烷-2-基}甲 基)苯基]-2-(1，3-噻唑-4-基)丙酰胺(异构体1)(实施例275)
Figure BSA00000571400401641
向来自步骤A的8毫克(0.01毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-{[2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)丙酰基]氨基}苄基)-5-[(R)-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}(3-氟苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(异构体2)在0.20毫升甲醇中的溶液中加入0.20毫升浓HCl并将反应混合物在室温下搅拌1小时。与甲苯共沸(2x)以除去水。将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用0-50％梯度的含0.05％ TFA缓冲剂的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(实施例275)(4.3毫克，79％)。m/z(ES)440(MH)+。
使用上述生物检定法，测得实施例275的人β3官能活性小于1nM。
实施例276-281
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用如上所述的生物检定法(β3AR-cAMP)，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；和
11-100nM(+++)。
表10
Figure BSA00000571400401651
Figure BSA00000571400401652
实施例282-287
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；和
11-100nM(+++)。
表11
Figure BSA00000571400401661
Figure BSA00000571400401662
Figure BSA00000571400401671
实施例288-293
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；和
11-100nM(+++)。
表12
Figure BSA00000571400401681
Figure BSA00000571400401682
实施例294-305
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
方法C：通过使用Pirkle(R，R)-WHELK-O柱的HPLC分离非对映异构体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；和
11-100nM(+++)。
表13
Figure BSA00000571400401691
Figure BSA00000571400401692
Figure BSA00000571400401701
实施例306-311
使用与上文所述的那些类似的程序和本领域中已知的常识，由适当的原材料制备下列实施例。使用如下所述的方法通过手性HPLC分离非对映体。
方法A：通过使用ChiralPAK AD柱的HPLC分离非对映体，用IPA、乙腈或乙醇在庚烷或己烷中的溶剂混合物洗脱，第一洗脱异构体标作异构体1，第二洗脱异构体标作异构体2。
使用上述生物检定法，测定各化合物的人β3官能活性并作为下列范围显示在下表中：
小于1nM(+)；
1-10nM(++)；和
11-100nM(+++)。
表14
Figure BSA00000571400401711
Figure BSA00000571400401712
实施例312
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[2-溴-4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基] 吡咯烷-2-基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401722
步骤A：(2S，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}-3-溴苄 基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400401723
向115毫克(0.25毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-80a)和(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酸(77毫克，0.30毫摩尔)在3.0毫升无水DMF中的溶液中加入HOBt(44毫克，0.32毫摩尔)，接着EDC(66毫克)和DIEA(0.22毫升，1.25毫摩尔)。将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时。该混合物用水洗涤并用二氯甲烷(2x2毫升)萃取。合并有机物，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。该残留物通过Gilson反相HPLC提纯，用含0.05％TFA缓冲剂的在水中的10-90％乙腈梯度洗脱以提供产物(105毫克，81％)。m/z(ES)601(M)+和603(M+2)+，以及623(MNa)+和625(MNa+2)+。
步骤B：2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[2-溴-4-({(2S，5R)-5-[(R)-羟基(苯 基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401731
向105毫克(0.175毫摩尔)(2S，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A)在2.0毫升DCM中的溶液中加入1.0毫升TFA并将反应混合物在室温下搅拌2小时。与甲苯共沸(2x)至过量酸。随后将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用含0.05％ TFA缓冲剂的10-90％梯度的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(77毫克，88％)。m/z(ES)501(M)+和503(M+2)+，以及523(MNa)+和525(MNa+2)+。
