CN101921331A - 一种胸腺肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胸腺肽的制备方法，其制备步骤为：用pH3.5-4.0的缓冲液将胸腺洗涤干净，再加入pH3.5～4.0的缓冲液低温匀浆，制成胸腺匀浆液；得到的匀浆液经过热变性离心去除杂蛋白，然后用盐酸调节上清液pH值至4.5-5，再次离心，调节上清液pH值至中性；得到的中性上清液经过不同的滤膜过滤，除去杂质和细菌，冻干，得到胸腺肽成品。本发明具有可提高胸腺肽的活性及得率，降低生产成本的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种胸腺肽的制备方法，属生物药品制备技术领域。
背景技术
胸腺肽是胸腺组织分泌的具有生理活性的一组多肽，具有调节和增强人体细胞免疫功能的作用。胸腺肽是采用生物化学的方法从动物胸腺组织中提取。公开号为CN1721440A的中国专利公开了一种制备胸腺肽的方法，其步骤为：（1）将新鲜的胸腺组织在20℃～23℃下用高速剪切机破碎得到匀浆液；（2）用稀盐酸调节pH值在4.5～4.8之间；（3）将匀浆液在20℃～23℃条件下放置3～4小时；（4）在60℃～65℃水浴中加热30min，自然冷却至室温；（5）过滤；（6）滤液用截留分子量为10000的中空纤维柱纯化、除菌得到胸腺肽产品。
上述制备方法在高速匀浆时未加入缓冲液来抑制蛋白酶的活性，而蛋白酶会分解或破坏胸腺肽，进而降低胸腺肽的得率和活性；另外匀浆温度为20℃～23℃，也不易保持胸腺肽的活性。
发明内容
为了克服上述工艺的不足之处，本发明目的在于提供一种制备胸腺肽的方法。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案在于提供一种制备胸腺肽的方法，步骤如下：
1）取新鲜的胸腺，用pH3～3.5的缓冲液洗涤干净；
2）加入pH3.5～4.0缓冲液，在8℃～10℃的条件下，用高速匀质机匀浆，得到匀浆液；
3）将上述匀浆液先放置在0℃～4℃条件下，然后再放置到-18℃～-25℃条件下；
4）将冻结后匀浆液在70～80℃的水浴锅中加热10～15min；
5）迅速将上述匀浆液放在低温条件下至完全冻结，然后取出置室温中融化，反复冻融；
6）将上述反复冻融后的匀浆液，离心，取上清液，用稀盐酸调节pH值4.5～5，再次离心，取上清，调节pH值至中性；
7）将上述中性上清液先经纸浆板过滤，得到的滤液用截留分子量100 000的中空纤维超滤柱超滤，得到的滤液再用截留分子量10 000 超滤膜超滤，得到的滤液最后经过滤菌膜过滤；
8）取除菌后的滤液测蛋白含量，冻干，得到胸腺肽成品。
步骤3）中在0℃～4℃下放置时间为36h～48h，在-18℃～-25℃下放置时间为36h～48h。
步骤5）中所述的低温为-15℃～-20℃。
步骤6）中所述的离心温度均为4℃。
步骤7）中所述的滤菌膜的孔径为0. 22μm。
本发明的有益效果：1）采用pH3～3.5的缓冲液进行洗涤，有效地抑制了酶的活性。
2）匀浆液在0℃～4℃条件下放置36h～48h后，然后在-18℃～-25℃条件下放置36h-48h，以防止胸腺肽突然进入低温而导致胸腺肽的活性下降。
3）采用低温匀浆和低温离心，一方面有利于抑制酶的活性，另一方面保持胸腺肽的活性。
4）采用低pH值进行匀浆，有利于胸腺细胞的完全破碎。
5）用盐酸将匀浆液的pH值调至为4.5～5，可使杂蛋白沉淀，抑制酶对胸腺肽的破坏，提高胸腺肽的活性。
6）采用超滤膜能进一步的除去杂质和细菌，产品的合格率提高，胸腺肽的含量得到提高。
具体实施方式
取1kg新鲜的小牛胸腺，去除脂肪及结缔组织，用pH3～3.5的缓冲液洗涤干净，加入1000 mL的pH3.5～4的缓冲液，在8℃～10℃下，用匀浆机以10000 rpm/min速度匀浆10 min，直到变成乳白色液体；得到的匀浆液先在0℃～4℃条件下放置36h～48h，然后在-18℃～-25℃条件下放置36h～48h，将冻结的匀浆液放入70～80℃水浴锅中，恒温加热10 min～15min；迅速取出匀浆液放在-15℃～-20℃条件下至完全冻结，然后取出放室温融化，反复冻融3次；在4℃条件下，7000rpm/min离心 20 min，取上清液，用稀盐酸调pH值至4.5～5，再次在4℃条件下，7000rpm/min离心 20 min，取上清液，用4 mol/ L NaOH 调节pH值至中性；取中性上清液经纸浆板过滤，滤液用截留分子量100 000的中空纤维超滤柱超滤，得到的滤液再经过截留分子量10 000 超滤膜超滤，得到的滤液经过孔径为0. 22μm滤菌膜过滤，取除菌后的滤液测蛋白含量，冻干，得到胸腺肽成品。测定胸腺肽含量为16.21mg/ml，胸腺肽α1含量为3.2%。体外玫瑰花结实验，样品稀释到0.002mg/ml，活性增加37.5%。
Claims (5)
1.一种胸腺肽的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：
1）取新鲜的胸腺，用pH3～3.5的缓冲液洗涤干净；
2）加入pH3.5～4.0缓冲液，在8℃～10℃的条件下，用匀质机匀浆,得到匀浆液；
3）将上述匀浆液先放置在0℃～4℃条件下，然后再放置到-18℃～-25℃条件下；
4）将冻结后匀浆液在70～80℃的水浴锅中加热10 min～15min；
5）迅速将上述匀浆液放在低温条件下至完全冻结，然后取出置室温中融化，反复冻融；
6）将上述反复冻融后的匀浆液，离心，取上清液，用稀盐酸调节pH值4.5～5，再次离心，取上清，调节pH值至中性；
7）将上述中性上清液先经纸浆板过滤，得到的滤液用截留分子量100 000的中空纤维超滤柱超滤，得到的滤液再经过截留分子量10 000 超滤膜超滤，得到的滤液最后经过滤菌膜过滤；
8）取除菌后的滤液测蛋白含量，冻干，得到胸腺肽成品。
