CN102066403A - 抗人死亡受体dr5单克隆抗体ad5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途 - Google Patents
抗人死亡受体dr5单克隆抗体ad5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102066403A CN102066403A CN2009801171512A CN200980117151A CN102066403A CN 102066403 A CN102066403 A CN 102066403A CN 2009801171512 A CN2009801171512 A CN 2009801171512A CN 200980117151 A CN200980117151 A CN 200980117151A CN 102066403 A CN102066403 A CN 102066403A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- amino acid
- polypeptide
- monoclonal antibody
- acid residue
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 56
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 113
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 81
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 10
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 26
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 16
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 claims description 7
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 claims description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 108010007337 Azurin Proteins 0.000 claims description 4
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 claims description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 4
- OUGPQMKVHOPOBY-UHFFFAOYSA-N gem 132 Chemical compound COP(O)(=O)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(=O)(OC)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)CC1OP(O)(=O)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=O)OCC(C(C1)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(=O)(OC)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(=O)(OC)OCC2C(CC(O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OP(=O)(OC)OCC2C(CC(O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OP(=O)(OC)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)OC1N1C=CC(N)=NC1=O OUGPQMKVHOPOBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 claims description 4
- 229940124321 AIDS medicine Drugs 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 abstract 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 abstract 1
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 description 58
- 102100040112 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Human genes 0.000 description 52
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 16
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 11
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 101000610605 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Proteins 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 108010049207 Death Domain Receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 7
- 102100040113 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Human genes 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 102100032236 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11B Human genes 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 5
- 239000011022 opal Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 102000010170 Death domains Human genes 0.000 description 2
- 108050001718 Death domains Proteins 0.000 description 2
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 101000610602 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010000449 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100040115 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 229940047431 recombinate Drugs 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000610609 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002259 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100040110 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Human genes 0.000 description 1
