CN102085248B - 一种治疗宫颈疾病的中药组合物及其制备方法和检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗宫颈疾病的中药组合物，含有以下重量份的组分：椿皮：35-45；苦参：25-35；牡丹皮：25-35；乳香：25-35；冰片：0.8-1.2，其中苦参和牡丹皮、乳香等量。本发明还提供了上述中药组合物的检测方法以及其凝胶剂的制备方法。本发明的中药组合物在保证苦参和牡丹皮、乳香含量相同的基础上调整了椿皮和冰片的含量，疗效更确切，通诸药和合，共奏清热燥湿，祛瘀生肌之功；其凝胶剂的制备方法是对各个组分进行分别提取，然后制备凝胶剂，方法简单，适合工业化生产，药效成分提取率高，节约成本；另外本发明还提供了该中药组合物的检测方法，其干扰小，结果重复性好，可有效鉴别该中药组合物的成分和含量。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，具体的说涉及一种治疗宫颈疾病的中药组合物及其制备方法和检测方法。
背景技术
宫颈炎是临床常见的一组临床症候。宫颈糜烂是慢性宫颈炎中的最为主要的局部病变，是妇科的常见病、多发病。其发病率占妇科疾病的50％以上。经研究表明，宫颈糜烂与宫颈癌的发生有着重要关系。宫颈糜烂患者的宫颈癌变率为2.5％，较非宫颈糜烂患者高6倍。
西医认为，宫颈糜烂是慢性宫颈炎的最常见的临床表现。其病因多为长期慢性机械性刺激与损伤，如分娩、流产或手术损伤等为主根诱因，致使病原体侵入而引起，急性感染期不积极治疗，渐渐形成慢性宫颈炎，使宫颈主要产生糜烂的病理变化。宫颈糜烂病理上认为主要是宫颈表面的鳞状上皮脱落，为柱状上皮所代替，上皮下血管显露的结果。近年来的研究又表明宫颈糜烂与全身的免疫机制、有着极大的关系。结果表明：人乳头瘤病毒16型(HPV-16)、人疱疹病毒2型(HSV-2)巨细胞病毒(CMV)和沙眼衣原体(CT)的感染与宫颈糜烂的发生关系密切。当病毒感染机体细胞后，可以直接对机体免疫产生影响，此影响包括两方面：一是免疫抑制，二是免疫促进，且以免疫抑制为主。
西医治疗宫颈糜烂，首选物理疗法，其次为外用药物。长期应用物理疗法可产生很多副作用，且疗后易复发，同时又有禁忌证；西药外用药多为腐蚀性药物，对比较表浅、面积比较小的病灶有一定的作用，但治疗多不彻底，长期用药与物理治疗可引起诸多副作用，且撤停后易复发。
祖国医学认为宫颈糜烂形成原因是湿毒内侵和湿热互结流注下焦，致任脉不固，带脉失约，胞脉气血失和，宫颈局部气血阻滞，邪瘀致腐。经现代中医研究表明，宫颈糜烂病因复杂，但其主要是湿邪为主，病位在胞宫，与脾肾二脏关系密切，病机主要为湿邪损伤任、带二脉，胞脉气血失和，日久子门局部则湿热瘀积、热毒壅滞、血瘀致腐。同时现代也有专家认为宫颈糜烂与肝也有一定的关系。肝经湿热下注，可直接损伤任带经脉，而致本病。综上可见，湿邪在宫颈糜烂的发病过程中有着重要的作用，所以宫颈糜烂的治疗务在祛湿。近年来，中医工作者对中医药治疗宫颈糜烂的有效性进行了大量的观察，结果表明，中药对于宫颈糜烂有较好的治疗作用，而且能减少物理疗法的副作用和疾病复发率，中医治疗宫颈糜烂由此而已成为临床上普遍采用的方法之一。
由于其病位比较特殊，内服药物作用比较缓慢，不易于直达病位，所以近年来的中医对宫颈糜烂的治疗多为外治法。归纳近年来的文献报道，常用的外治宫颈糜烂的中药大致分为以下几类：①收湿、消肿、敛疮、祛腐、生肌药；②清热、解毒、燥湿、凉血药；③活血、化瘀、散肿药。剂型多为散剂、栓剂、丸剂、片剂、膏剂、糊剂等。由此可见，治疗宫颈糜烂用药要以燥湿或祛湿药为主，并辅以活血凉血，生肌敛疮药为主。
本发明提供一种能够治疗宫颈疾病的中药组合物及其制备方法和检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗宫颈疾病的中药组合物；
本发明的另一目的是提供中药组合物凝胶剂的制备方法；
本发明还提供该中药组合物的检测方法。
本发明所述的中药组合物，含有以下重量份的组分：椿皮：35-45；苦参：25-35；牡丹皮：25-35；乳香：25-35；冰片：0.8-1.2，其中苦参和牡丹皮、乳香等量。
优选含有以下重量份的组分：椿皮：40；苦参：30；牡丹皮：30；乳香：30；冰片：1，其中苦参和牡丹皮、乳香等量。
椿皮：《药典》：性苦、涩、寒，归大肠、胃、肝经。功能清热燥湿，收涩止带，止泻，止血。用于赤白带下，湿热泻痢，久泻久痢，便血，崩漏等。《食疗本草》：“女子血崩及产后血不止，月信过多，亦止赤带下。”《本草纲目》：“椿根白皮，性凉而能涩血。信湿热为病，泻痢浊带，精滑梦遗诸证，无不用之。”《雷公炮制药性解》：“得溺涩。”《本草易读》：“杀诸般疳虫，蛔虫，鬼疰，传尸，赤白带浊之疾。”
苦参：《药典》：性苦，寒。归心、肝、胃、大肠、膀胱经。功能清热澡湿，杀虫，得尿。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；外治滴虫性阴道炎。《本经》：“主心腹结气，徵瘕积聚，黄疸，溺有余沥，逐水，除痈肿，补中，明目止泪。”《别录》：“养肝胆气，安五脏，安志益精，得九窍，除伏热肠辟，止渴，醒酒，小便黄赤，疗恶疮下部慝，平胃气，令人嗜食轻身。”《滇南本草》：“凉血，解热毒，疥癞，脓窠疮毒最良。疗皮肤瘙痒，各有风癣疥，顽皮白悄，肠风下血，便血。消风，消肿毒，清痰毒。”现代药理研究表明，本品有抗炎、增进免疫、抗病原微生物等作用(《中华本草》)。
牡丹皮：《药典》：性苦、辛，微寒。归心、肝、肾经。功能清热凉血，活血化瘀。用于温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，痈肿疮毒，跌扑伤痛。《本经》：“主寒热泪盈眶，中风瘛疭、惊痫邪气，除徵坚瘀血留胃，安五脏，疗痈疮。”《药性论》：“治冷气，散诸痛。治女子经脉不通，血沥腰疼。”《日华子》：“除邪气，悦色，通关腠血脉，排脓，通月经，消扑损瘀血，续筋骨，除风痹，落胎下胞，产后一切女人冷热血气。”张洁古：“能泻阴胞中之火。”《纲目》：“和血、生血、凉血，治血中伏火，附烦热。”现代药理研究表明，本品有抗菌、增进免疫、抗出血等作用。(《中华本草》)。
