CN101991640A - 一种含十大功劳的中药组合物的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗畜禽细菌病的药物组合物，特别涉及一种含十大功劳的中药组合物的制备方法及其应用，其中以十大功劳和苦参为主要药味，其中每1000个制剂单位，十大功劳与苦参的投料量分别为3-6kg、3-6kg；应用于口服液时，每1000ml口服液所加载体“辅料”包括表面活性剂、助溶剂、防腐剂及其溶剂；本发明口服液、颗粒剂适用于畜禽的细菌性疾病或混合感染；组合物临床应用安全，用于治疗畜禽细菌病具有很好的治疗的作用；在与抗菌药物联用能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性，增强抗菌药物的抗菌效果；本发明中药组合物为水溶性，尤其是在畜禽病情严重时，又不愿采食的情况下，便于通过饮水给药，能够达到快速起效的作用。

Description

一种含十大功劳的中药组合物的制备方法及其应用

【技术领域】

本发明涉及一种治疗畜禽细菌病的药物组合物，特别涉及一种含十大功劳的中药组合物的制备方法及其应用。

【背景技术】

公知的，由于抗生素的广泛应用，导致耐药菌株和多重交叉耐药菌株的不断增加和扩散，细菌的耐药性问题变的越来越严重，越来越突出，病原菌的耐药率呈现逐年上升的趋势。研究表明中草药抑菌成分多（而且中草药中还具有一些不明物质）而复杂，可作用于细菌的不同部位、靶点及繁殖的不同阶段，并对细菌的多个代谢环节起到一定的作用，因此不易产生耐药性。

而一些中草药具有良好的抗菌活性，并且与其他抗菌药物联合应用时候，可以增强抗菌药物的抗菌活性。因此，在抗感染治疗药物研究中显示了极具吸引力的应用潜力和良好前景，在国际上越来越受到重视。利用中草药开发新的抗菌药物，使其具有良好的抗菌活性，为解决目前日益严重的细菌耐药性问题，与合成抗菌药物联合应用，增强抗菌药物的抗菌活性无疑是本领域技术人员的一个追求目标或一个新研发方向。

已知的：十大功劳为小檗科十大功劳属植株阔叶十大功劳 Mahonia bealei(Fort.)Carr.及狭叶十大功劳Mahonia fortunei(Lindl)Fedde的干燥叶，具有清热燥湿、解毒止痢之功效，主治肠黄泻痢。现代药理研究表明从十大功劳中分离得到的小檗碱、巴马亭和药根碱具有一定得抑菌作用，其中小檗碱对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌具有明显的抑制作用，小檗碱及其结构类似物可作为多耐药泵的逆转剂，可预防或治疗由于耐药菌引起的感染。

苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait．的干燥根，具有清热燥湿之功效，用于湿热泻痢。现代药理表明苦参具有广谱的抗微生物作用，体外实验证明，对痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌有明显的抑制作用；苦参还具有抗炎作用，对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、巴豆油所致小鼠和大鼠耳部水肿、蛋清或角叉菜胶所致大鼠足肿胀及棉球肉芽肿均有明显抑制作用。

【发明内容】

为了克服抗生素的耐药性问题，本发明公开了一种含十大功劳的中药组合物的制备方法及其应用，本发明主要由十大功劳、苦参组成，属纯中药配方，不易产生耐药性，临床应用安全；与其他抗菌药联用能起到抗菌增效的作用，有效地克服了抗生素的耐药性问题。

为了实现所述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

一种含十大功劳的中药组合物的制备方法，其中以十大功劳和苦参为主要药味，其中每1000个制剂单位，十大功劳与苦参的投料量分别为3-6kg、3-6kg。

本发明组合物制备步骤如下：

①取十大功劳，用70～95%乙醇6-10倍量动态回流提取，其中提取时间为2~3h、动态提取温度为50~80℃，滤过，滤液回收乙醇，加70～90℃3-5倍量搅拌均匀，石油醚0.5-1萃取至少2次后，取水层减压浓缩后得浸膏，备用；

