CN102038713A - 蚯蚓干燥粉末的制造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供简便地、能够抑制蚯蚓中含有的酶活性的失活、并使其无害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法为,将活蚯蚓粉碎成为粉碎物,并将其冷冻干燥,其特征在于在110℃以上,低于130℃的温度下对得到的干燥物进行加热处理。上述活蚯蚓优选使用下述的活蚯蚓:在将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来使其与有机酸接触,并尽可能快速地用水稀释并将pH调整到2~5,在该条件下保持3~180分钟后,经水洗后的活蚯蚓。
Description
技术领域
本发明涉及蚯蚓干燥粉末的制造方法,具体来说,本发明涉及能够抑制蚯蚓中含有的酶活性的失活,并且无害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。
背景技术
主要在亚洲各国,自古以来就将蚯蚓用作各种疾病的预防剂、治疗剂,到目前为止已经知道其可以用于膀胱内结石缩小剂以及排出促进剂、黄疸治疗剂、分娩促进剂、补药、育毛剂、强精剂、解热剂、痉挛治疗剂、血液循环促进剂、半身不遂治疗剂、间接镇痛剂、排尿剂、支气管哮喘剂、高血压治疗剂用途。
在将蚯蚓活体作为原料,制备用于口服给药的药剂时,必须除去蚯蚓消化道内残留的消化物、以及附着在表皮的污染物等,到目前为止,已经提出了多种去除上述消化物和污染物的方法。
例如,下述制造用作糖尿病治疗剂、抗高血脂剂或者血压调节剂的蚯蚓干燥粉末的方法(参考专利文献1~4):将蚯蚓活体浸泡在钠盐或者钾盐这样的碱金属盐的水溶液中,使之排泄出消化道内的粪土后,进行湿式粉碎,并将得到的悬浊液进行真空冷冻干燥,到目前为止,还公开了下述制造血栓病患者治疗药物的方法(参考专利文献5)等:将蚯蚓活体在维持于6~26℃的酸水溶液中放置0.1~5小时,将消化道内的粪便除去,而后将其粉碎,并对该粉碎物进行脱气,然后使其边阶段性地升温边进行真空干燥从而制造血栓病患者治疗药物。
另外,本发明的发明人还提出了下述方法(参考专利文献6):通过将蚯蚓放置在由有机酸形成的不适生存条件的环境下,从而使蚯蚓消化道内的内容物排泄出来。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开平1-47718号公报
专利文献2:日本特开平1-47719号公报
专利文献3:日本特开平1-47720号公报
专利文献4:日本特开平1-268639号公报
专利文献5:日本特开平3-72427号公报
专利文献6:日本特开2008-081476号公报
发明内容
发明要解决的问题
但是,通过现有的制造方法制造的蚯蚓粉末,存在下述问题:由于通过真空冷冻等干燥步骤,因此对于蚯蚓中含有的菌的杀菌较不充分。对于该问题,虽然可以通过进行乙醇杀菌等处理来解决,但仍存在劳力和时间以及成本方面的问题,希望能够得到解决。
在此本发明的目的在于提供既简便又能抑制蚯蚓所含的酶活性的失活、同时使其无害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。
本发明人为了解决上述问题进行了专心的研究,结果发现通过将冷冻干燥后的蚯蚓粉末在特定的温度下加热,可以解决上述的问题,从而完成了本发明。
除了一部分耐热菌之外,一般来说酶的耐热性较差是公知常识,虽然实施过加热到80℃左右,但是对于进一步的加热没有进行研究。但是,本发明人在研究蚯蚓粉末的杀菌方法的过程中,着眼于安全且简单的热处理方法,并对最适的加热温度进行了探索。结果发现,即使将蚯蚓粉末加热到比目前方法的温度大幅提高的高温,蚯蚓粉末中所含的酶的活性也得以保持。
即,本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法包括:将活蚯蚓粉碎成粉碎物,并将该粉碎物冷冻干燥,在110℃以上且低于130℃的温度下对得到的干燥物进行加热处理。
