CN102286048A - 4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2, 3-d]嘧啶、同类衍生物及用于制备抗肿瘤药物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于新药合成技术领域，具体涉及一类4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶、其同类衍生物及用于制备抗人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源乳腺癌细胞、人源宫颈癌细胞、人源胃癌细胞菌素的药物。本发明所述的化合物是针对4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的C6位置进行改造，通过化学方法合成得到的。实验表明，这一类化合物显著抑制各类癌细胞增殖、有效诱导癌细胞、包括高度转移的癌细胞凋亡，可以做治疗癌症的药物和药物组分。
Description
技术领域
本发明属于新药合成技术领域，具体涉及一类4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶、其同类衍生物及用于制备抗肝癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、胃癌的药物。
背景技术
目前临床上使用的抗癌药物大部分通过直接或间接抑制DNA合成方式阻碍癌细胞的生长。而癌细胞具有基因的不稳定性，对DNA合成的抑制作用产生耐药性，导致癌症的复发。同时DNA合成的抑制作用往往伴随较大的副作用。因此，研发癌细胞特异的抗癌药物是至关重要的。
细胞周期的亢进和细胞凋亡的受阻共同导致细胞癌变。几乎所有的人类癌症里发现细胞周期依赖性激酶(Cdks)活性上调。因此，Cdks成为非常有前景的抗癌药物的靶标，其中一些Cdks的抑制剂，如olomoucine，roscovitine和favopiridol已经进入临床试验阶段。但是这些化合物细胞膜通透性差、体内半衰期短等缺陷，临床上没有达到预期的效果。本发明根据Cdk1和Cdk2的强抑制剂xylocydine与Cyclin A-Cdk2的复合体晶体结构信息，优化xylocydine，合成了一系列小分子化合物。其中4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶强烈抑制人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源乳腺癌细胞、人源宫颈癌细胞、人源胃癌细胞生长，最终诱导这些癌细胞的凋亡。值得关注的是4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶有效抑制高转移的肝癌细胞HCCLM3和伴随淋巴转移的胃癌细胞SGC7901细胞的生长。因此，该化合物在肿瘤的药物治疗方面有着广阔的应用前景。
发明内容
本发明提供了一类具有广谱抗肿瘤活性的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶及其同类衍生物，其是针对4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的C6位置进行改造，通过化学方法合成得到的。
本发明所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶具有下述结构式(I)，其同类衍生物具有的通式为(II)或(III)：
其中R为带有不同烃基、卤素的苯环、噻吩环、呋喃环或吡咯环，进一步为：
本发明具体方案主要通过如下方程式进行：
附图说明
图1(a)实施例4中4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(b)实施例6中4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(c)实施例9中4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(d)实施例14中4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(e)实施例15中4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(f)实施例16中4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图1(g)实施例18中4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的质谱图；
图2(a)实施例3：4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯 [2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(b)实施例4：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(c)实施例5：4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(d)实施例15：4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(e)实施例6：4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(f)实施例16：4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(g)实施例7：4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(h)实施例17：4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(i)实施例8：4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(j)实施例18：4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(k)实施例9：4-氨基-6-(4-溴基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(l)实施例19：4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(m)实施例10：4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(n)实施例20：4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