- 102000018594 Tumour necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007852 Tumour necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 201000006754 cone-rod dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 201000000464 cone-rod dystrophy 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
提供了抗人死亡受体DR5单克隆抗体AD5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途。该抗原决定簇具有氨基酸序列：LITQQDLAPQQRA，其中核心多肽为QDLAP。含有该抗原决定簇的多肽与单克隆抗体AD5-10结合后可激活DR5下游的信号通路，引起细胞凋亡。该抗原决定簇及其衍生物可用于筛选和制备抗人DR5激动性抗体、与DR5结合的小分子化合物以及DR5疫苗。它们的核苷酸编码序列可用于制备用于肿瘤和/或艾滋病等疾病的治疗和预防的反义核苷酸和小分子核糖核苷酸。
Description
抗人死亡受体 DR5单克隆抗体 AD5-10所识别的抗原决定簇、 其衍生物及其用途
技术领域
本发明涉及一种通过多肽芯片 （peptide array) 技术鉴定得到的一 段核心多肽序列， 该序列同人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)的受体 5 ( death receptor 5， DR5 )的 N末端第 4至第 16位氨基酸残基具有高度同源性， 是 AD-10 (中国专利号： ZL02104519.4) 所识别的抗原决定簇。 本发 明并涉及该多肽及其衍生物在研制激动性抗人 DR5 单克隆抗体、 与 DR5 结合的小分子化合物、 预防性疫苗或者治疗性疫苗中的用途。 最 后， 本发明还涉及该多肽及其衍生物的反义核苷酸和小分子核糖核苷 酸在肿瘤和 /或艾滋病等相关疾病的治疗和预防中的用途。 背景技术
死亡受体 （death receptor) 是肿瘤坏死因子受体 （TNFR) 基因超 家族的成员， 其结构特点是具有富含半胱氨酸的胞外结构域 (extracellular domain, ECD)和胞内死亡结构域 ( death domain, DD ) 。 月中瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 (tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand, TRAIL) 是死亡受体 DR4和 DR5的天然配体， 其与死 亡受体结合后可以激活细胞凋亡的死亡受体途径和线粒体途径， 从而 诱导细胞发生死亡。 TRAIL对多种肿瘤具有杀伤活性， 而对大多数正 常细胞没有毒副作用。 此外， 感染了人类免疫缺陷病毒 （HIV) 的 T 淋巴细胞对 TRAIL及其受体介导的细胞毒作用敏感性增加。 这些研究 结果表明 TRAIL 及其受体在癌症和艾滋病的治疗方面具有诱人的前 旦 至今发现 TRAIL有 5种天然受体， 分别是 DR4 (死亡受体 4， TRAIL-R1 ) 、 DR5 (死亡受体 5, TRAIL-R2 ) 、 DcRl (诱骗受体 1, TRID, TRAIL-R3 ) 、 DcR2 (诱骗受体 2, TRU DD, TRAIL-R4 )和骨保护素 (osteoprotegerin, OPG) 。 其中 DR4和 DR5 由于含有完整的胞外区
和胞内区结构域， 因此可以传递 TRAIL介导的细胞凋亡信号； 而诱骗 受体 DcRl和 DcR2缺少胞内区或者胞内区结构域不完整，因而不能传 递 TRAIL介导的细胞凋亡信号； OPG是分泌型受体， 具有抑制破骨细 胞和增加骨密度的作用， 在转基因小鼠中表达能使脾肿大， 它能抑制 TRAIL 和死亡受体结合而调节 TRAIL诱导的细胞凋亡， 因此， OPG 是 TRAIL可溶性的"诱骗"受体。总而言之，诱骗受体都可以通过与 DR4 和 DR5竞争性结合 TRAIL, 阻断 TRAIL诱导的细胞凋亡。
研究发现， 在人正常组织和肿瘤组织中均有死亡受体 DR4和 DR5 的表达，在肿瘤组织中往往表达较高。诱骗受体 DcRl多表达于人正常 组织 （其转录本存在于外周血淋巴细胞、 脾、 肺、 胎盘、 骨骼组织、 前列腺、 胸腺、 睾丸、 大肠、 小肠和卵巢中） ， 在外周血淋巴细胞与 脾脏中表达较高， 但在肿瘤细胞和转化细胞中不表达或极低水平表达； DcR2在许多正常组织中均有表达，在胎肝组织和成人睾丸组织表达较 高， 提示 DcR2对这些部位可能有保护作用。 DcR2在绝大多数肿瘤细 胞中不表达。
正是由于死亡受体在正常组织和肿瘤组织分布的不对称性， 使
TRAIL能杀伤许多肿瘤细胞， 而对大多数正常细胞没有毒性， 因此， 使用 TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡， 从而达到特异性治疗肿瘤的目的是当 今生物医学领域的一大热点。 然而随着研究的不断深入， 人们发现一 些肿瘤细胞对 TRAIL诱导的细胞凋亡具有抵抗作用， 但抗死亡受体的 特异性、 激动性抗体则更加特异、 安全， 为肿瘤的治疗带来了新的希 望。
研究表明，抗 DR4或 DR5的单克隆抗体对肿瘤细胞具有强烈的杀 伤作用，但对正常细胞没有毒性。目前文献报道的各种针对 DR4或 DR5 的单克隆抗体或单链抗体，其识别的抗原决定簇多与 DR4或 DR5分子 上的 TRAIL结合位点重合或部分重合， 因此， 这些单克隆抗体大都能 与 TRAIL竞争性地结合死亡受体 DR4或 DR5。
根据文献报道， DR5分子的胞外区有 2个 TRAIL的结合位点（高 亲和力结合位点和低亲和力结合位点） ， 分别位于 2个富含半胱氨酸 的结构域内 （CRD1和 CRD2) 。 中国专利 ZL02104519.4中所公开的 单克隆抗体 AD-10虽也针对 DR5分子的胞外区，但其结合位点与文献
已报道的单克隆抗体均不同， 且 AD-10与 DR5的结合不影响 TRAIL 与 DR5结合， 因而 AD-10和 TRAIL在诱导肿瘤细胞凋亡时具有协同 作用。 发明内容
本发明的第一个目的是提供一条多肽的氨基酸序列或称核心多肽 序列 ODLAP (SEQ ID No: 1)及其衍生物，其与人死亡受体 DR5胞外区 N末端第 8至 12位氨基酸残基具有完全一致的氨基酸序列或其从所述 的氨基酸序列 N端到 C末端依照 DR5的氨基酸序列扩展，扩展后的氨 基酸序列选自如 SEQ ID NOs: 3至 8所示的序列， 而且所述核心多肽 或其衍生物均包含人 DR5分子上的单克隆抗体 AD5-10所识别的抗原 决定簇， 其中 SEQ ID NO: 3-8的序列如下所示：
SEQ ID No: 3 ESALITOODLAP (a.a.1-12) SEQ ID No: 4 ALITQQDLAPQQ (a.a.3-14) SEQ ID No: 5 ITOODLAPOORA (a.a.5-16) SEQ ID No: 6 QQDLAPQQRAAP (a.a.7-18) SEQ ID No: 7 LITQQDLAPQQRA (a.a.4-16) SEQ ID No: 8 ESALITQQDLAPQQRAAP (a.a. l-18)。 本发明的第二个目的是提供一条核心多肽及其衍生物， 其具有包 含上述核心多肽的如 SEQ ID NO : 9 所示的氨基酸序列通式 XiX2X3X4X5DLAX6X7X8X9X10 , 其中：
可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基，
X2可以为除赖氨酸之外的任意氨基酸残基，