在本发明的蚯蚓干燥粉末制造方法中,就上述活蚯蚓而言,可以优选使用经过下述处理步骤的活蚯蚓:将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时,然后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来使其与有机酸接触,并尽可能快速地用水稀释,将pH调整到2~5,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
另外,在本发明的蚯蚓干燥粉末制造方法中,就上述活蚯蚓而言,可以优选使用经过下述处理步骤的活蚯蚓:将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时,然后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来将其浸渍在pH调整为2~5的有机酸中,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
另外,在本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中,就上述活蚯蚓而言,可以优选使用经过下述处理步骤的活蚯蚓:将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时,然后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来将晶体状羟基羧酸粉末撒在蚯蚓上,随后立即加水稀释羟基羧酸,将pH调整为2~5,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
另外,在本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中,优选使用含有微纳米气泡(micronano bubble)的水进行上述水洗。
再者,在本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法中,上述冷冻干燥优选在-18℃~-35℃冷冻20~240小时之后,在真空下进行。
发明效果
根据本发明可以提供既简便又能抑制蚯蚓中所含的酶活性的失活、同时使其无害化的蚯蚓干燥粉末的制造方法。
附图说明
图1为表示实施例1、2以及比较例1的结果的图表。
具体实施方式
以下,针对本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法进行详细地说明。
在本发明中,使用活蚯蚓作为原料,该活蚯蚓可以使用例如下述的蚯蚓:粉正蚓(アカミミズ,Lumbricus rubellus)、陆正蚓(LTミミズ,Lumbricusterrestris)、赤子爱胜蚓(シマミミズ,Eisenia foetida)、背闇异唇蚓(カツシヨクツリミミズ,Allolobophora caliginosa)、八毛枝蚓(ムラサキツリミミズ,Dendrobaena octaedra)、Allolobophora japonica Michaelsen(サクラミミズ)、Drawida hattamimizu Hatai(ハツタミミズ)、背黑蚯蚓(セグロミミズ,Pheretima divergens Michaelsen)、普通蚯蚓(フツウミミズ,Pheretimacommunissima)、田地蚯蚓(ハタケミミズ,Pheretima agrestis)、Pheretimasieboldi Horst(シ一ボルトミミズ)、一纹蚯蚓(ヒトツモンミミズ,Pheretimahilgendorfi)、湖滨蚯蚓(イソミミズ,Pontodrilus matsushimensis Iizuka)、系蚯蚓(イトミミズ,Tubifex hattai Nomura)、Limnodrilus gotoi Hatai(L.SocialisStephenson)(ゴトウイトミミズ(ユリミミズ))等。