(o)实施例11：4-氨基-6-(2-吡咯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(p)实施例14：4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(q)实施例24：4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-甲酰胺基-7-(β-L呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(r)实施例11：4-氨基-6-(2-噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图2(s)实施例21：4-氨基-6-(2-噻吩基)-5-甲酰胺基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d] 嘧啶的核磁图；
图2(t)实施例12：4-氨基-6-(2-呋喃基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的核磁图；
图3：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制人源肝癌细胞SK-HEP-1、Bel7402、HepG2、HCCLM3的存活率图；
图4：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制人源肺癌细胞A549的存活率图；
图5：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制人源宫颈癌细胞HeLa的存活率图；
图6：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制人源乳腺癌细胞MCF7的存活率图；
图7：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制人源胃癌细胞SGC7901的存活率图；
图8：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶诱导HeLa细胞的细胞凋亡图；上图为对照，下图为13.5μg/ml药物处理24h，Annexin V/IP染色后，流式细胞仪测定结果：LR：早期细胞凋亡细胞数(38.86％)；UR为晚期细胞细胞数(24.04％)；
图9：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶激活HeLa中caspase的活性图；
图10：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制HeLa细胞形成的克隆图。图10A，4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制HeLa细胞形成的克隆照片；图10B，每组克隆计数，三次实验数据的平均值±标准差(X±S)利用Sigma Plot进行分析。
具体实施方式
实施例1：4-氨基-6-溴-5-氰基吡咯[2，3-d]嘧啶A的合成
(1)将四氰乙烯(14.5g，113mmol)溶于丙酮(81mL)和乙酸乙酯(171mL)，向此溶液中滴加质量浓度为33％的溴化氢醋酸溶液(81mL)，保持内部温度0℃。滴加完毕后继续搅拌3h，过滤后将得到的固体悬浮于水中，加入浓氨水调整pH值至9，然后用冰醋酸处理至pH值为5，过滤收集沉淀，干燥后得灰白色固体18.6g，产率78％。
(2)将上述灰白色固体(10.50g，0.10mol)和醋酸甲脒(10.50g，0.10mmol)溶解于乙二醇二乙醚(100mL)中。加热至回流12h，滤液冷却到室温，产生棕色沉淀，抽滤得到粗品。用CH3OH-CHCl3重结晶得浅黄色固体A 5.97g，产率50％。m.p.＞300℃.MS(ESI)：m/z 240.0[M+H+].1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：13.84(s，1H)，8.21(s，1H)，7.20(s，2H，NH2)。
实施例2：1-O-乙酰-2，3，5-三-O-苯甲酰-L-木糖(B)的合成
将L-木糖(4.5g，30mol)悬浮于乙醇(70mL)中，加入H2SO4(0.3mL)，室温搅拌5h，加入无水K2CO3调至中性，过滤后滤液减压蒸镏除去溶剂。剩余物中加入甲苯共沸除去水，得粗品4.95g， 将上述所得粗品溶于四氢呋喃(100mL)溶液，冰浴搅拌下加苯甲酰氯(10.47mL，90mol)，室温搅拌过夜。减压蒸除溶剂，残留物用水和氯仿提取。有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥，滤后减压蒸除溶剂得到棕色油状物粗品13.8g，直接于下步反应。
向上述棕色油状物中加入冰乙酸(24mL)和乙酸酐(6mL)，溶液用冰浴冷却，搅拌下缓慢加入2mL浓硫酸，常温搅拌6h，得到的溶液倒入水中。分出有机相，水相用氯仿洗提数次，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液、水溶液洗涤，无水硫酸镁干燥，有机相减压浓缩得到黄色浆状物，经硅胶柱层析得到白色固体B(13.5g，产率91.6％)。
实施例3：4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶的合成
室温搅拌下，向实施例1中的4-氨基-6-溴-5-氰基吡咯[2，3-d]嘧啶(2.4g，10mmol)的乙腈(100mL)悬浮液中加入BSA(4.1g，20mmol)。30分钟后，加入实施例2中的1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-木糖2(5.0g，10mmol)，接着加入三氟甲基硅(TMSOTf，3.33g，5mmol)。室温下搅拌10分钟，60℃加热3小时，然后冷却到室温。反应完毕后用100mL乙酸乙酯和50mL水稀释。有机层依次用碳酸氢钠溶液、饱和氯化盐水洗涤，硫酸镁干燥。减压除去溶剂，粗产物用柱层析提纯，使用乙酸乙酯∶氯仿(1∶5，v/v)为洗脱剂，得到4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶5.1g，产率73％。m.p.150-152℃.MS(ESI)：m/z683.1[M+H+].1H NMR(300MHz，CDCl3)：8.11-8.14(m，2H)，7.92-7.03(m，5H)，7.40-7.62(m，9H)，6.82-6.84(m，1H)，6.23(d，1H)，5.98-6.00(m，1H)，5.60(s，2H，NH2)，4.83-4.90(m，3H).
