CN101875958A - 一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 - Google Patents
一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101875958A CN101875958A CN200910235175XA CN200910235175A CN101875958A CN 101875958 A CN101875958 A CN 101875958A CN 200910235175X A CN200910235175X A CN 200910235175XA CN 200910235175 A CN200910235175 A CN 200910235175A CN 101875958 A CN101875958 A CN 101875958A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- selenium
- candida utilis
- culture
- fermentation
- hours
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 60
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 53
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 title claims abstract 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title claims abstract 3
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 claims abstract description 52
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 40
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 40
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 19
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 17
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 16
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims abstract description 16
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 claims abstract description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims abstract 4
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims abstract 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 29
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 5
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 claims 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000003798 L-tyrosyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 claims 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 abstract description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 8
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 3
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 2-nitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 2
- 108010063907 Glutathione Reductase Proteins 0.000 description 2
- 102100036442 Glutathione reductase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical compound C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Natural products C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 2
- HLVXFWDLRHCZEI-UHFFFAOYSA-N chromotropic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC(O)=C2C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=C1 HLVXFWDLRHCZEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- JOVOSQBPPZZESK-UHFFFAOYSA-N phenylhydrazine hydrochloride Chemical compound Cl.NNC1=CC=CC=C1 JOVOSQBPPZZESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940038531 phenylhydrazine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- VKJKEPKFPUWCAS-UHFFFAOYSA-M potassium chlorate Chemical compound [K+].[O-]Cl(=O)=O VKJKEPKFPUWCAS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000019261 food antioxidant Nutrition 0.000 description 1
- 235000014106 fortified food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- 206010019692 hepatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000149 liver necrosis Toxicity 0.000 description 1
- 208000001491 myopia Diseases 0.000 description 1
- 230000004379 myopia Effects 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019624 protein content Nutrition 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物发酵领域，涉及一种富硒酵母发酵制备方法，具体公开了一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法，出发菌株经斜面培养和种子培养后，接种在含有亚硒酸钠的发酵培养基中进行发酵培养至少24小时，其中，采用产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01为出发菌株，并且，在发酵液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，氨基酸添加时间为0～12小时，添加浓度2～16mmol/L。由于本发明所得富硒产朊假丝酵母能够在胞内积累谷胱甘肽，在补充硒的同时还可以提高畜禽的免疫力，因此将具有更为广阔的市场和应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，涉及一种富硒酵母发酵制备方法，具体涉及一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法。
背景技术
硒和谷胱甘肽(GSH)对生物体有诸多益处。
硒是人体必需的14种微量元素之一，具有抗癌、保护心脏、抗肝坏死、防治近视和白内障、解毒、提高免疫力、延缓衰老和增强生殖功能等多种药理作用；硒是生物体内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的重要组成部分，以硒代半胱氨酸的形式存在于其活性中心。GSH-Px可以分解生物体内的有害过氧化物，清除自由基，防止细胞膜氧化受损和体内重金属的积累。
谷胱甘肽作为一种重要的生理活性物质，在抗辐射、肿瘤、癌症、氧中毒、衰老和协调内分泌的治疗中效果明显且无副作用，可以广泛应用于医药、保健品、化妆品及食品和饲料添加剂等多种领域：(1)辅助治疗癌症，减少癌症化疗的副作用，增强治疗效果；(2)保护心脏、心血管，并能维持机体正常的血压水平；(3)抗衰老，可作为抗衰老保健品或者化妆品的活性成分；(4)对于重金属、农药和药物具有解毒作用；(5)抗病毒、提高免疫力；(6)保护视力、内脏及防治糖尿病和地方病；(7)食品及饲料添加剂中的硒对于提高人们健康水平、防止缺硒引起的各种疾病具有特殊意义，GSH在增强食品营养价值和强化食品风味的同时对人体又有保健作用，是食品抗氧化剂发展的必然趋势。
硒的补充可以通过摄入无机硒或有机硒而得以实现。无机硒的毒性较高，因而限制了它的广泛使用，有机硒的安全性能和利用率虽然远远优于无机硒，但纯的硒代蛋氨酸价格昂贵，因此必须寻找一种有机硒的廉价生产方法。利用微生物如酵母将无机硒生物转化为有机硒被认为是一条安全高效的途径。
现有技术中，富硒酵母的制备采用的是微生物富集法。生产方法是在酵母菌的培养基中添加适当浓度的亚硒酸钠等无机硒添加剂，在优化的培养条件下进行发酵以最大程度地将无机硒转化为酵母细胞内的有机硒，发酵结束后收集发酵液中的酵母细胞即为富硒酵母。富硒酵母细胞中的硒有90％以上是有机硒，其中50％左右以硒代蛋氨酸的形式存在，是无机硒有机化的理想载体，可以安全添加至食品或饲料中。
上述技术方案中，酵母细胞在将亚硒酸钠进行有机转化的同时，提高了谷胱甘肽过氧化物酶的活性，增加了胞内GSH的氧化；另外，亚硒酸钠也会导致GSH向胞外泄漏。因此，非常有必要采取相关措施在制备富硒酵母的同时提高胞内GSH含量。
产朊假丝酵母富含必需氨基酸和维生素，蛋白质含量达到520g/kg，并且脂肪含量低，其营养价值与鱼粉、黄豆不相上下。作为一种GRAS(美国食品药物主管机构给予的检验标记)安全生物，产朊假丝酵母被美国FDA(食品及药物管理局)认证为可作为食品添加剂的酵母，并能运用于食品和制药行业。
专利号为03113418.1的中国发明专利公开了一种提高产朊假丝酵母发酵生产谷胱甘肽产量的方法，采用产朊假丝酵母为发酵菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养或发酵罐培养，在发酵培养基中添加L-半胱氨酸，增加发酵液中L-半胱氨酸的供应，以提高产品谷胱甘肽的合成速度和产量。该发明的优点是在其它培养条件相同的情况下，在发酵液中添加L-半胱氨酸后可以将谷胱甘肽的产量和胞内含量提高将近一倍，但是该发明无法同时提供有机硒；而且该发明是使用合成谷胱甘肽的前体氨基酸L-半胱氨酸以提高酵母发酵生产谷胱甘肽的产量。