就本发明中使用的活蚯蚓而言,对于将其粉碎之前的准备工作,没有特别的限定,但可以列举如下作为优选的准备工作的实例。首先从养殖床上取出活蚯蚓,移动到如面包箱一样的托盘(平箱)中,放置10~50小时,优选放置过夜。此时的容纳量为收纳厚度为30~60mm、优选40~50mm左右的量。在该托盘中,应避免存在泥、砂这样的异物,另外由于蚯蚓是夜行性动物,因此在较暗的地方其生活活动会较为活跃,可能会导致体力的消耗,为此在夜晚应当通过照明培养等方法,以保持明亮的状态。通过这样处置的活蚯蚓,将发挥其自己的防御本能,将消化道内残留的消化物排泄出,该排泄物覆盖其全身,从而防止水分蒸发,以维持其生活环境,因此,如果通过适当的手段反复将覆盖的污染物即排泄物剥离,最终可以将消化道内的消化物以及在表皮上附着的污染物几乎全部除去。就该表皮上附着的污染物的剥离而言,可以通过下述方法进行:例如用无纺布覆盖活蚯蚓,使污染物吸附于无纺布上。
接下来,对于如上除去了污染物的活蚯蚓,优选一下子形成令活蚯蚓不适的生活环境。通过实施了这样的处置之后,活蚯蚓由于自己生存的本能,将放出体液以改善生活环境,因此不仅是消化道内残留的消化物,还可以排泄出成为恶臭原因的氨以及对人体有毒害的含有砷的体液。
作为形成上述不适生活环境的方法,例如可以列举出使活蚯蚓与有机酸相接触的方法。通过与有机酸相接触,可以一下子形成令活蚯蚓不适的生活环境。就与有机酸的接触而言,可以在活蚯蚓上直接撒上有机酸粉末,也可以是撒上较浓的有机酸水溶液。作为此时使用的有机酸,例如有乙酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸等。可以单独使用这些酸,也可以混合2种以上使用。特别优选的有机酸为柠檬酸。在形成这样的不适生活环境时,如果将活蚯蚓长时间与有机酸粉末或较浓的有机酸水溶液相接触,将导致其死亡,生活机能丧失,从而无法将消化道内的消化物排出,因此必须尽可能快速地、通常在30秒以内,优选在20秒以内用水稀释有机酸,将pH调整到2~5的范围。作为稀释该有机酸的水,如果使用下述含有微纳米气泡的水,则因为能够增加蚯蚓体液的排出,故优选。另外,下述方法可以代替上述的与有机酸粉末或较浓的有机酸水溶液相接触之后,尽可能快速地稀释的方法,即预先将有机酸水溶液的pH调整到2~5,并将蚯蚓浸渍于其中,也可以使用含有微纳米气泡的有机酸水溶液。由于活蚯蚓的组织的65%为水分,因此,通过水分保护身体机能作用的时间,在一定程度上是充足的,但如果活蚯蚓死亡,则上述操作将没有任何意义,因此必须慎重地控制在不适生活环境下放置的时间。该时间受到条件的左右,通常优选3~180分钟的范围。需要说明的是,调整pH除了用水进行稀释之外,还可以通过使用碱中和、缓冲液等来进行。如上所述由于使用了有机酸,并且有机酸具有杀菌性,因此可以发挥如上所述的使消化器官内残留的消化物排泄出来的效果,同时还可以得到如下效果:杀死无法通过水洗除去的杂菌。
另外,作为形成上述不适生活环境的方法,也可以列举出使活蚯蚓与羟基羧酸相接触的方法。在该方法中,可以通过任意方法使蚯蚓与羟基羧酸相接触,但优选下述方法:在蚯蚓上撒上晶体状羟基羧酸粉末,随后立即加水稀释羟基羧酸,将pH调整到2~5,并在该条件下保持3~180分钟。如果活蚯蚓长时间与羟基羧酸粉末相接触,将导致其死亡,生活机能丧失,从而无法将消化道内的消化物排出,因此必须尽可能快速地、通常在30秒以内,优选在20秒以内用水稀释羟基羧酸,将pH调整到2~5的范围。需要说明的是,调整pH除了用水进行稀释之外,还可以通过使用碱中和、缓冲溶液等来进行。另外,作为水,如果使用下述含有微纳米气泡的水,则因为能够增加蚯蚓体液的排出,故优选。