实施例4：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成
向25mL的圆底烧瓶中加入实施例3制备的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和3-溴苯硼酸(479mg，2.40mmol)以及四三苯基膦钯(232mg，0.20mmol)和碳酸钾(0.52g，6.00mmol)以及甲苯(50mL)，回流反应24小时，冷却到室温。向该混合物加入10mL水稀释，并用乙酸乙酯提取。合并有机提取相，用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸镁干燥后旋转蒸干。粗产物使用乙酸乙酯∶氯仿(1∶4，v/v)为洗脱剂用柱层析提纯，得到白色固体。
将上述白色固体悬浮于甲醇(10mL)中，在室温搅拌下加入甲醇钠(32.40mg，0.6mmol)。TLC检测，反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物经C18反相柱层析提纯，使用甲醇∶水(3∶1，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率50％。m.p.150-152℃.MS(ESI)：522.9m/z[M+H+].1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.32(s，1H)，7.96-8.00(m，3H)，7.76-7.82(m，2H)，7.62-7.71(m，2H)，7.483(t，J＝7.4Hz，1H)，7.22(s，1H，NH2)，6.71(d，J＝9.6Hz，1H)，5.95(d，J＝4.5Hz，1H)，5.51(d，J＝3.3Hz，1H)，4.80-4.84(m，2H)，3.94-4.00(m，1H)，3.70-3.72(m，1H)，3.61-3.63(m，1H).
实施例5：4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和4-甲基苯硼酸(163mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/ v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率80％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.28(s，1H)，7.45-7.53(m，4H)，7.15(s，2H，NH2)，6.72(d，1H，J＝9.6Hz)，5.83(d，J＝4.8Hz，1H)，5.39(d，J＝3.3Hz，1H)，4.76-4.81(m，2H)，3.88-3.97(m，2H)，3.57-3.73(m，2H)，2.43(s，3H).
实施例6：4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和4-甲氧基苯硼酸(182mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率82％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.28(s，1H)，7.57(d，2H)，7.22(d，2H)，7.12(s，2H，NH2)，6.71(d，J＝9.6Hz，1H)，5.83(d，J＝4.5Hz，1H)，5.41(d，J＝3.3Hz，1H)，4.76-4.80(m，2H)，3.90-3.95(m，2H)，3.88(s，3H)，3.58-3.71(m，2H).
实施例7：4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和3-甲氧基苯硼酸(182mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率84％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.29(s，1H)，7.55-7.60(m，1H)，7.19-7.22(m，5H)，6.68(d，J＝9.3Hz，1H)，5.85(d，J＝4.8Hz，1H)，5.44(d，J＝3.6Hz，1H)，4.79(d，J＝3.0Hz，2H)，3.91-3.93(m，2H)，3.84(s，3H)，3.32-3.73(m，2H).
实施例8：4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和4-叔丁基苯硼酸(213mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率82％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.29(s，1H)，7.57-7.71(m，4H)，7.16(s，2H，NH2)，6.72(d，J＝9.3Hz，1H)，5.86(d，J＝4.5Hz，1H)，5.43(d，J＝3.3Hz，1H)，4.80(s，2H)，3.94-4.10(m，2H)，3.61-3.75(m，2H)，1.37(s，9H).
实施例9：4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和4-溴苯硼酸(240mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶9， v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率84％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.30(s，1H)，7.90(d，2H)，7.58(d，2H)，7.19(s，2H，NH2)，6.61(d，J＝9.3Hz 1H)，5.82(d，J＝4.8Hz，1H)，5.36(d，J＝3.6Hz，1H)，4.75-4.82(m，2H)，3.91-3.99(m，2H)，3.58-3.74(m，2H).
实施例10：4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和3-溴苯硼酸(240mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶4，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率85％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.30(s，1H)，7.85-7.88(m，2H)，7.62-7.66(m，2H)，7.02(s，2H，NH2)，6.55(d，J＝1.8Hz，1H)，5.84(d，J＝4.5Hz，1H)，5.37(d，J＝3.6Hz，1H)，4.74(s，2H)，3.94-3.96(m，2H)，3.58-3.73(m，2H).