②取苦参，加8-10倍量水真空动态提取，其中提取时间为4~6h、真空动态提取温度为60~80℃，真空度为0.08~0.1Mpa，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达60~75%，4℃冷藏12小时以上，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值9-11，再用0.5-1倍量三氯甲烷萃取2-3次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏，添加药学上可接受的载体，制备成口服制剂。

本发明所述的十大功劳，为小檗科十大功劳属植物阔叶十大功劳及狭叶十大功劳的干燥叶，或采用十大功劳属小果十大功劳、长柱十大功劳以及华南十大功劳的干燥叶中的任一。

所述含十大功劳的中药组合物的制备方法，应用于口服液时，每1000ml口服液所加载体“辅料”包括表面活性剂、助溶剂、防腐剂及其溶剂；

其中表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60或吐温-80中的任意一种，用量为1～4%W/V；

助溶剂为乙醇，用量为5～15%W/V；

防腐剂为苯甲酸钠、山梨酸钾或苯甲酸中的任意一种，用量为0.05%～0.2%W/V；溶剂为纯化水，加至全量1000ml。

其中含十大功劳的中药组合物口服液，所用的表面活性剂与助溶剂乙醇的用量之和不超过18% W/V。

所述含十大功劳的中药组合物的制备方法，应用于颗粒剂时，每1000g颗粒，取制备方法中①得十大功劳浸膏及步骤②得苦参浸膏混合后加入糊精100-250g、蔗糖或葡萄糖补足至全量1000g。

一种含十大功劳的中药组合物的应用。

所述含十大功劳的中药组合物的应用，口服液、颗粒剂适用于畜禽的细菌性疾病或混合感染。

所述含十大功劳的中药组合物的应用，口服液、颗粒剂尤其适用于猪、鸡的细菌性疾病或混合感染。

所述含十大功劳的中药组合物的应用，所述颗粒剂用量为1～2g颗粒剂兑1L水或0.5～1g颗粒剂拌料1kg，自由采食，连用3-5天。

所述含十大功劳的中药组合物的应用，口服液用量为1～2ml兑1L水，自由饮水，连用3-5天。

由于采用了上述技术方案，本发明具有如下有益效果：

本发明用于含十大功劳的中药组合物与抗菌药联用能起到抗菌增效的作用，所述的抗菌药为喹诺酮类、大环内酯类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类。喹诺酮类包括诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星及其盐；大环内酯类包括泰乐菌素、替米考星、红霉素及其盐；β-内酰胺类包括头孢噻呋、氨苄西林、氯唑西林及其盐；氨基糖苷类包括庆大霉素、新霉素、链霉素、卡那霉素及其盐；氯霉素类包括氟苯尼考、甲砜霉素；四环素类包括多西环素、土霉素及其盐。

由上可看出，本发明的一个技术效果，本发明组合物临床应用安全，用于治疗畜禽细菌病具有很好的治疗的作用；在与抗菌药物联用能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性，增强抗菌药物的抗菌效果。

本发明中药组合物为水溶性，尤其是在畜禽病情严重时，又不愿采食的情况下，便于通过饮水给药，能够达到快速起效的作用。

【具体实施方式】

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。

本发明用于含十大功劳的中药组合物还可配合抗菌药使用时具有抗菌增效的作用，试验见实施例1。

具体实施例1 含十大功劳的药物组合物的制备方法及其药效试验

1. 含十大功劳的中药组合物的制备方法

十大功劳5kg           苦参5kg

①                  取十大功劳5kg，用10倍量95%乙醇动态回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，加90℃热水4倍量，搅拌均匀，用1倍量的石油醚萃取3次，取水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加8倍量水真空动态提取时间为5h（真空动态提取温度为70℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达60%，4℃冷藏12小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值11，用1倍量三氯甲烷萃取3次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏混合，继续浓缩至相对密度1.2（70-75℃）的清膏，加入糊精200g，蔗糖补足至1000g，混匀，制成颗粒，干燥，即得。

