CN102046189A - 通过给予双歧杆菌属细菌减少腹鸣的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通过给予益生菌，优选给予双歧杆菌属细菌来减少受试者腹鸣的方法，根据本发明的一个方面，所述方法是非治疗方法。

Description

通过给予双歧杆菌属细菌减少腹鸣的方法

技术领域

本发明涉及通过给予双歧杆菌属细菌来减少受试者腹鸣的方法，根据本发明的一个方面，所述方法是非治疗方法。

背景技术

白天发生腹鸣对健康个体而言是正常的，其是可听见的肠鸣音(15)。肌肉的蠕动收缩过程会使胃和肠内容物向下移动，从而引起腹鸣。蠕动是消化道肌肉波纹状的运动。在胃中，这种运动使食物与胃液混合并将食物转变成稀的液体。腹鸣，特别是在早晨或进餐后，对许多人来说，每天或者定期都会感到不适，因此人们希望消除或至少减少这种不适。

腹鸣与胃气胀、腹痛或肠胃气胀等其他肠胃症状相似，在肠易激综合征(IBS)中通常发生频率更高，也更严重。

IBS是功能性肠紊乱，其中腹痛或不适与通便或排便习惯的变化有关，并且与脸色和紊乱的通便有关(1)。

因此，需要部分减少或完全减少健康受试者小频率腹鸣的方法，以及部分减少或完全减少更高频率腹鸣的方法。

已显示使用某些含有细菌例如丙酸菌、乳杆菌和/或双歧杆菌的益生菌制剂可以改善某些患者结肠内菌群(8，9，9bis)。而且，在人类和动物模型中，许多益生菌已显示出可改善胃肠的收缩性或过度的胃肠胀气、腹中积气或腹痛(10)。

长期(5个月)随机化双盲安慰剂对照研究显示4种冻干益生菌(鼠李糖乳杆菌GG、鼠李糖乳杆菌LC705、动物双歧杆菌Bb12和费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii ssp.Shermani JS))的混合物具有积极作用(11)。在患有IBS并符合罗马II诊断标准的86例受试者中，此益生菌组合在最后一个月期间减轻了胃肠症状(总体评分降低评估)。但是，对腹鸣没有显示出明显的作用。另一长期(6个月)随机化双盲安慰剂对照研究显示，以胶囊形式给予4种冻干益生菌(鼠李糖乳杆菌GG、鼠李糖乳杆菌LC705、短双歧杆菌Bb99和费氏丙酸杆菌)的混合物具有积极作用(14)。在患有IBS并符合罗马I和II诊断标准的103例受试者中，此益生菌组合在最后一个月期间减轻了胃肠症状(总体评分降低评估)，并且从治疗开始的第4个月起(第4、5、6月)改善了腹鸣。但是在对IBS患者进行研究的前3个月期间，对腹鸣没有显示出明显的作用。

因此，迄今为止，没有研究显示使用益生菌对于尤其是健康受试者的腹鸣具有积极作用，特别是在给予小于3个月的短时间内。

发明内容

意外发现在至少15天内每天给予至少约1x10⁹cfu的选自双歧杆菌属的细菌，可明显减少健康受试者的腹鸣。

因此，本发明一个目的在于减少受试者腹鸣的方法，该方法包括每天给予所述受试者至少约1x10⁹cfu的选自双歧杆菌属的细菌的步骤。更优选地，所述方法用于在给予所述细菌的小于3个月内减少受试者腹鸣。

在本发明优选的实施方式中，所述细菌在至少15天内给予。

术语“腹鸣(borborygmus)”或其复数形式“腹鸣(borborygmi)”意图表示从腹部区域发出的隆隆声，该声音是可听见的肠鸣音(15)。

术语“给予”意图表示“口服给予”，即受试者经口摄入本发明细菌或含有本发明细菌的组合物，或表示“直接给予”，即本发明细菌或本发明的包含细菌的组合物特别是通过结肠镜直接原位给予，或经栓剂直肠给予。