实施例11：4-氨基-6-(2-噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和2-噻吩硼酸(153mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(2-噻吩基苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率81％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.29(s，1H)，8.02-8.04(m，1H)，7.52-7.53(m，1H)，7.37-7.40(m，1H)，7.21(s，2H，NH2)，6.63(d，J＝9.3Hz，1H)，5.86(d，J＝4.5Hz，1H)，5.61(d，J＝3.3Hz，1H)，4.78-4.82(m，2H)，3.94-3.99(m，2H)，3.59-3.72(m，2H).
实施例12：4-氨基-6-(2-呋喃基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和2-呋喃硼酸(135mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶9，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(2-呋喃基苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率85％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.28(s，1H)，8.12(d，1H)，7.22(s，1H，NH2)，7.14(d，1H)，6.85-6.86(m，1H)，6.64(d，J＝9.3Hz，1H)，5.87(d，J＝4.5Hz，1H)，5.77(d，1H，J＝3.3Hz)，4.75-4.81(m，2H)，3.99-4.02(m，2H)，3.62-3.75(m，2H).
实施例13：4-氨基-6-(2-吡咯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和2-吡咯硼酸(135mg，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌6h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶5，v/v) 做洗脱剂。得到4-氨基-6-(2-吡咯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率80％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：11.71(s，1H)，8.25(s，1H)，7.18(d，1H)，7.08(s，2H，NH2)，6.71-6.73(m，1H)，6.55(s，1H)，6.35(d，J＝3.0Hz，1H)，5.89(d，J＝4.5Hz，1H)，5.73(d，J＝3.3Hz，1H)，4.73(s，2H)，3.96(d，2H，J＝3.6Hz)，3.60-3.70(m，2H).
实施例14：4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
按照实施例4的方法，将实施例3中的4-氨基-6-溴-5-氰基-7-(2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖)吡咯[2，3-d]嘧啶(0.68g，1.00mmol)和2-溴噻吩-5-硼酸(2.47g，1.20mmol)反应得到白色固体。向此白色固体的10mL甲醇的悬浮液中加入NaOMe(160mg，3.00mmol)，此反应在室温下搅拌12h，TLC检测。反应结束后，该混合物旋转蒸干。残留物柱层析提纯，使用甲醇∶氯仿(1∶9，v/v)做洗脱剂。得到4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率82％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.29(s，1H)，7.53(d，J＝3.9Hz，1H)，7.37(d，J＝3.6Hz，1H)，7.24(s，1H，NH2)，6.51(d，J＝9.9Hz，1H)，5.83(d，J＝4.8Hz，1H)，5.58(d，J＝3.9Hz，1H)，4.77-4.81(m，2H)，3.99(d，2H，J＝6.3Hz)，3.61-3.71(m，2H).
实施例15：4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成
将实施例5的产物(152mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(4-甲苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率89％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.27(s，1H)，7.66(s，1H，NH2)，7.11(d，1H)，6.04(s，1H，NH2)，5.97(d，J＝4.2Hz，1H)，5.69(d，J＝4.5Hz，1H)，4.85-4.89(m，1H)，4.27-4.29(m，2H)，3.97-3.99(m，1H)，3.77-3.79(m，2H).
实施例16：4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成
将实施例6的产物(159mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(4-甲氧苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率90％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.14(s，1H)，7.52(s，2H，NH2)，7.41-7.52(m，2H)，7.15-7.19(m，2H)，7.07(d，J＝10.8Hz，1H)，5.80(s，1H，NH2)，5.70(d，J＝4.5Hz，1H)，5.08(d，J＝3.0Hz，1H)，4.76-4.82(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，3.86(s，3H)，3.70-3.82(m，2H)，3.50-3.67(m，2H).
实施例17：4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例7的产物(159mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(3-甲氧苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体产率84％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.15(s，1H)，7.50-7.55(m，3H)，7.16-7.20(m，1H)，7.02-7.08(m，3H)，5.92(s，1H，NH2)，5.73(d，J＝4.5Hz，1H)，5.10(d，J＝2.7Hz，1H)，4.79-4.82(m，1H)，4.65(s，1H)，3.8-3.89(m，5H)，3.53-3.70(m，2H).