如果使用这样的羟基羧酸,那么,由于该羟基羧酸是强酸,因此会破坏表皮,并且具有杀菌作用,因此通过一下子形成令活蚯蚓不适的生活环境,活蚯蚓由于自身生存的本能将放出体液以改善生活环境。另外,通过这样的接触处理,可以减少蚯蚓活体内包含的病原性微生物。由于羟基羧酸具有与重金属形成络合物的能力,因此具有下述的优点:其可以与蚯蚓活体内的汞、镉、铅等有毒金属结合,从而将其分泌到体外。在这种情况下使用的晶体状羟基羧酸只要是在使用条件下呈现晶体状态的物质即可,与其羟基数或者羧基数无关。即,可以为以下任意羟基羧酸:单羟基单羧酸、单羟基多羧酸、多羟基单羧酸、多羟基多羧酸。作为这样的羟基羧酸,可以为例如,羟基乙酸、乳酸、β-羟基丙酸、α-羟基正丁酸、β-羟基正丁酸、α-羟基正戊酸、β-羟基正戊酸、苹果酸、α-甲基苹果酸、α-羟基戊二酸、β-羟基戊二酸、柠檬酸等,但从获取方便的角度考虑,优选乳酸、苹果酸、柠檬酸。这些羟基羧酸,可以单独使用,也可以混合2种以上使用。
如上所述实质上完全除去了污染物的蚯蚓活体通过纯水进行清洗,然后,通过粉碎形成液态或糊状粉碎物。该粉碎可以使用均化器、混合机、均质混合器、混砂机(擂潰機)、加压型细胞破坏装置,通常在1~25℃,优选在2~15℃的温度下进行。接下来,将该粉碎物供给至冷冻干燥过程。此时,蚯蚓活体内含有的酶虽然对活细胞没有作用但对死细胞会发生瞬时作用而导致发热、腐败,产生强烈的腐败性气体,因此优选下述步骤:为了防止上述情况将该粉碎物瞬间骤冷到-18℃~-35℃以抑制酶的作用,随后将其冷冻进行冷冻真空干燥。
如上所述,为了在不损害蚯蚓本身的药理作用的情况下将其粉末化,必须迅速地进行冷冻,但另一方面,如果在短时间内使其冻结,与作为蚯蚓糊状物的主要成分的蛋白质一起存在的杂质将形成点状的未冷冻部分,从而导致无法将其分离,因此不优选过于急速的冷冻。因此,优选的冷冻为:在-18℃~-35℃的低温下,需要进行20~240小时,更优选为需要进行50~170小时。
接下来,在冷冻真空干燥时,优选所选择的条件可以将水分和杂质无残留地除去。为此,优选在下述条件下进行:在压力50Pa以下,-60℃~+90℃的温度范围、阶段性的升高温度同时控制时间范围为10~60小时。
例如,将上述粉碎物在-18℃~-35℃的温度下,用20~240小时进行冷冻之后,在下述条件下进行冷冻真空干燥10~60小时,从而可以得到无菌状态的淡黄色的蚯蚓干燥粉末,上述条件为在-60℃~+90℃的温度范围,分成数个阶段进行升温,在压力为25~40Pa的范围,分成数个阶段进行减压。
在本发明中使用的活蚯蚓,在实施了例如上述的处理之后,优选在粉碎之前进行水洗,但作为在这种情况下的水,可以优选使用含有微纳米气泡的水。使用这样的水的优点在于:可以提高清洗效率。在此所谓的微纳米气泡是指直径为0.01~100μm的气泡,气泡可以为空气也可以为氧气。含有微纳米气泡的水,可以通过下述方法来制造:例如,将微小气泡压坏而生成微纳米气泡的方法,使用SPG(Shirasu Porous Grass)膜生成微纳米气泡的方法。作为能够制造含有微米气泡的水的装置,例如可以举出安装有SPGTECHNOLOGY.Co.,Ltd.制造的缝隙式起泡装置的微细气泡产生气体溶解系统。
本发明的蚯蚓干燥粉末的制造方法的特征在于,将活蚯蚓洗净处理并粉碎,然后,进行干燥,将得到的蚯蚓干燥物在110℃以上且低于130℃的温度,优选为115~125℃的条件下进行加热处理。如果加热温度低于110℃时,有时对干燥物的杀菌是不充分的,如果温度在130℃以上,蚯蚓干燥物中含有的酶将失活从而导致活性的降低,因此不优选使用。对于加热方法没有特别的限定,可以列举出:利用热风的方法、使用加热套管的方法、利用安装在塔盘中的加热器进行加热的方法、以及使用定温恒温器的方法。
加热时间优选为30秒~130分钟,更优选为30分钟~90分钟,进一步优选为60分钟~90分钟。如果加热时间过短,则有时会出现杀菌不充分的情况,如果加热时间过长会导致酶活性损失,因此不优选。
实施例
以下,通过实施例对本发明进行更为具体的说明,但本发明并不仅限于下述实施例。