表述“健康受试者”意图表示“未被诊断为患有胃肠紊乱，特别是功能性肠紊乱(例如肠易激综合征)的总人群”。

口服给予包含本发明细菌的组合物可以是明胶胶囊、胶囊、片剂、粉末、颗粒、口服溶液或混悬剂形式。

在本发明优选的实施方式中，所述组合物是食品组合物，其可用于制备EC条例No.258/97所定义的新型食品或食品成分，特别是用于制备功能性食品。如果一种食品被满意地证明除了通常的营养作用外还对有机体中一种或多种目标功能发挥有益的作用，提高健康和幸福感状况和/或降低疾病危险，则这种食品可以认为是功能性食品(12)。

在本发明优选的实施方案中，所述细菌以乳制品的形式给予。具体地，该乳制品是发酵的乳制品，更具体地，该发酵的乳制品是酸奶。

在本发明优选的实施方案中，所述发酵的乳制品或所述酸奶包含保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌，优选包含保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。

在本发明优选的实施方案中，所述发酵的乳制品或所述酸奶不包含鼠李糖乳杆菌和/或费氏丙酸杆菌。

特别地，所述组合物可构成包装的益生菌，例如胶囊形式或明胶胶囊形式。

在本发明另一优选的实施方案中，所述组合物是药物组合物，还可与药用可接受的载体结合，其可包括赋形剂。

术语“药物组合物”意图表示“药”或“OTC非处方药物(Over TheCounter)”。

根据本发明，受试者腹鸣的减少是腹鸣发生频率减少至少约10％，例如约15％、17％或20％。

优选地，受试者腹鸣的减少是腹鸣发生频率减少至少约25％，例如约30％、35％或40％。

更优选地，受试者腹鸣的减少是腹鸣发生频率减少至少约45％，例如约50％、55％或60％。

根据本发明优选的实施方式，受试者在给予细菌15天后腹鸣发生频率减少至少约10％，更优选地，受试者在给予细菌4周后腹鸣发生频率减少至少约20％。

根据本发明，受试者腹鸣的减少是腹鸣发生频率减少至少约20％。

优选地，受试者腹鸣的减少是腹鸣发生频率减少至少约50％。

例如，每天都会发生腹鸣(每天至少一次)的受试者，在每天至少给予约1×10⁹cfu的选自双歧杆菌属的细菌后，优选在给予15天后，每周有2-3天会发生腹鸣(每周有2-3天至少发生一次腹鸣)。

所述细菌选自双歧杆菌属细菌，其被认为是益生菌。

术语“益生菌”意指含有潜在有益的细菌或酵母的膳食补充剂。根据目前由FAO/WHO采用的定义，益生菌是：“活的微生物，当适量给予时授予宿主健康上的益处”。乳酸菌是所用微生物类中最常用的类型。由于乳酸菌能将糖(包括乳糖)和其他碳水化合物转化成乳酸，其已用于食品工业许多年。其不仅提供发酵乳制品如酸奶特有的酸味，而且通过降低pH值可提供较少的腐败生物生长的机会，因此创造大量健康的有益于防止肠胃感染的条件。乳酸杆菌属和双歧杆菌属的菌株是应用最为广泛的益生菌。

益生菌培养物旨在帮助身体自然存在的肠道菌群以重建这些菌群。在使用一个疗程的抗生素后或作为治疗肠道有关念珠菌病的一部分，医生和(更常见是)营养学家有时推荐它们。提出益生菌增强免疫系统以对抗过敏症以及其他免疫疾病。

细菌优选选自：动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalissubspecies lactis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)和乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)。