实施例18：4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例8的产物(169mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(4-叔丁苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率88％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：8.15(s，1H)，7.64(d，J＝8.1Hz，2H)，7.51(s，1H，NH2)，7.44(d，J＝8.1Hz，2H)，7.11(d，J＝10.2Hz，1H)，5.87(s，1H，NH2)，5.76(d，J＝4.5Hz，1H)，5.10(d，1H，2.4Hz)，4.77-4.80(m，1H)，4.66(s，1H)，3.79-3.88(m，2H)，3.52-3.70(m，2H).
实施例19：4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例9的产物(178mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(4-溴苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体产率85％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.16(s，1H)，7.81(d，2H)，7.52(s，1H，NH2)，7.44(d，2H)，6.99(d，J＝9.9Hz，1H)，6.22(s，1H，NH2)，5.73(d，J＝4.8Hz，1H)，5.08(d，J＝3.0Hz，1H)，4.78-4.82(m，1H)，4.65(s，1H)，3.80-3.90(m，2H)，3.51-3.72(m，2H).
实施例20：4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例10的产物(178mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(3-溴苯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率84％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.17(s，1H)，7.78-7.81(m，1H)，7.71(s，2H，NH2)，7.51-7.58(m，3H)，6.98(d，J＝9.3Hz，1H)，6.32(s，1H，NH2)，5.76(d，J＝4.8Hz，1H)，5.09(d，J＝3.0Hz，1H)，4.80-4.81(m，1H)，4.64-4.66(m，1H)，3.82-3.89(m，2H)，3.56-3.71(m，2H).
实施例21：4-氨基-6-(2-噻吩基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例11的产物(149mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(2-噻吩基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率70％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.16(s，1H)，7.98(d，1H)，7.69(s，1H，NH2)，7.42-7.44(m，1H)，7.31-7.34(m，1H)，6.98(d，J＝9.9Hz，1H)，6.15(s，1H，NH2)，5.72(d，J＝4.8Hz，1H)，5.18(d，J＝3.0Hz，1H)，4.75-4.79(m，1H)，4.63-4.66(m，1H)，3.82-3.89(m，2H)，3.55-3.72(m，2H).
实施例22：4-氨基-6-(2-呋喃基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例12的产物(143mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(2-呋喃基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率68％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.18(s，1H)，8.02-8.03(m，1H)，7.71(s，1H，NH2)，6.99-7.02(m，1H)，6.95(d，J＝3.6Hz，1H)，6.76-6.78(m，1H)，6.56(s，1H，NH2)，5.78(d，J＝4.5Hz，1H)，5.25(d，J＝3.0Hz，1H)，4.74-4.77(m，1H)，4.61-4.64(m，1H)，3.88(s，2H)，3.53-3.72(m，2H).
实施例23：4-氨基-6-(2-吡咯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例13的产物(143mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(2-吡咯基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率79％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：11.56(s，1H)，8.13(s，1H)，7.59(s，2H，NH2)，7.10-7.14(m，2H)，6.43-6.45(m，1H)，6.31-6.35(m，1H)，5.68(d，J＝4.5Hz，1H)，5.57(s，1H)，5.23(d，J＝2.7Hz，1H)，4.72-4.75(m，1H)，4.58-4.60(m，1H)，3.80-3.90(m，2H)，3.66-3.71(m，1H)，3.51-3.57(m，1H).
实施例24：4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的合成。
将实施例14的产物(180mg，0.40mmol)悬浮于浓氨水(5mL)中，加入30％过氧化氢(0.5mL)和甲醇(3mL)。此混合物在室温下搅拌，直至由TLC显示反应完成。减压脱除溶剂，残留物用柱层析提纯，得到化合物4-氨基-6-(2-溴噻吩基)-5-甲酰基-7-(β-L-呋喃木糖-)吡咯并[2，3-d]嘧啶的白色固体，产率89％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：8.18(s，1H)，7.73(s，2H，NH2)，7.46(d，J＝3.9Hz，1H)，7.26(d，J＝3.9Hz，1H)，6.91(d，J＝9.6Hz，1H)，6.58(s，1H，NH2)，5.76(d，J＝4.5Hz，1H)，5.24(d，J＝3.0Hz，1H)，4.80-4.83(m，1H)，4.64-4.66(m，1H)，3.85-3.93(m，2H)，3.31-3.71(m，2H).
上述工艺包括4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶的同类衍生物，即在4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶C6位上由3-溴苯基改变成带有不同取代基的苯环、噻吩环、呋喃环、吡咯环的同类衍生物，由于也具备了其药理活性主架结构，在不改变本发明实质内容的情况下，仍属于本发明的保护范围。
经过药理学实验筛选，上述化合物在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用。
本发明的化合物可以用于制备药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的上述通式的化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可以接受的载体，或者含有一种或多种药学上可以接受的、与该化合物一同对治疗有作用的药物。
本发明的化合物和药物组合物可用于制备治疗抗肿瘤药物。
上文的载体是指药学领域常规的药物载体，包括稀释剂、赋形剂，填充剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收促进剂，表面活性剂，吸附载体。
本发明的化合物和药物组合物可以通过口服或直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药等方式施用于这种治疗的患者。
本发明的化合物和药物组合物可以按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。
本发明的药物组合物中，优选含量重量比为0.1％～99.5％的活性成分，进一步优选含有10-90％的活性成分，更优选含有20-80％的活性成分，最好为70％的本发明化合物。
本发明的施药量可根据用药途径、患者年龄、体重、疾病类型和严重程度等变化，日剂量为0.01～10mg/kg。
下述从细胞生物学的角度以及动物实验证实本发明化合物4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶具有显著的抑制癌细胞生长和诱导癌细胞凋亡的效果。
实施例25：评估4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶是否抑制人源癌细胞生长的活性，利用MTT方法测定了其对人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源胃癌细胞、人源乳腺癌细胞以及人源宫颈癌细胞生长的抑制作用。
(1)细胞培养
用含有10％(v/v)热灭活小牛血清、100U/mL青霉素和100g/mL链霉素的DMEM培养基，培养HeLa细胞、SK-HEP-1细胞、Bel-7402细胞、HepG2细胞、HCCLM3细胞、A549细胞、MCF-7细胞和SGC-7901细胞；用含有10％(v/v)热灭活小牛血清、100U/mL青霉素和100g/mL链霉素的RPMI-1640培养基，培养K562细胞和NCl-H460细胞；用含有10％(v/v)热灭活小牛血清、100U/mL青霉素和100g/mL链霉素的IMDM培养基，培养PC-3细胞。上述细胞均置于37℃，5％CO2潮湿培养箱中培养。取对数生长期的这11种细胞，用于MTT实验。
(2)癌细胞生长抑制作用
将上述细胞按1×104个/孔接种于96孔板中，每3个孔为一组；用细胞特定的培养基(同上)培养24h后，分别加入终浓度为0μg/ml，1.3μg/ml，3.2μg/ml，6.5μg/ml，13.0μg/ml，26.0μg/ml和65.1μg/ml的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶作用细胞72h；每孔再加入20μl、5mg/ml的噻唑蓝(MTT，购于Sigma公司)孵育4小时后，轻轻吸出培养液；每孔再加入150μl二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒结晶；在多功能酶标仪(TECANGENios)550nm波长处测定各孔光吸收值，计算半数抑制浓度(IC50值)。结果表明，4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶对人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源胃癌细胞、人源乳腺癌细胞以及人源宫颈癌细胞生长均具有显著的抑制作用。
(3)数据的统计学处理
本文中数据用平均数±标准差(X±S)利用Sigma Plot进行分析。
实施例26：确定4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶是否诱导人源癌细胞凋亡，利用HeLa细胞进行其诱导细胞凋亡作用的分析。
(1)细胞凋亡的检测
采用流式细胞术。将1.6×106个Hela细胞接种于100mm培养皿中，培养24h后，分别加入终浓度为0μg/ml，6.5μg/ml，13.0μg/ml和26.0μg/ml的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶，作用细胞24h；将培养液与细胞收入同一离心筒，4℃，3000r/min离心5min，弃上清，沉淀中加入1ml预冷的PBS，3000r/min离心5min，弃上清；用500μl，1×结合缓冲液(0.01M Hepes/NaOH(pH7.4)，0.14M NaCl，25Mm CaCl2)悬浮细胞，细胞浓度大约为1×105个/ml；在细胞悬浮液中加入5μl带有荧光探针FITC标记的钙离子依赖的磷脂结合蛋白(Annexin V-FITC)和5μl碘化丙锭(PI)，轻轻混匀后于2-8℃避光条件下孵育15分钟，在1小时内用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果表明，4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶诱导了HeLa细胞凋亡。
(2)Caspase-3活力检测
将1.6×106个Hela细胞接种于100mm培养皿中，培养24h后，分别加入终浓度为13.0μg/ml 4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶分别作用细胞0、6、12、18、24h；4℃，3000r/min离心5min收集细胞，弃上清；沉淀中加入1ml预冷的PBS，12000r/min离心1min，弃上清；沉淀中加入适量细胞裂解液，充分混匀，冰浴1h，4℃，12000r/min离心15min，将上清(即全细胞裂解液)移入新的预冷EP管；采用BCA蛋白定量试剂测定蛋白质浓度。将50μg全细胞裂解液蛋白质加入96孔黑板中，再加入200μl含25μM Caspase-3底物(Ac-DEVD-AFC)的反应缓冲液(20mM HEPES，pH 7.4，100mM NaCl，10mM DTT，0.1％CHAPS，10％sucrose)，于37℃孵育1h；以100μl含底物的缓冲液加入100μl水作为对照；用多功能酶标仪(TECAN GENios)仪分别于激发光和发射光波长405nm和505nm处测定底物断裂产生的荧光强度。结果表明，4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶诱导的HeLa细胞凋亡过程中Caspase-3被激活。
实施例27：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶抑制癌细胞形成克隆的实验
将1×104个Hela细胞接种于60mm培养皿中，培养72h后，分别加入终浓度为0μg/ml，6.5μg/ml和13.0μg/ml的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶作用细胞7天；吸去培养基，每个60mm培养皿中加入2ml 2％亚甲基蓝(50％甲醇溶解)37℃孵育10min；吸干亚甲基蓝后，流水冲洗，空气干燥，照相。结果表明，6.5μg/ml、13μg/ml 134-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶形成克隆率分别达到对照组的38％和0％，说明该化合物显著抑制HeLa细胞克隆的形成。
结果讨论
实验结果表明：4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶显著抑制肝癌细胞SK-HEP-1、HepG2、Bel-7402、HCCLM3的生长，其IC50值分别为2.16，4.10，4.81，6.3μg/ml；4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶显著抑制人源肺癌细胞A549、宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞MCF7、伴随淋巴转移的胃癌细胞SGC-7901细胞生长，其IC50分别为3.98、5.13、3.26、5.13μg/ml。
4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶诱导HeLa细胞凋亡。
癌细胞克隆实验表明4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶显著抑制HeLa细胞形成克隆。
总之，以上化合物显著抑制各类癌细胞增殖、有效诱导癌细胞，包括高度转移的癌细胞凋亡，可以做治疗癌症的药物和药物组分。
Claims (10)
1.4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶，其结构式如下所示：
2.4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物，其结构式如下所示：
其中，R为带有烃基或卤素的苯环、噻吩环、呋喃环或吡咯环。
3.如权利要求2所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物，其特征在于：
R为
4.权利要求1所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用。
5.如权利要求4所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用，其特征在于：用于制备治疗抗肿瘤药物。
6.如权利要求4或5所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用，其特征在于：肿瘤细胞为人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源胃癌细胞、人源乳腺癌细胞或人源宫颈癌细胞。
7.权利要求2或3所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用。
8.如权利要求7所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用，其特征在于：用于制备治疗抗肿瘤药物。
9.如权利要求7所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用，其特征在于：肿瘤细胞为人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源胃癌细胞、人源乳腺癌细胞或人源宫颈癌细胞。
10.如权利要求8所述的4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2，3-d]嘧啶同类衍生物在制备抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡药物方面的应用，其特征在于：肿瘤细胞为人源肝癌细胞、人源肺癌细胞、人源胃癌细胞、人源乳腺癌细胞或人源宫颈癌细胞。
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111221 |