CN102108346A - 一种溶菌酶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种溶菌酶的制备方法，具体步骤为：(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2～5；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1～6％；(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80～100℃；(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1～50转/min，离心时间为1～10min，得到上清液；(4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，得到溶菌酶。本发明的优点：缩短生产风期、简化工艺流程、大幅度提高生产率、降低成本，用途广泛。
Description
【技术领域】
本发明涉及溶菌酶制备技术领域，具体地说，是一种溶菌酶的制备方法。
【背景技术】
溶菌酶(lysozyme)是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，又称胞壁质酶(murami2dase)。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初，英国细菌学家Flem2ing在发现青霉素的前6年(1922年)发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶，因其具有溶菌作用，故命名为溶菌酶。此后人们在人和动物的多种组织、分泌物、某些植物、微生物中也发现了溶菌酶的存在；其中鸡蛋清溶菌酶的研究和应用已相当深入和广泛。另外随着基因工程技术的发展，通过人工合成基因，用微生物发酵生产人溶菌酶的研究也正在深入进行之中。
六十年代以后，随着生物化学和技术的发展，促进了溶菌酶生产应用的研究，近年来，溶菌酶已广泛应用于人类生产的各个领域，其中包括医药、生物和食品工业。目前，工业生产溶菌酶，主要是从鸡蛋清中提取，另外蛋壳也可作为溶菌酶的来源。从蛋清中提取溶菌酶的方法有直接结晶法、离子交换法和亲和层析法；用这几种方法生产的产品纯度较高，但存在着工艺复杂，成本较高等的缺点，不能满足各个领域的需要。
【发明内容】
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种溶菌酶的制备方法；以达到缩短生产风期、简化工艺流程、大幅度提高生产率、降低成本的目的。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2～5，pH值优选为3～4；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1～6％，碱金属氯化物的质量百分数优选为3～4％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钠或者氯化钾，优选为氯化钠；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80～100℃，溶液温度优选为85～95℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1～50转/min，离心速度优选为10～50转/min，离心时间为1～10min，离心时间优选为3～7min；得到上清液；
(4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，优选为真空干燥，得到溶菌酶。
本发明制备的溶菌酶的应用：
医学上应用：作为一种具有杀菌作用的天然抗感染物质。有抗菌、抗病毒、止血、消肿止痛及加快组织恢复功能等作用；临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘、带状疱疹和扁平疣等；也可与抗菌药物合用治疗各种细菌和病毒感染；口服和肌注均有效；口服，3～5片/次(肠溶片含10mg)，3次/日；口含，1片/次(口含片含20mg)，4～6次/日；外用：以1％～2％溶液滴注、涂擦或直接喷粉；肌注，50mg～100mg/次，1～2次/日；滴眼：用2％溶液；副作用，偶有较轻的过敏反应；氯化溶菌酶医疗效果更广，有浓痰分散、出血抑制、组织修复、消炎镇痛、抗过滤性病毒等作用，因而用氯化溶菌酶的制药有消炎消痔、治感冒、皮肤病及眼、鼻、喉等用药。
食品保藏应用：可作为防腐剂，它的主要功用是水解细菌细胞壁，在细胞内，则对吞噬后的病原菌起破坏作用，该酶对革兰氏阳性菌中的枯草杆菌、耐辐射微球菌有分解作用；对大肠杆菌、普通变形菌和副溶血性弧菌等革兰氏阴性菌也有一定程度溶解作用，其最有效浓度为0.05％；与植酸、聚合磷酸盐、甘氨酸等配合使用，可提高其防腐效果。
与现有技术相比，本发明的积极效果是：
(1)本发明加入酸，降低体系pH值，就可破坏上述络合物的形成，使得溶菌酶与酸作用生成相应的盐，这样有利于溶菌酶的制备；
(2)本发明加入了碱金属氯化物，这对提高溶菌酶活性、破坏悬浊体的稳定性，以及改善溶菌酶的提取率，均有一定的促进作用；
(3)本发明的反应体系温度提高到80℃以上，可使鸡蛋白中大量的其他蛋白质凝聚，而溶菌酶由于其耐热性较高则不会凝聚仍在上清液中，这样也可以促进溶菌酶与其他蛋白质分开；
(4)本发明用途广泛，可用于医疗和食品等相关领域。
【具体实施方式】
以下提供本发明一种溶菌酶的制备方法的具体实施方式。
实施例1
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钠；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为2转/min，离心时间为1min；得到上清液；
(4)将上清液进行真空干燥，得到溶菌酶。
实施例2
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为3；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为2％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钠；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至85℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为10转/min，离心时间为3min；得到上清液；
(4)将上清液进行真空干燥，得到溶菌酶。
实施例3
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为3；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为3％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钠；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至90℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为30转/min，离心时间为5min，得到上清液；
(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。
实施例4
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为4，再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为5％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钾；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至95℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为40转/min，离心时间为8min，得到上清液；
(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。
实施例5
一种溶菌酶的制备方法，其具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为5；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为6％；
所述的碱金属氯化物选自氯化钾；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至100℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为50转/min，离心时间为10min，得到上清液；
(4)将上清液进行冷冻干燥，得到溶菌酶。
本发明加入酸，降低体系pH值，就可破坏上述络合物的形成，使得溶菌酶与酸作用生成相应的盐，这样有利于溶菌酶的制备。
本发明加入了碱金属氯化物，这对提高溶菌酶活性、破坏悬浊体的稳定性，以及改善溶菌酶的提取率，均有一定的促进作用。
本发明的反应体系温度提高到80℃以上，可使鸡蛋白中大量的其他蛋白质凝聚，而溶菌酶由于其耐热性较高则不会凝聚仍在上清液中，这样也可以促进溶菌酶与其他蛋白质分开。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，具体步骤为：
(1)配置溶液：取100ml的水溶液，用醋酸调节其pH值为2～5；再加入碱金属氯化物，碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为1～6％；
(2)将步骤(1)得到的溶液加热至80～100℃；
(3)再加入蛋清进行搅拌，然后离心，离心速度为1～50转/min，离心时间为1～10min，得到上清液；
(4)将上清液进行真空干燥或者冷冻干燥，得到溶菌酶。
2.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的用醋酸调节溶液的pH值为3～4。
3.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的碱金属氯化物在水溶液中的质量百分数为3～4％。
4.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的碱金属氯化物选自氯化钠或者氯化钾。
5.如权利要求4所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，所述的碱金属氯化物为氯化钠。
6.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的溶液温度为85～95℃。
7.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的离心时间为3～7min。
8.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的离心速度为10～50转/min。
9.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(4)中，所述的的上清液处理方式为真空干燥。
10.如权利要求1所述的一种溶菌酶的制备方法，其特征在于，所述的溶菌酶在医学领域和食品包藏领域中的应用。
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