CN102175501A - 用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 - Google Patents
用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102175501A CN102175501A CN201110003216XA CN201110003216A CN102175501A CN 102175501 A CN102175501 A CN 102175501A CN 201110003216X A CN201110003216X A CN 201110003216XA CN 201110003216 A CN201110003216 A CN 201110003216A CN 102175501 A CN102175501 A CN 102175501A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- vessel
- plant
- final concentration
- treating method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 title 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 claims abstract description 20
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 claims abstract description 20
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 4
- 239000000834 fixative Substances 0.000 abstract description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 38
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 12
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 12
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 8
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 6
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 6
- 241001024327 Oenanthe <Aves> Species 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 241000495841 Oenanthe oenanthe Species 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 241000221785 Erysiphales Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 2
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000004226 salt gland Anatomy 0.000 description 2
- -1 salt ions Chemical class 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000233679 Peronosporaceae Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002377 thylakoid Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明涉及用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，属于显微镜样品制作技术领域。步骤如下：(1)吸取固定液置入器皿中，冷却，得样品固定液；(2)将植物组织切成组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，密封器皿；(3)对步骤(2)制得的密封后的器皿抽气；然后将器皿放入超声波清洗器，清洗2-5分钟，得清洗样品；(4)将步骤(3)制得的清洗样品固定2-4小时，得经前处理的植物样品。本发明通过超声波所具有的空化效应，增大介质分子的运动速度及穿透力，激活固定液戊二醛和多聚甲醛分子，消除组织细胞间隙微小气泡对固定液入渗的阻碍，有效提升植物材料的固定效果，同时起到材料表面清洁的效果。
Description
技术领域
本发明涉及用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，特别是一种植物材料超薄切片、半超薄切片、表面扫描样品制作前的处理方法，属于显微镜样品制作技术领域。
技术背景
显微技术已成为现代科学技术研究中不可缺少的重要工具。透射与扫描电子显微镜在生物学、医学、材料学及其他学科方面有着广泛应用，与光学显微镜相比，具有高分辨率、高放大倍数和可做高分辨图像的特点，利用它可以获得生物组织细胞精细的超微结构，显微结构或立体结构图像，为物体组织表面或断面的精细结构的研究提供了光学显微镜技术所不能得到的大量信息，为研究微观世界开辟了新的领域。而光学显微镜可为生物组织显微结构的观察提供较广的视野，提供生物细胞显微水平的结构信息。细胞超微结构、显微结构、表面形态结构观察的效果，关键是样品的制备，而样品制备的关键步骤是材料的有效、快速固定。
