CN101780124A - 一种独行千里提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种独行千里提取物及其制备方法和应用。所述独行千里提取物是取植物独行千里根茎，粉碎后加热回流、冷浸或渗漏提取，减压浓缩得到粗提浸膏，用氯仿提取粗提浸膏得到，可应用于制备治疗神经病理性疼痛、治疗炎性疼痛、治疗癌症性疼痛、治疗糖尿病疼痛、治疗风湿病疼痛、治疗跌打损伤疼痛、治疗咽喉肿痛、治疗牙痛或治疗腹痛药物方面，具有很好的镇痛、抗炎活性，对弗氏完全佐剂性关节炎效果明显。本发明的制备工艺具有成本低、易于工业化生产的特点。

Description

一种独行千里提取物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种独行千里提取物及其制备方法和其在制备抗炎镇痛、抗风湿性关节炎药物方面的应用。

背景技术

独行千里为山柑科(Capparaceae)植物独行千里Capparisacutifolia Sweet〔C.membranacea Gardn.et Champ.〕的干燥根。别名扣钮子(广东乳源)、膜叶槌果藤、独虎龙、黑皮蛇、黑钩榕(海南)等，产于广东、广西、江西(大余)、福建(沙县、崇安、延平)、湖南(宜章)、台湾；生于低海拔灌丛、林中、旷野或山坡路旁。本品为我国南方的民间草药。性平，味苦、涩，有毒；功能活血散瘀，解痉止痛。用于治疗风湿关节痛，筋骨不舒，咽喉肿痛，腹痛；外用根或叶治疮疖肿毒，跌打损伤。

目前独行千里在临床上应用多为简单加工使用，可以内服或外用；粗提制剂，成分复杂，普遍存在着粗、大、黑的不足，因其有效部位的不明确，临床应用存在服用剂量较难控制和治疗效果不稳定等缺陷。亟需在药效学引导下，筛选独行千里的有效部位并加以应用研究，但目前尚无独行千里有效部位提取工艺、最佳提取条件的报道，也未见其提取物在抗炎镇痛、抗炎抗风湿药理方面的研究报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种独行千里提取物。

本发明的另一个目的是提供所述提取物的制备方法。

本发明还有一个目的是提供所述独行千里提取物的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现：

提供一种独行千里提取物，是取植物独行千里根茎，粉碎后加热回流、冷浸或渗漏提取，减压浓缩得到粗提浸膏，用氯仿提取得到。

本发明提供了所述独行千里提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)独行千里根茎干燥后粉碎成粗粉；

(2)采用体积比浓度为70～95％的乙醇浸提、回流提取或超声提取独行千里根茎粉；合并提取液，减压浓缩得浸膏；

或采用体积比浓度为70～95％的乙醇渗漏提取独行千里根茎粉；合并提取液，减压浓缩得浸膏；

(3)将步骤(2)所得浸膏经柱层析纯化后，即得独行千里有效部位：氯仿部位或乙酸乙酯部位；

或将步骤(3)所得浸膏经石油醚脱脂后以氯仿萃取、氯仿回流提取或氯仿超声提取，提取液减压回收氯仿，得稠膏，即为独行千里有效部位。

步骤(2)若采用乙醇浸提，乙醇的加入量优选按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入；优选浸提3次，每次1天～7天；

步骤(2)若采用乙醇回流提取，乙醇的加入量优选按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入；优选提取2～3次，每次1～6小时；

或步骤(2)所述乙醇超声提取，乙醇的加入量优选按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入，超声提取2～3次，每次1～6小时；

或步骤(2)所述乙醇渗漏提取，优选流速1～3ml/秒，直至渗漏液颜色较淡为止。

本发明还同时提供了另一独行千里提取物的制备方法，包括以下步骤：

(A)独行千里根茎干燥后粉碎成粗粉；

(B)采用60～80％乙醇回流提取独行千里根茎粉，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

(C)以1～2％(体积比浓度)的稀酸水(可采用盐酸或硫酸等)酸化后(优选酸化至PH值为2～3)，酸水液以氨水调PH值至9～11，氯仿萃取，减压回收氯仿所得稠膏，即为独行千里有效部位。

