CN102076214A

CN102076214A - 释放胃泌素的肽化合物

Info

Publication number: CN102076214A
Application number: CN2009801244462A
Authority: CN
Inventors: L·拉图阿达; E·卡佩勒蒂; K·E·林德; A·D·努恩; L·兰特里
Original assignee: Bracco Imaging SpA
Current assignee: Bracco Imaging SpA
Priority date: 2008-05-19
Filing date: 2009-05-19
Publication date: 2011-05-25
Also published as: WO2009143101A2; US20130136691A1; WO2009143101A3; EP2291075A2; JP2011520971A; EP2291075A4

Abstract

提供了用于诊断、疾病分期，监测药物的治疗效果和将患者成像的方法和组合物，所述组合物包括放射性药物制剂。提供了包括与放射性同位素络合的Ga-AMBA的组合物；也提供了具有释放胃泌素的肽受体(GRP-R)的组织的成像方法和患者的疾病的诊断或疾病分期的方法，所述患者被怀疑具有与异常的GRP-R功能相关的疾病。此外，提供了监测靶向于与GRP-R串流的受体的药物治疗效果的方法；也提供了在含有GRP-R的非靶组织中之前给药/共同给药的方法。特别地，提供了通过使用与GRP-R结合的配体在体内/体外监测受体和受体途径活性的方法；也提供了通过使用这类也可以通过外部方法测定的配体，测量显示与GRP-R串流的受体或受体集团和它们的相关途径的活性的方法。

Description

释放胃泌素的肽化合物

相关申请的交叉参考

本申请要求下述每个申请的权益，并通过引用将其完整地并入本文：2008年2月19日提交的U.S.S.N.61/054,335；2006年2月10日提交的U.S.S.N.11/352,156，其是2005年6月24日提交的U.S.S.N.11/165,721的部分继续申请，其是2004年4月20日提交的U.S.S.N.10/828,925的部分继续申请，其是2003年12月24日提交的国际申请PCT/US2003/041328的部分继续申请，其是2003年1月13日提交的U.S.S.N.10/341,577的部分继续申请，所有上述申请在此通过引用被完整地并入本文。

技术领域

本发明涉及用作诊断显像剂或放射治疗剂的新释放胃泌素的肽(GRP)化合物。这些GRP化合物用可通过体内光学成像来检测的放射性核素或标记物进行标记，并包括在标记物和靶向肽之间使用的新连接基，这提供改进的药代动力学。

本发明也描述了通过使用与GRP受体结合的配体观察药物对释放胃泌素的肽GRP的作用而监测药物活性的方法，所述药物在体内和体外靶向于特定受体和受体通路。更具体地，本发明提供了通过使用与GRP受体结合的可以通过某些外部方法检测的配体测量受体或若干受体以及它们的相关通路活性的方法，所述通路显示与GRP受体的串流。该方法包括放射性核素成像、光学成像或配体在体内或体外分布的其它成像方法。

背景技术

已知放射性药剂(例如诊断显像剂、放射治疗剂)用于检测和治疗癌症的应用。近年来，已发现许多用于癌症检测和/或治疗的部位定向放射性药剂，并这些发现随着药学专业更好地了解这些化合物的特异性、效力和效用而继续增加。

靶向治疗，其中给予药物以使其与在细胞中或在环绕细胞的基质中的特异性受体或途径相互作用，在近年来特别是在癌症领域中已取得了进展。靶向治疗起源于如下想法：在细胞水平单个或有限数量的机理影响给定病理学，但是明确的是耐药性的发展表明适应能力可能由异质性和/或基因组的不稳定性所推动。尽管有靶标的存在，靶向药物失败的一个可能原因是，如果靶向系统被扰乱，存在细胞使用或可以使用的代替的系统，因此允许细胞逃避破坏(细胞死亡)，从而继续发挥功能和存活。

在最近几年约65％的FDA批准的新肿瘤药物需要在标签中表明在给予与靶标相互作用的药物之前在患者中的靶标。尽管存在某些单独的卓越的成就，总体结果未达到最佳。例如，在用

治疗乳腺癌中，其靶向于HER2/neu(ERBB2；EGFR2；表皮生长因子受体(EGFR)家族的成员)，大体存在9％的应答(30％具有HER2/neu，所处理的30％应答)。对于转移的结肠癌，靶向于EGFR的爱必妥具有11-14％的应答，靶向于VEGFR的

具有10％的应答。这种变化的来源之一是在相同的患者中在原始转移瘤中和不同转移瘤之间表型和基因型中已知的异质性。

该异质性可以在肿瘤块的发展之后很快出现，因为已知癌症细胞是遗传不稳定的，它可以作为表型的变化而显现，所述变化由肿瘤细胞在体内所经历的特定的环境所导致，或它可以因为之前的治疗效果而显现。

大多测定基因型或表型的方法包括取活体组织检查样本或血样。活体组织检查易于产生在肿瘤内取样误差，并面临进一步的限制：由于方法的侵入性，不易从患者的相同肿瘤中得到多个样本，也不易从体内多个肿瘤位置得到多个样本。此外，难于从某些组织(例如骨)得到活体组织检查样本。这对于转移至骨的乳腺和前列腺癌是特别相关的。易于获得例如血液或尿液的多个液体样本，但是这面临它们仅仅提供整个身体的平均信号的缺陷。优选能够一次审查身体的所有组织并且能用于多种场合的成像方法。

虽然通常审查一个或最多少量的感兴趣的靶标的固体样本，但是可以审查大量分析物的液体样本，例如通过基因芯片或蛋白质组学芯片测试。虽然可能出现单个物质的给药和成像可能弱于复合组合，但是应该注意到，使用适当的物质可以允许不仅仅审查靶标，还允许审查组成靶系统的多种调节和信号传递途径。在最佳情况中，数据提供靶标以及其相关的系统的功能读出数据。

尽管很多靶向药物具有靶标，使用其在低百分比的患者中有效的靶向药物对于那些无应答的患者是有害的，不仅在更好的治疗开始之前浪费时间，而且由于有毒性效果而没有益处的可能性。它也是对健康系统资源的浪费。例如，在2007年，某些靶向药物的全球销售额预期是在$10-30亿的范围中。某些肿瘤药物在2007年基于第一季度的销售额(x4)是

和

亿。如果这些药物中的大部分用于不应答的患者，这代表一个巨大的金融耗竭，并且对于那些不应答的患者是浪费时间或潜在不良事件。目前使用例如WHO或RECIST标准的形态学标准审查存活的增加测量实体瘤应答。但是，在治疗开始之后，甚至在最佳治疗和应答的最优条件下，花费相当多的时间才可观察到这类形态学应答，在此期间最终非应答者的不适当的治疗可能仍在持续。

进一步描述受体、细胞或一组细胞的应答特征的方法是必需的。在近几年，在形态学应答可检测之前或如果肿瘤形态学没有可预期的变化，日益增多的使用成像在生物化学水平描述肿瘤的应答特征。

实施这类生化成像的最普通的方法是使用F-18氟代脱氧葡萄糖，其报道部分是糖酵解途径(例如葡萄糖代谢)。尽管已得到了某些有希望的结果，却面临降低的特异性，因为在炎症区域摄取也增加，所述摄取的增加可以与肿瘤同时发生或独立地发生，并可以独立地增加或降低肿瘤糖酵解。实际上，糖酵解也是大部分正常组织产生能量的主要形式。因此正常组织可呈现升高的背景，这可能使得分离来源于肿瘤组织的信号变得困难。此外，炎症部位也显示增加的葡萄糖消耗，其对于某些炎症性癌症(例如乳腺癌)是特殊的问题。炎症可能与癌症混淆。此外，作为对肿瘤治疗的正常应答而被刺激的炎症，可能被误认为在肿瘤中糖酵解的增加，和因此治疗的失败。此外糖酵解是大多细胞中基础系统之一，因此是大多药物靶标很远的下游。最终，FDG是产生的回旋加速器，其可以限制它的有效性。

一般性质的其它两种方法是那些使用F-18氟代胸苷测量细胞增殖和F-18氟代胆碱测量脂质周转的方面的方法。每一个这种技术是非常灵敏的，但是因为每种方法测量代谢的某些方面也被正常的细胞所利用，所述方法面临特异性的降低。

需要提供和指示药物在能量产生的基础水平的上游的靶标上，更接近药物靶标的效果的试剂。理想地，需要从多种途径中的一点提供显示对多种药物/靶相互作用的效果的敏感性信息的试剂。

一种方法是直接测量所怀疑的靶标。例如将作放射性标记，在用

治疗之前和之后测量在患者中的分布。结果显示不能预见基于心肌摄取水平的心毒性，仅仅某些已知肿瘤是成像的，其它的肿瘤可以被鉴别。没有尝试预见治疗的应答。另一方面，已显示使用放射性标记F(ab′)₂片段的

在动物系统中治疗的应答。

在体外测试EGFR家族的另一成员，EGFR用于很多临床试验中选择EGFR靶向治疗的患者，FDA需要选择用治疗的患者。尚不清楚其作为应答的预报器的用途。大多EGFR研究没有得到表明患者的哪些子集可能从EGFR-靶向试剂受益最大的数据。在多种恶性肿瘤中，EGFR是不同程度过表达的。正在发展许多EGFR表达和突变的新测试，正在进行大量临床试验以阐明它们在决定EGFR-靶向治疗的患者选择中的作用。

已经在体内用用于治疗表达该靶标的癌症的抗体的放射性标记衍生物(西妥昔单抗

C225)和已知配体、EGF或小分子抑制剂检测EGFR的表达。尽管在某些实例中，在肿瘤组织中放射活性的摄取和由独立方法测得的EGFR的存在之间存在良好的相关，没有尝试预测应答。实际上，显示特异性的阻断研究(用药物)在将通过靶标成像的配体阻断摄取的动物的靶向治疗的给药中使得使用靶标的配体将治疗中涉及的靶标成像的一般问题变得显著。这可能导致与应答没有关系的信号衰减或消失，除非在靶标占据和应答之间存在单一和直接关系。从尽管已知靶标的存在而患者的应答低来看显然可能不是这样的。

对于每一个受体或靶标使用特异性配体的另一个缺陷是，已批准了很多对于不同靶标的靶向药物用于更多在临床试验中的常规使用。所需的潜在大量的配体将加重发展和批准进程的负担。此外，即使可能有很多靶向药物，每种都具有良好的应答，但是仅仅在患者的小子集中，才可以预期多种组合可能是有益的，其将再次在一个靶标一种显像剂的情况下，需要多个方法评价应答的可能性。

最后，在很多靶标中已知的突变的出现暗示靶标的存在是不够的，并且需要功能阻断的知识。

因此需要发展测定靶向药物在其靶标功能上的活性的更通用的方法，优选可以报告多于一种靶标/药物相互作用的活性的方法和显示来自正常组织的最小干扰的对病理有特异性的方法。

已知通过靶向药物定位的很多受体显示“串流”。“串流”意指这样一种状态：一种受体活性的调节影响另一种不直接连接的受体的表达水平或活性。这种串流不是由密切相关的酪氨酸激酶EGFR和HER2(所述EGFR和HER2当关联配体结合时形成二聚物)的相互作用所表征的类型，而是不同类型的受体可以通过细胞内或细胞外途径相互作用的类型。例如，已知生长抑素受体的表达水平可以通过雌激素受体的占据和活性来调节。在这种情况下生长抑素受体是通常位于细胞外膜的G蛋白偶联的受体(GPCR)，由此起始信号发生，雌激素受体通常位于接近于细胞核的位置，具有细胞核内的活性。雌激素通过核激素受体起作用，所述核激素受体在激活后增加激素-响应基因的转录和表达。

研究显示，在对雌激素的暴露被拮抗剂或部分激动剂阻断之后，针对于均具有雌激素和生长抑素受体的两种人乳腺癌细胞系，每细胞结合的经放射性标记的生长抑素受体黏合剂增加。类似增加不存在于具有生长抑素受体而不具有雌激素受体的细胞系中。在开始抗雌激素治疗之前和之后不久检查了3名乳腺癌患者。结果中存在一位患者肿瘤摄取中的某些降低。

许多批准的药物直接针对GPCR，但是近年来靶向受体酪氨酸激酶(RTK)的药物变得更普通，并且很多新的癌症药物靶向RTK。例如，下列是已知显示串流的RTK和某些抑制它们的作用的批准的药物的部分列表。

RTK靶标药物

HER2 曲妥珠单抗

EGFR 西妥昔单抗

EGFR 厄洛替尼

EGFR/HER2 拉帕替尼

VEGFR2/PDGFR 索拉非尼

PDGFR 舒尼替尼

EGFR 吉非替尼

PDGFR/KIT 伊马替尼

VEGF/VEGFR2 贝伐珠单抗

由于它们的作用方式，不预期靶向于RTK的药物对GPCR具有任何直接作用。

不广泛分布于正常的成人脑外部组织且已知显示与多种其它受体的串流的一种受体类型是GRP受体家族。在人类中存在3种该受体的已知亚型：通过序列相似性鉴别的BB1(NMBR)、BB2(GRPR)、bb3(BRS-3)和第四个两栖受体bb4。已经独立证明了在GRP受体家族和诸多RTK之间的串流。例如已显示通过激活TNF-α转化酶和释放EGFR的前体配体之一双调蛋白，GRP增EGFR的活化。给予GRP受体拮抗剂导致EGF受体数量的下调。

在这些和很多其它实施例中，串流是以GRPR至RTK(例如EGFR)的方向，即应用GRPR激动剂/拮抗剂导致EGFR信号传导的激活/失活。没有获得证明在相反方向，RTK至GRPR的串流的数据，所述串流可能导致GRP受体特异性信号的表达的增加或减少，所述特异性信号可能通过体内成像测定。

靶向GRP-受体的放射性药剂

最近报道了设计为定位在癌性组织中的若干靶向的放射性药剂。这些较新的放射性药剂通常由与金属螯合剂连接的靶向剂(targeting agent)组成，它们可以与诊断性金属放射性核素(如锝、铟或镓)，或者治疗性金属放射性核素(如镥、钇或铼)螯合(例如络合)。金属螯合剂的作用是当放射性药剂递送至目标部位时保留(即螯合)金属放射性核素。不与金属放射性核素强结合的金属螯合剂将使放射性药剂对其目标应用无效，因为金属放射性核素因此不能到达它的目标部位。因此，进一步的研发导致发现金属螯合剂，例如Pollak等人的美国专利5,662,885以及Tweedle等人的美国专利6,13,274(通过引用将所述文献并入本文)中报道的那些金属螯合剂，所述螯合剂表现出对金属放射性核素的强结合亲和力和与靶向剂缀合的能力。因此，使用“间隔基”以在金属螯合剂和靶向剂之间建立物理分隔的概念被进一步引入，例如在Pollak等人的美国专利5,976,495中，所述文献在此被引入作为参考。

靶向剂由于其在体内对某些结合部位的亲和力而起到的作用在于将诊断剂，例如包含金属放射性核素的放射性药剂定向至检测或治疗的目标部位。典型地，靶向剂可以包括表现出对给定受体具有特异性亲和力的蛋白、肽、其它大分子或小分子。其它已知的靶向剂包括单克隆抗体(MAbs)、抗体片段(F_ab‘s和(F_ab)₂‘s)和受体-亲和肽(receptor-avid peptides)。Donald J.Buchsbaum，“Cancer Therapy with Radiolabeled Antibodies；Pharmacokinetics of Antibodies and Their Radiolabels；Experimental Radioimmunotherapy and Methods to Increase Therapeutic Efficacy，”CRC Press，Boca Raton，Chapter 10，pp.115-140，(1995)；Fischman等人，“A Ticket to Ride：Peptide Radiopharmaceuticals，”The Journal of Nuclear Medicine，vol.34，No.12，(Dec.1993)。这些文献的内容在此被全文引入作为参考。

近几年来，已认识到某些癌细胞包含释放胃泌素的肽(GRP)受体(GRP-R)，其具有多种亚型。具体而言，已表明某些类型的癌细胞具有超表达或独特表达的GRP受体。由于这个原因，已完成许多有关与GRP受体家族结合的GRP和GRP类似物的调查和研究。一种这样的类似物是铃蟾肽(BBN)，一种从蛙皮肤分离的14个氨基酸的肽(即十四肽)，它类似于人GRP，并以高度特异性与GRP受体结合，并具有类似于GRP的亲和力。

铃蟾肽和GRP类似物可以是激动剂或拮抗剂的形式。GRP或BBN激动剂与GRP受体的结合增加这些癌细胞的细胞分裂速率，且这些激动剂被细胞内化，而GRP或BBN拮抗剂的结合通常不导致细胞内化或增加细胞分裂速率。这些拮抗剂被设计用于竞争性抑制与GRP受体的内源性GRP结合，并减小癌细胞增殖的速率。例如参见Hoffken，K.；Peptides in Oncology II，Somatostatin Analogues and Bombesin Antagonists(1993)，pp.87-112。为此原因，大量工作已经并正在进行，意在研发作为拮抗剂的BBN或GRP类似物。例如Davis等人，Metabolic Stability and Tumor Inhibition of Bombesin/GRP Receptor Antagonists，Peptides，vol.13，pp.401-407，1992。

在设计用作癌症的诊断或治疗剂的有效化合物中，药物具有合适的体内靶向和药代动力学性能是重要的。例如，优选放射性药剂、放射性标记肽被癌细胞高度特异性地摄取(例如通过GRP受体)。此外，还优选一旦放射性核素定位在癌部位，则其在那儿保留需要量的时间以允许成像或为了治疗目的将高度局部化的放射剂量递送至该部位。

而且，研发从正常组织有效清除的放射性标记肽对于放射性药剂来说也是一个重要的因素。如果对动物(例如人)施用用金属放射性核素标记(通过螯合物缀合)的生物分子(例如MAb、F_ab或肽)，则大量的金属放射性核素(呈某些化学形式)可能“截留”在肾或肝实质中(即没有排泄进入尿或胆汁)。Duncan等人，Indium-111-Diethylenetri aminepentaacetic Acid-Octreotide Is Delivered in Vivo to Pancreatic，Tumor Cell，Renal and Hepatocyte Lysosomes，Cancer Research 57，pp.659-671，(Feb.15，1997)。对于较小的放射性标记的生物分子(即肽或F_ab)，主要的活性清除途径是通过肾，而肾也可能保留高水平的放射性金属(即通常＞10-15％的注射剂量)。在肾或肝中保留金属放射性核素显然是不期望的。相反，如果需要较长期的诊断成像或放射治疗高肿瘤摄取，则通过肾过快地从血流中清除放射性药剂也是不期望的。

随后的研究，例如Hoffman等人的美国专利6,200,546和US2002/0054855的研究(所述文献的内容在此被全文引入作为参考)已尝试通过形成具有通式X-Y-B的化合物来克服这个问题，其中X为能够络合金属的基团，Y为间隔基上的共价键，而B为结合铃蟾肽激动剂的部分。据报道这些化合物对GRP受体具有高结合亲和力，且其放射性在细胞内长时间地保持。此外，正常小鼠的体内研究已表明肾中保留的放射性金属低于本领域中已知的水平，大部分的放射性排泄进入尿。

仍需要可以靶向于GRP-R和其亚型，具有改善的特异性，并适用于递送诊断部分(例如可检测的标记)和/或治疗部分的化合物。

发明概述

在本发明的一个实施方案中，提供用于诊断成像或放射治疗的新的和改进的化合物。所述化合物包括通过连接基或间隔基与靶向GRP受体的肽连接的能够络合药用金属离子或放射性核素的化学部分(金属螯合剂)。在另一个实施方案中，这些化合物包括通过连接基或间隔基连接到靶向GRP受体的肽上的光学标记(optical label)(例如光学标记(photolabel)或可通过光学成像、光声成像或光致发光检测的其它标记)。

总体而言，本发明的化合物可以具有下式：

M-N-O-P-G

其中M为金属螯合剂(呈与金属放射性核素络合或不络合的形式)、包含例如¹⁸F、¹²³I-、¹²⁴I-或¹³¹I-的放射性卤素的部分或光学标记，N-O-P为连接基，而G为靶向GRP受体的肽。

金属螯合剂M可以是本领域中已知用于与药用金属离子或放射性核素络合的任何金属螯合剂。优选的螯合剂包括DTPA、DOTA、DO3A、HP-DO3A、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、MECAM、Aazta及其衍生物或肽螯合剂，例如本文讨论的那些螯合剂。所述金属螯合剂可以与金属放射性核素络合或不络合，并可以包括任选存在的间隔基，如单一氨基酸。

用于放射成像或放射治疗的优选的金属放射性核素包括^99mTc、⁵¹Cr、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁴⁷Sc、⁵¹Cr、¹⁶⁷Tm、¹⁴¹Ce、¹¹¹In、¹⁶⁸Yb、¹⁷⁵Yb、¹⁴⁰La、⁹⁰Y、⁸⁸Y、¹⁵³Sm、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁵Dy、¹⁶⁶Dy、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁹⁷Ru、¹⁰³Ru、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、²⁰³Pb、²¹¹Bi、²¹²Bi、²¹³Bi、²¹⁴Bi、²²⁵Ac、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Pd、^117mSn、¹⁴⁹Pm、¹⁶¹Tb、¹⁷⁷Lu、¹⁹⁸Au和¹⁹⁹Au。金属的选择根据所需治疗或诊断应用来确定。例如，为诊断目的，优选的放射性核素包括⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、^99mTc和¹¹¹In，特别优选^99mTc、¹¹¹In和⁶⁸Ga。为治疗目的，优选的放射性核素包括⁶⁴Cu、⁹⁰Y、¹⁰⁵Rh、¹¹¹In、¹¹⁷mSn、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁵Yb、¹⁷⁷Lu、^186/188Re和¹⁹⁹Au，特别优选¹⁷⁷Lu和⁹⁰Y。用于本发明化合物的优选的螯合剂为1-取代的4，7，10-三羧甲基1，4，7，10-四氮杂环十二烷三乙酸(DO3A)。

包含例如¹⁸F、¹²³I-、¹²⁴I-或¹³¹I-的放射性标记的卤素的部分优选是描述于Zhang等人J.Nuclear Med.47：492-501(2006)中的那些之一，通过引用将其完整地并入本文。

光学标记M可以是本领域中已知的多种光学标记中的任何一种。优选的标记包括但不限于光学染料，包括有机发色团或荧光团，例如花青染料，吸收光的化合物、反射和散射光的化合物以及生物发光分子。

在一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个非α-氨基酸。

在另一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个取代的胆汁酸。

在另一种实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸。

在最优选的实施方案中，M是金属螯合剂，并且连接基团N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α氨基酸。此外，M可以与放射性或顺磁性金属络合。在一个更优选的实施方案中，M-N-O-P-G是描述于本文的L70或AMBA。在一个特别优选的实施方案中，L70或AMBA与¹⁷⁷Lu络合(¹⁷⁷Lu-AMBA或¹⁷⁷Lu-L70)，或与通过正电子发射断层摄影术(PET)可测定的放射性核素，例如⁶⁸Ga络合(⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70)。

所述靶向GRP受体的肽可以是GRP、铃蟾肽或其任何衍生物或类似物。在一个优选的实施方案中，靶向GRP受体的肽为用作激动剂的GRP或铃蟾肽类似物。在一个特别优选的实施方案中，靶向GRP受体的肽为在美国专利6,200,546和US 2002/0054855中公开的结合铃蟾肽激动剂的部分，所述文献在此被引入作为参考。

也提供了使用本发明化合物的新成像方法。在一个优选的实施方案中，将PET用于GRP-R在组织，特别是具有GRP-R的癌组织中的成像。在一个更优选的实施方案中，将⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70用于GRP-R在人体内组织的成像。

在本发明的一个例示性实施方案中，提供一种包含制备本发明的诊断剂或治疗剂所需的所有组分的单瓶或多瓶试剂盒。

还提供一种用于制备诊断显像剂的新方法，所述方法包括如下步骤：向可注射成像介质中加入包含本发明化合物的物质。

还提供一种使用本发明的化合物进行放射治疗的新方法，所述方法用于治疗或延缓涉及GRP受体过表达的病症的进展，所述病症例如癌症，所述癌症例如乳腺癌和前列腺癌。还提供了一种用于制备放射治疗剂的新方法，所述方法包括如下步骤：向可注射治疗介质中加入包含本发明化合物的物质。在优选的实施方案中，在上述方法中使用¹⁷⁷Lu-AMBA或¹⁷⁷Lu-L70。

提供了改进的施用本发明的标记化合物的方法，作为通过本发明的标记化合物增加表达GRP的靶组织的靶向性的方法。

本发明人出人意料地发现，通过某些RTK或雌激素受体的配体或拮抗剂(包括例如靶向于这类受体的癌症药物)调节所述RTK或雌激素受体的活性，影响GPCR的活性，特别是受体的GRP家族的活性。因此通过GRP受体成像(或其它测定GRP受体中变化的方法)测定该活性能够间接评价受定向于这些RTK或雌激素受体的治疗干预影响的RTK或雌激素受体的活性。因此，本发明提供检测与GRP受体的串流，特别是在RTK或“其它靶”至GRPR方向的串流的方法，所述方法用于表达GRPR(原发和转移瘤)的广谱人实体瘤，所述肿瘤包括，但是不限于乳腺癌和前列腺癌。特别地，通过与上述受体串流的GRP受体的特异性信号的表达变化测定所述效果，评价采用众多类型治疗剂中的任一种的治疗剂对这类受体(例如RTK受体或雌激素受体)功能的效果，所述治疗剂靶向RTK受体或雌激素受体(例如RTK抑制剂、雌激素抑制剂)，在正常的临床状况(剂量和时间表)下给药。本发明提供了通过在体内GRP受体特异性信号活性增加、减少或不变预期治疗反应的功能性指证。在一个优选的实施方案中，本发明靶向GRP-R的化合物与可通过例如SPECT或PET测定的诊断放射性核素络合，其用于监测GRP受体(或M是包括放射性卤素的结构部分，其可以被测定以监测GRP-R反应)中的变化。在一个特别优选的实施方案中，给予⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70并使其成像以测定在体内GRP-R信号活性的变化。

本发明也提供了，在体外使用GRP受体的放射性标记或其它可测定的标记的激动剂或拮抗剂，针对GRP受体家族的活性变化筛选新药的方法。在一个优选的实施方案中，本发明靶向GRP-R的化合物与可通过例如SPECT或PET(或M是包括放射性卤素的结构部分，其可以被测定以监测GRP-R响应)测定的诊断性放射性核素络合。在一个特别优选的实施方案中，给予⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70并使其成像以测定体内GRP-R信号活性的变化。本发明也提供了，使用GRP受体的放射性标记激动剂或拮抗剂将GRP受体家族在体内的活性成像以监测靶向与GRP-R串流的受体的药物的治疗效果的方法。在一个优选的实施方案中，本发明的放射性标记靶向GRP-R的化合物与可通过例如SPECT或PET(或M是包括放射性卤素的结构部分，其可以被测定以监测GRP-R反应)测定的诊断性放射性核素络合。在一个特别优选的实施方案中给予⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70并使其成像以测定体内GRP-R信号活性的变化。

附图的简要说明

图1A是实施例I所述的由A(甲基-(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸酯)和B((3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸)合成中间产物C((3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸)的一系列化学反应的图示。

图1B是实施例I所述的合成N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L62)的连串反应的图示。

图2A是实施例II所述的合成N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L70)的连串反应的图示。

图2B是实施例II所述合成N-[4-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L73)、N-[3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L115)和N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L116)的连串反应的总图示。

图2C是在实施例II所述合成N-[4-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L73)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。

图2D是在实施例II所述合成N-[3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L115)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。

图2E是在实施例II所述合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L116)的图2B的合成反应中所用的连接基的化学结构。

图2F是实施例II所述的合成N-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基-4-哌啶羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L74)的连串反应的图示。

图3A是实施例III所述的合成中间产物(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)的一系列化学反应的图示。

图3B是实施例III所述的合成N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L67)的连串反应的图示。

图3C是实施例III所述的(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸(B)的化学结构。

图3D是实施例III所述的(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)的化学结构。

图3E是实施例III所述的N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L67)的化学结构。

图4A是实施例IV所述的获得中间产物(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸(3a)和(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(3b)的反应流程的图示。

图4B是实施例IV所述的合成N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L63)的连串反应的图示。

图4C是实施例IV所述的合成N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L64)的连串反应的图示。

图4D是实施例IV所述的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(2b)的化学结构。

图4E是实施例IV所述的(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸(3a)的化学结构；

图4F是实施例IV所述的(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(3b)的化学结构。

图4G是实施例IV所述的N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L63)的化学结构。

图4H是实施例IV所述的N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L64)的化学结构。

图5A是实施例V所述的合成4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L71)和反式-4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]环己基羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L72)的连串反应的一般图示，其中连接基分别来自图5B和5C。

图5B是用于图5A所示和实施例V所述的化合物L71的连接基的化学结构。

图5C是用于如图5A所示和实施例V所述的化合物L72的连接基的化学结构。

图5D是实施例V所述的用铃蟾肽[7-14](B)官能化的Rink酰胺树脂的化学结构。

图5E是实施例V所述的反式-4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]环己烷甲酸(D)的化学结构。

图6A是实施例VI所述的合成中间产物连接基2-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯甲酸(E)的反应流程的图示。

图6B是如实施例VI所述的合成中间产物连接基4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸(H)的反应流程的图示。

图6C是实施例VI所述的合成N-[2-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L75)的图示。

图6D是实施例VI所述的合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L76)的图示。

图7A是实施例VII所述的合成中间产物连接基[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸(E)的反应流程的图示。

图7B是实施例VII所述的合成N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L124)的图示。

图7C是实施例VII所述的N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L124)的化学结构。

图8A是实施例VIII所述的合成中间产物4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸(E)的反应流程的图示。

图8B是实施例VIII所述的合成N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L125)的图示。

图8C是实施例VIII所述的N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L125)的化学结构。

图9A是实施例IX所述的合成3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸(B)的反应的图示。

图9B是实施例IX所述的合成6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸(C)的反应的图示。

图9C是实施例IX所述的合成4-[[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酸(D)的反应的图示。

图9D是实施例IX所述的合成N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L146)、N-[3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L233)、N-[6-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]萘甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L234)和N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L235)的反应的图示。

图10A是实施例X所述的合成7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯H的反应的图示。

图10B是实施例X所述的合成N-[4-[[[[[4，10-双(羧甲基)-7-(二羟基氧膦基)甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L237)的反应的图示。

图11A是实施例XI所述的合成N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L238)的反应的图示。

图11B是实施例XI所述的合成N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L239)的反应的图示。

图12A是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸(A)的反应的图示。

图12B是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸(D)的反应的图示。

图12C是实施例XII所述的合成4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸(E)的反应的图示。

图12D是实施例XII所述的N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L240)的化学结构。

图12E是实施例XII所述的化合物N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-氯苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L241)的化学结构。

图12F是实施例XII所述的N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-甲基苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L242)的化学结构。

图13A是实施例XIII所述的合成4-[N，N’-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸(D)的反应的图示。

图13B是实施例XIII所述的合成N-[4-[[4-[双[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙基]氨基-1，4-二氧代丁基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L244)的反应的图示。

图13C是实施例XIII所述的化合物L244的化学结构。

图14A和图14B是实施例XLIII所述的结合和竞争曲线的图示。

图15A是实施例LV所述的放射治疗实验结果的图示。

图15B是实施例LV所述的其它放射治疗实验结果的图示。

图16是N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-L-赖氨酰基-(3，6，9)-三氧杂十一烷-1，11-二甲酸-3，7-二脱氧-3-氨基胆酸]-L-精氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L65)的化学结构。

图17是N-[2-S-[[[[[12α-羟基-17α-(1-甲基-3-羧基丙基)本胆烷-3β-氨基甲酰基甲氧基乙氧基乙氧基乙酰基]-氨基-6-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]己酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L66)的化学结构。

图18A是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L70)的化学结构。

图18B是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]-3-羧基丙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L114)的化学结构。

图18C是N-[4-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]-2-羟基-3-丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L144)的化学结构。

图18D是N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L69)的化学结构。

图18E是N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L146)的化学结构。

图19公开了可以用于制备如实施例LVI所述的化合物L64和L70的中间产物的化学结构。

图20是实施例LVI所述的利用分段偶联制备L64的图示。

图21是制备(1R)-1-(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-3-甲酸-1-羧基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L201)的图示。

图22A是用于制备L202的化学中间产物的化学结构的图示。

图22B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-4-肼基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L202)的图示。

图23A是用于制备L203的化学中间产物的化学结构的图示。

图23B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L203)的图示。

图24是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L204)的图示。

图25是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L205)的图示。

图26A是用于制备L206的化学中间产物的化学结构的图示。

图26B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[4’-氨基-2’-甲基联苯-4-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L206)的图示。

图27A是用于制备L207的化学中间产物的化学结构的图示。

图27B是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[3’-氨基-联苯-3-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L207)的图示。

图28是制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[1，2-二氨基乙基-对苯二甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L208)的图示。

图29A是用于制备L209的化学中间产物的化学结构的图示。

图29B是制备L209的图示。

图30A是用于制备L210的化学中间产物的化学结构的图示。

图30B是L210的化学结构。

图31是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L211的化学结构。

图32是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L212的化学结构。

图33是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-1-蛋氨酸羧酸酯L213的化学结构。

图34是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L214的化学结构。

图35是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-精氨酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L215的化学结构。

图36是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-精氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L216的化学结构。

图37是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-赖氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L217的化学结构。

图38是L218的化学结构。

图39是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-氨基戊基L219的化学结构。

图40是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丝氨酰基-L-缬氨酰基-D-丙氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L220的化学结构。

图41是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰胺L221的化学结构。

图42是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-酪氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酰胺L222的化学结构。

图43是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酰胺L223的化学结构。

图44是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-亮氨酰胺L224的化学结构。

图45是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺L225的化学结构。

图46是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-组氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L226的化学结构。

图47是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺L227的化学结构。

图48是N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺L228的化学结构。

图49A是如实施例LVII所述合成(3β，5β，7α，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(B)的反应的图示。

图49B是如实施例LVII所述合成N-[3β，5β，7α，12α]-3-[[[2-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L69)的反应的图示。

图50是如实施例LVIII所述合成N-[4-[2-羟基-3-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L144)的反应的图示。

图51是L300的化学结构。

图52是L301的化学结构。

图53是如实施例LXII所述制备L500的图示。

图54是如实施例LXIII所述制备L501的图示。

图55是对照组与¹⁷⁷Lu-AMBA(¹⁷⁷Lu-L70)处理一段时间的小鼠出现瘀斑的图示。

图56是测定对照组与¹⁷⁷Lu-AMBA(¹⁷⁷Lu-L70)处理一段时间的小鼠出现瘀斑的试验中对照组小鼠的图片。

图57是测定对照组与¹⁷⁷Lu-AMBA(¹⁷⁷Lu-L70)处理一段时间的小鼠出现瘀斑的试验中试验组小鼠的图片。

图58是GRP受体串流路径的图表。

图59显示通过⁶⁸Ga-AMBA进行癌症的靶向和成像。

申请中使用的缩写词

下面是用于本发明实施例的化学治疗剂的列表，涉及串流的靶标、已批准的化学治疗剂适用癌症的类型以及适用的临床试验的部分列表：

●他莫昔芬(4OH-TAM)：抑制雌激素结合(雌激素受体调节剂-SERM)；批准用于乳腺癌的治疗；在临床试验中用于前列腺癌、卵巢癌、骨癌、肝癌和晚期实体瘤。

●吉非替尼：激酶抑制剂：EGFR；抑制细胞内酪氨酸激酶的磷酸化；批准用于非小细胞肺癌(NSCLC)；在临床试验中用于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、食管癌、脑癌、肝癌和肾癌。

●达沙替尼：Src家族激酶抑制剂；批准用于CML；在临床试验中用于乳腺癌、前列腺癌、脑癌、肝癌、肺癌和结肠直肠癌。

●拉帕替尼：双重激酶抑制剂：EGFR和HER2/ErbB2(和ErbB3)；批准用于乳腺癌；在临床试验中用于前列腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、脑癌，以及晚期实体瘤。

●伊马替尼：多激酶抑制剂：Bcr-Abl酪氨酸激酶；也抑制PDGF、干细胞因子(SCF)和Kit，并且抑制PDGF-和SCF-介导的细胞事件(cellular event)；批准用于CML和胃肠基质瘤(GIST)；在临床试验中用于乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌。

●厄洛替尼：激酶抑制剂：EGFR；批准用于NSCLC和胰腺癌；在临床试验中用于HER2阴性的乳腺癌、前列腺癌、食管癌、结肠直肠癌和脑癌。

●索拉非尼：多激酶抑制剂：PDGFRba/VEGFR1，2，3/KIT，FLT3/EGF/Ras/Raf激酶；批准用于肝细胞癌(HCC)和肾细胞癌(RCC)；在临床试验中用于乳腺癌、前列腺癌、脑癌和晚期实体瘤。

●舒尼替尼：多激酶抑制剂：EGFR、HER2，ErbB3；PDGFα和β；干细胞因子受体(KIT)；FLT3；CSF-1R；嗜神经因子受体(RET)；批准用于RCC和GIST；在临床试验中用于乳腺癌、前列腺癌、脑癌、结肠直肠癌和晚期实体瘤。

●阿那曲唑：芳化酶抑制剂，阻断雌激素/雌二醇(例如肿瘤产生的雌激素)的产生；批准用于乳腺癌；在临床试验中用于卵巢癌和晚期乳腺癌。

●硼替佐米：蛋白酶体抑制剂；阻断泛素途径，导致程序性细胞死亡；批准用于多种骨髓瘤；在临床试验中用于乳腺癌、前列腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、脑癌、结肠直肠癌、NSCLC和晚期实体瘤。

发明详述

在以下说明书中，将进一步详细描述本发明的各方面。为了进行解释，给出了特定的结构构型和细节以使本发明被全面理解。但是，本领域技术人员还可以明显看出可以在不采用特定细节的情况下实施本发明。而且，可以省略或简化已知的特征，其目的在于不使本发明不明确。

在本发明的一个实施方案中，提供用于诊断成像或放射治疗的新的和改进的化合物。所述化合物包括通过连接基或间隔基连接到靶向GRP受体的肽上的光学标记或能够络合药用金属离子或放射性核素的化学部分(金属螯合剂)。

一般地，本发明的化合物可具有下式：

M-N-O-P-G

其中M为金属螯合剂(呈与金属放射性核素络合或不络合的形式)、光学标记或包含放射性标记的卤素(例如¹⁸F、¹²³I-、¹²⁴I-或¹³¹I-)的结构部分。N-O-P为连接基，而G为靶向GRP受体的肽。在以下讨论中描述各金属螯合剂、光学标记、连接基和靶向GRP受体的肽。

在本发明最优选的实施方案中，M是金属螯合剂，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α氨基酸。在另一个优选的实施方案中，M是本文式8的金属螯合剂(优选Aazta螯合剂或其衍生物)，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α氨基酸。在一个更优选的实施方案中，M-N-O-P-Q是本文描述的L70或AMBA。在一个特别优选的实施方案中，L70或AMBA与¹⁷⁷Lu络合(¹⁷⁷Lu-AMBA或¹⁷⁷Lu-L70)，或与可通过正电子发射断层摄影术(PET)测定的放射性核素(例如⁶⁸Ga)络合(⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁸Ga-L70)。

在本发明的另一实施方案中，提供一种能够将光学标记或金属螯合剂连接到靶向GRP受体的肽上的新的和改进的连接基或间隔基。一般地，本发明的连接基可以具有以下式：

N-O-P

其中N、O和P中的每一个在整个说明书中定义。

发现符合本文定义的标准的化合物与本领域中已知的其它靶向GRP受体的肽缀合物相比具有改进的药代动力学性能。例如，包含本发明的连接基的化合物在血流中保留更长时间，并因此具有比先前已知的化合物更长的半衰期。较长的半衰期在医药上是有益的，因为它允许更好的肿瘤靶向，从而用于诊断成像，特别是用于治疗应用，其中癌细胞和肿瘤接收更大量的放射性标记的肽。此外，本发明化合物具有比现有技术的化合物改进的组织受体特异性。

此外，本发明包括增加本发明的标记化合物至表达GRP受体的靶组织的靶向性的方法，包括在本发明的标记化合物给药之前或期间给予适当量的靶向GRP受体的肽或缀合物。类似地，本发明包括本发明标记化合物的改进的给药方法，其中最优选靶向肿瘤，包括在本发明的标记化合物给药之前或期间给予适当量的靶向GRP受体的肽或缀合物。已经发现这类之前或共同给药使非靶向GRP-受体饱和，降低它们靶与GRP受体竞争(例如，肿瘤)组织的能力。

本发明也提供了检测与GRP受体的串流，特别是在RTK或“其它靶”至GRPR方向的串流的方法，用于表达GRPR的人广谱实体瘤(原发瘤和转移瘤)，所述实体瘤包括，但是不限于乳腺癌和前列腺癌。特别地，本发明能够评价，用靶向于RTK受体或雌激素受体(例如RTK抑制剂、雌激素抑制剂)的治疗剂的众多类型中的任一种的治疗在正常的临床状况(剂量和时间表)下给药时，可以对这类受体(例如RTK受体或雌激素受体)具有的功能的效果，如通过在GRP受体显示串流的特异性信号的表达的变化所测定。本发明提供了通过在体内GRP受体特异性信号的活性增加、减少或不变预期的治疗反应的功能性指证。本发明也提供了在体外使用GRP受体的放射性标记或通过其它方式可测定的标记的激动剂或拮抗剂，针对GRP受体家族活性变化，筛选新药的方法。本发明也提供了在体内使用GRP受体的放射性标记激动剂或拮抗剂将GRP受体家族的活性成像的方法。特别地，本发明构思了如US 7,226,577(通过引用将其并入本文)所描述的放射性标记铃蟾肽类似物的用途，以得到体内成像(PET和/或SPECT)以改善患者管理。

1A.金属螯合剂

术语“金属螯合剂”指与金属原子形成络合物的分子，其中该络合物在生理条件下是稳定的。也就是说，该金属将在体内与螯合剂主链保持络合。更具体地，金属螯合剂是与放射性核素金属络合而形成在生理条件下稳定的金属络合物的分子，并且其还具有至少一个用于与连接基N-O-P缀合的反应官能团。该金属螯合剂M可以是本领域中已知用于络合药用金属离子或放射性核素的任何金属螯合剂。该金属螯合剂可以与金属放射性核素络合或不络合。而且，该金属螯合剂可以包括任选的间隔基，例如单一的氨基酸(例如Gly)，其不与金属络合，但在金属螯合剂和连接基之间存在物理分隔。

本发明的金属螯合剂可以包括，例如，线性、大环、三联吡啶和N₃S、N₂S₂或N₄螯合剂(还参见U.S.5,367,080、U.S.5,364,613、U.S.5,021,556、U.S.5,075,099、U.S.5,886,142，所述文献的内容在此被全文引入作为参考)和本领域中已知的其它螯合剂，包括但不限于HYNIC、DTPA、EDTA、DOTA、TETA和双氨基双硫醇(BAT)螯合剂(还参见U.S.5,720,934)。例如在美国专利6,143,274、6,093,382、5,608,110、5,665,329、5,656,254和5,688,487中描述了N₄螯合剂，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。在PCT/CA94/00395，PCT/CA94/00479、PCT/CA95/00249和美国专利5,662,885、5,976,495和5,780,006中描述了某些N₃S螯合剂，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。该螯合剂还可以包括螯合配体巯基-乙酰基-甘氨酰基-甘氨酰基-甘氨酸(MAG3)的衍生物，它包含N₃S，以及N₂S₂系统，例如MAMA(一酰胺单胺二硫醇)、DADS(N₂S二胺二硫醇)、CODADS等。这些配体系统和多种其它配体在Liu和Edwards，Chem Rev.1999，99，2235-2268及其参考资料中作了描述，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。

该金属螯合剂还可以包括含有不以四配位基排列供给金属的配体原子的络合物。这些金属螯合剂包括锝和铼二肟的硼酸加合物，例如在美国专利5,183,653、5,387,409和5,118,797中所述的那些，所述文献的内容在此被全文引入作为参考。