乳香：性辛，苦、微温。归心、肝、脾经。功能活血行气，通经止痛，消肿生肌。用于心腹疼痛，风湿痹痛，经闭痛经，跌打瘀痛，痈疽肿毒，肠痈，疮溃不敛等。《别录》：“疗风水毒肿，去恶气。疗气瘾疹痒毒。”《日华子》：“下气益精，补腰膝，治肾气，止霍乱，冲恶中邪气，心腹痛疰气。煎膏，止痛长肉。《纲目》：“通血脉，止大肠血痢疼痛及妇人气逆血滞，心腹作痛。”《本草拾遗》：“疗耳聋，中风口噤，妇人血气，能发酒，理风冷，止大肠泄澼，疗诸疮令内消。”现代药理研究表明，本品有抗炎、增进免疫、降胆固醇和镇痛等作用(《中华本草》)。
冰片：性辛，苦，凉。功能开窃醒神，散热止痛，明目去翳。主治中风口噤，热泪盈眶病神昏，惊痫痰迷，气闭耳聋，目赤翳膜，喉痹，口疮，痈肿，痔疮，蛲虫病。《海药本草》：“主内外障眼，三虫，治五痔，明目，镇心，秘精。”《新修本草》：“主心腹邪气，风湿积聚，耳聋，明目，去目赤肤翳。”《医林篡要·药性》：“生肌止痛。”《本草元命苞》：“通关膈热塞，得闭壅风涎，点内外障视物不睹，退目赤痛，肤翳侵睛。能镇惊明目，善安神秘精。治心腹邪气，去风湿耳聋。”现代药理研究表明，本品有良好的抗炎、抗菌作用(《中华本草》)。
本发明以椿皮清热祛湿为君药；以等量的清热燥湿之苦参和清热凉血之牡丹皮为臣药，辅助君药以增强清热除湿作用；乳香、冰片为佐药，化瘀，止痛，清热，生肌，提高治疗效果。
本发明的中药组合物可以采用本领域常用的方法制成各种剂型，为施用方便，优选凝胶剂。
本发明还提供上述中药组合物的凝胶剂的制备方法：
1)椿皮加2-9倍量水，加水煎煮1-3次，每次煎煮1-2.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10(60℃)的椿皮清膏；
2)苦参加6-12倍量水，加水煎煮1-3次，第一次煎煮前浸泡0.5-1.5小时，每次煎煮0.5-3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10～1.15(60℃)的苦参清膏，放冷，加乙醇使含醇量达60-70％，静置8-24小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，与椿皮清膏合并，浓缩至相对密度1.05～1.10(60℃)的清膏；
3)乳香加6-10倍量水，蒸馏5-9小时，收集挥发油；
4)牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集质量为4-8倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集质量为2-4倍药材量的蒸馏液，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；
5)取药用羧甲基纤维素钠、药用甘油加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6)取冰片加入乳香的挥发油，丹皮酚结晶用乙醇溶解后，加入羟苯乙酯和聚山梨酯-80，搅拌使溶解后，加入到步骤5)得到的溶胀的溶液中，加水混匀，放置12-36小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。
其中羧甲基纤维素钠、药用甘油、羟苯乙酯和聚山梨酯-80是凝胶剂常用的药用辅料，其用量可根据本领域技术人员的要求进行调整；优选的，羧甲基纤维素钠、药用甘油的用量分别是所用冰片重量的0.6-1.5重量份，羟苯乙酯和聚山梨酯-80的用量分别是所用冰片重量的0.01-0.1重量份。
所述凝胶剂中有效成分的浓度可根据制备过程中的加水量和辅料量进行调整，所得凝胶剂为所用中药原料药总重量的0.1-0.2重量份，优选0.15重量份。
本发明所述的中药组合物清热燥湿，祛瘀生肌，用于湿热瘀阻所致带下量多，色黄或白，或呈脓性；腰腹坠胀，或小便淋漓涩痛；或阴痒，口苦咽干，舌红，苔黄或腻，脉弦或滑，以及宫颈炎有上述见症者。
另外，本发明还提供上述中药组合物的检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法：
本发明中药组合物的所述鉴别方法包括以下一种或多种方法：
(1)取1g样品，加水30ml，充分搅拌，室温放置30分钟，超声处理5分钟，移置分液漏斗，加10-30ml乙醚提取1-3次，合并乙醚液，室温挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(10∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；
(2)依照鉴别方法(1)配制样品溶液，取0.5ml，加甲醇至5ml作为供试品溶液；另取冰片对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(10∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的磷钼酸乙醇试液显色，置105℃加热至斑点清晰；
(3)取1g样品，加水30ml，搅匀，放置30分钟，超声处理5分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml，搅匀，移至分液漏斗中，以10-30ml三氯甲烷提取1-3次，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取苦参对照药材1g，加三氯甲烷25ml、浓氨试液0.5ml，密塞，时时振摇，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(2∶3∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新制的碘化铋钾试液，加热至斑点显色清晰；
所述鉴定方法(3)中，苦参的对照品还可为苦参碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；或同时选用苦参对照药材和苦参碱制成对照药材溶液和对照品溶液，进行薄层色谱检测。
利用上述薄层液相色谱法鉴别，本发明中药组合物的有效成分的分离效果好，阴性干扰小，供试品色谱在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，能够显相同颜色斑点，因此上述方法可以用于鉴别本发明的中药组合物。
