CN101772308B - 益生菌和纤维在腹泻上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗腹泻的营养组合物，包括鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、菊粉和大豆多糖。

Description

益生菌和纤维在腹泻上的应用

技术领域

本发明属于用于预防和/或治疗腹泻的、包括益生菌和纤维的婴儿营养品领域。

背景技术

腹泻是严重的公共健康问题，是营养不良的主要成因，在发展中国家小于5岁的儿童特别是婴儿中，全部死亡病例的四分之一与之相关。腹泻每年导致10亿多次的疾病发作，全球平均每个儿童发作3次，全球范围内导致近500万死亡。

对于急性腹泻特别是婴儿的急性腹泻，目前的建议是补充流体和电解质损失，同时提供营养支持。但是这种治疗方法并没有缩短腹泻的持续时间。可缩短腹泻持续时间的选择包括使用抗生素、抗动力药物(anti-motility)和抑制分泌药物。但这并不总是有效，并经常带来严重的副作用。一般的一致观点是，在治疗婴儿急性胃肠炎时没有必要使用药理剂。

益生菌(probiotics)，特别是乳杆菌种类(lactobacillus species)，己被用作腹泻的预防剂和促进腹泻治愈的治疗剂。

EP 0904784涉及一种用于预防和治疗胃肠道疾病的营养制剂，包括一种双岐杆菌(Bifidobacterium)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和一种乳杆菌菌株，并优选地包括益生元(prebiotics)化合物。该制剂可为食品添加剂、即用食品组合物、婴儿配方或者管喂食品(tubefeeding)的形式，任选地包括纤维。

WO 2006/046871涉及一种用于治疗和/或预防脓毒症、菌血症和/或内毒素血症的组合物，包括鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)并任选地包括纤维。

US 6,241,983涉及一种用于促进胃肠健康的组合物，包括益生菌和食物纤维。优选的有益的人肠道微生物包括乳杆菌和双歧杆菌。

WO 2006/110406涉及一种组合物，包括一种益生菌组分和一种增甜剂组分。

WO 2005/039319涉及一种组合物，包括非消化性寡糖和短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)的混合物。

WO 2006/091103涉及一种组合物，包括短双歧杆菌、两种非消化性寡糖以及任选的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。

发明内容

本发明人发现，包含鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)以及菊粉(inulin)和大豆多糖(大豆PS)的组合物对缩短腹泻的持续时间具有有益效果，该效果至少与所报道的单独使用鼠李糖乳杆菌的效果相似，同时该组合物可以通过向结肠提供可发酵基质来恢复微生物群，修复由腹泻导致的粘膜萎缩，并弥补营养缺乏。鼠李糖乳杆菌以及菊粉和大豆PS两者的结合还带来如下优点：减轻婴儿腹泻，食品中活细菌的存活力增强导致保质期延长，所食入的细菌中以存活形式到达结肠的数目增加，刺激结肠中外源细菌和内源细菌的生长和植入并使这些细菌的代谢作用活化，以及沿着小肠和结肠发挥作用。

不溶性大豆多糖的存在有利地使水从液态粪便中分离出来。包括鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖的组合的组合物可有利地集合了如下作用：缩短腹泻的作用(如刺激免疫系统的作用)、提高益生菌菌株的存活力、改善微生物群、抗病原作用、提高矿物保持、提高水分保持、促进肠壁修复和/或弥补营养缺乏。该作用超出了单个组分的作用。

具体实施方式

本发明涉及一种治疗和/或预防人受试者的腹泻、特别是急性腹泻的方法，所述方法包括将含有鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖的组合物给予所述的人受试者。换句话说，本发明涉及一种含有鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖的组合物在制备用于治疗和/或预防人受试者的腹泻的营养组合物中的应用。本发明还可表述为一种用于治疗和/或预防人受试者的腹泻、特别是急性腹泻的组合物，包括鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖。

