CN102027132A

CN102027132A - 粪便处理方法及粪便处理容器

Info

Publication number: CN102027132A
Application number: CN2009801168011A
Authority: CN
Inventors: 谷上恭央; 中岛一惠; 芝崎尊己
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2008-05-12
Filing date: 2009-05-07
Publication date: 2011-04-20
Also published as: WO2009139317A1; JP5616786B2; EP2287331A1; US20110060137A1; EP2287331A4; JPWO2009139317A1; US8597954B2

Abstract

本发明提供一种能够以高精度由粪便试样回收核酸的粪便处理方法及处理容器，一种粪便处理容器(1)，其具备粪便采集夹具(100)、悬浮液保持部(110)和处理液保持部(120)，并且由悬浮液(S)和粪便处理液(P)构成的粪便试样调制用溶液分别收纳在悬浮液保持容器(111)和处理液保持容器(121)中，首先，将粪便样品(E)与悬浮液(S)混合而使其悬浮后，通过按压处理液保持容器(121)下部而将阻断物(131)放出到悬浮液保持容器(111)内，将悬浮状态的粪便悬浮液与粪便处理液(P)混合。通过进行悬浮后再进行核酸的稳定化处理，能够以高精度得到未分解的核酸。

Description

粪便处理方法及粪便处理容器

技术领域

本发明涉及用于从粪便中有效地回收核酸的粪便处理方法及粪便处理容器。

本申请要求2008年5月12日在日本申请的日本特愿2008-125143号的优先权，并将其内容援引于此。

背景技术

如今，与欧美同样，日本结肠癌的患者数也在逐年急剧增加，结肠癌已占居癌症死亡率的前几位。其原因认为是日本人的饮食生活转变成欧美型的以肉食为中心。具体而言，每年约6万人左右罹患结肠癌。在按照脏器分类的死亡数方面，结肠癌排在第三位，仅次于胃癌、肺癌，预测今后也会进一步增加。另一方面，结肠癌与其他癌不同，通过在发病初期进行治疗，近100％能够治愈。因此，将结肠癌作为早期癌诊察的对象是非常有意义的，用于早期发现结肠癌的检查方法的研究和开发正在盛行。

作为用于早期发现结肠癌的检查方法，进行的有例如灌肠检查、结肠镜(colonoscopic)检查等。灌肠检查是如下检查：向大肠中注入钡使其附着于大肠的粘膜面，照射X射线拍摄该表面的凹凸，观察大肠的表面。另一方面，结肠镜检查是通过内窥镜直接观察大肠内部的检查。特别是结肠镜检查的灵敏度和特异性高，还具有能够同时切除息肉和早期癌的优点。

然而，这些检查方法存在成本高、给受试者带来的负担大、伴随并发症的风险的问题。例如，灌肠检查中存在X射线暴露和肠梗阻的危险性。另外，结肠镜检查由于将内窥镜直接插入大肠内因此对受试者具有侵入性。进而，需要内窥镜操作熟练，能够检查的设施有限。因此，这些检查方法不适于定期体检等以无症状的普通人为对象的结肠癌检查。

近年来，作为结肠癌的一次筛查方法，正广泛实施一种非侵入性且低成本的粪便潜血检查。粪便潜血检查是调查粪便中所含的红细胞来源的血红蛋白的有无的检查，是间接预测结肠癌的存在的方法。作为粪便潜血检查被广泛利用的主要原因，可列举出：可在常温下进行粪便的采集和保存，不需要冷藏和冷冻等特殊的保存条件；以及，可以在普通家庭简单地进行；操作非常简便。但是，在粪便潜血检查中，存在灵敏度低至25％左右、漏检结肠癌的概率高的问题。进而，阳性命中率也低，粪便潜血检查为阳性的受试者中实际为结肠癌患者的比例为10％以下，包括很多假阳性。因此，强烈期望开发可靠性更高的新型检查方法。

作为适于定期体检等的、非侵入性、简便、且可靠性高的新型检查方法，调查粪便中有无癌细胞或有无癌细胞来源的基因的检查受到瞩目。这些检查方法由于直接调查有无癌细胞或癌细胞来源的基因，因此通常认为，与调查有无产生伴随结肠癌的患病间接产生的消化道出血的粪便潜血检查法相比，该检查方法可靠性更高。

为了以高精度检测粪便中的癌细胞等，有效地回收粪便中的癌细胞来源的核酸很重要。特别是，由于粪便中的癌细胞来源的核酸为微量，且粪便中含有大量消化残留物和细菌，因此核酸非常容易被分解。因此，为了有效地从粪便试样回收核酸、特别是人等哺乳动物细胞来源的核酸，重要的是调制粪便试样以防止粪便中核酸的分解并且能够稳定地保存至检查操作时为止。作为这种粪便试样的粪便处理方法，例如有从采集的粪便中分离从大肠等消化道脱落的癌细胞的方法。通过从粪便中分离癌细胞，可以抑制细菌等来源的蛋白酶、DNase、RNase等分解酶造成的影响。作为从粪便中分离癌细胞的方法，例如公开了一种从粪便中分离细胞的方法，其将粪便冷却至低于其凝胶凝固点(gel freezing point)的温度，维持粪便温度低于凝胶凝固点以使得粪便实质上保持完好的状态的同时采集细胞(例如，参照专利文献1)。另外，公开了以下方法：在通常周围温度下将粪便分散到含有蛋白酶抑制物质、粘液溶解剂和杀菌剂的运输培养基中，然后分离从大肠脱落的细胞(例如，参照专利文献2)。

另一方面，在组织学及细胞学上观察细胞的形态的情况下，为了使采集的细胞形态维持到观察时为止，以往一直实行福尔马林固定、醇固定等多种固定方法。作为应用这些固定方法的方法，公开了使用以下的特殊细胞溶液保存剂作为能够进行哺乳动物细胞试样的长期保存及保存后的细胞观察的保存溶液的试样处理方法(例如，参照专利文献3)。该细胞溶液保存剂含有：足以固定哺乳动物细胞的量的水；能够混合的醇；足以防止溶液中哺乳动物细胞凝集的量的抗凝剂；保存细胞的期间将溶液的pH保持在4～7的范围的缓冲剂。

另外，例如可列举出使用以下的保存溶液的试样处理方法，所述保存溶液不仅能够进行细胞的组织学及细胞学观察、还能够对保存后的细胞中的蛋白质和核酸等进行分子学分析。专利文献4中公开了一种使用普通采集培养基的试样处理方法，所述普通采集培养基含有缓冲成分、至少1种醇成分、固定剂成分、以及抑制由RNA、DNA及蛋白质组成的组中的至少1种物质分解的药剂，专利文献5中公开了一种使用含有5～20％聚乙二醇及80～95％甲醇的非水溶液的试样处理法。

此外，专利文献6中公开了一种试样处理液，其含有：含有用于使阴道拭子中的细菌和病毒的核酸稳定化的醇或酮、并且使蛋白质沉淀或变性的物质；以及促进融合到细胞中的促进物质。

另外，专利文献7中公开了一种粪便处理容器，其为了进行粪便潜血检查，而将采集的0.03g左右的极少量的粪便混合到含有保存液等的悬浮液中并进行悬浮。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表平11-511982号公报

专利文献2：日本特表2004-519202号公报

专利文献3：日本特开2003-153688号公报

专利文献4：日本特表2004-500897号公报

专利文献5：日本特表2005-532824号公报

专利文献6：日本特开2001-128662号公报

专利文献7：日本专利第2668815号说明书

发明内容

发明要解决的问题

然而，在上述专利文献1那样的通过维持低温来处理粪便的粪便处理方法中，需要在采集粪便后立即进行粪便的冷却。因此，在如诊察等那样在家庭中进行粪便采集的情况下，采集后迅速将粪便冷却是非常困难的。另外，为了防止粪便的变质而考虑到将粪便冷冻，但在检查前必须使冷冻的粪便融解。为了尽可能防止粪便试样中核酸的分解等，融解操作优选在短时间内进行，通常在融解前将冷冻的粪便粉碎后使用。