使用上述生物检定法，测得实施例312的人β3官能活性为11至100nM。
实施例313
2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[2-溴-4-({(2R，5R)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基] 吡咯烷-2-基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401732
步骤A：(2R，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}-3-溴苄 基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
Figure BSA00000571400401741
向81毫克(0.18毫摩尔)(2R，5R)-2-(4-氨基-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(i-80b)和(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酸(45毫克，0.18毫摩尔)在2.0毫升无水DMF中的溶液中加入HOBt(31毫克，0.23毫摩尔)，接着EDC(45mg)和DIEA(0.16毫升，0.88毫摩尔)。将所得混合物在室温下在氮气氛下搅拌16小时。该混合物用水洗涤并用二氯甲烷(2x2毫升)萃取。合并有机物，经硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩。残留物通过Gilson反相HPLC提纯，用含0.05％ TFA缓冲剂的在水中的10-90％乙腈梯度洗脱以提供产物(75毫克，81％)。m/z(ES)601(M)+和603(M+2)+。623(MNa)+和625(MNa+2)+。
步骤B：2-(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)-N-[2-溴-4-({(2R，5R)-5-[(R)-羟基(苯 基)甲基]吡咯烷-2-基}甲基)苯基]乙酰胺
Figure BSA00000571400401742
向75毫克(0.124毫摩尔)(2R，5R)-2-(4-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)乙酰基]氨基}-3-溴苄基)-5-[(R)-羟基(苯基)甲基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(来自步骤A，实施例313)在2.0毫升DCM中的溶液中加入1.0毫升TFA并将反应混合物在室温下搅拌2小时。与甲苯共沸(2x)至过量酸。随后将该残留物置于乙腈/水/MeOH(9∶1∶1)中并在Gilson HPLC上提纯，用含0.05％ TFA缓冲剂的10-90％梯度的乙腈/水洗脱。合并含产物的馏分，冷冻和冻干以产生白色泡沫(56毫克，90％)。m/z(ES)501(M)+和503(M+2)+，以及523(MNa)+和525(MNa+2)+。
使用如上所述的生物检定法(β3AR-cAMP)，测得实施例313的人β3官能活性为101至1000nM。
尽管已参照其某些具体实施方案描述和例证了本发明，但本领域技术人员会认识到，可以在不背离本发明的精神和范围的情况下对其作出各种变动、修改和取代。例如，由于被治疗任何适应征的哺乳动物对上述本发明中所用的活性剂的响应性的变化，可适用不同于上文阐述的具体剂量的有效剂量。同样地，所观察到的具体药理学响应可随所选的具体活性化合物或是否存在药物载体以及所用制剂的类型而变，根据本发明的目的和实践预计到结果的此类预期变动或差异。因此，意在通过下列权利要求的范围规定本发明，且此类权利要求在合理的程度内尽可能宽地解释。

Claims (24)

1.式I的化合物或其可药用盐或其立体异构体或其立体异构体的可药用盐：
Figure FSA00000571400300011
其中
m是0、1、2、3或4；
n是0、1、2、3、4或5；
p是0、1或2；
q是0、1、2、3或4；
t是0、1、2、3、4或5；
X是-CO-或-SO2-；
Y选自：
(1)C1-C5链烷二基、C2-C5链烯二基和C2-C5炔二基，其中链烷二基、链烯二基和炔二基各自任选被1至3个独立地选自卤素、-ORa、S(O)p-C1-C3烷基的基团取代；
(2)-(CRaRa)j-Q-(CRaRa)k，其中j和k是独立地选自0、1和2的整数，
(3)键，和
(4)任选被1至3个独立地选自R1的基团取代的亚苯基；
Z选自：
(1)苯基、
(2)具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环、
(3)稠合到C5-C10碳环上的苯环、
(4)稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，和
(5)稠合到C5-C10碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环；
R1选自：
(1)任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基、
(2)C3-C6环烷基、
(3)卤素、
(4)硝基、
(5)氰基、
(6)-C(O)Ra、
(7)-C(O)2Ra、
(8)-C(O)NRaRb和
(9)-QRb；
R2选自卤素和C1-C5烷基；
R3选自：
(1)任选被1至5个独立地选自卤素、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb的基团取代的C1-C6烷基、
(2)-(CH2)t-苯基或-(CH2)t-O-苯基，且其中各自中的所述苯基任选被1至3个独立地选自卤素、-ORa和任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基的基团取代，
(3)氧代、
(4)硫代、
(5)卤素、
(6)-CN、
(7)C3-C6环烷基、
(8)-(CH2)t-杂环或-(CH2)t-O-杂环，且其中各自中的杂环是具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元环，且其中所述杂环任选邻位稠合到苯环上并任选被1至3个独立地选自卤素、-ORa和任选被1至5个卤素原子取代的C1-C5烷基的基团取代，
