CN101880669B

CN101880669B - 小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用

Info

Publication number: CN101880669B
Application number: CN2010101397937A
Authority: CN
Inventors: 王石平; 李弘婧
Original assignee: Huazhong Agricultural University
Current assignee: Huazhong Agricultural University
Priority date: 2010-04-01
Filing date: 2010-04-01
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2030-04-01
Also published as: CN101880669A

Abstract

本发明涉及植物基因工程技术领域。具体涉及包含小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3的DNA片段的分离克隆和功能验证。Xa3/Xa26-3基因编码富亮氨酸蛋白激酶类蛋白质。它能够赋予水稻抵抗由细菌性病原菌-白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起的病害。将该片段与其自身调控序列直接转入水稻，携带Xa3/Xa26-3的转基因水稻对白叶枯病的抵抗能力显著增强。

Description

小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域。具体涉及一个水稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3的分离克隆、功能验证和应用。所述的DNA片段能够赋予水稻抵抗由白叶枯病菌引起的病害。将该片段与其内源调节序列直接转入植物体，转基因水稻可以产生由该基因介导的对白叶枯病菌的防卫反应。

技术背景

植物在生长的过程中，受到多种病原物的侵害。植物病原物的种类繁多，包括病毒、细菌、真菌和线虫等。病原物侵入植物导致两种结果：(1)病原体成功的在寄主植物内繁殖，引起相关的病症；(2)寄主植物产生抗病反应，杀死病原物或阻止其生长。利用抗性基因资源改良植物的抗病性，是预防病害同时又保护环境的根本出路。

植物的抗病反应是多基因参于调控的复杂过程。参于植物抗病反应的基因分为两类：(1)抗病(主效)基因，又称R(resistance)基因和(2)抗病相关基因。

根据目前人们对抗病基因功能的认识，抗病基因的产物主要是作为受体，直接或间接与病原蛋白相互作用，启动植物体内的抗病信号传导路径(Chisholm等，2006)。抗病基因介导的抗病反应抗性强，是很好的基因资源。但是农作物栽培种中抗病基因的资源有限。从近缘物种中发掘新的抗病基因用于农作物遗传改良一直是研究者工作的一个重要目标。

水稻是世界上重要的粮食作物，但病害的影响常常造成其产量和品质的下降。水稻白叶枯病由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起，是世界上对水稻危害最大的细菌性病害之一(过崇俭，1995)。水稻栽培种(Oryzasativa L.)中抗病基因的资源非常有限。如目前知道的抗白叶枯病基因只有大约30个(储昭晖和王石平，2007)。由于野生稻长期处于野生状态，经受了各种不良环境和灾害的自然选择，形成了极其丰富的遗传多样性。野生稻中蕴藏有优良抗病基因资源，是人们发掘新的优良基因的一个重要资源库。已知的大约30个抗白叶枯病基因中就有多个基因是从野生稻中导入进栽培稻中的。如抗白叶枯病显性基因Xa21源自西非长药野生稻(Oryza longistaminata)，对大多数白叶枯病菌株表现高抗；但是该基因是成株期抗性，即只有在水稻成株期才对白叶枯病菌具有完全抗性(Khush等，1990；Wang等，1996)。Xa21基因已经被分离克隆(Song等，1995)。一个尚未被分离克隆的抗白叶枯病显性基因Xa23源自普通野生稻(Oryza rufipogon)，它具有广谱抗性(章琦等，2000)。另一个已经被分离克隆的抗白叶枯病基因Xa27来自于四倍体小粒野生稻(Orzyaminuta)，该基因抗白叶枯病菌菲律宾小种2、3、5和6(Amante-Bordeos等，1992；Gu等，2005)。此外，尚未被分离克隆的抗白叶枯病基因Xa29(t)和Xa30(t)是分别从药用野生稻(Orzya officinalis)和普通野生稻中鉴定出的(谭光轩等，2004；王春连等，2004)。

发明内容

本发明的目的是分离克隆小粒野生稻(Oryza minuta)中携带的抗白叶枯病基因Xa3/Xa26-3和包含调控这个基因的启动子的DNA片段，利用这个基因改良水稻品种或其他植物抵御病害的能力。

本发明涉及分离和应用包含Xa3/Xa26-3基因的DNA片段，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：1所示，它的编码序列如序列表SEQ ID NO：1中第6072-8979和9084-9451位所示。该基因(片段)赋予水稻对由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)所引起的病害产生特异性的抗病反应。这一发明适用于所有对该病原菌敏感的植物。这些植物包括单子叶植物和双子叶植物。除上述所述的如SEQ ID NO：1所示的DNA片段外，本发明所定义的基因还包括基本上相当于SEQ ID NO：1所示的DNA序列，或者其功能相当于SEQ

ID NO：1所示序列的亚片段。对序列表SEQ ID NO：1所示序列进行生物信息学分析表明，该DNA序列编码一种受体蛋白激酶，它包含细胞外的富亮氨酸重复(leucine-rich repeat，LRR)结构域和细胞内的蛋白质激酶结构域。

可以采用已经克隆的Xa3/Xa26-3基因作探针，从cDNA和基因组文库中筛选到本发明的基因或同源基因。同样，采用PCR(polymerase chain reaction)技术，也可以从基因组、mRNA和cDNA中扩增得到本发明的Xa3/Xa26-3基因以及任何感兴趣的一段DNA或与其同源的一段DNA。采用以上技术，可以分离得到包含Xa3/Xa26-3基因的序列或者包含一段Xa3/Xa26-3基因的序列，将这一序列与合适的载体连接，可以转入植物细胞，并表达Xa3/Xa26-3基因，产生抗病转基因植物。采用这种转基因技术创造抗病植物是传统育种技术所不能达到的。

将克隆的抗病基因转入感病的植物，有助于产生新的抗病植物。特别是可以用遗传转化技术在植物中累加多个抗病基因，而不会产生传统育种技术中伴随出现的将遗传连锁累赘引入需改良的品种。同时，抗病基因的克隆可以克服传统育种不能在植物种间转移抗病基因的问题。本发明能够进一步提供或应用利用上述DNA片段获得的抗病的转基因植株和相应的种子，可以用有性杂交的方式将本发明的基因转入其它的植物。

本发明为增强水稻对白叶枯病的抗性提供了一种新的方法。这种方法包括将来源于野生稻的Xa3/Xa26-3基因和它的调控DNA序列与遗传转化载体连接、转入感病水稻，改良水稻对白叶枯病的抗性。

更详细的技术方案见《具体实施方式》所述。

附图说明

序列表SEQ ID NO：1.是本发明克隆的Xa3/Xa26-3基因的DNA序列。

图1.本发明鉴定和分离克隆水稻抗白叶枯病基因Xa3/Xa26-3以及验证Xa3/Xa26-3基因功能的流程图。

图2.籼稻品种明恢63中Xa3/Xa26基因和MRKa基因的结构及用于制备DNA探针的PCR引物(箭头)位置。

图3.Xa3/Xa26基因片段的DNA探针与7个BAC克隆的杂交结果。

图4.籼稻品种明恢63和小粒野生稻中Xa3/Xa26基因家族成员的分布和序列同源性。每一个箭头代表一个Xa3/Xa26家族成员和转录方向。Xa3/Xa26和Xa3/Xa26-3基因下游约有1.4kb核苷酸序列同源程度达到83％。13.7kb区段是用于遗传转化的DNA片段。

图5.遗传转化载体pCAMBIA1301的结构。

图6.T1代遗传转化植株中的报告基因GUS与抗病表型共分离。说明与GUS基因紧密连锁的Xa3/Xa26-3基因与抗病表型共分离。对照为水稻感病品种牡丹江8(遗传转化的受体)。病斑面积为接种白叶枯病菌PXO61两周后的数据。

图7.与对照牡丹江8相比，携带Xa3/Xa26-3基因的遗传转化植株(D103OM26)对不同白叶枯病菌的抗性都增强了。

图8.Xa3/Xa26-3基因结构。箭头示用于基因结构分析的PCR引物位置和方向。“ATG”和“TGA”分别是翻译起始密码和终止密码。数字示每一种结构的核苷酸数目。

