CN101817855A - 一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法。工艺以新鲜地黄为原料，切片，先醇提梓醇，再水提取多糖，醇沉、纳滤纯化多糖，大空树脂吸附、中压硅胶柱分离梓醇。采用本发明生产梓醇和地黄多糖，原料利用率高，成本低，工艺简单。

Description

一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法

技术领域：

本发明涉及梓醇和地黄多糖的提取纯化工艺，特别是一种同时从地黄中制备梓醇和地黄多糖的新工艺。

背景技术：

地黄为玄参科多年生草本植物，其块根人药，始载于《神农本草经》，列为上品，我国传统的大宗中药材，怀地黄为道地药材，主治鲜地黄清热生津，凉后，止血；用于热风伤阴、舌绛烦渴、发斑发疹、吐血、衄血、咽喉肿痛。生地黄清热凉血，养阴，生津；用于热病烦渴、发斑发疹、阴虚内热、吐血、衄血、糖尿病、传染性肝。化学成分含梓醇(catalpol)、多种氨基酸和糖、甘露醇、β-谷甾醇及菜油甾醇(campesterol)等。2005版《药典》已将梓醇作为地黄的主要成分之一。

梓醇：环烯醚萜类化合物。

分子式：C15H22O

分子量：362.45

梓醇是地黄最主要有效成分之一，是其“滋阴”作用的有效活性成分，为一种不很稳定的环烯醚萜类化合物，具有利尿、缓泻、降血糖、保肝及抗衰老等多种药理活性。研究表明，在暂时缺血情况下，梓醇有显著的神经保护功能，并发现梓醇能激活脑神经元，可以治疗因外伤、代谢障碍、脑缺血和帕金森氏病等引起的脑神经病。

现有提取梓醇方法，有微波萃取、超声提取、有机试剂提取，如刘影等人在《时珍国医国药》2009年第20卷第1期发表的“正交实验法优选地黄中梓醇的提取工艺”，文献中比较了梓醇的提取方法，纯化梓醇的方法，多是硅胶柱分离，如专利2008100016005.8(申请号)“鲜地黄中分离梓醇的方法”所公开的方法采用水提，大空树脂吸附，硅胶柱分离。

地黄多糖在地黄中含量很高，它有增强人体免疫力、抗肿瘤和降血糖作用。在临床已广泛应用。现有公开地黄多糖提取纯化方法很多，如卢晓琳等人在《天然产物研究与开发》发表了“怀地黄多糖双酶法提取工艺研究”，该文献比较了地黄多糖提取方法的优劣。

同时从地黄中提取纯化地黄多糖和梓醇的方法研究甚少，如专利200710026330.8(申请号)公开了利用地黄生产水苏糖和梓醇的方法，该工艺采用水提取、膜分离、树脂柱联用。

总之现有公开工艺存在以下缺点：①地黄原料利用率不高；②产品收率低或含量低。

发明内容：

本发明采用新鲜地黄，同时提取纯化梓醇和地黄多糖，解决了现有工艺的缺点。

本发明的目的是这样来实现的：

一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法，其特征在于包括以下几个步骤：

①提取：将新鲜地黄切成薄片，加入原料量的4-5倍95％乙醇回流提取一次，滤液加入活性炭脱色，得液体A，再加水提取2-3次，合并滤液加入活性炭脱色得液体B；

②醇沉：将上述液体B浓缩液至密度1.3-1.4，加入乙醇沉淀，分离沉淀物和液体C；

③多糖纯化：上述沉淀热水溶解，加入乙醇再次沉淀，再次热水溶解，加Sevag试剂沉淀蛋白，离心，得液体回收试剂后加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物，干燥得地黄多糖产品，纳滤透过液、沉淀分离液和液体B、C合并，得混合液；

④梓醇纯化：将上述混合液回收乙醇，通过大空树脂吸附，乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥，得梓醇粗品，粗品甲醇溶解加入中压硅胶柱分离，收集梓醇流分，浓缩，结晶，干燥即得梓醇产品

其特征在于所述提取条件：水提取温度为80-90℃，提每次加水4-5倍量，提取时间1-2小时，活性炭加入量为液体的0.5-1％，脱色时间0.5-2小时。

其特征在于所述分醇沉条件为：乙醇浓度为95％，加入量浸膏的3-4倍量。

其特征在于所述的纳滤膜为截留分子量1000-600的中空纤维纳滤膜，

根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述大空树脂可选AB-8或ADS-7极性大空树脂，优选ADS-7。

其特征在于所述步骤④的乙醇溶液洗脱条件为：4-5倍柱体积10-30％乙醇洗脱杂质，5-6倍柱体积的70-80％乙醇洗脱梓醇。

其特征在于所述步骤④的中压硅胶柱分离条件：5-6柱体积量二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，二氯甲烷和甲醇(5∶1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱。

其特征在于所述步骤④的重结晶条件为：乙酸乙酯回流饱和溶解，放置结晶。

本发明存在以下优点：以新鲜地黄为原料，梓醇不会因干燥而损失；先用高浓度乙醇提取梓醇，减少了提取过程酶和温度对梓醇的破坏，更易分离梓醇和多糖；醇沉过程中液体利用，提高了梓醇收率；选用纳滤膜提纯多糖，除小分子物质和无机盐效果好，透过液中的梓醇再次被利用；大空树脂柱分段洗脱除杂效果好，减少了后序硅胶的用量；中压柱可以连续上样，提高了硅胶的利用率，缩短了生产周期。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

TLC检测条件：(药典法)取梓醇对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶6∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例1：

将新鲜地黄(梓醇含量0.8％)水洗干净，切成薄片，取50kg，投入提取罐内，加入200L95％乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入1kg活性炭脱色2小时，过滤得液体A(主要含梓醇)；再水提2次，每次加水200kg水，温度90℃，提取时间2小时，合并液体加入3kg活性炭脱色2小时，滤过，得液体B。

减压浓缩液体B至密度1.3放出，得18kg浓缩液，注入醇沉罐，取54kg95％乙醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。

沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95％乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量1000纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95％乙醇，含醇量80％停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖3kg，含量85％。在醇沉和膜分离过程的液体和液体AC合并。

上述合并液体减压浓缩无醇，加入10LADS-7大空树脂柱吸附，先用40L30％乙醇洗脱杂质，再用50L80％乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得500g粗提物。粗提物用99％甲醇溶解，泵入10L中压硅胶柱。先泵入50L二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5∶1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇成分流出，收集该段流分，回收试剂至3L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品231g，含量98.2％。

实施例2：

将新鲜地黄(梓醇含量0.8％)水洗干净，切成薄片，取50kg，投入提取罐内，加入250L95％乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入2.5kg活性炭脱色0.5小时，过滤得液体A(主要含梓醇)；再水提3次，每次加水250kg水，温度80℃，提取时间1小时，合并液体加入5kg活性炭脱色0.5小时，滤过，得液体B。

减压浓缩液体B至密度1.4放出，得19kg浓缩液，注入醇沉罐，取78kg95％乙醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。

沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95％乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量800纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95％乙醇，含醇量75％停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖3.2kg，含量85％。在醇沉和膜分离过程的液体和液体AC合并。

上述合并液体减压浓缩无醇，加入10LADS-7大空树脂柱吸附，先用50L10％乙醇洗脱杂质，再用60L70％乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得490g粗提物。粗提物用1L99％甲醇溶解，泵入10L中压硅胶柱。先泵入60L二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5∶1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇成分流出，收集该段流分，回收试剂至5L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品235g，含量98％。

实施例3：

将新鲜地黄(梓醇含量0.8％)水洗干净，切成薄片，取100kg，投入提取罐内，加入500L95％乙醇，回流提取2小时，抽滤液体，加入4kg活性炭脱色1小时，过滤得液体A(主要含梓醇)；再水提2次，加水600kg、500kg，温度90℃，提取时间2小时、1小时，合并液体加入10kg活性炭脱色1小时，滤过，得液体B。

减压浓缩液体B至密度1.35放出，得40kg浓缩液，注入醇沉罐，取160kg95％乙醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。

沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95％乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量600纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95％乙醇，含醇量80％停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖6.7kg，含量75％。在醇沉和膜分离过程的液体和液体AC合并。

上述合并液体减压浓缩无醇，加入20LAB-8大空树脂柱吸附，先用100L20％乙醇洗脱杂质，再用100L80％乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得1100g粗提物。粗提物用99％甲醇溶解(分两次)，泵入10LZH中压硅胶柱。先泵入120L二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5∶1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇，收集该段流分。依次用甲醇，二氯甲烷处理硅胶柱，再次泵入粗提物溶解液，二氯甲烷甲醇洗脱，收集梓醇流分，合并两次流分回收试剂至10L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品485g，含量98％。

实施例4：

将新鲜地黄(梓醇含量0.8％)水洗干净，切成薄片，取100kg，投入提取罐内，加入500L95％乙醇，回流提取1小时，抽滤液体，加入4kg活性炭脱色0.5小时，过滤得液体A(主要含梓醇)；再水提2次，每次加水600kg，温度80℃，提取时间2小时、1小时，合并液体加入8kg活性炭脱色1小时，滤过，得液体B。

减压浓缩液体B至密度1.4放出，得40kg浓缩液，注入醇沉罐，取120kg95％乙醇，缓慢加入充分搅拌沉淀，分离沉淀物，得沉淀物和液体C。

沉淀物热水溶解，再加其体积的4倍量95％乙醇沉淀，分离沉淀物热水溶解，加入Sevag试剂除去蛋白，液体加入截留分量1000纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入95％乙醇，含醇量80％停止加入，分离沉淀物，干燥即得地黄多糖6.5kg，含量80％。在醇沉和膜分离过程的液体和液体AC合并。

上述合并液体减压浓缩无醇，加入20LADS-7大空树脂柱吸附，先用80L30％乙醇洗脱杂质，再用120L70％乙醇洗脱梓醇，收集有效成分减压浓缩，干燥得1050g粗提物。粗提物用2L99％甲醇溶解，分两次分离，每次泵入20LZH中压硅胶柱。先泵入60L二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，再用二氯甲烷和甲醇(5∶1)洗脱梓醇，TLC监测洗脱，至无梓醇，收集该段流分。依次用甲醇，二氯甲烷处理硅胶柱，再次泵入粗提物溶解液，二氯甲烷甲醇溶液洗脱，收集梓醇流分，合并两次流分回收试剂至10L放置结晶。滤出结晶物，乙酸乙酯回流饱和溶解，放置重结晶，滤出干燥得梓醇产品487g，含量98％。

Claims (8)

1.一种从新鲜地黄中制备梓醇和地黄多糖的方法，其特征在于包括以下几个步骤：

①提取：将新鲜地黄切成薄片，加入原料量的4-5倍95％乙醇回流提取一次，滤液加入活性炭脱色，得液体A，再加水提取2-3次，合并滤液加入活性炭脱色得液体B；

②醇沉：将上述液体B浓缩液至密度1.3-1.4，加入乙醇沉淀，分离沉淀物和液体C；

③多糖纯化：上述沉淀物B热水溶解，加入乙醇再次沉淀，再次热水溶解，加Sevag试剂沉淀蛋白，离心，得液体回收试剂后加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液，加入乙醇沉淀，滤出沉淀物，干燥得地黄多糖产品，纳滤透过液、沉淀分离液和液体B、C合并，得混合液；

④梓醇纯化：将上述混合液回收乙醇，通过大空树脂吸附，乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥，得梓醇粗品，粗品甲醇溶解加入中压硅胶柱分离，二氯甲烷甲醇洗脱，收集梓醇流分，浓缩结晶，重结晶，干燥即得梓醇产品。

2.根据权利要求1所述制备的方法，其特征在于所述提取条件：水提取温度为80-90℃，提每次加水4-5倍原料量，提取时间1-2小时，活性炭加入量为液体的0.5-1％，脱色时间0.5-2小时。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述分醇沉条件为：乙醇浓度为95％，加入量浸膏的3-4倍量。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于所述的纳滤膜为截留分子量1000-600的中空纤维纳滤膜。

5.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述大空树脂可选AB-8或ADS-7极性大空树脂。

6.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的乙醇溶液洗脱条件为：4-5倍柱体积10-30％乙醇洗脱杂质，5-6倍柱体积的70-80％乙醇洗脱梓醇。

7.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的中压硅胶柱分离条件：5-6柱体积量二氯甲烷甲醇混合溶液(20∶1)洗脱杂质，7-8柱体积量二氯甲烷甲醇混合溶液(5∶1)洗脱梓醇。

8.根据权利要求1所述提制备方法，其特征在于所述步骤④的重结晶条件为：乙酸乙酯回流饱和溶解，放置结晶。