步骤(B)乙醇的加入量是独行千里根茎粗粉重量的8～20倍，提取3次，每次1～6小时。

本发明成功从植物独行千里中提取抗炎镇痛、抗关节炎有效部位将原料粉碎后加热回流、冷浸或渗漏提取，减压浓缩得到粗提浸膏，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、水等提取，得到不同部位，进行药理粗筛，本发明将氯仿部位进行进行碘化汞钾、碘化铋钾、硅钨酸生物碱指示剂的试管定性反应，均呈阳性反应，说明本发明制备得到的独行千里有效部位为总生物碱成分，经系统的抗炎镇痛及抗弗氏完全佐剂性关节炎实验，其抗炎、镇痛、抗佐剂性关节炎效果明显，证明其具有显著的药理作用，可用于制备抗炎镇痛、抗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、痛风、肩周炎的药物，为临床用药提供新的选择。

因此，本发明同时提供了独行千里提取物在制备治疗抗炎镇痛、抗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、痛风、肩周炎药物方面的应用。

优选地，所述独行千里提取物可应用于制备治疗神经病理性疼痛药物、治疗炎性疼痛药物、治疗癌症性疼痛药物、治疗糖尿病疼痛药物，可应用于制备治疗风湿病疼痛药物、跌打损伤疼痛、咽喉肿痛、牙痛、腹痛(特别是痉挛性疼痛)等药物。

上述应用，优选的剂量是0.5～200mg/kg体重。

所述有效部位可以加入药剂学允许的赋形剂制备成各种药物制剂，制剂形式有口服片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、散剂、口服液或乳剂；或者外用涂抹剂、膏剂、巴布剂、贴剂或凝胶剂。

本发明的有益效果是：

本发明对独行千里原料药材中的有效成分进行了充分的提取、浓缩、分离，得到的有效部位(所述独行千里提取物)占药材重量的0.2～1.5％左右，具有显著的药理功效，可抗炎镇痛、抗风湿性关节炎。

本发明获得的有效部位优于粗提物入药，便于制成各种制剂，为临床用药提供新的选择。

本发明方法设计合理，具有工艺过程简单、成本低、能耗低的特点。

附图说明

图1模型组大鼠踝关节腔光镜结构图

图2独行千里有效部位大剂量组对大鼠踝关节腔光镜结构图

图3独行千里有效部位中剂量组对大鼠踝关节腔光镜结构图

图4独行千里有效部位小剂量组对大鼠踝关节腔光镜结构图

图5阳性对照组对大鼠踝关节腔光镜结构图

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。通过大量实验总结得到本发明技术方案，总结见前述发明内容部分，乙醇浸提、回流提取、超声提取、渗漏提取中乙醇的加入量、浸提次数及时间等参数的优选方案不一一在实施例中赘述，但并不因此限定本发明范围。

实施例1独行千里有效部位(即独行千里提取物)的制备

取粉碎后的独行千里(根茎)2公斤左右，加12倍量(重量：体积)95％乙醇浸提7天，过滤后滤渣再用10倍量95％乙醇浸提5天，过滤后滤渣再用10倍量95％乙醇浸提3天，合并滤液，减压回收乙醇，得到浸膏。浸膏用60g硅胶拌匀后上硅胶柱，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮洗脱，减压回收溶剂，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分别为5.8g和6.1g。

实施例2独行千里有效部位的制备

取粉碎独行千里(根茎)2公斤左右，加12倍量85％乙醇超声(100KHZ)3次，每次45min，得到浸膏约86.2g。浸膏用60g硅胶拌匀后，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮回流提取3次，每次10倍量溶剂，提取1小时；减压回收溶剂，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分别为9.2g和10.9g。