(9)-ORa、
(10)-C(O)ORa、
(11)-C(O)Ra、
(12)-C(O)NRaRb、
(12)-NRaRb、
(13)-NRaC(O)Rb、
(14)-NRaC(O)ORb和
(15)-NRaC(O)NRaRb；
Ra选自氢和任选被1至5个卤素原子取代的C1-C6烷基；
Rb选自：
(1)氢，
(2)任选被1至5个选自下列基团的基团取代的C1-C6烷基：
(a)羟基、
(b)卤素、
(c)-CO2Ra、
(d)-S(O)p-C1-C3烷基；
(e)C3-C8环烷基、
(f)任选被1至5个卤素取代的C1-C6烷氧基，和
(g)任选被1至5个独立地选自卤素、硝基、-NRaRa、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-C5烷基和-ORa的基团取代的苯基，
(3)C3-C8环烷基，和
(4)任选被1至5个选自下列基团的基团取代的苯基：
(a)卤素、
(b)硝基、
(c)-NRaRa、
(d)-OH、
(e)任选被1至5个卤素取代的C1-C6烷氧基、
(f)-S(O)p-C1-C6烷基；和
(g)任选被最多5个选自羟基、卤素、三氟甲基、氰基、-CO2Ra、C3-C8环烷基和-QRc的基团取代的C1-C6烷基；
Rc选自：
(1)任选被最多5个选自卤素、三氟甲基、氰基、C1-C5烷基和C1-C5烷氧基的基团取代的Z，和
(2)C1-C6烷基；且
Q选自
(1)-N(Ra)-、
(2)-O-和
(3)-S(O)p-。
2.权利要求1的化合物，其中Y是亚甲基、-CH(CH3)-或键。
3.权利要求1的化合物，其中Z是具有一个氮原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环或具有1、2或3个氮原子的6-元杂环或具有1个氮原子和一个氧或硫原子的6-元杂环。
4.权利要求1的化合物，其中Z是稠合到C5-C6碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，且其中所述杂环是具有一个氮环原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环或具有1、2或3个环氮原子的6-元杂环或具有1个环氮原子和环氧或硫原子的6-元杂环。
5.权利要求1的化合物，其中Z是稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，其中所述稠合的环具有2至5个杂原子，其中至少一个是氮。
6.权利要求1的化合物，或其可药用盐或其立体异构体或其立体异构体的可药用盐，该化合物具有式Ia：
Figure FSA00000571400300041
其中Y、Z、R3和n如权利要求1中所定义。
7.权利要求6的化合物，其中Y是亚甲基、-CH(CH3)-或键。
8.权利要求6的化合物，其中Z是具有一个氮原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环或具有1、2或3个氮原子的6-元杂环或具有1个氮原子和一个氧或硫原子的6-元杂环。
9.权利要求6的化合物，其中Z是具有一个氮原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环。
10.权利要求6的化合物，其中Z选自噻唑基、
Figure FSA00000571400300042
唑基、吡啶基、二氢吡啶基、1，2，4-三唑基、1，2，3-三唑基、四唑基、嘧啶基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、吡嗪基、二氢吡嗪基、哒嗪基、二氢哒嗪基、吡咯烷基、咪唑基、吡唑基、1，2，4-
Figure FSA00000571400300051
二唑基和1，2，5-
Figure FSA00000571400300052
二唑基。
11.权利要求6的化合物，其中Z是稠合到C5-C6碳环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，且其中所述杂环是具有一个氮环原子和0至3个独立地选自N、O和S的附加杂原子的5-元杂环或具有1、2或3个环氮原子的6-元杂环或具有1个环氮原子和环氧或硫原子的6-元杂环。
12.权利要求6的化合物，其中Z是稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，其中所述稠合的环具有2至5个杂原子，其中至少一个是氮。
13.权利要求12的化合物，其中Z是稠合到具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环上的具有1至4个选自氧、硫和氮的杂原子的5-或6-元杂环，且其中该稠合的环具有2至4个氮原子且没有其它杂原子。
14.权利要求6的化合物，其中Z选自：
Figure FSA00000571400300053
Figure FSA00000571400300054
其中r是1或2。
15.权利要求6的化合物，其中R3选自：
(1)任选被卤素或-ORa取代的C1-C6烷基、
(2)氧代、
(3)卤素、
(4)-ORa、
(5)-C(O)NRaRa和
(6)-NRaRa；
其中Ra如权利要求6中所定义。
16.权利要求1的化合物，
其中m是0；
n是1；
q是0；
X是-CO-；
Y是-CH(CH3)-；
Z是1，2，4-三唑基；和
R3是甲基。
17.权利要求16的化合物，选自：
Figure FSA00000571400300061
或其可药用盐。
18.权利要求17的化合物，具有如下化学结构：
Figure FSA00000571400300062
19.权利要求17的化合物，具有如下化学结构：
Figure FSA00000571400300063
20.包含权利要求1-19任一项的化合物和可药用载体的药物组合物。
21.包含权利要求1-19任一项的化合物、第二活性剂和可药用载体的药物组合物。
22.权利要求17的药物组合物，其中该第二活性剂是毒蕈碱受体拮抗剂。
23.权利要求1-19任一项的化合物在治疗或预防选自(1)膀胱过度活动症、(2)尿失禁、(3)急迫性尿失禁和(4)尿急的疾病或病症的药剂制造中的用途。
24.权利要求1-19任一项的化合物和第二活性剂在治疗或预防选自(1)膀胱过度活动症、(2)尿失禁、(3)急迫性尿失禁和(4)尿急的药剂制造中的用途。
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