(4)酸度鉴别：取1.0克样品，加水50ml，搅拌使分散后，室温放置30分钟，超声处理5分钟，依法测定(中国药典2005年版一部附录VI H)，pH值为4.5～6.0。
本发明中药组合物的所述含量测定方法是采用高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定有效组分的含量，包括：
1)对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥10-14小时的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品，加流动相分别制成每1ml含苦参碱、氧化苦参碱各40μg的溶液；
2)供试品溶液的制备：取样品，充分研匀，精密称定1.5-2.5g，置100ml烧杯中，加水50ml，搅匀，室温放置30分钟，超声处理(功率300W，频率25KHz)5分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml，搅匀，移至分液漏斗中，用20-40ml三氯甲烷提取1-3次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，移至50ml量瓶中，并加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液A(测定氧化苦参碱)；精密量取A溶液5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液B(测定苦参碱)；
3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液A、B各10μl，注入液相色谱仪，测定；
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％三氟醋酸溶液(3.5∶96.5)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按苦参碱计应不低于2000。
本发明的中药组合物中，每1g含苦参以苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量计，不得少于5.0mg。
通过对含量的调整，本发明的中药组合物在保证苦参和牡丹皮含量相同的基础上调整了椿皮和冰片的含量，疗效更确切，诸药和合，共奏清热燥湿，祛瘀生肌之功，与现有的椿乳相比，能够全方位地针对适应病证及证候特点，符合中医理论及临床实际，主要药效学试验结果表明，本发明的中药组合物对于磷酸组胺所致的豚鼠致痒阈有升高的作用，说明其有较好的止痒作用，而且对于白色念珠菌、乙型溶血性链球菌、金葡菌、表葡菌、大肠杆菌、变形杆菌有较好的体外抑制作用；本发明还针对各组分的特点，对各个组分进行分别提取，结合凝胶剂的生产流程，提出了本发明所述中药组合物的凝胶剂的制备方法，方法简单，适合工业化生产，药效成分提取率高，节约成本；制得的药物有效成分含量足，疗效好；另外本发明还提供了该中药组合物的检测方法，其分离效果好，阴性干扰小，结果重复性好，可有效鉴别该中药组合物的成分和含量。
附图说明
图1为本发明中药组合物凝胶剂对小鼠热板法致痛作用的影响。
图2为苦参碱含量测定的HPLC图。
图3为氧化苦参碱含量测定的HPLC图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。如非特别指明，实施例中采用的标准品来自中国药品生物制品检定所。
实施例1
【处方】
椿皮2000g 苦参1500g 牡丹皮1500g
乳香1500g 冰片50g
【制法】
1)椿皮加水煎煮2次，第一次加6倍量水，煎煮2小时，第二次加4倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05(60℃)的清膏
2)苦参加水煎煮二次，第一次加9倍量水浸泡1小时，煎煮2小时，第二次加7倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10(60℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达65％，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，与上述椿皮清膏合并，浓缩至相对密度1.05(60℃)的清膏；
3)乳香加8倍量的水，蒸馏7小时，收集挥发油，备用；
4)牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集蒸馏液约9000ml，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集蒸馏液约4500ml，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶，备用；
5)另取药用羧甲基纤维素钠40g、药用甘油50g加入到上述椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6)取冰片加入乳香挥发油，丹皮酚结晶加乙醇50ml，加入羟苯乙酯2g和聚山梨酯-802g，搅拌使溶解后，加入到上述溶胀的溶液中，加蒸馏水至1000g，搅拌30分钟，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。
实施例2
【处方】
椿皮2250g 苦参1250g 牡丹皮1250g
乳香1250g 冰片40g
【制法】
1)提取：椿皮加水煎煮3次，第一次加9倍量水，煎煮2.5小时，第二次加6倍量水，煎煮1小时，第三次加2倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10(60℃)的清膏；
2)苦参加水煎煮3次，第一次加12倍量水浸泡1.5小时，煎煮3小时，第二次加9倍量水，煎煮1小时，第三次加6倍量水，煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.15(60℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达60％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，与上述清膏合并，浓缩至相对密度1.10(60℃)的清膏；
