CN101833010B - 纤维蛋白(原)降解产物(fdp)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法) - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体公开一种采用胶乳免疫比浊法检测纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量的试剂盒，所述试剂盒包含将酸化的抗人FDP抗体与聚乙烯基苄基氯胶乳颗粒发生化学交联并封闭后形成的抗人FDP抗体胶乳试剂。本发明所述试剂盒采用胶乳免疫比浊法检测FDP含量，灵敏度高，可达到0.10μg/ml；稳定性好，操作简单、快速，从检测到出结果仅需5-10分钟；特异性强，不易受干扰；定量准确，具有广泛的应用前景。

Description

纤维蛋白(原)降解产物(FDP)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种采用胶乳免疫比浊法检测纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量的试剂盒。

背景技术

纤维蛋白溶解系统，简称纤溶系统，是人体最重要的抗凝系统，对保持血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用，由4种主要部分组成：纤溶酶原、纤溶酶原激活剂(如t-PA、u-PA)、纤溶酶、纤溶酶抑制物。纤维蛋白(原)降解产物(Fibrin(ogen)Degradation Products，FDP)是在纤溶系统被激活后产生的纤溶酶的作用下，人体内的纤维蛋白原和纤维蛋白被降解，所产生的各种二聚体、多聚体及复合物的统称，生成的FDP反映机体纤溶活性的总水平。

纤溶系统的激活有多种途径，主要分为内激活、外激活和外源性激活途径。内激活途径是在内源性凝血途径中凝血因子XIIa使激肽释放酶原转变激肽释放酶，激肽释放酶使单链尿激酶型纤溶酶原激活物转变为双链尿激酶型纤溶酶原激活物，从而激活纤溶酶原变为纤溶酶，表现为继发性纤溶亢进；而外激活途径是通过血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活物(t-PA)，将纤溶酶原裂解成为纤溶酶，表现为原发性纤溶亢进。另外，外源性激活途径是通过外界进入体内的溶栓药物如SK、UK和t-PA等，将纤溶酶原激活成纤溶酶。在纤溶酶的存在下，纤维蛋白原和纤维蛋白降解成各种可溶片段，形成纤维蛋白降解产物(FDP)。由此可见，体内FDP水平在原发性和继发性纤溶亢进均可升高，是综合反映纤溶亢进的敏感指标，同时FDP的检测也可以反映溶栓药物的治疗疗效。

近几年来，FDP含量的检测在临床诊断、筛查上应用广泛，其含量升高可证明有纤溶亢进，如恶性肿瘤、弥散性血管内凝血、深静脉血栓形成、肺栓塞、严重细菌感染、慢性肝病、器官移植的排斥反应、妊娠高血压综合症等疾病所致的继发性及原发性纤溶亢进，FDP含量均出现升高。在溶栓药物的治疗过程中，大量纤溶酶的生成，加速血栓的溶解，血液中FDP升高，对血清或血浆FDP浓度的检测，可以监控溶栓药物的治疗效果。另由于血管内凝血，纤溶异常，大量FDP经肾脏排出或由于肾炎导致纤维蛋白在肾小管沉积同时继发激活纤维蛋白降解系统生成FDP从尿中排出，因此尿液中出现FDP也意味着体内或肾脏有血管内凝血和纤溶现象。动态地观察尿FDP的变化，对肾移植后排斥反应的诊断有重要意义。因此，检测样本包括血清、血浆、尿液中FDP的含量对纤溶系统疾病的早期、快速、准确诊断及对溶栓药物治疗的疗程监测和疗效考核具有重要的应用价值。