2.根据权利要求1所述的胸腺肽的制备方法，其特征在于：步骤3）中在0℃～4℃下放置时间为36h～48h，在-18℃～-25℃下放置时间为36h～48h。
3.根据权利要求1所述的胸腺肽的制备方法，其特征在于：步骤5）中所述的低温为-15℃～-20℃。
4.根据权利要求1所述的胸腺肽的制备方法，其特征在于：步骤6）中所述的离心温度均为4℃。
5.根据权利要求1所述的胸腺肽的制备方法，其特征在于：步骤7）中所述的滤菌膜的孔径为0. 22μm。
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|---|---|
| CN (1) | CN101921331A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103172725A (zh) * | 2013-04-02 | 2013-06-26 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法 |
| CN105541996A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-05-04 | 天津泰创生物科技有限公司 | 胸腺组织提取胸腺肽、中分子量胸腺蛋白和dna的方法 |
| CN105777891A (zh) * | 2014-12-16 | 2016-07-20 | 康普药业股份有限公司 | 一种提高胸腺肽提取效率的方法 |
| CN112143768A (zh) * | 2020-09-29 | 2020-12-29 | 北京赛升药业股份有限公司 | 一种利用小牛胸腺联合制备dna和胸腺肽的方法 |
| CN112450316A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-09 | 通化承诚药业有限公司 | 小牛胸腺肽粉制备方法 |
| CN114805541A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-07-29 | 福建农业职业技术学院 | 一种猪胸腺肽的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1390853A (zh) * | 2002-05-16 | 2003-01-15 | 西安迪赛生物药业有限责任公司 | 一种制备胸腺肽的工艺方法 |
| CN1712064A (zh) * | 2004-06-23 | 2005-12-28 | 北京赛生药业有限公司 | 高浓度胸腺肽溶液的制备方法及大规格胸腺肽制剂 |
| CN1721440A (zh) * | 2004-07-12 | 2006-01-18 | 张宜俊 | 胸腺肽的制备方法 |
-
2010
- 2010-08-17 CN CN 201010255435 patent/CN101921331A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1390853A (zh) * | 2002-05-16 | 2003-01-15 | 西安迪赛生物药业有限责任公司 | 一种制备胸腺肽的工艺方法 |
| CN1712064A (zh) * | 2004-06-23 | 2005-12-28 | 北京赛生药业有限公司 | 高浓度胸腺肽溶液的制备方法及大规格胸腺肽制剂 |
| CN1721440A (zh) * | 2004-07-12 | 2006-01-18 | 张宜俊 | 胸腺肽的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 《中国生化药物杂志》 尹德瑛等 不同动物来源胸腺肽的制备及生化性质的研究 , 第02期 * |
| 《黑龙江医药》 20061231 高思英 胸腺肽的提取与性质研究 443-445 1-5 第19卷, 第6期 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103172725A (zh) * | 2013-04-02 | 2013-06-26 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 一种富含胸腺肽α1的胸腺肽的制备方法 |
| CN105777891A (zh) * | 2014-12-16 | 2016-07-20 | 康普药业股份有限公司 | 一种提高胸腺肽提取效率的方法 |
| CN105541996A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-05-04 | 天津泰创生物科技有限公司 | 胸腺组织提取胸腺肽、中分子量胸腺蛋白和dna的方法 |
| CN112143768A (zh) * | 2020-09-29 | 2020-12-29 | 北京赛升药业股份有限公司 | 一种利用小牛胸腺联合制备dna和胸腺肽的方法 |
| CN112450316A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-03-09 | 通化承诚药业有限公司 | 小牛胸腺肽粉制备方法 |
| CN114805541A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-07-29 | 福建农业职业技术学院 | 一种猪胸腺肽的制备方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20101222 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |