CN101862346B - 人参酸性多糖在制备降血糖药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种人参酸性多糖在降血糖方面的应用，以人参根为原材料，经过提取，纯化，精制，制备出具有降血糖作用的人参酸性多糖。本发明涉及的人参酸性多糖可制备具有降血糖作用人参酸性多糖的各种制剂。本发明保留了人参多糖的活性，并提高了人参多糖降血糖活性成分的纯度。
Description
技术领域
本发明属于中药植物多糖的生物活性领域，具体涉及一种人参酸性多糖的降血糖的应用。
背景技术
人参被人们称为“百草之王”，是闻名遐迩的“东北三宝”(人参、貂皮、鹿茸)之一，是驰名中外、老幼皆知的名贵药材。古代人参的雅称为黄精、地精、神草。在中国医药史上，使用人参的历史非常久远。早在战国时代，良医扁鹊对人参药性和疗效已有了解；秦汉时代的《神农本草经》将其列为药中上品。明代著名中医学者龚居中在《四百味歌扩》中列为第一条：“人参味甘，大补元气，止渴生津，调营养卫”，成为无数中医入门的第一句背诵歌诀。
随着社会的日益发展，人们的生活水平日益提高，我国糖尿病的发病率也在逐年上升。20年来，我国糖尿病患病率显著增加。1980年全国14省市30万人的流行病学调查结果显示，糖尿病患病率0.67％。1994年全国19省市21万人的调查，25～64岁年龄段糖尿病的患病率为2.5％(人口标化率为2.28％)，糖耐量减低(IGT)为3.2％(人口标化率为2.12％)。这一数字与同等发展水平国家的数据相近，比1980年增加了近3倍。中国中医科学院糖尿病研究总院调查资料显示，我国的糖尿病患者人数已达4000万左右，占世界糖尿病人群总数的五分之一，患病率居世界第二位，并且以每天至少3000人的速度增加，每年增加超过120万人，预测至2010年我国糖尿病人口总数将猛增至8000万至1亿人。根据《中国糖尿病控制现状》报告表明，我国已成为糖尿病发病的“重灾区”，是全球糖尿病第二大国，更让人忧心的是，越来越多的孩子也成了糖尿病患者。据《中国糖尿病及用药市场分析》披露，中国目前服用糖尿病治疗药物的人数为800万人，其中长期服用中高价日消费在3-4.10元和高价日消费4.90-13.6元，占服用糖尿病药物的患者比例近6成。根据这组数字可以推算出，目前中国的糖尿病用药市场规模为130亿人民币。
糖尿病分1型糖尿病(type 1diabetes)和2型糖尿病(type 2diabetes)。其中1型糖尿病多发生于青少年，其胰岛素分泌缺乏，必须依赖胰岛素治疗维持生命。2型糖尿病多见于30岁以后中、老年人，其胰岛素的分泌量并不低甚至还偏高，病因主要是机体对胰岛素不敏感(即胰岛素抵抗)。据统计，2型糖尿病占糖尿病的80％，有50％新诊断的2型糖尿病患者已存在一种或一种以上的慢性并发症，有些患者是因为并发症才发现患糖尿病的。
发明内容
本发明以2型糖尿病为模型，旨在研究无毒副作用的人参酸性多糖在降血糖方面的应用。
本发明可以通过以下步骤实现：
1.人参总多糖的提取：100℃条件下用蒸馏水煮提人参根4小时。提取物经4层纱布过滤。过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次。合并三次提取所得滤液，离心去除其中的不溶物，上清液加入6倍体积的95％乙醇沉淀过夜，离心，收集沉淀，常规干燥后得到人参总多糖。
2.Sevag法脱蛋白：向10％的人参多糖水溶液中加入1/4体积的Sevag试剂，充分震荡两个小时，离心去除蛋白层和氯仿层，水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经乙醇沉淀和常规干燥得到脱蛋白级分人参多糖。
3.人参酸性糖的分离：将10％的脱蛋白级分人参多糖经DEAE-纤维素离子交换柱(Cl-型)分级，用两倍柱体积的蒸馏水洗脱，去除未结合的中性糖级分，收集由两倍柱体积的0.5M氯化钠水溶液洗脱得到的酸性糖级分，经蒸馏水透析、冰冻干燥得到氯化钠洗脱的结合级分人参酸性多糖。
本发明方法值得得人参酸性多糖，其单糖组成为Gal∶Glc∶Ara∶Rha∶GalUA∶GlcUA＝18.0∶18.5∶15.5∶2.5∶44.2∶1.3，分子量分布范围2.8×103～1.8×105。人参酸性多糖可以制成口服制剂、针剂、粘膜吸收、透皮吸收等剂型。
人参多糖降糖实验
1、人参粗多糖降糖实验
取100只小鼠随机取10只作为空白对照组，其余空腹12小时，按180mg/kg剂量腹腔注射pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的链脲佐菌素(STZ)溶液。72h后，尾静脉采血，强生随手测血糖仪测定禁食12h后的空腹血糖值，取血糖值大于15.00mmol/L的小鼠为成型糖尿病小鼠。糖尿病模型小鼠按血糖值分为7组，每组10只，模型对照组灌胃给蒸馏水，阳性对照组灌胃给小鼠优降糖，其余5组为人参多糖组。人参多糖组分成12.5、25、50、100和200mg/kg剂量组。每天灌胃给药1次，连续10d，末次给药后将所有各组小鼠空腹12h，眼眶取血，分离血清，葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。实验结果见表1：