3)乳香加6倍量的水，蒸馏9小时，收集挥发油，备用；
4)牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集蒸馏液约12000ml，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集蒸馏液约6000ml，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶，备用；
5)取药用羧甲基纤维素钠30g、药用甘油75g加入到上述清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6)取冰片加入上述挥发油，丹皮酚结晶加乙醇60ml，加入羟苯乙酯0.5g、聚山梨酯-800.5g，搅拌使溶解后，加入到上述溶胀的溶液中，加蒸馏水至1000g，搅拌30分钟，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装，即得凝胶剂。
实施例3
【处方】
椿皮1750g 苦参1750g 牡丹皮1750g
乳香1750g 冰片60g
【制法】
1)提取：椿皮加水煎煮1次，加9倍量水，煎煮2.5小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.05(60℃)的清膏；
2)苦参加水煎煮1次，加12倍量水浸泡1.5小时，煎煮3小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.10(60℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达60％，静置8小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，与上述清膏合并，浓缩至相对密度1.05(60℃)的清膏；
3)乳香加10倍量的水，蒸馏5小时，收集挥发油，备用；
4)牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集蒸馏液约6000ml，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集蒸馏液约3000ml，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶，备用；
5)取药用羧甲基纤维素钠75g、药用甘油30g加入到上述清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6)取冰片加入上述挥发油，丹皮酚结晶加乙醇60ml，加入羟苯乙酯5g、聚山梨酯-805g，搅拌使溶解后，加入到上述溶胀的溶液中，加蒸馏水至1000g，搅拌30分钟，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装，即得凝胶剂。
实施例4
(1)取实施例1和2制备的凝胶剂各1g，按照以下方法配制成供试品溶液：加水30ml，充分搅拌，室温放置30分钟，超声处理5分钟，移置分液漏斗，加乙醚振摇提取3次(30ml、20ml、10ml)，合并乙醚液，室温挥干，残渣加甲醇1ml使溶解；
另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(10∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色和斑点。
(2)取鉴别方法(1)配制供试品溶液各0.5ml，加甲醇至5ml作为供试品溶液。另取冰片对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(10∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的磷钼酸乙醇试液显色，置105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显两个相同颜色的斑点。
(3)取实施例1和2制备的凝胶剂各1g，按照以下方法配制成供试品溶液：加水30ml，搅匀，放置30分钟，超声处理5分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml，搅匀，移至分液漏斗中，以三氯甲烷振摇提取3次(30ml、20ml、20ml)，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取苦参对照药材1g，加三氯甲烷25ml、浓氨试液0.5ml，密塞，时时振摇，放置24小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取苦参碱对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(2∶3∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新制的碘化铋钾试液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
(4)酸度检测：取实施例1和2制备的凝胶剂各1.0克，分别加水50ml，搅拌使分散后，室温放置30分钟，超声处理5分钟，依法测定(中国药典2005年版一部附录VI H)，pH值分别为5.1和5.3。
实施例5
照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。