优选的螯合剂的实例包括但不限于二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)、1-取代的1，4，7-三羧甲基1，4，7，10-四氮杂环十二烷三乙酸(DO3A)、乙二胺四乙酸(EDTA)、4-羰基甲基-10-膦酰基甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸(Cm4pm10d2a)；和1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-四乙酸(TETA)。其它螯合配体为亚乙基双-(2-羟基-苯基甘氨酸)(EHPG)及其衍生物，包括5-Cl-EHPG、5-Br-EHPG、5-Me-EHPG、5-t-Bu-EHPG和5-sec-Bu-EHPG；苯并二亚乙基三胺五乙酸(苯并-DTPA)及其衍生物，包括二苯并-DTPA、苯基-DTPA、二苯基-DTPA、苄基-DTPA和二苄基-DTPA；双-2(羟基苄基)-亚乙基-二胺二乙酸(HBED)及其衍生物；包含至少3个碳原子，更优选至少6个碳原子和至少2个杂原子(O和/或N)的大环化合物类，所述大环化合物可以由1个环，或者在杂环元素处结合在一起的2或3个环组成，例如苯并-DOTA、二苯并-DOTA和苯并-NOTA，其中NOTA为1，4，7-三氮杂环壬烷N，N′，N″-三乙酸，苯并-TETA、苯并-DOTMA，其中DOTMA为1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四(甲基四乙酸)，和苯并-TETMA，其中TETMA为1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-(甲基四乙酸)；1，3-丙二胺四乙酸(PDTA)和三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)的衍生物；1，5，10-N，N′，N″三(2，3-二羟基苯甲酰基)-三儿茶酸酯(catecholate)(LICAM)和1，3，5-N，N′，N″-三(2，3-二羟基苯甲酰基)氨基甲基苯(MECAM)的衍生物。其它优选的螯合剂包括Aazta及其包括CyAazta的衍生物。本发明考虑的代表性螯合剂和螯合基的实例公开在以下文献中：WO98/18496、WO 86/06605、WO 91/03200、WO 95/28179、WO 96/23526、WO 97/36619、PCT/US98/01473、PCT/US98/20182和U.S.4,899,755、U.S.5,474,756、U.S.5,846,519和U.S.6,143,274，所述各文献在此被全文引入作为参考。

特别优选的金属螯合剂包括以下所述的式1、2、3和8的金属螯合剂(用于¹¹¹In和放射性镧系，例如¹⁷⁷Lu、⁹⁰Y、¹⁵³Sm、⁶⁸Ga和¹⁶⁶Ho)和式4、5和6的金属螯合剂(用于放射性^99mTc、¹⁸⁶Re和¹⁸⁸Re)。这些和其它金属螯合基在美国专利6,093,382和5,608,110中作了描述，所述文献在此被全文引入作为参考。此外，式3的螯合基例如在美国专利6,143,274中作了描述；式5的螯合基例如在美国专利5,627,286和6,093,382中作了描述，而式6的螯合基例如在美国专利5,662,885、5,780,006和5,976,495中作了描述，所有这些文献被引入作为参考。式8的螯合基描述于共未决的2004年1月15日提交的U.S.S.N10/484,111和2005年6月23日提交的U.S.S.N 11/165,793中，两个文献均被引入作为参考。特定的式6的金属螯合剂包括N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、N，N-二甲基Gly-Thr-Cys、N，N-二乙基Gly-Ser-Cys、N，N-二苄基Gly-Ser-Cys；及其其它变体。例如，实际上不与金属放射性核素络合的间隔基，例如额外的单一氨基酸Gly，可以连接到这些金属螯合剂(例如N，N-二甲基Gly-Ser-Cys-Gly、N，N-二甲基Gly-Thr-Cys-Gly、N，N-二乙基Gly-Ser-Cys-Gly、N，N-二苄基Gly-Ser-Cys-Gly)。其它有用的金属螯合剂，例如所有在美国专利6,334,996中公开的金属螯合剂(也在此被引入作为参考)(例如二甲基gly-L-叔丁基gly-L-Cys-Gly、二甲基gly-D-叔丁基gly-L-Cys-Gly、二甲基gly-L-叔丁基gly-L-Cys等)。

而且，硫保护基如Acm(乙酰氨基甲基)、三苯甲基或其它已知的烷基、芳基、酰基、烷酰基、芳酰基、巯基酰基和有机硫醇基可以连接到这些金属螯合剂的半胱氨酸氨基酸上。

此外，其它有用的金属螯合剂包括：

在以上式1和2中，R为烷基，优选甲基。在以上式5a和5b中，X为CH₂或O；Y为C₁-C₁₀支链或非支链烷基、芳基、芳氧基、芳基氨基、芳基氨基酰基、芳基烷基-其中连接到芳基上的烷基为C₁-C₁₀支链或非支链烷基、C₁-C₁₀支链或非支链羟基或多羟基烷基或多烷氧基烷基或多羟基多烷氧基烷基；J是任选的，但如果存在的则是C(＝O)-、OC(＝O)-、SO₂-、NC(＝O)-、NC(＝S)-、N(Y)、NC(＝NCH₃)-、NC(＝NH)-、N＝N-、均聚酰胺或杂聚胺，其源自合成或天然存在的氨基酸；所有情况下，n为1-100。这些结构的其它变体例如在美国专利6,093,382中作了描述。在式6中，基团S-NHCOCH₃可以被SH或S-Z替换，其中Z为任何已知的硫保护基，如上述的硫保护基。式7例示了用作金属螯合剂的叔丁基化合物的一个实施方案。各前述专利、申请和参考资料的内容在此被全文引入作为参考。

Aazta家族的金属螯合剂通常具有下列通式：(8)：

其中：

R₁是氢、任选用一个或多个羧基基团取代的C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基或两个R₁基团共同形成直链或环状C₂-C₁₀亚烷基基团或邻-二取代的亚芳基；

R₂是氢、羧基或任选经取代的选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基的基团、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团，其中的每一个可以进一步任选用官能团取代，所述官能团能够与适合的分子缀合，所述分子能够与生理系统相互作用；

R₃、R₄和R₅可以是相同的或不同的，是氢、羧基或任选取代的选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基的基团、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团，其中的每一个可能进一步任选用官能团取代，所述官能团能够与适合的分子缀合，所述分子能够与生理系统相互作用；

FG可以是相同的或不同的，是羧基、-PO₃H₂或-RP(O)OH基团，其中R是氢或任选取代的选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基的基团、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团，其中的每一个可能进一步任选用官能团取代，所述官能团能够与适合的分子缀合，所述分子能够与生理系统相互作用。

本领域的技术人员已知，官能团能够与靶分子或其它分子缀合，所述靶分子或其它分子能够与生理系统相互作用。这类基团包括，例如，羧酸、胺、醛、烷基卤、烷基马来酰亚胺、巯基基团、羟基基团等。

这类Aazta金属螯合剂或其衍生物的具体实施例包括，但是不限于CyAazta。Aazta衍生物也包括：

在一个优选的实施方案中，金属螯合剂包括环状或非环状聚氨基羧酸，例如DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)，DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)，DTPA-双甲基酰胺，DTPA-双吗啉酰胺，Cm4pm10d2a(1，4-羰基甲基-10-膦酰基甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸)，DO3A N-[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基、HP-DO3A、DO3A-一酰胺及其衍生物。在另一个优选的实施方案中，金属螯合剂包括Aazta或其衍生物。

用于闪烁照相术或放射治疗优选的金属放射性核素包括^99mTc、⁵¹Cr、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁴⁷Sc、⁵¹Cr、¹⁶⁷Tm、¹⁴¹Ce、¹¹¹In、¹⁶⁸Yb、¹⁷⁵Yb、¹⁴⁰La、⁹⁰Y、⁸⁸Y、¹⁵³Sm、¹⁶⁶Ho、¹⁶⁵Dy、¹⁶⁶Dy、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁹⁷Ru、¹⁰³Ru、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、²⁰³Pb、²¹¹Bi、²¹²Bi、²¹³Bi、²¹⁴Bi、¹⁰⁵Rh、¹⁰⁹Pd、¹¹⁷mSn、¹⁴⁹Pm、¹⁶¹Tb、¹⁷⁷Lu、¹⁹⁸Au和¹⁹⁹Au和它们的氧化物或氮化物。金属的选择将基于所需的治疗或诊断应用而确定。例如，为诊断目的(例如为了诊断和监测原发性肿瘤和转移瘤的治疗进展)，优选的放射性核素包括⁶⁴Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、^99mTc和¹¹¹In，特别优选^99mTc、¹¹¹In和⁶⁸Ga。为治疗目的(例如为了提供对与前列腺、乳腺、肺等的癌症有关的原发性肿瘤和转移瘤的放射治疗)，优选的放射性核素包括⁶⁴Cu、⁹⁰Y、¹⁰⁵Rh、¹¹¹In、¹¹⁷mSn、¹⁴⁹Pm、¹⁵³Sm、¹⁶¹Tb、¹⁶⁶Dy、¹⁶⁶Ho、¹⁷⁵Yb、¹⁷⁷Lu、^186/188Re和¹⁹⁹Au，特别优选¹⁷⁷Lu和⁹⁰Y。

^99mTc是特别有用的，并因为它的低成本、可获得性、成像性能和高特异性活性而优选用于SPECT和平面成像的诊断性放射性核素。^99mTc的核和放射性性能使这种同位素成为理想的闪烁照相显像剂。这种同位素的单光子能量为140keV，而放射性半衰期为大约6小时，并容易从⁹⁹Mo-^99mTc发生器获得。例如，^99mTc标记的肽可以用于诊断和监测原发性肿瘤和转移瘤的治疗进展。

同样地，⁶⁸Ga是特别有用的，因为它是正电子发射断层摄影术(PET)的理想的同位素。它是从⁶⁸锗/⁶⁸镓发生器制备，因此能够不经过回旋加速器使用正电子-发射同位素。若干类型的⁶⁸Ge/⁶⁸Ga发生器对于那些本领域的技术人员是已知的。这些发生器的区别在于用于维持⁶⁸Ge(长命母体同位素)在发生器上的吸附剂(adsorbant)性质，用于将⁶⁸Ga从柱上洗脱下来的洗脱液(参见例如Fania等人，Contrast Media Mol.Imaging2008，367-77；Zhernosekov等人，J.Nucl.Med，2007，48，1741-1748)。

大体积的酸，例如HCl，经常用于洗脱这类发生器，对于那些本领域的技术人员已知的是，该洗脱液的大体积和酸性对于随后的标记反应是不理想的。因此，在某些实例中，发生器的洗脱液如下预纯化：使用例如，阴离子或阳离子交换树脂，所述阴离子或阳离子交换树脂通过移除⁶⁸G穿透用于预纯化洗脱液，和/或浓集⁶⁸Ga，可以随后使用小体积的酸或酸和例如丙酮的有机溶剂的混合物从树脂上移除⁶⁸Ga。可代替地，含有最高浓度的同位素的仅发生器洗脱液的小级分，可以用于已知的分馏的过程。⁶⁸Ga具有68min的物理半衰期，其与很多低分子量的放射性药剂的清除药物代谢动力学是相容的，所述放射性药剂例如肽、抗体片段、寡核苷酸、适配体和小分子。大约89％的⁶⁸Ga通过正电子发射衰减，～11％通过电子捕获衰减。每次衰变的平均正电子能量是740keV，所述能量用于PET成像。

通常在一个热室中使用可以编程为远距离地制备和(如果需要)纯化化合物的自动合成器制备⁶⁸Ga标记的化合物；这保护化学家使其避免过度辐射暴露。由于同位素的短半衰期，用于加速反应速率的方法，包括使用微波加热，可以是有优势的(Velikyan，WO2004/089517)。

用¹⁷⁷Lu、⁹⁰Y或其它治疗性放射性核素标记的含有GRP的肽可以用于提供用于与前列腺、乳腺、肺等的癌症有关的原发性肿瘤和转移瘤的放射治疗。

1B.光学标记

在一个例举性实施方案中，本发明的化合物可以与光学标记物缀合，例如光学染料，包括有机发色团或荧光团，其具有广泛的离域环系统并且在400-1500nm的范围内具有最大吸收和发射。本发明的化合物可以选择性地用生物发光分子衍生。光学标记物的最大吸收的优选范围为600-1000nm以最小化来自血红蛋白的信号的干扰。优选光吸收标记具有大摩尔吸光系数，例如＞10⁵cm^-1M^-1，而荧光光学染料具有高量子产额。光学染料的实例包括但不限于在WO 98/18497、WO98/18496、WO98/18495、WO98/18498、WO98/53857、WO96/17628、WO97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其中引述的参考资料中描述的那些。例如，光学标记物可以直接共价连接到本发明的化合物，例如包含本发明的靶向GRP受体的肽和连接基的化合物。几种在电磁光谱的可见和近红外区吸收并发射光的染料由于它们的生物相容性、高摩尔吸光系数和/或高荧光量子产额而目前被用于许多生物医学应用。作为造影剂的染料结合的光形态的高度敏感性与核医学的相似，并允许在没有不期望的电离辐射作用的情况下使器官和组织显像。在近红外(NIR)区具有强烈吸收和发射的花青染料是特别有用的，因为在此区域生物组织是光学透明的。例如，在NIR区吸收和发射的吲哚氰蓝绿已用于监测心输出量、肝功能和肝血流，且它的官能化衍生物已用于缀合生物分子以用于诊断目的(R.B.Mujumdar，L.A.Ernst，S.R.Mujumdar等人，Cyanine dye labeling reagents：Sulfoindocyanine Succinimidyl esters.Bioconjugate Chemistry，1993，4(2)，105-111；Linda G.Lee和Sam L.Woo.″N-Heteroaromatic ion and iminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescent labels″，U.S.Pat.No.5,453，505；Eric Hohenschuh等人″Light imaging contrast agents″，WO98/48846；Jonathan Turner等人″Optical diagnostic agents for the diagnosis of neurodegenerative diseases by means of near infra-red radiation″，WO98/22146；Kai Licha等人″In-vivo diagnostic process by near infrared radiation″，WO96/17628；Robert A.Snow等人，化合物，WO 98/48838。在以下文献中描述了多种成像技术和试剂：美国专利6,663,847、6,656,451、6,641,798、6,485,704、6,423,547、6,395,257、6,280,703、6,277,841、6,264,920、6,264,919、6,228,344、6,217,848、6,190,641、6,183,726、6,180,087、6,180,086、6,180,085、6,013,243和公开的美国专利申请2003185756、20031656432、2003158127、2003152577、2003143159、2003105300、2003105299、2003072763、2003036538、2003031627、2003017164、2002169107、2002164287和2002156117。上述所有文献的内容在此被全文引入作为参考。

1C.包含放射性标记卤素的结构部分

本技术领域已知，包含放射性标记卤素(例如，放射性碘、氟等)的结构部分，也已知将它们连接至本发明的N-O-P-G组分上的方法。在优选的实施方案中，使用了类似于公开于Zhang等人，J.Nuclear Medicine 47：492-501(2006)中的那些结构部分的结构部分。

2A.包含至少一个非α-氨基酸的连接基

在本发明的一个实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个非α-氨基酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，

N为0(其中0意指它不存在)、α或非α-氨基酸或其它连接基；

O为α或非α-氨基酸；和

P为0、α或非α-氨基酸或其它连接基，

其中N、O或P中至少一个为非α-氨基酸。

因此，在一个实例中，N＝Gly，O＝非α-氨基酸，而P＝0。

α-氨基酸在本领域中是已知的，并包括天然存在和合成的氨基酸。

非α-氨基酸在本领域中也是已知的，并包括天然存在和合成的氨基酸。优选的非α-氨基酸包括：

8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；

N-4-氨基乙基-N-1-乙酸；和

具有式NH₂-(CH₂CH₂O)_n-CH₂CO₂H 或NH₂-(CH₂CH₂O)_n-CH₂CH₂CO₂H的聚乙二醇衍生物，其中n＝2-100。

包含具有至少一个非α-氨基酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表1。这些化合物可以用本文，特别是实施例中公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。

表1

＊BBN(7-14)对应于QWAVGHLV，其是[SEQ ID NO：1]

¹HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间内发生的梯度变化。

²HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。

³MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。

⁴IC₅₀指抑制碘化铃蟾肽与细胞上GRP受体的50％结合的化合物浓度。

2B.包含至少一个取代的胆汁酸的连接基

在本发明的另一实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个取代的胆汁酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，

N为0(其中0意指它不存在)、α-氨基酸、取代的胆汁酸或其它连接基；

O为α-氨基酸或取代的胆汁酸；和

P为0、α-氨基酸，取代的胆汁酸或其它连接基，

其中N、O或P中至少一个为取代的酸。

胆汁酸见于胆汁(肝的分泌物)中，它是具有羟基和终止于羧基的5个碳原子侧链的甾类化合物。在取代的胆汁酸中，胆汁酸的至少一个原子(如氢原子)被另一原子、分子或化学基团代替。例如，取代的胆汁酸包括具有3-氨基、24-羧基官能团、任选在7和12位被氢、羟基或酮官能团取代的那些。

本发明中其它有用的取代的胆汁酸包括取代的胆酸及其衍生物。特定的取代的胆酸衍生物包括：

(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；

(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；

Lys-(3，6，9)-三氧杂十一烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆酸)；

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸。

包含具有至少一个取代的胆汁酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表2。这些化合物可以使用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法来制备。

表2

＊BBN(7-14)对应于QWAVGHLM，其为SEQ ID NO：1

¹HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间。

²HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。

³MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。

⁴IC₅₀指抑制碘化铃蟾肽(¹²⁵I-[Tyr⁴]-BBN)与细胞上GRP受体的50％结合的化合物浓度。

2C.包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸的连接基

在本发明的又一实施方案中，连接基N-O-P包含至少一个具有环状基团的非α-氨基酸。因此，在连接基N-O-P的这个实施方案中，

N为0(其中0意指它不存在)、α-氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基；

O为α-氨基酸或具有环状基团的非α-氨基酸；和

P为0、α-氨基酸、具有环状基团的非α-氨基酸或其它连接基，

其中N、O或P中至少一个为具有环状基团的非α-氨基酸。

具有环状基团的非α-氨基酸包括取代的苯基、联苯、环己基或其它含胺和羧基的环状脂族或杂环部分。

这些实例包括：

4-氨基苯甲酸(此后在说明书中称作“Abz4”)

3-氨基苯甲酸

4-氨基甲基苯甲酸

8-氨基辛酸

反式-4-氨基甲基环己烷甲酸

4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸

六氢异烟酸

2-氨基甲基苯甲酸

4-氨基-3-硝基苯甲酸

4-(3-羧甲基-2-酮基-1-苯并咪唑基-哌啶

6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸

(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-吖庚因并[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-甲酸

(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫杂二环[4.3.0]壬烷-7-甲酸

3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮

N1-哌嗪乙酸

N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸

(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺

(2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂二环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮

3-氨基-3-脱氧胆酸

4-羟基苯甲酸

4-氨基苯基乙酸

3-羟基-4-氨基苯甲酸

3-甲基-4-氨基苯甲酸

3-氯-4-氨基苯甲酸

3-甲氧基-4-氨基苯甲酸

6-氨基萘甲酸

N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸

包含具有至少一个含环状基团的非α-氨基酸的连接基的具有式M-N-O-P-G的化合物的实例列于表3。这些化合物可以用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。

表3

＊BBN(7-14)^＊为序列QWAVGHLM(SEQ ID NO：1)

＊＊NT定义为“未测试”

＊＊＊BOA定义为(1R)-1-(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-1，3-二甲酸。

¹HPLC方法指HPLC梯度的10分钟时间内发生的梯度变化。

²HPLC RT指HPLC中化合物的保留时间。

³MS指质谱，其中分子量由质量/单位电荷(m/e)计算。

一小组含有优选连接基和多种靶向GRP受体的肽的化合物如表4所述。这些化合物可以用本文公开的方法，特别是实施例公开的方法，以及本领域技术人员已知的类似方法制备。

表4

＊BBN(7-14)是序列QWAVGHLM(SEQ ID NO：1)。

2D.其它连接基

可以在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括用于将靶向GRP受体的肽偶联至金属螯合剂或光学标记上同时不会不利地影响靶向GRP受体的肽的靶向功能或金属螯合剂的金属络合功能或光学标记的检测能力的化学基团。适宜的其它连接基包括单独的肽(即连接在一起的氨基酸)、非肽基团(例如烃链)或氨基酸序列和非肽间隔基的组合。

在一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括L-谷氨酰胺和烃链或它们的组合。

在另一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基包括由一系列氨基酸组成的纯肽连接基团(例如二甘氨酸、三甘氨酸、gly-gly-glu、gly-ser-gly等)，其中聚合链中靶向GRP受体的肽的N-末端残基与金属螯合剂或光学标记之间的原子总数为≤12个原子。

在另一个实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基还可以包括烃链[即R₁-(CH₂)_n-R₂]，其中n为0-10，优选n＝3-9，R₁为可以用作共价连接配体主链或预先形成的金属螯合剂或金属络合主链或光学标记的位点的基团(例如H₂N-、HS-、-COOH)；而R₂为用于共价偶联至靶向GRP受体的肽的N-末端NH₂-基团的基团(例如R₂为活化的COOH基团)。多种用于将配体(即螯合剂)或优选的金属螯合物偶联至生物分子上的化学方法已在文献中作了充分描述[Wilbur，1992；Parker，1990；Hermanson，1996；Frizberg等人，1995]。这些方法中的一种或多种可以用于将未络合的配体(螯合剂)或放射金属螯合物或光学标记连接到连接基或者将连接基连接到靶向GRP受体的肽上。这些方法包括形成酸酐、醛、芳基异硫氰酸酯、活化的酯或N-羟基琥珀酰亚胺[Wilbur，1992；Parker，1990；Hermanson，1996；Frizberg等人，1995]。

在一个优选的实施方案中，在连接基N-O-P内使用的其它连接基可以由下述的具有亲电体或亲核体的连接基前体形成：

LP1：在连接基至少2个位置上具有相同的亲电体E1或相同的亲核体Nul的连接基前体；

LP2：具有亲电体E1和在连接基的另一位置的不同亲电体E2的连接基前体；

LP3：具有亲核体Nul和在连接基的另一位置的不同亲核体Nu2的连接基前体；或者

LP4：一个末端以亲电体E1官能化和另一末端以亲核体Nul官能化的连接基前体。

优选的亲核体Nul/Nu2包括-OH、-NH、-NR、-SH、-HN-NH₂、-RN-NH₂和-RN-NHR′，其中R′和R独立地选自上述关于R的定义，除了R′不为H。

优选的亲电体E1/E2包括-COOH、-CH＝O(醛)、-CR＝OR′(酮)、-RN-C＝S、-RN-C＝O、-S-S-2-吡啶基、-SO₂-Y、-CH₂C(＝O)Y和

其中Y可以选自以下基团：

3.靶向GRP受体的肽

靶向GRP受体的肽(即式M-N-O-P-G中的G)为任何肽、其等同物、衍生物或类似物，它对GRP受体家族具有结合亲和力。

靶向GRP受体的肽可以是激动剂或拮抗剂的形式。已知靶向GRP受体的肽激动剂在以高度亲和力结合之后“激活”细胞，并可以被细胞内化。相反，已知靶向GRP受体的肽拮抗剂仅与细胞上的GRP受体结合而不被细胞内化，且不“激活”细胞。在一个优选的实施方案中，靶向GRP受体的肽为激动剂。

在本发明的一个更优选的实施方案中，GRP激动剂为铃蟾肽(BBN)类似物和/或其衍生物。BBN衍生物或其类似物优选包含BBN结合区的相同一级结构(即BBN(7-14)(SEQ ID NO：1))或类似的一级结构，具有以比单独的BBN更好或与其类似的结合亲和力与GRP受体发生特异性结合的特定氨基酸置换(即Kd＜25nM)。适宜的化合物包括肽、肽模拟物及其类似物和衍生物。BBN-14位L-蛋氨酸(Met)的存在一般将赋予激动剂特性，而BBN-14位该残基的缺乏一般将赋予拮抗剂特性[Hoffken，1994]。某些有用的铃蟾肽类似物公开在美国专利公开文本2003/0224998中，所述文献在此被全文引入。

现有技术已充分记载，在BBN(8-14)结合区存在一些和选择数目的特异性氨基酸置换(例如D-Ala¹¹置换L-Gly¹¹或D-Trp⁸置换L-Trp⁸)，所述置换可以在不减小结合亲和力的情况下完成[Leban等人，1994；Qin等人，1994；Jensen等人，1993]。此外，某些氨基酸链或其它基团与BBN-8位(即Trp⁸残基)的N-末端胺基的连接可以大幅减小BBN类似物与GRP受体的结合亲和力[Davis等人，1992；Hoffken，1994；Moody等人，1996；Coy等人，1988；Cai等人，1994]。在少数情况下，可以附加额外的氨基酸或化学部分而不减小结合亲和力。

BBN受体靶向肽的类似物包括以比BBN更大或相同的亲和力靶向GRP受体的分子以及GRP或BBN的突变蛋白质、逆肽(retro-peptide)和逆-反向-肽(retro-inverso-peptide)。本领域技术人员将认识到这些类似物还可以包含修饰，所述修饰包括置换和/或缺失和/或添加一个或多个氨基酸，条件是这些修修饰没有不利地改变本文所述的肽的生物活性。这些置换可以通过用它们的同义氨基酸置换一个或多个氨基酸来完成。一组内的同义氨基酸定义为具有充足的物理化学性能以允许组内成员之间进行置换而保持分子的生物功能的氨基酸。

也可以将氨基酸的缺失或插入引入所定义的序列，条件是它们不改变该序列的生物功能。优选这些插入或缺失应该限于1、2、3、4或5个氨基酸，且不应除去或者物理破坏或替换对功能构象来说重要的氨基酸。本文所述的靶向GRP受体的肽的突变蛋白质具有与本发明说明书公开的序列同源的序列，其中在一个或多个氨基酸位置存在氨基酸置换、缺失或插入。突变蛋白质的生物活性至少为本文所述肽的40％，优选至少50％，更优选60-70％，最优选80-90％。但是，它们还可以具有大于特别例举的肽的生物活性，并因此不必一定要与所例举的肽的生物功能完全相同。靶向GRP受体的肽的类似物还包括将改变引入肽主链的酰胺键，包括硫代酰胺、亚甲基胺和E-烯烃的肽模拟物或假肽。而且基于GRP、BBN的结构的肽或氨基酸被N-取代的肼羰基化合物替换的其肽类似物(还已知为氮杂氨基酸)也包括在本文所用的术语类似物中。

取决于所选择的螯合剂，所述靶向GRP受体的肽可以通过多种方法来制备。通常所述肽可以最方便地通过肽合成技术中已常规建立和已知的技术来制备，所述技术例如固相肽合成(SPPS)方法。固相肽合成(SPPS)包括往与不溶性载体或基质(如聚苯乙烯)连接的生长的肽链上分步加入氨基酸残基。肽的C末端残基首先固定于可商购得到的载体上，其氨基用N-保护试剂(如叔丁氧羰基(Boc)或芴基甲氧基羰基(Fmoc))保护。用适宜的脱保护剂除去氨基保护基，例如对于Boc用TFA，对于Fmoc用哌啶，加入下一个氨基酸残基(N-保护形式)和偶联剂如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)或N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲

六氟磷酸盐(HBTU)。在肽键形成后，从载体上洗去试剂。在加入最后的残基之后，用适宜的试剂(如三氟乙酸(TFA)或氟化氢(HF))从载体上裂解肽。

然后可以通过使靶向GRP受体的肽的Trp⁸残基的游离氨基与适宜的连接基官能团反应而偶联连接基以形成缀合物。以上讨论的螯合剂、连接基和靶向部分的完整构建体还可以在树脂上装配，然后通过适宜的试剂(如三氟乙酸或HF)裂解。

铃蟾肽(7-14)经过体外和体内蛋白酶剪切而缩短了肽的半衰期。多肽主链的酰胺键可被置换并保留活性，同时抵抗蛋白酶剪切，这在文献中是熟知的。例如，为了减少或消除不需要的蛋白酶解作用，或使血清稳定性减小导致生物活性降低或消失的其它降解途径，或为了限制或增加构象柔性，常常使用模拟现存构象或以所需方式改变构象的官能团置换肽主链内的酰胺键。这种修饰可增加结合亲和性或改善药动学行为。应了解肽合成领域的技术人员可对连接两个氨基酸的任何酰胺键(例如，靶向部分、连接基、螯合剂等中的酰胺键)进行下列酰胺键改变，预期所得肽可具有相同或更高的活性：插入α-N-甲基酰胺或主链硫代酰胺，除去羰基以产生关联仲胺，将一个氨基酸替换为氮杂-氨基酸以产生缩氨基脲衍生物，使用E-烯烃和取代E-烯烃作为酰胺键代用品。还可通过插入不稳定酰胺键的氨基酸之一的D-氨基酸，或通过α-甲基氨基酸衍生物来防止水解。还可用杂环(如唑、吡咯烷酮、咪唑以及南五味子酮和氟烯烃)替代主链酰胺键。

在表4a中列出了一些包括这种酰胺键修饰的具体的化合物。表4a中所用各种酰胺键修饰的缩写词在下面说明：

表4A

在上表中，QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1，且QWAVGHFL-NH₂(L300)是SEQ ID NO：22。

4.标记和施用放射性药物化合物

可以通过配位化学技术中公知的多种方法在放射性药物缀合物中引入金属。如果金属为^99mTc(一种优选的用于诊断成像的放射性核素)，则可以使用以下一般方法形成锝络合物。如下形成肽-螯合剂缀合物溶液：首先将缀合物溶于水、稀酸或醇(如乙醇)的水溶液。然后任选将溶液脱气以除去溶解的氧。如果在肽中存在-SH基团，则可以任选使用巯基保护基(如Acm(乙酰氨基甲基)、三苯甲基)或其它巯基保护基保护巯基使其免于氧化。用适宜的试剂(例如氢氧化钠)除去巯基保护基，然后用有机酸(如乙酸(pH 6.0-6.5))中和。作为可替代的选择，可以在锝螯合期间原位除去巯基保护基。在标记步骤中，将得自钼发生器的高锝酸钠与足量还原剂(如氯化亚锡)加至缀合物的溶液以还原锝，并使其在室温下静置或加热。可以例如用C-18SepPak柱[Millipore Corporation，Waters Chromatography Division，34Maple Street，Milord，Massachusetts 01757]进行色谱处理或使用本领域技术人员已知的方法进行HPLC而任选将标记的缀合物与污染物^99mTcO₄ ^-和胶体^99mTcO₂分离。

在一个可替代选择的方法中，可以通过转螯合(transchelation)反应来完成标记。在此方法中，锝源是锝溶液，它在与所选择的螯合剂反应之前被还原或与不稳定的配体络合，从而有利于与所选择的螯合剂进行配体交换。用于转螯合的适宜配体的实例包括酒石酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐和庚葡糖酸盐(heptagluconate)。可以认识到所述的缀合物可以用上述的技术标记，或者作为可替代的选择，螯合剂本身可以被标记，然后与肽偶联形成缀合物：一种称为“预标记螯合物”方法的工艺。Re和Tc均在元素周期表的VIIB列，且它们是化学同族元素。因此在极大程度上，这两种金属与在体外和体内表现高稳定性的配体主链的络合化学是相同的[Eckelman，1995]，且可以将类似的螯合剂和方法用于进行Re标记。许多用于与肽和蛋白形成稳定的放射金属络合物的^99mTc或^186/188Re络合物螯合+5氧化态的这些金属[Lister-James等人，1997]。这种氧化态可以将^99mTc-或^186/188Re选择地置于已与生物分子缀合的配体主链中，这种主链是由多种不同的^99mTc(V)和/或^186/188Re(V)弱螯合物构建的(例如^99mTc-葡庚糖酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐等)[Eckelman，1995；Lister-James等人，1997；Pollak等人，1996]。这些文献的内容在此均通过引用被全文并入本文。

正电子-发射放射同位素⁶⁸Ga是用于PET(正电子发射断层摄影术)成像的优选放射金属。⁶⁸Ga的重要特征是其通过⁶⁸Ge/⁶⁸Ga放射性核素发生器系统的回旋加速器-独立有效性。相对长寿命母体⁶⁸Ge(半衰期[t_1/2]＝270.95d)产生短寿命⁶⁸Ga(t_1/2＝67.71min)，其随后衰变成稳定的⁶⁸Zn。⁶⁸Ga是出色的正电子发射体，具有89％正电子分支(branching)，伴有低的光子发射(1，077keV，3.22％)。⁶⁸Ge/⁶⁸Ga放射性核素发生器已被开发和研究了几乎50年。最近的综述，参见

等人，(

Knapp FF.Radiohuclide generators.In：Vértes A，Nagy S，Klencsár Z，F，eds.Handbook of Nuclear Chemistry.Dordrecht，The Netherlands：Kluwer Academic Publishers；2003；4：81-118.)

现在，最常见商业上可获得的⁶⁸Ge/⁶⁸Ga放射性核素发生器是基于TiO2固体相，但是可以使用其它固体相。使用例如，0.1N HCl溶液从发生器洗脱“离子的”⁶⁸Ga³⁺，尽管也可以使用其它洗脱剂。在5mL的洗脱液中⁶⁸Ga收率＞60％；长寿命母体⁶⁸Ge的突破通常不超过5·10^-3％。洗脱液可以直接用于标记，或在标记之前，可以预纯化洗脱液，以浓缩它和/或移除⁶⁸Ge和其它痕量金属。例如，Hofmann等人(Hofmann M，Maecke HR，

AR，et al.Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand ⁶⁸Ga-DOTATOC：preliminary data.Eur J Nucl Med.2001；28：1751-1757)和Meyer等人(Meyer G-J，

HR，Schuhmacher J，Knapp WH，Hofmann M.⁶⁸Ga-Labelled DOTA-derivatised peptide ligands.Eur J Nucl Med.2004；31：1097-1104)已描述了浓缩方法，其中所述初始发生器洗脱液用强酸(例如9.5N HCl)处理。在这些情况下，⁶⁸Ga可以吸附在强阴离子-交换器上作为⁶⁸Ga(III)的氯阴离子络合物。在采用5.5N HCl的洗涤步骤后，树脂用氮流冲洗，然后用小体积H₂O洗脱。该策略从⁶⁸Ga分离⁶⁸Ge。

Konstantin(K.P.Zhernosekov，D.V.Filosofov，R.P.Baum，P.Aschoff，H.Bihl，A.A.Razbash，M.Jahn，M.Jennewein and F.Processing of Generator-Produced ⁶⁸Ga for Medical Application，J.Nucl.Med.Vol.48，1741-1748)已描述了可代替方法，其中使用包含有机阳离子-交换剂树脂的小柱实施初始发生器洗脱液的再浓缩和纯化，其中使用盐酸/丙酮洗脱，以移除⁶⁸Ga。纯化级分可以用于在纯水溶液中或在缓冲剂中标记包含螯合剂的肽，例如奥曲肽衍生物。

另一个方法是分馏初始发生器洗脱液。仅仅收集包含最高浓度⁶⁸Ga的洗脱液部分，这帮助克服若干问题，例如洗脱液体积，酸性pH和⁶⁸Ge和化学杂质的出现(Breeman WAP，de Jong M，de Blois E，Bernard BF，Konijnenberg M，Krenning EP.Radiolabelling DOTA-peptides with⁶⁸Ga.Eur J Nucl Med.2004；32：478-485)。可代替地，可以从发生器洗脱液将⁶⁸Ga萃取入例如，有机溶剂(例如甲基乙基酮)，例如如Bokhari等人所描述的(Bokhari TH，Mushtaq A，Khan IU，Concentration of ⁶⁸Ga via solvent extraction，Appl Radiat Isot.2009；67(1)：100-102)。溶剂的蒸发浓缩放射同位素，然后将其以缓冲液稀释以用于放射标记。在某些实例中，洗脱液不被预纯化，反而，在放射标记之后，使用技术(例如固体相提取或HPLC)移除⁶⁸Ge突破。

不管如何得到或纯化放射同位素溶液，通常在水性或水性/有机混合物中以适合的pH值实施放射标记，以将放射金属掺入螯合剂。通常使用大环的螯合剂(例如NOTA，DOTA和DO3A衍生物)结合⁶⁸Ga，尽管由于开链多齿配体(例如N，N′-双[2-羟基-5-(羧基乙基)苄基]乙二胺-N，N′-二乙酸、双胺、双硫醇配体BAT-TECH(双氨基乙硫醇-四乙基-环己基)和亚乙基二半胱氨酸(EC)、N3S)的快速率的标记(这对于具有短寿命同位素(例如⁶⁸Ga)是重要的)，也可以使用它们。可以在～2至～7的pH值，最通常在3-5的pH值，标记这些螯合剂。如果pH太低，放射金属不能很好掺入。如果pH太高，发生Ga³⁺与水和OH^-的竞争性反应，导致形成已知作为放射胶体的不溶解的含有Ga-氢氧化物(氧代)的化合物。用于掺入放射金属的适当pH通常使用生理可接受的缓冲剂保持，例如醋酸盐、柠檬酸盐、碳酸氢盐、HEPES等。如果在强酸中提供洗脱液，可以使用高缓冲浓度。

加入充足的配体，以提供高收率的期望的⁶⁸Ga络合物。通过以下确定所需的配体的量：放射浓度，pH，缓冲组合，螯合剂的性质，从最后一次洗脱发生器起算的时间和在标记溶液中存在的竞争性金属的量。竞争性金属可以包括Zn²⁺，其得自⁶⁸Ga³⁺的衰变，和Fe(III)，Al(III)等，其存在于用于洗脱发生器的溶剂中或从发生器自身被洗脱下来。典型地，必须使用＞2∶1络合配体/Ga的比率。为了将放射金属掺入配体，在室温下保持反应混合物，或在约37℃至～100℃的温度(通过加热或使用微波)将其加热，这取决于反应物的性质。

认为最终产物的特异性活性是重要的。如果被研究的系统具有低的受体浓度，且放射性标记产物不能被纯化以移除过量配体，重要的是最小化在反应中使用的配体的量，因为这可以与放射性标记产物竞争，因此减少在靶的有效信号。此外，某些配体具有生理学效果，这使得优选移除过量配体。如果需要，通过使用技术(例如固体相提取，离子-交换和/或逆相高压液相色谱法)纯化放射性标记产物以移除过量未标记的螯合剂和/或用其它金属标记的螯合剂，可以移除杂质，且可以提高特异性活性。

如果需要，可以在注射之前稳定化合物以预防对化合物的放射性损伤。放射稳定剂是那些本领域技术人员已知的，且可以包括，例如，对-氨基苯甲酸、抗坏血酸、龙胆酸等，以及那些公开在US 2007/0269375和WO 05/009393中的放射稳定剂，通过引用将其全部并入本文，包括含硒衍生物，例如硒代甲硫氨酸，半胱氨酸衍生物或二硫代氨基甲酸盐。它们也可以含有增溶剂和抑菌剂，例如，苄醇。也可以加入螯合剂(例如EDTA或DTPA)，以结合在反应之后残留的任何未反应的“游离”放射金属。

也可以使用类似于那些上文所述的方法的标记方法，制备⁶⁷镓-标记的化合物。通常在稀酸溶液中以氯化物或柠檬酸盐的形式，提供⁶⁷Ga放射同位素。在标记溶液中必须使用充足的配体，以抵消Zn(II)和其它竞争性痕量金属在标记溶液中的存在。

5.Ga-AMBA

Ga-AMBA(或⁶⁷Ga-AMBA和/或⁶⁸Ga-AMBA)意指AMBA的⁶⁷Ga或⁶⁸Ga标记的类似物，在本文中也意指Ga-L70(或⁶⁷G-L70和⁶⁸Ga-L70)。它是本发明优选的显像剂，且可以如本文描述的用于监测与GRP-R串流的药物的治疗反应。

结合Lu³⁺(例如DO3A，其包括在Lu-AMBA中)的螯合剂也结合Ga³⁺。⁶⁸Ga是特别优选的同位素，因为⁶⁸Ga是适于PET成像的发生器-产生的同位素，其具有的t_1/2＝68分钟。⁶⁷Ga和⁶⁸Ga-AMBA都靶向GRP-R阳性癌。这类类似物的示例性结构如下所示：

[DO3A螯合剂][连接基][靶向基团]

分子具有3部分，螯合剂、控制受体亚型特异性的连接基基团和从铃蟾肽截断的八肽靶向基团(BBN 7-14)，GRP-R的天然配体。Lu-AMBA对GRP-R具有Kd～2-3nM。Ga³⁺和Lu³⁺都是3+金属离子，其类似地结合于多价氨基羧酸根配体，如同用于Lu-AMBA(Lu-L70)的R-DO3A大环。

如在表5中所示，已发现在携带GRP-R阳性PC-3人前列腺肿瘤的小鼠模型中，⁶⁷Ga和¹⁷⁷Lu-AMBA是生物学等价的。预期采用⁶⁸Ga将得到类似结果。

如在表5中所示，将¹⁷⁷Lu-AMBA的生物分布与⁶⁷Ga-AMBA(作为⁶⁸Ga-AMBA的替代品)相比。对PC-3肿瘤靶的分布没有显著不同。以这些数据和体外数据为基础，¹⁷⁷Lu-AMBA是预见Ga-AMBA在体外和体内的行为的合理替代品，并且是本发明优选的显像剂。Ga-AMBA也是用于监测药物的治疗反应的优选显像剂，所述药物靶向与GRP-R串流的受体。

6.诊断和治疗应用

如果用诊断和/或治疗上有用的金属或光学标记进行标记，则本发明的化合物可以用于通过放射诊断、放射治疗和光学成像技术中已建立的方法治疗和/或检测任何涉及GRP受体(或NMB受体)超表达的病理。[例如参见Bushbaum，1995；Fischman等人，1993；Schubiger等人，1996；Lowbertz等人，1994；Krenning等人，1994；光学染料的实例包括但不限于以下文献公开的光学染料：WO 98/18497、WO 98/18496、WO 98/18495、WO 98/18498、WO 98/53857、WO 96/17628、WO97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其引述的参考资料，其内容在此均通过引用被全文并入本文。

GRP-R表达在许多人肿瘤中高度上调。例如参见WO99/62563。因此，本发明的化合物可以广泛地用于治疗和诊断癌症，包括前列腺癌(原发性和转移性)、乳腺癌(原发性和转移性)、结肠癌、胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、胃泌素瘤、黑素瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、子宫平滑肌肉瘤、前列腺上皮内瘤[PIN]和卵巢癌。此外，本发明的化合物可以用于区分其中GRP受体上调和没有上调的病症(例如分别为慢性胰腺炎和胰腺导管癌)。

在实施例中更为详细说明的本发明的化合物在体内比不具有本文公开的新连接基的化合物表现出更大的特异性和更高的肿瘤摄取，对表达GRP受体的肿瘤表现出改进的靶向能力，并因此用于对这些组织成像或递送放射治疗。

这些化合物的诊断应用可以是作为利用闪烁照相、光学或成像进行的肿瘤细胞存在的一线诊断筛选，或者作为在放射免疫指导的外科手术(RIGS)领域利用手持放射检测仪器靶向肿瘤组织的活性剂，作为一种在施用配对的放射治疗化合物之前获得放射量测定数据的手段，作为评价GRP受体活性(作为评价GRP受体靶向疗法的治疗对时间的函数)的手段，作为评价GRP受体活性(其作为非GRP受体靶向治疗对时间的函数)并且因此直接或间接评价靶向受体对治疗的响应。