(蚯蚓干燥物的制备)
将放置在明亮场所10~50小时后剥离表皮上附着的污染物的活红蚯蚓30kg,平铺在平皿上并使厚度为约5cm,在其上均匀地撒上250g柠檬酸,然后,用15秒钟加入30L纯水进行稀释。此时在加水之后即刻的pH为2.25,完全稀释之后pH为2.74。这样用水稀释的过程必须迅速地进行,所需时间较长将导致蚯蚓的死亡。
撒上柠檬酸粉末后,由于环境变化急剧,蚯蚓一下子释放出黄色的体液,从而除去了作为恶臭的原因的氨以及对人体有害的重金属、砷、纤维蛋白活性抑制物质。
接下来,从污浊的柠檬酸水溶液中取出活蚯蚓,经水洗后,用均化器在10℃的条件下进行粉碎,从而制备蚯蚓糊状物。接下来,抽滤脱气该粉碎物,在除去了其中含有的气体之后,将其转移到不锈钢制的塔盘上,并瞬间骤冷到-35℃,并在该温度下维持50小时进行缓慢冷冻。
将通过上述方法冷冻的蚯蚓糊状物,在-35℃、压力0Pa的条件下保持2个小时,之后升温到25℃,并在40Pa下干燥10小时,之后在40℃、压力35Pa下干燥14小时,以及随后在65℃、压力35Pa下干燥12小时,最后在温度80℃、压力25Pa的条件下保持6小时,并由此完成了真空冷冻干燥步骤。通过该处理得到了含水量8质量%的淡黄色蚯蚓干燥粉末。
(干燥物的加热处理)
使用RM-50D型加热装置(株式会社大河原制作所制造),对通过上述步骤得到的干燥粉末进行加热处理。加热条件如下:110℃、120℃或者130℃,在达到特定温度之后,每经过15分钟,取出一部分干燥粉末。对于取出的干燥粉末,通过纤维蛋白平板法进行试验,以评价干燥粉末的残留酶活性。首先,向1g干燥粉末中加入20ml生理盐水,在室温、150rpm的条件下振荡1个小时,并在10000rpm,4℃下离心15分钟,将上清作为样品。纤维蛋白平板法为:用10mlBSB(硼-生理食盐水缓冲液(生食緩衝液),pH7.8)溶解纤维蛋白原(Sigma公司制造)并使得终浓度为0.6%,并混合入浓度为5.0U/ml的凝血酶制作纤维蛋白平板,将30μl上述样品加入到纤维蛋白平板上,在37℃,保温培育4个小时后,对生成的纤维蛋白的溶解窗的面积进行测定。得到的结果如下表1所示。需要说明的是,利用纤维蛋白平板法的试验进行了3次,并计算出平均面积。另外,得到的结果如图1所示。
(加热条件)
(实施例1)
栏编号 温度 加热累积时间 特定温度下保持积累时间
110-60-0 110℃ 60分钟 0分钟
110-75-15 110℃ 75分钟 15分钟
110-90-30 110℃ 90分钟 30分钟
110-105-45 110℃ 105分钟 45分钟
110-120-60 110℃ 120分钟 60分钟
110-135-75 110℃ 135分钟 75分钟
110-150-90 110℃ 150分钟 90分钟
(实施例2)
栏编号 温度 加热累积时间 特定温度下保持积累时间
120-40-0 120℃ 40分钟 0分钟
120-55-15 120℃ 55分钟 15分钟
120-70-30 120℃ 70分钟 30分钟
120-85-45 120℃ 85分钟 45分钟
120-100-60 120℃ 100分钟 60分钟
120-115-75 120℃ 115分钟 75分钟
120-130-90 120℃ 130分钟 90分钟
(比较例2)
栏编号 温度 加热累积时间 特定温度下保持积累时间
130-40-0 130℃ 40分钟 0分钟
130-55-15 130℃ 55分钟 15分钟
130-70-30 130℃ 70分钟 30分钟
130-85-45 130℃ 85分钟 45分钟
130-100-60 130℃ 100分钟 60分钟
130-115-75 130℃ 115分钟 75分钟
130-130-90 130℃ 130分钟 90分钟
表1
*对照为没有加热的干燥粉末
如上表1以及图1的图表所示,通过110℃(实施例1)以及120℃(实施例2)的加热,在蚯蚓干燥粉末中含有的酶的活性虽然有一定程度的损失,但仍然残存了充分的活性。与此相对,通过比较达到130℃之前的粉末(130-40-0),与达到130℃,以及保持在130℃(130-55-15以后)的粉末,可以明确得知蚯蚓干燥粉末中所含的酶的活性因在130℃下的加热而急剧失活。
(菌数的测定)
如上所述,就经120℃加热处理的干燥粉末(实施例2-1~2-5),以及,在80℃(比较例2-1)、90℃(比较例2-2)、100℃(比较例2-3)的条件下经加热处理60分钟之后的干燥粉末而言,分别将1g这些干燥粉末溶解在20ml水中,从而得到样品溶液,通过标准琼脂平板培养方法测定一般活菌数量,通过合成酶基质培养基法测定大肠杆菌群落数,通过食品卫生检查指南中所记载的方法(加热条件:煮沸,10分钟)测定耐热菌的数量。得到的结果如下表2所示。
表2
*对照为没有加热的干燥粉末
如上表2的比较例2-1~2-3的结果所示,通过80℃、90℃、100℃的加热处理,虽然可以将大肠杆菌杀灭,但仍然残存了大量的一般活菌、耐热菌。与此相对,由实施例2-1~2-5的结果可知,通过实施120℃加热处理,可以使一般活菌、大肠杆菌、耐热菌全部降低到1000CFU/g以下,杀菌进行得较为充分。
从上述实施例的结果可知,通过本发明的制造方法制造的蚯蚓干燥粉末,与通过以往方法制造的蚯蚓干燥粉末具有同样的酶活性,并且杀菌进行得较为充分。因此,通过本发明的制造方法制造的蚯蚓干燥粉末,与通过以往方法制造的蚯蚓干燥粉末同样,可以作为血压调节剂、抗高血脂剂、糖尿病治疗剂、血栓溶解剂等使用。另外,通过离心来分离由纯水、乙醇对该粉末进行提取处理后的溶液,根据分子量的不同进行分级,可以用作医药品、化妆品、辅助品(サプリメントsupplement)的有效成分。
Claims (6)
1.一种制造蚯蚓干燥粉末的方法,该方法包括,将活蚯蚓进行粉碎,并对得到的粉碎物进行冷冻干燥,将得到的干燥物在110℃以上且低于130℃的温度下进行加热处理。
2.权利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法,其中,所述活蚯蚓经过了下述处理步骤:
将活蚯蚓放置于明亮场所10~50个小时,然后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来使其与有机酸接触,并尽可能快速地用水稀释,将pH调整到2~5,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
3.权利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法,其中,所述活蚯蚓经过了下述处理步骤:
将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时,然后,将附着在体表上的污染物剥离,接下来将其浸渍在pH调整为2~5的有机酸中,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
4.权利要求1所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法,其中,所述活蚯蚓经过了下述处理步骤:
将活蚯蚓放置于明亮场所10~50小时,然后,将附着在表皮上的污染物剥离,接下来将晶体状羟基羧酸粉末撒在其上,随后立即加水稀释羟基羧酸,将pH调整为2~5,在该条件下保持3~180分钟,而后进行水洗。
5.权利要求2~4中任一项所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法,其中,通过含有微纳米气泡的水来进行所述水洗。
6.权利要求1~5中任一项所述的制造蚯蚓干燥粉末的方法,其中,所述冷冻干燥在-18℃~-35℃下冷冻20~240小时后于真空下进行。
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