然而，冷冻的粪便由于硬度高而难以粉碎，处理困难。另外，由于粉碎时冷冻片飞散，因此有污染和感染的危险。另外，在专利文献2中公开的添加杀菌剂等的粪便处理方法中，不需要冷却操作，能够在室温下调制和保存粪便试样，但从粪便中分离从大肠脱落的细胞的操作繁杂。进而，杀菌剂等破坏的细菌所产生的核酸分解酶、蛋白水解酶会导致从大肠脱落的细胞及从大肠脱落的细胞来源的核酸等分解。其结果是，结肠癌检测的精度可能降低。此外，由于在细胞存活的状态下对其进行保存，因此还存在如下问题：从大肠脱落的细胞中的基因表达等分子谱(molecular profiling)受到培养基中的抗生素等成分的影响、粪便中的细胞由于经时的劣化和分解等发生变化。

另外，上述专利文献3～5中公开的使用各保存溶液的试样处理方法虽然能够在室温下稳定地保存细胞，但该保存溶液是对于组织、细胞那样的不含杂质的分离后的细胞而使用的，难以直接用于粪便那样的含有多种物质的生物试样。将上述保存溶液用于从粪便分离的从大肠脱落的细胞时，由于粪便中的从大肠脱落的细胞为微量，因此从所分离的细胞中提取足以用于分析的量的核酸很困难。另外，专利文献6中公开的试样处理液主要用于稳定地保存阴道拭子试样中的、主要来源于细菌的核酸。粪便处于大量的细菌、大量的消化残留物和极少量的哺乳动物细胞来源的核酸混合存在的状态。专利文献6中，关于也能够稳定地保存远比细菌微量的哺乳动物细胞来源的核酸的试样处理液未作任何记载。

进而，专利文献7中公开的进行粪便潜血检查的粪便处理容器中，能够处理的粪便量为0.03g左右，很微量，并且容器中收纳的粪便处理液实质上为1种。因此，使用保存液从粪便中回收核酸时，需要向悬浮液中添加保存液，悬浮液中的保存液的作用导致悬浮效率降低，核酸的回收效率也降低，无法以高精度回收核酸。

本发明是鉴于上述问题而进行的，目的在于提供一种能够以高精度回收核酸的粪便处理方法及粪便处理容器。

用于解决问题的方案

为了解决上述问题、达到目的，本发明采用以下手段。

即，

(1)本发明为一种对用于由采集的粪便回收核酸的粪便试样进行调制处理的粪便处理方法，其包括：悬浮步骤，生成由采集的粪便和悬浮液悬浮而成的粪便悬浮液；试样调制步骤，将前述粪便悬浮液与使前述核酸稳定化的粪便处理液混合而调制前述粪便试样。

(2)上述(1)所述的粪便处理方法中使用的前述悬浮液优选为水、生理盐水或缓冲剂。

(3)上述(1)或(2)所述的粪便处理方法中使用的前述粪便处理液优选为水溶性有机溶剂。

(4)上述(3)所述的粪便处理方法中使用的前述水溶性有机溶剂优选为水溶性醇和/或酮类。

(5)上述(3)或(4)所述的粪便处理方法中使用的前述粪便试样优选含有30％以上的前述水溶性有机溶剂。

(6)上述(4)所述的粪便处理方法中使用的前述水溶性醇优选为选自由乙醇、丙醇及甲醇组成的组中的1种以上。

(7)上述(4)所述的粪便处理方法中使用的前述酮类优选为丙酮和/或甲乙酮。

(8)上述(3)所述的粪便处理方法中使用的前述水溶性有机溶剂优选为醛类。

(9)上述(3)或(8)所述的粪便处理方法中使用的前述粪便试样优选含有0.01～30％的前述水溶性有机溶剂。

(10)上述(1)～(9)中任一项所述的粪便处理方法中使用的前述悬浮液和/或粪便处理液优选含有表面活性剂。

(11)上述(1)～(10)中任一项所述的粪便处理方法中使用的前述悬浮液和/或粪便处理液优选含有着色剂。

(12)上述(3)～(9)中任一项所述的粪便处理方法中使用的前述水溶性有机溶剂优选含有有机酸。

(13)上述(3)～(9)中任一项所述的粪便处理方法中使用的前述水溶性有机溶剂优选含有螯合剂、和/或聚阳离子。

(14)本发明为上述的发明中对用于由采集的粪便回收核酸的粪便试样进行调制处理的粪便处理容器，其具备：悬浮液保持部，其用于保持使前述粪便悬浮的悬浮液；导入机构，其用于向前述悬浮液保持部中导入前述粪便；处理液保持部，其用于保持使前述核酸稳定化的粪便处理液；开放机构，其用于使前述悬浮液保持部与前述处理液保持部互相开放。

(15)上述(14)所述的粪便处理容器所具备的前述开放机构优选具备：将前述悬浮液保持部与前述处理液保持部连通的连通孔，和设置在前述连通孔内用于阻断连通的阻断部；前述处理液保持部是伸缩自由的容器，通过压缩该处理液保持容器而使处理液的压力增大，从而解除阻断部的阻断，使前述粪便处理液流入到前述悬浮液侧。

(16)上述(14)或(15)所述的粪便处理容器所具备的前述处理液保持部优选在轴线方向上伸缩自由，使全部粪便处理液流入到前述悬浮液保持部侧。

(17)上述(14)所述的粪便处理容器所具备的前述开放机构优选具备：用于将前述悬浮液保持部与前述处理液保持部之间阻断的阻断部；用于穿透阻断部而使前述悬浮液保持部与前述处理液保持部互相开放的突起部。

(18)上述(14)所述的粪便处理容器所具备的前述开放机构优选具备：用于将前述悬浮液保持部与前述处理液保持部之间阻断的阻断部；用于按压阻断部而使前述悬浮液保持部与前述处理液保持部互相开放的突起部。

(19)上述(14)所述的粪便处理容器所具备的前述处理液保持部优选形成于前述悬浮液保持部内部，并且该悬浮液保持部及该处理液保持部由弹性材料形成，通过来自前述悬浮液保持部及前述处理液保持部的外部的按压使前述处理液保持部断裂，使前述粪便处理液流入到前述悬浮液侧。

(20)上述(14)所述的粪便处理容器所具备的前述处理液保持部优选形成于前述悬浮液保持部内部，并且该悬浮液保持部及该处理液保持部由弹性材料形成，进而，前述处理液保持部的部分的抗拉强度相对于前述悬浮液保持部的抗拉强度较低，通过从前述悬浮液保持部及前述处理液保持部的外部弯折该悬浮液保持部及该处理液保持部，使该处理液保持部的抗拉强度低的部分断裂，使前述粪便处理液流入到前述悬浮液侧。