鼠李糖乳杆菌

本发明的组合物包括鼠李糖乳杆菌。在存在于人肠道中的乳杆菌菌种中，该菌种是最丰富的菌种之一，已经发现属于该菌种的菌株可有效预防和/或治疗腹泻，包括婴儿急性腹泻。据称，预防或治疗腹泻的机制包括刺激免疫系统的作用、改善微生物群和/或直接的抗病原作用。优选地，当与典型株鼠李糖乳杆菌ATCC 7469(Stackebrandt&Goebel，1994，Int.J.Syst.Bacteriol.44：846-849)相比时，本发明中的鼠李糖乳杆菌的16S rRNA序列具有至少95％、更优选至少97％、进一步优选至少99％的同一性。鼠李糖乳杆菌在小肠和结肠中发挥它的抗腹泻作用。优选使用鼠李糖乳杆菌而不使用双歧杆菌，这是因为双歧杆菌只在大肠中有活性，鼠李糖乳杆菌在小肠中也可发挥作用，而小肠是经常发生引起腹泻的感染的地方。所以，使用鼠李糖乳杆菌代替双歧杆菌具有在小肠中也能对抗腹泻的优点。在乳杆菌菌种中优选使用鼠李糖乳杆菌，这是因为属于该菌种的菌株在肠道中是最丰富的，是最强健的，在对抗腹泻时是最有效的。

优选的鼠李糖乳杆菌菌株是从母乳喂养的健康人类婴儿的粪便中分离的那些菌株。几种鼠李糖乳杆菌菌株可从乳酸细菌的生产商处购买，但是它们也可以直接从粪便中分离，然后经识别、鉴定和生产。在一个优选的实施方案中，所述组合物包括至少一种选自下述的鼠李糖乳杆菌：鼠李糖乳杆菌LCS-742(Morinaga)、鼠李糖乳杆菌LR-35(Chr.Hansen)、鼠李糖乳杆菌GG(Valio)、鼠李糖乳杆菌HN001(Howaru)、鼠李糖乳杆菌R1039、R0011、R0049(Lallemand)、鼠李糖乳杆菌LBA 12.5U、LR-32(Rhodia)、鼠李糖乳杆菌271 231(Probi AB)、鼠李糖乳杆菌KCl(DSM)、鼠李糖乳杆菌LMG P-22799。更优选地，所述鼠李糖乳杆菌为菌株乳杆菌GG(ATCC 53103)。更优选地，所述鼠李糖乳杆菌为菌株LMGP-22799。鼠李糖乳杆菌菌株LMG P-22799表现出良好的技术特性，即没有不想要的抗生素抗性、在胃肠道中的高存活力、对肠细胞的良好的粘附性以及较好地防止肠病原粘附在肠细胞上。

该组合物在每克干重中优选地含有10²至10¹²菌落形成单位(cfu)的鼠李糖乳杆菌，优选10⁴至10¹¹，更优选10⁵至10¹⁰，最优选10⁵至5×10⁹。在每100ml即用组合物中，该组合物优选地含有10³至10¹³cfu鼠李糖乳杆菌，优选10⁴至10¹²，更优选10⁵至10¹¹，最优选10⁶至5×10¹⁰cfu。本发明的鼠李糖乳杆菌的剂量优选为每日给予10²至10¹³、更优选给予10⁵至10¹¹、最优选给予10⁷至5×10¹⁰cfu。

菊粉

本组合物包含菊粉。菊粉是一种可被人微生物群发酵的水溶性纤维。在本文中，菊粉被定义为一种非消化性寡糖，包括一条聚合度(DP)为2至250的β连接的果糖单元的链，90％以上的果糖单元由β(2→1)键连接。果糖链的末端可以有也可以没有葡萄糖单元。因而菊粉可以由GFn或Fn表示，其中G代表葡萄糖基单元，F代表果糖基单元，n为互相连接的果糖基单元的数目，n为2或者更多。优选地，本发明中所用的菊粉的平均DP值为7或者更多。平均DP值优选至少10、更优选至少20。适合的菊粉例如为可购得的Raftiline ST、RaftilineHP(Orafti)或者Frutafit(Sensus)。与平均DP值较小的菊粉相比，使用平均DP值超过7、更优选超过10、更加优选超过20的菊粉可降低肠道的渗透负担，从而防止了在患腹泻时特别不想要的有害的通便作用。

