CN102304159A

CN102304159A - 芍药内酯苷、芍药苷的制备方法

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Publication number: CN102304159A
Application number: CN2011101842874A
Authority: CN
Inventors: 李伟; 张建军; 王景霞
Original assignee: Individual
Current assignee: Beijing Cairui Medical Technology Research Institute Co ltd
Priority date: 2011-03-10
Filing date: 2011-07-04
Publication date: 2012-01-04
Anticipated expiration: 2031-07-04
Also published as: CN102304159B

Abstract

本发明涉及一种芍药内酯苷和/或芍药苷的制备方法，其特征在于该方法为：白芍总苷提取物用氧化铝精制：取白芍总苷提取物加水溶解，氧化铝精制；氧化铝精制液用活性炭精制；活性炭精制物用硅胶精制：将活性炭精制物加8～20倍量洗脱剂溶解，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。所述芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述方法，重复精制，得芍药苷、芍药内酯苷。本发明制成的产品，芍药苷含量≥95％，芍药内酯苷含量≥92％，符合1类新药原料药标准。

Description

芍药内酯苷、芍药苷的制备方法

技术领域

本发明涉及芍药内酯苷、芍药苷的制备方法，属于中药领域。

技术背景

CN 101607975A公开了芍药内酯苷的制备方法，其采用：“模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷的方法”采用白芍总苷提取物作为原料，应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷，模拟移动床色谱的固定相采用C₁₈硅胶，流动相采用甲醇或乙腈与水、甲酸、异丙醇的混合溶液。该专利存在如下问题：1)所用填料C₁₈硅胶价格在1000元左右/kg，成本高；2)其模拟移动床色谱法为高压色谱，需采用高压柱、高压输液泵等专用设备，生产条件要求高；3)溶剂方面，该专利为反相填料，用含有机溶剂的水洗脱。水沸点高，难蒸馏，蒸馏后混合溶剂的组分改变，难于循环使用。

文献报道制备芍药内酯苷、芍药苷对照品的方法，采用白芍总苷提取物加适量乙醇溶解，加入硅胶干燥后装柱(俗称拌样上柱或干法上柱)，以不同极性的混合洗脱剂梯度洗脱进行分离。此法用于工业化生产存在以下困难：①白芍总苷提取物含有较多杂质，洗脱芍药内酯苷、芍药苷后，杂质吸附在硅胶上难以去除，硅胶柱不能重复使用，需拆除后重新装柱，因柱内含有易燃、有毒的化学试剂，操作困难而且危险；②白芍总苷提取物加入硅胶干燥后装柱，吸附能力强，虽然制备的产品纯度较高，但洗脱过程缓慢(洗脱过程1～2天)，消耗溶剂量大，且芍药内酯苷、芍药苷有1/3吸附在硅胶上难以洗脱，产品收率低。③硅胶柱采用不同极性流动相洗脱，回收的溶剂难以重复使用；④因硅胶柱需重复拆装，回收的溶剂需勾兑比例，难以避免开放式生产，有机溶剂挥发可导致易燃、易爆、毒害、污染等危害。

发明内容

本发明目的在于提供一种制备芍药内酯苷、芍药苷的方法。

本发明所述一种制备芍药内酯苷、芍药苷的方法，该方法包括如下步骤：

步骤1：白芍总苷提取物用氧化铝精制：取白芍总苷提取物加适量水或醇溶解，与氧化铝混匀，干燥，装入渗漉器，洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

步骤2：氧化铝精制液用活性炭精制：氧化铝精制液通过活性炭柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物备用；

步骤3：活性炭精制物用硅胶精制：将活性炭精制物加8～20倍量洗脱剂溶解，通过硅胶柱，以洗脱剂洗脱，收集流份，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，滤液干燥，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。

步骤4：所述芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述步骤3方法，重复精制，得芍药苷、芍药内酯苷。