(21)上述(14)所述的粪便处理容器中，优选至少前述悬浮液保持部和前述处理液保持部为彼此独立的部件，该悬浮液保持部和该处理液保持部能够互相安装。

(22)上述(14)所述的粪便处理容器中使用的前述悬浮液优选为水、生理盐水或缓冲剂。

(23)上述(14)或(22)所述的粪便处理容器中使用的前述粪便处理液优选为水溶性有机溶剂。

(24)上述(23)所述的粪便处理容器中使用的前述水溶性有机溶剂优选为水溶性醇和/或酮类。

(25)上述(23)或(24)所述的粪便处理容器中使用的前述粪便试样优选含有30％以上的前述水溶性有机溶剂。

(26)上述(24)所述的粪便处理容器中使用的前述水溶性醇优选为选自由乙醇、丙醇及甲醇组成的组中的1种以上。

(27)上述(24)所述的粪便处理容器中使用的前述酮类优选为丙酮和/或甲乙酮。

(28)上述(23)所述的粪便处理容器中使用的前述水溶性有机溶剂优选为醛类。

(29)上述(23)或(28)所述的粪便处理容器中使用的前述粪便试样优选含有0.01～30％的前述水溶性有机溶剂。

(30)上述(14)或(22)～(29)中任一项所述的粪便处理容器中使用的前述悬浮液和/或粪便处理液优选含有表面活性剂。

(31)上述(14)或(22)～(30)中任一项所述的粪便处理容器中使用的前述悬浮液和/或粪便处理液优选含有着色剂。

(32)上述(23)～(29)中任一项所述的粪便处理容器中使用的前述水溶性有机溶剂优选含有有机酸。

(33)上述(23)～(29)中任一项所述的粪便处理容器中使用的前述水溶性有机溶剂优选含有螯合剂和/或聚阳离子。

发明的效果

根据本发明，由于使粪便与悬浮液混合而使其悬浮后，再与粪便处理液混合，因此可发挥通过悬浮效率的提高而使核酸的回收效率和回收精度提高的效果。

附图说明

图1是表示实施方式1所述的粪便处理容器1的示意图。

图2是表示实施方式1所述的粪便处理容器1的示意图。

图3是通过电泳法确认使用悬浮液回收的RNA(A)和不使用悬浮液回收的RNA(B)的图。

图4是表示实施方式2所述的粪便处理容器2的示意图。

图5是表示实施方式2所述的粪便处理容器2的变形例1即粪便处理容器3的示意图。

图6是表示实施方式2所述的粪便处理容器2的变形例2即粪便处理容器4的示意图。

图7是表示实施方式3所述的粪便处理容器5的示意图。

图8是表示实施方式3所述的粪便处理容器5的示意图。

图9是表示实施方式3所述的粪便处理容器5的变形例即粪便处理容器6的示意图。

图10是表示实施方式3所述的粪便处理容器5的变形例即粪便处理容器6的示意图。

图11是表示实施方式4所述的粪便处理容器7的示意图。

附图标记说明

1～7：粪便处理容器

100、200、300、400、500、600、700：粪便采集夹具

101、201、301、401、501、601、701：盖

102、203、403、502、602粪便采集棒

110、210、310、410、510、610、700：悬浮液保持部

111、211、311、411、511、611、701：悬浮液保持容器

112、414、512、612：滑块

120、220、320、420、720：处理液保持部

121、221、321、421、521、621、721：处理液保持容器

122、322：阻断物支撑部

131、331、431：阻断物

202、302、402：活塞

212、312、412、711：突起部

213、313、413、713：连通孔

222、722：阻断膜

415：样品裁断部

710：连结部

712：接合部

E：粪便样品

P：粪便处理液

S：悬浮液

具体实施方式

以下，参照附图对本发明的实施方式的粪便处理方法及粪便处理容器进行说明。另外，本发明并不限定于各实施方式。另外，附图的记载中，同一部分带有相同的附图标记。

(实施方式1)

图1是表示本发明的实施方式1所述的粪便处理容器1的概要结构示意图。该粪便处理容器1具备粪便采集夹具100、悬浮液保持部110和处理液保持部120。这些部件分别以密闭的状态存在于粪便处理容器1中，并能够分别装卸。另外，构成粪便试样调制用溶液的悬浮液S和粪便处理液P分别收纳在悬浮液保持容器111和处理液保持容器121中。

在图1所示的粪便处理容器1中，收纳在悬浮液保持容器111中的悬浮液S的液面的高度优选高于由粪便采集棒102采集的粪便样品E的高度。另外，可以设置配合液面的高度的用于防止漏液的阀等。另外，悬浮液保持容器111中设置有滑块112，将盖101与悬浮液保持容器111接合时，通过滑块112将粪便采集棒102上附着的多余的粪便擦掉从而使粪便样品E的量为一定量。另外，本实施方式中，用于将粪便样品E导入到悬浮液保持容器111中的盖101及粪便采集棒102称为导入机构。通过粪便采集棒102采集粪便样品E后，使盖101与悬浮液保持容器111接合，将调整至一定量的粪便样品E与悬浮液S混合而使其悬浮，从而生成粪便悬浮液。

接着，将悬浮液保持容器111内的悬浮状态的粪便悬浮液与粪便处理液P混合。如图2所示，通过按压处理液保持容器121的下部，从而使处理液保持容器121内部的体积减少，同时处理液保持容器121的内部压力上升。此时，阻断物131从阻断物支撑部122被放出到悬浮液保持容器111内，将粪便悬浮液和粪便处理液P混合。另外，本实施方式中，以阻断物131和阻断物支撑部122作为开放机构。该混合液成为用于从粪便回收核酸的粪便试样。另外，处理液保持容器121优选由铝箔等金属箔、橡胶或塑料材质形成。另外，处理液保持容器121下部能够伸缩至处理液保持容器121上部为止，能够使全部粪便处理液流入到悬浮液保持容器111内。进而，通过反复进行处理液保持容器121的伸缩，能够有效地进行粪便悬浮液与粪便处理液P的混合。

本发明的粪便处理方法中使用的悬浮液S没有特别限定，可列举出生理盐水、水、2-吗啉代乙烷磺酸(MES)缓冲剂、双(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(Bis-Tris)缓冲剂、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)缓冲剂、N-(2-乙酰胺)亚氨基二醋酸(ADA)缓冲剂、哌嗪-N，N’-双(2-乙烷磺酸)(PIPES)缓冲剂、2-[N-(2-乙酰胺)氨基]乙烷磺酸(ACE S)缓冲剂、3-吗啉代-2-羟基丙烷磺酸(MOPSO)缓冲剂、2-[N，N-双(2-羟乙基)氨基]乙烷磺酸(BES)缓冲剂、3-吗啉代丙烷磺酸(MOPS)缓冲剂、2-{N-[三(羟甲基)甲基]氨基}乙烷磺酸(TES)缓冲剂、N-(2-羟乙基)-N’-(2-磺乙基)哌嗪(HEPES)缓冲剂、3-[N，N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙烷磺酸(DIPSO)缓冲剂、2-羟基-3-{[N-三(羟甲基)甲基]氨基}丙烷磺酸(TAPSO)缓冲剂、哌嗪-N，N’-双(2-羟基丙烷-3-磺酸)(POPSO)缓冲剂、N-(2-羟乙基)-N’-(2-羟基-3-磺丙基)哌嗪(HEPPSO)缓冲剂、N-(2-羟乙基)-N’-(3-磺丙基)哌嗪(EPP S)缓冲剂、Tricine[N-三(羟甲基)甲基甘氨酸]缓冲剂、Bicine[N，N-双(2-羟乙基)甘氨酸]缓冲剂、3-[N-三(羟甲基)甲基]氨基丙烷磺酸(TAPS)缓冲剂、2-(N-环己基氨基)乙烷磺酸(CHES)缓冲剂、3-(N-环己基氨基)-2-羟基丙烷磺酸(CAPSO)缓冲剂、3-(N-环己基氨基)丙烷磺酸(CAPS)缓冲剂等。

另外，粪便处理液P含有具有使核酸稳定的作用的水溶性有机溶剂。粪便处理液P中所含的水溶性有机溶剂只要是能够发挥核酸稳定化效果的化合物，则没有特别限定，但需要注意的是不要与粪便悬浮液反应而损害核酸稳定效果。作为水溶性有机溶剂，例如有醇、酮类、醛类等。作为酮类，有丙酮、甲乙酮等，作为醛类，可列举出乙醛(acetyl aldehyde)、甲醛(福尔马林)、戊二醛、低聚甲醛、乙二醛(glyoxal)等。作为本发明中使用的水溶性有机溶剂，优选为水溶性醇、丙酮、甲乙酮，更优选为水溶性醇。另外，从获得容易性、处理性、安全性等方面出发，进一步优选为乙醇、丙醇或甲醇。丙醇可以是正丙醇，也可以是2-丙醇。特别是乙醇由于安全性最高，在家庭内也容易处理，因此在定期体检等筛查中特别有用。

另外，在笔者们的研究中，发现下述方法能够有效地回收粪便中的从大肠脱落的细胞等哺乳动物细胞来源的核酸等。该粪便处理方法是如下方法：使采集的粪便混合到以水溶性有机溶剂作为有效成分的粪便试样调制用溶液中，从粪便与粪便试样调制用溶液混合而成的粪便试样中同时回收常居(indigenous)肠细菌来源的核酸和常居肠细菌以外的生物来源的核酸。

由于粪便处理液P中的水溶性有机溶剂浓度期望是与粪便悬浮液混合后有效的水溶性有机溶剂的浓度，因此需要任意地设定容量、浓度，以达到最适的最终浓度。粪便悬浮液与粪便处理液P混合后的混合液中的水溶性有机溶剂的最终浓度只要是能够发挥核酸稳定化效果的浓度，则没有特别限定，可以考虑水溶性有机溶剂的种类等而适当决定。例如，使用水溶性醇、酮类作为有效成分时，粪便悬浮液与粪便处理液P混合后的混合液中的水溶性有机溶剂的浓度优选为30％以上。随着水溶性有机溶剂的浓度变为高浓度，粪便悬浮液与粪便处理液P混合时，水溶性有机溶剂的成分迅速地渗透到粪便中的哺乳动物细胞等和常居肠细菌中，能够迅速发挥稳定核酸的作用。