菊粉的存在选择性地刺激肠道细菌、特别是乳杆菌的生长和/或活性。这种刺激尤其是发生在结肠中。从而有利地降低了pH值，形成了有机酸，例如乳酸和短链脂肪酸(包括特别是丁酸)，这些有机酸具有抗病原作用(包括引发腹泻的病原)，并且作为肠上皮细胞的能源(从而修复肠壁)，它们还有助于矿物保持，这在腹泻时是特别有利的。另外，菊粉可刺激肠道中的益生菌菌株鼠李糖乳杆菌的生长、存活和/或代谢活性。这不仅包括大肠，还有利地包括小肠。

本发明营养组合物在每g干重中优选含有至少0.5mg菊粉，优选至少1.5mg，更优选至少5mg，更加优选至少10mg。优选地，本发明组合物在每g干重中含有不超过0.5g菊粉，更优选不超过0.35g，更加优选不超过0.2g，最优选不超过0.1g。本发明营养组合物在每100ml液态组合物中优选含有至少5mg菊粉，优选至少15mg，更优选每100ml至少50mg，甚至更加优选至少100mg。优选地，本发明组合物在每100ml中含有不超过10g菊粉，更优选每100ml不超过5g，甚至更加优选每100ml不超过2g，最优选每100ml不超过1g。本发明中菊粉的优选给予剂量为每天0.1至10g，更优选0.2至5g，更优选0.5至3g。

大豆多糖

本发明组合物中含有大豆多糖。在本发明中，术语“大豆多糖(PS)”和“大豆纤维”可互换使用，定义为从大豆中分离的非淀粉性、主要是不溶性的多糖。当在本发明中提及大豆多糖时，多糖被定义为DP值超过10、更优选超过20、更优选超过50、甚至更加优选超过100的糖。大豆纤维的适当来源有Fibrim(Solae)。大豆多糖中含有纤维素性和非纤维素性食物纤维。适用于本发明的通常市售来源的大豆多糖含有72-78％的总食物纤维(基于官方的AOAC法)，该纤维组分由约94-95％的水不溶性纤维(纤维素和半纤维素)和约5-6％的水溶性纤维(如阿拉伯半乳聚糖之类的多糖)组成。

不溶性大豆多糖的存在有利地使水从液态粪便中分离出来。另外，大豆PS的存在有利地导致了丁酸的形成。丁酸是肠上皮细胞的能源，有助于修复由对抗致腹泻病原的炎症反应所引发的肠损伤。

本发明营养组合物在每g干重中优选含有至少0.8mg大豆PS，优选至少2.5mg，更优选至少8mg，甚至更加优选至少15mg。优选地，本发明组合物在每g干重中含有不超过0.8g大豆PS，更优选不超过0.6g，甚至更加优选不超过0.35g，最优选每g干重不超过0.15g。本发明营养组合物在每100ml液态组合物中优选含有至少8mg大豆PS，优选至少25mg，更优选每100ml至少80mg，甚至更加优选每100ml至少150mg。优选地，本发明组合物在每100ml中含有不超过15g大豆PS，更优选每100ml不超过8g，甚至更加优选每100ml不超过3g，最优选每100ml不超过1.5g。本发明中大豆PS的优选给予剂量为每日0.15至15g，更优选0.3至8g，更优选0.8至5g。

优选地，大豆PS与菊粉的重量比在5至0.2之间，更优选在3至0.5之间，甚至更加优选在2至1之间。菊粉与大豆PS之间有平衡的比例是有利的，这是因为这样可确保可溶性纤维与不溶性纤维之间的适当的比例，以及它们对于腹泻的不同的有益效果。为清楚起见，应该注意“大豆PS与菊粉的重量比在5至0.2之间”是指大豆PS的重量除以菊粉的重量等于一个介于5和0.2之间的数。

包括鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖的组合的组合物可有利地集合如下作用：沿着整个肠道缩短腹泻的作用(如刺激免疫系统的作用)、提高益生菌菌株的存活力、改善微生物群、抗病原作用、提高矿物保持、提高水分保持、促进肠壁修复和/或弥补营养缺乏。该作用被认为超出了各单个组分的作用。特别是鼠李糖乳杆菌、大豆PS和菊粉的结合导致更多地形成了短链脂肪酸，包括丁酸和乳酸，以及在小肠中的作用增强。优选地，该组合物在每克大豆PS加菊粉中含有10⁴至10¹²菌落形成单位(cfu)鼠李糖乳杆菌，优选10⁶至10¹¹，更优选10⁷至10¹⁰，最优选10⁸至5×10⁹cfu。

微量营养素

本发明的组合物优选地含有锌。在发展中国家，儿童缺锌现象非常普遍。在腹泻时补充锌可缩短该治疗的疾病发作的持续时间和严重程度。在腹泻期间通常会过量产生一氧化氮(NO)，作为自由基，一氧化氮可诱导分泌作用和细胞损伤。添加锌有助于改善小肠的生理状态，并有可能减少腹泻复发的风险。优选地，该组合物在每g干重中含有至少35μg锌，更优选至少60μg。优选地，该组合物在每g干重中含有不超过250μg锌。

本发明组合物优选地含有铁用以补充铁损失。并且，铁可缩短腹泻的持续时间。优选地，该组合物在每g干重中含有至少40μg，更优选至少80μg。优选地，该组合物在每g干重中含有不超过250μg铁。

优选地，该组合物同时含有锌和铁，这是因为发现同时补充锌和铁可减少患严重腹泻的风险。优选地，铁与锌的重量比在0.8和1.3之间。锌与铁有平衡的比例可确保锌和铁被适当地吸收。

营养组合物

本发明的组合物特别适于满足36个月以下的婴儿、特别是24个月以下的婴儿、更加优选12个月以下的婴儿的每日营养需求。因此，本发明的组合物优选地含有脂质组分、蛋白质组分和可消化性碳水化合物组分，其中脂质组分提供20至55％的总卡路里，所述蛋白质组分提供5至15％的总卡路里，所述可消化性碳水化合物组分提供30至75％的总卡路里。优选地，本发明组合物包括提供25至50％的总卡路里的脂质组分，提供6至13％的总卡路里的蛋白质组分，以及提供40至65％的总卡路里的可消化性碳水化合物组分。

当为液态形式，如即用型液态形式时，该组合物优选地每100ml含有1.0至6.5g脂肪，更优选每100ml含有1.8至4.0g。以干重计，本发明组合物优选地含有8至40wt.％脂肪，更优选12至30wt.％。在总脂肪酸中，饱和脂肪酸的量优选少于58wt.％，更优选少于45wt.％。基于总脂肪酸的重量，单不饱和脂肪酸的浓度优选在17至60％的范围。基于总脂肪酸的重量，多不饱和脂肪酸的浓度优选在20至60％的范围。优选地，该组合物含有n-6多不饱和脂肪酸亚油酸(LA)和n-3多不饱和脂肪酸α-亚麻酸(ALA)。LA/ALA重量比优选在4和10之间，更优选在5和7之间。

优选地，该组合物含有长链多不饱和脂肪酸，例如花生四烯酸、二十二碳六烯酸和/或二十碳五烯酸。优选存在n-3LC-PUFA，如EPA和/或DHA。n3-LC-PUFA可减轻肠的炎症反应，这对于患腹泻的婴儿来说是特别有利的。

当为液态形式，如即用型液态形式时，该组合物每100ml优选含有0.5至4g蛋白质，更优选每100ml含有1.0至3.0g。以干重计，本发明组合物优选含有5至30wt.％蛋白质，更优选10至20wt.％。以总蛋白质计，本发明组合物优选含有至少50wt.％的非人乳来源的蛋白质，更优选至少90wt.％。以总蛋白质计，本发明组合物优选含有至少50wt.％牛乳来源的蛋白质，更优选至少90wt.％。本发明组合物优选含有酪蛋白和/或乳清蛋白。酪蛋白与乳清蛋白的重量比优选为0∶100至100∶0，更优选10∶90至90∶10，更优选20∶80至80∶20。本发明中所用的术语“蛋白质”是指蛋白质、肽和游离氨基酸的总和。该组合物可任选地含有水解的蛋白质和/或游离氨基酸。优选地，该组合物不含有水解的蛋白质和/或游离氨基酸，因为这可增大该组合物的渗透负荷，对患有腹泻的人受试者来说是不利的。

当为液态形式，如即用型液态形式时，该组合物每100ml优选含有2至30g可消化性碳水化合物，更优选每100ml含有5至15g。以干重计，本发明组合物优选含有40至80wt.％可消化性碳水化合物，更优选50至70wt.％。该组合物优选含有至少一种选自下述的可消化性碳水化合物：乳糖、麦芽糊精、淀粉、蔗糖、葡萄糖和麦芽糖。优选地，本发明组合物含有麦芽糊精和/或淀粉。使用具有较高聚合度的可消化性碳水化合物来代替单糖和二糖可减轻渗透负荷，对患有腹泻的人受试者来说这是有利的。