可以为任意氨基酸残基，
χ4可以为任意氨基酸残基，
可以为任意氨基酸残基， 可以与 X4相同或不同，
X6可以为除碱性氨基酸和侧链氨基酸之外的任意氨基酸残基， X7可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基，
X8可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基， 可与 X7相 同或不同，
χ9可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基， 以及
X1()可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基。
本发明的第三个目的是提供编码所述核心多肽的核苷酸序列， 其 具有如 SEQ ID No: 2 所示的核苷酸序列， 该序列如下所示： 5'-CA(A/G)GA(T/C)CTNGCNCCN-3'， 其中 N代表 A、 T、 C或 G四 种碱基。
本发明的第四个目的是提供一种诱导肿瘤细胞凋亡的单克隆抗体 的制备方法， 其特征在于包括以下步骤：
1 ) 以 ODLAP作为核心序列， 依照如 SEQ ID No:7所示的序列 LITQQDLAPQQRA合成多肽序列 C LITQQDLAPQQRA,并在 N末端 半胱氨酸残基上偶联钥孔嘁蓝蛋白 （KLH) ， 获得抗原肽；
2) 以所述抗原肽免疫小鼠， 取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP2/0融 合， 制备杂交瘤细胞， 经筛选获得能产生该多肽单克隆抗体的杂交瘤 细胞。
本发明的第五个目的是提供根据本发明第四个目的所述方法产生 的杂交瘤细胞株。 优选地， 所述能产生诱导肿瘤细胞凋亡的单克隆抗 体的杂交瘤细胞株为 Adie-1 和 Adie-2，该 2株杂交瘤细胞株已于 2009 年 3月 20日保存在"中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心" (CGMCC), 分类名称为 BALB/c小鼠杂交瘤细胞， 其编号为分别为 2938和 2939; 更优选地， 所述杂交瘤细胞株 Adie-1和 Adie-2分别产 生单克隆抗体 Adie-1 或 Adie-2。
本发明的第六个目的是提供由本发明第五个目的所述的杂交瘤细 胞株产生的单克隆抗体。优选地，所述单克隆抗体为 Adie-1 或 Adie-2。
本发明第七个目的是上述核心多肽及其衍生物在制备与 DR5结合 的单克隆抗体中的用途。
本发明的第八个目的是上述核心多肽及其衍生物在筛选与 DR5结 合的、 用于肿瘤和 /或艾滋病的治疗的小分子化合物中的用途。
本发明的第九个目的是上述核心多肽及其衍生物在制备肿瘤和 /或 艾滋病预防性疫苗或者治疗性疫苗中的用途。
本发明的第十个目的是提供根据本发明第三个目的所述的核苷酸 序列在制备用于肿瘤和 /或艾滋病的治疗和 /或预防的反义核苷酸和小 分子核糖核苷酸中的用途。
本发明的第十一个目的是提供根据本发明第六个目的所述的单克 隆抗体在制备抗肿瘤和 /或抗艾滋病药物中的用途。
换言之， 本发明涉及多肽的氨基酸序列， 或者称核心多肽序列， 其氨基酸序列为： ODLAP (SEO ID No: 1)。
术语:所述的核心多肽的氨基酸序列是指以 QDLAP (SEQ ID No:
1) 为基础的氨基酸序列。
本发明通过运用定向多肽芯片文库（ Oriented Peptide Array Library, OPAL)技术并在化学合成人死亡受体 DR5 (NCBI Acc #: NP— 671716.1 ) 的 "交叉重叠 (overlapping)"肽库的基础上， 结合分子生物学和细胞生 物学方法而完成。
详述之， 本发明首先利用多肽芯片文库筛选得到一条核心多肽， 该多肽的氨基酸序列与目前已知的人死亡受体 DR5胞外区非 CRD结 构域有 100%的同源性。用含有该序列的多肽制备的单克隆抗体， 具有 诱导肿瘤细胞凋亡的能力， 提示该多肽序列的功能与人死亡受体 DR5 密切相关， 而且 DR5受体的 N末端线性序列可能具有引起 DR5分子 发生构象改变的潜力和募集胞内信号分子的能力。 此外， 进一步的研 究发现小鼠抗人死亡受体 DR5 的单克隆抗体 AD5-10 (中国专利公开 号： CN 1673232A)能够特异性地同该多肽结合， 提示该核心多肽可能 包含 AD5-10识别的抗原决定簇。随后利用分子生物学、细胞生物学以 及定向多肽芯片文库（ Oriented Peptide Array Library, OPAL )技术， 高 通量地验证了该核心多肽序列为 AD5-10 以及由其生成的其它单克隆 抗体所识别的抗原决定簇； 本发明进一步利用多肽合成技术及基因工 程定点突变技术验证该核心多肽确为单克隆抗体 AD5-10 的抗原决定 簇。 随后， 参照 DR5分子的氨基酸序列， 合成含有该核心多肽的抗原 肽免疫小鼠， 取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞融合， 获得杂交瘤细胞， 经筛选后获得一批能产生特异性识别抗原肽（代表性结果见图 1 )并且 具有肿瘤杀伤活性 (代表性结果见图 2)的单克隆抗体的杂交瘤细胞株， 其中 2株杂交瘤细胞株命名为 Adie-1 和 Adie-2。这 2株杂交瘤细胞株 已经于 2009年 3月 20日保存在"中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心" （CGMCC), 分类名称为 BALB/c小鼠杂交瘤细胞， 其编 号为分别为 2938和 2939。 随后应用分子生物学和细胞生物学的方法，
确定 AD5-10 (中国专利公开号： CN 1673232A) 也能够特异性地识别 并结合该段核心序列（代表性结果见图 3 ) 。 由此证明该核心序列中含 有 AD5-10所识别的线性抗原决定簇。在此基础上，通过采用定向多肽 芯片文库 （Oriented Peptide Array Library, OPAL) 技术从 "交叉重叠 (overlapping) "多肽库中筛选得到上述特异性抗原决定簇（代表性结 果见图 4)。根据上述实验结果指导化学合成含有该抗原决定簇的多肽 以及将关键位置氨基酸突变后的突变体多肽， 随后检测其与 AD5-10 的结合情况， 发现含该抗原决定簇的多肽均能结合 AD5-10, 而关键位 置氨基酸突变的突变体多肽不能结合 AD5-10 (代表性结果见图 5 ) 。 最后， 构建表达全长野生型 DR5以及含有上述突变的全长突变体 DR5 的真核表达载体， 随后采用蛋白免疫印迹（Western blotting)技术检测 AD5-10识别并结合抗原决定簇的情况， 发现全长野生型 DR5能识别 AD5-10并结合抗原决定簇， 而含有上述突变的全长突变体 DR5则不 能（代表性结果见图 6) 。根据本发明获得的该核心多肽及其衍生物可 用于研制与 DR5结合的单克隆抗体，用于筛选与 DR5结合的、用于肿 瘤和 /或艾滋病的治疗的小分子化合物，用于制备肿瘤和 /或艾滋病预防 性疫苗或者治疗性疫苗。 编码根据本发明所述的核心多肽及其衍生物 的核苷酸序列可用于制备用于肿瘤和 /或艾滋病的治疗和预防的反义核 苷酸和小分子核糖核苷酸。 根据本发明所述的单克隆抗体也可用于制 备抗肿瘤和 /或抗艾滋病药物。 附图说明
图 1: 显示经 N末端偶联钥孔嘁蓝蛋白 （KLH) 的抗原肽免疫小 鼠得到的单克隆抗体识别并结合抗原肽和 DR5的情况。 A图和 C图显 示产生相应单克隆抗体的杂交瘤细胞培养上清同抗原肽或重组 DR5胞 外区蛋白分子的结合情况。 B图和 D图显示的是单克隆抗体 Adie-Ι 和 Adie-2在不同稀释浓度下同抗原肽或重组 DR5胞外区蛋白分子的结合 情况。
图 2:显示同 TRAIL及 AD5-10相比，单克隆抗体 Adie-1和 Adie-2 针对人结肠癌细胞 HCT116具有肿瘤杀伤活性。 A图显示不同处理组 的细胞在显微镜下（40x ) 的形态学特征。 B图和 C图显示不同处理条
件下， HCT116细胞的细胞活力。