更优选地，本发明细菌选自动物双歧杆菌乳亚种。

且欧洲专利EP1297176保护了其作为肠细胞表面糖基化调节剂的用途。

根据新的生物分类学，现在该菌种归类为动物双歧杆菌乳亚种(16)，通常称之为乳双歧杆菌(B.lactis)。

在本发明优选的实施方案中，每天给予受试者约1×10¹⁰cfu的细菌，至少给予15天，优选至少给予28天，更优选至少给予4周。

更优选的是，每天两次给予受试者约1.25×10¹⁰cfu的细菌，至少给予15天，优选至少给予28天，更优选至少给予4周。

根据本发明，受试者可以是儿童、成年人或老年人，优选是成人。

在本发明优选的实施方案中，受试者为女性。

事实上，已经显示女性受试者更容易患上肠易激综合征(1，13)。

在优选的实施方案中，受试者患有腹鸣。

根据本发明的一种实施方案，该方法是非治疗方法。

所述非治疗方法的目的在于减少健康受试者人群的腹鸣，特别是进餐后腹鸣。优选地，所述非治疗方法用于减少所述受试者的腹鸣频率。

附图说明

图1：腹鸣频率的基线分布：各值表示为各类受试者的百分比(0＝从不；1＝每周1次；2＝每周2至3次；3＝每周4至6次；4＝每周内每天出现)。

图2：ITT人群中腹鸣频率评分的变化。

图3：ITT人群中腹鸣频率评分的相对变化。

具体实施方式

I、材料和方法

I-A研究人群

该项研究是在两个平行的组(测试组(100例患者)和对照组)中进行的单中心、随机化、双盲对照研究。

该研究在患有轻微消化系统症状的197例年龄在18-60岁的健康妇女中进行，这些受试者经诊断未患有胃肠病症，特别是功能性肠疾病，年龄在18-60岁。

纳入标准

自由生活的女性受试者，年龄为18-60岁。

体重指数在18-30之间的受试者，包括端点。

患有评分为8至16的(包括端点)轻微的消化系统症状的受试者，或者患有至少一种根据下述消化系统症状频率筛选问卷的评分为≥4的消化系统症状。

消化系统症状频率筛选问卷：

向受试者提问下列4个问题：

1.在上月，你多久发生一次腹部任何地方的不适或腹痛？

2.在上月，你多久发生一次胃气胀？

3.在上月，你多久发生一次肠胃气胀/排气？

4.在上月，你多久发生一次腹鸣/胃隆隆声？

对于每个问题，受试者可以5个选项回答，对每个选项评分如下：“从不”(评分＝0)，“每月一天”(评分＝1)，“每月2至3天”(评分＝2)，“每周1天”(评分＝3)，“每周多于一天”(评分＝4)以及“每天”(评分＝5)。

如果受试者对于问题1-4的总评分为8-16(包括端点)，或者有至少一种症状(1-4)的评分≥4，则将该受试者纳入该研究。

受试者排便频率为每周排便3至21次(包括端点)。

为获得此排便频率，受试者需回答下列问题：在上月，您平均每周有多少次排便？

对于非绝经妇女：使用避孕方法的受试者。

目前未服用口服避孕药(在研究药物给药前的至少一整个月周期并且继续到研究药物的最后剂量后1个月)的育龄妇女应使用或遵照一种其他医学批准的避孕方法，例如包括但不局限于以下一种：a)宫内避孕器(IUD)；b)双重障碍法，例如避孕套和杀精子药；c)禁欲，在调查者的意见中，其职业或生活方式足以证明在整个研究期间以及之后1个月将维持禁欲。在禁欲的情况下，应在源文件中记录“已经给予受试者适当的忠告”。