实施例3独行千里有效部位的制备

取粉碎独行千里(根茎)2公斤左右，加12倍量85％乙醇回流提取3次，分别为2小时、1小时、1小时，得到浸膏约95.2g。浸膏用60g硅胶拌匀后，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮回流提取3次，每次10倍量溶剂，提取1小时；减压回收溶剂，得到的氯仿部位、乙酸乙酯部位分别为11.1g和12.6g。

实施例4独行千里有效部位的制备

取粉碎后的独行千里(根茎)2公斤左右，加95％乙醇渗漏提取，流速1～3ml/min，至提取液颜色较淡无生物碱显色反应，回收乙醇，得到浸膏约91.3g。石油醚脱脂后，用水混悬，再分别以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮萃取，得到的萃取液分别浓缩，得到氯仿部位和乙酸乙酯部位分别为6.3g和7.2g。

实施例5独行千里有效部位的制备

独行千里根茎干燥后粉碎，分别加入20、15、10倍量60～80％(体积比浓度)乙醇回流提取3次，提取时间分别为2、1.5、1.5小时，合并提取液，减压浓缩至浸膏，以1～2％稀酸水(盐酸、硫酸或硝酸等)酸化后，酸水液以氨水调PH值至9，氯仿萃取，减压回收氯仿所得稠膏，即为独行千里氯仿部位5.46g。

将实施例1～5制备得到的氯仿部位进行碘化汞钾、碘化铋钾、硅钨酸生物碱指示剂的试管定性反应，均呈阳性反应。

实施例6涂抹剂制备

称取聚乙烯醇120g(优选PVA05-88与17-88各60g)，用10g甘油润湿后加入到300ml蒸熘水中浸泡溶涨。另取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位(氯仿部位)50g与30g苯甲酸一起加入至500ml乙醇中在搅拌下至药物基本溶解或均匀混悬，搅拌均匀后缓缓加入聚乙烯醇液中，随加随搅拌，搅匀后过滤即得。

实施例7软膏剂制备

称取硬脂酸100g在水浴上熔化，加入羊毛脂20g、白凡士林120g并水浴加热至80℃，另取上述1～5任一实施例方法获得独行千里有效部位50g加入；另将甘油120g及蒸镏水500ml加热至90℃，再加入十二烷基硫酸钠10g和羟苯乙酯1g溶解为水相，然后慢慢将水相倒入油相中，边加边搅拌直至冷凝，即得乳剂型软膏剂。

实施例8硬膏剂制备

取生胶洗净，切成适宜大小的条块，在炼胶机中塑炼成网状胶片，浸入适量的溶剂汽油中，浸泡至完全溶涨成凝胶状，移入打膏桶内搅拌3～4小时，依次加入凡士林、羊毛脂、松香、氧化锌等按照常规方法制成基质，再加入上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位5～50g，继续搅拌3小时，待已成均匀膏浆时，经涂布、切割、加衬、包装即得。

实施例9凝胶剂制备

取卡波姆980适量用10ml丙二醇润湿后，逐渐缓慢搅拌加入水90ml，使其充分溶涨；再加入10ml水溶解的1％苯甲酸钠溶液；上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位5～50g用丙二醇90ml研磨混悬，再加入至胶体中，搅拌均匀后，搅拌下滴加三乙醇胺，即制得凝胶剂。

实施例10巴布剂制备

将1～20g的

Ultrez 10(卡伯母，市购)撒在去离子水15ml中，低速搅拌30min，得到A相溶液；称取独行千里有效部位浸膏0.1～20g，加入少量水，加入10ml甘油、透皮促进剂，不断搅拌，水浴加热使熔化得B相；高岭土、二氧化钛混合均匀，再与聚丙烯酸钠NP700混合均匀，加入剩余甘油润湿，研匀，将熔化的稠膏加入，研匀；山梨醇、亚硫酸氢钠、EDTA用28ml去离子水溶解，逐渐缓慢加入到B相中；甘羟铝、柠檬酸溶解于18ml水中，为C相；搅拌中将C相透明溶液加入B相，再将A相加入B、C相的混合物中。研磨均匀后涂布在无纺布上，室温下放置过夜，干燥后，与保护层复合，切割成6×8cm²包装即可。

实施例11贴剂制备

称取1～30g聚乙烯醇17-88，加入蒸馏水浸泡过夜，待其充分溶胀后，水浴回流至溶，备用。精密称取独行千里有效部位浸膏0.1～20g，加入无水乙醇10～30ml、甘油5～20ml、吐温800.1～1ml，适当加热溶解后趁热加入聚乙烯醇17-88胶液，缓慢搅拌混匀，涂布，干燥，即得。

实施例12片剂

取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位50g，粉碎后过80目筛，与淀粉120g、20g乳糖、羧甲基淀粉钠10g混匀，加8％淀粉桨适量制成软材，过20目筛制成湿颗粒，60℃干燥整粒后，加入干颗粒重量0.8％的硬脂酸镁为润滑剂，压制成1000素片，包薄膜衣即得。

实施例13胶囊剂

称取淀粉120g、糊精20g、羧甲基淀粉钠10g混匀后，逐渐缓慢加入药物(取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位50g，加入95％乙醇适量，水浴融化成的液体)，制成软材，过20目筛制成湿颗粒，60℃干燥整粒后，填充2号胶囊壳即可。

实施例14丸剂制备

称取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位50g，粉碎后过80目筛，适量蜂蜜作黏合剂泛制成丸。

实施例15颗粒剂制备

称取糖粉300g，乳糖50g、糊精150g混匀后，逐渐缓慢加入药物(取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位5g，加入95％乙醇适量水浴融化成液体)，制成软材，过14目筛制成湿颗粒，60℃干燥12目筛整粒后，分装(每袋重5g)，包装即可。

实施例16散剂制备

取上述1～5任一实施例方法获得的独行千里有效部位5g，加入淀粉100g，混合均匀，分装每包1g，包装即得。

实施例17乳剂制备

将独行千里有效部位浸膏5～50g干燥后过120目筛的细粉，加入110ml豆油混合均匀，加入豆磷脂溶液(11g豆磷脂加入甘油18ml，再加水约50ml研磨用蒸馏水稀释至250ml)，加蒸馏水至1000ml，用胶体磨匀化2次，即得。

实施例18独行千里提取物的镇痛实验

动物：ICR小鼠(由广州中医药大学动物中心提供)，雌性，体重20.34±1.43g。

药品及试剂：独行千里有效部位(临用前以0.5％羧甲基纤维素(CMC)配成混悬液)；阿司匹林片(石家庄制药有限公司，规格0.3g/片，临用时以0.5％CMC配成混悬液)；0.5％CMC溶液。

(1)扭体法：小鼠50只，适应性饲养三天，按体重随机分为5组，分别灌服独行千里氯仿部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、阿司匹林200mg/kg(阳性对照组)、0.5％CMC溶液(空白对照组)，连续给药5天。实验前禁食16小时，自由饮水，灌胃给药后30min，腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml，记录40min内小鼠扭体次数，进行组间t检验，结果见表1：

表1独行千里有效部位对小鼠扭体次数的影响(x±SD，n＝10)

注：与对照组比较，*P＜0.01；△P＜0.05

实验结果表明，与空白组比较，阿司匹林组、大剂量组均能显著减少小鼠扭体次数(P＜0.01)；大、中、小剂量组均可减少小鼠扭体次数(P＜0.05)。

(2)热板法：小鼠50只(初筛痛阈在10～30s)，适应性饲养三天，按体重随机分为5组，分别灌服独行千里氯仿部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、阿司匹林200mg/kg(阳性对照组)、0.5％CMC溶液(空白对照组)，连续给药5天。末次给药40min后，再测痛阈。痛阈超过60s者以60s计算。服药后痛阈减去服药前痛阈即得服药后痛阈延长时间，结果见表2：

表2独行千里有效部位对小鼠痛域的影响(x±SD，n＝10)

注：与对照组比较，*P＜0.01

结果表明，与空白组比较，阿司匹林组、大剂量、中剂量组均能显著提高小鼠热板痛阈；小剂量组未能显著性提高小鼠的热板痛阈。镇痛实验结果表明，独行千里有效部位在大、中剂量下有明显的镇痛作用。

实施例19独行千里有效部位抗炎实验

1、对抗二甲苯致小鼠耳廓肿胀所造成的炎症模型

动物：ICR小鼠(由广州中医药大学动物中心提供)雌雄各半，体重20.31±1.66g。

器材：小鼠灌胃器、BP-211D电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)、50μL可调微量取样器、6mm打孔器

药品及试剂：独行千里有效部位(临用前以0.5％羧甲基纤维素(CMC)配成混悬液)；阿司匹林片(石家庄制药有限公司，规格0.3g/片，临用时以0.5％CMC配成混悬液)；0.5％CMC溶液。

小鼠50只，适应性饲养三天，按体重随机分为5组，每组10只，灌服独行千里有效部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、阿司匹林200mg/kg(阳性对照组)、0.5％CMC溶液(空白对照组)，每日一次，连续给药5天。末次给药1小时后，每只小鼠左耳两面均涂布二甲苯0.03ml致炎，30分钟后脱臼处死动物，沿耳廓基线剪下两耳，用6mm打孔器取双侧耳对称处的圆耳片，用电子分析天平称重，并计算肿胀度和抗炎抑制率。结果见表3。

肿胀度＝左耳片重-右耳片重

抗炎抑制率(R)＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度×100％

表3独行千里有效部位对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响(x±SD，n＝10)

注：与对照组比较，*P＜0.05，△P＜0.01；与阿司匹林组相比，☆P＜0.05

从实验结果可知，独行千里有效部位大、中、小剂量组与对照组相比，均呈不同程度的抑制小鼠耳壳肿胀作用，具有随剂量增加而作用增强的趋势，大剂量组有极显著性差异(P＜0.01)，中、小剂量组有显著性差异(P＜0.05)。与阿司匹林组比较，大剂量组有显著性差异(P＜0.05)，中、小剂量组均无显著性差异。

2、对蛋清致小鼠足趾肿胀的炎症模型

小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。灌服独行千里有效部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、阿司匹林200mg/kg(阳性对照组)、0.5％CMC溶液(空白对照组)，每日一次，连续给药5天。末次给药1小时后，小鼠左后足掌皮内注入蛋清每只0.03ml，注射前及注射后1h、2h测定右后足容积。足爪肿胀增加百分率(％)＝(致炎后右后足容积-致炎前右后足容积)/致炎前右后足容积×100％。实验结果见表4。

表4独行千里有效部位对蛋清所致小鼠足趾肿胀的影响(x±SD)

注：与对照组比较，△P＜0.01；与阿司匹林组相比，☆P＜0.01

实验结果表明，阿司匹林组、给药组与空白对照组相比，在2h均呈现了显著的抑制炎症肿胀的作用(P＜0.01)；大剂量组与阿司匹林组相比，也有显著性差异。

3、小鼠腹腔毛细管通透性实验

小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。灌服独行千里有效部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、阿司匹林200mg/kg(阳性对照组)、0.5％CMC溶液(空白对照组)，每日一次，连续给药5天。末次给药1小时后，取伊文思蓝生理盐水溶液，以0.1ml/10g尾静脉注射，立刻腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml/只。20分钟后，断脊椎处死，用剪刀剪开腹腔，以5ml生理盐水反复洗涤，将洗涤液以离心管收集，用离心机以1000r/min离心5分钟取滤液，滤液用UV2300型分光光度计，以590nm处波长测OD值，结果见表5。

表5独行千里有效部位对小鼠毛细血管通透性的影响(x±SD)

注：与对照组比较，△P＜0.01

实验结果表明，独行千里有效部位具有良好的抗炎作用。

实施例20独行千里有效部位对大鼠佐剂性关节炎治疗作用

本实验用弗氏完全佐剂(FAC)建立大鼠佐剂性关节炎(AA)模型，用游标卡尺测量大鼠足跖厚度，以FAC致炎后大鼠足跖肿胀度、病理改变程度为指标，观察独行千里有效部位的抗炎作用。

药物：独行千里有效部位、正清风痛宁片(西安利君集团)

试剂：弗氏完全佐剂(Freund’s Adjuvant Complete，FAC)美国SIGMA公司产品。

动物：SD大鼠，雄性，体重180-200g。由广州中医药大学实验动物中心提供。

仪器：A℃S-1EAS型电子天平(精度0.5g)北京市菲姆斯科技开发公司产品

大鼠50只，适应性饲养三天，按体重随机分为5组，分别灌服独行千里氯仿部位(折算成药材量)40g/kg(小剂量组)、80g/kg(中剂量组)、120g/kg(大剂量组)、正清风痛宁片组、模型组，连续给药2天后。第三天用游标卡尺在测量正常足厚度之后，每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1ml，并在6h、18h、24h、3d、5d分别测量致炎后足肿胀度，并在10d、14d、18d、22d、26d分别测定左后足趾(非致炎足)的厚度。

以足肿胀度为指标，采用SPSS13.0统计软件包进行单因素方差分析。急发性和继发性炎症实验结果分别见表6和表7。

表6.独行千里有效部位对大鼠急性炎症实验结果(右足肿胀度)(x±SD，n＝10)

注：与模型组相比：P＞0.05*；P＜0.01***；0.05＞P＞0.01**

从实验结果可知，24小时内为急性炎症的发生期，与模型组相比，给药组各个剂量和阳性对照组对其均有明显抗炎作用。24小时后为继发性炎症的形成期，各个给药组对继发性炎症形成虽有一定的抑制作用，但不是特别明显。3天后，给药组和阳性对照组的炎症抑制作用较弱。由此可见，独行千里有效部位高、中、低剂量组，对大鼠佐剂性关节炎急性炎症，均有抑制作用。

表7独行千里有效部位对大鼠继发性炎症实验结果(左足肿胀度)(x±SD，n＝10)

注：与模型组相比：P＜0.01***；0.05＞P＞0.01**

从表7实验结果可知：18天以内是继发性炎症的形成期，药物对继发性炎症的形成有一定的抑制作用，作用相对缓和，无显著性。18天后，继发性炎症形成，药物的抗炎作用开始显效。与空白组相比，高、中剂量组和阳性对照组都有明显的抗炎作用。高剂量组26天有极显著性差异(P＜0.01***)，中剂量组与阳性对照组有显著性差异(P＜0.05)。

实施例21  独行千里有效部位对大鼠佐剂性关节炎病理改变的影响1组织固定和切片方法

取材、固定和脱钙：取药效实验第26天结束，大鼠处死后，在踝关节上15mm处剪断后肢，用10％的中性福尔马林浸泡固定48h，再用甲酸脱钙液浸泡4周脱钙。

冲洗：流水冲洗24h，洗去甲酸脱钙溶液。

脱水：用系列浓度乙醇逐级脱水，70％乙醇30min，80％乙醇30min，90％乙醇30min，95％乙醇30min，无水乙醇I 60min，无水乙醇II30min。

透明：二甲苯I 20min，二甲苯II观察至组织透明。

浸蜡：透明后的组织立即置于预先用烤箱融化的石蜡中，石蜡I60min，石蜡II 60min。

包埋：将组织定向置于装有融化石蜡的包埋板中，待石蜡凝固成块。

切片、贴片和烤片：用石蜡切片机将蜡块切成6μm的薄片，将蜡片贴在涂有蛋白甘油的载玻片上，45℃恒温箱内过夜后，常温下保存待染色。

2HE染色步骤

将烤干的切片放入二甲苯I、二甲苯II、二甲苯III各5min脱蜡；依次移入无水乙醇I、无水乙醇II、95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇、60％乙醇、50％乙醇、蒸馏水中复水，各5min；苏木精染色5min；自来水洗、蒸馏水洗各3遍；1％盐酸乙醇分色5秒钟；自来水洗3遍，氨水碱化10秒；蒸馏水洗3遍；0.5％伊红酒精染色13min；依次移入90％乙醇、95％乙醇、无水乙醇I各0.5min；无水乙醇II 5min；二甲苯I、二甲苯II、二甲苯III各5min；最后用中性树胶封片。