图 3:显示同 TRAIL及 AD5-10相比，单克隆抗体 Adie-1 和 Adie-2 同样具有激活 Jurkat和 HCT116细胞内半胱天冬蛋白酶 （Caspase) 级 联反应的能力。
图 4:显示通过采用定向多肽芯片库（Oriented Peptide Array Library, OPAL) 技术筛选确定 AD5-10能够特异性地识别并结合含有核心多肽 序列的多肽。这些核心多肽衍生序列主要集中分布在 DR5胞外区 N末 端的非富含半胱氨酸结构域 （non-Cysteine-Rich Domain) 。 这些多肽 衍生物的氨基酸序列分别为：
E iiSSAALLIlTIOUOUDDLLAAPP (a.a. 1-12 ) (SEQ ID No: 3 )
ALITQQDLAPQQ (a.a. 3-14) (SEQ ID No: 4)
ITOODLAPOORA (a.a. 5-16) (SEQ ID No: 5 )
QQDLAPQQRAAP (a.a. 1-12) (SEQ ID No: 6)
其中 ALITQQDLAPQQ ( a.a. 3-14 ) ( SEQ ID NO: 4 ) 和 ITQQDLAPQQRA (a.a. 5-16) (SEQ ID NO: 5 ) 与 AD5-10的结合能 力最强（即抗原性最强） 。 由此确定 AD5-10所识别的抗原决定簇的氨 基酸序列为 LITQQDLAPQQRA (a.a.4-16) (SEQ ID No:7)。而 AD5-10 识别的抗原决定簇的最短氨基酸序列为核心多肽 ODLAP ( SEQ ID No: l ) 。 B图显示针对上述抗原决定簇 LITQQDLAPQQRA (a.a.4-16) (SEQ ID No:7)进行丙氨酸突变扫描 (alanine mutation scan) ， 依次将 13 个氨基酸残基替换成丙氨酸 （A) 残基。 发现当抗原决定簇及其多 肽衍生物中紧密相邻的天门冬氨酸 （D) 、 亮氨酸 （L) 和丙氨酸 （A) 突变后，其与 AD5-10结合的能力降低或失去结合能力，证明这 3个氨 基酸残基在该抗原决定簇中起关键作用，且亮氨酸（L)是至关重要的。 同样，上述 3个氨基酸残基中亮氨酸（L)和丙氨酸（A)残基在 Adie-1 和 Adie-2识别并结合抗原肽的过程中扮演着重要角色。 C图显示针对 AD5-10识别的抗原决定簇 LITQQDLAPQQRA( a.a.4-16 )(SEQ ID No:7) 构建突变文库，用 20种常见氨基酸残基对上述多肽序列进行逐一替换。 结果证明 AD5-10识别的抗原决定簇包含一个以下通式（ I )所示的氨 基酸序列：
XiX2X3X4X5DLAX6X7X8X9X10 (SEQ ID NO: 9)
其中，
可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基，
χ2可以为除赖氨酸之外的任意氨基酸残基，
χ3可以为任意氨基酸残基，
χ4可以为任意氨基酸残基，
X5可以为任意氨基酸残基， 可以与 X4相同或不同，
X6可以为除碱性氨基酸和侧链氨基酸之外的任意氨基酸残基， X7可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基，
X8可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基， 可与 X7相 同或不同，
χ9可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基，
X1()可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基。
图 5: 显示含有上述抗原决定簇的合成多肽 （见表 3 ) 与 AD-10 结合，并可阻断其杀伤肿瘤细胞的作用。 A图显示以不同浓度的 AD5-10 和重组可溶性 TRAIL (rsTRAIL) 处理人 T淋巴细胞白血病 Jurkat细 胞 8小时后的细胞存活率； B图显示用 AD5-10 (250 ng/ml)和 7条合 成多肽处理 Jurkat细胞 8小时后的细胞存活率； C图显示 2种不同浓度 的野生型表位 1 (w.t. epitope 1 ) 和野生型表位 2 (w.t. epitope 2) 与 AD5-10结合并阻断其细胞毒作用； D图显示野生型表位 1 (w.t. epitope 1, ΙΟ μΜ) 与 AD5-10结合并阻断其细胞毒作用， 而其相应突变型表位 1 (mutant epitope 1 ) ( 10 μΜ) 则不能与 AD5-10结合； Ε图显示野生 型表位 2 (w.t. epitope 2, 10 μΜ)与 AD5-10结合并阻断其细胞毒作用， 而其相应突变型表位 2 (mutant epitope 2, 10 μΜ) 则不能与 AD5-10结 合。 G图和 Η图显示无论是野生型表位或其突变型表位， 均不能阻断 rsTRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。 I图和 J图显示含有人 DR5胞外区富 含半胱氨酸结构域氨基酸的多肽不能阻断 AD5-10或 rsTRAIL对肿瘤 细胞的杀伤作用。
图 6: 显示 AD5-10能够识别并结合全长野生型 DR5分子， 而不
具体实施方式
实验例 1 酶联免疫分析（ELISA)技术鉴定抗原肽免疫小鼠得到 单克隆抗体识别并结合抗原肽和 DR5的情况
收集不同编号的杂交瘤培养上清或者纯化的抗体， 按照一定稀释 比例稀释后， 进行 ELISA检测。 具体步骤如下：
1 ) 用抗原肽或原核表达的重组 DR5按照 100 ng/well的包被酶标
2) 5% 的 BSA， 37°C条件下封闭 1小时；
3 ) 加入不同浓度的抗体， 37°C条件下孵育 1小时；
4) PBS-T洗 3~5次；
5 ) 加入 HRP标记的山羊抗小鼠 IgG二抗， 37°C条件下孵育 1小 时；
6) PBS-T洗 3~5次；
7)加入显色底物， 待出现显著差异时加入 2 M硫酸终止反应测定 OD值。
实验结果如图 1所示， 图 1A和图 1C表明经 N末端偶联钥孔嘁蓝 蛋白 （KLH) 的抗原肽免疫小鼠， 所产生相应单克隆抗体的杂交瘤细 胞培养上清同抗原肽或重组 DR5胞外区蛋白分子的结合情况。 图 1B 和图 1D显示的是单克隆抗体 Adie-1(克隆编号为 56#：)和 Adie-2(克隆编 号为 64#：)在不同稀释浓度下同抗原肽或重组 DR5胞外区蛋白分子的结 合情况。 实验例 2 TRAIL, AD5-10及单克隆抗体 Adie-1 和 Adie-2针对 人结肠癌细胞 HCT116的肿瘤杀伤活性
用不同浓度的 TRAIL、 AD5-10及单克隆抗体 Adie-1 和 Adie-2处 理 HCT116细胞。 24小时后镜下观察并加入 CCK-8试剂（日本同仁化 学研究所） ， 反应 2小时后测 OD值 （波长 570 nm) 。 将无细胞孔的 OD值设定为 "0" ， 细胞存活率等于处理孔的 OD值与未处理孔 OD 值的比值。
实验结果如图 2所示， HCT116细胞在用 TRAIL (500 ng/ml) 、 AD5-10 (500 ng/ml)及单克隆抗体 Adie-1 (500 ng/ml)和 Adie-2 (500 ng/ml) 处理 8小时后， 在显微镜下可观察到明显的形态学改变和细胞
死亡特征 （A图） 。 图 2B和图 2C显示不同处理条件下， HCT116细 胞的细胞活力随着处理浓度的增加而显著降低。 实验例 3 蛋白免疫印迹（Western blot)技术检测 TRAIL、 AD5-10 及单克隆抗体 Adie-1和 Adie-2激活半胱天冬蛋白酶（Caspase)级联反 应
对数生长期的 Jurkat和 HCT116细胞用 TRAIL (500 ng/ml),AD5-10 (500 ng/ml)及 Adie-1 (1 g/ml) 和 Adie-2 (1 g/ml)处理 0、 30、 60分钟， 收集细胞， 裂解， 进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， 将凝胶上的蛋白转 到 PVDF膜上， 加入特定的抗体进行杂交， 加入相应的辣根过氧化物 酶标记的二抗， 加入发光底物显影。