因此，制备出能够在胞内积累谷胱甘肽的富硒产朊假丝酵母，在补充硒的同时还可以提高机体的免疫力，势必将具有更为广阔的市场和应用前景。
发明内容
本发明目的是提供一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法，出发菌株经斜面培养和种子培养后，接种在含有亚硒酸钠的发酵培养基中进行发酵培养至少24小时，其中，采用产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01为出发菌株，并且，在发酵液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，氨基酸添加时间为0～12小时，添加浓度2～16mmol/L。
上述技术方案中，所述菌株产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01由苏州大学工业微生物实验室保藏，该菌株已在文献(葛晓光，卫功元，聂敏，邵娜.富硒产朊假丝酵母的制备条件研究.粮食与饲料工业，2009，10：31-33)中公开。
上述技术方案中，发酵条件为：
(1)菌株：
产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01；
(2)培养基：
每1L所述斜面培养基含有：葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏10g，琼脂20g，所述斜面培养基pH为6.0～6.5；
每1L所述种子培养基含有：葡萄糖20g，蛋白胨10g，酵母膏10g，所述种子培养基pH为6.0～6.5；
每1L所述发酵培养基含有：葡萄糖30g，硫酸铵8g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁0.25g，所述发酵培养基pH为5.5～6.0；
(3)种子培养：
斜面种子活化4小时后接入装有种子培养基的三角瓶中进行振荡培养，装液量为30～50mL种子培养基/500mL，培养温度25～30℃，摇床转速150～250rpm，培养时间18～24小时；
(4)发酵培养：
将过滤灭菌(滤膜直径0.25μm)的亚硒酸钠溶液加入发酵培养基(30～50mL培养基/500mL三角瓶)中，加入的量为：每1L所述发酵培养加入8～12mg亚硒酸钠；并按5～10％的接种量(10％为体积比，如40mL发酵培养基接种量4mL)接入种子，在摇床中进行发酵培养；培养温度25～30℃，摇床转速150～250rpm，培养时间24～30小时；在发酵培养的0～12小时，向培养液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，添加浓度2～16mmol/L。
上述技术方案中，所述斜面培养、种子培养和发酵培养都是现有技术，具体地，本领域技术人员可参考以下步骤，但以下步骤不以任何方式限制本发明，一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法，具体包括以下步骤：
(1)菌株
产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01，苏州大学工业微生物实验室保藏；
(2)培养基
斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏10，琼脂20g，pH 6.0；
种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏10，pH 6.0；
发酵培养基(g/L)：葡萄糖30，硫酸铵8，磷酸二氢钾3，硫酸镁0.25，pH 5.5；
(3)种子培养
斜面种子活化4小时后接入装有50mL种子培养基的500mL三角瓶中进行振荡培养，培养温度30℃，摇床转速200rpm，培养时间20小时；
(4)发酵培养
按照初始亚硒酸钠浓度为10mg/L的设计(即每1L所述发酵培养基加入10mg亚硒酸钠)，将过滤灭菌(滤膜直径0.25μm)的亚硒酸钠溶液加入发酵培养基(40mL培养基/500mL三角瓶)中，并按10％的接种量接入种子，在摇床中进行发酵培养；培养温度27℃，摇床转速200rpm，培养时间30小时；在发酵培养的0～12小时，向培养液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，添加浓度2～16mmol/L；
(5)酵母生物量的测定
以细胞干重(DCW)表示酵母生物量。取25mL发酵液，3500rpm离心10min，蒸馏水离心洗涤3次，收集菌体，70℃烘干至恒重；
(6)胞内谷胱甘肽的提取及测定
发酵培养得到的新鲜酵母用蒸馏水洗涤3次后，30℃下在40％乙醇溶液中处理2小时，离心取上清液作为待测样品；谷胱甘肽采用DTNB[5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)]-谷胱甘肽还原酶循环法进行测定；
(7)样品的消化
取5mL发酵液，在3500rpm下离心10min，蒸馏水离心洗涤3次，收集湿菌体。将湿菌体置于小烧杯中并加入10mL混合酸(浓HNO3∶浓HClO4＝4∶1)，加热直到溶液上面有白烟时停止加热，此时溶液变成无色，冷却后，定容至50mL进行硒的检测；
(8)胞内总硒的测定
向25mL比色管中依次加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)溶液1mL、HCl-KCl缓冲液2mL、氯酸钾2mL、变色酸2mL、盐酸苯肼1mL和待测样品2mL，混匀，在沸水浴中加热20min，于冷水中迅速冷却后，利用酶标仪测定520nm下吸光值；
(9)胞内无机硒的测定
取10mL发酵液，3500rpm离心10min后收集菌体，蒸馏水离心洗涤3次；将湿菌体悬浮于5mL去离子水中，沸水浴30min，离心，测定上清液中硒的浓度；
(10)Se有机转化率的定义
上述技术方案中，当发酵培养基中添加的氨基酸为L-谷氨酸时，最佳添加时间为0小时，最佳添加浓度为12mmol/L；当发酵培养基中添加的氨基酸为L-谷氨酰胺时，最佳添加时间为0小时，最佳添加浓度为12mmol/L；当发酵培养基中添加的氨基酸为L-酪氨酸时，最佳添加时间为0小时，最佳添加浓度为14mmol/L；当发酵培养基中添加的氨基酸为L-亮氨酸中时，最佳添加时间为0小时，最佳添加浓度为10mmol/L。
由于上述技术方案的运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：
1.本发明在发酵培养富硒产朊假丝酵母时添加谷胱甘肽的前体氨基酸L-谷氨酸或者非前体氨基酸L-酪氨酸、L-亮氨酸及L-谷氨酰胺，富硒产朊假丝酵母的胞内谷胱甘肽含量均可以提高5倍以上，从而大大提高了富硒产朊假丝酵母的营养价值和应用前景。
2.本发明所得产朊假丝酵母可以广泛应用在食品和饲料添加剂中，由于本发明所得富硒产朊假丝酵母能够在胞内积累谷胱甘肽，在补充硒的同时还可以提高畜禽的免疫力，因此将具有更为广阔的市场和应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例一：发酵制备富硒产朊假丝酵母，摇瓶中不添加氨基酸，具体包括以下步骤：
(1)菌株
产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01，苏州大学工业微生物实验室保藏；
(2)培养基
斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏10，琼脂20g，pH 6.0；
种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏10，pH 6.0；
发酵培养基(g/L)：葡萄糖30，硫酸铵8，磷酸二氢钾3，硫酸镁0.25，pH 5.5；
(3)种子培养
斜面种子活化4小时后接入装有50mL种子培养基的500mL三角瓶中进行振荡培养，培养温度30℃，摇床转速200rpm，培养时间20小时；
(4)发酵培养
按照初始亚硒酸钠浓度为10mg/L的设计(即每1L所述发酵培养基加入10mg亚硒酸钠)，将过滤灭菌(滤膜直径0.25μm)的亚硒酸钠溶液加入发酵培养基(40mL培养基/500mL三角瓶)中，并按10％的接种量接入种子，在摇床中进行发酵培养；培养温度27℃，摇床转速200rpm，培养时间30小时；
(5)酵母生物量的测定
以细胞干重(DCW)表示酵母生物量。取25mL发酵液，3500rpm离心10min，蒸馏水离心洗涤3次，收集菌体，70℃烘干至恒重；
(6)胞内谷胱甘肽的提取及测定
发酵培养得到的新鲜酵母用蒸馏水洗涤3次后，30℃下在40％乙醇溶液中处理2小时，离心取上清液作为待测样品；谷胱甘肽采用DTNB[5，5′-二硫双(2-硝基苯甲酸)]-谷胱甘肽还原酶循环法进行测定；
(7)样品的消化
取5mL发酵液，在3500rpm下离心10min，蒸馏水离心洗涤3次，收集湿菌体。将湿菌体置于小烧杯中并加入10mL混合酸(浓HNO3∶浓HClO4＝4∶1)，加热直到溶液上面有白烟时停止加热，此时溶液变成无色，冷却后，定容至50mL进行硒的检测；
(8)胞内总硒的测定
向25mL比色管中依次加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)溶液1mL、HCl-KCl缓冲液2mL、氯酸钾2mL、变色酸2mL、盐酸苯肼1mL和待测样品2mL，混匀，在沸水浴中加热20min，于冷水中迅速冷却后，利用酶标仪测定520nm下吸光值；
(9)胞内无机硒的测定
取10mL发酵液，3500rpm离心10min后收集菌体，蒸馏水离心洗涤3次；将湿菌体悬浮于5mL去离子水中，沸水浴30min，离心，测定上清液中硒的浓度；
(10)Se有机转化率的定义
结果：
细胞干重：9～10g/L；GSH产量：10～15mg/L；GSH含量：0.1～0.15％；Se有机转化率：88.9～90.2％。
实施例二：按照实施例一所述发酵条件制备富硒产朊假丝酵母，摇瓶中添加L-谷氨酸的实验结果：
添加时间：0小时～12小时；添加浓度：2～14mmol/L；
细胞干重：10～12.5g/L；GSH产量：15～110mg/L；GSH含量：0.2％～0.9％；Se有机转化率：89.7～91.3％。
最佳添加时间为0小时；最佳添加浓度为12mmol/L。
实施例三：按照实施例一所述发酵条件制备富硒产朊假丝酵母，摇瓶中添加L-酪氨酸的实验结果：
添加时间：0小时～12小时；添加浓度：2～16mmol/L；
细胞干重：9～10g/L；GSH产量：15～90mg/L；GSH含量：0.2％～0.9％；Se有机转化率：88.7～91.2％。
最佳添加时间为0小时；最佳添加浓度为14mmol/L。
实施例四：按照实施例一所述发酵条件制备富硒产朊假丝酵母，摇瓶中添加L-亮氨酸的实验结果：
添加时间：0小时～12小时；添加浓度：2～12mmol/L；
细胞干重：9～11g/L；GSH产量：15～80mg/L；GSH含量：0.2％～0.8％；Se有机转化率：88.9～90.1％。
最佳添加时间为0小时；最佳添加浓度为10mmol/L。
实施例五：按照实施例一所述发酵条件制备富硒产朊假丝酵母，摇瓶中添加L-谷氨酰胺的实验结果：
添加时间：0小时～12小时；添加浓度：2～14mmol/L；
细胞干重：9～11g/L；GSH产量：15～90mg/L；GSH含量：0.2％～0.8％；Se有机转化率：88.5～90.4％。
最佳添加时间为0小时；最佳添加浓度为12mmol/L。
上述所得产朊假丝酵母可以广泛应用在食品和饲料添加剂中，由于本发明所得富硒产朊假丝酵母能够在胞内积累谷胱甘肽，在补充硒的同时还可以提高畜禽的免疫力，因此将具有更为广阔的市场和应用前景。
Claims (6)