目前在临床上使用的FDP检测方法有：乙醇胶试验、鱼精蛋白副凝试验、乳胶凝集法、酶联免疫吸附(ELISA)法和胶乳免疫比浊法等。但都存在一定局限性。

乙醇胶试验、鱼精蛋白副凝试验是只能通过与FDP产物中X、Y片段产生凝块，对FDP进行定性检测；乳胶凝集法虽具有快速，操作简便、费用不高等优点，但是其灵敏度低，通过肉眼观察，仅能检出5μg/ml水平的FDP，常用于定性或半定量测定作为筛查；酶联免疫吸附(ELISA)法虽具有灵敏度高，检测结果准确可靠，是一种经典的方法，但是操作要求严格费时，检测成本高，易受多种因素影响，不适用于临床病人和急诊病人及时诊断及治疗的需要。

胶乳免疫比浊法具有操作简便、快速、检测灵敏度高、特异、定量准确等优点，在临床应用上得到广泛认可。但现有市场上采用该法测定纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量的试剂盒在样本FDP浓度低于2.5μg/ml时一般不能准确定量，检测灵敏度欠佳。

发明内容

本发明的目的是针对现有胶乳免疫比浊法检测FDP的方法敏感度低的缺陷，提供一种定量检测血浆、血清、尿液等样本中FDP含量，且操作简单、快速、定量准确、敏感度更高的诊断试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明是这样实现的：

一种采用胶乳免疫比浊法检测FDP含量的试剂盒，包含试剂R1、试剂R2、稀释液、FDP校准品。

本发明所述试剂R2为抗人FDP抗体胶乳试剂，所述抗人FDP抗体胶乳试剂的制备包含以下步骤：

步骤1：将抗人FDP抗体在pH值为2.5-3.0的溶液中进行酸化；

步骤2：将步骤1所得溶液用碱溶液调节pH至7.5-8.0，加入粒径为100-200nm的聚乙烯基苄基氯胶乳溶液，在20-25℃搅拌0.5-2小时，再在37℃孵育2-4小时；

步骤3：将步骤2所得溶液用pH值为7.5-8.5的封闭液在37℃封闭1-8小时；

步骤4：将步骤3所得溶液经离心后，取沉淀用含有稳定剂和防腐剂的缓冲液洗涤分散后即得。

作为优选，步骤1所述溶液为甘氨酸、盐酸或磷酸溶液中的一种。在具体实施方式中，步骤1所述酸化选择甘氨酸溶液，调节溶液的pH值为2.5-3.0，并在20-25℃保持30-40min。

作为优选，步骤2所述碱溶液为三羟甲基氨基甲烷溶液。步骤2将抗人FDP抗体酸化后，用三羟甲基氨基甲烷溶液调节pH至中性，在10min之内与粒径为100-200nm的聚乙烯基苄基氯胶乳颗粒溶液化学交联致敏，形成共价抗体-胶乳复合物，否则酸化后抗体在中性溶液中的空间三维结构容易回复到没有活性的自然构象。

步骤3将形成的共价抗体-胶乳复合物溶液，用pH值为7.5-8.5含BSA的0.1mol/L的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液封闭胶乳颗粒未结合抗体的表面活性基团甲基氯。

更优选地，步骤3所述缓冲液中的BSA浓度质量体积百分比以g/ml计为0.1-0.5％。

步骤4所述缓冲液优选为Tris/HCl缓冲液，将封闭后的溶液用含有稳定剂和防腐剂的Tris/HCl缓冲液洗涤分散，即得到稳定的试剂R2。

聚乙烯基苄基氯胶乳颗粒是一种核壳形式的胶乳颗粒，其胶乳核是甲苯乙烯聚合物，胶乳壳为乙烯基苄基氯的聚合物，是一种疏水性胶乳。在壳的表面具有高密度的氯甲基基团，这些活性表面功能基团能够在温和的水溶液中直接与抗体、抗原或其它配体的氨基基团反应，通过一步反应产生一种稳定的共价化合物。通过加入适当的表面活性剂，该胶乳粒子的表面形成机械性或电性的保护膜，可以抑制胶乳颗粒的絮凝；根据胶乳颗粒的比重，通过适当助悬剂调节缓冲液比重和粘度，能够使胶乳颗粒稳定悬浮而不会沉降。