对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时的苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，加流动相分别制成每1ml含苦参碱、氧化苦参碱各40μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取实施例1制备的凝胶剂的内容物，置研钵中，充分研匀，精密称定2.120g，置100ml烧杯中，加水50ml，搅匀，室温放置30分钟，超声处理(功率300W，频率25KHz)5分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml，搅匀，移至分液漏斗中，用三氯甲烷提取3次(40ml，30ml，30ml)，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，移至50ml量瓶中，并加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液A(测定氧化苦参碱)；精密量取5ml供试品溶液A，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液B(测定苦参碱)。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液A、B各10μl，注入液相色谱仪，测定；
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％三氟醋酸溶液(3.5∶96.5)为流动相；检测波长为220nm。理论板数按苦参碱计2400。结果见图2和图3。
实验例
试验材料：
1.试验动物：
豚鼠50只，体重250-300g，雌性，江西医学院动物室提供。合格证号：021-9602。
小鼠昆明种18-22g，♀♂兼用，江西中医学院实验动物中心提供，合格证号：021-9601。
大鼠SD雌性，体重为200-280克左右，江西医学院动物室提供，合格证号：021-9602。
家兔：雌雄兼用，体重(2.5±0.2)kg，江西医学院动物室提供，合格证号：021-9603。
2.药物与试剂：
(1)本发明中药组合物的凝胶剂(简称椿乳)，规格：21.83g生药/ml，批号：020424；由中南大学湘雅二医院临床药学研究室提供。
赋形剂：0.4％羧甲基纤维素钠，临用前用蒸馏水配成0.4％羧甲基纤维素钠，由中南大学湘雅二医院临床药学研究室提供。
豚鼠的给药剂量为：
椿乳高剂量：实施例1和2制备的10ml椿乳原液加基质(0.4％羧甲基纤维素钠)至20ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：2.5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为2.73g生药/ml；
小鼠用给药剂量为：
椿乳高剂量：10ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：2.5ml椿乳原液加基质至20ml即可，浓度为2.73g生药/ml；
大鼠用给药剂量为：
椿乳高剂量：20ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：10ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低剂量：5ml椿乳原液加基质至40ml即可，浓度为2.73g生药/ml；
家兔用药剂量为：
椿乳高剂量：50ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为10.92g生药/ml；椿乳中剂量：25ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为5.46g生药/ml；椿乳低高剂量：12.5ml椿乳原液加基质至100ml即可，浓度为2.73g生药/ml。
(2)冰乙酸：500ml/瓶，AR，株洲市九州化学试剂厂，批号：990114
0.6％醋酸：取0.6ml冰醋酸加生理盐水至100ml，
(3)杜冷丁：规格：50mg×1ml，青海制药厂，批号：010408，取杜冷丁1支，加基质至50ml，即为1mg/ml，20mg/Kg；
(4)复方黄松洗液：广西源安堂药业有限公司，250ml/瓶，外洗用，批号：200204162，使用时用其原液；
(5)磷酸组胺：5克/瓶，中科院上海生化所东风生化技术公司，批号：9303044；用时精密称取磷酸组胺0.05g，加蒸馏水至50ml，配成0.1％磷酸组胺50ml；
取0.1％磷酸组胺1，2，3...8，9ml，加蒸馏水至10ml，为0.01％-0.09％磷酸组胺。
(6)二甲苯，CA，湖北大学化工厂，批号：960818
(7)强的松：5mg×100片，浙江仙居制药有限公司生产，批号020502；
(8)金葡菌液：来源于江西省妇幼保健院，病人阴道分泌物新近培养，临用前配成108个/L；
(9)白色念珠菌：来源于江西省妇幼保建院从阴道分泌物中新近分离，临用前挑起少许菌苔进行接种；
(10)表皮葡萄球菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、乙型链球菌、淋球菌：均来源于江西省妇幼保建院从阴道分泌物中新近分离；
(11)葡萄糖酚红肉汤配方：肉汤100ml(PH7.6)；葡萄糖1g；1％酚红溶液0.5ml，用于金葡菌、表葡菌、大肠埃希氏菌、变形杆菌和绿脓杆菌培养；
(12)血清肉汤配方：肉汤100ml(PH7.6)；葡萄糖1g；1％酚红溶液0.5ml，兔无菌血清1ml，用于乙型链球菌和淋球菌培养；
(13)沙保弱氏液体培养基配方：蛋白胨1g，葡萄糖4g，蒸馏水100ml，用于白色念珠菌的培养。
3.给药容量：家兔阴道给药为0.5ml/Kg；豚鼠足背涂药容量为0.2ml/每只；小鼠阴道给药容量为0.2ml/每只，大鼠阴道给药容量为0.2ml/每只。
4.仪器与设备
722分光光度计：上海第三分析仪器厂；
OLYMPUS显微镜：台湾生产；
数显恒温水浴锅，江苏金坛市医疗仪器厂；
PYX-DSH-40×50型隔水式电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂；
YXQ.SG41.020型电热手提式压力蒸汽灭菌器，上海医用核子仪器厂；
SWCG-1C型洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司。
5.统计处理