表1人参多糖对STZ糖尿病小鼠血糖值影响
注：与正常对照组比较：△△，p＜0.01；与模型组比较：*，p＜0.05；**，p＜0.01
从表1可知，灌胃10天后，人参多糖和优降糖均能显著降低高血糖小鼠的血糖值，其中人参多糖50mg/kg组能够极显著降低小鼠的高血糖，并能够达到正常值，说明人参多糖在口服的情况下具有降血糖的作用。
2、人参酸性多糖与中性多糖降糖实验
为筛选人参多糖的有效极分，按照人参粗多糖50mg的分离比例，将人参酸性多糖和中性多糖做降糖分析。取100只小鼠随机取10只作为空白对照组，其余空腹12小时，按180mg/kg剂量腹腔注射pH4.5的柠檬酸缓冲液配制的链脲佐菌素(STZ)溶液。72h后，尾静脉采血，强生随手测血糖仪测定禁食12h后的空腹血糖值，取血糖值大于15.00mmol/L的小鼠为成型糖尿病小鼠。糖尿病模型小鼠按血糖值分为4组，每组10只，模型对照组灌胃给蒸馏水，阳性对照组灌胃给小鼠优降糖，30mg/kg人参中性多糖和10mg/kg酸性多糖组。每天灌胃给药1次，连续10d，末次给药后将所有各组小鼠空腹12h，眼眶取血，分离血清，葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。实验结果如下：
注：与正常对照组比较：△△，p＜0.01；与模型组比较：*，p＜0.05；**，p＜0.01
从表2可知，灌胃10天后，人参多糖和优降糖均能显著降低高血糖小鼠的血糖值，其中人参酸性多糖10mg/kg组能够极显著降低小鼠的高血糖，并能够达到正常值，说明人参多糖在口服的情况下具有降血糖的作用的主要极分为酸性多糖部分。
附图说明
图1，人参酸性多糖的分子筛凝胶分布图(sepharose CL-6B)。
图2，人参酸性多糖的单糖组成图(HPLC)。
具体实施方式：
1.称取人参根1500克，用22.5升蒸馏水100℃提取4小时，提取物经4层纱布过滤。过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次。合并三次提取所得滤液，4000转/分离心10分钟，弃沉淀，上清液80℃浓缩至700毫升。向上清液中加入4倍体积的95％乙醇，充分搅拌后，静止沉淀过夜。离心，收集沉淀，常规干燥(95％乙醇、无水乙醇、乙醚依次充分搅拌后离心，沉淀减压干燥过夜)。得到152.9克人参粗糖样品。
2.称取人参粗糖150克，溶解于1500毫升水中，加入375毫升Sevag试剂(正丁醇∶氯仿＝1∶4，v/v)，充分震荡两个小时，静止分层后，4000转/分离心10分钟，去除蛋白层和氯仿层。水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经乙醇沉淀和常规干燥得到脱蛋白人参多糖级分人参多糖(129克)。
3.将人参多糖(25克)溶于蒸馏水(250毫升)中，用DEAE-纤维素离子交换柱(8.0×20cm，Cl-)分离。依次用2升蒸馏水和2升0.5M氯化钠洗脱，洗脱液流速为25毫升/分钟，每50毫升洗脱液收集一管，经由苯酚硫酸法检测，收集适当级分，经蒸馏水透析24小时后，冰冻干燥分别得到水洗脱的未结合级分人参中性多糖(15.1克)和氯化钠洗脱的结合级分人参酸性多糖(4.3克)。
Claims (1)
1.人参酸性多糖在制备降血糖药物中的应用，其特征在于人参酸性多糖通过以下步骤制备：
a)人参总多糖的提取：100℃条件下用蒸馏水煮提人参根4小时，提取物经4层纱布过滤，过滤得到的残渣在相同条件下重复提取两次，合并三次提取所得滤液，离心去除其中的不溶物，上清液加入6倍体积的95％乙醇沉淀过夜，离心，收集沉淀，常规干燥后得到人参总多糖；
b)Sevag法脱蛋白：向10％的人参多糖水溶液中加入1/4体积的Sevag试剂，充分震荡两个小时，离心去除蛋白层和氯仿层，水层重复操作至不再出现蛋白层为止，所得水溶液经乙醇沉淀和常规干燥得到脱蛋白级分人参多糖；
c)人参酸性糖的分离：将10％的脱蛋白级分人参多糖经Cl-型DEAE-纤维素离子交换柱分级，用两倍柱体积的蒸馏水洗脱，去除未结合的中性糖级分，收集由两倍柱体积的0.5M氯化钠水溶液洗脱得到的酸性糖级分，经蒸馏水透析、冰冻干燥得到氯化钠洗脱的结合级分人参酸性多糖。
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| 赵俊等.人参多糖的化学与药理学研究进展.《国外医学中医中药分册》.2004, * |
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