特别是，使用水溶性醇作为有效成分时，粪便悬浮液与粪便处理液P混合而成的粪便试样的水溶性醇的浓度优选为30％以上，更优选为50％以上，进一步优选为50～80％，特别优选为60～70％。水溶性有机溶剂浓度越高，对于水分含量多的粪便，也能够通过使用少量的粪便试样调制用溶液，获得将核酸稳定的充分的效果。

另外，使用丙酮、甲乙酮作为有效成分时，粪便试样的丙酮、甲乙酮的浓度优选为30％以上，更优选为60％以上，进一步优选为80％以上。此外，使用乙醛、甲醛、戊二醛、低聚甲醛、乙二醛作为有效成分时，粪便试样中这些有效成分的浓度优选为0.01～30％的范围，更优选为0.03～10％的范围，进一步优选为3～5％的范围。

另外，粪便处理液P中使用的水溶性有机溶剂可以仅含有1种水溶性有机溶剂，也可以是2种以上的水溶性有机溶剂的混合溶液。例如，可以是2种以上醇的混合溶液，也可以是醇与其他种类的水溶性有机溶剂的混合溶液。为了进一步改善核酸的回收效率，优选醇与丙酮的混合溶液。

另外，供于本发明的粪便处理方法的粪便只要是动物的粪便，则没有特别限定，优选哺乳动物来源的粪便，更优选人来源的粪便。例如，优选为了定期体检、诊断等而采集的人的粪便，但也可以是家畜、野生动物等的粪便。另外，可以是采集后保存了一定时间的粪便，但优选刚采集后的粪便。进而，采集的粪便优选刚排泄后的粪便，但也可以是排泄后经过一段时间的粪便。

另外，粪便样品量没有特别限定，优选为0.05～1g的范围。进而，为了提高核酸回收的效果，粪便样品量特别优选在0.1～1g的范围。如果粪便样品量过多的话，则采集操作费事，粪便采集容器也变大，因此处理性等可能降低。相反，粪便样品量过于少量时，粪便中所含的从大肠脱落的细胞等哺乳动物细胞数量过少，因此无法回收所需的核酸量，目标核酸分析的精度可能降低。另外，由于粪便是不均质的，即各种各样的成分不均匀地存在，因此为了避免哺乳动物细胞的局部的影响，优选在采集粪便时从粪便的不同部位采集。

另外，悬浮液S、粪便处理液P可以含有表面活性剂。作为粪便试样调制用溶液中所含的表面活性剂，优选为非离子性表面活性剂。作为该非离子性表面活性剂，例如有吐温80、CHAPS(3-[3-胆酰胺丙基二甲氨基]-1-丙磺酸内盐)、Triton X-100、吐温20等。离液序列高的(chaotropic)盐、表面活性剂的种类、浓度只要是能够获得稳定核酸的效果的浓度，则没有特别限定，可以考虑粪便量、之后的核酸回收和分析方法等而适当决定。

此外，悬浮液S、粪便处理液P中也可以添加适当着色剂。通过将悬浮液S、粪便处理液P着色，能够获得防止误吞、减轻粪便颜色等效果。作为该着色剂，优选用作食品添加剂的着色料，优选为蓝色、绿色等。例如，可列举出坚牢绿FCF(GreenNo.3)、亮蓝FCF(Blue No.1)、靛蓝胭脂红(Blue No.2)等。另外，可以混合添加多种着色剂，也可以单独添加。

另外，悬浮液S、粪便处理液P也可以含有有机酸。通过添加有机酸，能够将粪便中所含的核酸因分解等导致的损失抑制到最小限度，能够提高该水溶性有机溶剂中核酸的稳定性。作为有机酸，可列举出直链脂肪酸、二羧酸、氨基酸、羟基酸、及芳香族或杂环的多元羧酸、醋酸、己二酸、柠檬酸、乳酸等。

尤其优选直链脂肪酸、二羧酸、羟基酸等，更优选醋酸、己二酸、柠檬酸、乳酸。通过使用己二酸、柠檬酸，能够获得特别优异的核酸高保存效果。此外，醋酸不仅能够获得充分的核酸高保存效果，而且已被广泛使用且经济实惠，因而优选。

另外，悬浮液S、粪便处理液P可以仅含有1种有机酸，也可以含有2种以上的有机酸。另外，添加到本发明的粪便试样调制用溶液中的有机酸的量只要是能够维持该粪便试样调制用溶液为酸性的量，则没有特别限定，可以考虑所添加的有机酸的种类、该粪便试样调制用溶液中的水溶性有机溶剂的种类、浓度等而适当决定。

另外，悬浮液S、粪便处理液P也可以含有螯合剂和/或聚阳离子。通过添加螯合剂和/或聚阳离子，能够除去粪便中所含的干扰核酸分析的物质，以高纯度从粪便中回收核酸。

螯合剂是指形成螯合物的配体及盐。例如，可列举出乙二胺四醋酸(EDTA)、甘氨酸(Bicine)、乙二醇四醋酸(EGTA)等。另外，本发明的粪便试样调制用溶液可以仅含有1种螯合剂，也可以含有2种以上的螯合剂。

所添加的螯合剂的浓度只要是足以除去粪便试样中的干扰物质的浓度，则没有特别限定，可以考虑螯合剂的种类等而适当决定。优选添加各螯合剂，使其在本发明的粪便试样调制用溶液中的最终浓度达到0.1mM～1M的范围。

另外，聚阳离子是指含有阳离子性官能团并具有重复结构的高分子化合物及其盐。作为阳离子，例如有氨基等。具体而言，优选为聚赖氨酸或聚丙烯酰胺，更优选为聚赖氨酸。进而可列举出下述式(1)所示的聚赖氨酸等侧链具有阳离子性官能团的多肽、聚丙烯酰胺等侧链含有阳离子性官能团的单体聚合而获得的聚合物等。另外，这些多肽、聚合物只要分子整体为电阳性即可，无需全部重复单元(氨基酸、单体)的侧链都具有阳离子性官能团，但优选全部重复单元的侧链具有阳离子性官能团。另外，本发明的试样调制用溶液可以仅含有1种聚阳离子，也可以含有2种以上的聚阳离子。

本发明的悬浮液S、粪便处理液P中添加的聚阳离子的浓度只要是能够充分获得降低含核酸试样中所含的干扰物质所致的干扰作用的效果(干扰作用降低效果)的浓度，则没有特别限定，可以考虑聚阳离子的种类、含核酸试样的种类、试样调制用溶液的pH、试样调制用溶液与含核酸试样的混合比等而适当决定。例如，含有聚赖氨酸作为聚阳离子时，试样调制用溶液的聚赖氨酸浓度优选为0.01×10^-3重量％～1.0×10^-3重量％的范围，更优选为0.0125×10^-3重量％～0.8×10^-3重量％的范围，进一步优选为0.05×10^-3重量％～0.4×10^-3重量％的范围。

另外，本发明的悬浮液S、粪便处理液P的pH优选为酸性。这是由于能够更有效地抑制核酸的水解。作为本发明的粪便试样调制用溶液，pH优选为2～6.5的范围，更优选为3～6的范围，进一步优选为4.5～5.5的范围。

另外，优选快速地进行粪便与悬浮液S的混合。通过将粪便样品E与悬浮液S混合而使其悬浮后再与水溶性有机溶剂混合，从而能够迅速地进行水溶性有机溶剂的成分的渗透。其结果是，能够快速地获得核酸稳定化效果。另外，将粪便样品E与悬浮液S混合而使其悬浮时，或者将悬浮液S与粪便处理液P混合时，可以采用物理方法进行混合。例如，可以将粪便处理容器上下颠倒而进行混合，也可以通过旋涡混合器等震荡机进行混合。另外，也可以在混合用颗粒的存在下进行混合。混合用颗粒的种类和材质没有特别限定，可以是由1种材质形成的颗粒，也可以是由2种以上的材质形成的颗粒。作为这样的混合用颗粒，例如有由玻璃、陶瓷、塑料、胶乳、金属等形成的颗粒。此外，混合用颗粒可以为磁性颗粒，也可以为非磁性颗粒。