实验数据用SPSS系统进行统计处理，根据数据的分布情况用t检验(正态)，或t’(非正态)检验，以得出相应结论。
试验方法与结果：
一、本发明中药组合物凝胶剂(椿乳)对磷酸组胺所致豚鼠致痒阈的影响
试验方法与结果：
1.动物分组：随机分为5组，每组10只，即椿乳凝胶剂低剂量组(2.73g生药/ml)、中剂量组(5.46g生药/ml)、高剂量组(10.92g生药/ml)，复方黄松洗液组(原液)，以及基质组(0.4％羧甲基纤维素钠)。
2.对照组豚鼠、复方黄松洗液组豚鼠、椿乳低、中、高剂量组豚鼠右后足背剃毛、并涂以相应药物1次，剃毛面积约为1cm2，涂药容量为0.2ml左右，用小鼠灌胃针头均匀地涂在去毛皮肤表面，用纱布包裹胶布固定接触4小时；第二天对照组、复方黄松洗液组、椿乳低、中、高剂量组豚鼠右后足背均用粗砂纸擦伤，以渗血为度(擦伤者没有参与分组，不知道豚鼠的组别)，并涂以相应药物1次，涂药容量为0.2ml左右，用小鼠灌胃针头均匀地涂在去毛皮肤表面；30分钟后，洗净创面，用纱布轻轻擦干患处，以0.01％、0.02％、0.03％...递增浓度，每隔三分钟一次，每次均为0.05ml/只，直至出现豚鼠舔后足时，记录给予的磷酸组胺总量为致痒阈，各组豚鼠致痒阈见下表：
表1：千金椿乳凝胶剂对磷酸组胺所致小鼠致痒阈的影响
采用t检验，与基质组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
从上表可以看出，除椿乳凝胶剂低剂量组外，中、高剂量组的椿乳凝胶剂及复方黄松洗液组均能提高磷酸组胺所致豚鼠致痒阈，说明此药有明显的止痒作用。
二、对小鼠镇痛作用的影响(扭体法)：
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，杜冷丁组、模型组和对照组。
2.观察指标：模型组和对照组给予0.4％羧甲基纤维素钠，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；给药60分钟后，除对照组腹腔注射生理盐水，各鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，观察10分钟内各组出现扭体反应小鼠只数(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)和次数，结果见下表。
表2千金椿乳凝胶剂对小鼠镇痛作用的影响
结果采用t检验，与基质组比较，△P＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
从上表可以看出，腹腔注射0.6％冰醋酸可致小鼠出现疼痛反应。模型组小鼠扭体反应次数明显增多，说明造模是成功的，除杜冷丁组可明显减少小鼠扭体反应次数和只数，椿乳低、中、高剂量组均不能明显减少小鼠扭体反应只数和次数，说明其镇痛效应不明显。
三、对小鼠镇痛作用的影响(热板法)：
1.动物分组：动物随机分为5组，每组14只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，杜冷丁组、对照组(基质组)。
2.观察指标：雌性小鼠90只，将恒温水浴调节至55±0.5℃，金属盘底接触水面，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间作为该鼠的痛阈值，以痛阈值在5-30秒内为合格，筛得小鼠共70只，按其痛阈值进行随机分组，分组同上，对照组给予0.4％羧甲基纤维素钠，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口，每日给药一次，连续3天，于末次给药后30、60、120、240分钟分别测小鼠痛阈值，计算其痛阈提高百分率，痛阈提高率用下公式计算。结果见表3、表4和图1。
表3：千金椿乳凝胶剂对小鼠热板法致痛作用的影响
与生理盐水组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表4：千金椿乳凝胶剂对小鼠热板法痛阈提率的影响
与基质组相比，△P＜0.05，△△P＜0.01。
从表3、4和图1可看出，杜冷丁组在给药后30分钟就能明显提高小鼠痛阈值，在60、90、120分钟时也作用明显，而椿乳不同剂量组对小鼠痛阈值无明显的提高作用，说明椿乳的镇痛作用不明显。
四、对小鼠抗炎作用的影响(耳廓肿胀法)
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，强的松组、复方黄松洗液组和对照组。
2.观察指标：对照组给予0.4％羧甲基纤维素钠，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；30分钟后左耳廓涂100％二甲苯0.02ml/只，4小时后，将小鼠拉脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下两耳，用8mm直打孔器分别在同一部位打下圆耳片，扭力天平称重；每鼠左耳片减去右耳片重即为肿胀度。结果见下表。
表5千金椿乳凝胶剂对小鼠耳廓肿胀的影响
结果采用t检验，与生理盐水组比较，△P＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
从上表可以看出，除强的松组小鼠耳廓肿胀度有明显减轻，其他各组小鼠耳廓肿胀度与基质组的判别不明显，说明椿乳低、中、高三个剂量组和复方黄松洗液组对二甲苯所致小鼠耳廓炎症无明显的抑制作用。
五、对金葡菌所致大鼠细菌性阴道炎的影响
试验目的：通过损伤大鼠阴道壁再加上接种金葡菌造成大鼠阴道炎模型，给予药物，观察药物对动物的整体状况、阴道充血水肿、阴道涂片检查白细胞和细菌、及病理检查结果的改变，来衡量药物对细菌性阴道炎的治疗作用。
1.动物分组：动物随机分为6组，每组10只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，复方黄松洗液组、模型组和正常对照组。