本发明含十大功劳组合物颗粒经临床安全性试验表明：利用具体实施方式中实施例1方案制备的颗粒剂按照临床安全性试验要求进行试验，试验用鸡随机分为4组，每组30只，第1、2、3组分别以1g兑水1L、3g兑水1L、5g兑水1L混饮给药，第4组给予饮用水作为对照组，自由饮水，连续给药5日，每天观察鸡反应情况，所述反应情况包含精神状态、进食量、行为活动、眼睛和鼻孔分泌物以及其它不可预料的不适反应，连续观察至第19日，停止给药后和观察结束时，分别从各剂量组中随机挑选6只鸡处死，进行详细的系统尸检，记录实质性脏器的色泽、质地、肿块、空腔脏器的黏膜完整性及色泽等不确定状态或发现。结果各用药组鸡的精神状态、进食量、行为活动、眼睛和鼻孔分泌物、剖检症状与对照组比较未见异常，说明临床按1g兑水1L混饮给药，连用5d，对鸡的安全性良好。

2. 含十大功劳的药物组合物对人工感染大肠杆菌治疗的试验

供试菌：大肠杆菌（血清型O₇₈）购于中国兽医药品监察所。

攻毒剂量：0.2mL，3.2×10⁹CFU/mL。

分组：选用3周龄健康SPF罗曼蛋鸡300只，随机分为6组，每组50只。

试验1组：空白对照组，不染毒，不给药，隔离饲养。

试验2组：阴性对照组，染毒后，不给药，隔离饲养。

试验3～5组：治疗组，剂量分别为第3组（低剂量组）药物组合物颗粒0.5g兑水1L，第4组（中剂量组）药物组合物颗粒1g兑水1L，第5组（高剂量组）药物组合物颗粒2g兑水1L， 混饮，连用5日。

药物对照组：乳酸诺氟沙星可溶性粉组，规格：100g：5g，剂量1L水本品1g，混饮，联用5日。

给药及观察：待80%以上鸡只出现明显的发病症状时，连用5天，给药结束后继续观察至第19日，每天观察鸡只症状并进行计分，实验结束后，计算各组计分结果，以死亡率、治愈率、有效率、相对增重率判定指标对结果进行统计并评价。

结果：观察并记录各组鸡的临床症状，并对病死鸡进行剖检及细菌分离，按生物统计方法进行数据的显著性检验，其中死亡率、有效率及治愈率用卡方检验。结果见表1。

表1 临床治疗试验结果统计

组别	死亡率（%）	治愈率（%）	有效率（%）	相对增重率（%）
					空白对照组	—	—	—	100
阴性对照组	76	—	—	34.2
					低剂量组	32**	58**	68**	58.7
中剂量组	22*	64	78*	80.8
					高剂量组	18	70	82	83.2
药物对照组	8	86	92	92.1

注：*：与药物对照组比较，p＜0.05，**：与药物对照组比较p＜0.01。

从表1可以看出各给药组鸡的死亡率与阴性对照组相比明显降低（p＜0.01），说明本发明药物组合物颗粒能降低鸡大肠杆菌病的死亡率。以死亡率比较，该颗粒高剂量组与药物对照组无显著性差异（P＞0.05）；以治愈率比较，该颗粒高、中剂量组略低于药物对照组，但无显著性差异（P＞0.05），低剂量组差异极显著（p＜0.01）；以有效率比较，该颗粒高剂量组与药物对照组无显著性差异（P＞0.05）；各给药组相对增重率高于阴性对照组。说明本发明颗粒具有一定的治疗大肠杆菌病的作用。

3. 含十大功劳的药物组合物用于自然患白痢仔猪治疗的试验

试验猪场：河南栾川县养猪场。分别选择10~28日龄，4.0±1.0kg体重，自然患白痢的哺乳仔猪150头，健康哺乳仔猪50头进行试验，试验组给予本发明实施例1制备的颗粒，药物对照组给予四黄止痢颗粒，分组及处理见表2。