具体实施方式

本发明的前期研究结果显示来源于籼稻(Oryza sativa L.ssp.indica)品种明恢63的抗白叶枯病显性基因Xa3/Xa26属于多基因家族成员；这个家族的成员以串连排列的形式位于水稻11号染色体的长臂(Yang等，2003；Sun等，2004，2006；Xiang等2006)。在明恢63中，Xa3/Xa26家族由4个成员(Xa3/Xa26、MRKa、MRKc和MRKd)组成，它们的编码区之间的DNA序列同源性为60％至78％(Sun等，2004)。Xa3/Xa26编码一个富亮氨酸重复(leucine-richrepeat，LRR)蛋白激酶类蛋白(Sun等，2004)。根据本发明中的目标基因与Xa3/Xa26基因序列同源性分析和它在小粒野生稻(Oryza minuta)的Xa3/Xa26家族中与其他成员的相对应位置关系，确定该基因是Xa3/Xa26基因的又一个等位基因，故命名为Xa3/Xa26-3基因(视Xa3/Xa26基因为Xa3/Xa26-1)。

以下实施例中进一步定义本发明。图1描叙了鉴定和分离克隆Xa3/Xa26-3基因以及验证Xa3/Xa26-3基因功能的流程。根据以下的描述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征、并且在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明做出各种改变和修改，以使其适用各种用途和条件。

实施例1：从小粒野生稻中分离克隆Xa3/Xa26-3基因和基因结构分析

1.鉴定携带Xa3/Xa26基因同源序列的大片段DNA

本发明研究人员首先用Xa3/Xa26基因的特异性PCR引物RKb-3’race2(5’-TGGTCAAATACCGGAAGGAG-3’)和RKb-2R(5’-CAGTCCACCACATGGACAAG-3’)和Xa3/Xa26家族成员MRKa基因的特异性PCR引物RKa-11L(5’-TTGGCTTGAACGGCTTAACT-3’)和RKa-1R(5’-AAGATGAAATATGCTCGGTGGT-3’)从水稻品种明恢63(中国大面积推广的水稻品种)中扩增出Xa3/Xa26基因和MRKa的DNA片段，扩增长度各约1kb(图2)。将这两段PCR扩增产物混合作为探针筛选小粒野生稻(Oryzaminuta)的基因组BAC(bacterial artificial chromosome)文库(Ammiraju等，2006)，鉴定了7个阳性BAC克隆。这7个阳性BAC克隆(Ammiraju等，2006)由美国University of Arizona大学的Rod Wing教授惠赠。将筛选到得BAC克隆扩大培养，采用标准碱裂解法分离提取BAC质粒(Sambrook和Russell，2001)。将所得BAC质粒用HindIII完全酶切、电泳、转移至尼龙膜；然后用上述Xa3/Xa26基因片段探针和MRKa基因片段探针分别与载有BAC质粒的尼龙膜杂交(Sambrook和Russell，2001)。用Xa3/Xa26基因片段作探针的杂交结果显示BAC 克隆OMBa0293H21与其他三个BAC克隆有相同的杂交带型，它们的杂交带最多(图3)，推测这些BAC克隆可能覆盖Xa3/Xa26基因家族区段。故选择对OMBa0293H21克隆进行测序。

2.BAC克隆的shotgun文库的构建

本发明研究人员首先构建了用于测序的OMBa0293H21克隆的shotgun文库。采用超声波法构建shotgun文库(Sambrook和Russell，2001)。用超声波处理OMBa0293H21克隆的环形质粒1.6秒(超声破碎仪Soniprep 150为SANYO公司产品，具体操作参考该仪器的使用说明书)。通过1％琼脂糖凝胶电泳分离大约2.0-3.5kb的DNA片段，用UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒(购自中国上海生工生物工程有限公司)从电泳凝胶中纯化DNA。纯化后的DNA用T4DNA聚合酶补平末端，与限制性内切酶SmaI酶切的去磷酸化的pUC19载体(购自美国Amersham Bioscience公司)平端连接，电转化大肠杆菌DH10B(购自美国Invitrogen公司)(电转化仪为eppendorf公司产品，本实施例所用电压为1800V，具体操作参考该仪器的使用说明书)。挑克隆检测插入片段大小：提取阳性克隆质粒，并用空pUC19质粒进行电泳比较，剔除假阳性克隆及小片段克隆，或用EcoRI和HindIII双酶切重组质粒，检测插入片段大小，筛选插入片段大小合适的克隆作为shotgun文库用于测序。

3.Shotgun文库的测序

采用M13-F(5′-GTAAAACGACGGCCAGT-3′)和M13-R(5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′)通用引物(购自中国上海生工生物工程有限公司)、美国Perkin Elmer公司的测序试剂盒(BigDye Kit)，根据试剂盒说明书以双脱氧核苷酸末端终止法分别从shotgun文库中随机挑选的克隆两端测序。

4.原始序列的拼接

使用Squencer 4.5软件(美国Gene Codes Corporation)拼接序列。用Squencer4.5软件自动去除末端测序较差的序列和pUC19载体序列；软件没有去除干净的序列则用手工删除。BAC载体的碎片序列和污染的细菌DNA序列通过和BAC序列进行比较或BLAST分析的方法(Altschul等，1997)加以去除。用Squencer4.5软件对两条序列进行拼接的参数是：重叠序列长度(Mini Overlap)大于20bp(base pair)，重叠序列的一致性(Mini Match)大于85％。每一个碱基的确定都要参照重叠在该位点的多个shotgun片段序列。对于由一个shotgun片段序列所覆盖的区域要再次测序验证，以确保碱基的准确性。

5.DNA序列分析

首先用Blastn和Blastx方法(Altschul等，1997)分析所得序列。然后采用Fgenesh(http://www.softberry.ru/berry.phtml)(Salamov和Solovyev，2000)和GeneMark.hmm(http://exon.gatech.edu/GeneMark/eukhmm.cgi)(Besemer和Borodovsky，2005)软件分析预测基因结构，分析结果进一步用Blastp方法(Altschul等，1997)进行确定。两条或多条核苷酸或氨基酸序列的比较分析使用BLAST 2 sequence方法(Tatusova等，1999)和ClustalW方法(http://www.ebi.ac.uk)。

对BAC克隆OMBa0293H21测序和序列拼接形成九个大的序列片段，其长度分别为71.3kb，24.9kb，17.6kb，11.1kb，8.1kb，6.6kb，4.6kb，4.1kb和1.1kb。序列分析发现在71.3kb的片段上有5个基因编码LRR-蛋白激酶类蛋白，与水稻抗白叶枯病基因Xa3/Xa26编码的产物有不同程度的同源性，它们被命名为OmRKa、OmRKb1、OmRKb、OmRKg和OmRKc(图4)。用Fgenesh、GeneMark.hmm和Blastx分析表明，OmRKa和OmRKb是2个完整的基因，OmRKb1和OmRKg是不完整基因，OmRKc是假基因(图4)。OmRKa和OmRKb的转录方向相同，而OmRKc的转录方向与OmRKa和OmRKb相反(图4)。

将该区段与水稻品种明恢63中Xa3/Xa26基因家族区段进行比较分析。发现小粒野生稻中的OmRKa基因和明恢63中的MRKa基因的同源性达到80％，小粒野生稻中的OmRKc基因和明恢63中的MRKc基因的同源性达到83％，小粒野生稻中的OmRKb基因和和明恢63中的Xa3/Xa26(又称为MRKb)基因同源性高达95％；并且OmRKb和MRKb基因下游约有1.4kb区段同源性达到83％，所以OmRKb为Xa3/Xa26的等位基因，我们命名该基因为Xa3/Xa26-3(图4)。

实施例2：Xa3/Xa26-3基因的功能验证

1.遗传转化载体的构建

本发明所用载体是pCAMBIA1301(图5)，它是常用的水稻遗传转化载体(Sun等，2004)。用限制性内切酶SmaI从BAC克隆OMBa0293H21上酶切后回收13.7kb包含Xa3/Xa26-3基因的编码区、启动子以及尾部序列的片段(图4)。同时，用限制性内切酶SmaI酶切遗传转化载体pCAMBIA1301；酶切完毕，用SAP(虾碱性磷酸酶)去磷酸化；用氯仿∶异戊醇(体积比24∶1)抽提、纯化酶切产物。用包含Xa3/Xa26-3基因的酶切回收片段和纯化好的载体做连接反应。通过酶切验证阳性克隆，获得的重组质粒被命名为D103O。