受试者已签署了参与该研究的同意书。

受试者经常食用乳制品，并且准备每日食用2份研究产品。

排除标准

受试者经诊断患有肠易激综合征(IBS)或其他功能性肠疾病(便秘、腹泻...)。

受试者经全科医师或胃肠病专家检查，发现有下消化道(结肠和小肠)消化系统症状。

受试者已知患有器官性疾病，包括炎性肠疾病、小肠或结肠良性或恶性肿瘤以及严重的系统性疾病。

受试者已经开具了治疗消化系统病症的药物处方，例如抗痉挛药、泻药和止泻药。

受试者在前4周内服用过抗生素。

在前4周内改变了饮食习惯(例如，开始食用高纤维食品)。

受试者在前4周内接受过全身麻醉。

在研究期间的怀孕受试者或计划怀孕的受试者；哺乳受试者。

受试者已知患有乳糖耐受或免疫缺陷。

受试者已知对产品组分(例如乳蛋白质)过敏。

受试者在上个月内参与了任何其他的临床研究或处于另一临床研究后的排除期(exclusion period)。

受试者处于这样的情况：调查者的意见可能干扰最佳地参与本研究或可能对患者构成特别的风险。

受试者不能理解和/或回答问题。

在整个研究中，除提供的食品，这些受试者不得食用任何益生菌或发酵乳制品。鼓励受试者继续其饮食以及体育锻炼习惯的所有其他方面。

随机化标准

在磨合期(run-in period)，受试者消化系统症状(胃气胀、腹痛/不适、肠胃气胀/排气和腹鸣/胃隆隆声)频率的平均总和评分大于2且小于等于12。

在磨合期，受试者的排便频率为每周排便3至21次(包括端点)。

在磨合期，不得服用抗生素。

I-B 研究进行

磨合期

邀请愿意参加本研究的受试者在临床单位进行第一次访视(包括访视V1)，以核对纳入和排除标准。受试者也必须填写筛选问卷来确定其消化系统症状频率。为纳入该研究，受试者的最小评分必须≥8，或至少一种消化系统症状的评分≥4(阳性筛选问卷)。在此访视期间，调查者已经记录了医疗和手术史，包括并发症和治疗。明确记载目前用于治疗胃肠症状的药物。

满足所有资格标准的受试者进入为期2周的磨合期。

在2周的磨合期期间，为这些受试者提供了受试者日记供受试者每日填写。在整个研究期间，他们还必须接受需遵循的饮食建议，即不得食用其他发酵乳制品或益生菌。在开始食用发酵乳制品之前的磨合期对于收集结果参数的基线数据而言是必要的从而获得消化系统症状的自然变化，并证实受试者具有随机化标准所定义的最小消化系统症状。此期间用于均匀化发酵乳制品和益生菌的饮食食用。

双盲期

在4周的双盲食用产品期间，要求所有的受试者遵循提供的饮食信息。要求受试者每日和每周记录用于测量发酵乳制品的作用的信息。

受试者每天需要记录：

-食用的研究产品的数量

-食用的非授权产品的数量和类型

受试者每周需要记录：

消化系统症状的频率：腹鸣/胃隆隆声

I-C 产品给予说明

产品

测试产品是由Danone销售的发酵乳制品

并且含有活的细菌。其含有特殊的微生物：动物双歧杆菌DN-173 010(每份有1.25x1010个集落形成单位(cfu))，并结合有两种常规的酸奶菌母：嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌(1.2x10⁹cfu/份)。

对照产品是基于牛奶的非发酵乳制品(不含有益生菌)，并且乳糖含量低(＜4g/份)，外观、质感和口味与测试产品相近。

测试和对照产品均未调味。每份测试产品或安慰剂对照产品含有125g。

给予方法

受试者于随机访视的次日早晨开始食用随机化后的研究产品。在整个28天的双盲食用期间(直至第4周结束)，受试者每日根据随机列表食用两份测试或对照产品(除了第一天和最后一天，这两天受试者分别在晚餐和早餐时仅食用一份产品)。产品必须在进餐期间食用，每天两次，优选一次在早餐时一次在晚餐时。在受试者忘记食用产品的情况下，建议他们在下一次进餐时食用该产品。

受试者可以食用含有例如糖、甜果酱、果酱、水果和谷物的产品。这些产品必须在新鲜温度下食用(不能加热)。

研究期间允许与禁止的产品和治疗

在整个研究期间，受试者需遵循饮食建议。受试者应避免摄入任何其他的发酵乳制品，例如酸奶或含有益生菌的制品(例如Yakult，

...)，以及任何非提供的含有益生菌的片剂、丸剂、粉剂或其他的膳食补充剂。可包含和食用所有的奶酪和其他的奶制品。还要求受试者在研究期间避免对其平常的饮食做出任何明显的变化(即不得改变平常摄入的纤维量，不得开始节食减肥等)。

这些饮食建议的目的在于限制在产品作用评估中的混杂因素。

在整个研究期间，除抗生素外，所有的药物均可服用。受试者若服用了抗生素，则必须退出该研究。

在服用了任何药物的情况下，须要求受试者在其实验日志上填写服用药物的名称、剂量和服用日期。建议受试者与调查者或研究护士联系以获得有关待服用药物的建议。

II- 产品作用评价

受试者使用李克特五点量表(5-point Likert scale)自行评价腹鸣/胃隆隆声的频率(在整个研究期间每周评估)。

II-A 作用评价参数的测量、收集和分析

消化系统症状(腹鸣/胃隆隆声)