表2 对自然发病猪的疗效试验分组及处理

组号	组别	只数	处理	剂量
					1	空白对照组	50	—	/
2	阴性对照组	50	不治疗	/
					3	实施例1颗粒	50	治疗	1L水颗粒1g
4	药物对照组	50	治疗	1L水四黄止痢颗粒1g

给药及观察：每天给药一次，自由饮水，连用5天，给药结束后继续观察至第19日，每天观察仔猪症状，实验结束后，以死亡率、治愈率、有效率、相对增重率判定指标对结果进行统计并评价。

疗效判定标准：

治愈：治疗后患猪粪便成型，干稀适度，颜色正常，仔猪活动、精神和食欲恢复正常，观察期内无复发；以治愈头数占整个试验组总数的比，计算治愈率。

有效：治疗后患猪粪便明显变稠，拉稀次数明显减少，仔猪食欲、活动和精神状态有明显改善；以有效头数（包括治愈头数）占整个试验组总数的比，计算有效率。

无效：治疗后患猪精神、食欲无明显改善，甚至加重，属无效。根据无效头数占整个试验组总数的比，计算无效率。

死亡：治疗后患猪精神、食欲、粪便无明显改善，甚至加重或死亡。以死亡数占整个试验组总数的比，计算死亡率。

相对增长率：各试验组与健康对照组的增重比，其中健康对照组设为100%。

试验结果：观察并记录各组仔猪的临床症状，并对病死仔猪进行剖检及细菌分离，按生物统计方法进行数据的显著性检验，其中死亡率、无效率、有效率及治愈率用卡方检验，结果见表3。

表3 临床治疗试验结果统计

组别	死亡率（%）	治愈率（%）	有效率（%）	无效率（%）	相对增重率（%）
						空白对照组	0	—	—	—	100
阴性对照组	18	—	—	—	61.2
						实施例1颗粒组	4	68	76	20	85.4
药物对照组	10	54	68	22	82.7

从表3可以看出实施例1颗粒组的死亡率较低；以治愈率、有效率为指标，给药组均起到一定的治疗作用，其中实施例1颗粒组效果好于药物对照组；给药组相对增重率高于阴性对照组。说明本发明颗粒具有较好的治疗猪白痢的作用。

4. 含十大功劳的药物组合物联合抗菌药的抗菌增效试验

试验菌株：耐药大肠杆菌GXD0114、耐药葡萄球菌GXJ0043，由临床分离。

试验药品：乳酸诺氟沙星、氟苯尼考、庆大霉素、盐酸多西环素、头孢噻呋钠、乳酸环丙沙星、本发明药物组合物颗粒。

试验方法：采用微量倍比稀释法，第1-11孔各加100μl肉汤，第12孔加200μl肉汤。取药液100μl加入第1孔，依次倍比稀释至第10孔，第10孔混匀后弃去100μl，然后除第12孔外每孔加稀释的菌液100μl，使每孔含菌量为2×10⁵CUF/ml，混匀，置37℃培养16 h后观察结果，联合用药时因色深无法判定的可采用平板划线，37℃培养16 h后观察，结果无细菌生长的最低药物浓度即为该药的最低抑菌浓度（MIC）。

表4  抗菌药联合组合物颗粒前后MIC比较（耐药大肠杆菌GXD0114）

药物	MIC（μg/ml）
				单用	联用实施例1制备的颗粒，50mg生药/ml
乳酸诺氟沙星	1024	128
			氟苯尼考	640	160
庆大霉素	30000	1500
			盐酸多西环素	640	80
头孢噻呋钠	80	20

表5  抗菌药联合组合物颗粒前后MIC比较（耐药葡萄球菌GXJ0043）

药物	MIC（μg/ml）
				单用	联用实施例1制备的颗粒，50mg生药/ml
乳酸环丙沙星	80	20
			庆大霉素	160	40
盐酸多西环素	16	8
			乳酸诺氟沙星	256	64