作物高产与稳产是提高我国经济安全和粮食安全的重要因素。目前，对作物细胞超微结构、显微结构以及表面特征及其变化的观察是评价作物抗逆性、适应性及其高产性状的重要方面，作物高产、优质、水肥高效利用机理等日益成为生物学领域的研究热点；因而，电子与光学显微镜样品的制备与观察也成为该领域研究的重要手段。然而，受众多因素和繁杂实验步骤的影响，显微镜样品的制备与观察往往难以成功。很多作物，例如小麦、玉米、水稻等我国重要农作物，其茎、叶表面为硅质细胞层，并包裹有腊质角质层，阻碍固定液在有效时间内进入组织细胞，使得材料不能充分固定，严重影响显微镜下的观察效果，甚至导致实验前功尽弃。另外，很多作物由于表面污物障碍而使扫描电子显微镜的观察效果大打折扣。例如，小麦白粉病为真菌性病害，发病初期，叶片、叶鞘和茎秆，甚至麦穗产生白色粉状小霉斑，表面覆有一层白色粉质；水稻、小麦等作物茎、叶表面具有一层疏水性的白色蜡质角质层；大豆由于较长而密集的腺毛以及经常发生的霜霉病导致叶片表面黏附较多的杂尘等异物；柽柳、补血草、滨藜等泌盐植物，从土壤中吸收盐分，部分盐离子如钾、钠、钙、镁、氯和硫离子等会通过盐腺分泌出来，形成白色的结晶体粘附于叶片或茎的表面。以上黏附于材料表面的异物很难用常规方法去除，特别是对材料体积较小而又需要及时固定的样品。
因此，显微镜观察植物样品的快速、有效固定以及表面黏附物体的洁净是保证植物细胞超微结构、显微结构、组织表面形态结构观察的关键步骤。
公开号为℃N1673722A(申请号为200510067183.x)的中国专利，公开了一种细胞凝集素探针。它设有组分I、II、III，其中；III为样品固定体系，选自鲁格氏碘液、多聚甲醛和戊二醛中的一种，鲁格氏碘液的浓度为10％～20％，鲁格氏碘液的终浓度为0.5％～1.5％，多聚甲醛的浓度为10％～20％，多聚甲醛的终浓度为0.5％～1.5％，戊二醛的浓度为20％～25％，戊二醛的终浓度为1.0％～2.5％。该申请中的固定体系是用来固定赤潮生物，由于赤潮生物中不存在作物表面的硅质细胞层和蜡质角质层，因此该固定液无法在有效时间内进入组织细胞，无法充分固定材料。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，该方法可有效地提高植物细胞超微结构、显微结构、表面形态结构的固定与表面的洁净，提高植物样品制作的成功率与观察效果。
本发明解决技术问题所采取的技术方案是：
用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，步骤如下：
(1)吸取固定液2-3ml置入容积5-10ml的器皿中，然后冷却，得样品固定液；
(2)将植物组织切成1-3m3的组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，密封器皿；
(3)对步骤(2)制得的密封后的器皿抽气，使植物组织块全部沉到器皿底部；然后将器皿放入超声波清洗器，调整水温，工作频率40-60kHz，功率0.3-0.6w/cm2，清洗2-5分钟，得清洗样品；
(4)将步骤(3)制得的清洗样品在4℃下固定2-4小时，得经前处理的植物样品。
所述步骤(1)中的固定液通过如下方法配制：
将戊二醛和多聚甲醛分别加入至磷酸缓冲液中，使戊二醛的终浓度为2.2-2.8％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为2.8-3.2％(重量体积百分比)，磷酸缓冲液终浓度为100mM。
优选的，所述戊二醛的终浓度为2.5％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为3％(重量体积百分比)。
优选的，所述重量体积百分比单位为：g/ml。
优选的，所述的磷酸缓冲液的pH＝7.2。
所述步骤(1)中的冷却温度为4-8℃。
所述步骤(3)将器皿放入超声波清洗器，使器皿的80％没入清洗槽的水中。
所述步骤(3)中调整水温至4-8℃。
经前处理的植物样品随后的处理可按常规超薄切片、半薄切片、扫描电子显微镜观察样品制作方法等现有技术进行处理。
有益效果
1、本发明的采用超声波清洗器处理植物组织块，通过超声波所具有的空化效应，增大介质分子的运动速度及穿透力，激活固定液戊二醛和多聚甲醛分子，消除组织细胞间隙微小气泡对固定液入渗的阻碍，有效提升植物材料的固定效果，同时起到材料表面清洁的效果；
2、超声波清洗器对于不可避免的需要隔离的材料必须间接处理，即放在容器中再置于清洗槽内进行，本发明所采用的特定的超声波频率和功率使得固定液分子具有很强的穿透力，使得间接处理与直接处理有着同样的效果；
3、本发明的操作步骤均是在4-8℃下进行，细胞中的蛋白水解酶类、脂肪酶类、淀粉酶类等处于钝化状态，避免以上酶类对细胞结构以及有机大分子的降解，有利于稳定细胞超微结构、显微结构以及表面形态结构，使观察效果达到最佳状态；
4、样品固定液中加入3％的多聚甲醛，多聚甲醛溶解于水后解聚为分子量较小的单体或寡聚体，可快速通过细胞壁、细胞质膜渗透到细胞内部，起到快速固定的效果；
5、本发明可有效地提高植物材料组织细胞超微结构的固定与表面洁净效果，使细胞内叶绿体、线粒体、细胞核等膜系统清晰度显著增加；对诸如胞间连丝等在常规操作中难以观察到的细胞组分其固定效果更为显著；同时，由于对材料表面进行了有效的清洁，因而在扫面电子显微镜下对组织表皮细胞排列、气孔分布、腺毛、盐腺等植物材料表面形态结构的观察更为清晰；
6、本发明操作简单，所用的超声波清洗器为实验室中的常规仪器，成本低，便于应用；
7、本发明适用于所有需要固定的植物样品的制作，特别是对表面有较厚的蜡质角质层、表层为硅质细胞的植物材料，例如小麦、玉米、水稻等茎、叶组织，应用效果更佳。
附图说明
图1是按照实施例1的方法制得的样品在透射电子显微镜下观察的照片；
图2是按照实施例1中的对照例的方法制得的样品在透射电子显微镜下观察的照片；
图3是按照实施例2的方法制得的样品在光学显微镜下观察的照片；
图4是按照实施例2中的对照例的方法制得的样品在光学显微镜下观察的照片；
图5是按照实施例3的方法制得的样品在扫描电子显微镜下观察的照片；
图6是按照实施例3中的对照例的方法制得的样品在扫描电子显微镜下观察的照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
戊二醛购自Sigma公司，多聚甲醛购自上海试一化学试剂有限公司。
实施例1、用于小麦穗下茎组织细胞固定、透射电子显微镜下对超微结构的观察
用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，步骤如下：
(1)吸取固定液2-3ml置入容积5ml的小玻璃瓶中，然后冷却至4℃，得样品固定液，固定液通过如下方法配制：
将戊二醛和多聚甲醛分别加入至pH7.2的磷酸缓冲液中，使戊二醛得终浓度为2.5％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为3％(重量体积百分比，g/ml)，磷酸缓冲液终浓度为100mM；
(2)将穗下茎切成1m3的组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，小瓶用橡胶瓶盖盖紧；
(3)将医用注射器针头插入步骤(2)制得的用橡胶瓶盖盖紧的小瓶内，抽气3-5分钟，以样品全部沉到瓶底为准；然后将器皿放入超声波清洗器，使器皿的80％没入清洗槽的水中，调整水温至4-8℃，工作频率40-60kHz，功率0.3-0.6w/cm2，清洗2-5分钟，得清洗样品；
(4)将步骤(3)制得的清洗样品在4℃下固定2-4小时，得经前处理的植物样品。
(5)按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)49-66页的记载，随后的操作步骤与常规超薄切片的制作相同。
将最终制作的小麦穗下茎秆组织细胞超薄切片在透射电子显微镜下观察，观察结果如图1所示(标尺＝1μm)。
对照例
按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)49-66页的记载进行操作，将最终制作的小麦穗下茎秆组织细胞超薄切片在透射电子显微镜下观察，观察结果如图2所示(标尺＝1μm)。
通过将实施例1的结果图1与对照例的结果图2进行比较，可以得出，用本发明制作的超薄切片所观察的小麦茎秆组织细胞其超微结构观察效果显著提高，即使衰老的茎细胞其叶绿体中类囊体片层也非常清晰，说明本发明可有效对表面有较厚蜡质角质层、硅质细胞层的小麦茎组织细胞超微结构快速固定。
实施例2、用于小麦穗下茎组织固定、光学显微镜下对显微结构的观察
用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，步骤如下：
(1)吸取固定液2-3ml置入容积8ml的小玻璃瓶中，然后冷却至4℃，得样品固定液，固定液通过如下方法配制：
将戊二醛和多聚甲醛分别加入至pH7.2的磷酸缓冲液中，使戊二醛得终浓度为2.5％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为3％(重量体积百分比，g/ml)，磷酸缓冲液终浓度为100mM；
(2)将穗下茎切成3m3的组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，小瓶用橡胶瓶盖盖紧；
(3)将医用注射器针头插入步骤(2)制得的用橡胶瓶盖盖紧的小瓶内，抽气5-8分钟，以样品全部沉到瓶底为准；然后将器皿放入超声波清洗器，使器皿的80％没入清洗槽的水中，调整水温至4-8℃，工作频率40-60kHz，功率0.3-0.6w/cm2，清洗3-5分钟，得清洗样品；
(4)将步骤(3)制得的清洗样品在4℃下固定2-4小时，得经前处理的植物样品。
(5)按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)49-66页和68页的记载，随后的操作步骤与常规超薄切片的制作相同。
将最终制作的小麦穗下茎秆组织细胞超薄切片在光学显微镜下观察，观察结果如图3所示(标尺＝200μm)。
对照例
按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)49-66页和68页的记载进行操作，将最终制作的小麦穗下茎秆组织细胞超薄切片在光学显微镜下观察，观察结果如图4所示(标尺＝200μm)。
通过将实施例2的结果图3与对照例的结果图4进行比较，可以得出，用本发明制作的半超薄切片所观察的小麦茎秆组织细胞其显微结构观察效果显著提高，其薄壁细胞中叶绿体数目明显多于对照例中的叶绿体数目，说明本发明可有效对材料体积较大、表面有较厚蜡质角质层、硅质细胞层的小麦茎组织细胞显微结构快速固定。
实施例3、用于小麦穗下茎组织表面的固定、扫描电子显微镜下对表面形态结构的观察
用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，步骤如下：
(1)吸取固定液2-3ml置入容积10ml的小玻璃瓶中，然后冷却至4℃，得样品固定液，固定液通过如下方法配制：
将戊二醛和多聚甲醛分别加入至pH7.2的磷酸缓冲液中，使戊二醛得终浓度为2.5％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为3％(重量体积百分比，g/ml)，磷酸缓冲液终浓度为100mM；
(2)将小麦叶片组织切成3m3的组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，小瓶用橡胶瓶盖盖紧；
(3)将医用注射器针头插入步骤(2)制得的用橡胶瓶盖盖紧的小瓶内，抽气5-8分钟，以样品全部沉到瓶底为准；然后将器皿放入超声波清洗器，使器皿的80％没入清洗槽的水中，调整水温至4-8℃，工作频率40-60kHz，功率0.3-0.6w/cm2，清洗3-5分钟，得清洗样品；
(4)将步骤(3)制得的清洗样品在4℃下固定2-4小时，得经前处理的植物样品。
(5)按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)89-99页的记载，随后的操作步骤与常规超薄切片的制作相同。
将最终制作的小麦穗下茎组织表面在扫描电子显微镜下观察，观察结果如图5所示(标尺＝30μm)。
对照例
按照《实用电子显微镜技术》(ISBN：978-7-206-05491-4，2007年12月出版)89-99页的记载进行操作，将最终制作的小麦穗下茎组织表面在扫描电子显微镜下观察，观察结果如图6所示(标尺＝30μm)。
通过将实施例3的结果图5与对照例的结果图6进行比较，可以得出，用本发明制作的超薄切片所观察的小麦穗下茎组织表面非常洁净，其气孔等表面形态结构观察效果显著提高，说明本发明可有效对表面有白色蜡质层的小麦茎组织表面进行有效清洗。
Claims (8)
1.用于显微镜观察的植物样品的前处理方法，其特征在于，步骤如下：
(1)吸取固定液2-3ml置入容积5-10ml的器皿中，然后冷却，得样品固定液；
(2)将植物组织切成1-3m3的组织块，然后置入步骤(1)制得的样品固定液中，密封器皿；
(3)对步骤(2)制得的密封后的器皿抽气，使植物组织块全部沉到器皿底部；然后将器皿放入超声波清洗器，调整水温，工作频率40-60kHz，功率0.3-0.6w/cm2，清洗2-5分钟，得清洗样品；
(4)将步骤(3)制得的清洗样品在4℃下固定2-4小时，得经前处理的植物样品。
2.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中的固定液通过如下方法配制：
将戊二醛和多聚甲醛分别加入至磷酸缓冲液中，使戊二醛的终浓度为2.2-2.8％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为2.8-3.2％(重量体积百分比)，磷酸缓冲液终浓度为100mM。
3.如权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述戊二醛的终浓度为2.5％(体积百分比)，多聚甲醛的终浓度为3％(重量体积百分比)。
4.如权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述重量体积百分比单位为：g/ml。
5.如权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述的磷酸缓冲液的pH＝7.2。
6.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤(1)中的冷却温度为4-8℃。
7.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤(3)将器皿放入超声波清洗器，使器皿的80％没入清洗槽的水中。
8.如权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述步骤(3)中调整水温至4-8℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110003216XA CN102175501A (zh) | 2011-01-07 | 2011-01-07 | 用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110003216XA CN102175501A (zh) | 2011-01-07 | 2011-01-07 | 用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102175501A true CN102175501A (zh) | 2011-09-07 |
Family
ID=44518709
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110003216XA Pending CN102175501A (zh) | 2011-01-07 | 2011-01-07 | 用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102175501A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103033401A (zh) * | 2011-09-30 | 2013-04-10 | 汕头大学 | 一种大型海藻离体染色表皮片层的快速制片方法 |
| CN104949869A (zh) * | 2015-05-29 | 2015-09-30 | 浙江大学 | 一种由多聚甲醛固体试剂快速获得高效甲醛固定液的方法 |
| CN107132097A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-09-05 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种适合观察橡胶树花器官解剖结构的切片方法 |
| CN111982629A (zh) * | 2020-08-25 | 2020-11-24 | 北京市农林科学院 | 一种食用菌组织细胞的超薄冷冻切片方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002000849A1 (fr) * | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Renomedix Institute Inc. | Fraction cellulaire contenant des cellules capables de se differencier en cellules du systeme nerveux |
| US20050203022A1 (en) * | 1997-04-18 | 2005-09-15 | Biogen Idec, Inc. | Type II TGF-beta receptor/immunoglobulin constant region fusion proteins |
| CN101024090A (zh) * | 2007-02-08 | 2007-08-29 | 中国农业大学 | 一种基因传递复合物及其制备方法 |
-
2011
- 2011-01-07 CN CN201110003216XA patent/CN102175501A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050203022A1 (en) * | 1997-04-18 | 2005-09-15 | Biogen Idec, Inc. | Type II TGF-beta receptor/immunoglobulin constant region fusion proteins |
| WO2002000849A1 (fr) * | 2000-06-26 | 2002-01-03 | Renomedix Institute Inc. | Fraction cellulaire contenant des cellules capables de se differencier en cellules du systeme nerveux |