每周以李克特五点量表对单个消化系统症状(腹鸣/胃隆隆声)的频率进行评价，评分为0(从不)至4(每周每天)。从受试者入选研究至最后一次访视，此评价贯穿整个研究。每次均要求受试者评价前7天内各症状的频率。

从这些信息计算总评分。

选择采用消化系统症状频率代替功能性肠紊乱测试中经常采用的强度/严重度。这样看似更为相关，因为在经诊断未患有胃肠紊乱的总人群中，消化系统症状的强度和严重度较低。

II-B 统计

描述统计

根据所述的变量类型和受试者的数量描述，以及缺失数据(相关的)的数量描述来总结研究参数和共变量(年龄、体重指数、排便频率等)的分布。

以下给出了各种变量类型的描述统计：

-定性数据：数量和频率。

-有序定性数据：中位数、四分位数、出现次数和频率。

-连续数据：数量、平均数、变量的标准偏差(SD)、平均值的标准误(SEM)、范围(最小-最大)、中位数、四分位数和可能的置信区间。

制得的研究参数的汇总表必须覆盖所有的受试者，并且至少覆盖主要作用的水平(产品、时间...)。

统计分析

在食用产品前收集基线数据：

消化系统基线值是基于食用产品前两周的中位值。

对于定性参数，在各测量时间以卡方检验(Chi-2 test)连续性矫正进行组间比较，或者在期望频率的大小与卡方检验假设不符时采用费歇尔精确检验(FISHER exact test)进行组间比较。

对于有序数据，通过广义线性模型，将参数的次序性质纳入考虑范围，从而进行组间比较。对于重复测量，在需要时也可进行混合多级建模和/或广义估计方程分析作为二级分析。

对于定量数据，分析研究参数的分布。在正常情况下，以参数分析进行分析，否则以非参数或无分布分析进行分析。尽管如此，在采用非参数/无分布分析方法之前，尝试进行一些变量变化以找到使用参数测试分析参数的最佳方法。

计划的统计显著性程度

使用5％的双边显著性水平进行了主要效果的统计测试。5％至10％的显著性水平被认为指示了趋势。关于相互作用效果显著性的阈值，推断为显著作用的水平为10％。

如果p值＜0.05，则可估计相互作用因数。

评价标准

主要研究：

～在4周的双盲食用产品期间，比较组间趋势。

次要研究：

～若相关，进行多重比较

～在各个时间对各组进行描述统计

III.结果

基线数据

腹鸣频率的基线分布如图1所示。多于60％的人群的腹鸣频率为每周1次至每周2至3天。

在4周的产品食用期间，腹鸣评分显示出明显的降低(图2，平均减少-0.22，p＜0.05)。在食用产品4周后，观察到腹鸣评分的最大减少(Activia组＝-0.70，对照组＝-0.33；p＜0.05)。

图3显示了腹鸣频率评分的相对变化。在食用产品2周后，观察到11％的降低(Activia组＝-22％，对照组＝-5％)。在食用产品4周后，观察到更大的降低(Activia组＝-22％，对照组＝-9％)。

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Claims (12)

1.在少于3个月内减少受试者腹鸣的方法，包括每天给予所述受试者至少约1×10⁹cfu的细菌的步骤，所述细菌选自双歧杆菌属细菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在至少15天内给予所述细菌。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述受试者腹鸣的减少是腹鸣频率减少至少20％，优选50％。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于所述细菌选自动物双歧杆菌乳亚种。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述细菌是保藏号为CNCM I-2494的动物双歧杆菌乳亚种。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于在至少28天内，每天两次给予受试者约1.25x10¹⁰cfu的所述细菌。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于所述受试者为女性。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于所述细菌以乳制品的形式给予，优选以发酵乳制品的形式给予。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述发酵乳制品包含保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌，优选包含所述的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于所述发酵乳制品是酸奶。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于所述方法是非治疗方法。

12.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于所述受试者为健康受试者。

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