从表4-5可以看出在作用于耐药菌株时，本发明药物组合物颗粒在与乳酸诺氟沙星、氟苯尼考、庆大霉素、盐酸多西环素、乳酸环丙沙星、头孢噻吩钠与本发明药物组合物颗粒联用后MIC均有所降低，降低倍数为2～8倍；说明本发明药物组合物颗粒能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性，从而增强抗菌药物的抗菌效果。

 

实施例2 

十大功劳3kg           苦参6kg

①                  取十大功劳3kg，用10倍量70%乙醇动态回流提取3小时，滤过，滤液回收乙醇，加70℃热水3倍量，搅拌均匀，用0.5倍量的石油醚萃取2次，水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加10倍量水真空动态提取时间为6h（真空动态提取温度为80℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达75%，4℃冷藏24小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值9，用0.5倍量三氯甲烷萃取2次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏全量加40g吐温-80及20%乙醇溶液500g，搅拌均匀；取步骤②所得苦参浸膏全量用20%乙醇溶液200g溶解，搅拌均匀；十大功劳提取物溶液与苦参提取物溶液混合，加纯化水至1000ml，加防腐剂苯甲酸钠0.5g，搅拌均匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

实施例3 

十大功劳6kg           苦参5kg

①                  取十大功劳6kg，用6倍量85%乙醇动态回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，加80℃热水3倍量，搅拌均匀，用1倍量的石油醚萃取3次，取水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加9倍量水真空动态提取时间为4h（真空动态提取温度为60℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达65%，4℃冷藏12小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值10，用0.5倍量三氯甲烷萃取3次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏混合，继续浓缩至相对密度1.1（70-75℃）的清膏，糊精250g，蔗糖补足1000g，混匀，制成1000g颗粒，干燥，即得。

实施例4 

十大功劳4kg           苦参5kg

①取十大功劳4kg，用8倍量95%乙醇动态回流提取3小时，滤过，滤液回收乙醇，加80℃热水4倍量，搅拌均匀，用0.8倍量的石油醚萃取2次，水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加10倍量水真空动态提取时间为5h（真空动态提取温度为70℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达60%，4℃冷藏24小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值10，用0.5倍量三氯甲烷萃取2次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏加10g吐温-80及20%乙醇溶液550g，搅拌均匀；取步骤②所得苦参浸膏用20%乙醇溶液200ml溶解，搅拌均匀；十大功劳提取物溶液与苦参提取物溶液混合，加纯化水至1000ml，加防腐剂苯甲酸钠1g，搅拌均匀，滤过，灌装，灭菌，即得。

实施例5 

十大功劳5kg           苦参3kg

①取十大功劳5kg，用10倍量95%乙醇动态回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，加80℃热水5倍量，搅拌均匀，用0.5倍量的石油醚萃取3次，取水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加8倍量水真空动态提取时间为4h（真空动态提取温度为75℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达70%，4℃冷藏12小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值9.5，用0.8倍量三氯甲烷萃取2次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏混合，继续浓缩至相对密度1.2（70-75℃）的清膏，糊精200g，加入蔗糖补足至1000g，混匀，制成1000g颗粒，干燥，即得。

实施例6 

十大功劳3kg           苦参3kg

①取十大功劳5kg，用10倍量95%乙醇动态回流提取2小时，滤过，滤液回收乙醇，加70℃热水4倍量，搅拌均匀，用1倍量的石油醚萃取2次，取水层浓缩得浸膏，备用；

②取苦参，加10倍量水真空动态提取时间为4h（真空动态提取温度为75℃，真空度为0.08~0.1Mpa），滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达70%，4℃冷藏12小时，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值9.5，用0.8倍量三氯甲烷萃取2次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏混合，继续浓缩至相对密度1.15（70-75℃）的清膏，加入糊精200g，蔗糖补足至1000g，混匀，制成1000g颗粒，干燥，即得。