本发明组合物优选含有稻米淀粉。与基于葡萄糖的口服补液(ORS)相比，已经发现基于稻米的口服补液可以更加有效地在患有急性传染性腹泻的儿童中减少粪便排出，缩短腹泻持续时间，以及促进液体和电解质的肠吸收。基于稻米的ORS的益处以前归因于其较低的渗透负荷、较快的吸收速度以及较高的碳水化合物含量。对于基于稻米的ORS可减少粪便排出以及促进吸收的另一种解释是稻米能够抑制肠分泌。

本发明组合物优选含有果胶(pectin)或果胶降解产物。果胶和/或其降解产物可有利地抑制引起腹泻的病原微生物粘附在肠壁上，从而减轻腹泻。

该组合物优选含有半乳寡糖(GOS)，更优选β-连接的GOS。这些β-连接的GOS有益地减少引起腹泻的细菌与肠细胞之间的粘附。该组合物在每g干重中优选含有10至200mg β-连接的GOS，更优选20至90mg。β-连接的GOS的一个适当的来源是Vivinal(Borculo)。

该组合物优选含有核苷酸。可食用的核苷酸可有利地促进修复由导致腹泻的病原损害的肠细胞。

本发明组合物优选以液态形式给予。为满足婴儿的热量需求，该组合物优选含有50至200kcal/100ml液体，更优选60至90kcal/100ml液体，甚至更加优选60至75kcal/100ml液体。该热量密度可确保水和热量消耗之间的最佳比例。本发明组合物的渗透压优选在150和420mOsmol/l之间，更优选260至320mOsmol/l。该渗透压对于患腹泻的婴儿来说非常重要，有助于减轻胃肠压力，缓解腹泻。

优选地，该组合物为液态形式，其以Brookfield粘度计在20℃、100s^-1的切变率测得的粘度值低于35cps。适当地，该组合物为粉末形式，可以用水重构形成液体，或者为液体浓缩形式，应该用水稀释。当该组合物为液体形式时，优选每天给予的体积在约80至2500ml的范围，更优选每天约450至1000ml。该组合物可用水适当地重构以形成半流体、可用匙舀起的组合物。

在一个优选的实施方案中，该组合物为包括鼠李糖乳杆菌、菊粉、大豆PS、葡萄糖以及钠、钾、氯离子的补液，且渗透压在200和320mOsmol/l之间，更优选在230和285mOsmol/l之间，最优选在235和245mOsmol/l之间。

应用

已发现根据本发明的组合物特别适合用作婴儿营养品，特别是早产婴儿、足月婴儿以及处于开始食用固体食物的断奶期的婴儿。因此，本发明提供了一种向人类婴儿提供营养的方法，所述方法包括将本发明组合物给予所述婴儿。优选地，所述婴儿的年龄介于0和36个月之间，更加优选0和18个月之间，最优选0和12个月之间。本发明组合物可有利地用于制备预防和/或治疗腹泻、特别是传染性腹泻、更特别是轮状病毒腹泻的药物。优选地，所述的含有鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆PS的组合物用于治疗急性腹泻。

在一个优选的实施方案中，鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆PS的组合物存在于还包括葡萄糖和电解质的口服补液中，在第一补液步骤中恢复水和电解质平衡，同时立即使鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆PS出现在胃肠道中。

优选地，在使用葡萄糖-电解质混合物进行约3至4小时的第一补液步骤以恢复水和电解质平衡之后再使用本发明组合物。鼠李糖乳杆菌、菊粉、大豆PS的组合物与脂质组分、可消化性碳水化合物组分和蛋白质组分一起，可快速恢复正常的粪便排出量和稠度，同时为特别是小肠壁提供生长和修复的营养。本发明组合物优选使用2-10天，更优选使用2-5天，直到腹泻痊愈。

在本说明书以及权利要求书中，动词“包括”及其变化形式以非限制性意义使用，指该词后面的项目被包括，但是没有具体提及的项目并不被排除。另外，用词语“一”或者“一个”修饰的要素并不排除该要素有多于一个的可能性，除非上下文明确要求有且只有一个该要素。因此，词语“一”或者“一个”一般指“至少一个”。

实施例

实施例1：使用鼠李糖乳杆菌、菊粉和大豆多糖的混合物以及微量 营养素的补充营养来缩短急性婴儿腹泻的持续时间

方法：

进行了随机、双盲临床试验以评价含有鼠李糖乳杆菌(益生菌)和食物纤维(菊粉和大豆多糖)的婴儿制剂在治疗58名患中度脱水急性腹泻的3-12个月的营养良好的印度尼西亚男婴时的效果。在足够地口服补液之后，患者被随机地分配接受：低乳糖婴儿制剂，包括鼠李糖乳杆菌(5×10⁸/100ml)和食物纤维(0.15g菊粉/100ml和0.25g大豆多糖/100ml)的组合物以及较高浓度的几种特定的微量营养素(1.1mg铁/100ml、0.9mg锌/100ml、0.05mg铜/100ml、7μg锰/100ml、1.0μg硒/100ml、1.9mg维生素D3/100ml和1.1μg维生素E/100ml)(实验组)；或者不含鼠李糖乳杆菌或食物纤维的低乳糖婴儿制剂(对照组)，该制剂中含有标准浓度的微量营养素(0.5mg铁/100ml、0.5mg锌/100ml、0.04mg铜/100ml、1.4mg维生素D3/100ml和0.8μg维生素E/100ml)(对照组)。记录每个婴儿每天的下列数据：排便体积、排便频度和稠度以及精确的体重值。腹泻的持续时间被定义为入院后直到排出最后一次液态或半液态粪便(之后在24小时内没有再一次出现异常粪便)所经过的小时数。

结果：

两组患者在入院时在年龄、人体测量指标和营养状态、临床特征、治疗历史以及可能与腹泻发病率相关的实验室值等方面都是相当的。实验组的平均(SD)年龄为8.1(2.6)个月，对照组为8.0(2.7)个月。入院时，患者为中度脱水状态。在分离病原时，实验组和对照组之间没有检测到差异。在76％的病例中，轮状病毒是最主要的致病因素，这在实验组和对照组中是相同的。

与对照组相比，实验组的腹泻的持续时间显著缩短(实验组和对照组分别为1.63和2.45天；p＜0.05)，这在第一天的治疗后就变得很明显。该研究提供证据表明，在发展中国家，在口服补液之后提供含有益生菌、益生元和微量营养素的抗腹泻制剂具有缩短婴儿腹泻的持续时间的有益效果。与对照组相比，实验组更倾向于较低的粪便重量。在医院进行补液后，在第一天和第二天，实验组与对照组相比经食物治疗后倾向于具有较低的粪便排出量(以每千克体重每天的克数计)。

实施例2：大豆PS、菊粉和鼠李糖乳杆菌的协同作用

材料：

使用体外半动态批量发酵系统(semi-dynamic batch fermentationsystem)，使用儿童粪便。

使用Fibrim(Solae公司)作为大豆PS来源。使用RaftilinST(Orafti)作为菊粉来源，使用L GG(Valio)作为鼠李糖乳杆菌来源。

从2岁的健康儿童获取新鲜粪便。

实验介质为McBain&MacFarlane介质(缓冲胨水3.0g/l、酵母提取物2.5g/l、胰蛋白胨3.0g/l、L-半胱氨酸-HCl 0.4g/l、胆盐0.05g/l、K₂HPO₄·3H₂O 2.6g/l、NaHCO₃ 0.2g/l、NaCl 4.5g/l、MgSO₄·7H₂O 0.5g/l、CaCl₂ 0.228g/l、FeSO₄ 0.005g/l)。

方法：

将新鲜粪便材料与代表肠内环境的McBain&MacFarlane介质混合，重量比为1∶5。

在t＝0时，将6ml粪便悬液与纤维和域L GG混合，转移至100ml瓶中的透析管中，所述瓶中装满缓冲透析介质(K₂HPO₄·3H₂O 2.6g/l、NaHCO₃ 0.2g/l、NaCl 4.5g/l、MgSO₄·7H₂O 0.5g/l、CaCl₂ 0.228g/l、FeSO₄·7H₂O 0.005g/l，pH 6.3)。将该瓶盖好并在37℃温育。纤维和L GG的混合物如下所示：

48小时后用皮下注射器从透析管和透析缓冲液取0.5ml样品，在-18℃保存。实验平行做两份，所有操作均在无氧箱中进行。

乳酸的检测通过酶法使用带有D-和L-乳酸脱氢酶的乳酸检测试剂盒(Raisio Diagnostics Spa，Rome，Italy)进行。短链脂肪酸(SCFA)使用气相色谱检测，SCFA在MilliQ中提取。将2-乙基-丁酸用作内部标准。将样品在带有FID检测器的毛细管柱(Restek Stabilwax DA 15m×0.53×1.0μm；ZB-FFAB 15m×0.13×1.0μm)上分析。流动相为氦。

结果和结论：

结果以每g纤维形成的乳酸或SCFA的mmol量表示，示于表1中。

表1：不同纤维混合物发酵时形成的有机酸(mmol/g纤维)。

这些结果表明仅有鼠李糖乳杆菌时不会促进肠内发酵。大豆PS与菊粉相结合时与单独使用大豆PS相比，形成了更多的乳酸和SCFA。鼠李糖乳杆菌的存在进一步促进了大豆PS和菊粉混合物形成乳酸和SCFA。当单独使用菊粉时，观察到较多的乳酸和SCFA的形成。然而，几乎没有丁酸形成。在大豆PS或者大豆PS和鼠李糖乳杆菌的混合物中含有菊粉有利地促进了丁酸的形成。因此，大豆PS、菊粉和鼠李糖乳杆菌的混合物显示了对于患腹泻的儿童的最佳发酵特征。

实施例3：婴儿营养品

一种婴儿营养品，包括：

-植物脂肪组分，提供27％的总卡路里，多不饱和脂肪酸占总脂肪酸的40％，LA/ALA重量比为5.5。

-牛奶蛋白质组分，提供12％的总卡路里，由20wt.％的乳清蛋白和80wt.％的酪蛋白组成，以及

-可消化性碳水化合物组分，提供61％的总卡路里，包括超过80wt.％的麦芽糊精和淀粉。

-鼠李糖乳杆菌：5×10⁸cfu/100ml。

-菊粉：0.15g/100ml

-大豆多糖：0.25/100ml

该婴儿营养品的包装的标签上标明该营养品在腹泻的情况下使用。

实施例4：

一种口服补液，每100ml包括：

2.0g葡萄糖、0.2g柠檬酸、138mg钠、78mg钾、177mg氯离子、1×10⁸cfu鼠李糖乳杆菌、0.05g菊粉、0.10g大豆PS。

Claims (12)

1.一种包括鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）、菊粉和大豆多糖的组合物在制备用于治疗和/或预防人受试者腹泻的营养组合物中的应用。

2.根据权利要求1的应用，其中大豆多糖:菊粉的重量比在5至0.2之间。

3.根据权利要求1或2的应用，其中所述组合物进一步包括可提供20至55%总卡路里的脂质组分、可提供5至15%总卡路里的蛋白质组分以及可提供30至75%总卡路里的可消化性碳水化合物组分。

4.根据权利要求1或2的应用，其中所述的人受试者的年龄小于36个月。

5.根据权利要求1或2的应用，其中所述组合物在每g干重组合物中含有10⁴至10¹¹cfu的鼠李糖乳杆菌。

6.根据权利要求1或2的应用，其中所述鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌菌株LMG P-22799。

7.根据权利要求1或2的应用，其中所述组合物在每g干重组合物中含有1.5至350mg的菊粉。

8.根据权利要求1或2的应用，其中所述组合物在每g干重组合物中含有2.5至600mg的大豆多糖。

9.根据权利要求1或2的应用，其中所述组合物在每g干重组合物中进一步含有至少35μg锌和/或40μg铁。

10.根据权利要求3的应用，其中所述的可消化性碳水化合物组分包括麦芽糊精和/或淀粉，并且其中所述的蛋白质组分包括非水解的蛋白质。

11.根据权利要求1或2的应用，用于治疗急性腹泻。

12.根据权利要求1或2的应用，用于治疗轮状病毒腹泻。