这些化合物的治疗应用可以定义为用作癌症治疗中的一线治疗的药剂，作为采用化疗药物或其他药物的联合治疗，和/或作为配伍的诊断/治疗剂。治疗包括至少部分缓解或减轻指定病症的症状。例如，治疗可以导致肿瘤或其染病区域尺寸减小，预防肿瘤或其染病区域尺寸增加，减少肿瘤中异常血流或通过其他方式正常化肿瘤中血流，延迟肿瘤发展的时间，增加患者存活等。配对的概念指可以根据已选择用于与适宜的螯合物结合的放射金属而定既可充当诊断剂又可充当治疗剂的单一的未金属化化合物。如果该螯合剂不能适应需要的金属，则可以进行适宜的取代以适应不同的金属，同时保持药理学，使得诊断化合物的体内表现可以用于预测放射治疗化合物的表现。如果与联合疗法联合使用，则可以使用任何适宜的化学治疗剂或药物，例如包括抗肿瘤药如铂化合物(例如螺铂、顺铂和卡波铂)、氨甲蝶呤、阿霉素、丝裂霉素、柄型菌素、博来霉素、胞嘧啶、阿糖胞苷、阿糖腺苷、巯基聚赖氨酸、长春新碱、白消安、苯丁酸氮芥、美法仑(例如PAM、a、L-PAM或苯丙氨酸氮芥)、巯基嘌呤、米托坦、盐酸丙卡巴肼、更生菌素(放线菌素D)、盐酸柔红霉素、盐酸多柔比星、紫杉酚、丝裂霉素、普利霉素(光辉霉素)、氨基格鲁米特、雌莫司汀磷酸钠、氟他米特、乙酸亮丙瑞林、乙酸甲地孕酮、柠檬酸它莫西芬、睾内酯、曲洛司坦、安吖啶(m-AMSA)、天冬酰胺酶(L-天冬酰胺酶)、Erwina天冬酰胺酶、依托泊苷-(VP-16)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、替尼泊苷(VM-26)、硫酸长春碱(VLB)和阿拉伯糖基。在某些实施方案中，治疗剂可以是单克隆抗体，例如能够与黑素瘤抗原结合的单克隆抗体。

可以通过在可药用的载体和/或溶液，例如盐溶液(如等渗盐水)中进行例如静脉内、皮下或腹膜内注射而将用放射性核素金属，例如¹⁷⁷Lu，¹¹¹In，⁶⁸Ga或^99mTc标记的缀合物施用于哺乳动物，包括人患者或受试者。本发明提供的放射性标记的闪烁照相显像剂具有适宜的放射性量。在形成^99mTc放射性络合物过程中，一般优选形成包含放射性浓度为大约0.01毫居里(mCi)-100mCi/mL的放射性络合物溶液。一般地，待施用的单位剂量的放射性为大约0.01mCi至大约100mCi，优选1mCi至30mCi。单位剂量的待注射的溶液为大约0.01mL-大约10mL。适于施用的标记的缀合物的数量取决于选择的缀合物的分布性质，其含义是快速清除的缀合物可能需要以比清除较慢的缀合物更高的剂量施用。可以通过标准闪烁照相技术在施用后的适宜时间示踪体内分布和定位；所述时间取决于在靶部位的蓄积速率相对于在非靶组织的清除率，一般为30分钟至180分钟。例如，在给患者注射诊断性放射性核素标记的本发明的化合物之后，可以将针对在显像剂中引入的核素的γ-射线能量进行校准的γ-照相机用于对药剂摄取区域进行成像，并对该部位存在的放射性量进行定量。体内部位成像可以在数分钟内发生。但是，如果需要且如果放射性核素的物理半衰期允许的话，成像可以在放射性标记的肽注入患者之后数小时或甚至更长时间发生。在大部分的情况下，足量的施用剂量将在大约0.1小时内在待成像的区域蓄积以允许成像。

可以将本发明的化合物单独或作为包含其它组分(如赋形剂、稀释剂、自由基清除剂、稳定剂和载体，所有上述的组分在本领域中是已知的)的组合物的一部分施用于患者。可以将该化合物经静脉内或腹膜内施用于患者。

本发明具有许多优点。根据本发明某些实施方案制备的化合物形成稳定、清楚限定的^99mTc或^186/188Re标记的化合物。采用其他实施方案，形成用⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、¹¹¹In或¹⁷⁷Lu标记的化合物。类似的本发明的化合物也可以通过使用对各种放射性金属的适宜螯合剂主链来制备，以形成稳定、清楚限定的¹⁵³Sm、⁹⁰Y、¹⁶⁶Ho、¹⁰⁵Rh、¹⁹⁹Au、¹⁴⁹Pm或其它放射性金属标记的产物。放射性标记的靶向GRP受体的肽与表达GRP受体的肿瘤细胞选择性结合，并且如果使用激动剂的话，被内化并在肿瘤细胞内长期保留。未到达(即不结合)癌细胞的放射性物质优选有效地排泄进入尿液，放射金属在肾脏中保留极少。

a.增加靶向GRP-R的方法

此外，本发明包括与正常的(例如非靶)表达GRP受体组织相比增加标记的本发明化合物靶向表达GRP受体靶组织的方法。该方法包扩在标记的本发明化合物的给药之前或在给药期间，给予适当质量的靶向GRP受体的肽或缀合物。类似地，本发明包括标记的本发明化合物的改善的给药方法，其中优化肿瘤靶向，包括在标记的本发明化合物给药之前或在给药期间，给予适当的质量剂量的靶向GRP受体的肽或缀合物。已经发现这类预先或共同给药饱和非靶GRP受体，减少它们与肿瘤组织上GRP受体竞争的能力。

先前已显示，可以有益的是，预先或共同给予采用增加的质量的活性成分，以占有在正常的(例如，非靶)组织上的循环结合位置或结合位置，其将以其他方式与靶组织结合位置竞争活性成分。这类预给药或共同给药的目的是增加对靶组织的靶向和在靶组织中的摄取。例如，已在给予放射性抗CD20抗体之前给予未标记的抗CD20抗体，以占有在循环细胞上的结合位置，以便改善疾病位置的可视化。在另一个实施例中，已给予增加质量的冷促生长素抑制素，以便饱和正常的组织的结合位置和因此改善疾病的可视化。

迄今还没有鉴定循环靶向GRP受体的肽结合蛋白。但是，存在一些在机体中表达可预知的水平的GRP受体的正常的组织，其可以与表达GRP受体的靶组织竞争。预期增加质量给药将饱和这类组织中的结合位置。但是，已出人意料地发现，当给予质量剂量的本发明化合物时，表达GRP受体的肿瘤组织的行为不同于表达GRP受体的正常的组织。特别地，尽管表达GRP受体的正常组织显示质量剂量导致的预期饱和和因此标记的本发明化合物的摄取减少，表达GRP的肿瘤组织在质量剂量增加时出人意料地未饱和，保留结合标记的本发明化合物的能力。正常组织和肿瘤组织反应差异可以反映为脱离肿瘤组织的控制。因此该有益效果最可能存在于如下那些情况中，其中通常通过正常组织生理学密切控制的所述调节肽或化合物的结合位置，当存在于肿瘤组织时脱离这类控制，如在例如表达GRP受体肿瘤组织的情况下。

因此，为了优化肿瘤靶向，可以在给予标记的本发明化合物之前或在给予期间，给予适当的质量剂量的本发明化合物。应注意到，尽管优选给予质量剂量的未标记的本发明化合物，但是可以使用与GRP受体结合和相互作用的任何活性肽，无论是否缀合至连接基和/或金属螯合剂或可测定的标记，且无论是否标记。优选地，使用质量剂量的GRP受体激动剂，更优选它是缀合至连接基和/或金属螯合剂或可测定的标记，例如那些本文公开的。最优选给予质量剂量的本发明化合物。尽管某些实施方案优选使用未标记的化合物，质量剂量可以包括标记的化合物。实际上，对于共同给药应用，优选给予包括质量剂量和诊断的或治疗剂量的标记的化合物的单剂量。在该情况下，给予标记的、但是低特异性活性剂量，其递送适当的质量剂量的未标记的化合物以及诊断的或治疗适用剂量的标记的化合物。

适当的质量剂量将取决于患者和应用的特异性，但是这类剂量的选择在本领域技术范围之内。适用的质量剂量在约1至约20μg/m²范围中，优选的剂量在约2至约10μg/m²的范围中。当在标记的本发明化合物之前给予质量剂量(例如预给药)时，优选在诊断的或治疗剂量之前不超过约60分钟给予质量剂量。

b.光学成像、声致发光、光声成像和光治疗

根据本发明，可以将许多光学参数用于在给患者注射光学标记的本发明化合物之后用体内光学成像来确定靶体的位置。在成像制备中待检测的光学参数可以包括穿透辐射、吸收、荧光或磷光发射、光反射、吸收幅度或最大值的改变和弹性散射辐射。例如，生物组织对波长范围为650-1000nm的近红外(NIR)光相对透光。NIR照射可以穿透组织达数厘米，允许使用本发明化合物对含靶体的组织进行体内成像。可见和近红外(NIR)光在临床实践中的使用迅速增长。在电磁波谱的可见、NIR或长波长(UV-A，＞350nm)区吸收或发射的化合物可能用于光学断层照相成像、内窥镜可视化和光治疗。

生物医学光学的一个主要优点是它的治疗潜能。已证明光治疗是一种用于治疗多种表面损伤(外伤和内伤)的安全和有效的方法。染料对于在光学成像和光治疗中增强信号检测和/或使组织具有感光性是重要的。先前的研究已表明，某些染料可以定位在肿瘤，并用作检测和治疗小癌的强有力探针(D.A.Bellnier等人，Murine pharmacokinetics and antitumor efficacy of the photodynamic sensitizer 2-[1-hexyloxyethyl]-2-devinyl pyropheophorbide-a，J.Photochem.Photobiol.，1993，20，pp.55-61；G.A.Wagnieres等人，In vivo fluorescence spectroscopy and imaging for oncological applications，Photochem.Photobiol.，1998，68，pp.603-632；J.S.Reynolds等人，Imaging of spontaneous canine mammary tumors using fluorescent contrast agents，Photochem.Photobiol.，1999，70，pp.87-94)。所有这些所列文献的内容在此均通过引用被全文并入本文。但是，这些染料不优先定位在恶性组织中。

在一个例举性实施方案中，本发明化合物可以与光学标记物缀合，所述光学标记物例如光学染料，包括有机发色团或荧光团，具有广泛的离域环系统且吸收或发射最大值范围为400-1500nm。本发明化合物可选择性地用生物发光分子衍生。光学标记物的优选的最大吸收范围为600-1000nm，以使对来自血红蛋白的信号的干扰最小。优选光吸收标记具有大摩尔吸光系数，例如＞10⁵cm^-1M^-1，而荧光性光学染料具有高量子产率。光学染料的实例包括但不限于在US 6,641,798，WO98/18497、WO 98/18496、WO 98/18495、WO 98/18498、WO 98/53857、WO 96/17628、WO 97/18841、WO 96/23524、WO 98/47538及其引述的参考资料所述的光学染料，这些文献的内容在此均通过引用被全文并入本文。例如，光学标记物可以直接共价连接到本发明化合物，例如包含靶向GRP受体的肽和本发明的连接基的化合物。许多在电磁光谱的可见和近红外区吸收和发射光的染料由于它们的生物相容性、高摩尔吸光系数和/或高荧光量子产率目前正被用于多种生物医学应用。与作为造影剂的染料结合的光形态的高度敏感性与核医学的类似，并允许在无不期望的电离辐射作用的情况下使器官和组织可见。在近红外(NIR)区具有强烈吸收和发射的花青染料是特别有用的，因为生物组织在该区透光(B.C.Wilson，Optical properties of tissues.Encyclopedia of Human Biology，1991，5，587-597)。例如，在NIR区吸收和发射的吲哚花青绿已用于监测心输出量、肝功能和肝血流(Y-L.He，H.Tanigami，H.Ueyama，T.Mashimo，andI.Yoshiya，Measurement of blood volume using indocyanine green measured with pulse-spectrometry：Its reproducibility and reliability.Critical Care Medicine，1998，26(8)，1446-1451；J.Caesar，S.Shaldon，L.Chiandussi，et al.，The use of Indocyanine green in the measurement of hepatic blood flow and as a test of hepatic function.Clin.Sci.1961，21，43-57)，且它的官能化衍生物已用于缀合生物分子以用于诊断目的(R.B.Mujumdar，L.A.Ernst，S.R.Mujumdar等人，Cyanine dye Labeling reagents：Sulfoindocyanine Succinimidyl esters.Bioconjugate Chemistry，1993，4(2)，105-111；Linda G.Lee and Sam L.Woo.″N-Heteroaromatic ion and iminium ion substituted cyanine dyes for use as fluorescent labels″，U.S.Pat.No.5,453，505；Eric Hohenschuh等人″Light imaging contrast agents″，WO98/48846；Jonathan Turner等人″Optical diagnostic agents for the diagnosis of neurodegenerative diseases by means of near infra-red radiation″，WO98/22146；Kai Licha等人″In-vivo diagnostic process by near infrared radiation″，WO96/17628；Robert A.Snow等人，Compounds，WO 98/48838，US 6,641,798。所有这些所列文献的内容在此均通过引用被全文并入本文。

在注射光学标记化合物之后，用适于在药剂中所用的光学标记的波长范围的一个或多个光源(例如激光)扫描患者。所用的光可以是单色或多色的和连续或脉冲的。通过调至一个或多个波长的光检测器检测透射、散射或反射的光以确定受试者中含靶的组织(例如含GRP的组织)的位置。可以随时间监测光学参数的改变，以检测靶部位(例如具有GRP受体的部位的肿瘤或其它)光学标记的试剂的蓄积。可以将标准图像加工和检测设备与本发明的光学显像剂联合使用。

上述的光学显像剂还可以用于采用光学标记的显像剂进行的声-光或声致发光学成像(参见U.S.5,171,298、WO 98/57666及其参考资料)。在声-光学成像中，将超声照射应用于受试者，并影响透射、发射或反射光的光学参数。在声致发光学成像中，所用的超声实际上产生被检测的光。使用这些技术的适宜的成像方法在WO 98/57666中作了描述。

在以下文献中描述了各种成像技术和试剂：美国专利6,663,847、6,656,451、6,641,798、6,485,704、6,423,547、6,395,257、6,280,703、6,277,841、6,264,920、6,264,919、6,228,344、6,217,848、6,190,641、6,183,726、6,180,087、6,180,086、6,180,085、6,013,243和公开的美国专利申请2003185756、20031656432、2003158127、2003152577、2003143159、2003105300、2003105299、2003072763、2003036538、2003031627、2003017164、2002169107、2002164287和2002156117，所有这些文献在此均被引入作为参考。

c.放射治疗

放射性同位素治疗包括施用足量的放射性标记的化合物，该量足以损伤或破坏靶向的组织。在施用化合物(例如通过静脉内、皮下或腹膜内注射)之后，放射性标记的药物优先定位在病患部位(在此情况下为表达相关GRP受体的肿瘤组织或其它组织)。一旦定位，该放射性标记的化合物就以在所施用的同位素的放射性衰减期间释放的能量损坏或破坏病患组织。如本文讨论，本发明还包括联合使用放射治疗和化学治疗(或者与任何其它适宜的治疗剂联用)。

成功的放射治疗的设计涉及若干关键因素：

1.选择适宜的靶向基团以递送放射性至病患部位；

2.选择释放足够能量以破坏病患部位的适宜的放射性核素，并基本上不破坏相邻的正常组织；和

3.选择适宜的靶向基团与放射性核素的组合，不会不利地影响这种缀合物在病患部位定位的能力。对于放射性金属而言，这通常涉及这样的螯合基团：这种基团与放射性核素紧密地配位，并结合将该螯合物偶联至靶向基团的连接基，且这种基团影响化合物的总生物分布以使靶组织的摄取最大化，并使正常、非靶器官的摄取最小化。

放射治疗剂可以包含来自已知为镧系元素类(原子序数57-71的元素)的螯合的3+金属离子和它们的类似物(即M³⁺金属如钇和铟)。在此种类中典型的放射性金属包括同位素90-钇、111-铟、149-钷、153-钐、166-镝、166-钬、175-镱和177-镥。所有这些金属(和镧系中的其它金属)具有非常类似的化学性质，它们保持+3氧化态，并优选与含有硬(氧/氮)供体原子的配体螯合，典型的为已知螯合物DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)的衍生物和多氮杂-多羧酸大环如DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N″′-四乙酸及其相近的类似物。这些完全去质子化形式的螯合配体的结构如以下所示。

这些螯合配体通过多个氮和氧原子与放射金属结合而将其包封，从而防止游离(未结合)的放射金属释放进入体内。这是重要的，因为3⁺放射金属由其螯合物的体内解离可以导致在肝、骨和脾中放射金属的摄取[Brechbiel MW，Gansow OA，″Backbone-substituted DTPALLigands for ⁹⁰Y radioimmunotherapy″，Bioconj.Chem.1991；2：187-194；Li，WP，Ma DS，Higginbotham C，Hoffman T，Ketring AR，Cutler CS，Jurisson，SS，″Development of an in vitro model for assessing the in vivo stabilityof lanthanide chelates.″Nucl.Med.Biol.2001；28(2)：145-154；Kasokat T，Urich K，Arzneim.-Forsch，″Quantification of dechelation of gadopentetate dimeglumine in rats″，1992；42(6)：869-76]。除非配体特异性地靶向于这些器官，这些非特异性摄取是非常不期望的，因为它导致非靶组织的非特异性照射，从而可能导致诸如由于骨髓照射造成的造血抑制的问题。

关于放射治疗应用，可以使用本文公开的任何治疗性放射性核素的螯合剂。但是，DOTA螯合物形式[Tweedle MF，Gaughan GT，HaganJT，″1-Substituted-1，4，7-triscarboxymethyl-1，4，7，10-tetraazacyclodode cane and analogs.″美国专利4,885,363，Dec.5，1989]是特别优选的，因为DOTA螯合物预期在体内比DTPA或其它线性螯合物较少去螯合。化合物L64和L70(当用适宜的治疗性放射性核素标记时)特别优选用于放射治疗。

通过连接基将DOTA型大环偶联至靶向基团的一般方法(例如通过活化DOTA的羧酸之一以形成活性酯，然后使其与连接基上的氨基反应以形成稳定的酰胺键)对本领域技术人员来说是已知的(例如参见Tweedle等人，美国专利4,885,363)。还可以对在多氮杂环主链上修饰的DOTA型大环进行偶联。

用于特定的放射治疗应用的适当核素的选择取决于多种因素，包括：

物理半衰期-它应该足够长以允许从放射金属和缀合物合成并纯化放射治疗构建体，并将该构建体递送至注射部位，并在注射前无明显的放射性衰变。优选放射性核素应该具有大约0.5-8天的物理半衰期。

放射性核素发射的能量-为了放疗应用，作为粒子发射体(例如α-发射体、β-发射体和Auger电子发射体)的放射性核素是特别有用的，因为它们发射在短距离内蓄积其能量从而产生高度局部化破坏的高能粒子。β-发射放射性核素是特别优选的，因为来自这些同位素的β-粒子发射的能量在5至大约150个细胞直径内蓄积。由这些核素制备的放射治疗剂能够杀死与它们的定位部位相对接近的病患细胞，但不能跨越长距离行进而破坏相邻正常组织如骨髓。

比活性(即放射性/放射性核素质量)-具有高比活性的放射性核素(例如发生器产生的90-Y、111-In、177-Lu)是特别优选的。放射性核素的比活性由它的生产方法、用于生产它的特定靶体和所讨论的同位素的特性来决定。

许多镧系元素包括具有使它们适于用作放射治疗剂的核特性的放射性同位素，因为它们发射β-粒子或Auger电子。这些当中的一些列于表6。

Pm：钷，Sm：钐，Dy：镝，Ho：钬，Yb：镱，Lu：镥，Y：钇，In：铟

放射金属如β-发射镧系放射性同位素的制备方法对本领域技术人员是已知的，并已在其它地方公开[例如Cutler C S，Smith CJ，EhrhardtGJ.；Tyler TT，Jurisson SS，Deutsch E.″Current and potential therapeutic uses of lanthanide radioisotopes.″Cancer Biother.Radiopharm.2000；15(6)：531-545]。许多这些同位素可以高产率和较低成本地产生，且许多(例如⁹⁰Y、¹⁴⁹Pm、¹⁷⁷Lu)可以以接近无载体的比活性产生(即高百分比的原子是放射性的)。由于非放射性原子可以与它们的放射性类似物竞争与靶组织上的受体结合，因此使用具有高比活性的放射性同位素是重要的，以允许递送尽可能高剂量的放射性至靶组织。

含有β-发射同位素铼(¹⁸⁶-Re和¹⁸⁸-Re)的本发明的放射治疗衍生物也是特别优选的。

本发明通过适当选择靶向基团、放射性核素、金属螯合物和连接基，提供满足所有3个上述标准的放射治疗剂。如在实施例中更详细解释的，本发明化合物在体内显示比不具有本文公开的新连接基的化合物更强的对肿瘤的特异性和更高的肿瘤摄取，显示靶向表达GRP受体的肿瘤并因此成像或递送放射治疗至这些组织的改善能力。实际上，如实施例所示，使用本发明化合物的放射治疗是更有效的(并且存活时间增加)。

此外，如实施例所示，本发明化合物特别适用于治疗前列腺癌，包括前列腺癌的骨或软组织转移瘤并且适用于激素敏感的和激素难治的前列腺癌。

本发明化合物，特别是放射性标记的L70，也适用于延迟前列腺癌的发展和减少前列腺癌血管通透性的方法，特别是激素敏感的前列腺癌。实际上，如实施例所示，本发明化合物可以约100％地延迟发展的时间。这是特别显著的，因为某些药物已被证实少如15％地减少发展的时间。本发明化合物也适用于利于激素敏感的前列腺癌的组合治疗。组合治疗包括给予本发明化合物以及适用于治疗前列腺癌的其它物质，例如，化疗药。本发明化合物通过，例如，正常化到肿瘤的血流，利于附加的治疗剂的递送，从而方便这类组合治疗。

d.评价治疗性应用和对靶向与GRP-R串流的受体的药物(例如⁶⁸Ga-AMBA：GRP-R作为岗哨(Sentinel)受体的PET成像)响应的方法

本发明也提供检测表达GRPR的广谱固体人肿瘤(原发的和转移的)与GRP受体的串流，特别是在RTK或“其它靶”至GRPR方向的的串流的方法，所述固体人肿瘤包括，但是不限于乳腺癌和前列腺癌。现在参考图58，描述了涉及GRP-R与在癌症治疗中使用的其它受体的已知串流。这些实例的串流描述了当靶向“中枢”GRP受体时对“外周”受体的效果。令人意想不到地，我们现在发现串流可以相反方向进行，也就是说，当干涉改变“外周”受体活性时，这改变“中枢”GRP受体的活性。通过本发明分子靶向的GRP受体与多种其它癌症受体进行串流。串流意指在“中枢”GRP受体和一种或多种“外周”受体之间存在交流。显示与GRP受体串流的“外周”受体将，基于作为指向它的干涉的结果的活性变化，导致GRP受体活性变化。当这连贯地和以充足程度存在时，可以使用GRP受体以测定其它，外周受体的状态。这些受体各自由于各所述受体相关而与靶向药物相关，因此在癌症治疗中非常重要。不限于特定的原理，这些受体也可以具有对GRP-R的影响，并因此可以使用靶向GRP-R的本发明化合物以确定，如果和当一种或多种其它受体在患者肿瘤中有活性时，允许肿瘤科医生根据成像确定靶向受体的药物在肿瘤中有效程度。

特别地，本发明允许评价用诸多类型的靶向与GRP-R串流的受体(例如RTK受体或雌激素受体)的治疗剂(例如RTK抑制剂、雌激素抑制剂)中任一种的治疗效果，所述治疗剂在正常的临床条件(剂量和方案)下给予，可以具有对这类受体(例如RTK受体或雌激素受体)的功能的效果，如通过在GRP受体特异性信号的表达中变化所测定的，所述信号是所述受体进行串流所采用的。成像GRP-R受体提供靶向与GRP-R串流的其它受体的药物(例如易瑞沙，赫赛汀和他莫昔芬)治疗(预先/之后)的响应信息，特别是当响应速率低时是有帮助的。例如，在乳腺癌中，赫赛汀具有9％响应(30％具有Her2neu，30％是治疗应答的)。类似地，阿瓦斯丁在转移的结肠癌中具有10％响应和爱必妥在转移的结肠癌中具有11-14％响应。

本发明通过体内GRP受体特异性信号活性增加、减少或无变化，提供预期的对用这类药物治疗的响应的功能性指示。

本发明也提供，通过GRP受体家族体外活性变化，使用放射性标记或以其他方式可测定的标记的GRP受体的激动剂或拮抗剂，筛选靶向与GRP-R串流的外周受体的新药物的方法。

本发明也提供，使用放射性标记的GRP受体激动剂或拮抗剂成像GRP受体家族体内活性以监测药物治疗效果的方法。

这种方法使用本文定义的结合GRP-R的本发明配体，其中M是与通过闪烁照相术或PET成像可测定的放射性核素络合的螯合剂，或是包含放射性标记卤素(例如F-18，¹²³I-，¹²⁴I-或¹³¹I-)的结构部分，并且M-N-O-P-Q如本文所定义，从而成像GRP-R以监测靶向与GRPR串流的受体的药物的治疗进展。

在一个优选的实施方案中，方法使用结合GRPR的本发明配体，AMBA(本文也称之为L70或AMBA)，所述配体优选采用⁶⁸Ga标记(本文也称之为⁶⁸Ga-L70或⁶⁸Ga-AMBA)或者F-18，¹²³I-，¹²⁴I-，¹³¹I-或^99mTc-标记以成像GRP受体从而监测对靶向与GRPR串流的受体的药物治疗的响应。在一个特别优选的实施方案中，在这类方法中使用⁶⁸Ga-AMBA。

在一个优选的实施方案中，GRP-R的成像是纵向的：例如在初始治疗之前(以得到基线值)，在治疗期间(以预见和监测响应，和测定何时肿瘤群体位移可以保证治疗变化)，和在治疗结束时或治疗后(以辅助确定功效，下一治疗步骤和预见或寻找复发)进行成像。

在开始治疗之前至多约30天，优选至多15天和理想地至多7天，进行前成像。在治疗的第一疗程结束时进行开始治疗之后的成像，优选在开始治疗的15天之内和理想地在开始之后至多7天。在计划的一个或多个治疗疗程之后和在其后周期性或在怀疑复发时，进行在治疗结束时的成像。

可以使用的成像剂量为约3-12mCi(111-444MBq)，优选～3-5mCi(110-185MBq)的放射性标记化合物(例如⁶⁸Ga-AMBA或⁶⁷Ga-AMBA)，其采用至多约50μg的肽的质量剂量，并采用快速浓注或通过缓慢灌注历经30分钟给予。

在给药之后以适当的间隔，实施放射性标记的本发明化合物的成像。例如对于⁶⁸Ga，在给药⁶⁸G标记的物质之后约0.5-2小时，使用被称为正电子发射断层摄影术(PET)的成像技术和那些本领域技术人员众所周知的装置，实施成像。例如，R.P.Baum在2007在哥本哈根核医学欧洲联盟会议中所描述那些的。可代替地，可以采用SPECT装置，使用那些本领域技术人员众所周知的技术，实施非正电子发射放射性核素成像。对于更长寿命放射性核素，可以采用与它们的物理半衰期一致的更长时间实施成像。

预期的响应取决于治疗药物靶和GRP受体之间特定的关系，包括，但是不限于，GRP受体特异性信号单调增加，减少或无变化，如成像所测定的。

例如，可以如下导致活性减少：有效靶向治疗药物，通过串流和使肿瘤组织不能为了支持/拯救接通GRPR而导致GRP受体活性减少；或它可以表明治疗无效，因此没有选择性抑制肿瘤组织接通GRPR。

或者，可以通过包括GRP受体的细胞或肿瘤起动存活原理而导致活性增加。这种原理可以预示细胞最终死亡或避免破坏的企图(为了持续的生长接通GRP，或通过例如由GRPR反式激活靶向途径而增强靶向途径)。

最后，GRPR无变化可以暗示，治疗性处理是有效的，GRPR不是细胞可获得的拯救的可代替的途径；或所述治疗不是成功的，和因此不需要反式激活GRPR；或GRP介导拯救，但是不需要增加GRPR的表达.

预期的响应取决于治疗药物或使用的组合，并取决于靶向的癌症细胞，并将通过引用的实施例使其更清楚。当在肿瘤中观察到明显变化之前(即在存在可观察到的肿瘤细胞增殖减少和/或可观察到的肿瘤细胞丧失增加作为肿瘤生长速率减小或实际上肿瘤尺寸减少之前)监测这些GRP家族的受体功能变化是最适用的。

下列表总结了单独采用本发明化合物(优选Ga-AMBA)或将其与¹⁸F-FDG组合而成像GRP-R的可能结果。

表7：治疗决定基础(仅仅Ga-AMBA)

关键：

增加＝↑，减少＝↓，无变化＝

PR＝部分响应或更好

SD＝稳定的疾病

PD＝进行性疾病

表8：治疗决定基础，与¹⁸F-FDG组合的Ga-AMBA

关键：

增加＝↑，减少＝↓，无变化＝

PR＝部分响应或更好

SD＝稳定的疾病

PD＝进行性疾病

F＝¹⁸F-FDG

A＝⁶⁸Ga-AMBA

如在实施例中更详细解释的，本文试验显示，体外在细胞中培养物和体内在小鼠中，不靶向GRP受体的药物治疗以活的细胞为基础调节¹⁷⁷Lu-AMBA(和通过推理可知^67/68Ga-AMBA也如此)的GRP-R摄取。这种试验显示，在前列腺和乳腺癌细胞系中，在靶向外周串流受体的药物和GRP受体之间的串流。

令人意想不到地，实施例也确定了，使用¹⁷⁷Lu-AMBA测量GRP-R活性而测定的信号不同于FDG的信号。例如，通过类似量采用达沙替尼治疗pfPC-3前列腺癌细胞，增加¹⁷⁷Lu-AMBA摄取至多76％，但是减少NBDG，其是2脱氧葡萄糖和¹⁸F-氟脱氧葡萄糖的荧光类似物。一般而言，因为动力学范围增加，与信号减少相比，更期望信号增加。

因此，实施例显示，GRP-R活性(并因此GRP-R的成像)证明药物靶向与GRP-R串流的受体(例如，雌激素受体，Src受体家族，多种RTK受体等)效果的能力。此外，实施例显示，本发明化合物，例如Ga-AMBA，比¹⁸F-FDG更适于监测治疗进展。

6.给药和添加剂

本发明化合物的适宜给药方案对于本领域技术人员来说是已知的。该化合物可以用许多方法施用，所述方法包括但不限于单一或多次IV或IP注射。对于放射性药物，施用的放射性的量足以允许成像或在放射治疗的情况下导致破坏或除去含靶向的GRP-R的组织，但不至于造成非靶体(正常组织)发生实质性损伤。闪烁成像所需的量和给药在上文作了讨论。放射治疗所需的量和给药对于不同的构建体也是不同的，它取决于所用的同位素的能量和半衰期、体内试剂的摄取和清除程度以及肿瘤的质量。一般地，剂量范围可以从大约30-50mCi的单一剂量至至多大约3居里的累积剂量。

如本文解释的，适当地选择质量剂量的给药可以减少在具有功能性GRP受体的正常的组织中标记的本发明化合物的给予剂量的比率，因此改善肿瘤信号的清晰度和/或增加在肿瘤中治疗性放射性核素的剂量。

对于光学成像化合物而言，足以获得所需成像增强的剂量是本领域技术人员已知的且可根据所用染料或其它化合物、待成像的器官或组织、所用成像设备等而广泛变化。

本发明的组合物可以包括生理学上可接受的缓冲剂，并可能需要照射稳定剂以防止在注射前化合物发生辐射分解破坏。放射稳定剂对本领域技术人员来说是已知的，并可以包括例如对氨基苯甲酸、抗坏血酸、龙胆酸等。

包含制备本发明的诊断或治疗剂所需的所有组分的单瓶或多瓶试剂盒是本发明的一个组成部分。在放射性药物的情况下，这些试剂盒通常还包括除了放射性核素之外的所有必需的成分。

例如，用于制备本发明的放射性药物的单瓶试剂盒优选包含式M-N-O-P-G的螯合剂/连接基/靶向肽缀合物，一种亚锡盐来源(如果需要还原，例如在使用锝的时候)或其它可药用的还原剂，并用可药用的酸或碱适宜地缓冲以调节pH至大约3至大约9的值。所用的还原剂的数量和类型将高度取决于待形成的交换络合物的性质。适宜的条件对本领域技术人员来说是已知的。优选试剂盒内容物为冻干形式。这种单瓶试剂盒可以任选包含不稳定或交换配体，例如葡糖庚酸盐、葡萄糖酸盐、甘露醇、苹果酸盐、柠檬酸或酒石酸，并还可以包含反应修饰剂如二亚乙基三胺-五乙酸(DPTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)，或者α、β或γ-环糊精，其用于改善最终产物的放射化学纯度和稳定性。该试剂盒还可以包含稳定剂、膨胀剂如甘露醇，它们设计用于辅助冻干工艺，和本领域技术人员已知的其它添加剂。

多瓶试剂盒优选包含相同的常规组分，但使用多于一个的小瓶以重构放射性药物。例如，一个小瓶可以包含所有在加入高锝酸盐时形成不稳定的Tc(V)络合物所需的成分(例如亚锡源或其它还原剂)。将高锝酸盐加到此小瓶，并在等待适宜的时间之后将此小瓶的内容物加到包含螯合剂和靶向肽以及适于将pH调节至其最佳值的缓冲剂的第二小瓶。在大约5至60分钟的反应时间之后，形成本发明的络合物。有利的是此多瓶试剂盒的两个小瓶的内容物均被冻干。如上所述，反应修饰剂、交换配体、稳定剂、膨胀剂等可以存在于任一个或两个小瓶中。

化合物的一般制备

取决于所选择的螯合剂，本发明化合物可以通过多种方法制备。化合物的肽部分可以最为便利地由肽合成技术中已常规建立和已知的技术，例如固相肽合成(SPPS)方法来制备。因为要进行固相合成，因此使用交替FMOC保护和脱保护是优选的制备短肽的方法。重组DNA技术优选用于生产蛋白和它的长片段。

固相肽合成(SPPS)包括往与不溶性载体或基质(如聚苯乙烯)连接的生长的肽链上分步加入氨基酸残基。所述肽的C末端残基首先固定于可商购得到的载体上，其氨基用N-保护剂(如叔丁氧羰基(Boc)或芴基甲氧基羰基(Fmoc))保护。用适宜的脱保护剂除去氨基保护基，对于Boc为TFA，或对于Fmoc为哌啶，并采用偶联剂(如二异丙基碳二亚胺(DIC))加入下一个氨基酸残基(N-保护形式)。在肽键形成后，从载体上洗去试剂。在加入最后的残基之后，用适宜的试剂(如三氟乙酸(TFA)或氟化氢(HF))从载体上裂解肽。

通过分段偶联的化合物的可替代选择的制备

本发明化合物还可以通过本领域中称为分段偶联(segment coupling)或片段缩合的方法来制备(Barlos，K.和Gatos，D.；2002″Convergent Peptide Synthesis″in Fmoc Solid Phase Synthesis-APractical Approach；Eds.Chan，W.C.和White，P.D.；Oxford University Press，New York；Chap.9，pp 215-228)。在此方法中，通过液相合成或固相合成或这两种方法的组合分别制备通常为侧链保护形式的肽的片段。片段的选择是关键的，且用可以提供易处理数目的片段的分割策略来进行选择，所述片段的C-末端残基和N-末端残基设计用于提供肽合成中最干净利落的偶联。最好片段的C-末端残基不含手性α碳(甘氨酸或其它部分，在偶联步骤中在待活化的羧基的碳∝处为非手性)，或者包含在活化和偶联期间的外消旋化倾向是可能选择中最低的氨基酸。各片段的N-末端氨基酸的选择基于将活化的酰基中间产物偶联至氨基的容易程度。一旦选择分割策略，则根据所需的中间产物的合成可达性和所得产物的处理和纯化(如果需要的话)的相对容易性来选择各片段的偶联方法。然后将片段偶联在一起，所述片段都在溶液中，或者一个在固体相而另一个在溶液中，从而制备完全或部分保护形式的最终结构。

然后除去受保护的目标化合物的保护基，纯化，并分离得到最终期望的产物。分段偶联方法的优点是各个片段可以分别纯化，允许除去副产物，如由不完全偶联产生缺失序列，或者那些衍生自反应(如偶联步骤中侧链酰胺脱水，或在Fmoc基团脱保护期间将侧链(如Gln的侧链)内环化至α-氨基)的副产物。这些副产物都会存在于常规的基于树脂的“直通”肽链装配的最终产物中，如果需要的话可以在分段偶联策略的许多阶段除去这些物质。分段偶联策略的另一个重要的优点是可以应用不同的溶剂、试剂和条件以将各片段的合成最优化至高纯度和产率，导致最终产物的纯度和产率得到提高。其它意识到的优点是试剂消耗减少和成本降低。

实施例

提供以下实施例作为可以用于制备本发明多种化合物的不同方法的实例。在各个实施例中，存在用单一黑体大写字母(例如A、B、C)标识的化合物，其与在附图中相同标记的对应化合物相关。

一般实验

A.所用其它缩写词的定义

在整个说明书中使用以下常用缩写：

1，1-二甲基乙氧基羰基(Boc或Boc)；

9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；

烯丙氧基羰基(Aloc)；

1-羟基苯并三唑(HOBt或HOBT)；

N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)；

N-甲基吡咯烷酮(NMP)；

乙酸酐(Ac₂O)；

(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己-1-基)-3-甲基丁基(iv-Dde)；

三氟乙酸(TFA)；

试剂B(TFA∶H₂O∶苯酚∶三异丙基硅烷，88∶5∶5∶2)；

二异丙基乙胺(DIEA)；

O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲

六氟磷酸盐(HBTU)；

O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲

六氟磷酸盐(HATU)；

N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；

固相肽合成(SPPS)；

二甲亚砜(DMSO)；

二氯甲烷(DCM)；

二甲基甲酰胺(DMF)；

二甲基乙酰胺(DMA)；

1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)；

三异丙基硅烷(TIPS)；

1，4，7，10-四氮杂环十四烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)

(1R)-1-[1，4，7，10-四氮杂-4，7，10-三(羧甲基)环十二烷基]乙烷-1，2-二甲酸(CMDOTA)；

胎牛血清(FBS)；

人血清白蛋白(HSA)；

人前列腺癌细胞系(PC3)；

氯甲酸异丁酯(IBCF)；

三丁基胺(TBA)；

放射化学纯度(RCP)；和

高效液相色谱(HPLC)。

B.材料

所用的Fmoc-保护的氨基酸购自Nova-Biochem(San Diego，CA，USA)，Advanced Chem Tech(Louisville，KY.，USA)、Chem-Impex International(Wood Dale Ill.，USA)和Multiple Peptide Systems(SanDiego，CA.，USA)。合成中所需的其它化学物质、试剂和吸附剂购自Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，WI，USA)和VWR Scientific Products(Bridgeport，NJ.，USA)。用于肽合成的溶剂购自Pharmco Co.(Brook field CT.，USA)。用于HPLC分析和纯化的柱购自Waters Co.(Milford，MA.，USA)。以下给出非商购的物质的实验细节。

C.肽合成的仪器

使用Advanced ChemTech 496ΩMOS合成仪，Advanced ChemTech 357FBS合成仪和/或通过人工肽合成来制备肽。但是，所用的反复脱保护和链延伸的方案对于所有方法来说是相同的。

D.采用Symphony仪器(Rainin制造)的自动合成

用Protein Technologies Inc.提供的Symphony soft ware(Version3)进行合成。使用置换率为0.25mmol/g的Novagel TGR树脂，各孔包含0.2g树脂(50μmol)。将氨基酸溶于NMP，其浓度为0.25M。制备0.25M在DMF中的HBTU和N-甲基吗啉的溶液，并将其用于偶联。所有的偶联进行2.0小时。裂解在机器外通过将树脂转移至另一反应容器并使用如在人工合成中使用的试剂B完成。

E.用于分析和纯化的仪器

使用Shimadzu-LC-10A双泵梯度分析LC系统，采用用于系统控制、数据获取和运行后处理的Shimadzu-ClassVP软件4.1版完成分析HPLC。在Hewlett-Packard Series 1100MSD质谱仪上获得质谱，其接口为Hewlett-Packard Series 1100双泵梯度HPLC系统，配备Agilent Technologies 1100series自动取样器，适于直接流式注射或注射至Waters Associates XTerra MS C18柱(4.6mm×50mm，5μ颗粒，

孔)上。此仪器通过HP Kayak工作站，使用用于样品提交的′MSDAnyone′软件和用于仪器控制和数据获取的HP Chemstation软件来驱动。在大部分的情况下，通过使用注射5μL浓度为1mg/mL的样品溶液进行直接注射来引入样品，并使用阳离子电喷雾进行分析以得到用于确证结构的m/e和m/z(带多个电荷)离子。在Varian Innova波谱仪上于500MHz获得¹H-NMR谱。在相同的仪器上，于125.73MHz获得¹³C-NMR谱。通常将残余的¹H吸收，或者在¹³C-NMR的情况下所用溶剂的¹³C吸收用作内标；在其它情况下采用四甲基硅烷(δ＝0.00ppm)。以δ单位给出共振值。从Quantitative Technologies Inc.Whitehouse NJ获得微分析数据。用Shimadzu-LC-8A双泵梯度制备HPLC系统，使用用于系统控制、数据获取、级分收集和运行后处理的Shimadzu-ClassVP软件4.3版完成制备HPLC。

F.用于肽合成的一般方法

将Rink酰胺-Novagel HL树脂(0.6mmol/g)用作固体载体。

G.偶联操作

在典型实验中，将第一氨基酸装载至0.1g树脂(0.06mmol)。将在NMP中的适宜的Fmoc-氨基酸(0.25M溶液；0.960mL)加至树脂，然后加入N-羟基苯并三唑(0.5M，在NMP中；0.48mL)。并将反应区(block)(在自动肽合成的情况下)或各反应容器(在人工肽合成的情况下)振荡大约2分钟。向以上混合物中加入二异丙基碳二亚胺(0.5M，在NMP中；0.48mL)，并将反应混合物在室温下振荡4小时。然后通过应用正压力无水氮气来冲洗反应区或单独的反应容器内的反应物。

H.洗涤操作

给反应区的每孔装填1.2mL NMP，并将该区振荡5分钟。在氮正压下排出溶液。重复此操作三次。在使用单独的容器进行人工合成的情况下使用相同的方法和适宜体积的NMP。

I.除去Fmoc保护基团

用1.5mL在DMF中的20％哌啶(v/v)处理含有Fmoc-保护的氨基酸的树脂，并将该反应区或单独的人工合成容器振荡15分钟。从树脂中排出溶液。重复此过程一次，并用上述的洗涤方法洗树脂。

J.配体(DOTA和CMDOTA)的最终偶联

将树脂结合的肽连接基构建体的N-末端氨基去封闭，并洗涤树脂。制备0.25M在NMP中的目标配体和HBTU的溶液，并用两倍当量的DIEA进行处理。将所得的激活配体的溶液加至树脂(1.972mL；0.48mmol)，并将反应混合物在室温下振荡24-30小时。排出溶液并洗涤树脂。用1.5mL二氯甲烷(3X)完成树脂的最终洗涤。

K.最终肽的脱保护和纯化

将试剂B的溶液(2mL；88∶5∶5∶2-TFA∶苯酚∶水∶TIPS)加至树脂，并将反应区或单独的容器于室温下振荡4.5小时。将所得的包含脱保护肽的溶液排出至小瓶中。使用1mL试剂B再重复此过程2次。用Genevac HT-12 series II离心浓缩器减压浓缩合并的滤液。然后将各小瓶中残余物与2mL Et₂O一起研磨，并弃去上清液。重复此方法两次以得到肽，为无色固体。将该粗制肽溶于水/乙腈，并用WatersXTerra MS C18制备HPLC柱(50mm×19mm，5微米粒径，孔径)或Waters-YMC C18ODS柱(250mm×30mm i.d.，10微米粒径.