抗人FDP抗体通过适当的酸处理后，抗体的铰链区三维空间结构进行了一定的修饰改变，导致包埋的铰链区疏水性FC片段暴露，使得更易与疏水性胶乳颗粒结合，FC特殊的位点与胶乳表面活性基团甲基氯发生共价键结合，形成稳定的抗体-胶乳颗粒。FC片段活性位点吸附在胶乳颗粒的表面，由于空间立体结构的影响，FC片段不能与类风湿因子Rf和补体C1Q等血液中干扰物质反应，从而降低了血液中干扰物质的影响。抗体经酸处理后，由于更多可利用的FDP抗原结合位点暴露，提高胶乳抗体的反应活性，从而可以减少胶乳试剂制备中抗体的用量，降低成本，同时也提高分析灵敏度。

稳定剂选自蛋白质、氨基酸、无机盐、表面活性剂、助悬剂、抗氧剂中的一种或多种。

本领域技术人员可以根据稳定剂所起的稳定作用原理及需求，选择以下的多种进行组合：牛血清白蛋白和明胶，能够对胶乳颗粒表面交联的抗体起到很好的胶体保护稳定作用，优选BSA，其终浓度质量体积百分比以g/ml计为0.1-0.5％；乙二醇、丙三醇、麦芽糖等作为一种助悬剂，可以提高溶液的密度和粘度，使胶乳颗粒能够长期悬浮在溶液中不会沉降而起到很好的稳定作用，优选丙三醇，其终浓度体积百分比为1-10％；甘氨酸、丝氨酸、精氨酸等氨基酸能够与金属离子形成稳定的络合物，可以防止溶液中进入金属离子干扰，优选丝氨酸，其终浓度质量体积百分比以g/ml计为4-6％；表面活性剂包括阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子型表面活性剂选择，能够吸附在胶乳颗粒的表面，降低胶乳颗粒表面张力，使胶乳颗粒不易聚集，有效地提高胶乳颗粒在溶液中稳定性，优选吐温40，其终浓度体积百分比为0.1-0.6％；抗氧剂选择二叔丁对甲酚，终浓度质量体积百分比以g/ml计为0.01％；选择适当浓度的无机盐，如质量体积百分比以g/ml计为0.80％的氯化钠。

更优选地，所述稳定剂为：BSA 0.1-0.5％(g/ml)，丝氨酸4-6％(g/ml)、助悬剂丙三醇1-10％、表面活性剂吐温40 0.1-0.6％、抗氧剂二叔丁对甲酚(BHT)0.01％(g/ml)和氯化钠0.7-0.9％(g/ml)的组合。

所述防腐剂选自本领域技术人员已知的适当防腐剂，如0.1％(g/ml)的叠氮钠。

本发明所述试剂R1为pH值7.0-9.0的缓冲液。

作为优选，所述缓冲液选自Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液、HEPPS缓冲液中的一种或多种的组合。

更优选地，所述缓冲液为10-70mmol/L的Tris/HCl缓冲液。

作为优选，所述缓冲液中含有促凝剂PEG-6000，质量体积百分比以g/ml计为2-6％，可以加快抗原抗体的免疫反应速度，缩短检测时间；含有无机盐氯化钠，质量体积百分比以g/ml计为0.7-0.9％。

本发明所述稀释液选自生理盐水、磷酸盐缓冲生理盐水中的一种。

作为优选，所述稀释液选择pH7.4的磷酸盐缓冲生理盐水。

本发明所述FDP校准品可由市场购得或通过自制获得。在具体实施方式中，公开了一种制备FDP校准品的方法：将人纤维蛋白原在Tris/HCl缓冲液中加入纤溶酶降解，将得到的纤维蛋白原降解产物(FDP)溶液用Tris/HCl缓冲液稀释成FDP浓度为27-33μg/ml，再添加稳定剂BSA、赋形剂甘露醇和防腐剂后通过冻干制成。其中Tris/HCl缓冲液的浓度30-70mmol/L，pH为7.0-8.0；BSA的终浓度为20-60mg/ml；甘露醇的终浓度为10-30mg/ml。

胶乳免疫比浊法的基本原理是将FDP抗体吸附于大小适中、均匀的胶乳颗粒上，当遇到样本中的FDP抗原时，抗原与抗体胶乳结合，则使胶乳颗粒发生聚集，胶乳的粒径发生改变，从而引起浊度的改变，反应体系的透光率降低，当达到稳定的下降速率即线性期时，透光率变化速率与FDP浓度呈正比。采用血凝分析仪或生化分析仪测定在一定波长下反应体系在线性期的透光率的变化率，通过绘制校准曲线可以计算出样本中FDP的含量。

用本发明所述试剂盒采用胶乳免疫比浊法对FDP校准品进行FDP含量检测，在血凝分析仪或生化分析仪上测定其透光率的变化率与FDP浓度建立校准曲线。取待测样本同法测定其透光率的变化率，即可在校准曲线上求得待测样本中FDP的含量。

本发明所述试剂盒与现有技术相比，具有如下特点：

1、灵敏度高，可达到0.10μg/ml；

2、0.50μg/ml～30.0μg/ml线性范围内高度相关，重复性好；

3、特异性强，且不易受干扰；

4、本发明试剂盒稳定性好，2-8℃可保存18个月，各试剂开瓶后至少可以保存15天。

5、操作简单、快速，从检测到出结果仅需5-10分钟。

附图说明

图1为本发明所述试剂盒的校准曲线；

图2示本发明所述试剂盒线性范围相关性；

图3为本发明所述试剂盒与市售进口试剂盒检测结果相关性比较。

具体实施方式：

本发明公开了一种检测纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量的试剂盒，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限定。

实施例1：本发明所述试剂盒的组成及制备方法

试剂R2即抗人FDP抗体胶乳试剂的制备：将含有500μg鼠抗人FDP单克隆抗体(购自American Diagnostica Inc.，产品货号ADINo.313)冻干品，加入0.5ml去离子蒸馏水复溶，取50μl溶液用3ml 0.1M氯化钠溶液(含叠氮钠0.1％(g/ml))稀释，向溶液中加入2.0ml0.05M甘氨酸缓冲液(pH2.3，0.1M氯化钠)，溶液的pH值为2.8。酸化的抗体溶液在室温下(20-25℃)保持30-40min，然后向溶液中加入100μl 1M的三羟甲基氨基甲烷溶液，将pH值调为7.5-8.0之间。

取1.25ml 4％(g/ml)聚乙烯基苄基氯胶乳颗粒混悬液(美国INVITROGEN公司，产品货号为C37345，平均粒径为200nm)，加入3.75ml去离子蒸馏水稀释，将调节至中性后的酸活化的抗体溶液立即在300rpm磁力搅拌下加入稀释后的胶乳混悬液中充分混合，在室温(20-25℃)下继续搅拌45分钟，再在37℃孵育3小时，形成稳定的胶乳颗粒-抗体复合物。然后加入2.8ml封闭液(含0.2％(g/ml)BSA的0.1mol/L甘氨酸缓冲液，pH 8.0)在37℃封闭1小时，离心倾去上清液，用20ml 30mmol/L Tris/HCl缓冲液(含0.2％BSA、6％丙三醇、5％丝氨酸、0.1％吐温40、0.8％氯化钠、0.01％BHT、0.1％叠氮钠，pH为8.0)洗涤1次，再以同样的20mlTris缓冲液分散成乳白色混悬液，使致敏的抗体胶乳颗粒浓度为2.5mg/ml。

