CN101805388A

CN101805388A - 人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法

Info

Publication number: CN101805388A
Application number: CN 201010145908
Authority: CN
Inventors: 孟勤; 尹建元; 李巍; 马佳慧; 张莹; 李艳艳
Original assignee: Jilin University
Current assignee: Jilin University
Priority date: 2010-04-14
Filing date: 2010-04-14
Publication date: 2010-08-18

Abstract

人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，涉及人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，公开这些化合物的制备方法：酸降解制备及其纯化方法。具体涉及化学名称分别为人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-原人参三醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇。本发明反应条件温和，成本低，周期短，质量可控，产物易分离纯化，收率高，适合工业化生产，用以满足神经保护等药用资源的需求。

Description

人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，涉及人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，具体涉及人参三醇通过水解使侧链开环产生神经保护活性化合物的方法。

背景技术：

自从人参皂苷被确证为人参和西洋参中主要有效成分后，化学和医药工作者致力于某些单体皂苷的合成和有效单体的转化或结构修饰，达到改善其化学性质及其提高生物活性的目的。目前，主要有以下几种方法在研究及应用中，例如酸水解法、碱水解法、酶解法、缩合法、氧化环合等。

1982年，Hart B H首次报道了在温和酸条件下，使人参皂苷降解并确定了降解产物的结构。陈英杰等首次发现，在适宜的反应条件下，碱催化降解法，对人参皂苷的降解具有反应温和，容易控制等优点，用此法成功地用人参皂苷Rg2合成人参皂苷Rh1。1992年宋长春等用同样方法从西洋参叶皂苷制备了单体人参皂苷Rh1和Rh2。杨凌等利用碱水解天然人参皂苷制备出单体低级性人参皂苷及其苷元。尹建元等利用人参皂苷经水解制备出新人参二醇(专利号：ZL 200710055693.4)

研究表明达玛-(E)-20(22)-烯-3β，12β，25-三醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，12β，20-三醇，20(R/S)-达玛烷-3β，12β，20，25-四醇具有明显的抗癌活性，可以抑制人的肿瘤细胞生长与增殖，还能抑制前列腺移植瘤的生长，对肝肿瘤和胃肿瘤有明显的抑制作用，并增加肿瘤对放化疗的敏感性，诱导肿瘤细胞分化、凋亡，抑制肿瘤新生血管生成、抑制肿瘤的侵润和转移、增强机体免疫力和降低化疗药物毒副作用等功效。达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇对神经元具有显著的保护作用，明显减缓皮层神经元凋亡，对凋亡细胞有一定的保护作用；能够明显减轻次声引发的大鼠海马损伤、细胞凋亡、记忆功能减退等损害，保护海马神经元。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种通过人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法。

本发明提供了人参三醇的开环方法，以及具有神经保护活性的达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-原人参三醇，20(R))-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇的制备方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

人参三醇加有机溶剂于容器中，搅拌，加热，溶解，加入保护剂，再加入酸，回流反应，酸降解后的反应液用碱中和，蒸除有机溶剂，除盐，得酸降解物，反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到神经保护活性化合物达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-原人参三醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇，其中原料量为有机溶剂的1％～15％(g/ml)，有机溶剂浓度范围为35％～80％V/V，保护剂用量为1～10g/L，酸浓度范围为1～25V/V％，酸降解温度为40～90℃；水解时间为2小时～3天。

所获得的主要活性化合物的结构及通式为：

达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)和20(S)-达玛烷-人参三醇衍生物

本发明提供的方法中，所用的原料为人参三醇包括人参三醇，单体皂苷和植物总皂苷经酸降解或碱降解或生物转化或结构修饰等多种方法获得的人参三醇。

本发明提供的方法中，原料的开环反应为酸降解反应。

本发明提供的方法中，酸为质子酸或路易斯酸，如盐酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、草酸、苹果酸、柠檬酸等，优先选择盐酸、硫酸；浓度范围为1～25V/V％；保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠、没食子酸，优先选择抗坏血酸，用量为1～10g/L；酸解在有机溶剂甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶、乙腈之一种或其混合物溶剂进行，优先选择甲醇、乙醇、丙醇、丙酮，最佳溶剂选择为甲醇或乙醇；浓度范围为35％～80％V/V，优选浓度范围50％～75％V/V；原料量为有机溶剂的1％～15％(g/ml)；反应在容器中搅拌，加热，回流进行。酸降解温度为40～90℃；水解时间为2小时～3天，优选酸降解温度为75～85℃；优选降解时间为3小时～8小时。

本发明提供的方法中，在甲(乙)醇为溶剂条件下，生成如下化合物，分别为具有显著神经保护活性的人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-原人参三醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇。

本发明反应条件温和，成本低，周期短，质量可控，产物易分离纯化，收率高，适合工业化生产，用以满足抗肿瘤和神经保护等药用资源的需求。

具体实施方式：

实施例1：

取人参三醇10g，溶于甲醇250ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入盐酸(1％～36％)15ml，于40～90℃恒温水浴加热搅拌回流2小时～3天，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收甲醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(1.2g)，20(R)-原人参三醇(0.8g)，20(R)-25-甲氧基-3β，6β，12β，20-四醇(0.7g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(3.0g)。

实施例2：

取人参三醇10g，溶于乙醇250ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入盐酸(1％～36％)15ml，于75～85℃恒温水浴加热搅拌回流8小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(1.3g)，20(R)-原人参三醇(0.8g)，20(R)-25-乙氧基-3β，6β，12β，20-四醇(0.8g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(2.7g)。

实施例3：

取人参三醇10g，溶于甲醇500ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入盐酸(1％～36％)15ml，于40～55℃恒温水浴加热搅拌回流2天，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收甲醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(0.5g)，20(R)-原人参三醇(1.5g)，20(R)-25-甲氧基-3β，6β，12β，20-四醇(0.9g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(3.1g)。

实施例4：

取人参三醇10g，溶于乙醇500ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入盐酸(1％～36％)15ml，于40～90℃恒温水浴加热搅拌回流24小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(0.6g)，20(R)-原人参三醇(1.4g)，20(R)-25-乙氧基-3β，6β，12β，20-四醇(1.0g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(3.2g)。

实施例5：

取人参三醇10g，溶于乙醇250ml中，加入盐酸(1％～36％)15ml，于60～70℃恒温水浴加热搅拌回流12小时天，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(0.9g)，20(R)-原人参三醇(1.1g)，20(R)-25-乙氧基-3β，6β，12β，20-四醇(0.8g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(2.9g)。

实施例6：

取人参三醇10g，溶于乙醇250ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入硫酸(1％～35％)15ml，于75℃恒温水浴加热搅拌回流6小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(1.0g)，20(R)-原人参三醇(1.0g)，20(R)-25-甲氧基-3β，6β，12β，20-四醇(1.3g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(3.2g)。

实施例7：

取人参三醇10g，溶于乙醇500ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入硫酸(1％～35％)15ml，于90℃恒温水浴加热搅拌回流2小时天，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(0.8g)，20(R)-原人参三醇(1.2g)，20(R)-25-甲氧基-3β，6β，12β，20-四醇(1.0g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(3.1g)。

实施例8：

取人参三醇10g，溶于乙醇250ml中，加入抗坏血酸0.5g，加入醋酸(1％～50％)15ml，于55～70℃恒温水浴加热搅拌回流18小时，加入氢氧化钠溶液调pH为7.0，回收乙醇，除盐，得酸降解物。反复经(200～300目硅胶)柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O(2∶2∶4∶1，下层)，甲醇-水重结晶，得到人参三醇衍生物：达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇(0.9g)，20(R)-原人参三醇(1.1g)，20(R)-25-乙氧基-3β，6β，12β，20-四醇(0.8g)，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇(2.9g)。

Claims

1.一种人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征是人参三醇加有机溶剂于容器中，搅拌，加热，溶解，加入保护剂，再加入酸，回流反应，酸降解后的反应液用碱中和，蒸除有机溶剂，除盐，得酸降解物，反复经200～300目硅胶柱层析，流动相为CHCl₃-MeOH-EtOAc-H₂O比例为2∶2∶4∶1的下层，甲醇-水重结晶，得到神经保护活性化合物达玛-(E)-20(22)-烯-3β，6β，12β，25-四醇，20(R)-原人参三醇，20(R)-25-甲(乙)氧基-3β，6β，12β，20-四醇，20(R/S)-达玛烷-3β，6β，12β，20β，25-五醇，其中原料量为有机溶剂的1％～15％，有机溶剂浓度范围为35％～80％V/V，保护剂用量为1～10g/L，酸浓度范围为1～25V/V％，酸降解温度为40～90℃；水解时间为2小时～3天。

2.根据权利要求1所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：所述的酸为质子酸或路易斯酸，如盐酸、硫酸、磷酸、冰醋酸、草酸、苹果酸、柠檬酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的酸为盐酸或硫酸。

4.根据权利要求1所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二氧六环、二甲亚砜、吡啶及乙腈之一种或其混合物溶剂。

5.根据权利要求4所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：所述的有机溶剂为甲醇或乙醇。

6.根据权利要求1所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：所述的保护剂为抗坏血酸、亚硫酸氢钠或没食子酸。

7.根据权利要求6所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：所述的保护剂为抗坏血酸。

8.根据权利要求1所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：酸降解温度为75～85℃。

9.根据权利要求1所述的人参三醇制备具有神经保护活性化合物的方法，其特征在于：降解时间为3小时～8小时。