本发明的粪便处理方法中，特别是以常居肠细菌以外的生物来源的核酸、即与粪便试样中大量含有的常居肠细菌来源的核酸相比仅少量含有的核酸为靶核酸进行分析时，优选使用本发明的粪便试样调制用溶液来调制粪便。排泄后，随着时间的经过粪便中的核酸由于分解等而慢慢损失。因此，靶核酸为粪便中仅少量存在的核酸时，如果使用核酸不断分解的粪便试样进行分析，则无法回收对于分析而言充分的量的靶核酸。另外，即使在刚排泄后的粪便中存在该靶核酸时，核酸不断分解的粪便试样也可能被判断为阴性(粪便中不存在靶核酸)。即，通过使用本发明的粪便试样调制用溶液来调制粪便，从而能够稳定地保存粪便中的核酸，因此即使粪便中仅存在少量的核酸，也能够有效地回收对于分析而言充分的量的靶核酸，能够提高核酸分析的可靠性。

作为上述常居肠细菌以外的生物来源的核酸，例如有癌细胞来源的核酸等哺乳动物细胞来源的核酸、肝炎病毒等感染症的初期或后期的该感染症的致病菌来源的核酸等。此外，也可以是寄生虫来源的核酸。

另外，本发明中，常居肠细菌是粪便中比较大量存在的细菌细胞，意味着通常栖息在人等动物的肠内的常居菌。作为该常居肠细菌，例如有拟杆菌属(Bacteroides)、真杆菌属(Eubacterium)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、梭状芽胞杆菌属(Clostridium)等专性厌氧菌，埃希氏菌属(Escherichia)、肠杆菌属(Enterobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、肠球菌属(Enterococcus)等兼性厌氧菌等。

另外，只要存在充分量的水溶性有机溶剂，则水溶性有机溶剂成分带来的核酸的稳定化效果不会特别地受到温度条件的影响。因此，根据本发明的粪便处理方法，即使在通常进行粪便采集的温度下、即室温下进行粪便的采集时，也能够抑制粪便中的核酸的损失。另外，通过本发明的粪便处理方法调制的粪便试样，即使在室温下进行保存或输送时，也能够稳定地保持粪便试样中的核酸。但是，该粪便试样的保存优选在50℃以下进行。其原因是，通过在高温条件下长期保存，可能会导致该粪便试样中的水溶性有机溶剂的浓度由于挥发等而降低至低于对于发挥核酸稳定化效果而言充分的浓度。

通过本发明的粪便处理方法调制的粪便试样，利用水溶性有机溶剂的脱水作用、蛋白质变性作用，能够更稳定地维持粪便中的核酸、特别是哺乳动物细胞等来源的在粪便中仅以较少量存在的核酸。因此，通过本发明的粪便处理方法调制粪便试样时，不仅刚调制后的粪便试样能够期待获得可靠性高的分析结果，即使使用长期保存后或输送后的粪便试样进行核酸分析时，也能够期待获得可靠性高的分析结果。特别是能够将粪便中所含的从大肠脱落的细胞等哺乳动物细胞的分子谱的经时性(相对于时间的经过)的变化抑制到最小限度，而且能够长期在室温下稳定地保存粪便中的核酸、特别是哺乳动物细胞来源的核酸。因此，通过使用本发明的粪便处理方法来调制采集的粪便，从而即使在像诊察等筛查那样的、从粪便采集后到核酸分析时存在间隔的情况以及粪便采集场所远离核酸分析场所的情况下，也能够在抑制核酸、特别是容易损坏的RNA分解的同时，保存或输送粪便试样。另外，无需设定用于冷藏、冷冻的特别的设备、保存温度条件，能够简便且以低成本保存或输送粪便试样。

本发明的粪便试样与含有核酸的其他生物试样同样能够供于各种核酸分析。特别优选供于强烈期望早期发现的、用于调查有无癌症的发病或罹患感染症的核酸分析。另外，还优选供于用于调查有无结肠炎、肠炎、胃炎、胰腺炎等炎症性疾病的发病的核酸分析。此外，还可以供于息肉等隆起性病变的检查、胃溃疡等各种大肠、小肠、胃、肝脏、胆囊、胆管的疾病的检查。

例如，通过从粪便试样检测并分析癌细胞来源的核酸、即发生突变等的核酸，从而能够检查有无结肠癌、胰腺癌等癌症的发病。另外，通过调查是否从粪便试样中检测到感染症等的原因即病原菌来源的核酸、例如病毒来源的核酸或寄生虫来源的核酸等，能够调查有无感染症的罹患、有无寄生虫的存在。特别是通过利用粪便试样来检测甲型、戊型肝炎病毒等排出到粪便中的病原菌，能够进行非侵入性且简便的感染症检查。此外，通过调查是否检测到常居肠细菌以外的病原细菌、例如肠道出血性大肠杆菌O-157等引起食物中毒的菌类、病原菌来源的核酸，能够调查有无罹患细菌感染症。

特别优选通过核酸分析来检测指示致瘤性转化的标记物、指示炎症性消化器官疾病的标记物。作为该指示致瘤性转化的标记物，例如有癌胚抗原(CEA)、唾液酸Tn抗原(STN)等公知的癌标记物，APC基因、p53基因、K-ras基因等中有无突变等。另外，p16、hMLHI、MGMT、p14、APC、E-cadherin、ESR1、SFRP2等基因的甲基化的检测作为结肠疾病的诊断标记物也是有用的(例如，参照Lind et al.、“A CpG island hypermethylationprofile of primary colorectal carcinomas and colon cancer celllines”、Molecular Cancer、2004年、第3卷第28章)。此外，已经报道了粪便试样中的幽门螺杆菌来源的DNA被用作胃癌标记物(例如参照Nilsson et al.、Journal of Clinical Microbiology、2004年、第42卷第8号、第3781～8页)。另一方面，作为指示炎症性消化道疾病的标记物，例如有Cox-2基因来源的核酸等。

从通过本发明的粪便处理方法调制的粪便试样能够非常有效地回收核酸。因此，该粪便试样不仅非常适合用于粪便中大量存在的常居肠细菌来源的核酸的分析，还非常适合用于微量存在的哺乳动物细胞来源的核酸的分析。特别优选由粪便分析大肠、小肠、胃等消化道细胞来源的核酸，特别优选分析从大肠脱落的细胞来源的核酸。

粪便试样中存在多种多样的物质，也存在很多核酸分析中成为干扰因素的物质。因此，通过从粪便试样回收核酸，并利用回收的核酸进行核酸分析，能够进一步提高分析的精度。从粪便试样回收核酸的方法没有特别限定，只要是从试样回收核酸时通常采用的方法，则可以通过任意方法进行。本发明的粪便试样中，主要含有哺乳动物细胞等常居肠细菌以外的生物(以下，有时称为哺乳动物细胞等。)来源的核酸、和常居肠细菌来源的核酸。从粪便试样回收核酸时，可以分别回收哺乳动物细胞等来源的核酸和常居肠细菌细胞来源的核酸，但特别优选同时回收。通过同时回收哺乳动物细胞等来源的核酸和常居肠细菌来源的核酸，粪便中大量存在的常居肠细菌来源的核酸作为载体发挥功能，结果是，与预先从粪便中分离哺乳动物细胞等后再回收核酸时相比，对于量较少的哺乳动物细胞等来源的核酸能够更有效地回收核酸。另外，从粪便试样回收的核酸可以是DNA，可以是RNA，也可以是DNA和RNA这两者。

通过上述处理得到的粪便试样可以通过公知的方法根据用途进行各种处理。例如，通过在粪便试样中添加离液序列高的盐、有机溶剂、表面活性剂等通常用作蛋白质的变性剂的化合物，能够使粪便试样中的蛋白质变性。离液序列高的盐、表面活性剂可以使用与作为本发明的粪便试样调制用溶液中添加的离液序列高的盐及表面活性剂列举的同样的物质，作为有机溶剂，优选为酚类。酚类可以为中性，也可以为酸性。使用酸性的酚类时，能够将RNA选择性地优先于DNA提取到水层中。另外，在粪便试样中添加离液序列高的盐、有机溶剂、表面活性剂等时，可以添加1种化合物，也可以添加2种以上的化合物。

这里，从粪便处理容器1中取出粪便试样时，也可以取下粪便采集夹具100并安上带过滤器的盖等，从粪便试样中除去大的纤维质等。另外，也可以预先在处理液保持容器121下部设置过滤器，使用片材等作为盖，在使用时将片材揭下从而过滤粪便试样。