优选的，步骤1中白芍总苷提取物为白芍药材经提取后用大孔树脂精制，含芍药苷和芍药内酯苷之和≥40％。

优选的，步骤1中白芍总苷提取物加适量水或醇溶解，加2-8倍白芍总苷提取物量氧化铝混匀，更优选4倍量；

优选的，步骤1中以6-20倍量(体积/重量)乙酸乙酯-甲醇洗脱3-9∶1，更优选为6∶1；所述体积/重量是ml与g的关系。

优选的，步骤2中，装白芍总苷提取物2-6倍量的活性炭柱，更优选3倍；

优选的，步骤3中，取上述活性炭精制物加5-15倍量乙酸乙酯-甲醇3-9∶1溶解，通过硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇洗脱；更优选为：加9-12倍量乙酸乙酯-甲醇5-7∶1溶解；上述步骤3所用洗脱剂可以由下列的一种或多种溶剂混合组成，比例可以根据相当于乙

酸乙酯-甲醇6∶1的极性进行选择或混合：

液态醇类：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等；

液态酯类：甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯等；

液态酮类：丙酮、丁酮、戊酮等；

液态烷烃类：石油醚、戊烷、己烷、庚烷、辛烷等；

液态醚类：乙醚、丙醚、二乙二醇丁醚、甲基叔丁基醚等；

液态卤代烷类：三氯甲烷、二氯甲烷、四氯化碳、碘甲烷、溴乙烷等；

例如：戊酮；乙酸丁酯-乙醇8∶1；甲酸乙酯-乙醇6∶1；丁酮-异丙醇7∶1；二氯甲烷-丙酮3∶1；二氯甲烷-甲醇5∶1；丁酮-丙醇9∶2；甲基叔丁基醚-丁酮5∶2等。

上述洗脱剂根据相当于乙酸乙酯-甲醇6∶1的极性进行选择作为下列薄层鉴别方法的展开剂。

优选的，步骤3中，比上样量为上述活性炭精制物/硅胶柱横截面积为0.02-0.09g/cm²，流速为1-4倍硅胶量/小时，

上述步骤3的薄层检视方法可以为现有技术所载的方法，优选如下方法：分别取硅胶柱洗脱各流份，作为供试品溶液。另取芍药苷、芍药内酯苷对照品，加乙醇制成每1ml各含1mg溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20μl，标准品溶液10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。

本发明采用了预先净化，特定的方式上样，固定的混合洗脱剂比例，具备了工业化生产的可行性，具体优势如下：

①预先净化：分别用氧化铝柱除去极性大的糖类和具有酚羟基和羧基的羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷、鞣质、有机酸等杂质；用活性炭柱除去极性小的色素类杂质；制得的芍药内酯苷、芍药苷混合物纯度≥95％，避免了杂质吸附于硅胶上，使硅胶柱可以重复使用，简便操作，可连续生产。

②特定的上样方式：芍药内酯苷、芍药苷混合物溶于洗脱剂加入硅胶柱，不经干燥过程，硅胶对芍药内酯苷、芍药苷吸附能力较弱，虽然制备的产品纯度较低，但含量仍＞90％，符合1类新药原料药的标准；且洗脱速率高，生产工时少(每次上样洗脱约2小时)；因硅胶柱可以重复使用，仅第一次上样时有部分芍药内酯苷、芍药苷不能洗脱，以后均能全部洗脱，产品收率高。

③固定比例的混合溶剂洗脱剂：硅胶柱采用固定混合溶剂的比例作为洗脱，回收的溶剂可以重复使用，降低成本；

④工业生产可行：因硅胶柱可重复使用，无需拆装，且上样采用溶液上样，可管道输送，能实现生产设备全密闭，控制因有机溶剂挥发而导致的易燃、易爆、毒害、污染等危害。

⑤制成的产品，芍药苷含量≥95％，芍药内酯苷含量≥92％，符合1类新药原料药标准。

实验例1

氧化铝精制工艺洗脱剂极性对精制物含量的影响

以芍药苷和芍药内酯苷含量之和和收率为指标，以比较实验的方法对洗脱剂极性进行比较。

取白芍总苷提取物(其中含芍药苷和芍药内酯苷之和为55％)，加适量乙醇溶解，加入4倍量氧化铝，混匀，干燥。称取白芍总苷提取物与氧化铝的混合物，每份20g(含白芍总苷提取物4g)，装入色谱柱，分别以乙酸乙酯-乙醇3∶1、4∶1、5∶1、6∶1各300ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，干燥。称量重量，以HPLC法测定含量。结果见表1。

表1洗脱剂极性对洗脱物中芍药苷和芍药内酯苷含量的影响

实验例2

硅胶柱上样方式的比较(样品与硅胶拌样和样品溶于流动相)

以芍药苷和芍药内酯苷纯度和收率为指标，以比较实验的方法对上样方式(样品与硅胶拌样和样品溶于流动相)比较，确定最优上样方式：

方法一、取白芍总苷提取物3g(其中含芍药苷1.29g，芍药内酯苷0.36g)，溶于适量乙醇，加硅胶15g，混匀，干燥，得拌样硅胶。取硅胶1000g，装置硅胶柱(直径8em，高43cm)，拌样硅胶放置硅胶柱上端，依次用三氯甲烷-甲醇10∶0.5、10∶1、10∶3、10∶5各5000ml梯度洗脱，按250ml/流份收集流出液，以薄层检视，合并含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，干燥，称量重量，以HPLC法测定含量。

方法二、白芍总苷提取物经氧化铝和活性炭精制，得精制物。取硅胶1000g装置硅胶柱(直径10em，高28cm)。取上述精制物2g(其中含芍药苷1.34g，芍药内酯苷0.54g)，加流动相30ml溶解，通过硅胶柱，再以流动相3000ml洗脱。流动相为乙酸乙酯-乙醇5∶1。再按上述上样洗脱过程重复，按50ml/流份收集流出液，以薄层检视，合并含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收溶剂，干燥，称量重量，以HPLC法测定含量。结果见表2。

表2上样方式的比较(样品与硅胶拌样和样品溶于流动相)

结果表明，采用两种上样方法，制成的芍药苷和芍药内酯苷含量均大于90％，采用样品溶于流动相上样的芍药苷、芍药内酯苷收率高于样品与硅胶拌样上样，且硅胶柱可以连续使用。

具体实施方式

实施例1：

取白芍总苷提取物20g溶于适量水，加80g氧化铝混匀，减压干燥，装入渗漉器，以800ml乙酸乙酯-甲醇(6∶1)洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液，备用；

上述氧化铝精制液，通过装60g活性炭(100目)柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物备用；

取硅胶1000g装柱(高30cm，直径10cm)。取上述活性炭精制物3.2g，加32ml乙酸乙酯-甲醇(6∶1)溶解，通过硅胶柱，以乙酸乙酯-甲醇(6∶1)洗脱，流速为2000ml/小时，收集流份(每流份为50ml)，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，减压干燥，干膏粉碎过80目筛，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述硅胶精制方法，重复精制。

含量测定方法：色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(加1％氢氧化钠溶液调整PH为4.2)(34∶66)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备：精密称取芍药苷、芍药内酯苷对照品加50％乙醇分别制成每lml各含芍药苷、芍药内酯苷0.02mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末0.1g，精密称定，置1000ml量瓶中，加50％乙醇950ml超声使溶解，加50％乙醇至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取上述照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

采用前述的芍药苷和芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药苷含量为98.1％，芍药内酯苷含量为92.3％。

实施例2：

取白芍总苷提取物20g溶于适量乙醇，加120g氧化铝混匀，70℃干燥，装入渗漉器，以300ml丁酮-异丙醇(7∶1)洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液，通过装120g活性炭(60目)柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物备用；