试剂R1为缓冲液，其配制方法：三羟甲基氨基甲烷(Tris)浓度为50mmol/L，用盐酸调节后pH值为8.0。再加入氯化钠、PEG-6000、叠氮钠，其终浓度分别：氯化钠0.85％、PEG-60005％、叠氮钠0.1％。

本领域技术人员也可选择常规的其他缓冲液，如磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液、HEPPS缓冲液中的一种或多种。

稀释液：添加防腐剂的磷酸盐缓冲生理盐水(pH＝7.4)，其组成为Na₂HPO₄10mmol/L，NaH₂PO₄ 2mmol/L，NaCl 135mmol/L，KCl 4.7mmol/L，叠氮钠0.1％。

FDP校准品的制备：将市售人纤维蛋白原加入到50mmol/LTris/HCl缓冲溶液(Tris 50mM、NaCl 0.15mM、pH值7.4)，使浓度达到5.0mg/ml，向溶液中加入纤溶酶(终浓度为10mU/ml)，在37℃搅拌6小时。再在56℃水浴2小时，将纤溶酶灭活终止反应。以每分钟3000转离心10分钟，得到的上清液即为纤维蛋白原降解产物(FDP)溶液。以进口的日本积水医疗株式会社生产FDP校准品为原始标准，采用其FDP检测试剂盒(胶乳免疫比浊法)进行测定20次，求出均值。

将得到的FDP溶液用上述50mmo l/L Tris/HCl缓冲液稀释成FDP浓度为27-33μg/ml的溶液，然后再加入终浓度分别为50mg/ml牛血清白蛋白(BSA)、20mg/ml甘露醇、0.1％叠氮钠混合均匀。以0.5ml/瓶分装后进行冷冻干燥，即可得到FDP校准品的冻干疏松固体。取校准品10瓶，分别用0.5ml蒸馏水复溶，作为样本用日本积水医疗株式会社FDP试剂盒每瓶重复测定2次，计算总均值即为标示值，浓度为30.640μg/ml。

实施例2：本发明所述试剂盒的测定方法

将试剂盒中FDP校准品，精确加入0.5ml蒸馏水溶解，用稀释液配制成6个不同浓度的校准品溶液，浓度分别为0.958、1.915、3.830、7.660、15.320、30.640μg/ml。以日本东亚CA550血凝分析仪操作为例：反应温度为37℃，测定波长为575nm，分别取不同浓度的校准品溶液10μl，加入稀释液10μl，反应30秒后加入试剂R1100μl，再反应60秒后加入实施例1制备的试剂R2100μl，测定反应第50秒、第300秒的吸光度值(A₁、A₂)，计算吸光度差值ΔA＝A₂-A₁，每管重复测定3次，将各校准管3次测得的吸光度差值ΔA的均值为纵坐标，对应的浓度为横坐标，制作“浓度-吸光度差值”校准曲线：y＝0.01252x-0.00249，相关系数r＝0.9995，见图1。

取待测样本，同上方法测定样本的吸光度差值，代入校准曲线，即可以计算出待测样本中FDP的含量。如果样本中FDP的检测浓度超出校准曲线范围，为了保证检测的准确性，需要用FDP稀释液进行适当稀释后再行检测。

本试剂盒不仅适用于日本东亚CA550血凝仪，而且还适用于其它品牌、型号的血凝分析仪和生化分析仪，具体参数可根据仪器不同进行适当调整。

实施例3：本发明所述试剂盒的分析性能评估

1.线性范围

将接近线性范围上限的FDP的高浓度样本(30.42μg/ml)，用FDP稀释液将其按1/2，1/10，1/15，1/30，1/60稀释，共配制成6个不同浓度的溶液，用实施例2所述方法检测各浓度，每浓度重复测定3次，将测定浓度的平均值与理论浓度进行线性回归分析，计算回归方程为Y＝1.03917X-0.08011，相关系数为r＝0.9996，表明本发明试剂盒在0.50μg/ml～30.0μg/ml线性范围内相关性较好，见图2。