另外，也可以在上述蛋白质变性处理后、回收核酸之前除去变性的蛋白质。通过在回收核酸之前预先除去变性了的蛋白质，能够提高所回收的核酸的品质。变性蛋白质的除去可以通过公知的方法进行。例如，通过离心分离，使变性蛋白质沉淀并仅回收上清液，能够除去变性蛋白质。另外，添加氯仿，通过旋涡混合器等充分搅拌混合后进行离心分离，使变性蛋白质沉淀并仅回收上清液，与仅进行离心分离时相比，能够更完全地除去变性蛋白质。

蛋白质变性处理后的核酸的回收可以通过乙醇沉淀法、氯化铯超离心法等公知的方法进行。另外，使蛋白质变性处理中溶出的核酸吸附到无机支撑体上后，将吸附的核酸从无机支撑体上溶出，从而能够回收核酸。吸附核酸的无机支撑体可以使用能够吸附核酸的公知的无机支撑体。另外，无机支撑体的形状也没有特别限定，可以是颗粒状，也可以是膜状。作为无机支撑体，例如，有硅胶、硅基氧化物(siliceous oxide)、玻璃、硅藻土等含二氧化硅的颗粒(珠子)，尼龙、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯、硝基纤维素等的多孔质膜等。使吸附的核酸从无机支撑体溶出的溶剂，可以考虑所要回收的核酸的种类、之后的核酸分析方法等，适当使用通常用于使核酸从这些公知的无机支撑体溶出的溶剂。作为溶出用溶剂，特别优选纯化水。另外，优选使核酸吸附到无机支撑体上后使用适当的洗涤缓冲液对吸附有核酸的无机支撑体进行洗涤。

另外，使用含有用于使核酸从哺乳动物细胞等中溶出的充分浓度的离液序列高的盐、表面活性剂的粪便试样调制用溶液来调制粪便试样时，从粪便试样回收核酸时，也可以省略蛋白质变性处理。

使用不含用于使核酸从哺乳动物细胞等中溶出的充分浓度的离液序列高的盐、表面活性剂的粪便试样调制用溶液来调制粪便试样时，优选在蛋白质变性处理之前从粪便试样中回收固体成分。为了将粪便样品E与粪便试样调制用溶液迅速混合，粪便试样中的液体成分相对于粪便中的固体成分的比率大。因此，通过从粪便试样中除去粪便试样调制用溶液，仅回收含有哺乳动物细胞等和常居肠细菌的固体成分，从而能够减小核酸的回收及分析中试验者的负担、设备等所需要的规模。另外，通过从固体成分中除去水溶性有机溶剂，还能够抑制从固体成分中回收核酸的工序中水溶性有机溶剂的影响。例如，通过将粪便试样离心分离，使固体成分沉淀，并除去上清，从而能够仅回收固体成分。此外，通过用过滤器过滤等，也能够仅回收固体成分。进而，还优选使用PBS(磷酸缓冲生理盐水、pH7.4)等适当的缓冲液对所回收的固体成分进行洗涤。

另外，可以在所回收的固体成分中直接添加离液序列高的盐等蛋白质变性剂，但优选暂时悬浮到适当的溶出用药剂中后再添加蛋白质变性剂。回收DNA时，作为溶出用药剂，例如可以使用磷酸缓冲液、tris缓冲液等。优选通过高压蒸汽灭菌等使DNase失活的药剂，进而更优选含有蛋白酶K等蛋白水解酶的药剂。另一方面，回收RNA时，作为溶出用药剂，例如可以使用柠檬酸缓冲液等，但由于RNA是非常容易分解的物质，因此优选使用含有硫氰酸胍、盐酸胍等RNase抑制剂的缓冲液。

根据之后的分析方法的不同，也可以不从粪便试样中回收核酸。具体而言，可以使核酸从粪便试样中的哺乳动物细胞等和常居肠细菌溶出后，直接用于核酸分析。例如，粪便试样中存在大量病原菌等时，对该病原菌来源的核酸进行分析时，从粪便试样中仅回收固体成分后，在该固体成分中添加并混合含有蛋白酶K等蛋白水解酶的PBS等溶出用药剂。将由此得到的均匀的粪便试样溶液直接用于核酸分析，从而能够检测病原菌来源的基因等。此外，从粪便试样中回收核酸也可以使用核酸提取试剂盒、病毒检测试剂盒等市售的试剂盒。

从粪便试样中回收的核酸可以采用公知的核酸分析方法进行分析。作为核酸分析方法，例如有对核酸进行定量的方法、使用PCR等检测特定碱基序列区域的方法等。此外，回收RNA时，通过逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR：Reversetranscriptase-polymerase chain reaction)合成cDNA后，使用该cDNA，可以与DNA同样地用于分析。例如，通过检测编码癌基因等的碱基序列区域、含有小随体(microsatellite)的碱基序列区域等有无基因突变，能够调查有无癌症的发病。使用从粪便试样中回收的DNA时，例如可以检测DNA上的甲基化、碱基的插入、缺失、置换、重复、或倒置等突变。另外，使用回收的RNA时，例如可以检测RNA上的碱基的插入、缺失、置换、重复、倒置、或剪接变体(isoforms)等突变。另外，还可以检测RNA表达量。特别优选进行mRNA的表达分析、K-ras基因的突变分析、及DNA的甲基化的分析等。另外，这些分析可以通过该领域中公知的方法进行。另外，也可以使用K-ras基因突变分析试剂盒、甲基化检测试剂盒等市售的分析试剂盒。

图3是比较从使用悬浮液S处理粪便样品E得到的粪便试样中回收的RNA、和从未使用悬浮液S处理粪便样品E得到的粪便试样中回收的RNA的电泳图。

试样A：将粪便与4ml的PBS混合并震荡10秒钟使其悬浮后，添加6ml的100％乙醇，震荡10秒钟后，通过公知的技术提取RNA得到的样品。试样B：在粪便中添加10ml的70％乙醇并震荡20秒钟后，通过公知的技术提取RNA得到的试样。用于两种试样的粪便是在粪便采集后1小时以内用粪便采集夹具从该粪便中各采集1g而得到的。另外，所调制的试样A、B的最终的乙醇的浓度相等。

将通过上述粪便处理方法调制的试样A、B在室温下放置24小时后进行RNA提取。RNA的回收具体而言如下进行。首先，将试样A、B的各管离心分离，在除去上清而得到的固体成分中添加3mL的酚类混合物“ISOGEN”(Nippon Gene Co.，Ltd.制造)并用均化器充分混合30秒以上。此后，向试样A、B的各管中添加3mL的氯仿，利用旋涡混合器充分混合后，以12000×g、4℃进行20分钟离心分离处理。将试样A、B各管中通过离心分离处理得到的上清(水层)通入RNeasy midi kit(Qiagen公司制造)的RNA回收用柱中，根据该试剂盒提供的操作规程进行RNA回收用柱的洗涤操作及RNA溶出操作，从而回收试样A、B来源的RNA。

然后，对于试样A、B中回收的RNA在RNA6000 Nano测定试剂盒(Agilent公司)中应用电泳，通过Agilent 2100 bioanalyzer(Agilent公司制造)检测由试样A、B回收的各RNA(步骤参照试剂盒中附录的手册)。图3的标记物是指示25nt～4000nt的各核苷酸数的标准试样，用作构成试样的DNA或RNA的构成单元的基准。

对图3中试样A、B的条带图案进行比较的结果如下。在试样A的条带图案中，在箭头L所示的3000nt附近和箭头M所示的1500nt附近分别确认到深的条带。在试样B的条带图案中，达到只是在箭头L、M附近可确认出些许条带的程度。该方法中，由于条带的浓淡与浓度成比例，因此表现为箭头L、M附近的试样A的RNA的浓度(即试样A的RNA的回收量)大大高于试样B的RNA的浓度(即试样B的RNA的回收量)。这里，箭头L表示23S的品质良好的细菌来源的RNA的条带，箭头M表示16S的品质良好的细菌来源的RNA的条带。提高该23S、16SRNA的回收量还与分析精度的提高有关。另外，25nt～500nt中试样B的RNA的回收量整体上变浓。这表示原本在箭头L、M附近出现的RNA分解。该结果表示，通过在用粪便处理液处理粪便之前用悬浮液S处理粪便，能够以高精度回收没有分解的RNA。

这里，在以往的粪便处理方法、例如维持低温进行核酸的回收的方法中，温度条件的设定很重要，在添加杀菌剂等的方法中存在从粪便分离从大肠脱落的细胞的操作繁杂等问题。另外，使用保存溶液的方法基本上仅对于分离出的细胞有效，直接用于粪便那样含有多种物质的生物试样的话，则难以处理，且回收效率也低。在以往的粪便处理容器中，能够在容器内悬浮，但需要将处理液等也添加到悬浮液S中，因此存在核酸的回收效率降低的问题。

与此相对，实施方式1所述的粪便处理方法及粪便处理容器，通过预先将粪便采集到收纳有本发明的粪便试样调制用的溶液的粪便采集容器中，能够简便地由采集的粪便调制粪便试样，且能够以高精度进行核酸的回收。另外，能够在常温下进行处理，通过使用悬浮液将粪便悬浮后，通过粪便处理液使试样中的核酸处于稳定的状态，能够进行之后的各种处理。另外，本发明的处理容器的操作性(使用方法)也简易，能够在家庭中使用。进而，本发明的处理容器中将悬浮液和粪便处理液分别收纳，因此能够选择性地收纳各溶液，在进行各种处理时有用。

(实施方式2)

图4是表示本发明的实施方式2所述的粪便处理容器2的概要结构示意图。该粪便处理容器2具备粪便采集夹具200、悬浮液保持部210和处理液保持部220，分别以密闭的状态存在于粪便处理容器2中，能够分别装卸。另外，构成粪便试样调制用的溶液的悬浮液S和粪便处理液P分别收纳在悬浮液保持容器211和处理液保持容器221中。

图4中，通过粪便采集夹具200的粪便采集棒203采集粪便。粪便采集棒内部嵌入有活塞202，通过调节该活塞202，能够使(调整)粪便采集量为一定量。通过粪便采集棒203采集粪便后，将盖201与悬浮液保持容器211接合并按压活塞202，粪便样品E被挤出，与悬浮液S混合并被悬浮，得到粪便悬浮液。另外，本实施方式中，将用于将粪便样品E导入到悬浮液保持容器211中的盖201、粪便采集棒203和活塞202一并称为导入机构。然后，如果将悬浮液保持容器211压入到处理液保持容器221中，则突起部212的突起穿透用于阻断处理液保持容器221的阻断膜222，阻断膜222破裂，粪便处理液P与粪便悬浮液混合。另外，本实施方式中，将突起部212和阻断膜222称为开放机构。粪便处理液P和粪便悬浮液能够通过突起部212周围的连通孔213而流通，通过使粪便处理容器2上下翻转，能够容易地混合。与实施方式1同样地，用于取出粪便试样的机构可以将盖201更换成具有过滤器的盖进行过滤，也可以在处理液保持容器221下部形成过滤器。

这里，参照图5对图4所示的粪便处理容器2的变形例1即粪便处理容器3进行说明。粪便处理容器3与粪便处理容器2同样由粪便采集夹具300、悬浮液保持部310和处理液保持部320构成。进而，粪便采集夹具300中设置有活塞302，悬浮液S被收纳在悬浮液保持容器311中，粪便处理液P被收纳在处理液保持容器321中。另外，本实施方式中，用于将粪便样品E导入到悬浮液保持容器311中的包括盖301、粪便采集夹具300和活塞302的部件称为导入机构。粪便处理容器3中，球状的阻断物331保持在阻断物支撑部322中，以防止粪便处理液P流入到悬浮液S中。通过突起部312将球状的阻断物331压入到处理液保持容器321内，使得粪便悬浮液和粪便处理液P彼此通过连通孔313而混合。另外，本实施方式中，将包括阻断物331、阻断物支撑部322和突起部312的部件称为开放机构。

另外，参照图6对粪便处理容器2的变形例2即粪便处理容器4进行说明。图6所示的粪便处理容器4由粪便采集夹具400、悬浮液保持部410和处理液保持部420构成，悬浮液S被收纳在悬浮液保持容器411中，粪便处理液P被收纳在处理液保持容器421。进而，悬浮液保持部410具备突起部412及用于将附着在粪便采集棒403上的多余的粪便擦掉的滑块414，滑块414的下部形成有具有网状过滤器的样品裁断部415。通过样品裁断部415，从活塞402挤出的粪便样品E形成丝状并排出到悬浮液S中。因此，即使粘度高的粪便也能够简易地悬浮。另外，本实施方式中，用于将粪便样品E导入到悬浮液保持容器411中的包括盖401、粪便采集棒403、滑块414、活塞402、样品裁断部415的部件称为导入机构。

此后，通过突起部412将保持在阻断物支撑部422中的阻断物431放出到处理液保持容器421内，所得到的粪便悬浮液和粪便处理液P彼此通过连通孔413而混合。另外，本实施方式中，将包括阻断物431、阻断物支撑部422和突起部412的部件称为开放机构。

实施方式2中，通过使用活塞202、302、402，即使改变粪便采集量的情况下也能够应付。另外，通过挤压活塞402而利用裁断部415将粪便样品E裁切成丝状，从而即使粘度高的样品也能够通过悬浮微细地分散，能够以高精度进行核酸的回收。

(实施方式3)

图7是表示本发明的实施方式3所述的粪便处理容器5的概要结构示意图。图7所示的粪便处理容器5具备粪便采集夹具500、悬浮液保持部510和处理液保持容器521，分别以密闭的状态存在于粪便处理容器5内。另外，构成粪便试样调制用的溶液的悬浮液S和粪便处理液P分别被收纳在悬浮液保持容器511和处理液保持容器521中。

粪便处理容器5中，处理液保持容器521被收纳在悬浮液保持容器511内。悬浮液保持容器511及处理液保持容器521由弹性材料形成，处理液保持容器521的抗拉强度较低。通过粪便采集棒502采集粪便样品E，将悬浮液保持容器511与盖501接合的同时，通过滑块512擦掉附着在粪便采集棒502上的多余的粪便。此后，使悬浮液S与粪便样品E混合而使其悬浮，并将得到的粪便悬浮液与粪便处理液P混合。

如图8所示，混合粪便处理液P的方法如下：通过按压悬浮液保持容器511的处理液保持容器521附近而使处理液保持容器521的内部压力上升，从而使处理液保持容器521断裂而将内部的粪便处理液P放出到粪便悬浮液中。

另外，通过在悬浮液保持容器511和处理液保持容器521间设置抗拉强度的差异，从而能够通过按压仅使处理液保持容器521断裂。这里混合得到的粪便试样用于回收核酸。

另外，处理液保持容器521优选采用硅橡胶等软性树脂而形成。另外，由于悬浮液保持容器511保持密闭性，因此通过由硬性树脂来形成与盖501的接合部，不易由于按压而变形。另外，通过使粪便采集棒502前端锋利，也可以使处理液保持容器521断裂。

另外，参照图9对粪便处理容器5的变形例即粪便处理容器6进行说明。图9所示的粪便处理容器6由粪便采集夹具600、悬浮液保持部610和处理液保持容器621构成，粪便采集夹具600中形成有粪便采集棒602，悬浮液保持部610中形成有滑块612。另外，悬浮液保持容器611及处理液保持容器621由弹性材料等形成。因此，在处理液保持容器621的一部分中设置抗拉强度低于悬浮液保持容器611的部分，弯折悬浮液保持容器611及处理液保持容器621，从而使处理液保持容器621的抗拉强度低的部分断裂。另外，为了以很少的力就能够断裂，也可以由塑料等硬性树脂形成容器，并使该容器的一部分形成折痕而容易断裂。另外，与粪便处理容器5同样，为了保持容器的密闭性，也可以由硬性树脂形成悬浮液保持容器611的与盖601的接合部。

实施方式3所述的粪便处理容器5、6由于仅操作粪便采集夹具500、600和悬浮液保持容器511、611，因此其构造与粪便处理容器1～4相比更简易。另外，与将所分离的粪便悬浮液与粪便处理液P混合的方法相比，由于在粪便悬浮液中放出粪便处理液P，因此能够缩短粪便悬浮液与粪便处理液P混合所需要的时间。另外，本实施方式中，用于将粪便样品E导入到悬浮液保持容器511中的包括盖501、601、粪便采集棒502、602、滑块512、612的部件称为导入机构，将包括处理液保持容器521、621的部件称为开放机构。