2.观察指标：各组大鼠均用7号磨钝针头在阴道壁上由内到外每只鼠划30次，由一人操作，以保证力度均匀一致，除对照组外，其他各组均注入108个/L金葡菌液0.2ml，用凡士林封住阴道口；第二天除对照组外，其余各组镜下均见明显WBC增多，涂片中有大量金葡菌，阴道分泌物增多，阴道粘膜充血、肿胀，表面覆盖有白色物；第三天起，对照组给予0.4％羧甲基纤维素钠，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；每天肉眼观察各组动物的整体状态、阴道有无充血肿胀，并涂片检查其阴道分泌物中炎症细胞和细菌，第七天给药5小时后做阴道分泌物涂片，看WBC和金葡菌；脱颈椎处死大鼠，取出其阴道，观察其阴道粘膜有无充血、水肿情况，再将阴道放入Bolin氏固定液中，送做病理切片检查；
3、制定阴道炎疗效评价以阴道组织的病变大体观察为判定标准，见下表。
表6金葡菌性阴道炎大鼠评分标准
4、结果：
(1)一般观察：实验大鼠造型后除1例大鼠出现死亡外，其余状态尚可，饮食及排泄正常，毛色光滑。
(2)阴道局部病变肉眼观察：大鼠造型后第1-3天阴道出现明显的充血、肿胀，分泌物大量增加，表面覆盖大量白色粘性分泌物。在第1-3天阴道分泌物涂片，可见有大量的炎细胞及金葡菌，模型建立各组间综合分值没有明显差异。于造模第三天开始给药，大、中剂量组于给药第三天开始，阴道局部充血、水肿、分泌物、粘膜糜烂减轻，于4-5天有轻微的充血肿胀，第七天阴道病变除个别有轻度充血肿胀其余均恢复正常，综合分值与模型组、赋形剂组比较有极显著差异。小剂量组和阳性药组于给药4-5天时病变也明显减轻，在第7天，阴道局部病变多数基本恢复正常，综合分值与模型组、正常对照组比较也有检显著性差异，具体见表7。
(3)阴道涂片检查：各组造型后阴道分泌物涂片均呈阳性，可见有大量的金葡菌和脱落上皮细胞和炎细胞。给药后第7天，模型组10例、正常对照组0例涂片可见有金葡菌及大量炎细胞和坏死脱落上皮细胞。给药组除椿乳凝胶小剂量组3例和阳性药可见有金葡菌外，椿乳凝胶大中剂量组仅有1和2例有金葡菌，仅见有少量炎细胞和脱落的上皮细胞，具体情况见表8。
(4)组织学检查：基质组各层组织结构正常，上皮无破损，糜烂，粘膜未见充血及水肿，粘膜下层及肌层未见异常；模型组阴道粘膜下层及肌层出现明显充血水肿，上皮可见部分残缺；低剂量组粘膜及粘膜下层充血水肿减轻，有1例上皮残缺；中剂量组部分大鼠阴道粘膜可见充血肿胀，部分组织结构恢复正常；高剂量组大鼠部分阴道粘膜有轻度充血水肿，部分组织结构完全恢复正常；阳性药组大鼠部分阴道粘膜有轻度充血水肿，部分组织结构完全恢复正常。
表7椿乳凝胶剂对金葡菌性阴道炎病变综合分值的影响(X±SD)
结果采用t检验，与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
表8对阴道分泌物涂片(WBC和金葡菌)的影响
结果采用卡方检验，与生理盐水组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
六、对白色念珠菌所致家兔霉菌性阴道炎的影响[5]
试验目的：通过损伤家兔阴道壁再加上接种白色念珠菌造成家兔霉菌性阴道炎模型，给予药物，观察药物对动物的整体状况、阴道充血水肿、阴道涂片检查白细胞和细菌、及病理检查结果的改变，来衡量药物对霉菌性阴道炎的治疗作用。
试验方法与结果：
1.动物分组：动物随机分为7组，每组8只，即椿乳凝胶剂低、中、高剂量组，复方黄松洗液组、模型组和正常对照组和空白对照组(只划痕不接种霉菌)。
2.观察指标：各组家兔均用用接种针在家兔阴道壁上轻轻划痕，以有损伤但不出血为度，划30下，用接种环挑起少许白色念珠菌接种于损伤处，其中空白对照只划痕不接种白色念珠菌；第二天起除空白对照组外，其余各组镜下均见明显WBC增多，涂片中有大量白色念珠菌，阴道分泌物增多，阴道粘膜充血、水肿，表面覆盖有白色物；其中空白对照组也有阴道轻度充血，涂片中也有白细胞但未有白色念珠菌；第三天起，空白对照组和模型组给予0.9％生理盐水，其他各组均阴道给予相应药物0.2ml，用凡士林封闭阴道口；每天观察各组动物的整体状态、阴道有无充血肿胀，并涂片检查其阴道分泌物中炎症细胞和霉菌，第六天给药5小时后做阴道分泌物涂片，看WBC和白色念珠菌；空气栓塞处死大鼠，取出其阴道，观察其阴道粘膜有无充血、水肿情况，再将阴道放入Bolin氏固定液中，送做病理切片检查；
3、制定阴道炎疗效评价以阴道组织的病变大体观察为判定标准，见下表。
表9霉性阴道炎家兔评分标准
4、结果：
(1)一般观察：实验家兔造型后除对空白照组外，其余各组较差，饮食及排泄正常，给药后能恢复正常。
(2)阴道局部病变肉眼观察：实验家兔造型后第1-3天阴道出现明显的充血、肿胀，分泌物大量增加，表面覆盖大量白色粘性分泌物，呈豆腐渣样。在第1-3天阴道分泌物涂片，可见有大量的炎细胞及白色念珠菌，模型建立各组间综合分值没有明显差异。而空白组(划痕未接种霉菌组)在第三天时阴道充血肿胀基本消失，说明未接种霉菌者轻度的损伤可以自己恢复，造模组出现的一系列表现是由于感染霉菌所致。于造模第三天开始给药，高、中、低剂量组及阳性药组于给药第二天开始，阴道局部充血、水肿减轻，分泌物减少，于4-5天有轻微的充血肿胀，第6天阴道病变除个别有轻度充血肿胀其余均恢复正常，综合分值与模型组、基质组比较有极显著差异，具体情况见表10。
(3)阴道涂片检查：各组造型后阴道分泌物涂片均呈阳性，可见有大量的白色念珠菌和脱落上皮细胞和炎细胞。给药后第6天，模型组8例、基质组8例、正常对照组0例涂片可见有白色念珠菌及较多炎细胞。给药组除椿乳凝胶低剂量组2例和阳性药2例可见有白色念珠菌外，椿乳凝胶高中剂量组仅有1例有白色念珠菌，仅见有少量炎细胞，具体情况见表11。
(4)组织学检查：模型组和赋形剂组阴道粘膜表面有脱落、不整齐，各层充血水肿、粘膜下炎细胞浸润，腔内充满炎细胞及白色念珠菌。除低剂量组织粘膜下层轻度充血、水肿，少量炎细胞外，其他阴道粘膜上皮细胞与正常阴道组织无区别(病理报告和照片附后)。
表10椿乳凝胶剂对白色念珠菌性阴道炎病变综合分值的影响(X±SD)
结果采用t检验，与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
表11对阴道白色念珠菌和白细胞的影响
结果采用卡方检验，与生理盐水组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；；与模型组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001.