在实施例2-6中，分别试验了药物组合物其他配比的药物在治疗鸡的大肠杆菌病的疗效，试验参照实施例1，结果药物组合物其他配比的药物对鸡细菌性均有良好的疗效。

实施例7含十大功劳的药物组合物用于自然发病鸡大肠杆菌病治疗的试验

试验鸡场：河南栾川县某鸡场。选择30~40日龄，自然患病的鸡只经分离细菌鉴定为大肠杆菌感染后进行该试验，其中分离的大肠杆菌耐药情况见表6。

试验分组及给药：选取250只患病鸡只进行试验，分5组，每组50只，试验组给予本发明实施例1、3制备的颗粒及实施例2制备的口服液，药物对照组给予乳酸诺氟沙星可溶性粉，分组及处理见表6。

表6 临床分离大肠杆菌耐药性检测结果

菌种编号

氟苯尼考30μg/片

硫酸庆大霉素10μg/片

盐酸环丙沙星5μg/片

乳酸诺氟沙星10μg/片

乳酸环丙沙星5μg/片

氧氟沙星5μg/片

盐酸多西环素30μg/片

硫酸新霉素30μg/片

头孢噻吩钠30μg/片

GXD0129

S

R

R

R

R

R

R

R

I

注：S：表示敏感；I：表示中敏；R：表示耐药

从表6可以看出，临床分离的大肠杆菌，对庆大霉素、盐酸环丙沙星、乳酸诺氟沙星、氧氟沙星、多西环素、硫酸新霉素均耐药。

 

表6 对自然发病猪的疗效试验分组及处理

组号	组别	只数	处理	剂量（1L水用量）
					1	阴性对照组	50	不治疗	/
2	实施例1颗粒组	50	治疗	颗粒1g+乳酸诺氟沙星可溶性粉1g
					3	实施例2口服液组	50	治疗	口服液1ml+乳酸诺氟沙星可溶性粉1g
4	实施例3颗粒组	50	治疗	颗粒1g+乳酸诺氟沙星可溶性粉1g
					5	药物对照组	50	治疗	乳酸诺氟沙星可溶性粉1g

 试验给药、观察及结果统计：参照实施例1对人工感染大肠杆菌治疗的试验，结果见表7。

  

表7 临床治疗试验结果统计

组别	死亡率（%）	治愈率（%）	有效率（%）
				阴性对照组	76	—	—
实施例1颗粒组	20	62	76
				实施例2口服液组	28	46	68
实施例3颗粒组	24	54	70
				药物对照组	46	22	36

从表7可以看出各给药组鸡的死亡率与阴性对照组相比明显降低，说明本发明药物组合物能降低鸡大肠杆菌病的死亡率；从治愈率与有效率看，本发明实施例1、2、3组的治愈率及有效率均较药物对照组高，说明本发明组合物与抗菌药物联用用于治疗临床上由耐药大肠杆菌导致的患病鸡具有一定的治疗作用。

实施例2-6，参照实施例1分别用于治疗自然发病的仔猪白痢，均能起到很好的治疗作用。

实施例2-6，参照实施例1分别试验了药物组合物其他配比的药物联合抗菌药的抗菌增效试验，结果药物组合物其他配比的药物联合抗菌药均具有较好的联合抗菌增效作用。

前述中本发明具体实施方式中实施例1含十大功劳的中药组合物经临床药效试验表明：采用3周龄健康SPF罗曼蛋鸡，大肠杆菌C83851（血清型O₇₈）攻毒，经胸肌注射接种菌液0.2mL，菌液浓度3.2×10⁹CFU/ml，各给药组80%以上鸡出现明显的发病症状开始给药，药物组采用实施例4制备的颗粒加水混饮，高、中、低剂量分别为2g兑水1L、1g兑水1L、0.5g兑水1L，连用5日，给药结束后仍继续观察观察2周；同时设立阴性对照组、空白对照组、药物对照组，试验结束后统计死亡率、治愈率、有效率及相对增重率，并进行生物学统计分析。结果实施例1制备的颗粒能有效控制人工感染大肠杆菌鸡的临床症状，明显降低鸡的死亡率。

本发明组合物用于治疗自然发病猪的临床疗效试验见实施例1，结果采用本发明颗粒具有较好的治疗仔猪白痢的作用。

本发明用于治疗畜禽细菌病的中药组合物的抗菌增效试验见实施例1：结果采用本发明制备的颗粒能够提高耐药菌株对抗菌药物的敏感性，增强抗菌药物的抗菌效果。

Claims (9)

1.一种含十大功劳的中药组合物的制备方法，以十大功劳和苦参为主要药味，其特征在于：其中每1000个制剂单位，十大功劳与苦参的投料量分别为3-6kg、3-6kg；

本发明组合物制备步骤如下：

①取十大功劳，用70～95%乙醇6-10倍量动态回流提取，其中提取时间为2~3h、动态提取温度为50~80℃，滤过，滤液回收乙醇，加70～90℃3-5倍量搅拌均匀，石油醚0.5-1萃取至少2次后，取水层减压浓缩后得浸膏，备用；

②取苦参，加8-10倍量水真空动态提取，其中提取时间为4~6h、真空动态提取温度为60~80℃，真空度为0.08~0.1Mpa，滤过，滤液浓缩至70℃时相对密度为1.12~1.15的浓缩液后，加乙醇使含醇量达60~75%，4℃冷藏12小时以上，上清液回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值9-11，再用0.5-1倍量三氯甲烷萃取2-3次，合并三氯甲烷萃取液，减压回收三氯甲烷得浸膏，备用；

③取步骤①所得十大功劳浸膏及步骤②所得苦参浸膏，添加药学上可接受的载体，制备成口服制剂。

2.根据权利要求1所述的含十大功劳的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述的十大功劳，为小檗科十大功劳属植物阔叶十大功劳及狭叶十大功劳的干燥叶，或采用十大功劳属小果十大功劳、长柱十大功劳以及华南十大功劳的干燥叶中的任一。

3.根据权利要求1所述的含十大功劳的中药组合物的制备方法，其特征在于：应用于口服液时，每1000ml口服液所加载体“辅料”包括表面活性剂、助溶剂、防腐剂及其溶剂；

其中表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60或吐温-80中的任意一种，用量为1～4%W/V；

助溶剂为乙醇，用量为5～15%W/V；

防腐剂为苯甲酸钠、山梨酸钾或苯甲酸中的任意一种，用量为0.05%～0.2%W/V；溶剂为纯化水，加至全量1000ml；

其中含十大功劳的中药组合物口服液，所用的表面活性剂与助溶剂乙醇的用量之和不超过18% W/V。

4.根据权利要求1所述的含十大功劳的中药组合物的制备方法，其特征在于：作为颗粒剂时，每1000g颗粒，取制备方法中①得十大功劳浸膏及步骤②得苦参浸膏混合后加入糊精100-250g、蔗糖或葡萄糖补足至全量1000g。

5.根据权利要求1～4任一权利要求所述的一种含十大功劳的中药组合物的应用。

6.根据权利要求5所述的含十大功劳的中药组合物的应用，其特征在于：所述口服液、颗粒剂适用于畜禽的细菌性疾病或混合感染。

7.根据权利要求6所述的含十大功劳的中药组合物的应用，其特征在于：口服液、颗粒剂适用于猪、鸡的细菌性疾病或混合感染。

8.根据权利要求6或7所述的含十大功劳的中药组合物的应用，其特征在于：所述颗粒剂用量为1～2g颗粒剂兑1L水或0.5～1g颗粒剂拌料1kg，自由采食，连用3-5天。

9.根据权利要求6或7所述的含十大功劳的中药组合物的应用，其特征在于：口服液用量为1～2ml兑1L水，自由饮水，连用3-5天。