| CN101024090A (zh) * | 2007-02-08 | 2007-08-29 | 中国农业大学 | 一种基因传递复合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 《中国皮革》 20060930 石碧 《植物鞣剂-醛类化合物结合鞣法（I）植物鞣剂-改性戊二醛结合鞣法》 全文 1-8 第35卷, 第17期 * |
| 《华东师范大学学报（自然科学版）》 20040930 张利华等 《戊二醛固定剂对海洋微微型浮游植物特性的影响》 全文 1-8 , 第3期 * |
| 付洪兰: "《实用电子显微镜技术》", 31 July 2004 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103033401A (zh) * | 2011-09-30 | 2013-04-10 | 汕头大学 | 一种大型海藻离体染色表皮片层的快速制片方法 |
| CN103033401B (zh) * | 2011-09-30 | 2015-11-18 | 汕头大学 | 一种大型海藻离体染色表皮片层的快速制片方法 |
| CN104949869A (zh) * | 2015-05-29 | 2015-09-30 | 浙江大学 | 一种由多聚甲醛固体试剂快速获得高效甲醛固定液的方法 |
| CN107132097A (zh) * | 2017-06-29 | 2017-09-05 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种适合观察橡胶树花器官解剖结构的切片方法 |
| CN107132097B (zh) * | 2017-06-29 | 2020-05-05 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种适合观察橡胶树花器官解剖结构的切片方法 |
| CN111982629A (zh) * | 2020-08-25 | 2020-11-24 | 北京市农林科学院 | 一种食用菌组织细胞的超薄冷冻切片方法 |
| CN111982629B (zh) * | 2020-08-25 | 2023-11-17 | 北京市农林科学院 | 一种食用菌组织细胞的超薄冷冻切片方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rothwell et al. | Fluorescent analysis of Drosophila embryos | |
| CN105713871A (zh) | 一种人绒毛膜间充质干细胞的分离培养方法 | |
| CN102175501A (zh) | 用于显微镜观察的植物样品的前处理方法 | |
| CN112834737A (zh) | 一种用于整体组织样本的精准免疫荧光标记方法 | |
| CN105746494B (zh) | 一种含有d-海藻糖的人类精子冷冻保护剂及其制备方法 | |
| de los Ríos et al. | Preparative techniques for transmission electron microscopy and confocal laser scanning microscopy of lichens | |
| CN110892890B (zh) | 一种血管的低温保存方法及复温方法 | |
| CN104152408B (zh) | 亚全能干细胞的制备方法 | |
| CN1522766A (zh) | 脱细胞真皮基质的制备方法 | |
| Chemes | Ultrastructural analysis of testicular tissue and sperm by transmission and scanning electron microscopy | |
| CN107129962B (zh) | 一种日本医蛭唾液腺细胞的原代培养方法 | |
| RU2484446C1 (ru) | Способ подготовки образцов биопленок микроорганизмов для исследования в сканирующем электронном микроскопе | |
| JP2021512330A (ja) | スフェロイドを透明化するための組成物、これを使用するスフェロイドを透明化するための方法、およびこれを備えるキット | |
| CN103333234B (zh) | 冬油菜根质外体抗冻蛋白的提取方法 | |
| CN109122665A (zh) | 以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用 | |
| CN104975002A (zh) | 微小体型鞘翅目昆虫触角的快速分离方法 | |
| CN110777116B (zh) | 肿瘤样本前处理方法 | |
| CN104208751A (zh) | 一种新型肾脏去细胞生物支架的制备方法 | |
| CN110592005A (zh) | 间充质干细胞的分离方法 | |
| CN103589680B (zh) | 一种海洋弹性蛋白酶myroilysin在制备无细胞真皮基质中的应用 | |
| CN2271927Y (zh) | 人羊膜基底膜侵袭模型 | |
| CN113736667A (zh) | 一种长柄类大型真菌的超大原生质体及其制备方法 | |
| CN114533957A (zh) | 胎盘平滑绒毛膜脱细胞外基质材料的制备方法 | |
| CN106613838B (zh) | 一种提高拟南芥茎尖超低温保存后再生率的方法 | |
| Ramirez-Camacho et al. | Streamlined chemical fixation method for morphological investigation of Candida albicans with scanning electron microscopy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20110907 |