七、体外抑菌试验[7]
试验目的：采用一定的培养基对新近分离的阴道细菌或霉菌进行培养，观察药物的体外抑菌作用。
(一)致病菌培养基的选择及菌液的选择及菌液的制备
1、乙型溶血性链球菌用1％血清(新鲜脱纤维兔血清)肉汤培养基，传代二次实验菌斜面(血琼脂)用接菌环均匀刮取菌苔移种于1ml血清肉汤培养基中，置恒温箱37℃培养18小时。再用血清肉汤培养基按1∶10稀释备用。
2、白色念球菌传代二次新鲜斜面接种于沙保弱氏氏培养基、放置37℃恒温培养6小时，备用。
3、其它菌均用葡萄糖酚红营养肉汤培养基，将实验菌斜面用接种环均匀刮取菌苔移种于葡萄糖酚红营养肉汤培养基中置37℃培养6小时，以上除溶血性链球菌外再用营养肉汤按1∶1000稀释备用。
(二`)受试药采用试管二倍稀释法[8][9]测定药物最低抑菌浓度(MIC)
用相应的培养基按倍数稀释各受试药物(1∶4-1∶1024)每一株菌都做平行试验，每管1ml接种试验菌液0.1ml，充分混匀后置37℃培养箱18h取出，观察细菌生长情况，再做无菌试验，每管用接种环取培养液接种于营养琼脂(血、沙氏)平板上置37℃培养18h后无细菌生长可判定该管细菌被药物全部杀死，此管药物浓度作为该药物对该菌的最低杀菌浓度(MBC)。
结果：椿乳凝胶对金葡菌、表葡菌、大肠杆菌、白色念珠菌MIC为1.36g生药/ml；对变形杆菌MIC为5.46g生药/ml；对绿脓杆菌无作用；对乙型溶血性链球菌MIC为2.73g生药/ml；基质(0.4％羧甲基纤维素钠)对细菌生长无作用；复方黄松洗液对金葡菌的MIC为1∶32原液；对表葡、白念的MIC为1∶16原液；对大肠、变形为1∶16原液，对乙型溶血性链球菌的MIC为1∶4。
表12椿乳凝胶对7种菌株体外抑菌作用的结果
注：*有药无菌的药物对照，**有菌无药的细菌对照(以下同)
-表示无菌生长，+表示有菌生长
表13复方黄松洗液对7种菌株体外抑菌作用的结果
注：*有药无菌的药物对照，**有菌无药的细菌对照(以下同)
-表示无菌生长，+表示有菌生长
结论
1、千金椿乳凝胶剂(5.46g生药/ml、10.92g生药/ml)对于磷酸组胺所致的豚鼠致痒阈有升高的作用，说明其有较好的止痒作用；
2、千金椿乳凝胶剂各剂量组对于热刺激(热板)和化学刺激(冰醋酸)所致的小鼠痛阈和扭体次数没有减少或降低的作用，说明其阴道给药时镇痛作用不明显；
3、千金椿乳凝胶剂低、中、高剂量组对于二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀率无明显的抑制作用，说明其抗炎作用不明显；
4、千金椿乳凝胶剂低(2.73g生药/ml)、中(5.46g生药/ml)、高剂量药物(10.92g生药/ml)对于金葡菌所致的大鼠阴道炎有明显的抑制作用，可明显减轻金葡菌所致的大鼠阴道充血、肿胀、可减少或消除阴道局部的金葡菌和炎症细胞，并可改善金葡菌所致的阴道炎大鼠阴道病理状态；
5、千金椿乳凝胶剂低(2.73g生药/ml)、中(5.46g生药/ml)、高剂量药物(10.92g生药/ml)对于白色念珠菌所致的家兔阴道炎有明显的抑制作用，可明显减轻白色念珠菌所致的家兔阴道充血、肿胀、可减少或消除阴道局部的金葡菌和炎症细胞，可改善白色念珠菌所致的阴道炎家兔阴道病理状态；
6、千金椿乳凝胶剂于白色念珠菌、乙型溶血性链球菌、金葡菌、表葡菌、大肠杆菌、变形杆菌有较好的体外抑制作用。
Claims (2)
1.一种治疗宫颈疾病的凝胶制剂，其活性成分由以下重量份的中药制成：椿皮：2000g；苦参：1500g；牡丹皮：1500g；乳香：1500g；冰片：50g；其辅料是羧甲基纤维素钠、药用甘油、羟苯乙酯和聚山梨酯-80，其中，羧甲基纤维素钠、药用甘油、羟苯乙酯和聚山梨酯-80的用量分别为40g、50g、2g、2g，其制备方法包括以下步骤：
1）椿皮加水煎煮2次，第一次加6倍量水，煎煮2小时，第二次加4倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.05的清膏；
2）苦参加水煎煮二次，第一次加9倍量水浸泡1小时，煎煮2小时，第二次加7倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度1.10的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达65%，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，与上述椿皮清膏合并，浓缩至60℃时相对密度1.05的清膏；
3）乳香加8倍量的水，蒸馏7小时，收集挥发油，备用；
4）牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集蒸馏液9000ml，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集蒸馏液4500ml，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；
5）取药用羧甲基纤维素钠、药用甘油加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6）取冰片加入乳香的挥发油，丹皮酚结晶用乙醇溶解后，加入羟苯乙酯和聚山梨酯-80，搅拌使溶解后，加入到步骤5）得到的溶胀的溶液中，加水混匀，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。
2.一种制备权利要求1所述的凝胶制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1）椿皮加水煎煮2次，第一次加6倍量水，煎煮2小时，第二次加4倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.05的清膏；
2）苦参加水煎煮二次，第一次加9倍量水浸泡1小时，煎煮2小时，第二次加7倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度1.10的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达65%，静置过夜，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，与上述椿皮清膏合并，浓缩至60℃时相对密度1.05的清膏；
3）乳香加8倍量的水，蒸馏7小时，收集挥发油，备用；
4）牡丹皮用水蒸汽蒸馏法蒸馏，收集蒸馏液9000ml，放置析晶，滤过，丹皮酚结晶另置；水溶液重蒸馏，收集蒸馏液4500ml，放置析晶，滤过，合并丹皮酚结晶；
5）取药用羧甲基纤维素钠、药用甘油加入到椿皮和苦参的混合清膏中，搅匀，放置，使充分溶胀；
6）取冰片加入乳香的挥发油，丹皮酚结晶用乙醇溶解后，加入羟苯乙酯和聚山梨酯-80，搅拌使溶解后，加入到步骤5）得到的溶胀的溶液中，加水混匀，放置24小时使充分溶胀，搅拌均匀，分装即得凝胶剂。
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