取硅胶1350g，装柱(高40cm，直径10cm)。取上述活性炭精制物2g，加30ml乙酸丁酯-乙醇(8∶1)溶解，以乙酸丁酯-乙醇(8∶1)洗脱，流速为1350ml/小时，收集流份(每流份为135ml)，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，减压干燥，干膏粉碎过80目筛，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述硅胶精制方法，重复精制。

采用实施例1的芍药苷和芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药苷含量为98.4％，芍药内酯苷含量为93.2％。

实施例3：

取白芍总苷提取物20g溶于适量甲醇，加60g氧化铝混匀，70℃干燥，装入渗漉器，以300ml丁酮-异丙醇(7∶1)洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

上述氧化铝精制液，通过装80g活性炭(60目)柱，收集流出液，回收全部溶剂，干燥，得活性炭精制物备用；

取硅胶1350g装柱(高40cm，直径10cm)。取上述活性炭精制物2.4g，加36ml甲酸乙酯-乙醇(6∶1)溶解，流速为1350ml/小时，收集流份(每流份为50ml)，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，减压干燥(温度≤70℃)，干膏粉碎过80目筛，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述硅胶精制方法，重复精制。

采用用实施例1的芍药苷和芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药苷含量为98.4％，芍药内酯苷含量为93.2％。

实施例4：

取白芍总苷提取物20g溶于适量50％乙醇，加100g氧化铝混匀，70℃干燥，装入渗漉器以240ml二氯甲烷-甲醇(3∶1)洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

取硅胶1000g装柱(高30cm，直径10em)。取上述活性炭精制物1.6g，加24ml二氯甲烷-甲醇(5∶1)溶解，通过硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇(5∶1)洗脱，流速为1500ml/小时，收集流份(每流份为50ml)，薄层检视，分别收集含芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷、芍药内酯苷的流份，回收全部溶剂，再以适量水溶解提取物，过滤，减压干燥(温度≤70℃)，干膏粉碎过80目筛，分别得芍药苷、芍药苷和芍药内酯苷混合物、芍药内酯苷。芍药苷和芍药内酯苷混合物按上述硅胶精制方法，重复精制。

采用用实施例1的芍药苷和芍药内酯苷含量HPLC检测方法测定：芍药苷含量为98.9％，芍药内酯苷含量为92.2％。

Claims

1.一种芍药内酯苷和/或芍药苷的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤1：白芍总苷提取物用氧化铝精制：取白芍总苷提取物加水溶解，与氧化铝混匀，干燥，装入渗漉器，洗脱，收集全部流出液，得氧化铝精制液备用；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1中白芍总苷提取物为白芍药材经提取后用大孔树脂精制，含芍药苷和芍药内酯苷之和≥40％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1中白芍总苷提取物加适量水或醇溶解，加2-8倍白芍总苷提取物量氧化铝混匀。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3中以6-20倍量体积与重量比的乙酸乙酯-甲醇3-9∶1洗脱。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤3乙酸乙酯-甲醇为6∶1。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3中，取步骤2活性炭精制物加5-15倍量乙酸乙酯-甲醇3-9∶1溶解，通过硅胶柱，乙酸乙酯-甲醇洗脱。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于步骤3中加9-12倍量乙酸乙酯-甲醇，两者比例为5-7∶1。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于乙酸乙酯-甲醇由下述溶剂替换：

液态醇类：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇；液态酯类：甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯；液态酮类：丙酮、丁酮、戊酮；液态烷烃类：石油醚、戊烷、己烷、庚烷、辛烷；液态醚类：乙醚、丙醚、二乙二醇丁醚、甲基叔丁基醚；液态卤代烷类：三氯甲烷、二氯甲烷、四氯化碳、碘甲烷、溴乙烷；

上述溶剂按照与乙酸乙酯-甲醇极性相当的原则进行择一选择或多种溶剂混合。

9.如权利要求1-8任一所述的芍药内酯苷或芍药苷，其中芍药苷含量≥95％，芍药内酯苷含量≥92％。