2.遗传转化和T₀代遗传转化植株分析

采用农杆菌介导的遗传转化方法(Lin和Zhang，2005)将D103O导入水稻感病品种牡丹江8(Oryza sativa L.ssp.japonica)。获得的遗传转化植株被命名为D103OM(该命名的前面部分即D103O为遗传转化载体名称，M代表水稻品种牡丹江8)。本发明共获得阳性独立转化植株19株，对全部阳性转化植株接种白叶枯病菌株PXO61。白叶枯病菌接种采用剪叶法对成株期的水稻进行接种(Sun等，2004)。白叶枯病菌株PXO61由菲律宾国际水稻研究所惠赠(Sun等，2004；Wu等，2008)。白叶枯病菌的培养遵循已经公开发表的方法(Sun等，2004)。接种14天后调查病斑面积(病斑长度/病叶长度×％)。与对照牡丹江8相比，所有阳性遗传转化植株的抗性显著增强(表1)。

表1.T₀代遗传转化植株(D103OM)接种白叶枯病菌株PXO61的表型

(1)每株遗传转化基因植株接种3-5片叶，14天后调查病斑和病叶长度，每个数据来自多个叶片的平均值±标准差。

3.遗传转化植株的共分离分析

为了验证遗传转化植株的抗病能力增强是否与Xa3/Xa26-3基因转入相关，对在T₀代抗性增强的2株遗传转化植株(D103OM25、D103OM43)的T₁代家系进行基因型和抗性共分离分析。在孕穗期时接种白叶枯病菌PXO61，接种14天后调查病斑面积。同时取样抽取DNA，采用遗传转化载体所携带的报告基因GUS(β-葡萄糖醛酸酶)的PCR引物Gus2F(5’-CCAGGCAGTTTTAACGATCAGTTCGC-3’)和Gus2R(5’-GAGTGAAGATCCCTTTCTTGTTACCG-3’)扩增检测阳性遗传转化植株。分析发现遗传转化植株的抗性增强和GUS基因共分离(图6)。说明遗传转化植株的抗性增强是因为Xa3/Xa26-3基因的存在，Xa3/Xa26-3是一个抗白叶枯病基因。

4.遗传转化植株的抗谱分析

对来源于T₀植株D103OM26的T₁代遗传转化家系和对照牡丹江8在孕穗期接种不同白叶枯病菌株，分析遗传转化植株的抗谱。接种采用上述剪叶法。菲律宾白叶枯病菌株PXO61、PXO71、PXO112、PXO341由菲律宾国际水稻研究所惠赠(Sun等，2004；Wu等，2008)。中国白叶枯病菌株JL691是常用菌株(Sun等，2004)。日本菌株T7174也是常用白叶枯病菌株(Cao等，2007)。与遗传转化受体水稻品种牡丹江8相比，携带Xa3/Xa26-3基因的遗传转化植株显著增强(P＜0.01)了对不同白叶枯病菌株的抗性(图7)。遗传转化植株的病斑面积只是对照牡丹江8的30％至78％。这些结果说明Xa3/Xa26-3基因对白叶枯病菌具有广谱抗性。

5.Xa3/Xa26-3基因结构和编码产物分析

本发明研究人员利用转基因植株(D103OM)分析了Xa3/Xa26-3基因的结构。转基因植株的总RNA的抽提采用TRIzol Reagent(美国Invitrogen公司)，操作方法按该公司提供的说明书进行。

先将用于反转录的总RNA用无RNA酶活性的DNA酶I(美国Invitrogen公司)处理，室温放置15分钟，去除总RNA中可能存在的DNA污染；再将总RNA在65℃处理10分钟，灭活DNA酶I。用SuperScript III反转录酶(美国Invitrogen公司)，按试剂供应商提供的说明书进行反转录。采用跨越预测内含子位置的PCR引物RKb3F和RKb2R(表2)扩增基因组DNA和RNA反转录产物，RT-PCR产物比基因组扩增产物小，说明该区段确实存在一个内含子(图8)。采用Xa3/Xa26-3基因区段的其它引物(表2)进行反转录(RT)-PCR分析，没有再发现其它内含子的存在。

基因末端序列分析采用Clontech公司SMARTer RACE cDNA Amplification Kit试剂盒，根据试剂盒说明书，通过RACE(rapid amplification of cDNA end)分析方法，确定Xa3/Xa26-3基因的5’和3’末端序列。

表2.用于RT-PCR和RACE分析的基因特异性引物

采用上述DNA测序方法，对RT-PCR产物进行测序。比较分析Xa3/Xa26-3基因的cDNA序列和基因组序列，确定该基因由3601个核苷酸组成，包含两个外显子和一个内含子(图8)。第一个外显子由2954个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的6026-8979bp处)，其中包含由46个核苷酸组成的5’端非翻译区(untranslated region，UTR)(位于序列表SEQ ID NO：1的6026-6071bp处)和2908个核苷酸组成的编码区(位于序列表SEQ ID NO：1的6072-8979bp处)；内含子由104个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的8980-9083bp处)；第二个外显子由543个核苷酸组成(位于序列表SEQ ID NO：1的9084-9626bp处)，其中包含由368个核苷酸组成的编码区(位于序列表SEQ ID NO：1的9084-9451bp处)和由175个核苷酸组成的3’端UTR(位于序列表SEQ ID NO：1的9452-9626bp处)。

Xa3/Xa26-3基因编码一个由1092个氨基酸组成的LRR受体激酶类蛋白质。XA3/XA26-3蛋白与XA3/XA26蛋白的氨基酸一致性为92％，氨基酸的同源性为95％。

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序列表

<110>华中农业大学

<120>小粒野生稻抗白叶枯病主效基因Xa3/Xa26-3和它在改良水稻抗病性中的应用

<130>

<141>2010-03-25

<160>2

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>13653

<212>DNA

<213>Oryza sativa

<220>

<221>gene

<222>(6026)..(9626)

<220>

<221>5’UTR

<222>(6026)..(6071)

<220>

<221>CDS

<222>(6072)..(8979)

<220>

<221>Intron

<222>(8980)..(9083)

<220>

<221>CDS

<222>(9084)..(9451)

<220>

<221>3’UTR

<222>(9452)..(9626)