实验结果如图 3所示， 同 TRAIL及 AD5-10相比， 单克隆抗体 Adie-1 和 Adie-2同样能激活 Jurkat和 HCT116细胞内半胱天冬蛋白酶 (Caspase) 级联反应。 实验例 4 采用定向多肽芯片库 （Oreinted Peptide Array Library, OPAL) 技术筛选鉴定出 AD5-10所识别的抗原决定簇及其衍生物
依照 NCBI 蛋白质数据库提供的人 DR5 ( NCBI Acc#：
NP— 671716.1 )的氨基酸序列，合成一系列含有核心多肽的衍生多肽（表 1和 2所示） 。 随后利用 ASP222 SPOT机器人工作站将上述多肽库均 匀点样于硝酸纤维膜上（一个斑点对应一条多肽，其浓度约为 5 nmol)， 进行相应检测前用茚三酮染色确定蛋白量的均一性。 用 TBS-T溶液配 制的含 3%的 BSA的封闭液室温封闭 1小时， 然后加入相应的特异性 一抗（终浓度 2 g/ml) 4 °C孵育过夜。 随后加入 HRP标记的山羊抗小 鼠多克隆抗体， 室温孵育 2小时后加入发光底物 ECL显影。
表 1 依照人 DR5分子的氨基酸序列构建含有核心多肽的衍生多肽
DLAPQQRAAPQQ; 表 2丙氨酸突变肽库扫描
; 方框框起来的字母表示突变后的氨基酸残基。 实验结果如图 4所示， AD5-10能够特异性的识别并结合含有核心 多肽序列的多肽（图 4A)。这些核心多肽衍生序列主要集中分布在 DR5 胞外区 N末端的非富含半胱氨酸结构域（non-Cysteine-Rich Domain) 。 这些多肽衍生物的氨基酸序列分别为：
ESALITQQDLAP (a.a. 1-12 ) (SEQ ID No: 3 )
ALITOODLAPOO (a.a. 3-14) (SEQ ID No: 4)
ITQQDLAPQQRA (a.a. 5-16) (SEQ ID No: 5 )
OODLAPOORAAP (a.a. 1-12) (SEQ ID No: 6)
其中 ALITOODLAPOO ( a.a. 3-14 ) ( SEQ ID NO: 4 ) 和 ITQQDLAPQQRA (a.a. 5-16) (SEQ ID NO: 5 ) 与 AD5-10的结合能 力最强（即抗原性最强） 。 由此确定 AD5-10所识别的抗原决定簇的氨
基酸序列为 LITQQDLAPQQRA (a.a.4-16) (SEQ ID No:7)。 而 AD5-10 识别的抗原决定簇的最短氨基酸序列为核心多肽 ODLAP ( SEQ ID No: l )。图 4B显示针对上述抗原决定簇 LITQQDLAPQQRA (a.a.4-16) (SEQ ID No:7)进行丙氨酸突变扫描 （alanine mutation scan) ， 依次将
13 个氨基酸残基替换成丙氨酸 （A) 残基。 发现当抗原决定簇及其多 肽衍生物中紧密相邻的天门冬氨酸 （D) 、 亮氨酸 （L) 和丙氨酸 （A) 突变后，其与 AD5-10结合的能力降低或失去结合能力，证明这 3个氨 基酸残基在该抗原决定簇中起关键作用，且亮氨酸（L)是至关重要的。 同样，上述 3个氨基酸残基中亮氨酸（L)和丙氨酸（A)残基在 Adie-1 和 Adie-2识别并结合抗原肽的过程中扮演者重要角色。 C图显示针对 AD5-10识别的抗原决定簇 LITQQDLAPQQRA( a.a.4-16 )(SEQ ID No:7) 构建突变文库，用 20种常见氨基酸残基对上述多肽序列进行逐一替换。 结果证明 AD5-10识别的抗原决定簇包含一个以下通式（ I )所示的氨 基酸序列：
XiX2X3X4X5DLAX6X7X8X9X10 (SEQ ID NO: 9)
其中，
可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基，
X2可以为除赖氨酸之外的任意氨基酸残基，
可以为任意氨基酸残基，
χ4可以为任意氨基酸残基，
可以为任意氨基酸残基， 可以与 X4相同或不同，
X6可以为除碱性氨基酸和侧链氨基酸之外的任意氨基酸残基， X7可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基，
X8可以为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基， 可与 X7相 同或不同，
χ9可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基，
X1()可以存在或不存在， 为任意氨基酸残基。 实验例 5 化学合成含有本发明涉及的抗原决定簇的多肽衍生物 并检测其与 AD-10结合并阻断其肿瘤细胞毒作用的能力
在运用多肽芯片的方法将 AD5-10 所识别的抗原决定簇范围锁定
在氨基酸序列为 "LITQQDLAPQQRA"这一范围内之后， 采用化学合 成法合成该多肽。 同时， 构建野生型序列和含有突变序列多肽衍生物， 从而进一步明确 AD5-10识别的抗原表位。从前面的实验结果中我们可 以得知，第 4位亮氨酸（L)对 AD5-10与 DR5的结合不起作用， 因此， 为了增加合成肽段的水溶性， 我们将其替换为极性不带电荷的氨基酸
(例如谷氨酰胺， Gin) 或丙氨酸 （A) 。 多肽合成的具体信息如表 3 所示：
表 3多肽合成
编号 多肽名称 氨基酸序列 分子量 纯度 (％ )
1 野生型表位 1 AQITQQDLAPQQRA 1566.81 83.9
2 突变型表位 1 AQITQQD0APQQRA 1524.76 98.2
3 野生型表位 2 AITQQDLAPQQRA 1438.75 95
4 突变型表位 2 AITQQ^^PQQRA 1396.71 98.5
5 N1 CPPGHHISEDGRDC 1521.61 99
6 CRD1 GQDYSTHWNDLLFC 2069.91 100
LRC
7 对照序列 SQRLHTPCFNKMEA 1660.78 99.7 其中， 黑体加下划线表示的序列代表抗原决定簇的最核心序列; 方框框起来的字母表示突变后的氨基酸残基。 将处于对数生长期的人淋巴细胞白血病 Jurkat细胞按照每孔 2 X 104个细胞的密度接种于 96 孔细胞培养板中。 随后把合成多肽与 AD5-10按照相应浓度充分混合， 37 °C孵育 1小时后加入到含有肿瘤 细胞的培养孔中处理 8小时。加入 CCK-8试剂（日本同仁化学研究所）， 反应 2小时后测 OD值 （波长 570 nm) 。 将无细胞孔的 OD值设定为 "0 " ， 细胞存活率等于处理孔的 OD值与未处理孔 OD值的比值。
结果如图 5 所示， 图 5A表明以 AD5-10 和重组可溶性 TRAIL (rsTRAIL) 可以以剂量依赖的方式抑制人 T 淋巴细胞白血病 Jurkat 细胞的细胞活力； 图 5B表明， 同 AD5-10 (250 ng/ml) 相比， 7条合 成多肽对 Jurkat细胞的细胞活力没有影响； 图 5C显示 2种不同浓度的 野生型表位 1 (w.t. epitope 1 )和野生型表位 2 (w.t. epitope 2 )与 AD5-10
结合并阻断其细胞毒作用； 图 5D显示野生型表位 1 (w.t. epitope 1, 10 μΜ) 与 AD5-10 结合并阻断其细胞毒作用， 而其相应突变型表位 1 (mutant epitope 1 ) ( 10 μΜ)则不能与 AD5-10结合； 图 5Ε显示野生 型表位 2 (w.t. epitope 2, 10 μΜ)与 AD5-10结合并阻断其细胞毒作用， 而其相应突变型表位 2 (mutant epitope 2, 10 μΜ) 则不能与 AD5-10结 合。 图 5G和图 5Η显示无论是含有抗原决定簇的野生型表位或其突变 型表位， 均不能阻断 rsTRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。 图 51和 5J显 示含有人 DR5 胞外区富含半胱氨酸结构域氨基酸的多肽不能阻断 AD5-10或 rsTRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。 实验例 6 蛋白免疫印迹（Western blot)技术检测 AD5-10与全长 野生型 DR5以及全长突变体 DR5的结合能力
构建表达带有 3 XFLAG标签的全长野生型 DR5以及全长突变体 DR5的真核表达载体， 转染 293T-17细胞。 转染 48小时后收集细胞， 裂解， 进行 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳， 将凝胶上的蛋白转到 PVDF膜 上， 加入特定的抗体进行杂交， 加入相应的辣根过氧化物酶标记的二 抗， 加入发光底物 ECL显影。
结果如图 6所示， AD5-10能够识别并结合全长野生型 DR5分子， 而不能结合其 DR5抗原决定簇的突变体。
1/1
PCT
打印件 (原件为电子形式)
1 下面的说明与本申请说明书中此处提到的
保藏的微生物或其他生物材料相关：
1-1 页码 5
1-2 行号： 29-31
1-3 保藏事项
1-3-1 保藏单位名称 CGMCC 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
1-3-2 保藏单位地址 中国微生物菌种保藏委员会， 中国北京市 2714信箱， 邮 政编码：100080， Be i j i ng (GN)。
1-3-3 保藏日期 2009年 3月 20日 （20. 03. 2009)
1-3-4 保藏号 CGMCC 2938 & 2939
1-5 本说明是对下列指定国
所有指定国 由受理局填写
0-4 本表格与国际申请一起收到：
(是或否）
0-4-1 受权官员 由国际局填写
0-5 国际局收到本表格日期：
0-5-1 受权官员
Claims (1)
- 权利要求书1、 具有如 SEQ ID No: l所示的氨基酸序列的多肽及其衍生物。2、 根据权利要求 1所述的多肽及其衍生物， 其特征为其与人死 亡受体 DR5胞外区 N末端第 8至 12位氨基酸残基具有完全一致的氨 基酸序列。3、 根据权利要求 1所述的多肽及其衍生物， 其特征为其从所述 的氨基酸序列 N端到 C末端依照 DR5的氨基酸序列扩展， 扩展后的 氨基酸序列具有选自如 SEQ ID NOs : 3至 8所示的序列。4、 根据权利要求 1所述的多肽及其衍生物， 其特征为其具有如 SEQ ID NO: 9所示的任何一条多肽的氨基酸序列，其中 SEQ ID NO: 9的序列通式为 且存在或不存在， 为任意氨基酸残基，χ2为除赖氨酸之外的任意氨基酸残基，为任意氨基酸残基，χ4为任意氨基酸残基，Χ5为任意氨基酸残基， 可以与 Χ4相同或不同，Χ6为除碱性氨基酸和侧链氨基酸之外的任意氨基酸残基， Χ7为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基，Χ8为除碱性氨基酸残基之外的任意氨基酸残基，可与 Χ7相同或 不同，Χ9存在或不存在， 为任意氨基酸残基， 以及。存在或不存在， 为任意氨基酸残基。5、 根据权利要求 1所述的多肽及其衍生物， 其特征为其包含人 DR5分子上的单克隆抗体 AD5-10所识别的抗原决定簇。6、 编码如权利要求 1至 5任一项所述的多肽及其衍生物的核苷 酸序列， 其具有如 SEQ ID No:2所示的序列， 其中 N选自 A、 T、 C 或0。7、 如权利要求 1到 5任一项所述的多肽及其衍生物的单克隆抗 体的制备方法， 其特征在于包括以下步骤：1 ) 以 ODLAP作为核心序列， 依照如 SEQ ID No:7所示的序列 LITQQDLAPQQRA合成多肽序列 C LITQQDLAPQQRA, 并在 N末 端半胱氨酸残基上偶联钥孔嘁蓝蛋白， 获得抗原肽；2) 以所述抗原肽免疫小鼠， 取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP2/0 融合，制备杂交瘤细胞，经筛选获得该多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞。8、 根据权利要求 7所述方法获得的杂交瘤细胞株。9、 BALB/c 小鼠杂交瘤细胞株 Adie-1， 其特征在于所述杂交瘤 细胞株已于 2009年 3月 20日在"中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心"（CGMCC) 保藏， 保藏编号为： 2938。10、 BALB/c小鼠杂交瘤细胞株 Adie-2， 其特征在于所述杂交瘤 细胞株已于 2009年 3月 20日在"中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心"（CGMCC) 保藏， 保藏编号为： 2939。11、 根据权利要求 9或 10所述的杂交瘤细胞株， 其特征在于所 述杂交瘤细胞株产生单克隆抗体 Adie-1 或 Adie-2， 该单克隆抗体诱 导半胱天冬蛋白酶依赖的细胞凋亡信号传递途径。12、由权利要求 9或 10所述的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。13、 根据权利要求 12所述的单克隆抗体， 其特征在于所述的单 克隆抗体是单克隆抗体 Adie-1 或 Adie-2。 单克隆抗体中的用途。15、如权利要求 1所述的多肽及其衍生物在筛选与 DR5结合的、 用于肿瘤和 /或艾滋病的治疗的小分子化合物中的用途。16、 如权利要求 1 所述的多肽及其衍生物在制备肿瘤和 /或艾滋 病预防性疫苗和 /或治疗性疫苗中的用途。17、 如权利要求 6所述的核苷酸序列在制备用于肿瘤和 /或艾滋 病的治疗和 /或预防的反义核苷酸和小分子核糖核苷酸中的用途。18、 如权利要求 12所述单克隆抗体在制备抗肿瘤和 /或抗艾滋病 药物中的用途。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2009/071164 WO2010111842A1 (zh) | 2009-04-03 | 2009-04-03 | 抗人死亡受体dr5单克隆抗体ad5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102066403A true CN102066403A (zh) | 2011-05-18 |
| CN102066403B CN102066403B (zh) | 2014-10-08 |
Family
ID=42827474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200980117151.2A Active CN102066403B (zh) | 2009-04-03 | 2009-04-03 | 抗人死亡受体dr5单克隆抗体ad5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8790663B2 (zh) |
| EP (1) | EP2415781A4 (zh) |
| JP (1) | JP2012522492A (zh) |
| CN (1) | CN102066403B (zh) |
| AU (1) | AU2009343398B2 (zh) |
| CA (1) | CA2749512A1 (zh) |
| WO (1) | WO2010111842A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115974976A (zh) * | 2022-11-23 | 2023-04-18 | 华中科技大学 | 拮抗多肽及用于制备抗急性肾损伤药物的应用 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9808480B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-11-07 | Nanocarrier Co., Ltd. | Unit structure-type pharmaceutical composition for nucleic acid delivery |
| WO2019044937A1 (ja) | 2017-08-31 | 2019-03-07 | 国立大学法人 東京大学 | 核酸搭載ユニット型ポリイオンコンプレックス |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1275162A (zh) * | 1997-03-17 | 2000-11-29 | 人类基因组科学公司 | 包含死亡结构域的受体－5 |
| US6313269B1 (en) * | 1997-03-14 | 2001-11-06 | Smithkline Beecham Corporation | Tumor necrosis factor related receptor, TR6 |
| CN1610696A (zh) * | 2001-12-20 | 2005-04-27 | 人体基因组科学有限公司 | 免疫特异性结合trail受体的抗体 |
| CN1635908A (zh) * | 2001-05-25 | 2005-07-06 | 人体基因组科学有限公司 | 免疫特异性结合trail受体的抗体 |
| CN1673232A (zh) * | 2004-08-19 | 2005-09-28 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体dr5单克隆抗体（ad5－10）及其制法与用途 |
| CN101074261A (zh) * | 2006-04-30 | 2007-11-21 | 北京同为时代生物技术有限公司 | Trail受体1和/或trail受体2特异性抗体及其应用 |
| CN101300273A (zh) * | 2005-08-31 | 2008-11-05 | 安姆根有限公司 | Trail受体2多肽和抗体 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0445606B1 (en) * | 1990-02-27 | 1997-01-22 | The Agency of Industrial Science and Technology | Novel oligopeptides, pharmaceutical composition and food containing the same, and use of oligopeptides |
| CN1239516C (zh) | 2002-02-08 | 2006-02-01 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体胞外区突变多肽及其制法与用途 |
| DK1622929T3 (da) * | 2003-05-09 | 2007-02-19 | Genentech Inc | Apo-2L (TRAIL) receptorbindingspeptider og anvendelser deraf |
| PE20071101A1 (es) * | 2005-08-31 | 2007-12-21 | Amgen Inc | Polipeptidos y anticuerpos |
| US8178503B2 (en) * | 2006-03-03 | 2012-05-15 | International Business Machines Corporation | Ribonucleic acid interference molecules and binding sites derived by analyzing intergenic and intronic regions of genomes |
-
2009
- 2009-04-03 JP JP2012502419A patent/JP2012522492A/ja active Pending
- 2009-04-03 AU AU2009343398A patent/AU2009343398B2/en active Active
- 2009-04-03 CA CA2749512A patent/CA2749512A1/en not_active Abandoned
- 2009-04-03 WO PCT/CN2009/071164 patent/WO2010111842A1/zh active Application Filing
- 2009-04-03 EP EP09842499A patent/EP2415781A4/en not_active Withdrawn
- 2009-04-03 CN CN200980117151.2A patent/CN102066403B/zh active Active
- 2009-04-03 US US13/257,156 patent/US8790663B2/en active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6313269B1 (en) * | 1997-03-14 | 2001-11-06 | Smithkline Beecham Corporation | Tumor necrosis factor related receptor, TR6 |
| CN1275162A (zh) * | 1997-03-17 | 2000-11-29 | 人类基因组科学公司 | 包含死亡结构域的受体－5 |
| CN1635908A (zh) * | 2001-05-25 | 2005-07-06 | 人体基因组科学有限公司 | 免疫特异性结合trail受体的抗体 |
| CN1610696A (zh) * | 2001-12-20 | 2005-04-27 | 人体基因组科学有限公司 | 免疫特异性结合trail受体的抗体 |
| CN1673232A (zh) * | 2004-08-19 | 2005-09-28 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 抗人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的受体dr5单克隆抗体（ad5－10）及其制法与用途 |
| CN101300273A (zh) * | 2005-08-31 | 2008-11-05 | 安姆根有限公司 | Trail受体2多肽和抗体 |
| CN101074261A (zh) * | 2006-04-30 | 2007-11-21 | 北京同为时代生物技术有限公司 | Trail受体1和/或trail受体2特异性抗体及其应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115974976A (zh) * | 2022-11-23 | 2023-04-18 | 华中科技大学 | 拮抗多肽及用于制备抗急性肾损伤药物的应用 |
| CN115974976B (zh) * | 2022-11-23 | 2024-06-04 | 华中科技大学 | 拮抗多肽及用于制备抗急性肾损伤药物的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012522492A (ja) | 2012-09-27 |
| AU2009343398A1 (en) | 2010-10-07 |
| EP2415781A4 (en) | 2012-10-17 |
| AU2009343398B2 (en) | 2015-01-29 |
| US8790663B2 (en) | 2014-07-29 |
| EP2415781A1 (en) | 2012-02-08 |
| US20120271034A1 (en) | 2012-10-25 |
| CN102066403B (zh) | 2014-10-08 |
| WO2010111842A1 (zh) | 2010-10-07 |
| CA2749512A1 (en) | 2010-10-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104507968B (zh) | 人cd30配体抗原结合蛋白 | |
| CN102906112B (zh) | Trail r2-特异性多聚体支架 | |
| Meola et al. | Structural flexibility of a conserved antigenic region in hepatitis C virus glycoprotein E2 recognized by broadly neutralizing antibodies | |