孔径)纯化。收集含产物的级分，并用HPLC分析。收集＞95％纯度的级分，并通过冻干分离肽。

制备型HPLC的条件(Waters XTerra柱)：

洗脱速率：50mL/分

检测：UV，λ＝220nm

洗脱剂A：0.1％TFA水溶液；洗脱剂B：乙腈(0.1％TFA)。

HPLC分析的条件：

柱：Waters XTerra(Waters Co.；4.6×50mm；MS C18；5微米粒子，

孔)。

洗脱速率：3mL/分；检测：UV，λ＝220nm。

洗脱剂A：0.1％TFA水溶液；洗脱剂B：乙腈(0.1％TFA)。

实施例I-图1A-B

合成L62

概述：如图1A-B所示，用以下步骤制备L62：

用NaOH水解(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯A，得到对应的酸B，然后与Fmoc-Cl反应得到中间产物C。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂依次与C、Fmoc-甘氨酸和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L62。总产率：2.5％。以下提供更多的细节：

A.用铃蟾肽[7-14](SEQ ID NO：1)官能化的Rink酰胺树脂，(A)

在固相肽合成容器中，将Fmoc-氨基酸(24mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(3.67g；24mmol)和N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(3.75mL；24mmol)依次加到在DMF(45mL)中的Rink酰胺NovaGel^TM树脂(10g；6.0mmol)A的悬浮液。将混合物于室温下使用台式振荡器振荡3小时，然后排空溶液，并用DMF(5×45mL)洗涤树脂。将树脂与在DMF(45mL)中的25％哌啶一起振荡4分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMF(45mL)中的25％哌啶。将该悬浮液振荡10分钟，然后倒空溶液，并用DMF(5×45mL)洗涤树脂。

将此方法依次用于以下氨基酸：

N-α-Fmoc-L-蛋氨酸、N-α-Fmoc-L-亮氨酸、N-α-Fmoc-N^im-三苯甲基-L-组氨酸、N-α-Fmoc-甘氨酸、N-α-Fmoc-L-缬氨酸、N-α-Fmoc-L-丙氨酸、N-α-Fmoc-Nⁱⁿ-Boc-L-色氨酸。

在最后的偶联反应中，将N-α-Fmoc-N-γ-三苯甲基-L-谷氨酰胺(14.6g；24mmol)、HOBt(3.67g；24mmol)和DIC(3.75mL；24mmol)加到在DMF(45mL)中的树脂。将该混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMF(5×45mL)、CH₂Cl₂(5×45mL)洗涤树脂，并进行真空干燥。

B.制备中间产物B和C(图1A)：

1.合成(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸(B)

45℃下将1M NaOH溶液(16.6mL；16.6mmol)滴加到在MeOH(65mL)中的(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸甲酯(5.0g；12.8mmol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至25mL，并加入H₂O(40mL)和1MHCl(22mL)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×50mL)洗涤并真空干燥得到B，为一种白色固体(5.0g；13.3mmol)。产率80％。

2.合成(3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸(C)

将在1，4-二

烷(9mL)中的9-芴基甲氧基羰基氯(0.76g；2.93mmol)的溶液滴加到在0℃下搅拌的在10％Na₂CO₃水溶液(16mL)和1，4-二

烷(9mL)中的(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸B(1.0g；2.66mmol)的悬浮液。室温下搅拌6小时后，加入H₂O(90mL)，用Et₂O(2×90mL)洗涤水相，然后加入2M HCl(15mL)(最终pH：1.5)。用EtOAc(2×100mL)萃取水相，用Na₂SO₄干燥有机相并蒸发。用快速色谱法纯化粗品得到C，为一种白色固体(1.2g；2.0mmol)。产率69％。

C.合成L62(N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图1B)：

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将该悬浮液振荡20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基胆烷-24-酸C(0.72g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-甘氨酸(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，用DMA(5×7mL)洗涤树脂，然后将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)和CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(20mL)一起研磨得到沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤，然后用HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将含产物的级分冻干得到L62(6.6mg；3.8×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率4.5％。

实施例II-图2A-F

合成L70、L73、L74、L115和L116

概述：通过以下方法获得产物：将在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(具有适宜的侧链保护)与不同的连接基偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率3-9％。

A.合成L70(图2A)：

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(0.43g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和DIEA(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡24小时。倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀。并用Et₂O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L70，为一种白色绒毛状固体(6.8mg；0.005mmol)。产率3％。

B.合成L73、L115和L116(图2B-2E)：

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-连接基-OH(1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干。

C.合成L74(图2F)：

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-六氢异烟酸(0.42g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀并用Et₂O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析，并用HPPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L74，为一种白色绒毛状固体(18.0mg；0.012mmol)。产率8％。

实施例III-图3A-E

合成L67

概述：用NaOH水解(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯A得到对应的酸B，然后使其与Fmoc-甘氨酸反应得到中间产物C。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ IDNO：1])官能化的Rink酰胺树脂依次与C和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品，得到L67。总产率：5.2％。

A.合成(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸，(B)(图3A)

在45℃下将1M NaOH溶液(6.6mL；6.6mmol)滴加到在MeOH(15mL)中的(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸甲酯A(2.1g；5.1mmol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至25mL，然后加入H₂O(25mL)和1M HC1(8mL)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×30mL)洗涤，并真空干燥得到B，为一种白色固体(1.7g；4.4mmol)。产率88％。

B.合成(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-氧代胆烷-24-酸(C)(图3A)

将三丁基胺(0.7mL；3.1mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(25mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(0.9g；3.1mmol)的溶液。随后加入氯甲酸异丁酯(0.4mL；3.1mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(30mL)中的三丁基胺(0.6mL；2.6mmol)和(3β，5β)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸B(1.0g；2.6mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至40mL，然后加入H₂O(50mL)和1NHCl(10mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×50mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到C，为一种白色固体(1.1g；1.7mmol)。产率66％。

C.合成L67(N-[(3β，5β)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12，24-二氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图3B和3E)。

将树脂D(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基]-12-氧代胆烷-24-酸C(0.80g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯的加合物与NaCl(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(20mL)一起研磨。

实施例IV-图4A-H

合成L63和L64

概述：用NaOH水解(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯1b得到中间产物2b，然后使其与Fmoc-甘氨酸反应得到3b。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ IDNO：1])官能化的Rink酰胺树脂与3b反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L64。从已经获得的中间产物2a开始重复相同的过程得到L63。总产率分别为9和4％。

A.合成(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(2b)(图4A)

将1M NaOH溶液(130mL；0.13mol)滴加到在45℃下加热的在MeOH(300mL)中的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸甲酯1b(42.1g；0.10mol)的溶液。45℃下搅拌3小时后，将混合物浓缩至150mL，并加入H₂O(350mL)。在用CH₂Cl₂(2×100mL)萃取之后，将水溶液浓缩到200mL并加入1M HCl(150mL)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×100mL)洗涤，并真空干燥得到2b，为一种白色固体(34.8g；0.08mol)。产率80％。

B.合成(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸，(3a)(图4A)

将三丁基胺(4.8mL；20.2mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(120mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(6.0g；20.2mmol)的溶液。随后加入氯甲酸异丁酯(2.6mL；20.2mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(120mL)中的三丁基胺(3.9mL；16.8mmol)和(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸2a(6.6g；16.8mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至150mL，然后加入H₂O(250mL)和1N HCl(40mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到3a，为一种白色固体(3.5g；5.2mmol)。产率31％。

C.合成(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(3b)(图4A)

将三丁基胺(3.2mL；13.5mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(80mL)中的N-α-Fmoc-甘氨酸(4.0g；13.5mmol)的溶液。然后加入氯甲酸异丁酯(1.7mL；13.5mmol)，并在10分钟后于1小时内将在DMF(80mL)中的三丁基胺(2.6mL；11.2mmol)和(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸3a(4.5g；11.2mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温，并在6小时后将溶液浓缩至120mL，然后加入H₂O(180mL)和1N HCl(30mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化得到3a，为一种白色固体(1.9g；2.8mmol)。产率25％。

在一个可替代选择的方法中，(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，(3b)可以如下制备：

将N-羟基琥珀酰亚胺(1.70g，14.77mmol)和DIC(1.87g，14.77mmol)依次加到在二氯甲烷(15mL)中的Fmoc-Gly-OH(4.0g，13.45mmol)的搅拌溶液；将所得的混合物于室温下搅拌4小时。通过过滤除去形成的N，N′-二异丙基脲，并用乙醚(20mL)洗涤固体。除去挥发物，并用乙醚(3×20mL)洗涤形成的固体Fmoc-Gly-琥珀酰亚氨基酯。然后将Fmoc-Gly-琥珀酰亚氨基酯再溶于无水DMF(15mL)，并将3-氨基脱氧胆酸(5.21g，12.78mmol)加到该澄清的溶液。将反应混合物于室温下搅拌4小时，加入水(200mL)并将沉淀的固体过滤，用水洗涤，干燥并用硅胶色谱法(TLC(二氧化硅)：(R_f：0.50，硅胶，CH₂Cl₂/CH₃OH，9∶1)(洗脱剂：CH₂Cl₂/CH₃OH(9∶1))纯化得到(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，为一种无色固体。产率：7.46g(85％)。

D.合成L63(N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-12-羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图4B)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-12-羟基胆烷-24-酸3a(0.82g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(5mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀并用Et₂O(5×5mL)洗涤，然后用HPLC分析和纯化。将包含产物的级分冻干得到L63，为一种白色绒毛状固体(12.8mg；0.0073mmol)。产率9％。

E.合成L64(N-[(3β，5β，7α，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图4C)

将树脂A(0.5g，0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸3b(0.81g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥.将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×5mL)洗涤。然后将其溶于H₂O(20mL)，并加入Na₂CO₃(0.10g；0.70mmol)；将所得的混合物在室温下搅拌4小时。用HPLC纯化此溶液，将包含产物的级分冻干得到L64，为一种白色绒毛状固体(3.6mg；0.0021mmol)。产率4％。

实施例V-图5A-E

合成L71和L72

概述：分两步得到产物。第一步是在上文讨论的Rink酰胺树脂上固相合成八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(具有适宜的侧链保护基)。第二步是与不同的连接基偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率3-9％。

A.铃蟾肽[7-14]官能化和裂解方法(图5A和5D)

将树脂B(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂.将Fmoc-连接基-OH(1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡3小时，倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物C(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡24小时。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与乙醚(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用乙醚(5×5mL)洗涤，然后用分析HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干。

B.产物

1.L71(4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)

得到产物，为一种白色绒毛状固体(7.3mg；0.005mmol)。产率7.5％。

2.L72(反式-4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]环己基羰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)

得到产物，为一种白色绒毛状固体(7.0mg；0.005mmol)。产率4.8％。

C.反式-4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]环己烷甲酸，(D)(图5E)

将在1，4-二

烷(40mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(4.4g；14.0mmol)的溶液滴加到冷却至0℃的在10％Na₂CO₃(30mL)中的反式-4-(氨基甲基)环己烷甲酸(2.0g；12.7mmol)的溶液。然后使混合物温至室温，并在室温下搅拌1小时后用1N HCl(32mL)处理直至最终pH为2。用n-BuOH(100mL)萃取所得的溶液；除去挥发物，并用快速色谱法纯化粗制残余物，得到D，为一种白色固体(1.6g；4.2mmol)。产率33％。

实施例VI-图6A-F

合成L75和L76

概述：通过以下方法得到两种产物：将在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(A)与两种连接基E和H偶联，然后用DOTA三叔丁酯官能化。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化最终产物。总产率：8.5％(L75)和5.6％(L76)。

A.2-[(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)甲基]苯甲酸，(C)(图6A)

根据文献报道的方法(Bornstein，J；Drummon，P.E.；Bedell，S.F.Org Synth.Coll.Vol.IV 1963，810-812)合成产物。

B.2-(氨基甲基)苯甲酸，(D)(图6A)

将40％甲基胺溶液(6.14mL；7.1mmol)加到2-[(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)甲基]苯甲酸C(2g；7.1mmol)，然后加入EtOH(30mL)。室温下搅拌5分钟后在50℃下加热反应混合物。2.5小时后，将混合物冷却，并在减压下蒸发溶剂。将粗产物悬浮在50mL无水乙醇中，并在室温下将悬浮液搅拌1小时。将固体过滤，并用EtOH洗涤得到2-(氨基甲基)苯甲酸D(0.87g；5.8mmol)。产率81％。

C.2-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯甲酸，(E)(图6A)

根据文献报道的方法(Sun，J-H.；Deneker，W.F.Synth.Commun.1998，28，4525-4530)合成产物。

D.4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸，(G)(图6B)

将4-(溴甲基)-3-硝基苯甲酸(3.2g；12.3mmol)溶于在EtOH(300mL)中的8％NH₃，并将所得的溶液于室温下搅拌。22小时后蒸发溶液，并将残余物悬浮在H₂O(70mL)中。将悬浮液搅拌15分钟并过滤。将收集的固体悬浮在H₂O(40mL)中，并通过加入数滴25％NH₄OH水溶液(pH 12)来溶解，然后通过加入6N HC1调节溶液的pH至6。将沉淀的固体过滤，依次用MeOH(3×5mL)和Et₂O(10mL)洗涤，并真空干燥(1.3kPa；P₂O₅)得到4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸，为一种灰褐色固体(1.65g；8.4mmol)。产率68％。

E.4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸，(H)(图6B)

将4-(氨基甲基)-3-硝基苯甲酸G(0.8g；4mmol)溶于10％Na₂CO₃水溶液(25mL)和1，4-二烷(10mL)，并将溶液冷却至0℃。历经20分钟，滴加在1，4-二烷(10mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(Fmoc-Cl)(1.06g；4mmol)的溶液。在0-5℃下2小时和10℃下1小时后，将反应混合物过滤，并通过加入1N HCl将溶液酸化至pH 5。将沉淀过滤，用H₂O(2×2mL)洗涤，真空干燥(1.3kPa；P₂O₅)得到4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸，为一种白色固体(1.6g；3.7mmol)。产率92％。

F.L75(N-[2-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图6C)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将2-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯甲E(0.45g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(DOTA三叔丁酯)(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，在用Et₂O(20mL)处理后得到一种沉淀。通过离心收集所得的沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到L75(190mg；0.13mmol)，为一种白色固体。产率44％。

G.L76(N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-1-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图6D)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-硝基苯甲酸H(0.50g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯(0.79g；1.2mmol)、HOBT(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(20mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(141mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化37mg部分粗品。将包含产物的级分冻干得到L76(10.8mg；7.2×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率9％。

实施例VII-图7A-C

合成L124

概述：使4-氰基苯酚A与溴乙酸乙酯和K₂CO₃在丙酮中反应得到中间产物B，用NaOH水解得到对应的酸C。用H₂和PtO₂，在355kPa下，在EtOH/CHCl₃中对C进行连续氢化得到对应的氨基酸D，直接用FmocOSu保护得到E。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])官能化的Rink酰胺树脂与E反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化粗品得到L124。总产率：1.3％

A.合成(4-氰基苯氧基)乙酸乙酯，(B)(图7A)

根据文献报道的方法(Archimbault，P.；LeClerc，G.；Strosberg，A.D.；Pietri-Rouxel，F.PCT Int.Appl.WO 980005，1998)合成产物。

B.合成(4-氰基苯氧基)乙酸(C)(图7A)

将1N NaOH溶液(7.6mL；7.6mmol)滴加到在MeOH(15mL)中的(4-氰基苯氧基)乙酸乙酯B(1.55g；7.6mmol)的溶液。1小时后用1NHCl(7.6mL；7.6mmol)酸化溶液并蒸发。将残余物溶于水(20mL)，并用CHC1₃(2×30mL)萃取。蒸发有机相，并用快速色谱法纯化粗品得到(4-氰基苯氧基)乙酸C(0.97g；5.5mmol)，为一种白色固体。产率72％。

C.合成[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸，(E)(图7A)

将PtO₂(150mg)加到在EtOH(147mL)和CHCl₃(3mL)中的(4-氰基苯氧基)乙酸C(1.05g；5.9mmol)的溶液。将悬浮液在氢气氛(355kPa；20℃)下搅拌30小时。用

衬垫过滤混合物，并将溶液真空蒸发。用快速色谱法纯化残余物得到酸D(0.7g)，0℃下将其溶于H₂O(10mL)、MeCN(2mL)和Et₃N(0.6mL)，然后滴加在MeCN(22mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(1.3g；3.9mmol)的溶液。室温下搅拌16小时后，将反应混合物过滤，并在真空下除去挥发物。用1N HCl(10mL)处理残余物，将沉淀的固体过滤，并用快速色谱法纯化得到[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸E(0.56g；1.4mmol)，为一种白色固体.总产率24％。

D.合成L124(N-[[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，l0-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图7B)

将树脂A(480mg；0.29mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将[4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]苯氧基]乙酸E(480mg；1.19mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBT)(182mg；1.19mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(185μL；1.19mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(6mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(6mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(750mg；1.19mmol)、HOBT(182mg；1.19mmol)、DIEA(404μL；2.36mmol)、DIC(185μL；1.19mmol)和DMA(6mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(2×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发滤液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×5mL)洗涤得到一种固体(148mg)，用HPLC分析。用制备HPLC纯化65mg部分粗品。将包含产物的级分冻干得到L124(图7C)，为一种白色固体(15mg；0.01mmol)。产率7.9％。

实施例VIII-图8A-C

合成L125

概述：使4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯A与在DMF中的NaN₃反应得到中间产物叠氮化物B，然后用PH₃P和H₂O还原成胺C。用NaOH水解C得到酸D，将其直接用FmocOSu保护得到E。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14][SEQ ID NO：1])(A)官能化的Rink酰胺树脂与E反应，然后与DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，通过制备HPLC纯化粗品得到L125。总产率：0.2％。

A.合成4-(叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯，(B)(图8A)

将在DMF(90mL)中的4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(8g；31mmol)和NaN₃(2g；31mmol)的溶液于室温下搅拌过夜。在真空下除去挥发物，并将粗产物溶于EtOAc(50mL)。用水(2×50mL)洗涤溶液并干燥。将挥发物蒸发得到4-(叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(6.68g；30mmol)。产率97％。

B.4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯，(C)(图8A)

将三苯膦(6.06g；23mmol)加到在THF(50mL)中的(4-叠氮基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯B(5g；22mmol)的溶液：观察到产生氢和形成白色固体。将混合物在氮气氛和室温下搅拌。24小时后再加入三苯膦(0.6g；2.3mmol)。24小时后叠氮化物被消耗，并加入H₂O(10mL)。4小时后白色固体消失。将混合物于45℃下加热3小时，并在室温下搅拌过夜。将溶液蒸发至干，并用快速色谱法纯化粗品得到4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯C(1.2g；6.1mmol)。产率28％。

C.4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸，(E)(图8A)

将1N NaOH溶液(6.15mL；6.14mmol)滴加到在40℃下加热的在MeOH(25mL)中的4-(氨基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯C(1.2g；6.14mmol)的溶液。45℃下搅拌8小时后，将溶液于室温下搅拌过夜。加入1N NaOH溶液(0.6mL；0.6mmol)，并将混合物在40℃下加热4小时。浓缩溶液，用1N HCl(8mL；8mmol)酸化，用EtOAc(2×10mL)萃取，然后将水层浓缩至15mL。将此溶液(pH4.5)于0℃下冷却，并加入Et₃N(936μL；6.75mmol)(pH 11)。滴加在MeCN(30mL)中的N-(9-芴基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(3.04g；9mmol)的溶液(最终pH 9)，沉淀出白色固体。室温下搅拌1小时后将固体过滤，悬浮在1N HCl(15mL)中，并将悬浮液搅拌30分钟。将固体过滤得到4-[[[9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸E，为一种白色固体(275mg；0.7mmol)。将滤液真空蒸发，并将所得的白色残余物悬浮在1N HCl(20mL)中，并搅拌30分钟。将固体过滤，并用快速色谱法纯化得到更多的酸E(198mg；0.5mmol)。总产率20％。

D.L125(N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺)(图8B)

将树脂A(410mg；0.24mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]甲基]-3-甲氧基苯甲酸E(398mg；0.98mmol)、HOBt(151mg；0.98mmol)、DIC(154μL；0.98mmol)和DMA(6mL)加至树脂；将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(6mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(6mL)中的50％吗啉，将混合物振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(618mg；0.98mmol)、HOBt(151mg；0.98mmol)、DIC(154μL；0.98mmol)、DIEA(333μL；1.96mmol)和DMA(6mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空溶液，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其与Et₂O(5mL)一起研磨。用Et₂O(5×5mL)洗涤通过离心收集所得的沉淀，用HPLC分析，并用制备HPLC纯化。将包含产物的级分冻干得到L125(图8C)，为一种白色固体(15.8mg；0.011mmol)。产率4.4％。

实施例IX-图9A-9D

合成L146、L233、L234和L235

概述：分几步从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14])(A)开始获得产物。在最后用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L146、L233、L234和L235。总产率：分别为10％、11％、4.5％、5.7％。

A.3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸，B(图9A)

将在THF(20mL)中的3-氨基苯甲酸(0.5g；3.8mmol)和N-乙基二异丙基胺(DIEA)(0.64mL；3.8mmol)的溶液滴加到在THF(10mL)和CH₂Cl₂(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(1.2g；4.0mmol)(3)的溶液。室温下搅拌24小时后，加入1M HCl(50mL)(最终pH：1.5)。将沉淀过滤，用H₂O(2×100mL)洗涤，真空干燥并用CHCl₃/CH₃OH(1∶1)结晶得到B，为一种白色固体(0.7g；1.6mmol)。产率43％。

B.N-[3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L233(图9D)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。

将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将3-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基苯甲酸B(0.50g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡6小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl²的加合物(0.79g；1.2mmol)(5)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将该树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(152mg)，用HPLC分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L233(17.0mg；11.3×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率11％。

C.N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯基乙酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L146(图9D)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将该悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯基乙酸(0.45g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡6小时，过滤并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，将溶液过滤，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和DIEA(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂，将混合物于室温下振荡2小时，过滤并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，将溶液过滤，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、DIEA(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡24小时，过滤，并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(203mg)，对其用HPLC分析。通过制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L146(11.2mg；7.4×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率10％。

D.6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸，C(图9B)

将在THF(20mL)中的6-氨基萘甲酸(500mg；2.41mmol)和DIEA(410μL 2.41mmol)的溶液滴加到在CH₂Cl₂/THF 1∶1(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(760mg；2.41mmol)的溶液，并在室温下搅拌。24小时后，将溶剂真空蒸发。用0.5N HC1(50mL)溶解残余物，并搅拌1小时。将沉淀的白色固体过滤并干燥。将白色固体悬浮在甲醇(30mL)中，并煮沸5分钟，然后过滤得到产物C(690mg；1.48mmol)。产率62％。

E.N-[6-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]萘甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L234

将树脂A(500mg；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将6-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基萘甲酸C(560mg；1.2mmol)、HOBt(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡6小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(6L)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(757mg；1.2mmol)、HOBt(184mg；1.2mmol)、DIC(187uL；1.2mmol)和DIEA(537uL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在烧瓶中振荡，倒空，用DMA(2×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，将其用Et₂O(20mL)处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(144mg)，对其用HPLC进行分析。通过制备HPLC纯化一定量的粗品(54mg)。将包含产物的级分冻干得到L234(8mg；5.1×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率4.5％。

F.4-[[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酸，D(图9C)

将在THF(20mL)中的4-N-甲基氨基萘甲酸(500mg；3.3mmol)和DIEA(562uL 3.3mmol)的溶液加到在CH₂Cl₂/THF 1∶1(10mL)中的Fmoc-甘氨酸氯化物(1.04g；3.3mmol)的溶液，并在室温下搅拌。24小时后，在真空下蒸发溶剂。用0.5N HC1(30mL)溶解残余物，并在0℃下搅拌3小时。将沉淀的白色固体过滤并干燥。用快速色谱法纯化粗品得到化合物D(350mg；0.81mmol)。产率25％。

G.N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]甲基氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L235(图9D)

将树脂A(500mg；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[[9H-芴-9-基甲氧基]羰基]氨基]乙酰基]-N-甲基]氨基-苯甲酸D(510mg；1.2mmol)、HOBt(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡6小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将DOTA三叔丁酯与NaCl的加合物(757mg；1.2mmol)、HOBt(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DIEA(537μL，2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂.将混合物在烧瓶中振荡，倒空，用DMA(2×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥.将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，对其用Et₂O(20mL)处理后得到一种沉淀。

通过离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(126mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(53mg)。将包含产物的级分冻干得到L235(11mg；7.2×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率5.7％。

实施例X-图10A-B

合成L237

概述：在pH 3下用氯甲酸苄酯选择性保护1-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷(A)以得到B，用溴乙酸叔丁酯将其烷基化，并用羟胺盐酸盐将其去甲酰基化得到D。与P(OtBu)₃和低聚甲醛反应得到E，通过氢化去保护和用溴乙酸苄酯进行烷基化以得到G，最终将其氢化成H。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14])官能化的Rink酰胺树脂(A)依次与Fmoc-4-氨基苯甲酸、Fmoc-甘氨酸和H反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L237。总产率0.21％。

A.7-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-甲酸苯基甲酯二盐酸盐，B(图10A)

将1-甲酰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷A(14g；69.9mmol)溶于H₂O(100mL)，并加入12N HCl(11mL)直至pH 3，然后加入1，4-二

烷(220mL)。在3.5小时内缓慢滴加在1，4-二

烷(15mL)中的氯甲酸苄酯(13.8g；77mmol)的溶液，通过用pH恒稳仪器连续加入2NNaOH(68.4mL)来恒定保持反应混合物于pH 3。在加入结束后，将反应物搅拌1小时，然后用正己烷(4×100mL)和ⁱPr₂O(4×100mL)洗涤。通过加入10N NaOH(6.1mL)使水相为pH 13，并用CHCl₃(4×100mL)萃取。用盐水(100mL)洗涤有机相，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将油状残余物溶于丙酮(200mL)，并加入6N HCl(26mL)。将沉淀的固体过滤，用丙酮(2×50mL)洗涤，并真空干燥得到化合物B(23.6g；58mmol)，为一种白色结晶固体。产率83％。

B.4-(苯基甲氧基)羰基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸双(1，1-二甲基乙基)酯D(图10A)

将在H₂O(450mL)和1N NaOH(74mL；74mmol)中的B(14.4g；35.3mmol)的溶液搅拌20分钟，然后用CHCl₃(4×200mL)萃取。蒸发有机层得到一种油状残余物(12.3g)，将其溶于CH₃CN(180mL)和N-乙基二异丙基胺(DIEA)(15mL；88.25mmol)。在2.5小时内将在CH₃CN(15mL)中的溴乙酸叔丁酯(16.8g；86.1mmol)的溶液滴加到前述的溶液。室温下20小时后，蒸发溶剂，将油状残余物溶于CHCl₃(150mL)，并用H₂O(5×100mL)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发至干得到C，为一种黄色油状物。将粗品C(22g)溶于EtOH(250mL)，加入NH₂OH·HC1(2.93g；42.2mmol)，并将溶液加热回流。48小时后蒸发溶液，并将残余物溶于CH₂Cl₂(250mL)，用H₂O(3×250mL)洗涤，然后用盐水(3×250mL)洗涤。将有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。用快速色谱法纯化油状残余物(18.85g)。收集含产物的级分，并蒸发得到一种玻璃状白色固体(17.62g)，将其溶于H₂O(600mL)和1N NaOH(90mL；90mmol)，并用CHCl₃(3×250ml)萃取。将有机层干燥(Na₂SO₄)，并蒸发至干得到D(16.6g；31mmol)，为一种油状物。产率88％。

C.4-(苯基甲氧基)羰基-10-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，7-二乙酸双(1，1-二甲基乙基)酯，E(图10A)

将化合物D(13.87g；26mmol)、P(OtBu)₃(7.6g；28.6mmol)(10)和低聚甲醛(0.9g；30mmol)的混合物在60℃下加热。16小时后，再加入P(OtBu)₃(1g；3.76mmol)和低聚甲醛(0.1g；3.33mmol)。将反应物于60℃下再加热20小时，然后在80℃和真空下加热8小时以除去挥发性杂质。用快速色谱法纯化粗品得到E(9.33g；8mmol)，为一种油状物。产率31％。

D.7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸1-苯基甲基4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯，G(图10A)

向在CH₃OH(160mL)中的E(6.5g；5.53mmol)的溶液中加入5％Pd/C(1g；0.52mmol)，并将该混合物在氢气氛和室温下搅拌。4小时后(消耗H₂165mL；6.7mmol)用

滤器(FT 0.45μm)过滤混合物，并减压蒸发溶液。用快速色谱法纯化粗品(5.9g)得到F(4.2g)，为一种油状物。在1小时内将溶于CH₃CN(8mL)的溴乙酸苄酯(1.9g；8.3mmol)滴加到在CH₃CN(40mL)和DIEA(1.5mL；8.72mmol)中的F(4.2g)的溶液。室温下36小时后，蒸发溶剂，并将残余物(5.76g)溶于CHCl₃(100mL)，用H₂O(2×100mL)洗涤，然后用盐水(2×70mL)洗涤。干燥有机层(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。用快速色谱法纯化粗品(5.5g)两次，收集级分并蒸发至干得到G(1.12g；1.48mmol)，为一种油状物。产率27％。

E.7-[[双(1，1-二甲基乙氧基)氧膦基]甲基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，10-三乙酸4，10-双(1，1-二甲基乙基)酯，H(图10A)

将5％Pd/C(0.2g；0.087mmol)加到在CH₃OH(27mL)中的G(1.12g；1.48mmol)的溶液，并将混合物于氢气氛和室温下搅拌。2小时后(消耗H₂35mL；1.43mmol)，用

滤器(FT 0.45μm)过滤混合物，并将溶液蒸发至干，得到H(0.94g；1.41mmol)，为一种灰黄色油状物。产率97％。

F.N-[4-[[[[[4，10-双(羧甲基)-7-(二羟基氧膦基)甲基-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L237(图10B)

将树脂A(330mg；0.20mmol)(17)在固相肽合成容器中与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(290mg，0.80mmol)、HOBt(120mg；0.80mmol)、DIC(130μL；0.80mmol)和DMA(5mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(240mg；0.8mmol)、HATU(310mg；0.8mmol)和DIEA(260μL；1.6mmol)在DMA(5mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(5mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(5mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×5mL)洗涤树脂。将H(532mg；0.80mmol)、HOBt(120mg；0.80mmol)、DIC(130μL；0.80mmol)和DIEA(260μL；1.6mmol)和DMA(5mL)加至树脂。将混合物在烧瓶中于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×5mL)、CH₂Cl₂(5×5mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)对其处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(90mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L237(6mg；3.9×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率3.5％。

实施例XI-图11A-B

合成L238和L239

概述：从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14])(A)开始分几步获得产物。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L238和L239。总产率：分别为14和9％。

A.N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L238(图11A)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-4-氨基苯甲酸(0.43g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-甘氨酸(0.36g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂，将混合物于室温下振荡2小时，然后将溶液加至树脂，将混合物于室温下振荡2小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物在室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空和用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。

倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂。将混合物于室温下振荡2小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(169mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(60mg)。将包含产物的级分冻干得到L238(22.0mg；0.015mmol)，为一种白色固体。产率14％。

B.N，N-二甲基甘氨酰基-L-丝氨酰基-[S-[(乙酰基氨基)甲基]]-L-半胱氨酰基-甘氨酰基-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L239(图11B)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.82g；1.2mmol)(7)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂。

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.82g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-S-乙酰氨基甲基-L-半胱氨酸(0.50g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N-α-Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸(0.46g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将N，N-二甲基甘氨酸(0.12g；1.2mmol)、HATU(0.46g；1.2mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)在DMA(7mL)中搅拌15分钟，然后将溶液加至树脂。

实施例XII-图12A-F

合成L240、L241、L242

概述：从在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14])(A)开始分几步获得产物。在用试剂B裂解并脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L240、L241和L242。总产率：分别为7.4、3.2、1.3％。

A.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸A(图12A)

将在THF(20mL)中的4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(1.0g；5.9mmol)和N-乙基二异丙基胺(1.02mL 5.9mmol)的溶液滴加到在CH₂Cl₂/THF 1∶1(20mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(1.88g；5.9mmol)的溶液，并在室温和N₂下搅拌。3小时后，真空蒸发溶剂。用0.5N HCl(50mL)溶解残余物，在0℃下搅拌1小时，然后过滤并干燥。将白色固体悬浮在MeOH(30mL)中，并搅拌1小时，然后过滤，并悬浮在CHCl₃/己烷1∶4(75mL)的溶液中。将悬浮液过滤得到化合物A，为一种白色固体(1.02g；2.28mmol)。产率39％。

B.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]-3-甲氧基苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L240

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲氧基苯甲酸A(0.50g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)，N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到油残余物，用Et₂O(20mL)对其进行处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×20mL)洗涤得到一种固体(152mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(52mg)。将包含产物的级分冻干得到L240(12.0mg；7.8×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率7.4％。

C.4-氨基-3-氯苯甲酸C(图12B)

45℃下将1N NaOH(11mL；11mmol)加到在MeOH(20mL)中的4-氨基-3-氯苯甲酸甲酯(2g；10.8mmol)的溶液。将反应混合物于45℃下搅拌5小时，并在室温下搅拌过夜。再次加入1N NaOH(5mL；5mmol)，并将反应物于45℃下搅拌2小时。浓缩溶剂后加入1NHCl(16mL)。过滤固体沉淀，并干燥得到4-氨基-3-氯苯甲酸，C，为一种白色固体(1，75g；10.2mmol)。产率94.6％。

D.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸，D(图12B)

将在THF(50mL)中的4-氨基-3-氯苯甲酸(1.5g；8.75mmol)和N-乙基二异丙基胺(1.46mL 8.75mmol)的溶液滴加到在CH₂Cl₂/THF 1∶1(30mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(2.76g；8.75mmol)的溶液，并在室温和N₂气氛下搅拌。3小时后，真空蒸发溶剂。用0.5N HC1(50mL)溶解残余物，过滤并干燥。

将白色固体悬浮在MeOH(30mL)中，并搅拌1小时，然后过滤，并干燥得到4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸(2.95g；6.5mmol)。产率75％。

E.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-氯苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L241(图12E)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-氯苯甲酸，D(0.54g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。

然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL.1.2mmol)，N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，在用Et₂O(20mL)处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×20mL)洗涤得到一种固体(151mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(56mg)。将包含产物的级分冻干得到L241(5.6mg；3.6×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率3.2％。

F.4-[[[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸，E(图12C)

将在THF(30mL)中的4-氨基-3-甲基苯甲酸(0.81g；5.35mmol)和N-乙基二异丙基胺(0.9mL 5.35mmol)的溶液滴加到在CH₂Cl₂/THF 1∶1(20mL)中的Fmoc-甘氨酰氯(1.69g；5.35mmol)的溶液，并在室温和N₂气氛下搅拌。3小时后在真空下蒸发溶剂。用HCl 0.5N(50mL)溶解残余物，并在0℃下搅拌3小时，然后过滤并干燥。将白色固体悬浮在MeOH(50mL)中，并搅拌1小时，然后过滤并干燥得到化合物E(1.69g；3.9mmol)。产率73％。

G.N-[4-[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]甘氨酰基]氨基]3-甲基苯甲酰基]L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L242(图12F)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[[(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-3-甲基苯甲酸E(0.52g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡5小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉和将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.76g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)、N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。

将混合物于室温下振荡40小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)对其进行处理之后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×20mL)洗涤得到一种固体(134mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(103mg)。将包含产物的级分冻干得到L242(4.5mg；2.9×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率1.3％。

实施例XIII-图13A-C

合成L244

概述：从担载在Rink酰胺树脂上的八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂(BBN[7-14])(A)开始分几步得到产物。在对连接基-BBN[7-14]用试剂B裂解和脱保护之后在液相完成与DOTA三叔丁酯的最后偶联步骤。用制备HPLC纯化粗品得到L244。总产率：0.4％。

A.N，N′-(亚氨基二-2，1-乙烷二基)双[2，2，2-三氟乙酰胺]，A(图13A)

0℃下在1小时内将三氟乙酸乙基酯(50g；0.35mol)滴入在THF(180mL)中的二亚乙基三胺(18g；0.175mol)的溶液。室温下20小时后，将混合物蒸发至一种油状残余物(54g)。用Et₂O(50mL)结晶该油状物，过滤，用冷Et₂O(2×30mL)洗涤，并干燥得到A，为一种白色固体(46g；0.156mol)。产率：89％。

B.4-[N，N′-双[2-(三氟乙酰基)氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸，B(图13A)

室温下将琥珀酸酐(0.34g；3.4mmol)加入在THF(5mL)中的A(1g；3.4mmol)的溶液。28小时后将粗品浓缩得到残余物(1.59g)，用EtOAc(2×10mL)和1N HCl(2×15mL)洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤并蒸发得到一种油状残余物(1.3g)，用快速色谱法(5)将其纯化得到B，为一种油状物(0.85g；2.15mmol)。产率63％。

C.4-[N，N′-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸，D(图13A)

室温下将琥珀酸酐(2g；20mmol)加入在THF(25mL)中的A(5g；16.94mmol)的溶液。28小时后将粗品浓缩得到残余物(7g)，在乙酸乙酯(100mL)和1N HCl(2×50mL)中洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层，过滤并蒸发得到粗品B，为一种油状残余物(6.53g)。将2N NaOH(25mL)加到在EtOH(35mL)中的粗品B(5g)的悬浮液，并在室温下1小时后得到一种完全溶解。20小时后将溶剂蒸发得到C，为一种油状物(8.48g)。0℃下1小时内将在1，4-二烷(30mL)中的9-芴基甲基氯甲酸酯(6.54g，25.3mmol)的溶液滴入在10％Na₂CO₃水溶液(30mL)中的C的溶液。室温下20小时后得到一种胶状悬浮液，过滤得到一种白色固体(3.5g)和一种黄色溶液。蒸发溶液，用H₂O(150mL)稀释剩余的水溶液，并用EtOAc(70mL)萃取。将新鲜的EtOAc(200mL)加到水相，得到一种悬浮液，将其冷却至0℃，并用浓HCl酸化至pH 2。用H₂O(5×200mL)洗涤有机层至中性pH，然后干燥得到一种玻璃状固体(6.16g)。将该化合物悬浮在沸腾的正己烷(60mL)中持续1小时，过滤得到D，为一种白色固体(5.53g，8.54mmol)。总产率50％。

D.N-[4-[[4-[双[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙基]氨基-1，4-二氧代丁基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L244(图13B)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后倒空溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[N，N′-双[2-[(9-H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基乙基]氨基]-4-氧代丁酸(777.3mg；1.2mmol)、HOBt(184mg；1.2mmol)、DIC(187μL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡40小时，倒空和用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物振荡20分钟。倒空溶液，用DMA(2×7mL)洗涤树脂，并用CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，然后将其在烧瓶中与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)对其进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×20mL)洗涤，得到F，为一种白色固体(140mg)。将DOTA三叔丁酯(112mg；0.178mmol)、HATU(70mg；0.178mmol)和DIEA(60μL；0.356mmol)加到在DMA(3mL)和CH₂Cl₂(2mL)中的F(50mg；0.0445mmol)的溶液，并在室温下搅拌24小时。将粗品蒸发至减小的体积(1mL)，并与试剂B(25mL)一起振荡4.5小时。蒸发溶剂后，用Et₂O(20mL)处理残余物得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(5×20mL)洗涤得到一种淡棕色固体(132mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(100mg)。将包含产物的级分冻干得到L244(图13C)(3.5mg；1.84×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率0.8％。

实施例XIV-实施例XLII的一般实验

L201-L228

A.人工偶联

用各6.0当量的HOBt和DIC处理6.0当量的适宜保护的氨基酸，并在反应容器之外活化。然后将在NMP中的活化的羧酸转移至含胺的树脂，使反应进行4-6小时，然后排干树脂并洗涤。

B.Fmoc-Gly-OH与4-氨基苯甲酸和氨基联苯羧酰胺的特殊偶联：

用在NMP(10mL NMP用于1克氨基酸，按重量计)中的HATU(10.0当量)和DIEA(20.0当量)处理Fmoc-Gly-OH(10.0当量)，并将溶液于RT下搅拌10-15分钟，然后转移至含有载胺树脂的容器。使对于每克树脂的溶液体积为15.0ml。在RT下继续偶联20小时，并从树脂上排出所有的反应物。再重复此过程一次，然后用NMP洗涤，随后继续下一步骤。

C.制备DO3A一酰胺：

将8.0当量DOTA一酸溶于NMP，并用8.0当量的HBTU和16.0当量的DIEA处理。将此溶液于RT下搅拌15分钟，然后转至担载在树脂上的胺，并在RT下继续偶联24小时。然后排干树脂，洗涤，随后将肽裂解并纯化。

D.从树脂上裂解粗制肽并纯化：

将树脂悬浮在试剂B(15.0ml/g)中并在RT下振荡4小时。然后排干树脂，再次用2×5mL试剂B洗涤，并与前面的滤液合并。然后在RT下将滤液减压浓缩成糊/液体，并与25.0mL无水乙醚(对于每克所用的树脂)一起研磨。然后将悬浮液离心，并倾析醚层。再重复此过程两次，用制备HPLC纯化乙醚洗涤后的无色沉淀。

实施例XIV-图21

合成L201

使用0.5g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-M-树脂(0.4mmol/g，0.5g，0.2mmol)(树脂A)。如在一般方法所述加入其余的氨基酸单元以制备(1R)-1-(双{2-[双(羧甲基)氨基]乙基}氨基)丙烷-3-甲酸-1-羧基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L201)，产率：17.0mg(5.4％)。

实施例XV-图22A和22B

合成L202

A.4-Fmoc-肼基苯甲酸(图22A)：

用碳酸铯(21.5g，66.0mmol)处理在水(100ml)中的4-肼基苯甲酸(5.0g，32.9mmol)的悬浮液。在1小时内将在THF(25mL)中的Fmoc-Cl(9.1g，35.0mmol)滴加到以上溶液，同时搅拌。加入后将溶液再搅拌4小时，将反应混合物浓缩至大约75mL，并用乙醚(2×100mL)萃取。弃去醚层，并用2N HCl酸化水层。将分离的固体过滤，用水(5×100mL)洗涤，然后用乙腈重结晶得到产物(化合物B)，为一种无色固体。产率：11.0g(89％)。¹H NMR(DMSO-d₆)：d 4.5(m，1H，Ar-CH₂-CH)，4.45(m，2H，Ar-CH₂)6.6(bs，1H，Ar-H)，7.4-7.9(m，9，Ar-H和Ar-CH₂)，8.3(s，2H，Ar-H)，9.6(s，2H，Ar-H)。M.S.-m/z373.2[M-H]

使用0.5g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-M-树脂(0.4mmol/g，0.5g，0.2mmol)(树脂A)。如一般方法所述加入氨基酸单元，包括化合物B，以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-4-肼基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L202)(图22B)，产率：25.0mg(8.3％)

实施例XVI-图23A和图23B

合成L203

A.制备4-Boc-氨基苄基苯甲酸酯化合物B(图23A)：

用粉末碳酸铯(1.3g，4.0mmol)处理在无水乙腈(10.0mL)中的4-boc-氨基苯甲酸(0.95g，4.0mmol)的悬浮液，并在氮气氛下剧烈搅拌。加入苄基溴(0.75g，4.4mmol)，并在氮气氛下将反应混合物回流20小时。然后将反应混合物倾入冰冷的水(200mL)，过滤分离的固体，并用水(5×50mL)洗涤。然后用甲醇水溶液重结晶粗物质以得到产物，为一种无色固体(化合物B)。产率：0.8g(61％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.5(s，9H，三个甲基)，5.4(s，2H，Ar-CH₂)，7.4(m，7H，Ar-H)和8.0(m，2H，Ar-H)。M.S.-m/z 326.1[M+H]。

B.4-氨基苄基苯甲酸酯化合物C(图23A)：

将4-Boc-氨基苄基苯甲酸酯(0.8g，2.5mmol)溶于含TFA(25％体积)的DCM(20mL)，并在RT搅拌2小时。将反应混合物倾入100.0g碎冰，并用饱和碳酸氢钠溶液中和，直至pH到达大约8.5。分离有机层，用DCM(3×20mL)萃取水层，并合并所有的有机层。然后用1×50mL饱和碳酸氢钠、水(2×50mL)洗涤DCM层，并干燥(硫酸钠)。除去溶剂得到一种无色固体(化合物C)，将此固体用于下一步而不进行进一步纯化。产率：0.51g(91％)。¹HNMR(CDCl₃)：δ5.3(s，2H，Ar-CH₂)，6.6(d，2H，Ar-H，j＝1.0Hz)，7.4(m，5H，Ar-H，J＝1.0Hz)和7.9(d，2H，Ar-H，J＝1.0Hz)。

C.4-(2-氯乙酰基)氨基苄基苯甲酸酯化合物D(图23A)：

将胺(0.51g，2.2mmol)溶于无水二甲基乙酰胺(5.0mL)，并在冰中冷却。通过注射器滴加氯乙酰氯(0.28g，2.5mmol)，使溶液变为RT，并搅拌2小时。再加入2.5mmol氯乙酰氯，并再继续搅拌2小时。然后将反应混合物倾入冰冷的水(100mL)。将沉淀的固体过滤，用水洗涤，然后用己烷/乙醚重结晶得到一种无色固体(化合物D)。产率：0.38g(56％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ4.25(s，2H，CH₂-C1)，5.4(s，2H，Ar-H)，7.4(m，5H，Ar-H)，7.6(d，2H，Ar-H)，8.2(d，2H，Ar-H)和8.4(s，1H，-CONH)。

2-{1，4，7，10-四氮杂-7，10-双{[(叔丁基)氧基羰基]甲基}-4-[(N-{4-[苄氧基羰基]苯基}氨基甲酰基]环十二基}乙酸叔丁酯，化合物E图23A：

将DO3A-三叔丁酯.HCl(5.24g，9.5mmol)悬浮在30.0mL无水乙腈中，加入无水碳酸钾(2.76g，20mmol)，并搅拌30分钟。然后历经10分钟，将在无水乙腈(20.0mL)中的氯乙酰胺D(2.8g，9.2mmol)滴加到上混合物。然后将反应混合物搅拌过夜。将溶液过滤，然后减压浓缩至糊。将该糊溶于大约200.0mL水，并用5×50mL乙酸乙酯萃取。用水(2×100mL)洗涤合并的有机层，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤并减压蒸发至糊，并用快速硅胶(600.0g)对糊进行色谱处理。用在DCM中的5％甲醇洗脱产物。收集在TLC上统一的所有级分，并蒸发得到一种无色胶。用异丙醚和DCM重结晶该胶以制备化合物E。产率：4.1g(55％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.5(s，27H，甲基)，2.0-3.75(m，24H，NCH₂s)，5.25(d，2H，Ar-CH₂)，7.3(m，5H，Ar-H)，7.8(d，2H，Ar-H)和7.95(d，2H，Ar-H)。M.S.-m/z 804.3[M+H]。

D.还原以上的酸E以制备化合物F，(图23A)：

将以上的苄基酯E(1.0g，1.24mmol)溶于甲醇-水混合物(10.0mL，95∶5)，并加入钯碳(10％，0.2g)。然后用Parr仪器在50.0psi下将溶液氢化8小时。从溶液中滤出催化剂，然后减压浓缩得到一种无色绒毛状固体F。未对它进行进一步纯化，而将其立即用于下一步骤。MS：m/z 714.3[M+Na]。

E.制备L203(图23B)

使用上述的标准偶联方法使以上的酸F偶联至来自以上的树脂[H-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂]树脂A和以上的胺。0.5g(0.2mmol)树脂产生31.5mg最终纯化的肽(10.9％)N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L203)(图23B)。

实施例XVII-图24

合成L204

使用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)(树脂A)。使用标准偶联条件，首先装载Fmoc-Gly-OH，然后装载来自以上方法(图23A)的F。产率：24.5mg(8.16％)的N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L204)(图24)。

实施例XVIII-图25

合成L205

如文献所述制备Fmoc-6-氨基烟酸¹(″Synthesis of diacylhydrazine compiounds for therapeutic use″.Hoelzemann，G.；Goodman，S.(Merck Patent G.m.b.H..，Germany)。Ger.Offen.2000，16pp.CODEN：GWXXBX DE 19831710 Al 20000120)，并与预装载的Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)树脂A偶联，然后与如上述的其它氨基偶联以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-4-氨基苯甲酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L205)产率：1.28mg(0.4％)。

实施例XIX-图26A和26B

合成L206

A.4’-Fmoc-氨基-3’-甲基联苯-4-甲酸B：

将氨基酸(0.41g，1.8mmol)溶于在10.0mL水中的碳酸铯(0.98g，3.0mmol)的溶液。参见″Rational Design of Diflunisal Analogues with Reduced Affinity for Human Serum Albumin″Mao，H.等人，J.Am.Chem.Soc.，2001，123(43)，10429-10435。将此溶液在冰浴中冷却，滴加在THF(10.0mL)中的Fmoc-Cl(0.52g，2.0mmol)的溶液，并剧烈搅拌。加入后，将反应混合物于RT下搅拌20小时。然后用2N HCl酸化溶液。将沉淀的固体过滤，用水(3×20mL)洗涤并风干。然后用乙腈重结晶粗固体以得到一种无色绒毛状固体B(图26A)。产率：0.66g(75％)。¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.2(s，Ar-Me)，4.25(t，1H，Ar-CH，j＝5Hz)，4.5(d，2H，O-CH₂，j＝5.0Hz)，7.1(bs，1H，CONH)，7.4-8.0(m，8H，Ar-H)和9.75(bs，1H，-COOH)。M.S.：m/z 472.0[M-H]。

使用标准偶联条件将以上的酸B与Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)树脂A偶联。如上述加入附加的基团以制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[4’-氨基-2’-甲基联苯-4-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L206)。产率：30.5mg(24％)

实施例XX-图27A-B

合成L207

使用上述的方法由对应的胺制备3’-Fmoc-氨基-联苯-3-甲酸。参见″Synthesis of 3’-methyl-4-′nitrobiphenylcarboxylic acids by the reaction of 3-methyl-4-nitrobenzenenediazonium acetate with methyl benzoate″，Boyland，E.和Gorrod，J.，J.Chem.Soc.，Abstracts(1962)，2209-11。0.7G胺产生0.81g Fmoc-衍生物(58％)(化合物B，图27A)。¹H NMR(DMSO-d₆)：δ4.3(t，1H，Ar-CH)，4.5(d，2H，O-CH₂)，7.25-8.25(m，16H，Ar-H)和9.9(s，1H，-COOH)。M.S.-m/z 434[M-H]

将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)树脂A与以上的酸B和上述其它基团偶联(图27B)。制备29.0mgN-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-3’-氨基-联苯-3-羧基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L207)(23％)。

实施例XXI-图28

合成L208

将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A解封，并使用HATU作为偶联剂与对苯二甲酸偶联。用DIC和NHS活化所得的担载在树脂上的酸，然后与乙二胺偶联。最后将DOTA-一酸与担载在树脂上的胺偶联。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]-[1，2-二氨基乙基-对苯二甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺(L208)，产率为17.5mg(14％)

实施例XXII-图29A-B

合成L209

A.Boc-Glu(G-OBn)-G-OBn：

将Boc-谷氨酸(5.0g，20.2mol)溶于THF(50.0mL)，并在冰浴中冷却至0℃。加入HATU(15.61g，41.0mmol)，然后加入DIEA(6.5g，50.0mmol)。将反应混合物于0℃下搅拌30分钟。加入在THF(25.0mL)中的甘氨酸的苄基酯[8.45g，50mmol，通过用碳酸钠中和苄基甘氨酸盐酸盐，用DCM萃取并除去溶剂来产生]。将反应混合物变至RT，并在RT下搅拌20小时。在减压下除去所有的挥发物。用饱和碳酸钠溶液(100mL)处理残余物，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有机层，用1N HCl(2×100mL)和水(2×100mL)洗涤，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，并在减压下除去溶剂以得到一种糊，用快速硅胶(500.0g)对该糊进行色谱处理。用在DCM中的2％甲醇洗脱得到产物，为一种无色的糊(化合物B，图29A)。产率：8.5g(74.5％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.4(s，9H，-CH₃s)，2.0-2.5(m，4H，-CH-CH₂和CO-CH)，4.2(m，5H，N-CH₂-CO)，5.15(s，4H，Ar-CH₂)，5.45(bs，1H，Boc-NH)，7.3(m，10H，Ar-H)和7.6(2bs，2H，CONH)。M.S.-m/z 564.1[M+H]。分析HPLC保留时间-8.29分(＞97％纯，20-65％B，经过15分钟)。

B.H-Glu(G-OBn)-G-OBn：

将以上的完全受保护的谷氨酸衍生物(1.7g，3.2mmol)B溶于DCM/TFA(4∶1，20mL)，并搅拌直至在TLC上原料消失(2小时)。将反应混合物倾入冰冷的饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，分离有机层，用2×50mL DCM萃取水层，并与有机层合并。用饱和碳酸氢钠(2×100mL)、水(2×100mL)洗涤DCM层，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，减压蒸发，并在真空下干燥残余物以得到一种玻璃状物质(化合物C，图29A)，将其用于下一步骤而不进行进一步的纯化。产率：0.72g(95％)。M.S.-m/z 442.2[M+H]。

C.(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OBn)-G-OBn：

将在无水DCM(10.0mL)中的以上的胺C(1.33g，3mmol)加到活化的DOTA-三叔丁酯[2.27g，3.6mmol，用HBTU 1.36g，3.6mmol和DIEA 1.04g，8mmol处理，并在RT下在25mL无水DCM中搅拌30分钟]的溶液并在RT下搅拌20小时]。用200mL DCM稀释反应混合物，用饱和碳酸钠(2×150mL)洗涤，并干燥(硫酸钠)。将溶液过滤，并在减压下除去溶剂以得到一种褐色糊。用快速硅胶(500.0g)对粗产物作色谱处理。用在DCM中的2％甲醇洗脱得到产物，为一种无色胶(化合物D，图29A)。产率：1.7g(56.8％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.3和1.4(2s，9H，三个甲基，各自来自游离碱和DOTA的钠加合物)，2.0-3.5(m，20H，N-CH₂s和-CH-CH₂和CO-CH₂)，3.75-4.5(m，13H，N-CH₂-CO)，5.2(m，4H，Ar-CH₂)和7.25(m，10H，Ar-H)。M.S.m/z-1018.3[M+Na]和996.5[M+H]和546.3[M+Na+H]/2。HPLC-保留时间：11.24分(＞90％，20-80％B，经过30分钟)。

D.(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OH)-G-OH：

将以上的双苄基酯(0.2g，0.2mmol)D溶于甲醇-水(20mL，9∶1)，并在50psi下在10％Pd/C催化剂(0.4g，50％wt.水)存在下氢化。在HPLC和TLC上原料消失后(4小时)，滤出溶液中的催化剂，在减压下除去溶剂，并在高度真空下干燥残余物大约20小时(＜0.1mm)以得到产物，为一种无色泡沫(化合物E，图29A)。产率：0.12g(73.5％)。¹HNMR(DMSO-d₆)：δ1.3和1.4(2s，9H，对应于游离碱和DOTA的钠加合物的甲基)，1.8-4.7(m，33H，NCH₂s，COCH₂和CH-CH₂和NH-CH-CO)，8.1，8.2和8.4(3bs，NHCO)。M.S.：m/z-816.3[M+H]和838.3[M+Na].HPLC保留时间：3.52分(20-80％B，经过30分，＞95％纯度)。

E.H-8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基-8-氨基-3，6-二氧杂辛酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂：

将Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.5g，0.2mmol)A解封，并依次与8-氨基-3，6-二氧杂辛酸偶联两次以在制备HPLC纯化之后得到以上脱保护的肽(化合物F，图29B)。产率：91.0mg(37％)。

HPLC保留时间：8.98分(＞95％纯度，10-40％B，经过10分钟)。M.S.：m/z-1230.6[M+H]，615.9[M+2H]/2。

F.液相偶联以上的双酸E和胺F(图29B)

将双酸(13.5mg，0.0166mmol)E溶于100μL无水乙腈，用NHS(4.0mg，0.035mmol)和DIC(5.05mg，0.04mmol)处理，并在RT下搅拌24小时。向以上活化的酸中加入游离胺F(51.0mg，0.41mmol)[通过以下方法产生：用饱和碳酸氢钠处理TFA盐并冻干溶液得到绒毛状固体的胺]，然后加入100μL NMP，并在RT下继续搅拌40小时。用无水乙醚(10mL)稀释溶液，离心收集沉淀，并再次用2×10mL无水乙醚洗涤。然后用制备HPLC纯化粗固体以得到产物，为一种无色绒毛状固体L209，如在图29B所示，产率为7.5mg(14.7％)。

实施例XXIII-图30A-B

合成L210

A.H-8-氨基辛酰基-8-氨基辛酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH₂：

此化合物也完全以与化合物F(图29B)的情况相同的方式制备，但使用1-氨基辛酸，并用制备HPLC纯化胺(化合物B，图30A)。产率：95.0mg(38.9％)。HPLC保留时间：7.49分(＞95％纯度；10-40％B，经过10.0分钟)。M.S.：m/z-1222.7[M+H]，611.8[M+2H]/2。

如在L209的情况下那样在100μL乙腈中将(DOTA-三叔丁基)-Glu-(G-OH)-G-OH(0.0163g，0.02mmol)转化成它的双NHS酯，用在100μL NMP中的游离碱-化合物B(60.0mg，0.05mmol)处理，并继续反应40小时，然后进行处理，并如上述纯化以制备L210(图30B)，产率为11.0mg(18％)。

实施例XXIV-图31

合成L211

使用标准方案由0.2g Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.08mmol)制备。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L211，产率为4.7mg(3.7％)(图31)。

实施例XXV-图32

合成L212

使用标准方案由Rink酰胺Novagel树脂(0.47mmol/g，0.2g，0.094mmol)通过在树脂上构建序列来制备。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L212，产率为25.0mg(17.7％)(图32)。

实施例XXVI-图33

合成L213

由Fmoc-Met-2-氯三苯甲基氯树脂(NovaBioChem，0.78mmol/g，0.26g，0.2mmol)制备，而序列的其余部分使用标准方法构建。制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酸L213，产率为49.05mg(16.4％)(图33)。

实施例XXVII-图34

合成L214

使用标准条件用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L214。得到8.5mg产物(6.4％)(图34)。

实施例XXVIII-图35

合成L215

用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-精氨酰基-L-亮氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L215。得到9.2mg(5.5％)(图35)。

实施例XXIX-图36

合成L216

用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂(0.2g，0.08mmol)A制备N[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-精氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L216。得到25.0mg(14.7％)(图36)。

实施例XXX-图37

合成L217

用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂A(0.2g，0.08mmol)制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-赖氨酰基-L-酪氨酰基-甘氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺L217。得到58.0mg(34.7％)(图37)。

实施例XXXI-图38

合成L218

使用Fmoc-Q(Trt)-W(Boc)-A-V-G-H(Trt)-L-M-树脂A(0.2g，0.08mmol)。将Fmoc-Lys(ivDde)用于引入赖氨酸。在完成线性序列之后，用在DMF中的10％肼除去赖氨酸的保护基(2×10mL；每次10分钟，然后洗涤)。然后用“一般”部分所述的方法引入其余的氨基酸以完成所需的肽序列。图38中获得L218的产率为40.0mg(23.2％)。

实施例XXXII-图39

合成L219

使用4-氨磺酰丁酰基AM Novagel树脂(1.1mmol/g；0.5g；0.55mmol)。-20℃下将第一氨基酸装载到此树脂上，持续20小时。用普通偶联方法完成其余的序列。洗涤后，用20.0当量的碘乙腈和10.0当量的DIEA将树脂烷基化20小时。然后排干树脂的液体，洗涤，随后用2.0当量的在5.0mL THF中的戊胺裂解20小时。随后用2×5.0mL的THF洗涤树脂，并合并所有的滤液。然后在减压下蒸发THF，用10.0mL的试剂B将残余物解封，并如前述纯化肽N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-氨基戊基，L219。得到28.0mg(2.8％)(图39)

实施例XXXIII-图40

合成L220

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-D-丙氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L220。得到31.5mg(41.4％)(图40)。

实施例XXXIV-图41

合成L221

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-亮氨酰胺，L221。得到28.0mg(34.3％)(图41)。

实施例XXXV-图42

合成L222

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-D-酪氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酰胺，L222。得到34.0mg(40.0％)(图42)。

实施例XXXVI-图43

合成L223

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-苯丙氨酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-β丙氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-正亮氨酰胺，L223。得到31.2mg(37.1％)(图43)。

实施例XXXVII-图44

合成L224

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-亮氨酰胺，L224。得到30.0mg(42.2％)(图44)。

实施例XXXVIII-图45

合成L225

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-丝氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺，L225。得到15.0mg(20.4％)(图45)。

实施例XXXIX-图46

合成L226

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-组氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L226。得到40.0mg(52.9％)(图46)。

实施例XL-图47

合成L227

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-亮氨酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-苏氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺L227。得到28.0mg(36.7％)(图47)。

实施例XLI-图48

合成L228

用NovaSyn TGR(0.25mmol/g；0.15g，0.05mmol)树脂A制备N-[(3β，5β，12α)-3-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]-甘氨酰基-4-氨基苯甲酰基-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-苯丙氨酰基-L-蛋氨酰胺，L228。得到26.0mg(33.8％)(图48)。

实施例XLII-合成其它GRP化合物

A.用于制备4，4’-氨基甲基联苯羧酸(B2)和3，3’-氨基甲基联苯羧酸(B3)的一般方法：

1.甲基-羟基甲基联苯羧酸酯：

将商购得到的(Aldrich Chemical Co.)4-羟基甲基苯基硼酸或3-羟基甲基苯基硼酸(1.0g，6.58mmol)和异丙醇(10mL)及2M碳酸钠(16mL)一起搅拌直至溶液变均一。通过使氮通过溶液而使溶液脱气，然后用固体甲基-3-溴苯甲酸酯或甲基-4-溴苯甲酸酯(1.35g，6.3mmol)处理，随后用Pd(O)催化剂{[(C₆H₅)₃P]₄Pd；0.023g，0.003mmol}处理。将反应混合物在氮气氛下保持回流，直至通过TLC分析确定原料溴苯甲酸酯用完(2-3小时)。然后用250mL水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。在减压下除去溶剂，并用快速硅胶(100g)色谱处理残余物。用在己烷中的40％乙酸乙酯洗脱得到产物，为一种固体或油状物。

产率：

B2-0.45g(31％)；m.p.-170-171℃。

B3-0.69g(62％)；油状物。

¹H NMR(CDCl₃)δB2-3.94(s，3H，-COOCH₃)，4.73(s，2H，-CH₂-Ph)，7.475(d，2H，J＝5Hz)，7.6(d，2H，J＝10Hz)，7.65(d，2H，J＝5Hz)和8.09(d，2H，J＝10Hz)。

M.S.-m/e-243.0[M+H]

B3-3.94(s，3H，-COOCH₃)，4.76(s，2H，-CH₂-Ph)，7.50(m，4H)，7.62(s，1H)，7.77(s，1H)，8.00(s，1H)和8.27(s，1H)。

M.S.-m/e-243.2[M+H]

2.叠氮基甲基联苯羧酸酯：

在冰中冷却在无水二氯甲烷(10mL)中的以上联苯醇(2.0mmol)，用二苯基磷酰基叠氮化物(2.2mol)和DBU(2.0mmol)处理，并在氮气氛下搅拌24小时。用水稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。合并有机层，相继用0.5M柠檬酸溶液(2×25mL)、水(2×25mL)洗涤，并干燥(Na₂SO₄)。将溶液过滤，并在减压下蒸发得到粗产物。用己烷/乙醚结晶4，4’-异构体，并将3，3’-异构体与异丙醚一起研磨以除去所有的杂质；进行TLC分析确定产物是均一的，不需要作进一步纯化。

产率：

甲基-4-叠氮基甲基-4-联苯羧酸酯-0.245g(46％)；m.p.-106-108℃。

甲基-4-叠氮基甲基-4-联苯羧酸酯-0.36g(59％，油状物)

¹H NMR(CDCl₃)δ-4，4’-异构体-3.95(s，3H，-COOCH₃)，4.41(s，2H，-CH₂N₃)，7.42(d，2H，J＝5Hz)，7.66(m，4H)和8.11(d，2H，J＝5Hz)

3，3’-异构体-3.94(s，3H，-COOCH₃)，4.41(s，2H，-CH₂N₃)，7.26-7.6(m，5H)，7.76(d，1H，J＝10Hz)，8.02(d，1H，J＝5Hz)和8.27(s，1H)。

3.水解联苯羧酸的甲酯：

用20mL 2M氢氧化锂溶液处理大约4mmol甲酯，并搅拌至溶液均一(20-24小时)。用2×50mL乙醚萃取水层，并弃去有机层。然后用0.5M柠檬酸酸化水层，将沉淀的固体过滤并干燥。不需要进行其它纯化，并将酸用于下一步骤。

产率：

4，4’-异构体-0.87甲酯产生0.754g酸(86.6％)；m.p.-205-210℃

3，3’-异构体-0.48g甲酯提供0.34g酸(63.6％)；m.p.-102-105℃。

¹H NMR(DMSO-d₆)δ：4，4’-异构体-4.52(s，2H，-CH₂N₃)，7.50(d，2H，J＝5Hz)，7.9(m，4H)和8.03(d，2H，J＝10Hz)

3，3’-异构体-4.54(s，2H，-CH₂N₃)，7.4(d，1H，J＝10Hz)，7.5-7.7(m，4H)，7.92(ABq，2H)和8.19(s，1H)。

4.将叠氮化物还原成胺：

此还原在固相完成，并且不分离胺。用标准肽偶联方案将叠氮基羧酸装载在树脂上。洗涤后，将含叠氮化物的树脂与20当量的三苯膦在THF/水(95∶5)中一起振荡24小时。在氮正压下排干溶液，然后用标准洗涤方法洗涤。将所得的胺用于下一步偶联。

5.(3β，5β，7α，12α)-3-[{(9H-芴-9-基甲氧基)氨基]乙酰基}氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸：

将三丁基胺(3.2mL；13.5mmol)滴加到在0℃下搅拌的在THF(80mL)中的Fmoc-甘氨酸(4.0g，13.5mmol)的溶液。然后加入氯甲酸异丁酯(1.7mL；13.5mmol)，并在10分钟后在1小时内将在DMF(80mL)中的三丁基胺(2.6mL；11.2mmol)和(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸(4.5g；11.2mmol)的悬浮液滴加到冷却的溶液。使混合物升温至室温，并在6小时后将溶液浓缩至120mL，然后加入水(180mL)和1N HCl(30mL)(最终pH 1.5)。将沉淀的固体过滤，用水(2×100mL)洗涤，真空干燥，并用快速色谱法纯化。用氯仿/甲醇(8∶2)洗脱得到产物，为一种无色固体。

产率：1.9g(25％)。TLC：R_f 0.30(CHCl₃/MeOH/NH₄OH-6∶3∶1)。

化合物的体外和体内测试

实施例XLIII：在PC3细胞系中对GRP受体的体外结合试验

图14A-B

为鉴定潜在的先导化合物，使用一种鉴定对GRP-R具有高亲和力的化合物的体外试验。由于已知来自人前列腺癌的PC3细胞系表现出在细胞表面高表达GRP-R，因此开发出96孔平板格式的放射性配体结合试验，并使其有效用于测定¹²⁵I-BBN与GRP-R阳性PC3细胞的结合和本发明化合物抑制这种结合的能力。用此试验测定RP527配体、DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂(对照)和抑制¹²⁵I-BBN与GRP-R结合的本发明化合物的IC₅₀。(RP527＝N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-5-氨基戊酸-BBN(7-14)[SEQ.ID.NO：1]，它具有MS＝1442.6和IC₅₀-0.84)。Van de Wiele C，Dumont F等人，Technetium-99m RP527，a GRP analogue for visualation of GRPreceptor-expressing malignancies：a feasibility study.Eur.J.Nucl.Med.，(2000)27；1694-1699；DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂也称作DO3A-一酰胺-8-氨基-辛酸-BBN(7-14)，其是SEQ ID NO：1，它具有MS＝1467.0。DO3A一酰胺-氨基辛基-BBN[7-14]。

使放射性配体结合平板试验有效用于BBN和BBN类似物(包括可商购得到的BBN和L1)，且还使用^99mTc RP527作为放射性配体。

A.材料和方法：

1.细胞培养：

从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)获得PC3(人前列腺癌细胞系)，并在组织培养瓶(Corning)中在RPMI1640(ATCC)内培养。此生长培养基补充有10％热灭活FBS(Hyclone，SH₃0070.03)、10mM HEPES(GibcoBRL，15630-080)和抗生素/抗真菌剂(GibcoBRL，15240-062)以得到最终浓度的青霉素-链霉素(100单位/mL)和两性霉素B(0.25μg/mL)。将所有的培养物保持在含5％CO₂/95％空气的增湿气氛和37℃下，按指示用0.05％胰蛋白酶/EDTA(GibcoBRL 25300-054)进行常规传代。在96孔白色/透明底微滴量板(Falcon Optilux-1)或96孔黑色/透明胶原I cellware板(Beckton Dickinson Biocoat)中以2.0×10⁴/孔的浓度接种培养用于实验的细胞。在接种后第1或2天将平板用于结合研究。

2.结合缓冲液：

补充20mM HEPES、0.1％BSA(w/v)、0.5mM PMSF(AEBSF)、杆菌肽(50mg/500ml)，pH 7.4的RPMI 1640(ATCC)。从Perkin-Elmer获得¹²⁵I-BBN(不含载体，2200Ci/mmole)。

B.与¹²⁵I-BBN对PC3细胞中的GRP-R的竞争试验：

用96孔平板试验测定本发明各种化合物抑制¹²⁵I-BBN与人GRP-R结合的IC₅₀。采用以下的一般方法：

将所有受试化合物溶于结合缓冲液，并在结合缓冲液中完成适宜的稀释。在96-孔白色/透明底微滴平板(Falcon Optilux-I)或96孔黑色/透明胶原I cellware平板(Beckton Dickinson Biocoat)中以2.0×10⁴/孔的浓度接种用于试验的PC3细胞(人前列腺癌细胞系)。在接种后第1或2天将平板用于结合研究。在试验前检查平板的汇合(＞90％汇合)。对于此试验，将浓度范围为1.25×10^-9M-5×10^-9M的RP527或DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂配体(对照)或本发明化合物与¹²⁵I-BBN(25,000cpm/孔)一起温育。以75μL/孔的测试体积进行这些研究。将一式三份的孔用于各数据点。在加入适宜的溶液之后，将平板在4℃下培养1小时以防止配体-受体复合物内化。通过加入200μL冰冷的温育缓冲液来终止温育。将平板洗涤5次，并吸干。用LKBCompuGamma计数器或微板闪烁计数器检测放射性。

RP527(对照)和L70-本发明化合物的竞争结合曲线可以见于图14A-B。这些数据表明RP527对照的IC₅₀为2.5nM，而本发明化合物L70的IC₅₀为5nM。DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂对照的IC₅₀为5nM。受试的本发明化合物的IC₅₀值可以见于上述表1-3，表明它们与对照的值相当，从而可以预期其对受体具有充足的亲和力，以允许在体内被带受体的细胞摄取。

C.内化和流出试验：

在96孔平板上进行这些试验。在洗涤除去血清蛋白之后，将PC3细胞与¹²⁵I-BBN、¹⁷⁷Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂或放射性标记的本发明化合物一起在37℃下温育40分钟。通过加入200μL冰冷的结合缓冲液来终止温育。用结合缓冲液将平板洗涤两次。为除去表面结合的放射性配体，将细胞与0.2M乙酸(在盐水中)，pH 2.8一起温育2分钟。将平板离心，并收集酸洗涤培养基以测定未被内化的放射性的量。收集细胞以测定内化的¹²⁵I-BBN的数量，并在γ-计数器中分析所有的样品。通过将不同时间点获得的计数与在最后时间点(T40分钟)获得的计数进行比较而将内化试验数据标准化。

对于流出研究，在37℃下对PC3细胞负载¹²⁵I-BBN或放射性标记的本发明化合物40分钟后，滤除未结合的物质，并如上述测定内化％。然后在37℃下将细胞重悬在结合缓冲液中达3小时。在0.5、1、2或3小时，如上所述测定相对于最初负荷水平保持内化的量，并将其用于计算流出百分比，记录于表9。

表9

¹²⁵I-BBN以及DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂(对照)和本发明化合物的Lu-177络合物的内化和流出

这些数据表明，本发明化合物被PC3细胞内化和保留的程度与对照物类似。

实施例XLIV-制备Tc-标记的GRP化合物

制备在0.1％TFA水溶液中浓度为1mg/mL的表10鉴定的本发明化合物的肽溶液。通过将SnCl₂·2H₂O(20mg/mL)溶于1N HCl而制备氯化亚锡溶液。通过将等分试样的SnCl₂溶液(10μL)加到葡萄糖酸钠溶液来制备包含20μg SnCl₂·2H₂O/100μL的葡萄糖酸亚锡溶液，所述葡萄糖酸钠溶液通过将13mg的葡萄糖酸钠溶于水来制备。通过将50mg HP-γ-CD溶于1mL水来制备羟丙基γ-环糊精[HP-γ-CD]溶液。

通过混合20μl未标记化合物(20μg)的溶液，50μL HP-γ-CD溶液，100μL Sn-葡萄糖酸盐溶液和20-50μL ^99mTc高锝酸盐(5-8mCi，Syncor)来制备以下鉴定的^99mTc标记的化合物。最终的体积大约为200μL，而最终pH为4.5-5。将反应混合物在100℃下加热15-20分钟，然后通过反相HPLC分析以测定放射化学纯度(RCP)。通过HPLC分离期望产物峰，收集至含有5mg/mL抗坏血酸、16mg/mL HP-γ-CD和50mM磷酸盐缓冲液，pH 4.5的稳定缓冲液中，并用加速真空浓缩以除去乙腈。用于分析和纯化的HPLC系统如下：C18Vydac柱，4.6×250mm，水相：在水中的0.1％TFA，有机相：在乙腈中的0.085％TFA。流速：1mL/分。取决于各肽的性质，使用20％-25％乙腈/0.085％TFA的等度洗脱。

标记结果总结在表10中。

表10

n.d.＝未检测

1：所有化合物与N，N′-二甲基甘氨酰-Ser-Cys-Gly金属螯合剂缀合。使用Acm保护形式的配体。因此，用于制备L2的^99mTc络合物的配体为N，N′-二甲基甘氨酰-Ser-Cys(Acm)-Gly-RJQWAVGHLM-NH₂。在与Tc螯合期间除去Acm基团。

2：在序列中，″J″指8-氨基-3，6-二氧杂辛酸，而″a″指D-丙氨酸。

3：加热后和HPLC纯化前即刻进行最初RCP测定。

4：在HPLC分离和通过加速真空除去乙腈之后测定RCP。

实施例XLV-制备用于细胞结合和生物分布研究的¹⁷⁷Lu-L64：

通过在90℃下将10μg L64配体(10μL 1mg/mL水溶液)、100μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.2)和～1-2mCi在0.05N HCl中的¹⁷⁷LuCl₃(MURR)温育15分钟来合成此化合物。通过加入20μL1％Na₂EDTA·2H₂O(Aldrich)水溶液来清除游离¹⁷⁷Lu。所得的放射化学纯度(RCP)为～95％。通过HPLC，使用YMC Basic C8柱[4.6×150mm]，30℃的柱温和1mL/分的流速，以及30分钟内68％A/32％B-66％A/34％B的梯度，将放射性标记的产物与未标记的配体和其它杂质分离，其中A为柠檬酸盐缓冲液(0.02M，pH 3.0)，而B为80％CH₃CN/20％CH₃OH。分离的化合物的RCP为～100％，而HPLC保留时间为23.4分钟。

通过将目标HPLC峰收集至1000μL柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH5.3，含1％抗坏血酸和0.1％HSA)来制备用于生物分布和细胞结合研究的样品。通过离心浓缩30分钟来除去收集的洗脱物中的有机洗脱剂。对于细胞结合研究，在体外研究30分钟内用细胞结合培养基稀释纯化的样品至浓度为1.5μCi/mL。关于生物分布研究，在体内研究30分钟内将样品用柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH5.3，含1％抗坏血酸钠和0.1％HSA)稀释至最终浓度为50μCi/mL。

实施例XLVI-制备用于放射治疗研究的¹⁷⁷Lu-L64

通过于85℃下将70μg L64配体(70L 1mg/mL水溶液)、200μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.2)和～30-40mCi在0.05N HCl中的¹⁷⁷LuCl₃(MURR)温育10分钟来合成此化合物。在冷却至室温后，通过加入20μL 2％Na₂EDTA·2H₂O(Aldrich)水溶液清除游离¹⁷⁷Lu。所得的放射化学纯度(RCP)为～95％。通过HPLC，用300VHP阴离子交换柱(7.5×50mm)(Vydac)从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，所述的柱依次用水、50％乙腈/水，然后用1g/L乙酸铵水溶液以1mL/分的流速洗脱。用50％CH₃CN从柱中洗脱目标化合物，并将其与～1mL含5％抗坏血酸、0.2％HSA和0.9％(v∶v)苄醇的柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3)混合。通过旋转真空40分钟除去分离级分中的有机部分，并在体内研究30分钟内用含5％抗坏血酸、0.2％HSA和0.9％(v∶v)苄基醇的柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3)将该浓缩的溶液(～20-25mCi)调节至浓度为7.5mCi/mL。所得的化合物的RCP＞95％。

实施例XLVII-制备¹¹¹In-L64：

通过在85℃下在0.05N HCl(80μL)和155μL乙酸钠缓冲液(0.5M，pH 4.5)中将10μg L64配体(5μL在0.01N HCl中的2mg/mL溶液)、60μL乙醇、1.12mCi ¹¹¹InCl₃温育30分钟来合成此化合物。通过加入20μL 1％Na₂EDTA.2H₂O(Aldrich)水溶液来清除游离¹¹¹In。所得的放射化学纯度(RCP)为87％。通过HPLC，使用Vydac C18柱[4.6×250mm]，50℃的柱温和1.5mL/分的流速，以及20分钟内75％A/25％B-65％A/35％B的梯度，从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，其中A为0.1％TFA水溶液，而B为在乙腈中的0.085％TFA。以此系统，¹¹¹In-L64的保留时间为15.7分钟。分离的化合物RCP为96.7％。

实施例XLVIII-制备¹⁷⁷Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂(对照)

通过将DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂配体(如美国专利申请公开2002/0054855和WO 02/87637所述制备，二者被引用作为参考)溶于0.01N HCl至浓度为1mg/mL来制备肽的储备液。以所示的顺序混合以下试剂来制备¹⁷⁷Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂：

0.2M NH₄0Ac，pH 6.8 100μl

肽储备液，1mg/mL，在0.01N HCl中 5μL

¹⁷⁷LuCl₃(MURR)，在0.05M HCl中 1.2μl(1.4mCi)

将反应混合物在85℃下保温10分钟。在水浴中冷却至室温后，加入20μL 1％EDTA溶液和20μL EtOH。通过HPLC，使用C18柱(VYDAC Cat#；218TP54)分析化合物，用20分钟内21-25％B的梯度以1mL/min的流速洗脱，其中A为0.1％TFA/H₂O，而B为0.1％TFA/CH₃CN)。形成97.1％产率(RCP)的¹⁷⁷Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂，其在此系统中的保留时间为～16.1分钟。

实施例XLIX-制备¹⁷⁷Lu-L63

如关于¹⁷⁷Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂，其中QQWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)所述制备此化合物。通过HPLC，使用C18柱(VYDAC Cat#，218TP54)分析化合物，以1mL/分的流速和20分钟内30-34％B的梯度洗脱(其中溶剂为A.0.1％TFA/H₂O，而B为0.1％TFA/CH₃CN)。形成的¹⁷⁷Lu-L63的RCP为97.8％，在此系统中的保留时间为～14.2分钟。

实施例L-制备用于细胞结合和生物分布研究的¹⁷⁷Lu-L70：

根据上述的方法制备此化合物，但换成L70(实施例II的配体)。用YMC Basic C8柱(4.6×150mm)进行纯化，柱温为30℃，流速为1mL/分，而梯度为40分钟内80％A/20％B至75％A/25％B，其中A为柠檬酸盐缓冲液(0.02M，pH 4.5)，而B为80％CH₃CN/20％CH₃OH。分离的化合物的RCP为～100％，而HPLC保留时间为25.4min。

实施例LI-制备用于放射治疗研究的¹⁷⁷Lu-L70：

如以上关于L64所述制备此化合物。

实施例LII-制备用于细胞结合和生物分布研究的¹¹¹In-L70：

通过在85℃下将10μg L70配体(10μL在0.01N HCl中的1mg/mL溶液)、180μL乙酸铵缓冲液(0.2M，pH 5.3)、在0.05N HCl中的1.1mCi¹¹¹InCl₃(61μL，Mallinckrodt)和50μL盐水保温30分钟来合成此化合物。通过加入20μL 1％Na₂EDTA·2H₂O(Aldrich)水溶液来清除游离的¹¹¹In。所得的放射化学纯度(RCP)为86％。通过HPLC，使用与Vydac强阴离子交换柱[7.5×50mm]相连的Waters XTerra C18柱，从未标记的配体和其它杂质中分离放射性标记的产物，柱温为30℃，流速为1mL/分，且梯度如下表列出，其中A为0.1mM NaOH水溶液，pH 10.0，B为1g/L乙酸铵水溶液，pH 6.7，而C为乙腈。利用此系统，¹¹¹In-L70的保留时间为15分钟，而L70配体的保留时间为27-28分钟。分离的化合物的RCP为96％。

时间，分钟	％A	％B	％C
				0-10	100％
10-11	100-50％		0-50％
				11-21	50％		50％
21-22	50-0％	0-50％	50％
				22-32		50％	50％

通过收集目标HPLC峰至500μL柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH5.3，含有5％抗坏血酸、1mg/mL L-蛋氨酸和0.2％HSA)来制备用于生物分布和细胞结合研究的样品。通过旋转真空30分钟来除去收集物中的有机部分。关于细胞结合研究，在体外研究30分钟内使用纯化、浓缩的样品。关于生物分布研究，在体内研究30分钟内用柠檬酸盐缓冲液(0.05M，pH 5.3，包含5％抗坏血酸钠和0.2％HSA)将样品稀释至终浓度为10μCi/mL。

实施例LIII-体内药代动力学研究

A.示踪剂剂量生物分布：

用以下鉴定的本发明化合物在荷有异种移植的PC3肿瘤的裸小鼠([Ncr]-Foxnl<nu>)中进行低剂量药代动力学研究(例如生物分布研究)。在所有的研究中，以200μCi/kg给小鼠静脉内施用100μL ¹⁷⁷Lu-标记的受试化合物，且每组(n＝3-4)的停留(residence)时间为1和24小时。在LKB 1282CompuGamma计数器中以适宜的标准分析组织。

表11

在1和24小时在负荷PC3肿瘤的裸小鼠中进行药代动力学比较

(200μCi/kg；值为％ID/g，除非另有说明)¹⁷⁷Lu-177标记的本发明化合物

与对照比较

在L64和L70注射之后血液、肝脏和肾中的放射性的分布与对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂的类似，其中QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)，而L64和L70在肿瘤中的摄取在1和24小时则高得多。L63也表现高肿瘤摄取，虽然早期血液和肝脏值有所增加。小鼠胰腺-已知具有GRP受体的正常器官对L64、L70和L63的摄取大大高于对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

B.L70在肿瘤和正常组织中的质量肽给药的效果

下列生物分布研究在人PC-3裸小鼠模型(Tac:Cr:(NCr)-Fox1^nu)中实施。

小鼠接受一次i.v.尾静脉剂量(0.1mL)的适当的¹⁷⁷Lu-L70的溶液，其加入充足的L70配体以得到记录在下列表中的肽质量。给予的¹⁷⁷Lu-L70的放射性剂量是10-750μCi。

所有研究的受试者停留间隔结束时被处死，并收集器官和组织。在γ计数器中测试放射活性。数据表达为总给予放射活性/克组织的百分比(％ID/g)。

小鼠％ID/g，给予剂量(μg)

1h

器官 0.0025 0.08 0.22 0.43 0.64 0.85

血 0.24 0.77 0.49 0.85 0.48 0.71

肝 0.21 0.44 0.27 0.44 0.26 0.35

肾 7.09 5.17 3.46 4.13 4.75 5.31

肿瘤 6.35 3.13 4.36 3.13 3.97 5.78

胰腺 49.59 51.15 25.11 11.60 7.19 5.27

GI 6.38 4.08 1.41 1.39 0.94 0.83

数据显示那些在小鼠中已知表达GRP受体的正常器官，例如胰腺和胃肠道，显示预期的质量剂量效果(即随着质量剂量增加放射活性的摄取减少)，但是，当质量剂量增加时，肿瘤出人意料地未饱和。

通过在给予放射性物质之前给予一定剂量的L70配体，可以得到类似效果。在该研究中，生物分布研究在人PC-3裸小鼠模型(Tac:Cr:(NCr)-Fox1^nu)中实施，其中在静脉内给药的¹⁷⁷Lu L70之前5，15或60分钟，用1次静脉内注射L70配体(0.64μg)或缓冲对照预处理所述动物；质量肽剂量0.1μg/kg小鼠。在¹⁷⁷Lu L70给药之后1小时处死动物，计数组织以测定用L70预处理是否对生物分布具有任何效果。

体内下调，％注射剂量/器官＊，在PC-3小鼠中，

在注射¹⁷⁷Lu-L70后1小时

如之前所述，在¹⁷⁷Lu-L70给药之前5或15分钟用L70预处理的动物中发现，胰腺中放射活性的量显著减少，尽管在所有L70预治疗组(5，15，和60分钟)中发现，胃肠放射活性减少。肾效果是不稳定的，仅仅在5分钟预给药组中显著不同于对照组；但是，尿的排泄在L70给药后60分钟持续不同。结果表明，在所有预给药条件下，靶肿瘤是未受L70预处理影响，并显示¹⁷⁷Lu-L70的摄取。综上所述，这些结果显示采用本发明化合物的预给药或共同给药的有益效果。

实施例LIV-受体亚型特异性

目前，已知GRP受体家族的四种哺乳动物成员：GRP-偏好受体(GRP-R)、神经调节肽-B偏好受体(NMB-R)、铃蟾肽受体亚型3(BB3-R)和铃蟾肽受体亚型4(BB4-R)。¹⁷⁷Lu-L70的受体亚型特异性得到研究。结果表明，¹⁷⁷Lu-L70与GRP-R和NMB-R特异性结合，并且对BB3-R的亲和力小。

通过体外受体放射自显影术，使用Reubi等人，″Bombesin Receptor Subtypes in Human Cancers Detection with the Universal Radio Ligand¹²⁵I-[D-Tyr⁶，beta-Ala，Phe¹³，Nle¹⁴]″，Clin.Cancer Res.8：1139-1146(2002)所述的方法和先前发现仅表达一种GRP受体亚型的组织样品，以及包括正常胰腺和结肠及慢性胰腺炎的非-肿瘤组织确定L70的镥络合物[这里称为¹⁷⁷Lu-L70](如上述制备)的亚型特异性(在下面表12a中表示)。将人回肠类癌组织用作NMB-R的来源，将人前列腺癌用作GRP-R的来源，而将人支气管类癌用作BB3-R亚型受体的来源。为了进行比较，还使用其它铃蟾肽放射性配体，如¹²⁵I-Tyr⁴-铃蟾肽，或已知为通用配体的化合物，¹²⁵I-[DTyr⁶，βAla¹¹，Phe¹³，Nle¹⁴]-BBN(6-14)(其与GRP-R的所有三个亚型结合)，对相邻组织切片进行受体放射自显影。进一步讨论见Fleischmann等人“Bombesin Receptor in Distinct Tissue Compartments of Human Pancreatic Disease，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000)；Markwalder等人，“Gastin-Releasing Peptide Receptor in the Human Prostate：Relation to Neoplastic Transformation，”Cancer Res.59：1152-1159(1999)；Gugger等人，“GRP Receptor in Non-Neoplastic and Neoplastic Human Bbreast”Am.J.Pathol.155：2067-2076(1999)。