<400>1

gggaacgaga ggagggggag ggagtaggtc gagagggaag tcggcccgag tggaggaggg 60

aggtaaagtg gactttacca gagaaaatga aagagggagt ttgagggctc agattcgaaa 120

tccgattttg cggttttctc cgggattgag acgagagggg gaacacgaga ccaggcacac 180

gacaagactt gaccaagaac aaaattttcg caaatagggt ttttagagaa ctaggttttc 240

ccactaacgc cacgacgaaa caggcgttac atatttttaa cacaaaaaac atattatcaa 300

aatatattca atgttagatt taatgaaact aatttgatat ttcagatttt gctaaatttt 360

tctataaact taatcaaact taacaaagtt tgactagaaa aaaattcaaa tgacttataa 420

tatgaaatgg agagagtacc gatttcttgc gttgctgttg catctgtata aatctctctg 480

tgagtgtgtg ttgttatctt gttgcttcta agttccctct gttacatttt ctggttgcag 540

tccaggttcc ctggaagatc aatgctgcta caagtaaaac atccttctcc tcggcaatga 600

ttccccttca caatcacgcg aagtgagccg aaaatgcttc aatacggacg ttcggtgcgg 660

ataaaaaatc ggaccccaca tgtaaccact catttcttat cctcccatct ccttcgtctt 720

tcacgcaggg cggagaagac agccattgcg gcgtcgcctt cgcgcttccc ctacgaagcc 780

aaccgccacg cagctccctc acgcttgctc cttcctcctc cacctctgac tgctgtagca 840

tgctgggcga cggcagatgg taaggccacc ttcctcatgt cccccatcta gatccatcaa 900

tctagttgga gcgtgctttc tgtgcttggt agccggcacc gcaatggcga aagaagaggg 960

ggaaggaagc acagtttgaa agaaatggag tgctttttga tgggtccggt caccggagca 1020

gaggaagaag atggatccag ccatcgaagt agaagaagac agatctagtc acctaagtgg 1080

atgaaaaaga cagacggtag agttgttgca atctattgta tatgtttgtt gcactctatt 1140

ttatttacgt gtttcaccct cgttttatcg gatgttgcac atgatgtaca atgtgtgttt 1200

cttcgatgtt gcagagtaga gtcttgatgt tgcgggtagt gttttttcat tgtttcatct 1260

gattgaaaca ttctttacca agcgatgaaa tatttctcat cgagtaatga aatatcttaa 1320

acatctttta ttgaaacatt attcattgag tgatgaaaca tctgaaatat ttttttacat 1380

gtgatgaaac accgtctgat ttgtagtctt tttttaggtg ataatatctt aatgctattt 1440

atttatacct agcttagtgg tcccaatcta gattgtttct ctctggtgga atttcgctat 1500

gattctatac tgaaaaaaat ttcttaggag tctaaccaag ttcgtcacag gtcttgacca 1560

atcaaattat ttgcttactt ctacatgatt aagtgcatgc ctgcctgcaa tatactacct 1620

ccttttcaaa atgtacgatg ctgttgactt ctcgtatgac gttttcaaaa tgtacgatgc 1680

cgttgacttc tcgtatgacg tttgattata cgtcttattc aaaaaatcta ttatatatta 1740

aaaatccatt aaacttccta caaaaagtca ccatgtggca cttctataaa cactcctatg 1800

ccgccacgtg tcatatctcc aaattaagag aaaatctata gattctgaaa aaaggaaaaa 1860

tatccaacca tcgatttcac ttaaatcggt gatccattat tttagatcat tagattagat 1920

ctattaaata aagcaaatcc ctccctccta actcccgtat atgtacatag aagtagaaaa 1980

agaatacgta ctaccctatt ttcctggaga aaaaggtcga aaacaaaata cactattcat 2040

caggaaaaaa gcaaaaaaaa acatacaaac atatttgtac ggccacctga agtagtgaaa 2100

aaacacagaa aaaagcatac gtcccctcgc ctgattgtag aaaaacatta tattattaca 2160

attaaattta caatgctaaa cttgtattaa ctgtatattt taatttgaga aataattatt 2220

ttactttggg ttttattcta aatttatatg tcacccaaat aatcataaaa aatataaaac 2280

aactaaaact gatatttaaa aattactgac tggtatgaaa ttatgatatg ttaaaataaa 2340

tttactacta gatttataaa aaaaataaaa taaaactaat tccatttatt tatttcatca 2400

taaaaataat aacaaaaata acaatattga ttataccatt atacataact tcataaatat 2460

ggataacaaa attatatcta tgattattcg aagtaaatat tttctttgtt atgaaacttt 2520

gataagctat aataacatta aagtcctaat aacattataa aattgtcata taaactactt 2580

tcatgtattc atatttttaa ttttcattgt gaatatattg caagaaagac aagatacaaa 2640

gctcttgcta tggttcaacc tacacaggtt atacgtggat aacttaaagg tatcaatcat 2700

atgtctcatt aatcttgaat gtgtcagccc cacttacaaa ttcgtatcca ccaattgcta 2760

acgaggtatt tgtgcatcat ctcatatatc ttagatatga tgagcatgtg taccattaga 2820

cgtataataa agataaaggg cattttataa tatagattat atcattctat atcattttat 2880

aaacatacat agccaaagtc atgtgtgatt tactttaaat ctaactaaaa aaatcatgtc 2940

tacaataata agaatcatag aaatttaaaa aacagaaaaa ctcaagagca tataccctaa 3000

tagtaaataa aaatatcaat ggctaatccc taggacatat aaaattataa aggtttgtta 3060

aacgtcctat agaaccctcc tacagtgtct attaaagcct ttaacaaata agagaaaact 3120

ttaaaattct tctataatag acaaagcatc caacacttaa tcctcattaa tttaatgctc 3180

ccattaattt tagctattgg tcatgtcaat gggtatgtgt atacacacat tatttaataa 3240

aaaaaaccat ccattcaagc gtgttttgta atagaaaatt atttgagatg tcaggtgagg 3300

ttgtagtgac ctgttgcaag gttcacaggg ttgtagcaag aatgaccagc atcaagttgc 3360

atgaggttgc cagccatcta atgtatcact aaaagagccc ataggagata tttgtgtttt 3420

gttgattaga gccacaacca aaagaaggca acaagagaac cccaacacaa ataataattt 3480

ttatgaataa accttctctc aactcaagta tctatgtaat attatttaag tcgcatcagc 3540

ttgaaacatg cataatttga taacatggta tatctagaag gctatatgtt agaacattca 3600

attaacccac cttagaaata ataatactta gcaagaactc atgcatgtaa caaatttcta 3660

tctttaattt tgatatttaa ttttatcact gaaaaggggg agatagagta tgtgaatatt 3720

gtccaatttg caagctaaat gtttttttaa atgtgatagt tcagttggtt actgattctc 3780

aagtattatc atactattca agagtagagc aagcaataat catatccaaa acagatacaa 3840

agaacttaca tatcatagat aattttaaca tttagaaaca cgaagatgcc tgcccaaccg 3900

cgtgggctac cttcctagtt aatataaata tgtaaaggta taacttaaga ttataattta 3960

tttgatgata aaacaagtat ttatgtatat atatatatat ttaataaaat gaatgatcaa 4020

acgctatacg aaaaatcaac ggcgtcgtgc attttgaaat ggaggaagta tttttttcga 4080

ggtaatcgtt atgtttgagg aaatgtggca tgagttcacc acttgccaac ttggaatata 4140

acacatcgta tcgttagtgt tccatgcact aaaagtctct ttctttcccc tttggaatga 4200

gaacaatata gcttggtaat actgttcatc ttattcgcct ttttcctcct ttggaaaggg 4260

acagttgagc ggtggtctgg tggttacatc taaaacatgc catgagaagc tttggcactg 4320

tgtgtcttgt gcttcaaatg gctcgacatt acaacctaat aaatctgaac actttgttcc 4380

atcttggact tcagagcact ggtacttcag tacatgccca agggtagctt agaagcactc 4440

tgcactcaga acaaggaaag caattaggct ttctccagag gttggttatt atgctagatg 4500

tgtcaatggc aatggaatac ctacatcatg agcactatga ggtggtctta cactacgatt 4560

tgaagcctag caacgtacta tttgacgatg ataggatggc acatgtggca gactttggca 4620

ttgcaaggtt attgttaggt gatgacaact ccatgatctc agctagcatg ccaggaacag 4680

ttgggtacat ggcaccaggt aattagtact agtttttgtt gtcttgctca aacattgcct 4740

gatattttat tattatcgag tagggtgcaa ctaatttttg gttgtctatc tttctgcgca 4800

gagtatgggg ctcttggaaa agcatcacag aagagcgacg tgttcagcta cgggatcatg 4860

ctactcgaag tgttcactag gaagagatcc acagatgtta tgtttgtagg agaactgaac 4920

atcaggcagt gggttcacca ggcgtttcct gcagagcttg tccatttgat ggactgccaa 4980

cttctacagg atggctcttc ttcttcttcc agtaacatgc atggcttcct tgtgccagtg 5040

ttcgagctgg gcttgctctg ctcagctgac tccccggagc aaaggatggc gatgagcgat 5100

gtggtcgtga cactgaagaa gattaggaag gactatgtca aattgatggc aaccacaggg 5160

agcgctgtgc agcaatgatc catcgctctg tcgtggtata tgagcgaata aaatatatat 5220

catttgcatc catttcttct tctgcatcag gaatagcatc agtgcatgcc cagtgatcga 5280

ttaccctatt tgtgtacggt tgaattgaat atatctgtgg tgcttcaggt tcagcaataa 5340

tttagttggt gtaaaaatgt gattgaactg ttggtcaata aatttgcatg atgaaaatgg 5400

gagtagatga tgtgctgctt atgttttctt atttctggcc aaaataaata aaaaaaagaa 5460

tattctgggc acagcatcac aactccggct caatcagcct taaacagcca cagttaacag 5520

tcctaagcat agaaacttaa caagcttttc aggcaaacaa aacatcaaaa ggtccacaag 5580

acaacagggt cttcagggag cacatcttca ggctgtgatg caaaaaggat ctgacagccg 5640

tatgataact actgaacagg tcgtgcatat tgataaggtc cgccactaac cacccaatca 5700

acaaaagagt aaggccgttg ccgtcaaatt gtttgacaga aaaaaaaaat ttcagtgagt 5760

gtatggctga tgaccgagcg acacagctat catatctagc gtgtcgtgca caccgcgatc 5820

tgctgaatat atattttgtg atgactttat tttccagcgt ttacctagta gtgctgccaa 5880

atatttatga ctggaatttg actggaggga gtatcattta agtttctttc actttctgag 5940

agcaacagtc aaggtcgtcc gagatgttga aagcaagcta gcactacgta ctgtgctaaa 6000

taaagctcaa cttgatcgtc actgtgaagt atgatgcact cttgttgcca atgcatcaca 6060

cacaaccaga c atg gcg ctt gga ttg cca gta tgg att ttc att gcg ttg 6110

Met Ala Leu Gly Leu Pro Val Trp Ile Phe Ile Ala Leu

1 5 10

ttg atc gct ttg tcc act gtg cct tgt gct tcc tct cta ggt ccg agc 6158

Leu Ile Ala Leu Ser Thr Val Pro Cys Ala Ser Ser Leu Gly Pro Ser

15 20 25

aac agt agc ggc agt gac acc gac ctc gct gca ctt ttg gct tta aaa 6206

Asn Ser Ser Gly Ser Asp Thr Asp Leu Ala Ala Leu Leu Ala Leu Lys

30 35 40 45

tcg cag ttc tct gat cct gat aac att ctt gcc ggc aac tgg acc att 6254

Ser Gln Phe Ser Asp Pro Asp Asn Ile Leu Ala Gly Asn Trp Thr Ile

50 55 60

ggc acg cca ttc tgc caa tgg atg ggt gtc tcg tgc agc cac cgc cgg 6302

Gly Thr Pro Phe Cys Gln Trp Met Gly Val Ser Cys Ser His Arg Arg

65 70 75

cag cgc gtc acc gcc ctg gaa ctg cca aac gtt cct ctc caa gga gag 6350

Gln Arg Val Thr Ala Leu Glu Leu Pro Asn Val Pro Leu Gln Gly Glu

80 85 90

ctc agc tct cac ctt ggt aac att tct ttt ctc ttg atc ctc aac ctc 6398

Leu Ser Ser His Leu Gly Asn Ile Ser Phe Leu Leu Ile Leu Asn Leu

95 100 105

acc aac acc ggc ctc aca ggc ttg gtg ccg gat tat ata gga agg cta 6446

Thr Asn Thr Gly Leu Thr Gly Leu Val Pro Asp Tyr Ile Gly Arg Leu

110 115 120 125

cgt cgc ctt gag atc ctt gat ctc ggc cac aat gcc ttg tca ggt ggc 6494

Arg Arg Leu Glu Ile Leu Asp Leu Gly His Asn Ala Leu Ser Gly Gly

130 135 140

gtc cca atc gcc ata ggg aac ctc acg agg ctt cag cta ctt aat cta 6542

Val Pro Ile Ala Ile Gly Asn Leu Thr Arg Leu Gln Leu Leu Asn Leu

145 150 155

cag ttt aac cag cta tat ggt cca atc cca gca gag ctg cag ggg ctg 6590

Gln Phe Asn Gln Leu Tyr Gly Pro Ile Pro Ala Glu Leu Gln Gly Leu

160 165 170

cac agt ctt gac agc atg aat ctc cgt cac aat tac ctc act gga tca 6638

His Ser Leu Asp Ser Met Asn Leu Arg His Asn Tyr Leu Thr Gly Ser

175 180 185

att ccg gac aat ctg ttc aac aac aca tct ttg cta act tat ctc aac 6686

Ile Pro Asp Asn Leu Phe Asn Asn Thr Ser Leu Leu Thr Tyr Leu Asn

190 195 200 205

gtt ggt aac aat agc ctg tca gga ccg ata ccg ggt tgc atc ggt tcc 6734

Val Gly Asn Asn Ser Leu Ser Gly Pro Ile Pro Gly Cys Ile Gly Ser

210 215 220

ttg cca atc ctc caa tac ctt aac ttg cag gcc aat aac tta act ggg 6782

Leu Pro Ile Leu Gln Tyr Leu Asn Leu Gln Ala Asn Asn Leu Thr Gly

225 230 235

gcg gtg cca cca gcc atc ttc aac atg tct aaa tta agt act att tct 6830

Ala Val Pro Pro Ala Ile Phe Asn Met Ser Lys Leu Ser Thr Ile Ser

240 245 250

ctt ata tcg aat ggt tta act ggc cct atc cct ggt aat aca agt ttc 6878

Leu Ile Ser Asn Gly Leu Thr Gly Pro Ile Pro Gly Asn Thr Ser Phe

255 260 265

agc ctc cca gtt cta caa tgg ttc gcc atc agt aaa aac aat ttc ttt 6926

Ser Leu Pro Val Leu Gln Trp Phe Ala Ile Ser Lys Asn Asn Phe Phe

270 275 280 285

ggt caa att cca ctg ggg ttc gca gcg tgt cca tac ctc caa gtt att 6974

Gly Gln Ile Pro Leu Gly Phe Ala Ala Cys Pro Tyr Leu Gln Val Ile

290 295 300

gcc ctg cct tat aat tta ttc gag ggt gtt ttg cca cca tgg ctg ggc 7022

Ala Leu Pro Tyr Asn Leu Phe Glu Gly Val Leu Pro Pro Trp Leu Gly

305 310 315

aag ttg acg agt ctt aat acc atc tcc ttg ggt ggg aat aac ctt gat 7070

Lys Leu Thr Ser Leu Asn Thr Ile Ser Leu Gly Gly Asn Asn Leu Asp

320 325 330

gct ggc ccg atc cct act gaa ctt agc aac ctc acc atg ctg gca gtc 7118

Ala Gly Pro Ile Pro Thr Glu Leu Ser Asn Leu Thr Met Leu Ala Val

335 340 345

tta gat ttg acg acg tgc aac ctg aca gga aac atc cct gca gat att 7166

Leu Asp Leu Thr Thr Cys Asn Leu Thr Gly Asn Ile Pro Ala Asp Ile

350 355 360 365

ggg cac cta ggc caa ctt tca tgg ttg cat ctt gcg agg aat caa cta 7214

Gly His Leu Gly Gln Leu Ser Trp Leu His Leu Ala Arg Asn Gln Leu

370 375 380

aca gga cct att cct gct tct ctt ggc aac ctt tca tcg tta gca atc 7262

Thr Gly Pro Ile Pro Ala Ser Leu Gly Asn Leu Ser Ser Leu Ala Ile

385 390 395

ctg cta ttg aaa gga aac ttg ttg gat gga tca tta cca gcg aca gtt 7310

Leu Leu Leu Lys Gly Asn Leu Leu Asp Gly Ser Leu Pro Ala Thr Val

400 405 410

gat agc atg aac tca cta act gca gtt gat gtt act gaa aac aat cta 7358

Asp Ser Met Asn Ser Leu Thr Ala Val Asp Val Thr Glu Asn Asn Leu

415 420 425

cac gga gat ctc aac ttc ctt tct act gtt tcc aat tgt aga aag ctt 7406

His Gly Asp Leu Asn Phe Leu Ser Thr Val Ser Asn Cys Arg Lys Leu

430 435 440 445

tct acc ctt caa atg gac ttt aat tat gtc acc gga agc ctc cca gac 7454

Ser Thr Leu Gln Met Asp Phe Asn Tyr Val Thr Gly Ser Leu Pro Asp

450 455 460

tat gtt ggg aac ctg tcg tca cag ctg aaa tgg ttc acg tta tct aac 7502

Tyr Val Gly Asn Leu Ser Ser Gln Leu Lys Trp Phe Thr Leu Ser Asn

465 470 475

aac aag tta act ggc acg ctt cca gct acc att tca aat tta act ggt 7550

Asn Lys Leu Thr Gly Thr Leu Pro Ala Thr Ile Ser Asn Leu Thr Gly

480 485 490

ctt gag gtg ata gat ctt tcg cat aac caa ctg cgc aat gca att cca 7598

Leu Glu Val Ile Asp Leu Ser His Asn Gln Leu Arg Asn Ala Ile Pro

495 500 505

gaa tca atc atg acg att gag aat ctc caa tgg ctt gac cta agt gga 7646

Glu Ser Ile Met Thr Ile Glu Asn Leu Gln Trp Leu Asp Leu Ser Gly

510 515 520 525

aat agc ttg tct ggc ttc atc cca tcg aat act gca ctt cta agg aac 7694

Asn Ser Leu Ser Gly Phe Ile Pro Ser Asn Thr Ala Leu Leu Arg Asn

530 535 540

att gta aaa cta ttc ctt gaa agc aac gaa att tct ggc tcc ata cca 7742

Ile Val Lys Leu Phe Leu Glu Ser Asn Glu Ile Ser Gly Ser Ile Pro

545 550 555

aag gac atg aga aac ctc act aat cta gag cac ctt cta ttg tct gat 7790

Lys Asp Met Arg Asn Leu Thr Asn Leu Glu His Leu Leu Leu Ser Asp

560 565 570

aac caa tta acg tca acc gtg cca cca agc tta ttt cat ctt gat aaa 7838

Asn Gln Leu Thr Ser Thr Val Pro Pro Ser Leu Phe His Leu Asp Lys

575 580 585

atc atc agg cta gat ctt tct cga aac ttc ttg agt ggt gca ctg ccg 7886

Ile Ile Arg Leu Asp Leu Ser Arg Asn Phe Leu Ser Gly Ala Leu Pro

590 595 600 605

gtt gat gta ggg tac ttg aag caa att acc atc ata gat ctc tct gac 7934

Val Asp Val Gly Tyr Leu Lys Gln Ile Thr Ile Ile Asp Leu Ser Asp

610 615 620

aac agc ttt tct ggc agc atc cca gat tcg ata gga gaa ctt caa atg 7982

Asn Ser Phe Ser Gly Ser Ile Pro Asp Ser Ile Gly Glu Leu Gln Met

625 630 635

tta aca cac ctg aat cta tca gct aac gaa ttc tat gat tct gtt cca 8030

Leu Thr His Leu Asn Leu Ser Ala Asn Glu Phe Tyr Asp Ser Val Pro

640 645 650

gac tct ttt ggt aat tta act ggc ttg caa act ttg gac ata tcc cat 8078

Asp Ser Phe Gly Asn Leu Thr Gly Leu Gln Thr Leu Asp Ile Ser His

655 660 665

aac agt att tct ggt acc atc cca aac tac ttg gct aat ttt acg acc 8126

Asn Ser Ile Ser Gly Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Ala Asn Phe Thr Thr

670 675 680 685

ctt gtt agc ttg aac cta tct ttc aat aaa cta cat ggt caa ata ccg 8174

Leu Val Ser Leu Asn Leu Ser Phe Asn Lys Leu His Gly Gln Ile Pro

690 695 700

gaa gga ggt atc ttt gca aac atc act tta caa tac ttg gtg ggg aac 8222

Glu Gly Gly Ile Phe Ala Asn Ile Thr Leu Gln Tyr Leu Val Gly Asn

705 710 715

tca ggg cta tgt ggt gct gcc cgt tta gga ttc cca cca tgc caa acc 8270

Ser Gly Leu Cys Gly Ala Ala Arg Leu Gly Phe Pro Pro Cys Gln Thr

720 725 730

acc tcc ccc aag aga aat ggt cac atg cta aaa tac ttg cta ccg act 8318

Thr Ser Pro Lys Arg Asn Gly His Met Leu Lys Tyr Leu Leu Pro Thr

735 740 745

ata atc ata gta gtt gga gtt gta gct tgt tgc ttg tat gta atg att 8366

Ile Ile Ile Val Val Gly Val Val Ala Cys Cys Leu Tyr Val Met Ile

750 755 760 765

aga aag aaa gct aac cat caa aag att tct gct ggt atg gct gac ctt 8414

Arg Lys Lys Ala Asn His Gln Lys Ile Ser Ala Gly Met Ala Asp Leu

770 775 780

atc agc cat caa ttt ctg tcc tat cat gag ctt ctt cgt gca acc gat 8462

Ile Ser His Gln Phe Leu Ser Tyr His Glu Leu Leu Arg Ala Thr Asp

785 790 795

gat ttc agt gat gat aac atg ttg ggc ttc gga agc ttt gga aaa gtt 8510

Asp Phe Ser Asp Asp Asn Met Leu Gly Phe Gly Ser Phe Gly Lys Val

800 805 810

ttt aag gga cag ttg agc aac ggt atg gtg gtt gcc ata aaa gtt ata 8558

Phe Lys Gly Gln Leu Ser Asn Gly Met Val Val Ala Ile Lys Val Ile

815 820 825

cac cag cat ctg gaa cat gcc atg aga agc ttt gac acc gag tgt cgt 8606

His Gln His Leu Glu His Ala Met Arg Ser Phe Asp Thr Glu Cys Arg

830 835 840 845

gta ctc cga att gct cga cat cgt aac ctg ata aag att ctg aac act 8654

Val Leu Arg Ile Ala Arg His Arg Asn Leu Ile Lys Ile Leu Asn Thr

850 855 860

tgt tcc aac ctg gac ttc aga gca ctc gta ctt cag tac atg ccc aag 8702

Cys Ser Asn Leu Asp Phe Arg Ala Leu Val Leu Gln Tyr Met Pro Lys

865 870 875

ggt agc tta gaa gca ctc ctg cac tca gaa caa gga aag caa tta ggc 8750

Gly Ser Leu Glu Ala Leu Leu His Ser Glu Gln Gly Lys Gln Leu Gly

880 885 890

ttt ctc aag agg ttg gat att atg cta gat gtg tca atg gca atg gaa 8798

Phe Leu Lys Arg Leu Asp Ile Met Leu Asp Val Ser Met Ala Met Glu

895 900 905

tac ctg cat cat gag cac tat gag gtg gtc tta cac tgc gat ttg aag 8846

Tyr Leu His His Glu His Tyr Glu Val Val Leu His Cys Asp Leu Lys

910 915 920 925

cct agc aac gta cta ttt gac gat gat atg acg gca cat gtg gca gac 8894

Pro Ser Asn Val Leu Phe Asp Asp Asp Met Thr Ala His Val Ala Asp

930 935 940

ttt ggc att gca agg ttg ttg tta ggt gat gac aac tcc atg atc tca 8942

Phe Gly Ile Ala Arg Leu Leu Leu Gly Asp Asp Asn Ser Met Ile Ser

945 950 955

gct agc atg cca gga aca gtt ggg tac atg gca cca g gtacttagta 8989

Ala Ser Met Pro Gly Thr Val Gly Tyr Met Ala Pro

960 965

ctagtttttg ttgtcttgct caagcattgc ctgatctttt attattatca agtagggtgc 9049

gactaatttt tggtaactaa cttttcttga gcag ag tat ggg gct cta gga aag 9103

Glu Tyr Gly Ala Leu Gly Lys

975

gcg tca cgg aag agc gat gtg ttc agt tac ggg atc atg ttg ttt gaa 9151

Ala Ser Arg Lys Ser Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ile Met Leu Phe Glu