(实施方式4)

图11是表示本发明的实施方式4所述的粪便处理容器7的概要结构示意图。该粪便处理容器7具备悬浮液保持部700、连结部710和处理液保持部720，分别以密闭的状态存在于粪便处理容器7内。另外，构成粪便试样调制用溶液的悬浮液S和粪便处理液P分别收纳在悬浮液保持容器701和处理液保持容器721中。

首先，将采集的粪便样品E导入到预先收纳有悬浮液S的悬浮液保持容器701内，使悬浮液保持容器701、接合部712及处理液保持容器721彼此接合。另外，在使粪便样品E和悬浮液S悬浮之前，在处理液保持部720和连结部710预先保持若干的空区域以防止放出粪便处理液P。如果将粪便样品E和悬浮液S悬浮而获得粪便悬浮液，则通过挤压处理液保持容器721从而使突起部711的突起部穿透阻断膜722，阻断膜722破裂。其结果是，粪便处理液P和粪便悬浮液通过连通孔713而混合。然后通过上述处理调制粪便试样。

另外，本实施方式中没有与导入机构相当的部件的说明，但在以往的方法中，也可以通过上述的实施方式中记载的导入机构将粪便样品E导入到悬浮液保持容器701内。另外，本实施方式中将包括突起部711、阻断膜722的部件称为开放机构。

由于实施方式4所述的粪便处理容器7的各部分分离存在，因此操作时的选择增加。例如，在悬浮液保持容器701中也设置阻断膜而将悬浮液S密闭，使用时通过连结部710的突起部711而使悬浮液保持容器701开放，从而还能够期待防止悬浮液S的氧化等、提高溶液的稳定性。此后，通过使连结部710翻转，能够进行上述的试样调制处理。另外，通过使用实施方式2中记载的球状的阻断物，使放出到悬浮液S及粪便处理液P中的阻断物发挥搅拌珠的作用，能够期待发挥促进各自的搅拌的效果。

另外，并不限于上述的实施方式1～4，也包括这里没有记载的各种实施方式等，可以在不超出权利要求书所限定的技术思想的范围内实施各种设计变更等。

产业上的可利用性

根据本发明的粪便处理方法及粪便处理容器，通过将粪便采集到预先收纳有本发明的粪便试样调制用的溶液的粪便采集容器中，能够简便地由采集的粪便调制粪便试样，并且以高精度且稳定的状态进行核酸的回收和处理。另外，由于本发明的处理容器的操作性(使用方法)也简便，因此能够在家庭中使用。进而，由于本发明的处理容器中将悬浮液和粪便处理液分开收纳，因此能够选择性地收纳各溶液，进行各种处理时有用。

Claims

1.一种粪便处理方法，该粪便处理方法对用于由采集的粪便回收核酸的粪便试样进行调制处理，其包括以下步骤：

悬浮步骤，生成由采集的粪便和悬浮液悬浮而成的粪便悬浮液；

试样调制步骤，将所述粪便悬浮液与使所述核酸稳定的粪便处理液混合而调制所述粪便试样。

2.根据权利要求1所述的粪便处理方法，所述悬浮液为水、生理盐水或缓冲剂。

3.根据权利要求1或2所述的粪便处理方法，所述粪便处理液为水溶性有机溶剂。

4.根据权利要求3所述的粪便处理方法，所述水溶性有机溶剂为水溶性醇和/或酮类。

5.根据权利要求3或4所述的粪便处理方法，所述粪便试样含有30％以上的所述水溶性有机溶剂。

6.根据权利要求4所述的粪便处理方法，所述水溶性醇为选自由乙醇、丙醇及甲醇组成的组中的1种以上。

7.根据权利要求4所述的粪便处理方法，所述酮类为丙酮和/或甲乙酮。

8.根据权利要求3所述的粪便处理方法，所述水溶性有机溶剂为醛类。

9.根据权利要求3或8所述的粪便处理方法，所述粪便试样含有0.01～30％的所述水溶性有机溶剂。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的粪便处理方法，所述悬浮液和/或粪便处理液含有表面活性剂。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的粪便处理方法，所述悬浮液和/或粪便处理液含有着色剂。

12.根据权利要求3～9中任一项所述的粪便处理方法，所述水溶性有机溶剂含有有机酸。

13.根据权利要求3～9中任一项所述的粪便处理方法，所述水溶性有机溶剂含有螯合剂和/或聚阳离子。

14.一种粪便处理容器，该粪便处理容器对用于由采集的粪便回收核酸的粪便试样进行调制处理，其具备：

悬浮液保持部，其用于保持使所述粪便悬浮的悬浮液；

导入机构，其用于向所述悬浮液保持部中导入所述粪便；

处理液保持部，其用于保持使所述核酸稳定的粪便处理液；

开放机构，其用于使所述悬浮液保持部与所述处理液保持部互相开放。

15.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述开放机构具备：将所述悬浮液保持部与所述处理液保持部连通的连通孔，和设置在所述连通孔内用于阻断连通的阻断部；

所述处理液保持部是伸缩自由的容器，通过压缩该处理液保持容器而使处理液的压力增大，从而解除阻断部的阻断，使所述粪便处理液流入到所述悬浮液侧。

16.根据权利要求14或15所述的粪便处理容器，所述处理液保持部在轴线方向上伸缩自由，使全部粪便处理液流入到所述悬浮液保持部侧。

17.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述开放机构具备：用于使所述悬浮液保持部与所述处理液保持部之间阻断的阻断部，和用于穿透所述阻断部而使所述悬浮液保持部与所述处理液保持部互相开放的突起部。

18.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述开放机构具备：用于将所述悬浮液保持部与所述处理液保持部之间阻断的阻断部，和

用于按压所述阻断部而使所述悬浮液保持部与所述处理液保持部互相开放的突起部。

19.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述处理液保持部形成于所述悬浮液保持部内部，并且该悬浮液保持部及该处理液保持部由弹性材料形成，

通过来自所述悬浮液保持部及所述处理液保持部的外部的按压而使所述处理液保持部断裂，

使所述粪便处理液流入到所述悬浮液侧。

20.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述处理液保持部形成于所述悬浮液保持部的内部，并且该悬浮液保持部及该处理液保持部由弹性材料形成，进而，所述处理液保持部的部分的抗拉强度相对于所述悬浮液保持部的抗拉强度较低，通过从所述悬浮液保持部及所述处理液保持部的外部弯折该悬浮液保持部及该处理液保持部，使该处理液保持部的抗拉强度低的部分断裂，使所述粪便处理液流入到所述悬浮液侧。

21.根据权利要求14所述的粪便处理容器，至少所述悬浮液保持部和所述处理液保持部为彼此独立的部件，该悬浮液保持部和该处理液保持部能够互相安装。

22.根据权利要求14所述的粪便处理容器，所述悬浮液为水、生理盐水或缓冲剂。

23.根据权利要求14或22所述的粪便处理容器，所述粪便处理液为水溶性有机溶剂。

24.根据权利要求23所述的粪便处理容器，所述水溶性有机溶剂为水溶性醇和/或酮类。

25.根据权利要求23或24所述的粪便处理容器，所述粪便试样含有30％以上的所述水溶性有机溶剂。

26.根据权利要求24所述的粪便处理容器，所述水溶性醇为选自由乙醇、丙醇及甲醇组成的组中的1种以上。

27.根据权利要求24所述的粪便处理容器，所述酮类为丙酮和/或甲乙酮。

28.根据权利要求23所述的粪便处理容器，所述水溶性有机溶剂为醛类。

29.根据权利要求25或28所述的粪便处理容器，所述粪便试样含有0.01～30％的所述水溶性有机溶剂。

30.根据权利要求14或22～29中任一项所述的粪便处理容器，所述悬浮液和/或粪便处理液含有表面活性剂。

31.根据权利要求14或22～30中任一项所述的粪便处理容器，所述悬浮液和/或粪便处理液含有着色剂。

32.根据权利要求21～29中任一项所述的粪便处理容器，所述水溶性有机溶剂含有有机酸。

33.根据权利要求21～29中任一项所述的粪便处理容器，所述水溶性有机溶剂含有螯合剂和/或聚阳离子。