表12A

使用不同放射性配体检测各种人类组织中的铃蟾肽受体亚型

＊¹²⁵I-[DTyr⁶，βAla¹¹，Phe¹³，Nle¹⁴]-BBN(6-14)和¹²⁵I-Tyr⁴-BBN。

从表12a可以看出，也可使用¹⁷⁷Lu-L70体外可视化使用已建立的放射性配体鉴定的所有表达GRP-R的肿瘤，如前列腺、乳腺和肾细胞癌。如表12a所示，由于敏感性更好，可使用¹⁷⁷Lu-L70(但不能使用¹²⁵I-Tyr⁴-BBN)鉴定所选择的具有较低GRP-R水平的肿瘤。所有用已建立的放射性配体鉴定的表达NMB-R的肿瘤也可用¹⁷⁷Lu-L70可视化。相反，不能用¹⁷⁷Lu-L70检测BB3肿瘤。人们不应对在表12a所列各种类型肿瘤中受体表达的天然发生率作出任何结论，因为所试验例子被选择为在绝大多数情况下受体-阳性，仅有少数选择阴性对照。正常的人类胰腺不被¹⁷⁷Lu-L70标记，而在相同条件下小鼠胰腺被强标记。虽然正常胰腺是一种可非常迅速降解的组织，不能完全排除蛋白包括受体的降解，表明人类胰腺数据确实为阴性的因素包括相似条件下小鼠胰腺的阳性对照和在相应人类胰岛中发现的强标记的BB3，其代表所研究的人类胰腺质量的阳性对照。此外，在病理学改变(慢性胰腺炎)的胰腺组织中检测到GRP-R表明GRP-R当存在时可在所选择的实验条件下在该组织中被鉴定。事实上，¹⁷⁷Lu-L70以比¹²⁵I-Tyr⁴-BBN更高的敏感性鉴定慢性胰腺炎中的这些GRP-R。胰腺癌均不含可测出量的GRP-R，少数结肠癌显示用¹⁷⁷Lu-L70测量的低密度的非均匀分布的GRP受体(表12a)。还应进一步注意到结肠平滑肌表达GRP-R且用¹⁷⁷Lu-L70及已建立的铃蟾肽配体在体外检测到。

表12B

¹⁷⁵Lu-L70与在人类癌症中表达的3种铃蟾肽受体亚型的结合亲和性。数据以nM IC₅₀(平均值+SEM.n＝圆括号中的实验数)表示。

化合物	D.NMB-R	E.GRP-R	BB3
				通用配体	0.8+0.1(3)	0.7+0.1(3)	1.1+0.1(3)
¹⁷⁵Lu-L70	0.9+0.1(4)	0.8+0.1(5)	＞1,000(3)

如表12b所示，冷标记的¹⁷⁵Lu-L70对在人类组织中表达的人GRP和NMB受体具有非常高的亲和性，而对BB3受体仅有低亲和性。这些实验使用¹²⁵I-[DTyr⁶，βAla¹¹，Phe¹³，Nle¹⁴]-BBN(6-14)作为放射性示踪剂。使用¹⁷⁷Lu-标记的L70作为放射性示踪剂，上述数据由此被证实和扩展。所有表达GRP-R的人类癌症都被¹⁷⁷Lu-L70强标记。对所有NMB-R-阳性肿瘤情况也相同。相反，没有可视化BB3肿瘤。¹⁷⁷Lu-L70的敏感性似乎好于¹²⁵I-Tyr⁴-BBN或¹²⁵I-标记的通用铃蟾肽类似物。因此，可使用¹⁷⁷Lu-L70很容易地鉴定少数表达低密度GRP-R的肿瘤，而使用¹²⁵I-Tyr⁴-BBN时，它们不能被鉴定。¹⁷⁷Lu-L70的结合特性还可在非-肿瘤组织中加以证实。尽管作为对照的小鼠胰腺显示出表达非常高密度的GRP-R，正常人类胰腺腺泡全无GRP-R。然而，在慢性胰腺炎的状况下，可在腺泡(如Fleischmann等人先前报道，“Bombesin Receptor in Distinct Tissue Compartments of Human Pancreatic Diseases，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000))和组织中鉴定出GRP-R，且使用¹⁷⁷Lu-L70较使用¹²⁵I-Tyr⁴-BBN再次具有更好的敏感性。相反，表达BB₃的胰岛不被¹⁷⁷Lu-L70检出，而它们被通用配体强标记，如先前Fleischmann等人，“Bombesin Recptors in Distinct tissue Compartments of Human Pancreatic Disease，”Lab.Invest.80：1807-1817(2000)所报道的。少数结肠癌具有GRP-R，通常密度非常低且不均匀分布，正常结肠平滑肌表达高密度GRP-R。

表12a和12b的结果表明预期Lu标记的L70衍生物可很好地结合主要表达GRP-R的人类前列腺癌。它们还表明预期Lu标记的L70衍生物不会很好地结合正常的人类胰腺(其主要表达BB3-R受体)，或主要表达BB3-R受体亚型的癌。

实施例LV-放射治疗研究

A.效力研究

使用负荷PC3肿瘤的裸小鼠模型进行放射治疗研究。在短期效力研究中，将¹⁷⁷Lu标记的本发明化合物L64、L70、L63和治疗对照化合物DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂与未治疗的对照组作比较。(每个治疗组的n＝12，长达30天，而合并的未治疗的对照组的n＝36，长达31天)。对于所有效力研究而言，在无菌条件下给小鼠静脉内或皮下施用100μL 30mCi/kg ¹⁷⁷Lu-标记的本发明化合物。在研究持续期间将受试者笼养在栅栏环境中。在整个研究期间每周对每只受试动物进行3次体重和肿瘤大小(用卡尺测量)的测量。提前终止的指标包括：死亡；总体重(TBW)下降等于或大于20％；肿瘤大小等于或大于2cm³。短期效力研究的结果在图15A中显示。这些结果表明用L70、L64或L63治疗的动物与不给予治疗的对照动物和给予相同剂量DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-NH₂对照的动物相比存活提高。

用L64和L70，使用与前述相同的剂量，但每种化合物使用更多动物(n＝46)并追踪长达120天，来进行长期效力研究。长期效力研究的结果表示在图15B中。相对于与前面相同的对照(n＝36)，L64和L70治疗均明显增加存活(p＜0.0001)，且L70好于L64，虽然彼此没有统计学差异(p＜0.067)。

实施例LVI

使用分段偶联对L64和L70的可替代选择的制备

可以使用由A-D(图19)概括表示的中间产物的集合体来制备化合物L64和L70，所述中间产物本身可以由固相和液相肽合成领域中已知的标准方法制备(Synthetic Peptides-A User′s Guide 1992，Grant，G.，Ed.WH.Freeman Co.，NY，Chap 3和Chap 4pp 77-258；Chan，W.C.和White，P.D.Basic Procedures in Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis-A Practical Approach 2002，Chan，W.C.和White，P.D.Eds Oxford University Press，New York，Chap.3 pp 41-76；Barlos，K和Gatos，G.Convergent Peptide Synthesis in Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis-A Practical Approach 2002，Chan，W.C.和White，P.D.Eds Oxford University Press，New York，Chap.9pp 216-228.)，所述文献在此被引用以供参考。

这些方法包括基于Aloc、Boc、Fmoc或苄氧基羰基的肽合成策略，或者审慎选择的那些固相或溶液方法的组合。用于特定步骤的中间体根据分子中每个位置的适宜保护基的选择来选择，所述保护基可以选自图1所示的基团清单。本领域技术人员还理解，还可以使用可与肽合成方法相容、包含可替代选择的保护基的中间体，而以上所示的保护基的罗列选项用作例示而不是包括性的，且这些可替代的选择在本领域中是已知的。

这在概述这种方法的图20中作了详细例示。当应用相同的合成策略时，用中间产物C2替换在合成L64中所示的Cl而得到L70。

实施例LVII-图49A和49B

合成L69

概述：(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸A与Fmoc-Cl反应得到中间产物B。使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14)(SEQ ID NO：1)(A)官能化的Rink酰胺树脂(A)依次与B、Fmoc-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸和DOTA三叔丁酯反应。在用试剂B裂解和脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品，得到L230。总产率：4.2％。

A.(3β，5β，7α，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，B(图49)

将在1，4-二

烷(18mL)中的9-芴基甲氧基羰基氯(1.4g；5.4mmol)的溶液滴加到在0℃下搅拌的在10％Na₂CO₃水溶液(30mL)和1，4-二

烷(18mL)中的(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸A(2.0g；4.9mmol)(3)的悬浮液。室温下搅拌6小时后加入H₂O(100mL)，用Et₂O(2×90mL)洗涤水相，然后加入2M HCl(15mL)(最终pH：1.5)。将沉淀的固体过滤，用H₂O(3×100mL)洗涤，真空干燥，然后用快速色谱法纯化得到B，为一种白色固体(2.2g；3.5mmol)。产率71％。

B.N-[3β，5β，7α，12α)-3-[[[2-[2-[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-7，12-二羟基-24-氧代胆烷-24-基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L69(图49B)

将树脂A(0.5g；0.3mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟。过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将(3β，5β，7a，12α)-3-(9H-芴-9-基甲氧基)氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸B(0.75g；1.2mmol)、N-羟基苯并三唑(HOBt)(0.18g；1.2mmol)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂，将混合物于室温下振荡24小时，倒空，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，倒空溶液加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。倒空溶液并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将Fmoc-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL；1.2mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物于室温下振荡3小时，倒空并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。然后将树脂与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉，并将混合物再振荡20分钟。过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸三(1，1-二甲基乙基)酯与NaCl的加合物(0.79g；1.2mmol)、HOBt(0.18g；1.2mmol)、DIC(0.19mL∶1.2mmol)、N-乙基二异丙基胺(0.40mL；2.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，过滤并用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)(2)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)对其进行处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(248mg)，对其用HPLC分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(50mg)。将包含产物的级分冻干得到L69(6.5mg；3.5×10^-3mmol)(图49B)，为一种白色固体。产率5.8％。

实施例LVIII-图50

合成L144

概述：使用八肽Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2(BBN[7-14])(SEQ ID NO：1)(A)官能化的Rink酰胺树脂(A)与4-[2-羟基-3-[4，7，10-三[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酸反应。在用试剂B(2)裂解并脱保护之后，用制备HPLC纯化粗品得到L144。总产率：12％。

A.N-[4-[2-羟基-3-[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰基-L-丙氨酰基-L-缬氨酰基-甘氨酰基-L-组氨酰基-L-亮氨酰基-L-蛋氨酰胺，L144(图50)

将树脂A(0.4g；0.24mmol)在固相肽合成容器中与在DMA(7mL)中的50％吗啉一起振荡10分钟，过滤溶液，并加入新鲜的在DMA(7mL)中的50％吗啉。将悬浮液再搅拌20分钟，然后过滤溶液，并用DMA(5×7mL)洗涤树脂。将4-[2-羟基-3-[4，7，10-三[2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-基]丙氧基]苯甲酸B(0.5g；0.7mmol)、HOBt(0.11g；0.7mmol)、DIC(0.11mL；0.7mmol))、N-乙基二异丙基胺(0.24mL；1.4mmol)和DMA(7mL)加至树脂。将混合物在室温下振荡24小时，倒空，用DMA(5×7mL)、CH₂Cl₂(5×7mL)洗涤树脂，并真空干燥。将树脂在烧瓶中与试剂B(25mL)(2)一起振荡4.5小时。将树脂过滤，并在减压下蒸发溶液得到一种油状粗品，用Et₂O(20mL)对其处理后得到一种沉淀。离心收集沉淀，并用Et₂O(3×20mL)洗涤得到一种固体(240mg)，用HPLC对其进行分析。用制备HPLC纯化一定量的粗品(60mg)。将包含产物的级分冻干得到L144(10.5mg；7.2×10^-3mmol)，为一种白色固体。产率12％。

实施例LIX

制备L300和¹⁷⁷Lu-L300

从0.2g Rink酰胺Novagel树脂(0.63mmol/g，0.126mmol)，在制备型柱色谱之后，得到L300(0.033g，17％)。保留时间为6.66分钟。分子式为C₇₂H₉₉N₁₉O₁₈。计算的分子量为1518.71；观察到1519.6。序列为DO3A-Gly-Abz4-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH₂，其中Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Phe-Leu-NH₂。L300的结构在图51中显示。

将L300(13.9μg溶于13.9μL 0.2M pH 4.8的醋酸钠缓冲液中)与150μL 0.2M pH 4.8醋酸钠缓冲液和4μL ¹⁷⁷LuCl₃(1.136mCi，Missouri Research Reactor)混合。100℃下10分钟后，放射化学纯度(RCP)为95％。将产物在Vydac C18肽柱(4.6×250mm，5μm孔径)上纯化，使用0.1％TFA水溶液(A)和0.085％TFA乙腈溶液(B)的含水/有机梯度，以1mL/分钟的流速洗脱。使用下列梯度：等度洗脱22％B 30分钟，5分钟内至60％B，保持在60％B 5分钟。将以18.8分钟保留时间洗脱的该化合物收集到1mL 0.8％人血清白蛋白溶液中，其是通过将HSA加入到生理盐水与注射用抗坏血酸的9∶1混合物中而制备的。使用Speed Vacuum(Savant)除去乙腈。纯化后，该化合物具有100％的RCP。

实施例LX-与GRP受体亚型相关的连接基特异性的表征

在本测定中，使用两种细胞系：C6，一种表达NMB-R的啮齿动物成胶质细胞瘤细胞系，和PC3，一种表达GRP-R的人前列腺癌细胞系。通过测量其竞争¹²⁵I-NMB或¹²⁵I-BBN与在C6和PC3细胞中其相应受体结合的能力，间接测定了多种未标记的化合物对各受体亚型(NMB-R和GRP-R)的亲和性。

A.材料和方法：

1.细胞培养：

C6细胞从ATCC(CCL-107)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、15％马血清和2.5％FBS的F12K培养基(ATCC)中培养。将用于测定的细胞以9.6×10⁴/孔的浓度平板接种在48孔聚-赖氨酸涂覆的平板(Beckton Dickinson Biocoat)中。PC3从ATCC(CRL-1435)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、10mM HEPES和10％FBS的RPMI 1640(ATCC)中培养。两种培养物均维持在37℃下，含5％CO₂/95％空气的湿润大气中。将用于测定的PC3细胞以2.0×10⁴个细胞/孔的浓度平板接种在96-孔白色/透明底平板(Falcon Optilux-I)中。在接种后第2天，平板用于进行测定。

2.结合缓冲液，和放射性-配体：

RPMI 1640(ATCC)含25mM HEPES、0.2％BSA级分V、1.0mMAEBSF(CAS#3087-99-7)和0.1％杆菌肽(CAS#1405-87-4)，pH 7.4。

使用定制的¹²⁵I-[Tyr⁰]NMB，＞2.0Ci/μmole(Amersham Life Science)[¹²⁵I-NMB]和商业可得到的¹²⁵I-[Tyr⁴]BBN，＞2.0Ci/μmole(Perkin Elmer Life Science)[¹²⁵I-BBN]作为放射性配体。

B.体外测定法：

使用48-孔平板测定系统(用于C6研究)，用¹²⁵I-NMB进行竞争实验。所有PC3研究均是按照实施例XLIII所述，使用¹²⁵I-BBN进行的。基于连接基亚型选择进行测定的化合物。结果在表13中表示。

表13

用于测定所选的化合物数和它们的连接基

使用GraphPad Prism单-位点竞争非-线形回归分析分析由该研究获得的结合参数。将各种化合物对C6细胞中NMB-R的相对亲和性与使用商业得到的[Tyr⁴]-BBN和[Tyr⁰]-NMB获得的进行比较。为了区分GRP-R偏好化合物与NMB-R加GRP-R偏好化合物，将从各化合物获得的IC₅₀值与在C6细胞上从[Tyr⁰]-BBN和¹²⁵I-NMB获得的进行比较。将两类化合物之间的截断点取为10X[Tyr⁴]-BBN的IC₅₀。在所试验化合物中，8种化合物偏好结合GRP-R(如表14所示)而32种化合物以相似的亲和性结合GRP-R和NMB-R，有两种显示偏好NMB-R。

表14

使用¹²⁵I-NMB和¹²⁵I-BBN进行竞争实验获得的IC₅₀值

＊QWAVGHLM-NH₂是序列BBN(7-14)，其是(SEQ ID NO：1)。

在上表中，“na”表示“不适用的”(例如，该化合物不含本发明的连接基且因此没有指定L#)。

基于上面所述，观察到若干结果。单独的受体结合区(BBN_7-14或BBN_8-14)没有显示出对GRP-R或NMB-R的任何偏好。向受体结合区加入单独的螯合剂不有助于肽对GRP-R或NMB-R的亲和(DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1))。螯合剂通过连接基与肽偶合确实导致肽对受体的亲和。然而，根据连接基类型的不同，该亲和性从双重(偏好NMB-R和GRP-R)到GRP-R(偏好GRP-R)变化。在上述段落中，QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

所试验的ω-氨基链烷酸(¹⁷⁵Lu-DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHLM-HN₂和DO3A-一酰胺-Aoc-QWAVGHL-Nle-NH₂中的8-氨基辛酸，DO3A-一酰胺-Apa3-QWAVGHLM-NH₂中的3-氨基丙酸和DO3A-一酰胺-Abu4-QWAVGHLM-NH₂中的4-氨基丁酸)作为连接基，赋予肽对GRP-R和NMB-R的双重亲和性。用′Nle′替换¹⁷⁵Lu-DOTA-Aoc-QWAVGHLM-NH₂中的′Met′不改变肽的这种双重亲和性。在上述段落中，QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQID NO：1)。

含胆酸的连接基(L64中的3-氨基胆酸、L63中的3-氨基-12-羟基胆烷酸和L67中的3-氨基-12-酮胆烷酸)赋予肽对GRP-R和NMB-R的双重亲和性。含环烷基和芳族取代的丙氨酸的连接基(DO3A-一酰胺-Cha-Cha-QWAVGHLM-NH₂中的3-环己基丙氨酸、DO3A-一酰胺-Cha-Nal1-QWAVGHLM-NH₂中的1-萘基丙氨酸、DO3A-一酰胺-Nal1-Bpa4-QWAVGHLM-NH₂中的4-苯甲酰基苯丙氨酸和DO3A-一酰胺-Nal1-Bip-QWAVGHLM-NH₂中的联苯基丙氨酸)使肽对GRP-R具有选择亲和性。仅含4-(2-氨乙基哌嗪)-1的连接基也使肽具有GRP-R选择性(L89)。在上述段落中，QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

向NMB序列中引入G-4-氨基苯甲酸连接基可使化合物除了其固有的NMB-R亲和性外，还对GRP-R具有亲和性(L227 vsGNLWATGHFM-NH₂(SEQ ID NO：24)。围绕连接基移动Gly的位置将L70的亲和性从其双重亲和性改变为对NMB-R的选择亲和性(L204)。L70中4-氨基苯甲酸中的3-甲氧基取代(如L240)将双重亲和性改变为对GRP-R的选择亲和性。

根据前面的数据可明显看出连接基对受体亚型的特异性具有显著影响。可鉴定三组化合物：

对GRP-R有活性的那些

这些化合物提供体外和体内对该受体特异性的信息，其可用于诊断目的。当用治疗性放射性核素放射性标记这些化合物时，可对仅含该受体的组织进行治疗，而不影响含NMB-R的那些组织。

对NMB-R有活性的那些

这些化合物提供体外和体内对该受体特异性的信息，其可用于诊断目的。当用治疗性放射性核素放射性标记时，可对仅含该受体的组织进行治疗，而不影响含GRP-R的那些组织。

对GRP-R和NMB-R均有活性的那些

这些化合物提供有关体外和体内这两种受体亚型联合存在的信息，其可用于诊断目的。以特异性为代价，靶向两种受体可增加检测的敏感性。当用治疗性放射性核素放射性标记这些化合物时，可对含两种受体的组织进行治疗，其可增加递送到所需组织的剂量。

实施例LXI-经修饰的铃蟾肽(BBN)类似物与¹²⁵I-BBN对人前列腺癌(PC3)细胞中GRP-R的竞争研究

为了测定替换BBN^7-14类似物中特定氨基酸的效应，制备靶向部分中被修饰的肽，并测定与人前列腺癌(PC3)细胞中GRP-R的竞争性结合。所有这些肽具有与金属螯合部分缀合的通用连接基(DOTA-Gly-Abz4-)。结合数据(IC₅₀nM)在下面表15中表示。

A.材料和方法：

1.细胞培养：

PC3细胞系从ATCC(CRL-1435)获得并在补充了2mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、10mM HEPES和10％FBS的RPMI 1640(ATCC)中培养。培养物维持在37℃，含5％CO₂/95％空气的湿润大气中。将用于测定的PC3细胞以2.0×10⁴个细胞/孔的浓度平板接种在96-孔白色/透明底平板(Falcon Optilux-I)中。在接种后第2天，平板用于进行测定。

2.结合缓冲液：

3.¹²⁵I-Tyr⁴-铃蟾肽[¹²⁵I-BBN]

¹²⁵I-BBN(Cat#NEX258)从PerkinElmer Life Sciences获得。

C.体外测定法：

与¹²⁵I-BBN对PC3细胞中GRP-R的竞争测定：

将所有试验的化合物均溶于结合缓冲液中，并在结合缓冲液中进行适当稀释。以2.0×10⁴/孔的浓度将用于测定的PC3细胞接种在96-孔黑色/透明I型胶原cellware平板(Beckton Dickinson Biocoat)中。在平板接种后第2天，平板用于结合研究。在测定前检查该平板的汇合(＞90％汇合)。进行竞争测定时，将1.25×10^-9M-500×10^-9M浓度的N，N-二甲基甘氨酰基-Ser-Cys(Acm)-Gly-Ava5-QWAVGHLM-NH₂(对照)，其中QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)或其它竞争剂与¹²⁵I-BBN(25,000cpm/孔)共同温育。以75μl/孔测定体积进行研究。各数据点使用一式三个孔。加入适宜溶液后，在4℃温育平板1小时。通过加入200μl冰冷的温育缓冲液而终止温育。将平板洗5次并吸干。使用LKB CompuGamma计数器或微量平板闪烁计数器检测放射性。将¹²⁵I-BBN的结合放射性相对于竞争剂的抑制浓度绘制曲线，并根据结合曲线获得¹²⁵I-BBN结合被抑制50％的浓度(IC₅₀)。

表15：与¹²⁵I-BBN对PC3细胞中GRP-R的竞争研究

＊QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

结果/结论：靶向部分被修饰的各种肽的结合结果分析表明：

神经调节肽类似物(GNLWATGHFM-NH₂，yGNLWATGHFM-NH₂，其中GNLWATGHFM-NH₂是SEQ ID NO：24)不能竞争GRP-R，除非与DO3A-一酰胺-G-Abz4缀合(L227)。然而，它们是有效的NMB竞争剂。这与QWAVGHLM-NH₂、DO3A-一酰胺-QWAVGHLM-NH₂(其中QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列SEQID NO：1)和L70中反映的对铃蟾肽序列氨基末端的衍生要求相类似。组氨酸的替换(L225)降低了在GRP-R的竞争。

L70中两个连接基组分的反转产生L204，这将亚型特异性改变成偏好NMB亚型。铃蟾肽序列中L¹³F置换维持了GRP-R活性(L228)。

表16

＊QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

在此可见，L228中F¹³M¹⁴置换成F¹³L¹⁴产生对GRP-R具有高活性的化合物(L300)。除去蛋氨酸有益，因为它有氧化的倾向。如果不同时进行L¹³F置换，不会产生该益处(L221)。如在L224中所见，除去V¹⁰导致结合完全丧失。

表17

表18

如表18所见，在BBN^2-6区允许多种置换(L214-L217，L226)。

＊QWAVGHLM-NH₂是BBN(7-14)序列(SEQ ID NO：1)。

表19

正如所预期的，表19的结果表明通用激动剂(L222和L223)以～50nM水平相当好地竞争。

实施例LXII-L500的合成

图53

如在图53中所示制备化合物L500。具体地说，将二异丙基乙基胺(150μL)加入至冷却的酸A(0.19g，0.3mmol)和HATU(0.12g，0.32mmol)在DMF(1mL)中的溶液，并搅拌5min。然后将纯化的肽B(0.11g，0.1mmol)加入反应混合物，并搅拌18小时。移除了DMF，将得到的油状物溶解于DMF/CH₃CN的混合物中，通过制备HPLC纯化。采集含有四-叔丁基酯的纯的级分和冷冻干燥，得到四-叔丁基酯，为白色固体。收率80mg(32％)。将得到的四-叔丁基酯溶解于试剂B之中，并搅拌8小时。移除了TFA，使用CH₃CN/水/0.1％TFA，通过HPLC纯化产生的糊状固体是。采集纯的级分，冷冻干燥，得到L500，为白色固体。收率23mg(38％)MS：1515.7(M-H)，757.4(M-2H)/2。

实施例LXIII-L501的合成

图54

如在图54中所示制备化合物L501。将二异丙基乙基胺(150μL)加入至冷却的A(0.278g，0.4mmol)和HATU(0.152g，0.4mmol)在DMF(1mL)中的混合物，并搅拌5min。将纯化的肽B(0.12g.0.11mmol)加入至反应混合物，并搅拌18小时。移除了DMF，将得到的油状物溶解于DMF/CH₃CN的混合物之中，通过制备型HPLC纯化。采集含有四-叔丁基酯的纯的级分，冷冻干燥，得到四叔丁基酯。收率62mg(32％)。将四叔丁基酯(36.0mg，0.02mmol)溶解于试剂B之中，并搅拌8小时。移除了TFA，使用CH₃CN/水/0.1％TFA，通过HPLC纯化产生的粘稠油状物。采集纯的级分，冷冻干燥，得到L501，为白色固体。收率12mg(38％)。MS：1569.7(M-H)，784.4(M-2H/2)，803.3(M+K-2H)/2。

实施例LXIV-L500和L501的放射标记(177Lu)和生物分布L500和L501的¹⁷⁷Lu-络合物的放射标记和HPLC分析

放射标记方法：

典型地，在0.2M醋酸钠缓冲液(pH 4.8)中制备1mg/mL的配体溶液。将等份的该溶液(2至5μL)和6至10mCi的¹⁷⁷LuCl₃(在0.05N HCl中，将特异性活性2.8-4.09Ci/μmol)加入至100至200μL的0.2M，pH 4.8NaOAc缓冲液，以实现2∶1的配体：Lu摩尔比率。在室温温育5min之后，加入10μL的10mM Na₂EDTA·2H₂O以终止反应，清除溶液中任何残留游离¹⁷⁷Lu。然后加入抑菌剂0.9％氯化钠注射USP/ASCOR

抗坏血酸注射USP(0.2mL)的9∶1(v/v)混合物，以抑制产生的放射络合物的辐射分解。通过HPLC测定放射化学纯度(RCP)。在室温温育5min之内观察到所有受试的配体与Lu-177的完全配位。

为了体内生物分布研究制备的放射标记的络合物：

为了生物分布研究，如上文所述制备放射标记的化合物，除了使用配体∶镥的1∶1摩尔比率，以保证所有起始配体的完全螯合。将含有产生的¹⁷⁷Lu络合物的HPLC峰采集在含有0.1％HAS的1mL的9∶1抑菌盐水/ASCOR

溶液中，和使用快速真空(speed-vacuum)装置移除有机溶剂。使用以9∶1[v/v])比率混合的抑菌剂盐水/ASCOR

抗坏血酸注射USP，将残留溶液进一步稀释至需要的放射浓度，所有样品的放射化学纯度是≥95％。

HPLC分析：在1.5mL/min的流速下，使用37℃的柱温度，实施所有HPLC研究。

1.¹⁷⁷Lu-L500

HPLC柱：Zorbax Bonus-RP，5μm，80

孔径，250mm×4.6mm(Agilent)。

流动相：使用下列梯度，其中A＝水；B＝含有30mM(NH₄)₂SO₄的水；C＝甲醇；D＝乙腈

表20

时间	A(％)	B(％)	C(％)	D(％)
					0-2min	70	30	0	0
15min	36	30	16	16
					30min	30	30	20	20
35-40min	0	30	35	35
					45min	70	30	0	0
55min	70	30	0	0

保留时间：¹⁷⁷Lu-L500＝25.5min。

2.¹⁷⁷Lu-L501

HPLC柱：Zorbax Bonus-RP，5μm，80

孔，250mm×4.6mm(Agilent)。

流动相：使用下列梯度，其中A＝水；B＝含有30mM(NH₄)₂SO₄的水；C＝甲醇；D＝乙腈。

时间	A(％)	B(％)	C(％)	D(％)
					0-2min	70	30	0	0
15min	32	30	19	19
					30min	28	30	21	21
35-40min	0	30	35	35
					45min	70	30	0	0
55min	70	30	0	0

保留时间：¹⁷⁷Lu-L501＝23.1min。

生物分布研究：

在人PC-3裸小鼠模型中评价¹⁷⁷Lu-L500，¹⁷⁷Lu-XX100，¹⁷⁷Lu-L501和¹⁷⁷Lu-L70的肿瘤靶向容量，生物分布和动力学。将10-50μCi的HPLC纯化化合物通过i.v.尾静脉注射给予各小鼠，每组n＝4。在注射后1小时，1和7天，处死小鼠，收集器官和组织，在γ计数器中测定放射活性。数据表达为与膀胱混合的尿，以及血池(blood pool)占总给予放射活性的百分比(％ID)；和所有其它受试的器官占总给予放射活性/克的百分比(％ID/g)。

表22

＊72h时间点，ND-未测定

数据显示作为未衍生化的环己基氮杂(aazta)螯合剂的络合物(XX100)给予的Lu-177(其不包括靶向GRP受体的结构部分)从机体快速地被清除，在任何器官或组织中几乎没有残留定位。当采用靶向GRP的肽衍生化(如在L500和L501中)络合物(或其密切相关的衍生物)时，显示放射活性定位在肿瘤中。数据类似于那些¹⁷⁷Lu-L70的数据，如本文所示，显示已将用于放射治疗目的的放射活性递送至PC-3肿瘤的功效。肿瘤定位和在机体其它组织中缺少放射活性残留显示，包括这些两种螯合剂的的本发明的化合物用于放射成像和放射治疗的用途。

¹⁷⁷Lu-XX100的结构是：

实施例LXV-异常血管的通透性在LNCaP肿瘤中的减少

图55-57

现在参考图55，在一个优选的实施方案中，LNCaP细胞在CrTAC:NCr:Foxn1^nu/nu小鼠中成长为异种移植物，显示不明显的侵入性体型，同时来自肿瘤维管结构的血大量外渗入皮肤，导致非隆起的、圆形的或不规则，暗或更暗斑块(瘀斑)(图56)。瘀斑是清楚地可见的，提供肿瘤维管结构渗漏的度量。现已显示用¹⁷⁷Lu-L70处理LNCaP肿瘤减少瘀斑，这表明它减少异常血管通透性，如在图55和57中所示。由于其影响血管通透性，预期用放射性L70在与其它治疗剂组合治疗将改善其它治疗剂的递送。

如在图55-57中所示，在一个优选的实施方案中，使用具有LNCaP(雄性激素敏感前列腺腺癌)肿瘤的裸小鼠模型实施放射治疗研究。将¹⁷⁷Lu标记的本发明的化合物与未的治疗对照组比较。(各组n＝12，持续60天)，在无菌条件下，以30mCi/kg总剂量，将100μL的¹⁷⁷Lu-标记的本发明的化合物静脉内(i.v.)或皮下(s.c.)给予接受治疗的小鼠。在研究期间将受试者饲养在屏障环境中。在研究期间每周3次对各受试者采集体重，肿瘤尺寸(通过测径器测量)，和临床观察。早期终点标准包括：死亡；总体重(TBW)丧失等于或大于20％；肿瘤尺寸等于或大于2cm³。采用¹⁷⁷Lu-L70的治疗相对于不接受治疗的参照动物不增加存活，但是用¹⁷⁷Lu-L70治疗的小鼠的可观察到的瘀斑显著减少，P＝0.0056。在研究期间出现的瘀斑显示在图55中，并描述于图56和57中。

进展时间是评价新药剂抗癌症活性的可代替手段。其被定义为肿瘤直径显示20％增加的时间点。进展平均值时间是当在一组中半数动物达到该点时的研究天数。在一个优选的实施方案中，现在已发现，在采用¹⁷⁷Lu-L70治疗的情况下，在LNCap肿瘤中肿瘤发展平均时间增加约100％。进展平均值时间的数据显示在表23中。

表23

组	发展平均值时间(研究天数)
		对照	14
¹⁷⁷Lu-L70	28

发展时间＝至少20％的增加＞2r，其中r＝平均(L ×W)/2。

如在图56中所示，不接受¹⁷⁷Lu-L701的对照小鼠具有LNCaP异种移植物，其显示具有延伸入身体同侧后肢的瘀斑。通过比较，在图57中，接受¹⁷⁷Lu-L70的试验小鼠具有LNCaP异种移植物，其与对照小鼠相比显示瘀斑减少。

如本实施例所描述，用¹⁷⁷Lu-L70治疗在LNCap肿瘤中提供有益反应，也就是说，在肿瘤中正常化血管，且基本上增加发展时间。

实施例LXVI-体外证明拉帕替尼在BT-474人乳腺癌细胞中对GRP受体结合的效果

从美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)得到BT-474乳腺癌细胞(人原发性侵入性导管癌；ER+，PR+，扩增HER2/neu+)。用于BT-474细胞的生长介质是Hybri-care Medium(CatNo：46X，ATCC)，其补充有10％热灭活的FBS(Hyclone，SH30070.03)，0.2％NaHCO₃，和最终浓度为青霉素-链霉素(1x，100单元/mL)和两性霉素(0.25μg/mL)的抗生素/抗真菌剂“PSF-1x”(GibcoBRL，15240-062)。在含有5％CO₂/95％空气的湿润气氛中，在37℃，将BT-474保持在CellBind^TM组织培养烧瓶(Corning)上，常规使用0.05％胰蛋白酶/EDTA(GibcoBRL 25300-054)传代。在0天，以5.6×104细胞/cm²在96孔白色/清晰底微量滴定板(Falcon Optilux-I)，或96孔黑色/清晰collaga Icellware板(Beckton Dickinson Biocoat)中，将用于结合试验的细胞铺板。

结合缓冲液：

补充有20mM HEPES，0.1％BSA(w/v)，0.5mM PMSF(AEBSF)，杆菌肽(50mg/500ml)的RPMI 1640，pH 7.4.

拉帕替尼溶液：

储备液：在100％DMSO中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

细胞处理，并进行结合测试：

处理：在0天将BT-474细胞铺板(参见上述)；在铺板之后约24-48小时，处理1和2天(DT1，DT2)，移除介质，替换为新鲜生长介质(对照)，或添加拉帕替尼(0.1-1.0μM)的生长介质。

细胞结合测试：采用结合缓冲液洗涤两次以移除血清蛋白，之后3天，在22℃，用¹⁷⁷Lu-AMBA(系列稀释5μCi/mL-0.625μCi/mL)温育细胞60min。通过添加200μL的冰冷结合缓冲液停止温育。采用结合缓冲液再洗涤板3次，将140μL的闪烁液体加入各孔，密封板，在微β板读取器(MicroβTrilux，Perkin-Elmer)上分析。

采用拉帕替尼的处理导致在BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA(也称为¹⁷⁷Lu-L70)结合至多140％的未处理的对照(0.1-1.0μM)的增加所表明。此外，在最高浓度观察到细胞增殖减少至多65％，可能表明GRP受体特异性信号扩增。上文所述显示EGFR和/或HER2和GRP-R的串流。可以认为所述增加是避免破坏的可代替途径(即为了EGFR的持续生长或GRPR导致的反式激活，转换至GRP)，在治疗上可以将其用作原始治疗药物耐药性的早期指征。也可以认为信号增加是避免肿瘤细胞死亡的最后企图(“最后喘息”)，最终导致肿瘤死亡。通过成像以测定这类变化的能力将具有极大优势。

通过实施例XCII为此举例的结果记录在表24(如下)中，其显示，不靶向GRP受体的药物治疗以活细胞为基础在体外调节细胞培养物中GRP-R摄取¹⁷⁷Lu-AMBA(和通过推理可知^67/68Ga-AMBA也如此)：

表24

上表显示，通过在左侧的药物靶向的受体和前列腺和乳腺癌细胞系中GRP受体的体外串流，如通过受体-配体结合测试所测定的。

实施例LXVII-拉帕替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明

T-47D乳腺癌细胞(从胸膜渗出物分离的人转移的乳腺导管腺癌，ER+，PR+)从美国模式培养物保藏所得到。用于T-47D的生长介质是RPMI 1640(10-041-CM，Mediatech，inc)，补充有10％热灭活的FBS(Hyclone，SH30070.03)，0.5％胰岛素(10516-5ML，Sigma)和PSF-1x，如在实施例LXVI中所述保持细胞。结合缓冲液、拉帕替尼溶液、处理方法和细胞结合测试与在实施例LXVI中的相同。

采用拉帕替尼的处理导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多50％的未处理的对照(0.1-1.0μM)增加所表明，同时在最高浓度细胞增殖至多减少35％。上文所述显示EGFR和/或HER2和GRP-R的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXVIII-拉帕替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

PC-3(人前列腺腺癌，骨转移瘤，AR-，ER)从美国模式培养物保藏所得到。用于PC-3细胞的生长介质是RPMI 1640(10-041-CM，Mediatech，inc)，补充有10％热灭活的FBS(Hyclone，SH30070.03)和PSF-1x(如在实施例LXVI中所述)。结合缓冲液、拉帕替尼溶液、处理方法和细胞结合测试与在实施例LXVI中的相同。

结果：采用拉帕替尼的处理导致在PC-3前列腺癌细胞中增殖或经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在0.1-1.0μM范围内等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这显示EGFR和/或HER2和可能的GRP-R的串流。这可以表明治疗实现成功靶向，且GRPR不是可代替的拯救途径；治疗不是成功的，因此不需要反式激活GRPR；或GRP介导拯救，但是不需要增加GRPR的表达。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXIX-达沙替尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

达沙替尼溶液：

储备液：1mM在100％DMSO中

操作：(0.1-1.0μM)在完全生长介质中

结果：采用达沙替尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10-15％的未处理的对照(0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这表明Src家族激酶的成员和GRPR的串流。减少可以表明有效靶向，但是不能为了支持/拯救转换至GRPR；或治疗不是有效，因此不需要转换至GRPR。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXX-达沙替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且达沙替尼溶液如在实施例LXIX中所述。

结果：采用达沙替尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如在(0.1-1.0μM)下¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多500％的未处理的对照的增加所表明。

分析：这表明Src家族激酶的成员和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXX1-达沙替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且达沙替尼溶液如在实施例LXIX中所述。

结果：采用达沙替尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如在(0.1-1.0μM)下¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多250％的未处理的对照的增加所表明。

实施例LXXII-吉非替尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

吉非替尼溶液：

储备液：1mM储备液，在0.5M H₃PO₄中

操作：0.1-10μM，在完全生长介质中

结果：采用吉非替尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如在0.1-10μM下通过等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这可以表明Src家族激酶的成员和GRPR的串流。这可以表明治疗实现成功靶向，GRPR不是可代替的拯救途径；治疗不是成功的，因此不需要反式激活GRPR；或GRP介导拯救，但是不需要增加GRPR的表达。已经报道，GRP如下与对吉非替尼的耐药性(Liu X，等人，ExpCell Res 2007，313；1361-72)相关：通过下游c-src介导的Akt的反式激活，关键的EGFR-激活的信号传递途径，拯救接触吉非替尼的NSCLC细胞。但是这可以不需要增加GRPR的表达。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXIII-吉非替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且吉非替尼溶液如在实施例LXXII中所述。

结果：采用吉非替尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多20％的未治疗的对照(范围0.1-10μM)的增加所表明。

分析：这显示EGFR和GRPR的串流；分析如在实施例LXVI中所述。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXIV-吉非替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且吉非替尼溶液如在实施例LXXII中所述。

结果：采用吉非替尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多20-40％的未治疗的对照(范围0.1-10μM)的减少所表明。

分析：这显示EGFR和GRPR的串流；分析如在实施例LXIX中所述。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXV-伊马替尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

伊马替尼溶液：

储备液：在100mM CH₃COOH中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用伊马替尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在0.1-1.0μM下等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(Bcr-Abl酪氨酸激酶；也抑制PDGF和干细胞因子(SCF)，Kit和PDGFR)和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVIII中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXVI-伊马替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且伊马替尼溶液如在实施例LXXV中所述。

结果：采用伊马替尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多15％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的增加所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(Bcr-Abl酪氨酸激酶；也抑制PDGF和干细胞因子(SCF)，Kit和PDGFR)和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXVII-伊马替尼在PC-3前列腺癌细胞中效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且伊马替尼溶液如在实施例LXXV中所述。

结果：采用伊马替尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多15-25％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(Bcr-Abl酪氨酸激酶；也抑制PDGF和干细胞因子(SCF)，Kit和PDGFR)和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXVIII-厄洛替尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

厄洛替尼溶液：

储备液：在95％乙醇中制备在100mM CH₃COOH中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用厄洛替尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在0.1-1.0μM下等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这表明EGFR和GRP-R的串流；对其的分析与实施例LXVIII中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXIX-厄洛替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且厄洛替尼溶液如在实施例LXXVIII中所述。

结果：采用厄洛替尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多5-20％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的增加所表明。

分析：这表明EGFR和GRP-R的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXX-厄洛替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如在实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且厄洛替尼溶液如在实施例LXXVIII中所述。

结果：采用厄洛替尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多5-20％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这表明EGFR和GRP-R的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXI-索拉非尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

索拉非尼溶液：

储备液：在95％乙醇中制备在100mM CH₃COOH中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用索拉非尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10-25％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(PDGFRba/VEGFR 1，2，3/KIT，FLT3/EGF/Ras/Raf激酶)和GRPR的串流；分析如在实施例LXIX中所述。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXII-索拉非尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且索拉非尼溶液如在实施例LXXXI中所述。

结果：采用索拉非尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在0.1-1.0μM下等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(PDGFRba/VEGFR 1，2，3/KIT，FLT3/EGF/Ras/Raf激酶)和GRPR的串流；分析如在实施例LXVI II中。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXIII-索拉非尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且索拉非尼溶液如在实施例LXXXI中所述。

结果：采用索拉非尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10-20％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

实施例LXXXIV-舒尼替尼对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

舒尼替尼溶液：

储备液：以95％制备在100mM CH₃COOH中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用舒尼替尼的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多8％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(EGFR、HER2，ErbB3；PDGFα和β；干细胞因子受体(KIT)；FLT3；CSF-1R；拿神经因子受体(RET)和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXV-舒尼替尼对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且舒尼替尼溶液如在实施例LXXXIV中所述。

结果：采用舒尼替尼的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多13％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的增加所表明。

分析：这显示多个激酶抑制剂(EGFR、HER2，ErbB3；PDGFα和β；干细胞因子受体(KIT)；FLT3；CSF-1R；向神经因子受体(RET)和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXVI-舒尼替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且舒尼替尼溶液如在实施例LXXXIV中所述。

结果：采用舒尼替尼的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号增加，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的增加所表明。

实施例LXXXVII-阿那曲唑对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

阿那曲唑溶液：

储备液：在100％乙醇中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用阿那曲唑的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在0.1-1.0μM下等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这显示雌激素受体和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVIII中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXVIII-阿那曲唑对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且阿那曲唑溶液如在实施例LXXXVII中所述。

结果：采用阿那曲唑的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示雌激素受体和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例LXXXIX-阿那曲唑对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且阿那曲唑溶液如在实施例LXXXVII中所述。

结果：采用阿那曲唑的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多10％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

实施例XC-硼替佐米对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

硼替佐米溶液：

储备液：在100％DMSO中的1mM储备液

操作：0.1-1.0μM，在完全生长介质中

结果：采用硼替佐米的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多50％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示泛素途径中下游信号传递和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例XCI-硼替佐米对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且硼替佐米溶液如在实施例XC中所述。

结果：采用硼替佐米的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多50％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

分析：这显示下泛素途径中游信号传递和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例LXVI表24中。

实施例XCII-硼替佐米对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且硼替佐米溶液如在实施例XC中所述。

结果：采用硼替佐米的治疗导致PC-3前列腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多60％的未治疗的对照(范围0.1-1.0μM)的减少所表明。

实施例XCIII-4-OH他莫昔芬对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试。

4-OH他莫昔芬溶液：

储备液：1mM，在95％乙醇中

操作：0.001-0.1μM，在完全生长介质中

结果：采用4-OH他莫昔芬的治疗导致BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多73％的未治疗的对照(范围0.001-0.1μM)的减少所表明。

分析：这显示ER和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在下表25中：

表25

实施例XCIV-4-OH他莫昔芬对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII中所述保持和处理T-47D细胞，并进行结合测试，且4-OH他莫昔芬溶液如在实施例XCIII中所述。

结果：采用4-OH他莫昔芬的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号减少，如¹⁷⁷Lu-AMBA结合至多35％的未治疗的对照(范围0.001-0.1μM)的减少所表明。

分析：这显示ER和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXIX中所述相同。结果记录在实施例XCIII中表25。

实施例XCV-4-OH他莫昔芬对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试，且4-OH他莫昔芬溶液如在实施例XCIII中所述。

结果：采用他莫昔芬(4-OH TMX)的治疗导致在PC-3前列腺乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如所通过在范围0.001-0.1μM中等价的1⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照表明。

分析：这显示ER和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVIII中所述相同。结果记录在表25实施例XCIII中。

实施例XCVI-4-OH他莫昔芬加β2-雌二醇对BT-474人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI中所述保持和处理BT-474细胞，并进行结合测试，除了添加β2-雌二醇(参见下文)。

4-OH他莫昔芬溶液：

储备液：1mM，在95％乙醇中

操作：0.001-0.1μM，在完全生长介质中

β2-雌二醇溶液：

储备液：1mM，在95％乙醇中

操作：1nM，在完全生长介质中

治疗：在0天将BT-474细胞铺板，在1和2天(D_T1，DT2)治疗。移除介质，替换为新鲜生长介质(对照)；或在D_T1替换为生长介质，接着在D_T2替换为1nMβ2-雌二醇；或在D_T1替换为4-OH他莫昔芬，接着在D_T2替换为1nMβ2-雌二醇。

结果：采用β2-雌二醇的治疗增加了在BT-474乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号，如¹⁷⁷Lu-AMBA相对于对照值结合47％的增加所表明。采用4-OH他莫昔芬接着采用β2-雌二醇的治疗没有改变单独采用4-OH他莫昔芬治疗得到的值(参见实施例XCIII)。

分析：这显示ER和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVI中所述相同。结果记录在表25实施例XCIII中。

实施例XCVII-4-OH他莫昔芬加β2-雌二醇和仅用β2-雌二醇对T47D人乳腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVII和XCVI中所述保持和处理T47D细胞，并进行结合测试。

结果：采用β2-雌二醇的治疗没有改变T47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号。采用他莫昔芬接着进行β2-雌二醇的治疗导致T-47D乳腺癌细胞中经细胞的GRP-R表达减少27％，小于仅用他莫昔芬(实施例XCIV)8％。

实施例XCVIII-4-OH他莫昔芬加β2-雌二醇对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合的效果的体外证明。

如实施例LXVI和LXVIII和XCVI中所述保持和处理PC-3细胞，并进行结合测试。

结果：采用β2-雌二醇或4-OH他莫昔芬接着进行β2-雌二醇的治疗导致PC-3前列腺乳腺癌细胞中经细胞的GRP受体特异性信号无变化，如通过在范围0.001-0.1μM中等价的¹⁷⁷Lu-AMBA结合未治疗的对照所表明。

分析：这显示ER和GRPR的串流；对其的分析与实施例LXVIII中所述相同。结果记录在实施例XCIII表25中。

实施例XCIX-达沙替尼对PC-3前列腺癌细胞中GRP受体结合和葡萄糖摄取的效果的体外证明(使用单板测试方法)

方法：从美国典型培养物保藏所得到PC-3(人前列腺腺癌，骨转移瘤，AR-，ER)。用于PC-3细胞的生长介质是RPMI 1640(10-041-CM，Mediatech，inc)，补充有10％热灭活的FBS(Hyclone，SH30070.03)和PSF-1x(如在实施例LXVI中所述)。在0天将细胞铺板(7.5k/孔96孔PEScintiplate)。在铺板之后约24小时，在1和2天(D_T1，D_T2)治疗，移除介质，替换为新鲜生长介质(对照)，或替换为添加达沙替尼(0-0.1μM)的生长介质。在3天，和之前所描述的进行¹⁷⁷Lu-AMBA结合测试。为了测定细胞数量和增殖，将100uL的在DPBS中的10％CCK-F溶液(Molecular technologies)加入至相同的板，在37℃温育30min，在535nm测量相对荧光(RFU)。基于细胞数量和¹⁷⁷Lu-结合，计算Bmax(结合的f摩尔/百万细胞)，将结果与对照相比。

为了葡萄糖摄取研究，使用荧光学标记的2-脱氧葡萄糖衍生物(2-NBDG)。在如上文所述用达沙替尼治疗之后，在37℃，用含2-NBDG(200uM)的结合缓冲液温育细胞2小时，在530nm测量RFU。如上文所述使用CCK-F测定细胞数量。基于细胞数量，测定葡萄糖摄取的Bmax，并将其与对照相比。

如所预期的，细胞增殖显著减少，当使用100nM达沙替尼时，抑制生长多达33％。令人意想不到地，¹⁷⁷Lu-AMBA的摄取从不采用达沙替尼治疗(对照)时的266f摩尔/百万细胞的平均Bmax增加至高如采用100nM达沙替尼时的470f摩尔/百万细胞)，增加了76.7％。当采用100nM达沙替尼时，葡萄糖摄取减少多达67.8％。

达沙替尼治疗对前列腺癌(PC3)细胞(N＝4)中增殖和¹⁷⁷Lu-AMBA摄取的相对变化的效果

结果显示GRP受体活性具有证明达沙替尼治疗靶向Src受体家族的效果能力。

实施例C-4-羟基他莫昔芬对ZR-75-1人乳腺癌细胞中GRP受体结合和葡萄糖摄取的效果的体外证明

方法：从美国模式培养物保藏所(ATCC)得到ZR-75-1乳腺癌细胞系(具有雌激素受体的人导管癌)。如下培养细胞：在37℃，在T-150CellBind组织培养烧瓶(Corning)中，保持在含有5％CO₂/95％空气的湿润气氛中，在完全生长介质，来自ATCC(Cat No：30-2001)的补充有10％热灭活的FBS(hyclone，SH30070.03)的RPMI-1640介质中。常规通过使用来自Mediatech，inc的0.25％胰蛋白酶/EDTA(Cat No：25-053-cl)传代细胞。在0天将ZR-75-1细胞铺板(40k/孔96孔PE Scintiplate)。在铺板之后约48小时，在2和3天(D_T2，D_T3)治疗，移除介质，替换为新鲜生长介质(对照)，或添加4-羟基他莫昔芬(0-0.1μM)的生长介质。在-4天，如之前所描述的进行¹⁷⁷Lu-AMBA结合测试。为了测定细胞数量和增殖，将100uL的在DPBS中的10％CCK-F溶液(Molecular technologies)加入至相同的板，在37℃温育30min，在535nm测量相对荧光(RFU)。基于细胞数量和¹⁷⁷Lu-结合，计算Bmax(结合的f摩尔/百万细胞)。

为了葡萄糖摄取研究，使用荧光学标记的2-脱氧葡萄糖衍生物(2-NBDG)。在如上文所述用4-羟基他莫昔芬治疗之后，在37℃用含2-NBDG(200uM)的结合缓冲液温育细胞2小时，在530nm测量RFU。

如上文所述测定采用CCK-F治疗的细胞数量。

结果显示采用4-OH他莫昔芬长期治疗ZR-75-1导致ZR-75-1细胞的增殖减少，如截止至12天观察到的28％抑制。观察到177Lu-AMBA摄取显著减少，同时伴随响应于治疗的2-NBDG摄取的较小变化。结果显示GRP受体活性具有证明他莫昔芬治疗靶向雌激素受体效果的能力。⁶⁷Ga-AMBA比¹⁸F-FDG更适于监测该治疗的进展。

实施例：CI-4-羟基他莫昔芬对ZR-75-1人乳腺癌细胞中GRP受体结合的长期(2-12天)的效果的体外证明

方法：

1.4-OH他莫昔芬治疗在-2天对GRP摄取的效果：：如上文所述培养ZR-75-1乳腺癌细胞系。如上文所述进行采用4-OH Tam接着采用¹⁷⁷Lu-AMBA摄取的2-天研究。

2.4-OH他莫昔芬在5天对ZR-75-1细胞中GRP或葡萄糖摄取的效果：

如2天研究中所述，在同一天，以15K/孔将ZR-75-1细胞接种在两个96孔闪烁板。从2天至5天，每天采用100nM 4-OH他莫昔芬实施治疗。通过与2天4-OH他莫昔芬的效果研究中所述相同的方法，在6天测定4-OH他莫昔芬对ZR-75-1细胞中GRP-R或葡萄糖摄取的效果。

3.4-OH他莫昔芬在11天对ZR-75-1细胞中GRP或葡萄糖摄取的效果：

当所述研究开始时，在同一天在T-75TC烧瓶中培养ZR-75-1细胞，从2天至5天，每天用或不用100nM 4-OH他莫昔芬处理细胞。在6天，将细胞以15K/孔接种至两个96孔闪烁板，每天采用100nM 4-OH他莫昔芬实施治疗，直到11天。在12天通过与先前应用的相同的方法，测定4-OH他莫昔芬对ZR-75-1细胞中GRP-R或葡萄糖摄取的效果。

结果显示，采用4-OH他莫昔芬长期治疗ZR-75-1导致截止12天观察到的ZR-75-1细胞的28％抑制的增殖减少。观察到¹⁷⁷Lu-AMBA摄取显著减少，同时存在响应于治疗的2-NBDG摄取更小变化。结果显示GRP受体活性具有证明他莫昔芬治疗靶向雌激素受体的效果的能力。67Ga-AMBA比¹⁸F-FDG更适于监测这类治疗的进展。

实施例CII-Ga-AMBA(Ga-L70)的制备和表征。

(a)AMBA配体的合成：

如美国专利7,226,577(Cappelletti等人)所述，使用固相肽合成化学合成AMBA[(DO3A-CH2CO-G-(4-氨基苯甲酰基)-QWAVGHLM-NH₂)，DO3A＝(1，4，7，10-四氮杂-4，7，10-三(羧甲基)-环十二烷基)-乙酰基]。

配体的结构显示如下。

(b)非放射性Ga-AMBA标准的合成：

如下制备非放射性Ga-AMBA的样品：在含2μg的镓的0.2mL的0.2M NaOAc缓冲液(pH 4.8)(镓AAS标准溶液)中混合AMBA配体(25μg)和硒代蛋氨酸(200μg)。这表示1.8∶1的Ga：配体比率。使用过量的Ga以消耗所有AMBA配体，使随后的纯化更简单。在100℃将混合物加热10min。在配位之后，将20μL的10mM EDTA加入反应溶液以螯合任何残留游离镓。将Ga-AMBA反应溶液注射入使用下文列举的条件的用于LC/MS分析的HPLC。

柱：Zorbax Bonus-RP embedded amide C14(250mm×4.6mm，尺寸5μM)。溶剂：A：H₂O/0.1％甲酸/0.01％TFA(v/v)；B：乙腈/0.1％甲酸/0.01％TFA(v/v)。梯度如下表26中所列举。流速：0.6mL/min。柱温：37℃。

用于Ga-AMBA LC/MS分析的HPLC梯度：

表26

在用于LC/MS分析的HPLC条件下，Ga-AMBA的保留时间是～24.8min。天然存在的镓是两种非放射性同位素(分别具有60.11％和39.89％的丰度的Ga-69和Ga-71)的混合物。测量和预期的Ga-AMBA的同位素质量之间具有良好一致性。

Ga-AMBA的预期的、测量同位素质量：

如下制备第二非放射性Ga-AMBA标准：处理10mg溶解于10mL含0.8mg镓的0.2M，pH 4.8NaOAc缓冲液(镓AAS标准溶液)中的“原样”AMBA。在该反应中，Ga：配体比率是～2至1。使用过量Ga以在螯合期间消耗所有AMBA，以方便随后纯化的Ga-AMBA络合物。在100℃加热混合物20min。在配位之后，将2mL的10mM EDTA加入反应溶液以螯合任何残留游离镓。

使用下文列举的HPLC条件，通过制备型HPLC纯化Ga-AMBA。

用于大规模Ga-AMBA纯化的制备型HPLC条件：

采集和冻干Ga-AMBA峰。得到了8.4mg Ga-AMBA的样品，元素分析的结果与2037.6的分子量(3TFA.7H₂O)一致

Ga-AMBA 3TFA.7H₂O的元素分析结果

(c)⁶⁷Ga-AMBA的制备：

使用与如本文描述的和在共同未决US申请U.S.11/751,337中描述的用于¹⁷⁷Lu-AMBA的方法相似的方法，制备⁶⁷Ga-AMBA。将AMBA(6μg的无水配体，4nmol)和硒代蛋氨酸(0.05mg)在50μL的0.2M，pH 4.8NaOAc缓冲液中的溶液与1.7mCi的⁶⁷GaCl₃(Nordion)混合。在100℃加热反应小瓶，加热封闭10min，然后在室温水浴中冷却～2min。在冷却之后，将0.1mL的9∶1的抑菌剂0.9％氯化钠注射USP和ASCOR

抗坏血酸注射USP的混合物加入至小瓶，接着加入20μL的10mM EDTA以螯合任何残留游离放射性核素。未纯化反应混合物的RCP是90.1％。HPLC纯化等份的反应混合物以移除过量配体，使用下列HPLC系统。柱：Zorbax Bonus-RP embedded amide C14(250mm×4.6mm，尺寸5μM，Agilent)。柱温：37℃，流速：1.5mL/分钟。梯度：流动相A＝H₂O，B＝含0.1％三氟乙酸(TFA)(v/v)和30mM(NH₄)₂SO₄的H₂O。(3.96g/L)，C＝甲醇(MeOH)，和D＝乙腈(ACN)。

用于⁶⁷Ga-AMBA分析的流动相梯度

时间(min)	％A	％B	％C	％D
					0	30	60	5	5
5	14	60	13	13
					37	14	60	13	13
40	0	60	20	20
					45	0	60	20	20
46	30	60	5	5

采集期望的级分，将其放入1mL含有0.1％HAS的的抑菌剂盐水/ASCOR L500(9∶1)。使用高速真空移除有机物，使用含有0.1％HAS的9∶1的抑菌剂盐水/ASCOR L500的混合物，将最终产物稀释至0.1mCi/mL。最终RCP是99.8％。⁶⁷Ga-AMBA的平均特异性活性在制备时是～20Ci/微摩尔。当考虑检测器偏差(offsets)时，Ga-AMBA标准(26.2min)的保留时间与⁶⁷Ga-AMBA(26.4min)的保留时间相同，。

(d)⁶⁷Ga-AMBA与PC-3肿瘤细胞的体外结合。

从美国模式培养物保藏所得到人前列腺癌(PC-3)细胞(ATCC，Lot #3250)，将其培养在组织培养烧瓶(Corning)中的含有L-谷氨酰胺和25mMHEPES(来自Cellgro，cat# 10-041-CM)的RPMI-1640中。该生长介质补充有10％热灭活的FBS(Hyclone，SH30070.03)，和两性霉素(0.25μg/mL)。所有培养物保持在37℃的含有5％CO₂湿润气氛中，常规使用0.25％胰蛋白酶/EDTA(VWR，Cat#45000-664)进行传代。以20×103/孔的浓度，在96孔白色/清晰底组织培养板中(Falcon Optilux-I)将细胞铺板。当汇合时，测定的细胞总数量为约25-30×10³细胞/孔。在铺板后2天将板用于结合研究。结合缓冲液是RPMI-1640，其补充有0.2％BSA(w/v)，0.5mM PMSF(AEBSF)，杆菌肽(Sigma，lot#60K082；50mg/500ml)，pH 7.2(从Cellgro得到的RPMI-1640，Cat# 10-041-Cm，Lot#10041059)。

采用96孔板测试以测定非放射性Ga-AMBA抑制⁶⁷Ga-AMBA与GRP-R的结合的EC₅₀。将所有受试化合物溶解于结合缓冲液中，在结合缓冲液中也进行适当的稀释。为了该测试，以1.0×10^-9M至50×10^-9M的浓度，将AMBA配体或非放射性金属络合物Lu-AMBA或Ga-AMBA与总体积为75μL的⁶⁷Ga-AMBA(0.035μCi，1.5μCi/mL)共温育。如下实施这些研究：采用75Ml/孔的测试体积，每个数据点使用一式三份孔。在添加适当的溶液之后，在4℃温育板1小时。在4℃进行结合研究，以预防配体-受体络合物的内化。通过添加200μL的冰冷温育缓冲液，结束温育。洗涤板5次并印记干燥。使用LKB CompuGamma计数器，测定细胞结合的放射活性。通过GraphPad Prizm软件分析数据，以得到抑制50％结合需要的′有效浓度′(EC₅₀值)。

使用板测试的⁶⁷Ga-AMBA的饱和结合研究：

为了⁶⁷Ga-AMBA的饱和结合，使用下列一般方法：如上文所述将PC-3细胞铺板，当汇合时，然后将不同浓度[0-50nM]的添加了⁶⁷Ga-AMBA的75μL的载体[储备液：20μCi/mL，50nM]以一式三份加入各孔，在4℃温育细胞1小时。在一个平行试验中，采用多种浓度的⁶⁷Ga-AMBA在大过量的冷Ga-AMBA(1μM)存在的情况下温育细胞，以测定任何非特异性结合(NSB)。在洗去未结合的放射活性之后，测定结合至细胞的总放射活性。使用GraphPad Prism软件分析数据，以得到K_d和B_max值。根据B_max值计算受体数量。

内化和外向通量测试：

在37℃，将PC-3细胞与在结合缓冲液(总测试体积75μL)中的⁶⁷Ga-AMBA(100,000cpm，75μL，1μCi/mL)温育40min。通过添加200μL的冰冷结合缓冲液停止温育，通过采用结合缓冲液(4℃)洗涤(4x)移除未结合的放射活性。为了移除细胞表面-结合的放射性配体，在0-5℃(冰-浴)用0.2M乙酸的盐水溶液(pH 2.8)温育细胞4min。从各孔单独地采集溶液(酸洗涤介质)。再次重复酸洗涤，在γ计数器中计数混合的溶液，以测定表面结合的放射活性。然后在室温用通过0.5N NaOH(100μL/孔)处理3min裂解细胞。从各孔单独地采集溶液。再次重复用0.5N NaOH温育。计数混合的溶液，以测定PC-3细胞内化的放射性物质的量。在γ计数器中分析所有样品。

为了外向通量研究，在37℃将PC-3细胞与⁶⁷Ga-AMBA(75μL，1μCi/mL)温育40min之后，用冷结合缓冲液(4℃)洗去(4x)未结合的物质。将新鲜结合介质(200μL)加入至各孔，温育细胞至多3小时。在0、1、2和3h，如上文所述测定在介质(观察到的外向通量)中，表面结合的(酸洗涤)和内化的(裂解液)放射活性。

因为在介质中观察到的外向通量可以含有从细胞表面释放的放射活性，根据各时间点细胞中保持内化的放射活性，使用下列等式，计算真实外向通量百分比：

显示AMBA非常均等地与¹⁷⁷Lu-AMBA和⁶⁷Ga-AMBA进行竞争，EC₅₀分别是2.95(+0.28)和2.89(+0.18)nM。类似地，在1.0-1.5nM[EC₅₀]下，AMBA的Lu-和Ga-螯合物与⁶⁷Ga-AMBA和¹⁷⁷Lu-AMBA进行竞争和交叉竞争。

AMBA配体和非放射性金属络合物与具有放射-标记的AMBA对PC-3细胞的竞争结合的比较

＊结果是3个不同试验的平均值。#EC₅₀值不等于kD，因为最大浓度的Ga-AMBA不足以实现饱和。

发现Lu-和Ga-AMBA甚至在比不含金属的AMBA低的浓度下，都与⁶⁷Ga-AMBA和¹⁷⁷Lu-AMBA进行竞争和交叉竞争。例如，发现金属螯合物(Lu-AMBA和Ga-AMBA)的EC₅₀值是在1.0-1.5nM的范围中，尽管不含金属的AMBA一致性地显示稍微更高的EC₅₀值(2.89-2.95nM)。

通过在PC-3中加入载体的⁶⁷Ga-AMBA与GRP-R的饱和结合，测定结合亲和力。通过Prizm软件分析数据，以得到亲和力(kD)和结合容量(B_max)。根据B_max值，计算受体密度。

结果显示，在PC-3细胞中，⁶⁷Ga-AMBA[kD 0.46±0.07nM]对GRP-R的亲和力类似于¹⁷⁷Lu-AMBA(kD 0.44±0.08nM)。类似地，402f摩尔/百万细胞的B_max和受体数量242,000/细胞类似于那些从¹⁷⁷Lu-AMBA研究得到的(B_max 408f摩尔/百万细胞，和受体245,000/细胞)。

通过PC-3细胞比较⁶⁷Ga-AMBA和¹⁷⁷Lu-AMBA的结合

＊结果是3个不同试验的平均值；#高标准偏差源于三个值之一是异常值)在将⁶⁷Ga-AMBA与PC-3细胞预温育后，78.4％的总细胞结合的放射活性显示被内化，和表面结合的总计20.9％。甚至在3小时之后，几乎所有内化的活性保持内化。在2h测定的计算的外向通量是2.4％。表面结合的活性保持为总摄取的15-20％。在多个时间点在介质中发现的放射活性(观察到的外向通量)表现为几乎都来自细胞表面结合的活性。发现⁶⁷Ga-AMBA的内化和外向通量图是与¹⁷⁷Lu-AMBA相同。

通过PC-3细胞比较内化和外向通量的放射-标记的AMBA

(＊结果是3个不同试验的平均值)

实施例CIII-在具有PC-3肿瘤的免疫妥协的雄性小鼠中用镥-177或镓-67标记的AMBA的生物分布数据

使用HPLC纯化物质的痕量水平的放射活性(50μCi/mL)，实施生物分布研究。称重最接近0.1g的受试者(n＝4/镓-67组，n＝9/镥-177组)，记录重量。将0.1mL剂量的⁶⁷Ga-AMBA(0.0002μg)通过i.v.尾静脉，或¹⁷⁷Lu-AMBA(avg.0.0026μg)给予各受试者。在保留间隔结束时，通过颈脱位法处死受试者。在处死之后立即收集要评价的指定组织。称重等份的切除的器官，组织，和血(至最接近的mg)，在Perkin-Elmer，14803”Wizard自动化γ计数器中评价残留的放射活性。将物质重量和相关的计数/分钟(cpm)转移至Excel电子表格以使用GraphPad^TM进行其它统计学的分析。镥-177和镓-67在靶和非靶组织中显示类似的全身生物分布和摄取，除了使用⁶⁷Ga-AMBA通过Student′s t-检验时血中增加的水平(P≤0.05)。特别是，在1和24小时时间点的肿瘤摄取相当。

在PC-3异种移植物小鼠模型中Lu-AMBA和Ga-AMBA的分布。

＊P≤0.05

基于这些数据和体外数据，Lu-AMBA是预见Ga-AMBA体外和体内行为的合理替代品。

实施例CIV-检测他莫昔芬对GRP受体结合BT-474人乳腺癌细胞在小鼠异种移植物模型中的效果。

先前已经确立¹⁷⁷Lu-AMBA作为用于⁶⁷Ga-AMBA的经验证的替代品的用途(实例XCVI和XCVII)，随后主要为了便利使用该替代品。

通过经由s.c移植的60天定时释放的小丸的17β-雌二醇给药，使雌性裸小鼠([Ncr]-Foxn1<nu>)接受激素补充(0.72mg/60天释放；0.6mg/kg；Innovative Research of America，Sarasota，FL)。在开始激素治疗之后4至7天，将在Matrigel(1∶1与PBS)中的1千万BT-474细胞s.c.异种移植至小鼠肋腹。17β雌二醇是肿瘤细胞生长在该模型中需要的。

一旦通过s.c.移植的定时释放小丸(10mg/21天释放；25mg/kg；Innovative Research of America，Sarasota，FL)使肿瘤达到平均尺寸100-200mm³，将他莫昔芬柠檬酸盐每日给予具有BT-474肿瘤的小鼠。对照小鼠接受仅含赋形剂的定时释放小丸(除了激素支持)。

在下列化学治疗给药开始后14天，使用¹⁷⁷Lu-AMBA作为Ga-AMBA的替代品，实施低剂量药物代谢动力学研究，以测定相对于对照的GRP-R摄取。在所有研究中，将100μL的200μCi/kg的¹⁷⁷Lu-AMBA i.v.给予小鼠，采用1小时保留时间/每组(n＝3)。在采用适当标准的LKB 1282CompuGamma计数器中分析组织。

结果：采用他莫昔芬柠檬酸盐(25mg/kg)的治疗在补充β2-雌二醇(0.6mg/kg)的具有BT-474肿瘤的小鼠中显著减少肿瘤GRP受体特异性信号(P＜0.05)，如相对于对照肿瘤值的¹⁷⁷Lu-AMBA的结合减少68％所表明。BT-474肿瘤中摄取减少与采用相同细胞在用4-OH他莫昔芬治疗的情况下的体外研究观察到的相当。

在具有BT-474肿瘤的裸小鼠(采用17β-雌二醇进行激素补充)中，在1小时的莫昔芬对¹⁷⁷Lu-AMBA分布的效果。

实施例CV：⁶⁸Ga-AMBA的制备。

a)硒代蛋氨酸对⁶⁸Ga-AMBA RCP的效果：一式三份地进行2组的试验，以测定硒代-L-蛋氨酸(Se-Met)对⁶⁸Ga-AMBA的放射化学纯度(RCP)的效果。已经观察到，硒代蛋氨酸是这样的氨基酸，其保护放射标记的化合物中敏感残基使其免受放射性损伤，特别是，在AMBA配体(-QWAVGHLM-NH₂)的靶向基团中的蛋氨酸残基。

在第一组的试验中，在Se-Met的存在下制备⁶⁸Ga-AMBA，而在第二组中，在没有Se-Met的情况下制备⁶⁸Ga-AMBA。比较两组的结果。为了限制暴露于操作者，使用自动化合成仪TRACERlab FX-FN实施合成。在两种情况下，如下得到⁶⁸Ga放射同位素溶液：使用注射器泵，以1.5mL/min的流速，采用5mL的0.1M HCl洗脱，洗脱⁶⁸Ge/⁶⁸Ga产生器。采集峰级分(1mL)，将其用于研究。

在Se-Met存在的情况下合成⁶⁸Ga-AMBA：通过将AMBA配体(122至123μg)溶解在0.2M醋酸钠(NaOAc)缓冲液(pH 4.5，含有1mg/mLSe-Met(Aldrich))中，制备制剂溶液。最终AMBA浓度是120μg/mL。向1mL(6.4to 7.6mCi)的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入100μL的AMBA制剂(包含12μg的AMBA)和通过混合120μL H₂O与含有13.1mg NaOAc的80μL用于注射(Hospira)的USP乙酸钠制备的200μL NaOAc溶液。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，转移至小瓶以进行HPLC分析。为了洗涤反应器和来自反应器的管以使其进入产物小瓶，将10％EtOH的H₂O(3mL)溶液引入反应器，并将其转移至产物小瓶。

在Zorbax Bonus-RP柱(4.6×250mm；5μm，Agilent)上实施HPLC分析，使用四元梯度，其中A：H₂O；B：30mM(NH₄)₂SO₄/0.1％TFA(v∶v)；C：乙腈(ACN)；D：甲醇(MeOH)，流速＝1.5mL/min，柱温＝37℃。使用的梯度显示如下。

在不存在e-Met的情况下的⁶⁸Ga-AMBA的合成：如下制备制剂溶液：将AMBA配体(106至134μg)溶解在0.2M NaOAc缓冲液(pH 4.5)中，获得120μg/mL的最终浓度。向1mL(6.6至7.5mCi)的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入100μL的AMBA制剂(包含12μg的AMBA)和通过混合120μL H₂O与含有13.1mg NaOAc的80μL用于注射(Hospira)的USP乙酸钠制备的200μL NaOAc溶液。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，将其转移至小瓶以进行HPLC分析。为了洗涤反应器和来自反应器的管以使其进入产物小瓶，将10％EtOH的H₂O溶液(3mL)引入反应器，并将其转移至产物小瓶。

采用先前描述的柱和方法实施HPLC分析。试验的结果显示在下列表27和28和放射色谱中。显示了在标记后t＝0，1小时，和2小时得到的放射化学纯度(RCP)值。

表27

硒代蛋氨酸对⁶⁸Ga-AMBA的RCP的效果

表28

不存在(顶部图)和存在(底部图)硒代蛋氨酸时的⁶⁸Ga-AMBA反应的通常放射痕迹

根据上述表和放射色谱，清楚的是，Se-Met预防⁶⁸Ga-AMBA中蛋氨酸残基的氧化。它也预防其它⁶⁸Ga-标记的亲水杂质的形成。当使用Se-Met时得到了至多96％(93.7±3.2％)的RCP值，而不存在Se-Met时得到83.3±2.1％RCP。

(b)抗坏血酸和盐水对⁶⁸Ga-AMBA稳定性的效果。以一式三份进行2组的试验，以测定用含有抗坏血酸和盐水的放射稳定剂溶液稀释Sep-Pak纯化⁶⁸Ga-AMBA的效果。通过混合9份正常的盐水与1份ASCOR L

制备稳定剂溶液。Ascor L500(McGuff)是用于注射的抗坏血酸USP溶液，并包含500mg/mL钠抗坏血酸盐，依地酸盐二钠(0.025％)，注射用水(q.s.)和用于pH调节(pH 5.5至7.0)的碳酸氢钠。

在第一组的试验中，在纯化Sep-Pak之后，将⁶⁸Ga-AMBA与4mL的盐水混合，而在第二组中，将它用3mL的9Saline：1Ascor和1mL的H₂O稀释。比较两组的结果。

不采用9Saline：1Ascor合成⁶⁸Ga-AMBA。

为了限制暴露于操作者，使用自动化合成仪TRACERlab FX-FN实施合成。通过将AMBA配体(120μg)溶解在0.2M醋酸钠(NaOAc)缓冲液(pH 4.5含有1mg/mL Se-Met(Aldrich))中，制备制剂溶液。最终AMBA浓度是120μg/mL。向1mL的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入100μL(12μg)的AMBA制剂和通过混合120μL H₂O与80μL(13.1mg)USP NaOAc(Hospira)制备的200μL NaOAc溶液。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，将其转移至用3mL的EtOH和8mL的H₂O调节的WatersC18Light Sep-Pak。为了增加回收，通过将2ml的10％EtOH的H₂O溶液引入反应器洗涤反应器和从反应器至产物小瓶的管，将该溶液转移至Sep-Pak。用4mL的H₂O洗涤Sep-Pak，将产物(5.5至5.8mCi)洗脱入含500μL的EtOH的产物小瓶。然后用4mL的盐水漂洗Sep-Pak，将其采集在产物小瓶中。使用先前描述的柱和方法实施HPLC分析。

采用9Saline：1Ascor合成⁶⁸Ga-AMBA。

向1mL的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入100μL(12μg)如上文所述制备的AMBA制剂和通过混合120μL H₂O与80μL(13.1mg)USP NaOAc(Hospira)制备的200μL NaOAc溶液。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，将其转移至Waters C18 light Sep-Pak。为了增加回收，通过将2mL的10％EtOH的H₂O溶液引入反应器中，洗涤反应器和从反应器至产物小瓶的管，将该溶液转移至Sep-Pak。用4mL的H₂O洗涤Sep-Pak，用500uL的EtOH将产物(4.6至4.9mCi)洗脱入产物小瓶，其包含3mL的9∶1 Saline的混合物(来自Hospira的USP)：Ascor(McGuff Pharmaceuticals)。然后用1mL的H₂O漂洗Sep-Pak，将其采集在产物小瓶中。

采用先前描述的柱和方法实施HPLC分析。试验的结果显示在下列表29和30：

表29

表30

在t＝0和t＝1小时的RCP在统计学无差异(P≤0.05)。产物在t＝2小时的RCP值在统计学上不同(P≤0.05)，表明混合物9份Saline：1份Ascor作为放射保护剂发挥作用。

采用1mL的产生器洗脱液和100μL的AMBA制剂合成的⁶⁸Ga-AMBA

为了限制暴露于操作者，使用自动化合成仪TRACERlab FX-FN实施合成。向1mL的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入如上文所述制备的100μL(12μg)的AMBA制剂和通过混合120μL H₂O与80μL(13.1mg)USPNaOAc(Hospira)制备的200μL的NaOAc溶液。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，将其转移至Waters C18 light Sep-Pak。为了增加回收，将2mL的10％EtOH的H₂O溶液引入反应器，洗涤反应器和从反应器至产物小瓶的管，将该溶液转移至Sep-Pak。用4mL的H₂O洗涤Sep-Pak，将产物(4.6至4.9mCi)洗脱入产物小瓶，其含有3mL的9Saline(来自Hospira的USP)：1Ascor(McGuff Pharmaceuticals)和500uL的EtOH。然后用1mL的H₂O漂洗Sep-Pak，将其采集入产物小瓶。

采用先前描述的柱和方法实施HPLC分析。试验的结果显示在表31中：

表31

采用3mL的产生器洗脱液，400μL的AMBA制剂合成⁶⁸Ga-AMBA和HPLC纯化

在该研究中，使用更大量的Ga产生器洗脱液，增加反应混合物中AMBA制剂的量。HPLC纯化产物以在反应之后移除游离配体。为了限制暴露于操作者，使用自动化合成仪TRACERlab FX-FN实施合成。

向3mL的⁶⁸Ga产生器洗脱液中加入如上文所述制备的400μL(48μg)的AMBA制剂和含有36mg NaOAc的220μL USP NaOAc(Hospira)。在95℃加热该溶液7分钟，冷却至30℃，加入881μL的H₂O和500μL的EtOH。使用MN Nucleosil柱(100-7C18，20×250mm)，通过HPLC纯化该溶液，采用29％CH₃CN/81％H₂O，以5mL/min进行洗脱。将所关注的含有产物的级分采集入含有10mL的H₂O的容器。将该溶液装载至用3mL的EtOH和8ml的H₂O调节的Waters C18Sep-Pak。用4mL的H₂O洗涤Sep-Pak，将产物(4.7至5.4mCi，n＝4)洗脱入含500μL的EtOH的产物小瓶。然后用3mL的H₂O漂洗Sep-Pak，将其采集在产物小瓶中。

使用先前描述的柱和方法实施HPLC分析。试验结果显示在表32中：

表32

本发明的实施方案

提供下文以阐述本发明，而不限制本发明的多种实施方案：

1.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是光性学标记或金属螯合物，任选地与放射性核素络合；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

2.实施方案1的化合物，其中G是具有激动剂活性的激动剂或肽。

3.实施方案1的化合物，其中所述非α氨基酸选自：

8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；

N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪-乙酸；和

具有式NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CO₂H或NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CH₂CO₂H，其中n＝2至100的聚乙二醇衍生物。

4.实施方案1的化合物，其中所述金属螯合剂选自DTPA、DOTA、DO3A、HP-DO3A、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、MECAM和CMDOTA。

5.实施方案1的化合物，其中所述金属螯合剂选自

N，N-二甲基Gly-Ser-Cys；

N，N-二甲基Gly-Thr-Cys；

N，N-二乙基Gly-Ser-Cys；和

N，N-二苄基Gly-Ser-Cys。

6.实施方案1的化合物，其中所述金属螯合剂选自

N，N-二甲基Gly-Ser-Cys-Gly；

N，N-二甲基Gly-Thr-Cys-Gly；

N，N-二乙基Gly-Ser-Cys-Gly；和

N，N-二苄基Gly-Ser-Cys-Gly.

7.实施方案1的化合物，选自：

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Lys-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Arg-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Asp-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Ser-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Glu-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Dala-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Glu-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Dala-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-2，3-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Asp-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Asp-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Ser-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Arg-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-2，3-二氨基丙酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-2，3-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-2，3-二氨基丙酸BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-4-羟基脯氨酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-4-氨基脯氨酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Lys-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Arg-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Ser-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；和

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

8.实施方案1的化合物，选自：

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Lys-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Arg-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Asp-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Ser-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Glu-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Dala-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Glu-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Dala-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-2，3-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Asp-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Asp-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Ser-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Arg-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-2，3-二氨基丙酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-2，3-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Asp-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-2，3-二氨基丙酸BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-N-1-哌嗪乙酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-4-羟基脯氨酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-4-氨基脯氨酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Lys-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Arg-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-Ser-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Lys-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；和

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys-Gly-2，3-二氨基丙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1.

9.实施方案1的化合物，选自：

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-二苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-4-苯甲酰基苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-5-氨基戊酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-D-苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；和

DO3A-单酰胺-8-氨基辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

10.实施方案1、2或3任一项的化合物，其中所述光学标记选自有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物以及生物发光分子。

11.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案1的化合物的诊断的显像剂，其中M是与诊断性放射性核素络合的金属螯合剂，且

将所述患者成像。

12.包括下述步骤的方法成像：

给予患者诊断包括实施方案8的化合物的显像剂，所述显像剂与诊断性放射性核素络合，且

将所述患者成像。

13.包括下述步骤的成像方法：

给予患者诊断包括实施方案1的化合物的显像剂，其中M是光学标记，且

将所述患者成像。

14.包括下述步骤的成像方法：

给予患者诊断包括实施方案10的化合物的显像剂，且

将所述患者成像。

15.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案1的化合物的物质加入至可注射的介质。

16.治疗患者的方法，所述方法包括如下步骤：给予患者包括实施方案7、8或9的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

17.包括如下步骤的治疗患者的方法：给予患者包括实施方案4的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

18.包括下述步骤的放射治疗剂的制备方法：将包括实施方案7、8或9的化合物的物质加入至可注射的介质。

19.包括下述步骤的放射治疗剂的制备方法：将包括实施方案4的化合物的物质加入至可注射的介质。

20.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是光学标记或金属螯合物，任选与放射性核素络合；

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；且

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；且

G是靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

21.实施方案20的化合物，其中G是具有激动剂活性的激动剂或肽。

22.实施方案20的化合物，其中所述取代的胆酸选自：

3β-氨基-3-脱氧胆汁酸；

(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；

(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；

Lys-(3，6，9)-三氧杂癸烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆汁酸)；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸。

23.实施方案20的化合物，其中M选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA、TETA和CMDOTA。

24.实施方案20的化合物，其中M选自EHPG和其衍生物。

25.实施方案20的化合物，其中M选自5-Cl-EHPG、5-Br-EHPG、5-Me-EHPG、5-t-Bu-EHPG和5-sec-Bu-EHPG。

26.实施方案20的化合物，其中M选自苯并二亚乙基三胺戊乙酸(苯并DTPA)和其衍生物。

27.实施方案20的化合物，其中M选自二苯并DTPA、苯基DTPA、二苯基DTPA、苄基DTPA和二苄基DTPA。

28.实施方案20的化合物，其中M选自HBED和其衍生物。

29.实施方案20的化合物，其中M是包含至少3个碳原子和至少2个杂原子(O和/或N)的大环化合物，其大环化合物可以由以杂环元素连接的1个、2个或3个环组成。

30.实施方案20的化合物，其中M选自苯并DOTA、二苯并DOTA、苯并NOTA、苯并TETA、苯并DOTMA和苯并TETMA。

31.实施方案20的化合物，其中M选自1，3-丙稀二胺四乙酸(PDTA)和三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)的衍生物；1，5，10-N，N′，N”三(2，3-二羟基苯甲酰基)三儿茶酚酯(LICAM)和1，3，5-N，N′，N”三(2，3-二羟基苯甲酰基)氨基甲基苯(MECAM)的衍生物。

32.实施方案20的化合物选自：

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-Lys-(3，6，9)-三氧杂癸烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆汁酸)-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-3，6，9-三氧杂癸烷-1，11-二羰基

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-Gly)-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-12-氧代胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-1-氨基-3，6-二氧杂辛酸-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVaHLM-NH₂其中QWAVaHLM-NH₂是SEQ ID NO：14；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHLM-NH₂其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-WAVGHLL-NH₂其中WAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：26；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHL-NH-戊基其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-y-QWAV-Bala-小时-F-Nle-NH₂其中QWAV-Bala-小时-F-Nle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAV-Bala-小时-F-Nle-NH₂其中QWAV-Bala-小时-F-Nle-NH₂是SEQID NO：9；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFL-NH₂其中QWAVGHFL-NH₂是SEQ ID NO：22

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGNMeH-L-M-NH₂其中QWAVGNMeH-L-M-NH₂是SEQ IDNO：15；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAVGSF-M-NH₂其中LWAVGSF-M-NH₂是SEQ ID NO：11；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-HWAVGHLM-NH₂其中HWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：12；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAGHFM-NH₂其中LWAGHFM-NH₂？是SEQ ID NO：20；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFM-NH₂其中QWAVGHFM-NH₂是SEQ ID NO：13；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：3；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：4；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：5；

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺)-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LGNQWAVGHLM-NH₂其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：18.

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：3；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：4；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：5；和

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸)-LGNQWAVGHLM-NH₂其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：18.

33.实施方案20、21或22任一项的化合物，其中所述光学标记选自有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物以及生物发光分子。

34.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案20的化合物的诊断的显像剂，其中M是与诊断性放射性核素络合的金属螯合剂，且

将所述患者成像。

35.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案32的化合物的诊断的显像剂，且

将所述患者成像。

36.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案20的化合物的诊断的显像剂，其中M是光学标记，且

将所述患者成像。

37.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案33的化合物的诊断的显像剂，且

将所述患者成像。

38.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案20的化合物的物质加入至可注射的介质。

39.治疗患者的方法，所述方法包括下述步骤：给予患者包括实施方案20的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

40.放射治疗剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案20的化合物的物质加入至可注射的介质。

41.化合物DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1.

42.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)的诊断的显像剂，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1，所述诊断的显像剂与诊断性放射性核素络合，且

将所述患者成像。

43.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：加入至可注射的介质化合物包括DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

44.治疗患者的方法，所述方法包括下述步骤：给予患者包括实施方案41的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

45.放射治疗剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案41的化合物的物质加入至可注射的介质。

46.化合物DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

47.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)的诊断的显像剂，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述诊断的显像剂与诊断性放射性核素络合，且

48.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：将包括DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)的化合物加入至可注射的介质，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

49.治疗患者的方法，所述方法包括下述步骤：给予患者包括实施方案46的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

50.放射治疗剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案46的化合物的物质加入至可注射的介质。

51.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选地与放射性核素络合的光学标记或金属螯合物；

N是0、具有环状基团的α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是具有环状基团的α或非α氨基酸；且

P是0、具有环状基团的α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

52.实施方案51的化合物，其中G是其具有激动剂活性的激动剂或肽。

53.实施方案51的化合物，其中所述具有环基团的非α氨基酸选自：

4-氨基苯甲酸；

4-氨基甲基苯甲酸；

反式-4-氨基甲基环己烷羧酸；

4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸；

六氢异烟酸；

2-氨基甲基苯甲酸；

4-氨基-3-硝基苯甲酸；

4-(3-羧甲基-2-氧代-1-苯并咪唑基)-哌啶；

6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑啉酮-3-乙酸；

(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-氮杂卓并[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-羧酸；

(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫代双环[4.3.0]壬烷-7-羧酸；

3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮；

N1-哌嗪乙酸；

N-4-氨基乙基-N-1-乙酸；

(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺；和

(2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂双环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮。

54.实施方案51的化合物，其中M选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA和TETA。

55.实施方案51的化合物，其中M选自EHPG和其衍生物。

56.实施方案51的化合物，其中M选自5-Cl-EHPG、5-Br-EHPG、5-Me-EHPG、5-t-Bu-EHPG和5-sec Bu EHPG.

57.实施方案51的化合物，其中M选自苯并二亚乙基三胺戊乙酸(苯并DTPA)和其衍生物。

58.实施方案51的化合物，其中M选自二苯并DTPA、苯基DTPA、二苯基DTPA、苄基DTPA和二苄基DTPA。

59.实施方案51的化合物，其中M选自HBED和其衍生物。

60.实施方案51的化合物，其中M是包含至少3个碳原子和至少2个杂原子(O和/或N)的大环化合物，所述大环化合物可以由1个、2个或3个环通过杂环元素连接而组成。

61.实施方案51的化合物，其中M选自苯并DOTA、二苯并DOTA、苯并NOTA、苯并TETA、苯并DOTMA和苯并TETMA。

62.实施方案51的化合物，其中M选自1，3丙稀二胺四乙酸(PDTA)和三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)的衍生物；1，5，10N，N′，N”三(2，3二羟基苯甲酰基)三儿茶酚酯(LICAM)和1，3，5N，N′，N”三(2，3二羟基苯甲酰基)氨基甲基苯(MECAM)的衍生物。

63.实施方案51的化合物，选自

DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己基羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-六氢异烟酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-2-氨基甲基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基-3-硝基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-1-萘基丙胺酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-(3-羧甲基-2-氧代-1-苯并咪唑基-哌啶-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑酮-3-乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-氮杂卓[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫代双环[4.3.0]壬烷-7-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-N，N-二甲基甘氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-N1-哌嗪乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQID NO：1；

DO3A-单酰胺-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-(2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂双环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-5-氨基戊酸-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-D-苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯甲酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-苯甲酰基-(L)-苯丙氨酸-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-Lys-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-二苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-1-萘基丙胺酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-Ser-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-2，3-二氨基丙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-氮杂卓[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基辛酸-反式-4-氨基甲基环己烷-1-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4’-氨基甲基-二苯基-1-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-3’-氨基甲基-二苯基-3-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

CMDOTA-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯氧基乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯基乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

HPDO3A-4-苯氧基-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-3-氨基甲基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯基乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基-3-甲氧基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

Boa-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-4-肼基苯甲酰基-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基苯甲酸-Gly-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-6-氨基烟碱酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-4’-氨基-2’-甲基二苯基-4-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-3’-氨基二苯基-3-羧酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-1，2-二氨基乙基-对苯二甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-EWAVGHLM-NH₂，其中EWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：2；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHLM-OH，其中QWAVGHLM-OH是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Phe-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：3；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：4；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：5；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Phe-QWAVGHL-NH-Pentyl，其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWSVaHLM-NH₂，其中QWSVaHLM-NH₂是SEQ ID NO：7；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Phe-QWAVGHLL-NH₂，其中QWAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：8；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Tyr-QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂，其中QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-Phe-QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂，其中QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAGHFL-NH₂，其中QWAGHFL-NH₂是SEQ ID NO：10；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-LWAVGSFM-NH₂，其中LWAVGSFM-NH₂是SEQ ID NO：11；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-HWAVGHLM-NH₂，其中HWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：12；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFM-NH₂，其中QWAVGHFM-NH₂是SEQ ID NO：13；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-6-氨基萘甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-4-甲基氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

Cm4pm10d2a-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-3-甲氧基-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氯-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-3-甲基-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1

DO3A-单酰胺-Gly-3-羟基-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

(DO3A-单酰胺)2-N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFL-NH₂其中QWAVGHFL-NH₂是SEQ ID NO：22

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯甲酸-L-1-萘基丙胺酸-QWAVGHLM-NH₂其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；和

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGNMeHLM-NH₂其中QWAVGNMeHLM-NH₂是SEQ ID NO：15.

64.实施方案51、52或53任一项的化合物，其中所述光学标记选自有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物以及生物发光分子。

65.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案51的化合物的诊断的显像剂，其中M是与诊断性放射性核素络合的金属螯合剂，且

将所述患者成像。

762]66.包括下述步骤的成像方法：

给予患者的诊断的显像剂包括化合物的实施方案63，和将所述患者成像。

67.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案51的化合物的诊断的显像剂，其中M是光学标记，且

将所述患者成像。

68.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案51的化合物的物质加入至可注射的介质。

69.治疗患者的方法，所述方法包括下述步骤：给予患者包括实施方案51的化合物的放射治疗剂，所述放射治疗剂与治疗放射性核素络合。

70.放射治疗剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案51的化合物的物质加入至可注射的介质。

71.合成DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述方法包括下述步骤：

(a)在固相肽合成管中振荡溶液，所述溶液包括树脂和至少1种肽生成成分，

(b)冲洗所述溶液且

(c)用DMA洗涤所述树脂，

其中所述至少1种肽生成成分包括DMA吗啉、(3β，5β，7α，12α)-3-[[(9H-芴基-9-基甲氧基)氨基]乙酰基]氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸、HOBt、DIC、HATU或其混合物，且

其中重复(a)、(b)和(c)的各步骤直到得到化合物DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

72.合成DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述方法包括下述步骤：

(a)在固相肽合成管中振荡溶液或阻断反应，所述溶液包括树脂和至少1种肽生成成分，

(b)冲洗所述溶液且

(c)洗涤所述树脂用DMA，

其中所述至少1种肽生成成分包括DMA、吗啉、Fmoc-4-氨基苯甲酸、HOBt、DIC、HBTU、HATU或其混合物，且

其中重复(a)、(b)和(c)各步骤直到得到化合物DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

73.用于标记DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述方法包括下述步骤：

孵化含有

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)(其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1)、

铵醋酸酯、

选自¹⁷⁷LuCl₃或¹¹¹InCl₃放射性金属前体和

HCl的第一溶液，且

将含有Na₂EDTA·2H₂O和水的第二溶液加入至所述第一溶液，以得到放射化学纯度大于95％。

74.用于标记DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述方法包括下述步骤：

孵化含有

DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)(其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1)、

铵醋酸酯、

选自¹⁷⁷LuCl₃或¹¹¹InCl₃放射性金属前体和

HCl的第一溶液，且

75.通过单独的氨基酸的偶联合成DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，在溶液中的偶联步骤之前或之后，用任何需要的附加的试剂或步骤的方法保护氨基酸或修饰的氨基酸。

76.合成DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，所述方法通过修饰的、保护的、未保护的或其它可变的肽片段的偶联，与在溶液中、在固相上或经由溶液和固相合成组合的步骤和方法的偶联步骤之前或之后任何需要的附加的试剂或步骤的方法组合。

77.通过单独氨基酸的偶联合成DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)的方法，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1，在溶液中的偶联步骤之前或之后，用任何需要的附加的试剂或步骤的方法保护氨基酸或修饰的氨基酸。

78.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的DO3A；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是8-氨基-3，6-二氧杂辛酸.

79.实施方案78的化合物，其中所述靶向GRP受体的肽选自QWAVGHLM-OH(SEQ ID NO：1)、QWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：1)、QWAVGNMeHLM-NH₂(SEQ ID NO：15)、QWAVGHFL-NH₂(SEQID NO：22)、QRLGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：3)、QRYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：4)、QKYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：5)、QWAVGHL-NH-戊基(SEQ ID NO：6)、QWSVaHLM-NH₂(SEQ ID NO：7)、QWAVGHLL-NH₂(SEQ ID NO：8)、QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂(SEQ ID NO：9)、QWAGHFL-NH₂(SEQ ID NO：10)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、HWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：12)、LWATGSFM-NH₂(SEQ IDNO：17)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、QWAVaHLM-NH₂(SEQID NO：14)和QWAVGHFM-NH₂(SEQ ID NO：13)。

80.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的DO3A；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸。

81.实施方案80的化合物，其中所述靶向GRP受体的肽选自QWAVGHLM-OH(SEQ ID NO：1)、QWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：1)、QWAVGNMeHLM-NH₂(SEQ ID NO：15)、QWAVGHFL-NH₂(SEQID NO：22)、QRLGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：3)、QRYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：4)、QKYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：5)、QWAVGHL-NH-戊基(SEQ ID NO：6)、QWSVaHLM-NH₂(SEQ ID NO：7)、QWAVGHLL-NH₂(SEQ ID NO：8)、QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂(SEQ ID NO：9)、QWAGHFL-NH₂(SEQ ID NO：10)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、HWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：12)、LWATGSFM-NH₂(SEQ IDNO：17)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、QWAVaHLM-NH₂(SEQID NO：14)和QWAVGHFM-NH₂(SEQ ID NO：13)。

82.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的DO3A；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是4-氨基苯甲酸。

83.实施方案82的化合物，其中所述靶向GRP受体的肽选自QWAVGHLM-OH(SEQ ID NO：1)、QWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：1)、QWAVGNMeHLM-NH₂(SEQ ID NO：15)、QWAVGHFL-NH₂(SEQID NO：22)、QRLGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：3)、QRYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：4)、QKYGNQWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：5)、QWAVGHL-NH-戊基(SEQ ID NO：6)、QWSVaHLM-NH₂(SEQ ID NO：7)、QWAVGHLL-NH₂(SEQ ID NO：8)、QWAV-Bala-HF-Nle-NH₂(SEQ ID NO：9)、QWAGHFL-NH₂(SEQ ID NO：10)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、HWAVGHLM-NH₂(SEQ ID NO：12)、LWATGSFM-NH₂(SEQ IDNO：17)、LWAVGSFM-NH₂(SEQ ID NO：11)、QWAVaHLM-NH₂(SEQID NO：14)、QWAVGHFM-NH₂(SEQ ID NO：13)、Nme-QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是(SEQ ID NO：1)、Q-ψ[CSNH]WAVGHLM-NH₂、Q-ψ[CH₂NH]-WAVGHLM-NH₂、Q-ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH₂、α-MeQWAVGHLM-NH₂、QNme-WAVGHLM-NH₂、QW-ψ[CSNH]-AVGHLM-NH₂、QW-ψ[CH₂NH]-AVGHLM-NH₂、QW-ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH₂、Q-α-Me-WAVGHLM-NH₂、QW-Nme-AVGHLM-NH₂、QWA＝ψ[CSNH]-VGHLM-NH₂、QWA-ψ[CH2NH]-VGHLM-NH₂、QW-Aib-VGHLM-NH₂、QWAV-Sar-HLM-NH₂、QWAVG-ψ[CSNH]-HLM-NH₂、QWAVG-ψ[CH＝CH]-HLM-NH₂、QWAV-Dala-HLM-NH₂、QWAVG-Nme-His-LM-NH₂、QWAVG-H-ψ[CSNH]-L-M-NH₂、QWAVG-H-ψ[CH₂NH]-LM-NH₂、QWAVGH-ψ[CH＝CH]-LM-NH₂、QWAVG-ψ-Me-HLM-NH₂、QWAVGH-Nme-LM-NH₂、QWAVGH-α-MeLM-NH₂、QWAVGHF-L-NH₂、QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：1、QWAVGHFL-NH₂是SEQ ID NO：22。

84.光线治疗的方法，所述方法包括将实施方案1、20或51任一项的化合物给予患者，其中Mis用于光线治疗的光学标记。

85.选自如下的化合物：

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVaHLM-NH₂，其中QWAVaHLM-NH₂是SEQ ID NO：14；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHLL-NH₂，其中QWAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：8；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAVGHL-NH-戊基，其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-yQWAV-Bala-HFNle-NH₂，其中QWAV-Bala-HFNle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-fQWAV-Bala-HFNle-NH₂，其中QWAV-Bala-HFNle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHFL-NH₂，其中QWAVGHFL-NH₂是SEQ ID NO：22；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGNMeHisLM-NH₂，其中QWAVGNMeHisLM-NH₂是SEQ ID NO：15；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-LWATGHFM-NH₂，其中LWATGHFM-NH₂是SEQ ID NO：16；

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸)-LGNQWAVGHLM-NH₂，其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：18；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QWAVaHLM-NH₂，其中QWAVaHLM-NH₂是SEQ ID NO：14；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-fQWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-fQWAVGHLL-NH₂，其中QWAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：8；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-fQWAVGHL-NH-戊基，其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-yQWAV-Bala-HFNle-NH₂，其中QWAV-Bala-HFNle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-fQWAV-Bala-HFNle-NH₂，其中QWAV-Bala-HFNle-NH₂是SEQ ID NO：9；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QWAVGHFL-NH₂，其中QWAVGHFL-NH₂？是SEQ ID NO：22

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QWAVGNMeHLMNH₂，其中QWAVGNMeHLMNH₂是SEQ ID NO：15；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-LWAVGSFM-NH₂，其中LWAVGSFM-NH₂是SEQ ID NO：11；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-HWAVGHLM-NH₂，其中HWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：12；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-LWATGHFM-NH₂，其中LWATGHFM-NH₂是SEQ ID NO：16；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QWAVGHFM-NH₂，其中QWAVGHFM-NH₂是SEQ ID NO：13

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRLGNQWAVGlyHLM-NH₂，其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：3；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：4；

DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：5；和

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸)-LGNQWAVGHLM-NH₂，其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：18。

86.实施方案16、17、39、44、49或69任一项的方法还包括给予化疗或其它治疗剂。

87.实施方案78或80任一项的化合物，其中所述靶向GRP受体的肽选自Nme-QWAVGHLM-NH₂、Q-ψ[CSNH]WAVGHLM-NH₂、Q-ψ[CH₂NH]-WAVGHLM-NH₂、Q-ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH₂、α-MeQWAVGHLM-NH₂、QNme-WAVGHLM-NH₂、QW-ψ[CSNH]-AVGHLM-NH₂、QW-ψ[CH₂NH]-AVGHLM-NH₂、QW-ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH₂、Q-α-Me-WAVGHLM-NH₂、QW-Nme-AVGHLM-NH₂、QWA＝ψ[CSNH]-VGHLM-NH₂、QWA-ψ[CH₂NH]-VGHLM-NH₂、QW-Aib-VGHLM-NH₂、QWAV-Sar-HLM-NH₂、QWAVG-ψ[CSNH]-HLM-NH₂、QWAVG-ψ[CH＝CH]-HLM-NH₂、QWAV-Dala-HLM-NH₂、QWAVG-Nme-His-LM-NH₂、QWAVG-H-ψ[CSNH]-L-M-NH₂、QWAVG-H-ψ[CH₂NH]-LM-NH₂、QWAVGH-ψ[CH＝CH]-LM-NH₂、QWAVG-α-Me-HLM-NH₂、QWAVGH-Nme-LM-NH₂、QWAVGH-α-MeLM-NH₂、QWAVGHF-L-NH₂、QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1、QWAVGHFL-NH₂是SEQ IDNO：22。

88.用于靶向于释放胃泌素的肽受体(GRP-R)和神经调节肽-B受体(NMB-R)的方法，所述方法包括给予如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的光学标记或金属螯合物；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

89.实施方案88的方法，其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

90.实施方案89的方法，其中N是Gly，O是4-氨基苯甲酸且没有P。

91.靶向于GRP-R和NMB-R的方法，所述方法包括给予如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的光学标记或金属螯合物；

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；且

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；且

G是靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

92.实施方案91的方法，其中N是Gly，O是(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，且没有P。

93.实施方案88、89或91任一项的方法，其中所述靶向GRP受体的肽选自：

Nme-QWAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CSNH]WAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CH₂NH]-WAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH₂、

α-MeQWAVGHLM-NH₂、

QNme-WAVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CSNH]-AVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CH₂NH]-AVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH₂、

Q-α-Me-WAVGHLM-NH₂、

QW-Nme-AVGHLM-NH₂、

QWA＝ψ[CSNH]-VGHLM-NH₂、

QWA-ψ[CH₂NH]-VGHLM-NH₂、

QW-Aib-VGHLM-NH₂、

QWAV-Sar-HLM-NH₂、

QWAVG-ψ[CSNH]-HLM-NH₂、

QWAVG-ψ[CH＝CH]-HLM-NH₂、

QWAV-Dala-HLM-NH₂、

QWAVG-Nme-His-LM-NH₂、

QWAVG-H-ψ[CSNH]-L-M-NH₂、

QWAVG-H-ψ[CH₂NH]-LM-NH₂、

QWAVGH-ψ[CH＝CH]-LM-NH₂、

QWAVG-α-Me-HLM-NH₂、

QWAVGH-Nme-LM-NH₂和

QWAVGH-α-MeLM-NH₂，

其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1且QWAVGHFL-NH₂是SEQID NO：22。

94.改善实施方案1、20、51、78、80或82任一项的化合物体内活性的的方法，包括下述步骤：修饰靶向GRP受体的肽以使减少所述肽的蛋白水解裂解。

95.实施方案94的方法，其中所述修饰的GRP-R靶向肽是激动剂。

96.减少实施方案1、20、51、78、80或82任一项的释放胃泌素的肽(GRP)类似物蛋白水解裂解的方法，所述方法包括下述步骤：修饰在GRP-R靶向结构部分中的肽键。

97.实施方案96的方法，其中所述修饰的GRP-R靶向肽是激动剂。

98.减少具有释放胃泌素的肽受体(GRP-R)靶向结构部分的释放胃泌素的肽(GRP)类似物的蛋白水解裂解的方法，所述释放胃泌素的肽受体(GRP-R)靶向结构部分是激动剂，所述方法包括下述步骤：修饰在GRP-R靶向结构部分中的肽键。

99.实施方案94、96或98任一项的方法，其中所述GRP-R靶向结构部分选自：

Nme-QWAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CSNH]WAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CH₂NH]-WAVGHLM-NH₂、

Q-ψ[CH＝CH]WAVGHLM-NH₂、

α-MeQWAVGHLM-NH₂，

QNme-WAVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CSNH]-AVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CH₂NH]-AVGHLM-NH₂、

QW-ψ[CH＝CH]-AVGHLM-NH₂、

Q-α-Me-WAVGHLM-NH₂、

QW-Nme-AVGHLM-NH₂、

QWA＝ψ[CSNH]-VGHLM-NH₂、

QWA-ψ[CH₂NH]-VGHLM-NH₂、

QW-Aib-VGHLM-NH₂、

QWAV-Sar-HLM-NH₂、

QWAVG-ψ[CSNH]-HLM-NH₂、

QWAVG-ψ[CH＝CH]-HLM-NH₂、

QWAV-Dala-HLM-NH₂、

QWAVG-Nme-His-LM-NH₂、

QWAVG-H-ψ[CSNH]-L-M-NH₂、

QWAVG-H-ψ[CH₂NH]-LM-NH₂、

QWAVGH-ψ[CH＝CH]-LM-NH₂、

QWAVG-α-Me-HLM-NH₂、

QWAVGH-Nme-LM-NH₂和

QWAVGH-α-MeLM-NH₂，

其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1且QWAVGHFL-NH₂是SEQID NO：22。

100.根据实施方案1、20、51、78、80或82任一项的化合物，其中G是已经修饰的靶向GRP受体的肽以使蛋白水解裂解减少。

101.在包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物上具有对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；和

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

102.在包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物上具有对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；且

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团，

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

103.在包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物上具有对GRP-R和/或NMB-R的特异性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

N是0、具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；且

P是0、具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

104.改善包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物的体内活性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；和

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

105.改善包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物的体内活性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；和

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团，

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

106.改善包括任选与放射性核素和GRP-R靶向肽络合的光学标记或金属螯合剂的化合物的体内活性的方法，所述方法包括在这类如下通式的化合物的连接中：

N-O-P

其中

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；和

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

107.具有下列结构的化合物：

108.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是式8的金属螯合剂：

任选与放射性核素络合，其中

R₁是氢、任选用一个或多个羧基基团取代C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基或两个R₁基团共同形成直链或环状C₂-C₁₀亚烷基基团或邻-二取代的亚芳基；

R₂是氢、羧基或选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团的任选取代的基团，其中的每一个可以进一步任选用与能够与生理系统相互作用的适合的分子缀合的官能团取代；

R₃、R₄和R₅，其可以是相同的或不同的，是氢、羧基或选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团的任选取代的基团，其中的每一个可以进一步任选用与能够与生理系统相互作用的适合的分子缀合的官能团取代；且

FG，其可以是相同的或不同的，是羧基、-PO₃H₂或-RP(O)OH基团，其中R是氢或选自C₁-C₂₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基、具有酸性结构部分的基团和具有氨基结构部分的基团的任选取代的基团，其中的每一个可以进一步任选用与能够与生理系统相互作用的适合的分子缀合的官能团取代；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

P是0、具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团；且

G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

109.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是式8的金属螯合剂：

任选与放射性核素络合，其中

R₁是氢、任选用一个或多个羧基基团取代的C₁-C₂₀烷基，C₃-C₁₀环烷基、C₄-C₂₀环烷基烷基、芳基、芳基烷基或两个R₁基团共同形成直链或环状C₂-C₁₀亚烷基基团或邻-二取代的亚芳基；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

和G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

110.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是式8的金属螯合剂：

任选与放射性核素络合，其中

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；且

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；且

G是靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

111.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的氮杂金属螯合剂或其衍生物；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

112.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的氮杂螯合剂或其衍生物；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；和

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

113.如下通式的化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是任选与放射性核素络合的氮杂金属螯合剂或其衍生物；

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；且

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；且

G是靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

114.实施方案108至113任一项的化合物，其中G是具有激动剂活性的激动剂或肽。

115.实施方案108或111的化合物，其中所述具有环状基团的非α氨基酸选自：

4-氨基苯甲酸；

4-氨基甲基苯甲酸；

反式-4-氨基甲基环己烷羧酸；

4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸；

六氢异烟酸；

2-氨基甲基苯甲酸；

4-氨基-3-硝基苯甲酸；

4-(3-羧甲基-2-氧代-1-苯并咪唑基)-哌啶；

6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑酮-3-乙酸；

(2S，5S)-5-氨基-1，2，4，5，6，7-六氢-氮杂卓[3，21-hi]吲哚-4-酮-2-羧酸；

(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫代双环[4.3.0]壬烷-7-羧酸；

3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮；

N1-哌嗪乙酸；

N-4-氨基乙基-N-1-乙酸；

(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺；和

(2S，6S，9)-6-氨基-2-羧甲基-3，8-二氮杂双环-[4，3，0]-壬烷-1，4-二酮.

116.实施方案109或112的化合物，其中所述非α氨基酸选自：

8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；

N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪-乙酸；和

具有式NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CO₂H

或NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CH₂CO₂H的聚乙二醇衍生物，其中n＝2至100。

117.实施方案110或113的化合物，其中所述取代的胆酸选自：

3β-氨基-3-脱氧胆汁酸；

(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；

(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸.

118.包括下述步骤的成像方法：

给予患者包括实施方案109至113任一项的化合物的诊断的显像剂，其中M是与放射性或顺磁性金属络合的金属螯合剂，且

将所述患者成像。

119.用于制备诊断的显像剂的方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案108至113任一项的化合物的物质加入至可注射的介质。

120.治疗患者的方法，所述方法包括下述步骤：给予患者包括实施方案108至113任一项的化合物的与治疗放射性核素络合的放射治疗剂。

121.放射治疗剂的制备方法，所述方法包括下述步骤：将包括实施方案108至113任一项的化合物的物质加入至可注射的介质。

122.实施方案108的化合物，其中M是Aazta，N是Gly，O是4-氨基苯甲酸，P是0，且G是BBN(7-14)，其中BBN(7-14)是SEQ ID NO：1。

123.实施方案108的化合物，其中M是CyAazta，N是Gly，O是4-氨基苯甲酸，P是0，且G是BBN(7-14)，其中BBN(7-14)是SEQ ID NO：1。

124.实施方案110的化合物，其中M是Aazta，N是Gly，O是(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，P是0，且G是BBN(7-14)，其中BBN(7-14)是SEQ ID NO：1。

125.实施方案110的化合物，其中M是CyAazta，N是Gly，O是(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸，P是0，且G是BBN(7-14)，其中BBN(7-14)是SEQ ID NO：1。

126.具有下列结构的化合物：

127.具有下列结构的化合物：

128.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织的靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：

给予受试者包括靶向GRP受体的肽的第一剂量以在非靶组织中占据GRP受体结合位置，

给予所述受试者包括具有如下通式的标记的化合物的第二剂量：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；且

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是靶向GRP受体的肽，和

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

129.实施方案128的方法，其中所述给予所述第一剂量的步骤和给予所述第二剂量的步骤同时存在。

130.实施方案128的方法，其中在第一剂量中所述靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

131.实施方案128的方法，其中在第一剂量中所述靶向GRP受体的肽与连接基缀合，所述连接基与一个或多个金属螯合剂连接。

132.实施方案131的方法，其中所述第一剂量的靶向GRP受体的肽、连接基和金属螯合剂与第二剂量的靶向GRP受体的肽、N-O-P连接基和金属螯合剂相同。

133.实施方案128的方法，其中所述非α氨基酸选自：

8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；

N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪-乙酸；和

具有式NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CO₂H或NH₂-(CH₂CH₂O)n-CH₂CH₂CO₂H的聚乙二醇衍生物，其中n＝2至100。

134.实施方案128的方法，其中所述金属螯合剂选自DTPA、DOTA、DO3A、HP-DO3A、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、MECAM，MDOTA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、Aazta和其衍生物.

135.实施方案128的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

N，N-二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪乙酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；

136.实施方案128的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

DO3A-单酰胺-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-D-苯丙氨酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-8-氨基辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-E(G8-氨基-3，6-二氧杂辛酸-8-氨基-3，6-二氧杂辛酸QWAVGHLM-NH₂)-8-氨基辛酸-8-氨基辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；和

DO3A-单酰胺-E(G-Aoa-Aoa-QWAVGHLM-NH₂)-8-氨基辛酸-8-氨基辛酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

137.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织的靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：

给予所述受试者包括如下通式的标记化合物的第二剂量：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

G是靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

138.实施方案137的方法，其中所述给予所述第一剂量的步骤和给予所述第二剂量的步骤同时存在。

139.实施方案137的方法，其中在第一剂量中的所述靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

140.实施方案137的方法，其中在第一剂量中的所述靶向GRP受体的肽与连结至一个或多个金属螯合剂的连接基缀合。

141.实施方案140的方法，其中所述第一剂量的靶向GRP受体的肽、连接基和金属螯合剂与第二剂量的靶向GRP受体的肽、N-O-P连接基和金属螯合剂相同。

142.实施方案137的方法，其中所述取代的胆酸选自：

3β-氨基-3-脱氧胆汁酸；

(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；

(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸.

143.实施方案137的方法，其中所述金属螯合剂选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA、TETA、CMDOTA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、Aazta和其衍生物。

144.实施方案137的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

DO3A-单酰胺-Gly-Lys-(3，6，9)-三氧十一烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆汁酸)-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-3，6，9-三氧十一烷-1，11-二羰基Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-Gly)-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVaHLM-NH₂，其中QWAVaHLM-NH₂是SEQ ID NO：14；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-WAVGHLL-NH₂，其中WAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：8；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAVGHL-NH-戊基，其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-y-QWAV-Bala-H-F-Nle-NH₂，其中QWAV-Bal-H-F-Nle-NH₂是SEQ IDNO：9；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-QWAV-Bala-H-F-Nle-NH₂，其中QWAV-Bala-H-F-Nle-NH₂是SEQ IDNO：9；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFL-NH₂，其中QWAVGHFL-NH₂是SEQ ID NO：22；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGNMeH-L-M-NH₂，其中QWAVGNMeH-L-M-NH₂是SEQ IDNO：15；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAVGSF-M-NH₂，其中LWAVGSF-M-NH₂是SEQ ID NO：11；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-HWAVGHLM-NH₂，其中HWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：12；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LWAGHFM-NH₂，其中LWAGHFM-NH₂是SEQ ID NO：20；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGHFM-NH₂，其中QWAVGHFM-NH₂是SEQ ID NO：13；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：3；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：4；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：5；

-Lys(DO3A-单酰胺)-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-LGNQWAVGHLM-NH₂，其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：18；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：3；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：4；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QKYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QKYGNQWAVGHLM-NH₂是SEQID NO：5；

Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺DO3A-单酰胺-G-3-氨基-3-脱氧胆汁酸)-LGNQWAVGHLM-NH₂，其中LGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：18；

Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；和

ta-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

145.实施方案137的方法，其中所述标记化合物包含DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

146.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织的靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：

给予所述受试者包括如下通式的标记化合物的第二剂量：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

P是0、具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团；和

G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

147.实施方案146的方法，其中所述给予所述第一剂量的步骤和给予所述第二剂量的步骤同时存在。

148.实施方案146的方法，其中在第一剂量中的所述靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

149.实施方案146的方法，其中在第一剂量中所述靶向GRP受体的肽与连结至一个或多个金属螯合剂的连接基缀合。

150.实施方案149的方法，其中所述第一剂量的所述GRP受体肽、连接基和金属螯合剂与第二剂量的靶向GRP受体的肽，N-O-P连接基和金属螯合剂相同。

151.实施方案146的方法，其中所述具有环状基团的非α氨基酸选自：

苯甲酸；

甲基苯甲酸；

-氨基甲基环己烷羧酸；

氨基乙氧基)苯甲酸；

异烟酸；

甲基苯甲酸；

-3-硝基苯甲酸；

羧甲基-2-氧代-1-苯并咪唑基)-哌啶；

哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑酮-3-乙酸；

)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫代双环[4.3.0]壬烷-7-羧酸；

羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮；

哌嗪乙酸；

氨基乙基-N-1-乙酸；

-氨基-1-羧甲基己内酰胺；和

152.实施方案146的方法，其中所述金属螯合剂选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA、TETA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、Aazta和其衍生物。

153.实施方案146的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自

DO3A-单酰胺-N1-哌嗪乙酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

OTA-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQID NO：1；

-4-苯氧基-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-EWAVGHLM-NH₂，其中EWAVGHLM-NH₂？是SEQ ID NO：2；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QWAVGHLM-OH其中QWAVGHLM-OH是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-QRYGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRYGNQWAVGHLM-NH₂？是SEQ ID NO：4；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Phe-QWAVGHL-NH-戊基，其中QWAVGHL-NH-戊基是SEQ ID NO：6；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-(D)-Phe-QWAVGHLL-NH₂QWAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：8；

m10d2a-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

二甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-Gly-3-甲基-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

ADO3A-单酰胺)2-N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺-4-氨基甲基苯甲酸-L-1-萘基丙胺酸-QWAVGHLM-NH₂，其中QWAVGHLM-NH₂是SEQ ID NO：1；

-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；和

zta-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQID NO：1。

154.实施方案146的方法，其中所述标记化合物含有DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

155.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织的靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述组合的剂量：

第一靶向GRP受体的肽以在非靶组织中占据GRP受体结合位置，和

如下通式的标记化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

N是0、α或非α氨基酸或其它连接基团；

O是α或非α氨基酸；和

P是0、α或非α氨基酸或其它连接基团，

且G是第二靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是非α氨基酸。

156.实施方案155的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

157.实施方案155的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连结至一个或多个金属螯合剂的连接基缀合。

158.实施方案157的方法，其中所述第一GRP受体肽、连接基和金属螯合剂与第二靶向GRP受体的肽、N-O-P连接基和标记化合物的金属螯合剂相同。

159.实施方案158的方法，其中所述非α氨基酸选自：

8-氨基-3，6-二氧杂辛酸；

N-4-氨基乙基-N-1-哌嗪-乙酸；和

160.实施方案155的方法，其中所述金属螯合剂选自DTPA、DOTA、DO3A、HP-DO3A、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、MECAM，CMDOTA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、Aazta和其衍生物.

161.实施方案155的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

162.实施方案155的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

163.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括如下组合的的剂量：

如下通式的标记化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

N是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

O是α氨基酸或取代的胆酸；

P是0、α氨基酸、取代的胆酸或其它连接基团；

G是第二靶向GRP受体的肽，且

其中N、O或P中至少一个是取代的胆酸。

164.实施方案163的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

165.实施方案163的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连结至一个或多个金属螯合剂的连接基缀合。

166.实施方案166的方法，其中所述第一GRP受体肽、连接基和金属螯合剂与第二靶向GRP受体的肽、N-O-P连接基和标记化合物的金属螯合剂相同。

167.实施方案163的方法，其中所述取代的胆酸选自：

3β-氨基-3-脱氧胆汁酸；

(3β，5β)-3-氨基胆烷-24-酸；

(3β，5β，12α)-3-氨基-12-羟基胆烷-24-酸；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸；

Lys-(3，6，9)-三氧十一烷-1，11-二羰基-3，7-二脱氧-3-氨基胆汁酸)；

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7-羟基-12-氧代胆烷-24-酸；和

(3β，5β，7α)-3-氨基-7-羟基胆烷-24-酸.

168.实施方案163的方法，其中所述金属螯合剂选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA、TETA、CMDOTA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys，Aazta和其衍生物。

169.实施方案163的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自：

(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-3，6，9-三氧十一烷-1，11-二羰基Pglu-Q-Lys(DO3A-单酰胺-Gly)-Arg-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-f-WAVGHLL-NH₂，其中WAVGHLL-NH₂是SEQ ID NO：26；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-y-QWAV-Bala-H-F-Nle-NH₂，其中QWAV-Bala-H-F-Nle-NH₂是SEQ IDNO：9；

DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-QWAVGNMeH-L-M-NH₂，其中QWAVGNMeH-L-M-NH₂，其中QWAVGNMeH-L-M-NH₂是SEQ ID NO：15；

DO3A-单酰胺-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-QRLGNQWAVGHLM-NH₂，其中QRLGNQWAVGHLM-NH₂是SEQ IDNO：3；

ta-Gly-(3β，5β，7a，12a)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1.

170.实施方案163的方法，其中所述标记化合物包含DO3A-单酰胺-Gly-(3β，5β，7α，12α)-3-氨基-7，12-二羟基胆烷-24-酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

171.用于在受试者中增加标记化合物对表达GRP受体的靶组织靶向性的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述组合的剂量：

如下通式的标记化合物：

M-N-O-P-G

其中

M是与放射性核素络合的光学标记或金属螯合剂；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

G是第二靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸。

172.实施方案171的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连接基缀合。

173.实施方案171的方法，其中第一靶向GRP受体的肽与连结至一个或多个金属螯合剂的连接基缀合。

174.实施方案173的方法，其中所述第一GRP受体肽、连接基和金属螯合剂与靶向GRP受体的肽、N-O-P连接基和标记化合物的金属螯合剂相同。

175.实施方案171的方法，其中所述具有环状基团的非α氨基酸选自：

4-氨基苯甲酸；

4-氨基甲基苯甲酸；

反式-4-氨基甲基环己烷羧酸；

4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸；

六氢异烟酸；

2-氨基甲基苯甲酸；

4-氨基-3-硝基苯甲酸；

4-(3-羧甲基-2-氧代-1-苯并咪唑基)-哌啶；

6-(哌嗪-1-基)-4-(3H)-喹唑酮-3-乙酸；

(4S，7R)-4-氨基-6-氮杂-5-氧代-9-硫代双环[4.3.0]壬烷-7-羧酸；

3-羧甲基-1-苯基-1，3，8-三氮杂螺[4.5]癸烷-4-酮；

N1-哌嗪乙酸；

N-4-氨基乙基-N-1-乙酸；

(3S)-3-氨基-1-羧甲基己内酰胺；和

176.实施方案171的方法，其中所述金属螯合剂选自：DTPA、DOTA、DO3A、HPDO3A、EDTA、TETA、N，N-二甲基Gly-Ser-Cys、Aazta和其衍生物。

177.实施方案171的方法，其中所述标记化合物所包含的化合物选自

TA-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQID NO：1；

3A-4-苯氧基-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

ly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；

DO3A-单酰胺-G-4-氨基苯甲酸-EWAVGHLM-NH₂，其中EWAVGHLM-NH₂，是SEQ ID NO：2；

甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

甲基甘氨酸-Ser-Cys(Acm)-Gly-Gly-3-氨基-3-脱氧胆汁酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

DO3A-单酰胺)2-N，N′-双(2-氨基乙基)-琥珀酰胺酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1；

Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1；和

ta-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ IDNO：1。

178.实施方案171的方法，其中所述标记化合物包含DO3A-单酰胺-Gly-4-氨基苯甲酸-BBN(7-14)，其中所述BBN(7-14)序列是SEQ ID NO：1。

179.实施方案128的方法，其中所述第一剂量的靶向GRP受体的肽是激动剂。

180.实施方案137的方法，其中所述第一剂量的靶向GRP受体的肽是激动剂。

181.实施方案146的方法，中所述第一剂量的靶向GRP受体的肽是激动剂。

182.实施方案155的方法，其中第一靶向GRP受体的肽是激动剂。

183.实施方案163的方法，其中第一靶向GRP受体的肽是激动剂。

184.实施方案171的方法，其中第一靶向GRP受体的肽是激动剂。

185.治疗转移前列腺癌骨或软组织的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述物质的剂量：

许多放射性标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

186.实施方案185的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

187.实施方案185的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三s(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

188.实施方案185的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

189.实施方案185的方法，其中所述肿瘤显示异常的维管结构的减少。

190.实施方案185的方法，其中发展时间增加至少大约15％。

191.治疗对激素敏感的前列腺癌的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括如下物质的剂量：

大量放射性标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

192.实施方案191的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

193.实施方案191的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

194.实施方案191的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

195.实施方案191的方法，其中所述肿瘤显示异常的维管结构的减少。

196.实施方案191的方法，其中发展时间增加至少大约15％。

197.治疗激素难以治疗的前列腺癌的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述物质的剂量：

198.实施方案197的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

199.实施方案197的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

200.实施方案197的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

201.延迟激素敏感的前列腺癌的发展的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述物质的剂量：

大量放射性标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺，足以导致在肿瘤中异常的维管结构的减少或发展时间的增加。

202.实施方案201的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

203.实施方案201的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

204.实施方案201的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

205.实施方案201的方法，其中所述肿瘤显示异常的维管结构的减少。

206.实施方案201的方法，其中发展的时间至少增加大约15％。

207.实施方案201的方法，其中发展的时间至少增加大约50％。

208.实施方案201的方法，其中发展时间增加大约100％。

209.利于激素敏感的前列腺癌的组合治疗的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括如下物质的剂量：

大量的放射性标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺，足以导致在肿瘤中异常的维管结构的减少或发展时间的增加。

210.实施方案209的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

211.实施方案209的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

212.实施方案209的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

213.实施方案209的方法，其中所述肿瘤显示异常的维管结构的减少。

214.实施方案209的方法，其中发展时间增加至少大约15％。

215.在激素敏感的前列腺癌的患者中减少异常血管通透性的方法，所述方法包括下述步骤：给予受试者包括下述物质的剂量：

大量的放射性标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

216.实施方案215的方法，其中所述放射性标记是¹⁷⁷Lu。

217.实施方案215的方法，其中所述剂量是大约3-30mCi/kg的¹⁷⁷Lu-标记的L70，N-[4-[[[[[4，7，10-三(羧甲基)-1，4，7，10-四氮杂环十二碳-1-基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]苯甲酰基]-L-谷氨酰胺酰基-L-色氨酰-L-丙氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰-L-组氨酰基-L-亮氨酰-L-甲硫酰胺。

218.实施方案215的方法，其中所述剂量是静脉内给予。

219.通过观察在它们显示串流的GRP受体上的功能的这种效果变化，检测当用一种或多种的不同药物治疗时，对多种受体之一的功能的效果的方法。

220.使用GRP受体的放射标记的激动剂或拮抗剂，特别是放射标记的L70(AMBA)，和最优选的用Ga放射标记的L70，在体外筛选GRP受体家族的活性的方法。

221.使用GRP受体的放射标记的激动剂或拮抗剂，特别是放射标记的L70(AMBA)，和最优选的用Ga放射标记的L70，在体内将GRP受体家族的活性成像的方法。

222.改善患者管理的方法，所述患者正经历靶向于与GRP-R串流的受体的药物治疗，所述方法包括在放射标记的L70给药至患者之后，在初始治疗之前(以得到基线值)，在治疗期间(以预见和监测反应，和当肿瘤群的位移可能保证治疗剂的变化时进行测定)，和在治疗结束或治疗之后(以有助于效果的测定，下一步的治疗和以预见或期待复发)，得到一系列患者的成像，和评价GRP-R活性的任何变化。

Claims

1.包含与Ga的放射性同位素络合的下式L70的组合物：

2.权利要求2的组合物，其中所述放射性同位素是⁶⁸Ga。

3.包括权利要求1的组合物、缓冲剂和硒代蛋氨酸的放射性药物制剂。

4.权利要求3的放射性药物组合物，其中所述缓冲剂包含醋酸钠。

5.权利要求3或4任一项的放射性药物制剂，还包括抗坏血酸、EDTA和盐水。

6.患者中具有GRP-R的组织的成像方法，所述方法包括下述步骤：

a)将权利要求1、2或3任一项的组合物给予患者；和

b)将患者成像。

7.权利要求6的成像方法，其中使用PET将所述患者成像。

8.诊断患者疾病或对患者疾病进行疾病分期的方法，所述患者被怀疑具有与异常GRP-R功能相关的疾病，所述方法包括下述步骤：

a)给予权利要求1、2或3任一项的组合物至患者；和

b)将患者成像。

9.诊断权利要求8的疾病或对权利要求8的疾病进行疾病分期的方法，其中使用PET将所述患者成像。

10.权利要求6或8任一项的方法，还包括在步骤a)中在给予放射标记组合物之前，给予第二靶向GRP受体的肽，所述肽任选与连接基和/或螯合剂缀合，以在非靶组织中占据GRP受体结合位置。

11.权利要求6或8任一项的方法，还包括在步骤a)中给予下述组合：

a)任选与连接基和/或螯合剂缀合的第一靶向GRP受体的肽，以在非靶组织中占据GRP受体结合位置；和

b)放射标记的组合物。

12.监测靶向与GRP-R串流的受体的药物治疗效果的方法，所述方法包括：

a)给予患者包含如下通式的化合物的组合物：

M-N-O-P-G

其中

M是与金属放射性核素络合的金属螯合剂，或包含放射标记的卤素，例如¹⁸F-、¹²³I-、¹²⁴I-或¹³¹I-的结构部分；

N不存在、或是具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团；

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

P不存在、或是具有环状基团的α氨基酸、非α氨基酸或其它连接基团；和

G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸；

b)将患者成像；

c)基于成像评价GRP-R的活性；

d)给予患者靶向与GRP-R串流的受体的药物；

e)给予患者包含如下通式的化合物的组合物：

M-N-O-P-G

其中

O是具有环状基团的α氨基酸或非α氨基酸；

G是靶向GRP受体的肽，

其中N、O或P中至少一个是具有环状基团的非α氨基酸；

f)将患者成像；

g)基于成像评价GRP-R的活性；

h)在给药之后评价GRP-R活性的变化；和

i)基于GRP-R活性的变化评价药物的治疗效果。

13.权利要求12的方法，还包括基于所评价的药物治疗效果改变治疗方案。

14.权利要求12的方法，其中步骤a)-c)在步骤d)之前约30天发生。

15.权利要求14的方法，其中步骤a)-c)在步骤d)之前约15天发生。

16.权利要求15的方法，其中步骤a)-c)在步骤d)之前约7天发生。

17.权利要求12的方法，其中步骤e)-i)在步骤d)约15天之内发生。

18.权利要求17的方法，其中步骤e)-i)在步骤d)约7天之内发生。

19.权利要求12的方法，其中在治疗过程期间所述方法重复若干次。

20.权利要求12的方法，其中所述与GRP-R串流的受体选自雌激素受体和酪氨酸激酶(RTK)受体。

21.权利要求20的方法，其中所述RTK选自EGFR、Src家族、HER2/ErbB3、Bcr-Abl、SCF、KIT、PDGF、VEGF-R1，2，3、FLT3、Ras、Raf、CSF-1R和RET。

22.权利要求12的方法，其中所述药物选自依西美坦、拉帕替尼、达沙替尼、吉非替尼、伊马替尼、厄洛替尼、索拉非尼、舒尼替尼、阿那曲唑、硼替佐米、他莫昔芬和β2-雌二醇。

23.权利要求12的方法，其中所述式M-N-O-P-G的化合物是与诊断性放射性核素络合的下式的L70：

24.权利要求23的方法，其中L70与能用PET测定的放射性核素络合。

25.权利要求23的方法，其中L70与能用SPECT测定的放射性核素络合。

26.权利要求24的方法，其中L70与⁶⁸Ga络合。

27.权利要求23或26任一项的方法，其中所述组合物还包含缓冲剂和硒代蛋氨酸。

28.权利要求27的方法，其中所述缓冲剂包含醋酸钠。

29.权利要求27的方法，其中所述组合物还包含抗坏血酸、EDTA和盐水。

30.权利要求12的方法，其中使用PET将所述患者成像。

31.权利要求12的方法，其中使用SPECT将所述患者成像。

32.权利要求12的方法，还包括给予任选与连接基和/或螯合剂缀合的第二靶向GRP受体的肽，以在步骤a)或e)中，或在步骤a)和e)中，在给予组合物之前，在非靶组织中占据GRP受体结合位置。

33.权利要求12的方法，还包括，在步骤a)或e)中，或在步骤a)和e)中，给予下述组合：

b)放射标记的组合物。