980 985 990

gtg ttc act ggg aag aga ccc aca gat gct atg ttt gtg gga gaa ctg 9199

Val Phe Thr Gly Lys Arg Pro Thr Asp Ala Met Phe Val Gly Glu Leu

995 1000 1005

aac atc agg cag tgg gtt cac cag gcg ttt cct gca gag ctt gtc 9244

Asn Ile Arg Gln Trp Val His Gln Ala Phe Pro Ala Glu Leu Val

1010 1015 1020

cat gtg gtg gac tgc caa ctt cta cat gat ggc tct tct tcc agt 9289

His Val Val Asp Cys Gln Leu Leu His Asp Gly Ser Ser Ser Ser

1025 1030 1035

aac atg cat ggc ttc cat gtg cca gtg ttc gag ctg ggc ttg ctc 9334

Asn Met His Gly Phe His Val Pro Val Phe Glu Leu Gly Leu Leu

1040 1045 1050

tgc tca gct gac tcc ccg gag caa agg atg gcg atg agc gat gtg 9379

Cys Ser Ala Asp Ser Pro Glu Gln Arg Met Ala Met Ser Asp Val

1055 1060 1065

gtc gtg aca ctg aag aag att agg aag gac tat gtc aaa ttg atg 9424

Val Val Thr Leu Lys Lys Ile Arg Lys Asp Tyr Val Lys Leu Met

1070 1075 1080

gca acc aca gag aac gct gtg cag cag tgattcatca ctttcttgtg 9471

Ala Thr Thr Glu Asn Ala Val Gln Gln

1085 1090

gtatatgagc gaatgaaatg tatatccttt gcatccattt cttcttctgc attaggaaca 9531

gcatcaatgc atgcccagtg atcgaataac ccttttgctt ctatttgtgt atggttgaat 9591

tgaatatatc tacggtgctt caggttcagc aacaatttag ttggtgtaaa aatgtgattg 9651

aactgctggt cgataaattt gcatcatgaa aatgaaaatg ggagtagatg atgtgctgct 9711

tatattttct atttctggcc aaatatatat aaaaaaggat attctcactt gaaaacagaa 9771

tgaggtttgc tttgtagaca ttgggccttt gtcgtgggct tcactggtac cctgacatgc 9831

tttatagccc atgggcctat gtttgtaatg ggcttttgtt tctttcgaat gactcaaggt 9891

atattaaggc ctgtttgaac acttcggaat attttgcggt ggtagaggtg gacactaaac 9951

gacgacatag gtaaaatgat atatagaaac aaaattaatt caaacgatat actcatgcta 10011

taaatttgag atatggtaat taataaaact tcacataggc gacgaaccgt atatataaca 10071

gttaatgcat aataatggca gagatttcgt aatgaatcct ccaagattta ctcttgcgac 10131

tctatataaa cagctgcaaa atgaagctag gtagtcagca tatgcagtag cttccttcta 10191

aaagaagatc tctcatctca tcatggagca acttctcaac aagaaggctg cagtgttctt 10251

gttcatagct cttatggtga tggctaccgt aaatttctca tcctgtcata ctacacaagg 10311

tatatacctc tggaattaat ttctgcatca catccatata tattgaaaac agtttaactt 10371

gttctctttt gcaatggctc catcacatca atgaagctag aataatctga tatagcctga 10431

caagtatatg tgcattttac attttctgta tgaactattt tagctttctg taaaagtcgg 10491

gtcattaaca atataatgat cttttctcta aaaacatgca ttttacatgt gtatatatat 10551

aggtggatat ggagaaatgg attcgtgcat ggtccttgaa cgttgcgata tgaacaagtg 10611

catgagtgcc tgccaagtca acaagtacaa cggaggtcag tgcgacggcg agttgaacga 10671

ccactgctgc tgtactgatg aggccccgca caaatagtag atttctcttg tccaaatcaa 10731

cgacgacggt tgtataatca acggcaatct tattattgac tgatgcagag attccataat 10791

aaacttgcag ttgatgcttg taccaattca ctcagtatgt caattagtaa aaggagaatc 10851

ccgcgcaaat gtgcgggcaa cttatttatt ctttattaaa agaataaatt ttatttaaag 10911

actatagatt atcttatgtc attaaaaaag aaatatctct accctgaaat tgaccataga 10971

ctttgataca ctaaagtaac ttataagaat atctctcata ttaaaaaaga tcactatgtc 11031

ttggttatat ataaactttc ctatcacaac tacttattat tctctcgaaa aagctaagta 11091

tgtttttaat agatagaatt gcttattaaa aaacaaacat aatacatcat taatgcaata 11151

aaaaaatcat ctctatttca ttccgaagtg cacatgtctc acttgtgtct gaatgtataa 11211

atatttaaaa atgccgtttc tgtcaattaa tgaaagaaaa ccattaaaat tagatataaa 11271

tacccatata atgtgtgaag ttggtcatag ctgctaaggc tttattctct aatgccttga 11331

aacatgggtc ctgcattgac gtagccgtgc ccctcaagac tacgtcgatc ataattttga 11391

cacctagctc actctctaca catttataaa gaattgtatt agtaagtagg ctagttgagc 11451

tctacctcca agagtgaaag aagtcatagg ggattcgatg gactgatcct atgtatgtgt 11511

gtacaaacat aataacattt tagttttaaa tttgaggatt tggagggaaa gattaatatt 11571

ttttcaattg tacatgcata catatatttt tttctagggt tttggatgaa cagtacttat 11631

ttttctgtgg tagtggtact tacatgggag attaacaggg aaggatcact ttaatacatc 11691

taatctaata ttttaaaata atgggtatat tggtttaagt ataaatcaat ggtagatgtt 11751

ttgctttttt ctcatatttt tttatatttt caccaattta ttagagcatc aggttgttgc 11811

cttaggagcg tttgtagaga ttaggtggga gtgattagtt taacagatct aatctaataa 11871

ttaaaaatat tgggtcaacc catttaagta taatcaatcg ctagatgttt tacttttttg 11931

ttaggatttc ttggattttt tctaatttat tagagcacca tgtgatggtt taagattgtt 11991

tgtagcagtg ccacatggtg gcttagaagc gtttgtatga ttttcaatgg acttttaata 12051

tataataata tttttgtctc aatgattggt ggatagcact gcatatgtag aattgataca 12111

tgagtttgag tctgacataa aattaacaca taaggtaaga catgcatgag tcaaatacat 12171

tggatcttat ttattatata cccagattaa cttaagttta aactgcagag actgaagaga 12231

aaaagatcaa catatatgcc tcctattact cttaattaag acatatcgat ccggttcatt 12291

taatcattta ttttctatag tcctttacaa tatatctaga tttatattac tgtgataatt 12351

gatattttaa agcgaagata atatttttta atggtaatca caattagagt attttagttt 12411

ggaacattgt agattgcttt aaatattaaa gttatgatga tgtcaatcat gaaagattta 12471

agtaaagtta ttttgttttg tgaaaaataa tattgtttta acatataaat attttagaac 12531

agtggtatta ttttttggga gtgctaatca aaactaatta gaatatttta ttttgtgata 12591

ttattgagct aatctaatta tgcatgattg tgaaatgata tatgatgata tgatctacat 12651

tatctatttt cttcacaacc ttttttattg ttgggatgac atgcaaaagg ttagggtatg 12711

atttaaaata ctagagggaa tattttttgg aacgtcactc acgatttaag tgtttttgtt 12771

ttttcatatc tatcatattt aatttatttg tgcatgtttt ataaagtgat atatgatcat 12831

ataatatacg ttgtcatttt ttgtatttaa cagcttcaat tgcatactaa ggttaggatg 12891

tgataaaaat taaatatttt ttatgagtta aagaatgtag tggcttatat gggtatttga 12951

atggttaatt aagcttcatg aatacaatta taaagaatga taaaaagatt tatgtgcact 13011

agaggagggg gagggggagg gggaggggaa ggggggtggg ttggtggggg agaggggagg 13071

gaggtgtatt gtggggtttt ttttaaaaaa ataaatctaa tagataaata tagtgggcct 13131

accgatctaa tagataaaaa tagtaggcct accgatttat tagagagtca tatggcaact 13191

tagaagcatt tatagaagcc ccacgtgacg gcttgagaat gtttagtaga agtttaatgg 13251

actagggtaa tagctagtgt gtttatcttc atgaaatctt catcggctgc ttctagtaat 13311

ttgctttaga catgttaaaa taggccgatg agattagatc tgtttcaatt tatttattat 13371

cttgagtaag ccgatacagc tttgccctat cggctgggtt ataacaatgt gtcatcggct 13431

tatcggccga tcgaccattg ttttctgata tggtttactt gtttcttgtt gattgcagat 13491

caaatcaact ggcacgctct gcgtacgact aggcaagcca atttggacct gcactggagt 13551

taagcagatc tcccagaccg ccgtggtaac gcggaacccg ttttgttgct agacgggtcc 13611

aaattctgcg ccaacaaacc ccaagtacta aagcaacacc cg 13653

<210>2

<211>1092

<212>PRT

<213>Oryza sativa

<400>2

Met Ala Leu Gly Leu Pro Val Trp Ile Phe Ile Ala Leu Leu Ile Ala

1 5 10 15

Leu Ser Thr Val Pro Cys Ala Ser Ser Leu Gly Pro Ser Asn Ser Ser

20 25 30

Gly Ser Asp Thr Asp Leu Ala Ala Leu Leu Ala Leu Lys Ser Gln Phe

35 40 45

Ser Asp Pro Asp Asn Ile Leu Ala Gly Asn Trp Thr Ile Gly Thr Pro

50 55 60

Phe Cys Gln Trp Met Gly Val Ser Cys Ser His Arg Arg Gln Arg Val

65 70 75 80

Thr Ala Leu Glu Leu Pro Asn Val Pro Leu Gln Gly Glu Leu Ser Ser

85 90 95

His Leu Gly Asn Ile Ser Phe Leu Leu Ile Leu Asn Leu Thr Asn Thr

100 105 110

Gly Leu Thr Gly Leu Val Pro Asp Tyr Ile Gly Arg Leu Arg Arg Leu

115 120 125

Glu Ile Leu Asp Leu Gly His Asn Ala Leu Ser Gly Gly Val Pro Ile

130 135 140

Ala Ile Gly Asn Leu Thr Arg Leu Gln Leu Leu Asn Leu Gln Phe Asn

145 150 155 160

Gln Leu Tyr Gly Pro Ile Pro Ala Glu Leu Gln Gly Leu His Ser Leu

165 170 175

Asp Ser Met Asn Leu Arg His Asn Tyr Leu Thr Gly Ser Ile Pro Asp

180 185 190

Asn Leu Phe Asn Asn Thr Ser Leu Leu Thr Tyr Leu Asn Val Gly Asn

195 200 205

Asn Ser Leu Ser Gly Pro Ile Pro Gly Cys Ile Gly Ser Leu Pro Ile

210 215 220

Leu Gln Tyr Leu Asn Leu Gln Ala Asn Asn Leu Thr Gly Ala Val Pro

225 230 235 240

Pro Ala Ile Phe Asn Met Ser Lys Leu Ser Thr Ile Ser Leu Ile Ser

245 250 255

Asn Gly Leu Thr Gly Pro Ile Pro Gly Asn Thr Ser Phe Ser Leu Pro

260 265 270

Val Leu Gln Trp Phe Ala Ile Ser Lys Asn Asn Phe Phe Gly Gln Ile

275 280 285

Pro Leu Gly Phe Ala Ala Cys Pro Tyr Leu Gln Val Ile Ala Leu Pro

290 295 300

Tyr Asn Leu Phe Glu Gly Val Leu Pro Pro Trp Leu Gly Lys Leu Thr

305 310 315 320

Ser Leu Asn Thr Ile Ser Leu Gly Gly Asn Asn Leu Asp Ala Gly Pro

325 330 335

Ile Pro Thr Glu Leu Ser Asn Leu Thr Met Leu Ala Val Leu Asp Leu

340 345 350

Thr Thr Cys Asn Leu Thr Gly Asn Ile Pro Ala Asp Ile Gly His Leu

355 360 365

Gly Gln Leu Ser Trp Leu His Leu Ala Arg Asn Gln Leu Thr Gly Pro

370 375 380

Ile Pro Ala Ser Leu Gly Asn Leu Ser Ser Leu Ala Ile Leu Leu Leu

385 390 395 400

Lys Gly Asn Leu Leu Asp Gly Ser Leu Pro Ala Thr Val Asp Ser Met

405 410 415

Asn Ser Leu Thr Ala Val Asp Val Thr Glu Asn Asn Leu His Gly Asp

420 425 430

Leu Asn Phe Leu Ser Thr Val Ser Asn Cys Arg Lys Leu Ser Thr Leu

435 440 445

Gln Met Asp Phe Asn Tyr Val Thr Gly Ser Leu Pro Asp Tyr Val Gly

450 455 460

Asn Leu Ser Ser Gln Leu Lys Trp Phe Thr Leu Ser Asn Asn Lys Leu

465 470 475 480

Thr Gly Thr Leu Pro Ala Thr Ile Ser Asn Leu Thr Gly Leu Glu Val

485 490 495

Ile Asp Leu Ser His Asn Gln Leu Arg Asn Ala Ile Pro Glu SerIle

500 505 510

Met Thr Ile Glu Asn Leu Gln Trp Leu Asp Leu Ser Gly Asn Ser Leu

515 520 525

Ser Gly Phe Ile Pro Ser Asn Thr Ala Leu Leu Arg Asn Ile Val Lys

530 535 540

Leu Phe Leu Glu Ser Asn Glu Ile Ser Gly Ser Ile Pro Lys Asp Met

545 550 555 560

Arg Asn Leu Thr Asn Leu Glu His Leu Leu Leu Ser Asp Asn Gln Leu

565 570 575

Thr Ser Thr Val Pro Pro Ser Leu Phe His Leu Asp Lys Ile Ile Arg

580 585 590

Leu Asp Leu Ser Arg Asn Phe Leu Ser Gly Ala Leu Pro Val Asp Val

595 600 605

Gly Tyr Leu Lys Gln Ile Thr Ile Ile Asp Leu Ser Asp Asn Ser Phe

610 615 620

Ser Gly Ser Ile Pro Asp Ser Ile Gly Glu Leu Gln Met Leu Thr His

625 630 635 640

Leu Asn Leu Ser Ala Asn Glu Phe Tyr Asp Ser Val Pro Asp Ser Phe

645 650 655

Gly Asn Leu Thr Gly Leu Gln Thr Leu Asp Ile Ser His Asn Ser Ile

660 665 670

Ser Gly Thr Ile Pro Asn Tyr Leu Ala Asn Phe Thr Thr Leu Val Ser

675 680 685

Leu Asn Leu Ser Phe Asn Lys Leu His Gly Gln Ile Pro Glu Gly Gly

690 695 700

Ile Phe Ala Asn Ile Thr Leu Gln Tyr Leu Val Gly Asn Ser Gly Leu

705 710 715 720

Cys Gly Ala Ala Arg Leu Gly Phe Pro Pro Cys Gln Thr Thr Ser Pro

725 730 735

Lys Arg Asn Gly His Met Leu Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ile Ile Ile

740 745 750

Val Val Gly Val Val Ala Cys Cys Leu Tyr Val Met Ile Arg Lys Lys

755 760 765

Ala Asn His Gln Lys Ile Ser Ala Gly Met Ala Asp Leu Ile Ser His

770 775 780

Gln Phe Leu Ser Tyr His Glu Leu Leu Arg Ala Thr Asp Asp Phe Ser

785 790 795 800

Asp Asp Asn Met Leu Gly Phe Gly Ser Phe Gly Lys Val Phe Lys Gly

805 810 815

Gln Leu Ser Asn Gly Met Val Val Ala Ile Lys Val Ile His Gln His

820 825 830

Leu Glu His Ala Met Arg Ser Phe Asp Thr Glu Cys Arg Val Leu Arg

835 840 845

Ile Ala Arg His Arg Asn Leu Ile Lys Ile Leu Asn Thr Cys Ser Asn

850 855 860

Leu Asp Phe Arg Ala Leu Val Leu Gln Tyr Met Pro Lys Gly Ser Leu

865 870 875 880

Glu Ala Leu Leu His Ser Glu Gln Gly Lys Gln Leu Gly Phe Leu Lys

885 890 895

Arg Leu Asp Ile Met Leu Asp Val Ser Met Ala Met Glu Tyr Leu His

900 905 910

His Glu His Tyr Glu Val Val Leu His Cys Asp Leu Lys Pro Ser Asn

915 920 925

Val Leu Phe Asp Asp Asp Met Thr Ala His Val Ala Asp Phe Gly Ile

930 935 940

Ala Arg Leu Leu Leu Gly Asp Asp Asn Ser Met Ile Ser Ala Ser Met

945 950 955 960

Pro Gly Thr Val Gly Tyr Met Ala Pro Glu Tyr Gly Ala Leu Gly Lys

965 970 975

Ala Ser Arg Lys Ser Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ile Met Leu Phe Glu

980 985 990

Val Phe Thr Gly Lys Arg Pro Thr Asp Ala Met Phe Val Gly Glu Leu

995 1000 1005

Asn Ile Arg Gln Trp Val His Gln Ala Phe Pro Ala Glu Leu Val

1010 1015 1020

His Val Val Asp Cys Gln Leu Leu Hi s Asp Gly Ser Ser Ser Ser

1025 1030 1035

Asn Met His Gly Phe His Val Pro Val Phe Glu Leu Gly Leu Leu

1040 1045 1050

Cys Ser Ala Asp Ser Pro Glu Gln Arg Met Ala Met Ser Asp Val

1055 1060 1065

Val Val Thr Leu Lys Lys Ile Arg Lys Asp Tyr Val Lys Leu Met

1070 1075 1080

Ala Thr Thr Glu Asn Ala Val Gln Gln

1085 1090

Claims

1.一种分离的对白叶枯病产生抗性的基因Xa3/Xa26-3，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO：1所示。