1.一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法，出发菌株经斜面培养和种子培养后，接种在含有亚硒酸钠的发酵培养基中进行发酵培养至少24小时，其特征在于，采用产朊假丝酵母(Candida utilis)SZU 07-01为出发菌株，并且，在发酵液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，氨基酸添加时间为0～12小时，添加浓度2～16mmol/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵条件为：
将过滤灭菌的亚硒酸钠溶液加入发酵培养基中，加入的量为：每1L所述发酵培养基中加入8～12mg亚硒酸钠；并按5％～10％的接种量接入种子，在摇床中进行发酵培养，装液量为30～50mL发酵培养基/500mL；培养温度25～30℃，摇床转速150～250rpm，培养时间24～30小时；在发酵培养的0～12小时，向培养液中添加L-谷氨酸、L-酪氨酸、L-亮氨酸或L-谷氨酰胺中的一种，添加浓度2～16mmol/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基中添加的氨基酸为L-谷氨酸，添加时间为0小时，添加浓度为12mmol/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基中添加的氨基酸为L-谷氨酰胺，添加时间为0小时，添加浓度为12mmol/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基中添加的氨基酸为L-酪氨酸，添加时间为0小时，添加浓度为14mmol/L。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基中添加的氨基酸为L-亮氨酸中，添加时间为0小时，添加浓度为10mmol/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910235175A CN101875958B (zh) | 2009-11-10 | 2009-11-10 | 一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910235175A CN101875958B (zh) | 2009-11-10 | 2009-11-10 | 一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101875958A true CN101875958A (zh) | 2010-11-03 |
| CN101875958B CN101875958B (zh) | 2012-09-26 |
Family
ID=43018639
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200910235175A Expired - Fee Related CN101875958B (zh) | 2009-11-10 | 2009-11-10 | 一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101875958B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102146355A (zh) * | 2011-01-10 | 2011-08-10 | 四川农业大学 | 一种利用产朊假丝酵母制备富硒酵母的方法 |
| CN103932198A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-23 | 济南大学 | 一种利用啤酒废酵母制备富硒谷胱甘肽啤酒酵母生物制品的方法 |
| CN107365716A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-11-21 | 陕西科技大学 | 一种富gsh‑硒多形汉逊酵母的制备方法 |
| CN108220265A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-29 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法 |
| CN113322223A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-08-31 | 重庆市畜牧科学院 | 富硒酵母基因工程菌及其表面展示系统及其构建方法 |
| CN114540265A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-05-27 | 广州博善生物科技股份有限公司 | 一种富含谷胱甘肽的富硒酵母的制备方法 |
| CN117063779A (zh) * | 2023-09-20 | 2023-11-17 | 西北大学 | 一种黑木耳培养过程中提高有机硒含量同时降低铬的简易方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103911299B (zh) * | 2012-12-31 | 2016-02-10 | 安琪酵母股份有限公司 | 富硒酵母及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1203185C (zh) * | 2003-05-09 | 2005-05-25 | 江南大学 | 一种提高产朊假丝酵母发酵生产谷胱甘肽产量的方法 |
-
2009
- 2009-11-10 CN CN200910235175A patent/CN101875958B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102146355A (zh) * | 2011-01-10 | 2011-08-10 | 四川农业大学 | 一种利用产朊假丝酵母制备富硒酵母的方法 |
| CN103932198A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-23 | 济南大学 | 一种利用啤酒废酵母制备富硒谷胱甘肽啤酒酵母生物制品的方法 |
| CN107365716A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-11-21 | 陕西科技大学 | 一种富gsh‑硒多形汉逊酵母的制备方法 |
| CN107365716B (zh) * | 2017-08-02 | 2020-04-07 | 陕西科技大学 | 一种富gsh-硒多形汉逊酵母的制备方法 |
| CN108220265A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-29 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法 |
| CN108220265B (zh) * | 2018-01-04 | 2023-11-24 | 上海青瑞食品科技有限公司 | 一种硒修饰谷氨酰胺转氨酶的制备方法 |
| CN113322223A (zh) * | 2021-06-03 | 2021-08-31 | 重庆市畜牧科学院 | 富硒酵母基因工程菌及其表面展示系统及其构建方法 |
| CN113322223B (zh) * | 2021-06-03 | 2023-09-12 | 重庆市畜牧科学院 | 富硒酵母基因工程菌及其表面展示系统及其构建方法 |
| CN114540265A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-05-27 | 广州博善生物科技股份有限公司 | 一种富含谷胱甘肽的富硒酵母的制备方法 |
| CN114540265B (zh) * | 2022-03-23 | 2024-04-16 | 广州博善生物科技股份有限公司 | 一种富含谷胱甘肽的富硒酵母的制备方法 |
| CN117063779A (zh) * | 2023-09-20 | 2023-11-17 | 西北大学 | 一种黑木耳培养过程中提高有机硒含量同时降低铬的简易方法 |
| CN117063779B (zh) * | 2023-09-20 | 2024-04-02 | 西北大学 | 黑木耳培养方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101875958B (zh) | 2012-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101875958B (zh) | 一种提高富硒产朊假丝酵母胞内谷胱甘肽含量的方法 | |
| CN109939027A (zh) | 一种猴头菌发酵制备含麦角硫因的化妆品原液的方法 | |
| CN104000080A (zh) | 富含玉米肽硒的多肽营养面粉 | |
| CN103263448B (zh) | 用于发酵预处理改进银杏叶黄酮提取的发酵菌种及应用 | |
| CN104522828A (zh) | 一种藻类酵素保健固体饮品及其制备工艺 | |
| CN104663246B (zh) | 富硒高钙食用菌菇的生产方法 | |
| CN102703283A (zh) | 一种富硒保健黄酒的制备方法 | |
| CN103932198A (zh) | 一种利用啤酒废酵母制备富硒谷胱甘肽啤酒酵母生物制品的方法 | |
| CN102559523A (zh) | 一种富硒酵母、富硒酵母酶解物及其制备方法 | |
| CN103460994B (zh) | 蛹虫草纳米硒及其制备方法 | |
| CN104522827A (zh) | 一种藻类酵素营养固体饮品及其制备工艺 | |
| CN107223986A (zh) | 一种富硒多肽保健品及其制备方法 | |
| CN106472819A (zh) | 一种富硒及蛹虫草活性物质的饲料的制备方法及应用 | |
| CN107868778A (zh) | 一种富硒酵母的制备方法 | |
| CN112481341B (zh) | 一种强化硒吸收活性肽的制备方法及其应用 | |
| KR20100126887A (ko) | 양식 넙치용 액상 사료첨가제 | |
| CN104975051A (zh) | 一种富集桑叶中gaba的方法 | |
| CN101760477B (zh) | 一种降血压红曲的制造方法 | |
| CN103865816A (zh) | 一种富硒、锗酵母粉 | |
| CN104988183A (zh) | 糙皮侧耳发酵液的制备方法及该发酵液在降解黄曲霉毒素b1中的应用 | |
| KR101810567B1 (ko) | 발효방식을 이용한 셀레늄 함유 건조효모의 제조방법 | |
| CN103757076B (zh) | 一种利用氧载体提高酿酒酵母发酵液中谷胱甘肽效价的方法 | |
| CN107048166A (zh) | 一种增加青稞红曲中天然γ‑氨基丁酸含量的方法 | |
| CN107028171A (zh) | 一种富硒的蘑菇菌丝体营养保健品 | |
| CN106937740A (zh) | 一种富硒的灵芝菌丝体营养保健品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: Suzhou City, Jiangsu province 215137 Xiangcheng District Ji Road No. 8 Patentee after: Soochow University Address before: 215123 Suzhou City, Suzhou Province Industrial Park, No. love road, No. 199 Patentee before: Soochow University |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120926 Termination date: 20151110 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |