CN101659951B - 一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法 - Google Patents
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Abstract
一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法：将活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂与固定化包埋载体(8％聚乙烯醇和2％海藻酸钠按体积比0.6:1.4的混合物)按体积比1:1混合后，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌的0.2M CaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡，用无菌水冲洗，加入增殖培养基进行定时培养。本方法能够达到充分发挥菌株的活性，提高其耐受性，提高菌剂生产的操作稳定性和简化操作工艺，简化反应后期微生物的回收问题，降低其生产成本和劳动强度，充分发挥微生物反应的优势，实现微生物的在线再生，保证工艺的可行性。
Description
技术领域
本发明属于生物工程中微生物发酵的方法，特别涉及一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法。
背景技术
本项专利是在专利“秸秆发酵生物添加剂及其配制方法”(专利号ZL97119176)(以下简称：秸秆微贮生物添加剂)的基础上进行的生产工艺技术的改进研究。“秸秆微贮生物添加剂”可在7-10天内使半黄或干黄的各类农作物秸秆变成气味酸香、湿润柔软、适口性好的反刍家畜粗饲料。该项专利具有很好的经济效益和社会效益。但在该菌剂的批量生产中存在需耗费大量人力、物力制种和生产稳定性较差、生产成本较高等缺点，影响了该项专利的产业化进程，而广泛应用的固定化技术恰好弥补了这些不足。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法。本项技术方法提供了适合“秸秆微贮生物添加剂”发酵的固定化培养技术。
本发明的技术方案是：
一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法，其特征在于：
将固定化包埋载体8％的聚乙烯醇和2％海藻酸钠分别用热水熬化，按体积比0.6:1.4比例混合，用Ca(OH)2溶液调节其pH值为7.2，灭菌后冷却，与活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂增殖培养18h后(其中菌液浓度为109cfu/ml)的混合发酵菌剂按体积比1:1混合，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌(15磅，30min)的0.2MCaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状(胶球直径为2-3mm)，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培养基进行定时培养。
其培养基配方为：每升含以下成分：酵母膏7.5g，葡萄糖10g，蛋白胨7.5g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，其pH值为6.5-7.0。
“秸秆微贮生物添加剂”菌体固定化发酵条件为：最适的培养温度为30℃；最适pH值为6.0的静止发酵培养。该条件可使“秸秆微贮生物添加剂”固定化发酵的稳定性达10个批次以上。
本发明效果是：
本一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法能够达到充分发挥菌株的活性，提高其耐受性，提高菌剂生产的操作稳定性和简化操作工艺，简化反应后期微生物的回收问题，降低其生产成本和劳动强度，充分发挥微生物反应的优势，实现微生物的在线再生，从而可以保证工艺的可行性。
通过对“秸秆微贮生物添加剂”菌体的游离和固定化两种发酵培养的比较研究发现：菌剂的固定化发酵可以达到游离发酵相同的效果，却使生产成本降低了7％，生产的稳定性提高了1.5倍。
具体实施方式
本项一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法提供了适合“秸秆微贮生物添加剂”发酵的固定化培养技术。
工艺过程为：将活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂加入增殖培养基中，(增殖培养基每升配方为：酵母膏7.5g，葡萄糖10g，蛋白胨7.5g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，pH值为6.5-7.0)
将固定化包埋载体8％的聚乙烯醇和2％海藻酸钠分别用热水熬化，按体积比0.6:1.4比例混合，用Ca(OH)2溶液调节其pH值为7.2，灭菌后冷却与增殖培养18h(菌液浓度为109cfu/ml)的混合发酵菌剂按体积比1:1混合，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌(15磅，30min)的0.2M CaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状(胶球直径为2-3mm)，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培养基进行定时培养。
通过对“秸秆微贮生物添加剂”菌体的游离和固定化两种发酵培养的比较研究发现：菌剂的固定化发酵可以达到游离发酵相同的效果，却使生产成本降低了7％，生产的稳定性提高了1.5倍。“秸秆微贮生物添加剂”菌体固定化发酵条件为：30℃为最适的培养温度；6.0为最适pH值的静止发酵培养。该条件可使“秸秆微贮生物添加剂”固定化发酵的稳定性达10个批次以上。
Claims (3)
1.一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法，其特征在于：
将固定化包埋载体8％的聚乙烯醇和2％海藻酸钠分别用热水熬化，按体积比0.6∶1.4比例混合，用Ca(OH)2溶液调节其pH值为7.2，灭菌后冷却，与活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂增殖培养18h后，其中菌液浓度为109cfu/ml的混合发酵菌剂按体积比1∶1混合，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌，15磅，30min，的0.2MCaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状，胶球直径为2-3mm，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培养基进行定时培养；
其中所述“秸秆微贮生物添加剂”为说明书中背景技术中提到的“秸秆发酵生物添加剂及其配制方法”专利号ZL 97119176。
2.根据权利要求1所述的“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法，其特征在于：其培养基配方为每升含有以下成分：酵母膏7.5g，葡萄糖10g，蛋白胨7.5g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，其pH值为6.5-7.0。
3.根据权利要求1所述的“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法，其特征在于：“秸秆微贮生物添加剂”菌体固定化发酵条件为：最适的培养温度为30℃；最适pH值为6.0的静止发酵培养。
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