2.灵敏度即最低检测限

以5％人血清白蛋白为空白样本，按实施例2所述方法进行测定，重复测定20次，计算结果均值为0.0008，标准差SD为0.00025，根据以空白均值加两倍标准差报告方法计算吸光度变化量为0.0013，用稀释后浓度为0.05μg/ml、0.10μg/ml和0.15μg/ml的FDP校准品溶液测定，吸光度变化值分别为0.0007、0.0014、0.0020，其中浓度为0.10μg/mlFDP校准品ΔA高于+2SD的计算值，因此本发明试剂盒检测FDP的灵敏度为0.10μg/ml。

3.重复性和准确度

用日本积水医疗株式会社标示值分别为4.5μg/ml和28.6μg/ml的FDP校准品作为样本，按实施例2所述的方法测定，各浓度分别重复测定10次，分别计算测定均值

和标准差(S)。分别以

计算变异系数进行重复性考察，结果显示变异系数分别为1.62％和1.21％；以

计算相对偏差进行准确度考察，其相对偏差分别为1.71％和1.13％。

表1本发明所述试剂盒的重复性和准确度考察

4.批间精密度(批间差)

用3个批号的本发明实施例1组成的试剂盒分别测定同一份血浆样本各3次，分别计算每个批号3次的测定均值

和3个批号的总均值

以

进行批间精密度计算，结果显示批间精密度为2.38％。

表2本发明所述试剂盒的批间差考察

5.干扰物质的影响

将浓度为16.1μg/mlFDP校准品溶液，分别加入相同体积的各干扰物质溶液，加入后浓度分别为胆红素(18mg/L)、血红蛋白(470mg/L)，乳糜(福尔马肼)浊度为2800和类风湿因子(RF)(470IU/ml)，每个样本重复测定3次，取平均值，与加入同体积的蒸馏水比较，观察加入干扰物质与加入蒸馏水后FDP测定值的相对误差。结果表明：加入以上浓度干扰物质的与加入同体积蒸馏水后测定值的相对误差不超过3％，可以认为在中轻度溶血、黄疸或乳糜时，此测定方法的检测结果基本不受干扰。

表3本发明所述试剂盒的干扰物质影响实验

加入的干扰物质	测定均值(μg/ml)	相对误差
			蒸馏水	5.82
胆红素(18mg/L)	5.67	-2.58％
			血红蛋白(470mg/L)	5.72	-1.72％
乳糜(福尔马肼)浊度为2800	5.85	0.52％
			类风湿因子(RF)(470IU/ml)	5.76	-1.03％

实施例4：检测试剂盒的稳定性

将本发明试剂盒开瓶后置于2-8℃保存15天后，取出按实施例2所述方法测定日本积水医疗株式会社标示值分别为4.5μg/ml和28.6μg/ml两个不同浓度的校准品，各重复测定3次，计算平均值及与标示值的相对偏差。实验结果表明，开瓶15天后本发明试剂盒检测值与标示值的相对偏差都小于3％，稳定性较好。

将本发明试剂盒置于2-8℃保存18个月后，检测日本积水医疗株式会社标示值分别为4.6μg/ml和29.8μg/ml两个不同浓度的校准品，各重复测定3次，计算平均值及与标示值的相对偏差。实验结果显示检测值与标示值的相对偏差都小于3％，表明本发明试剂盒在此2-8℃保存18个月是比较稳定的。

表4本发明所述试剂盒的稳定性实验数据

实施例5：本发明所述试剂盒与已上市产品的比较

1.重复性和准确度的比较

用本发明试剂盒和市售进口FDP试剂盒同时测定日本积水医疗株式会社浓度为4.5μg/ml的FDP校准品，分别重复测定10次，计算均值

方差S²，进行统计分析，采用F检验和t检验比较两者的差异。

表5对浓度为4.5μg/ml校准品检测结果比较

对2组检测数据的总体方差显著性差异进行单侧F检验：查表α＝0.05，υ₁＝9，υ₂＝9，F_{α(υ1，υ2)}＝3.19；两组数据方差比的F值为1.5423，则P值大于0.05，两者的总体方差没有显著性差异。对2组检测数据总体均数显著性差异进行双侧t检验：查表可知α＝0.1，υ＝18，t_α(υ)＝1.734；根据统计学计算，两组数据的t＝-0.6935，则P值大于0.1，两者的总体均数没有显著性差异。通过比较结果表明：本发明试剂盒与市售进口FDP试剂盒在重复性和准确度的性能方面基本一致。

2.对医院正常人群和患者血浆样本检测的相关性比较

从上海市瑞金医院住院及门诊随机抽取正常人群和患者的血液样本共70份，其中男42例，女28例。血液按9∶1的比例与0.109mol/L枸橼酸钠抗凝液混匀后，3000r/min离心15分钟，分离得到血浆。用本发明试剂盒和市售进口FDP试剂盒分别对样本重复测定2次，分别计算测定均值，计算两者的相关系数，并进行线性回归。

血浆FDP的检测浓度小于2.5μg/ml的样本为12份，此浓度水平应为正常人的血浆，超出了市售进口FDP试剂盒的检测范围，定量不是很准确；浓度在2.5μg/ml-180μg/ml的样本为58份，两种试剂盒的相关系数r＝0.9989，线性回归方程为y＝1.011x-0.1238(见图3)。根据美国临床实验室标准化组织(CLSI)文件的要求(r＞0.975)，本发明试剂盒和市售进口试剂盒的检测数据具有很好的一致性。由此可见两种试剂盒在临床上对于弥漫性血管内凝血(DIC)、深静脉血栓(DVT)及肺栓塞(PE)等疾病的诊断和病程检测具有等同作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种采用胶乳免疫比浊法检测FDP含量的试剂盒，其特征在于，包含试剂R1、试剂R2、稀释液、FDP校准品；所述试剂R1为pH值7.0-9.0的缓冲液，所述试剂R2为抗人FDP抗体胶乳试剂，抗人FDP抗体胶乳试剂由以下方法制备：

步骤1：将抗人FDP抗体在pH值为2.5-3.0的溶液中进行酸化；

步骤2：将步骤1所得溶液用碱溶液调节pH至7.5-8.0，加入粒径为100-200nm的聚乙烯基苄基氯胶乳溶液，在20-25℃搅拌0.5-2小时，再在37℃孵育2-4小时；

步骤3：将步骤2所得溶液用pH值为7.5-8.5的封闭液在37℃封闭1-8小时；

步骤4：将步骤3所得溶液经离心后，取沉淀用含有稳定剂和防腐剂的缓冲液洗涤分散即得。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，步骤1所述溶液为甘氨酸、盐酸或磷酸溶液中的一种。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，步骤2所述碱溶液为三羟甲基氨基甲烷溶液。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，步骤3所述封闭液为含BSA的0.1mol/L的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液，BSA浓度质量体积百分比以g/ml计为0.1-0.5%。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，步骤4所述缓冲液为Tris/HCl缓冲液。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，步骤4所述稳定剂选自蛋白质、氨基酸、无机盐、表面活性剂、助悬剂、抗氧剂中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为质量体积百分比以g/ml计为0.1-0.5%的BSA、4-6%的丝氨酸、0.7-0.9%的氯化钠、0.01%的抗氧剂二叔丁基对甲酚和体积百分比为0.1-0.6%的表面活性剂吐温40、1-10%的助悬剂丙三醇。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液、HEPPS缓冲液中的一种或多种的组合。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为10-70mmol/L的Tris/HCl缓冲液，含有促凝剂PEG-6000，质量体积百分比以g/ml计为2-6%。

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