实验结果：

致炎后第26天的AA大鼠踝关节组织切片显微镜下观察，模型组可见滑膜内炎性细胞浸润，滑膜组织肿胀，有少量纤维组织渗出；滑膜细胞有一定程度增生，排列不规则；滑膜层下毛细血管扩张，血管腔内充满炎性细胞。见附图1所示。

各给药组镜下所见，滑膜组织炎性细胞较少，滑膜肿胀较轻纤维组织渗出不明显；滑膜细胞有增生但程度低于模型组；滑膜层毛细血管腔内炎性细胞较少，见附图2～4所示，阳性对照组结果见附图5。

Claims (10)

1.一种独行千里提取物，其特征在于是取植物独行千里根茎，粉碎后加热回流、冷浸或渗漏提取，减压浓缩得到粗提浸膏，用氯仿提取粗提浸膏得到。

2.一种权利要求1所述独行千里提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)独行千里根茎干燥后粉碎成粗粉；

(2)采用体积比浓度为95％的乙醇浸提、回流提取或超声提取独行千里根茎粉；合并提取液，减压浓缩得浸膏；

或采用体积比浓度为70～95％的乙醇渗漏提取独行千里根茎粉；合并提取液，减压浓缩得浸膏；

(3)将步骤(2)所得浸膏经柱层析纯化后，即得独行千里有效部位：氯仿部位；

或将步骤(3)所得浸膏经石油醚脱脂后以氯仿萃取、氯仿回流提取或氯仿超声提取，提取液减压回收氯仿，得稠膏，即为所述独行千里提取物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)所述乙醇浸提采用的乙醇的加入量按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入；优选浸提3次，每次1天～7天；

或步骤(2)所述乙醇回流提取，乙醇的加入量按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入；优选提取2～3次，每次1～6小时；

或步骤(2)所述乙醇超声提取，乙醇的加入量按照独行千里根茎粉重量的8～20倍量加入，超声提取2～3次，每次1～6小时；

或步骤(2)所述乙醇渗漏提取的流速1～3ml/秒。

4.一种权利要求1所述独行千里提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(A)独行千里根茎干燥后粉碎；

(B)采用60～80％乙醇回流提取独行千里根茎粉，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

(C)以稀酸水酸化后，酸水液以氨水调PH值至9～11，氯仿萃取，减压回收氯仿所得稠膏，即为独行千里有效部位。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于步步骤(B)所述乙醇的加入量是独行千里根茎粉重量的8～20倍，提取3次，每次1～6小时。

6.一种权利要求1所述独行千里提取物的应用，其特征在于应用于制备抗炎镇痛、抗风湿性关节炎、治疗类风湿性关节炎、治疗痛风或肩周炎方面的药物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于应用于制备治疗神经病理性疼痛、治疗炎性疼痛、治疗癌症性疼痛、治疗糖尿病疼痛、治疗风湿病疼痛、治疗跌打损伤疼痛、治疗咽喉肿痛、治疗牙痛或治疗腹痛药物方面。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于应用于制备治疗痉挛性疼痛药物方面。

9.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于所述独行千里提取物的应用剂量为单次服用剂量0.5～200mg/kg体重。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于是将所述独行千里提取物辅以药剂学允许的赋形剂制备成为口服片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、散剂、口服液或乳剂；或者制备成为外用涂抹剂、膏剂、巴布剂、贴剂或凝胶剂。

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