| EA026129B1 (ru) | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ БЕЛКИ ЧЕЛОВЕКА, КОТОРЫЕ СВЯЗЫВАЮТСЯ С β-КЛОТО, РЕЦЕПТОРАМИ FGF И ИХ КОМПЛЕКСАМИ | |
| CN102687010B (zh) | 疾病治疗用试剂 | |
| Stricher et al. | Combinatorial optimization of a CD4-mimetic miniprotein and cocrystal structures with HIV-1 gp120 envelope glycoprotein | |
| Wibmer et al. | Common helical V1V2 conformations of HIV-1 Envelope expose the α4β7 binding site on intact virions | |
| JP2012508698A (ja) | 慢性炎症性応答の調節および自己免疫疾患の処置のためのｉｌ−４由来ペプチド | |
| CN110092832A (zh) | 抗ox40抗体及其用途 | |
| Rujas et al. | Structural and thermodynamic basis of epitope binding by neutralizing and nonneutralizing forms of the anti-HIV-1 antibody 4E10 | |
| RU2010152690A (ru) | Белки, связывающие рецептор интерлейкина-21 | |
| CN102066403A (zh) | 抗人死亡受体dr5单克隆抗体ad5-10所识别的抗原决定簇、其衍生物及其用途 | |
| CN109678950A (zh) | spink1抗原、能够特异性结合spink1的抗体及其功能片段及其应用和产品 | |
| Wang et al. | Identification of three conserved linear B cell epitopes on the SARS-CoV-2 spike protein | |
| CN110167959A (zh) | 用于监测对免疫检查点抑制剂pd1和pd-l1的抗体治疗的免疫测定和工程化蛋白 | |
| EP2221314A1 (en) | A soluble tumor necrosis factor receptor mutant | |
| JPS62500032A (ja) | ヘルペスウイルス特異的免疫学的物質および方法 | |
| Tavano et al. | Mapping of the Neisseria meningitidis NadA cell-binding site: relevance of predicted α-helices in the NH2-terminal and dimeric coiled-coil regions | |
| CN101864398B (zh) | 一种抗促性腺激素释放激素受体的单克隆抗体与应用 | |
| CN104045713B (zh) | 一种抗Blys的单克隆抗体及含有该抗体的药物组合物 | |
| WO2022007796A1 (zh) | 共表达IL-21和hrCD16嵌合受体的免疫细胞及其应用 | |
| Chen et al. | Reintroduction of the 2G12 epitope in an HIV-1 clade C gp120 | |
| HUE034297T2 (en) | The peptide domain required for interaction between the HER-W interfering viral envelope and the hASCT receptor | |
| CN107868119A (zh) | 用于抑制cd279相互作用的组合物和方法 | |
| Glögl et al. | Trapping the HIV-1 V3 loop in a helical conformation enables broad neutralization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 201203 China (Shanghai) free trade zone Cailun Road, room 406 No. 781 Patentee after: OBIO TECHNOLOGY (SHANGHAI) Corp.,Ltd. Address before: 201203, 10F, building 1, Heng International Building, 1238 Zhangjiang Road, Shanghai, Pudong New Area Patentee before: Obio Technology (Shanghai) Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20160308 Address after: 201203, 10F, building 1, Heng International Building, 1238 Zhangjiang Road, Shanghai, Pudong New Area Patentee after: Obio Technology (Shanghai) Co.,Ltd. Address before: No. three, No. 5, Dongdan, Beijing, Dongcheng District Patentee before: Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200525 Address after: Room 208, No. 56 Beijing Zhonglu Complex Building, Yantai Economic and Technological Development Zone, Shandong Province Patentee after: Yantai Heyuan Edith Biomedical Technology Co.,Ltd. Address before: Room 406, No. 781, Cailun Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone Patentee before: OBIO TECHNOLOGY (SHANGHAI) Corp.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240119 Address after: No.58, Beijing Middle Road, Yantai Development Zone, Yantai area, China (Shandong) pilot Free Trade Zone, Yantai City, Shandong Province 264006 Patentee after: Rongchang biopharmaceutical (Yantai) Co.,Ltd. Address before: 264006 room 208, complex building, No.56 middle Beijing Road, Yantai Economic and Technological Development Zone, Shandong Province Patentee before: Yantai Heyuan Edith Biomedical Technology Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |