CN101648933B

CN101648933B - 3,4-二氢-4-氧-2h-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物、其制备方法和用途

Info

Publication number: CN101648933B
Application number: CN2009101676909A
Authority: CN
Inventors: 邓勇; 周黎丽; 沈怡; 黄志雄
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2009-09-21
Filing date: 2009-09-21
Publication date: 2011-07-20
Anticipated expiration: 2029-09-21
Also published as: CN101648933A

Abstract

本发明公开了一种3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐，它们可作为雄激素受体激动剂或/和拮抗剂；还公开了式I化合物的制备方法和用途，以及含有式(I)化合物的药物组合物。

Description

3,4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物、其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)及其药学上可接受的盐、其制备方法和在制备预防或/和治疗各种因雄激素和雄激素受体功能失调而引起的症状或疾病药物中的用途，包括但不限于中老年男性雄激素部分缺乏综合征、骨质疏松症、肌消耗、女性性功能不全、厌食、恶病质、乳腺癌、前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发、痤疮、阿尔茨海默病和帕金森综合症等。

(式中R₁，R₂，R₃，R₄表示H、卤素、C₁～C₁₂烷基、C₃～C₇环烷基、C₆～C₁₂芳基、C₁～C₁₂烷氧基、C₆～C₁₂芳氧基、C₁～C₁₂烷硫基、C₆～C₁₂芳硫基、硝基、氰基、羧基、羟基、CF₃、NR₆R₇；R₆，R₇表示H、C₁～C₁₂烷基、C₆～C₁₂芳基；R₁，R₂，R₃，R₄可在苯环的任意可能位置；R₁，R₂，R₃，R₄可以相同，也可以不同；R₅表示H、COOR₈；R₈表示H、C₁～C₁₂烷基、C₃～C₇环烷基；Ar表示苯基、取代苯基、呋喃基、取代呋喃基、噻吩基、取代噻吩基、吡啶基、取代吡啶基)。

背景技术

雄激素(Androgen)是睾酮、二氢睾酮、肾上腺雄酮等激素的总称，主要由睾丸的间质细胞分泌，肾上腺皮质和卵巢也能分泌少量的雄激素，因此在男性和女性体内均存在一定比例的雄激素。雄激素通过与雄激素受体(Androgen Receptor，AR)结合发挥重要生理功能，如男性胎儿生殖器官的形成(前列腺、贮精囊、附睾等)、第二性征的发育及维持、精子产生、蛋白同化作用、以及促进细胞分化和组织生长等。AR是核受体超家族的一个成员，属配体激活的转录因子，广泛分布于增殖和非增殖组织，包括前列腺和精囊、雄性和雌性生殖器、睾丸、卵巢、皮肤、毛囊、汗腺、软骨、心肌、骨骼和平滑肌、肾上腺皮质、肝脏、松果体和多个大脑皮质区及皮质下区(包括脊髓运动神经元)等。

雄激素或其受体的代谢及功能紊乱可诱发多种疾病或加速疾病进程，如：中老年男性雄激素部分缺乏综合征、骨质疏松症、肌消耗、女性性功能不全、厌食、恶病质、乳腺癌、前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发、痤疮、阿尔茨海默病和帕金森综合症等，这些疾病不仅严重影响了患者的生理和心理健康，而且极大地降低了他们的生活质量。雄激素与其受体的作用机制包括一系列复杂而又精密的信号转导过程，然而二者的特异性结合在其中扮演了不可替代的角色。很多AR相关疾病的产生，或是由于激素水平失常，或是因为受体功能紊乱，破坏了正常的相互作用平衡关系；在患病个体中，利用药物加强或抑制受体活化水平可达到治疗相关疾病的效果。因此，在治疗与雄激素作用相关的多种疾病和症状当中，AR是重要的靶标。对于代谢和内分泌性疾病，AR调节剂可用于预防或/和治疗各种因雄激素代谢和雄激素受体功能失调而引起的症状或疾病。

调节雄激素与其受体作用的药物，根据其药效，可分为雄激素激动剂和拮抗剂。目前，临床上常用的雄激素受体调节剂，按化学结构可分为甾体类和非甾体类，甾体类激动剂药物除内源性的雄激素外，还包括睾酮和二氢睾酮的衍生物(如：甲睾酮、丙酸睾酮等)，及其合成甾体类似物(如：苯丙酸诺龙、氯司替勃、羟甲烯龙、司坦唑醇等)；甾体类拮抗剂药物则以醋酸环丙孕酮(CyproteroneAcetate)为代表。非甾体类AR调节剂药物包括：氟他胺(Flutamide)、尼鲁米特(Nilutamide)、比卡鲁胺(Bicalutamide)等，均为受体拮抗剂；已有文献和专利报道了一些非甾体AR激动剂，但目前尚处于临床和临床前研究阶段。

在临床使用过程中发现，无论是甾体或非甾体类AR调节剂都有一定的副作用，包括引起雌雄激素代谢紊乱而使男性乳房发育及肝脏毒性等；前列腺增生/前列腺癌患者人长期服用氟他胺或比卡鲁胺会出现胃肠道不适、恶心、呕吐、失眠、乏力、头痛、焦虑、视力模糊和性欲减退等副作用；其次，前列腺增生/前列腺癌患者单一服用某种抗雄激素药物后会出现“抗雄激素减退综合症”(AntiandrogenWithdrawal Syndrome，AWS)，表现为用药一段时间后原本被抑制的前列腺特异性抗原(Prostate-specific Antigen，PSA)水平又迅速上升、肿瘤体积增大，只能停止服药或转用其它抗雄激素药物。此外还有报道显示，AR调节剂在使用时与抗凝剂香豆素等药物存在相互作用。因此，临床上迫切需要研究开发具有全新化学结构的非甾体类AR调节剂。

发明内容

本发明的目的在于公开一类具有3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化学结构(I)的非甾体雄激素受体调节剂或其药学上可接受的盐；

本发明的另一目的在于公开3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)的制备方法；

本发明的又一目的在于公开包含3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐的药物组合物；

本发明的再一目的在于公开3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐作为非甾体雄激素受体调节剂在制备预防或/和治疗因雄激素和雄激素受体功能失调而引起的症状或疾病中的用途。

本发明提供的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类非甾体雄激素受体功能调节剂化合物或其药学上可接受的盐的化学结构如(I)所示：

对于本发明所公开的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐，其化合物(I)的构型为顺式(syn)或反式(anti)或顺式与反式的混合物；当分子中存在手性碳时，化合物(I)为消旋体或光学活性体。

本发明提供的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)可用下述方法来制备：以3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃衍生物(1)、芳香醛(2)和芳香胺(3)为起始原料，在合适溶剂中经酸催化，发生Mannich缩合反应，得相应的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)；(I)再与合适的酸成盐，即得3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物的盐，其化学反应式如下：

其中，Mannich缩合反应所用溶剂为C₁～C₆脂肪醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、乙腈、四氢呋喃，其优选溶剂为C₁～C₆脂肪醇、四氢呋喃；酸催化剂为质子酸(如：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)或Lewis酸(如：BF₃-Et₂O、TiCl₄、SnCl₄、AlCl₃、FeCl₃等)，其优选酸催化剂为盐酸、氢溴酸、BF₃-Et₂O、TiCl₄；酸催化剂与3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃衍生物(1)的摩尔投料比为0.001～0.5∶1.0，优选摩尔投料比为0.01～0.1∶1.0；反应温度为室温～150℃，优选反应温度为室温或回流反应；反应时间为1小时～10天，优选反应时间为24～96小时。

本发明提供的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)可与任何合适的酸通过药学上常规成盐的方法得到其药物学上可接受的盐，所述的酸为无机酸(如：盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等)；有机酸(如：甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸等；烷基磺酸，如甲基磺酸、乙基磺酸、樟脑磺酸等；芳基磺酸，如苯磺酸、对甲苯磺酸等)均可使用。

本发明提供的药物组合物包括治疗有效量的一种或多种3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐，该药物组合物可进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明所提供的药物组合物其理想的比例是，3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐作为活性成分占总重量比50％～99.5％，其余部分为占总重量比50％以下。

本发明的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐具有雄激素受体调节活性，可作为雄激素受体激动剂或/和拮抗剂来预防或/和治疗各种因雄激素和雄激素受体功能失调而引起的症状或疾病，包括但不限于中老年男性雄激素部分缺乏综合征、骨质疏松症、肌消耗、女性性功能不全、厌食、恶病质、乳腺癌、前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发、痤疮、阿尔茨海默病和帕金森综合症等。

具体实施方式

通过下面的实施例可对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

实施例1

(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氯3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

在反应瓶中加入苯甲醛1.06克(0.01mol)、对硝基苯胺1.38克(0.01mol)和无水乙醇40ml，室温搅拌10分钟后，加入6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃1.83克(0.01mol)和0.2ml浓盐酸，室温搅拌反应96小时；反应毕，抽滤析出的固体，用氯仿-甲醇混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得黄色粉末固体1.18克，mp：205～207℃，收率28.8％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.94(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.73(d，J＝7.2Hz，1H，NH)，7.65(dd，J₁＝2.8Hz，J₂＝8.4Hz，1H，Ar-H₇)，7.64～7.63(m，1H，Ar-H₅)，7.32～7.29(m，4H，Ar-H)，7.26～7.23(m，1H，Ar-H)，7.14(dd，J₁＝1.6Hz，J₂＝8.4Hz，1H，Ar-H₈)，6.68(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，5.18(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.82(dd，J₁＝8.0Hz，J₂＝12.0Hz，OCH₂)，4.46(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.40(td，J₁＝4.0Hz，J₂＝8.0Hz，1H，COCH)；¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ：189.82(C＝O)，159.77(Ar-C_8a)，153.72(Ar-C_1’)，139.71(Ar-C_1”)，136.77(Ar-C_4’)，135.91(Ar-C₇)，128.60(2×Ar-C)，127.60(Ar-C₅)，126.96(2×Ar-C)，126.00(2×Ar-C)，125.83(Ar-C₆)，125.62(Ar-C_4”)，121.83(Ar-C_4a)，120.42(Ar-C₈)，112.06(2×Ar-C)，67.59(OCH₂)，53.26(COCH)，51.08(NHCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：409.3([C₂₂H₁₇ClN₂O₄+H]⁺计算值：409.1)。

实施例2

(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

将实施例1所得重结晶母液减压蒸除溶剂，残余固体用氯仿重结晶，得(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体1.64克，mp：211～213℃，收率40.0％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.96(d，J＝8.4Hz，1H，NH)，7.88(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.69(d，J＝2.4Hz，1H，Ar-H₅)，7.64～7.61(dm，1H，Ar-H₇)，7.48(d，J＝7.2Hz，2H，Ar-H_2”，6”)，7.37(t，J＝7.2Hz，2H，Ar-H_3”，5”)，7.31～7.26(m，1H，Ar-H_4”)，7.14(d，J＝9.2Hz，1H，Ar-H₈)，6.63(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，5.04(t，J＝8.4Hz，1H，CHNH)，4.56(dd，J₁＝3.6Hz，J₂＝＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.93(dd，J₁＝6.8Hz，J₂＝12.0Hz，OCH₂)，3.27(td，J₁＝3.6Hz，J₂＝6.8Hz，J₃＝8.4Hz，1H，COCH)；¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ：190.45(C＝O)，159.77(Ar-C_8a)，153.30(Ar-C_1’)，139.35(Ar-C_1”)，136.59(Ar-C_4’)，136.00(Ar-C₇)，128.81(2×Ar-C)，127.99(Ar-C₅)，127.44(2×Ar-C)，126.03(2×Ar-C)，125.90(Ar-C₆，Ar-C_4”)，121.21(Ar-C_4a)，120.44(Ar-C₈)，111.98(2×Ar-C)，68.38(OCH₂)，53.96(COCH)，50.36(NHCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：409.2([C₂₂H₁₇ClN₂O₄+H]⁺计算值：409.1)。

实施例3

(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将苯甲醛用2-噻吩甲醛替代，浓盐酸用三氟化硼乙醚替代，得(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色固体，mp：208～210℃，收率25.5％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.95(d，J＝9.6Hz，2H，Ar-H)，7.94(d，J＝7.2Hz，1H，NH)，7.71(d，J＝2.8Hz，1H，Ar-H₅)，7.62(dd，J₁＝2.8Hz，J₂＝8.8Hz，1H，Ar-H₇)，7.43(dd，J₁＝1.2Hz，J₂＝5.2Hz，1H，Thiophene-H₅)，7.13(d，J＝8.8Hz，1H，Ar-H₈)，7.11(d，J＝4.0Hz，1H，Thiophene-H₄)，6.98(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝5.2Hz，1H，Thiophene-H₃)，6.71(d，J＝9.6Hz，2H，Ar-H)，5.49(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.71(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，4.06(dd，J₁＝9.2Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.45(td，J₁＝4.0Hz，J₂＝7.2Hz，J₃＝9.2Hz，1H，COCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：437.4([C₂₀H₁₅ClN₂O₄S+Na]⁺计算值：437.03)。

实施例4

(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用6-氟-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃替代，得(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色固体，mp：189～191℃，收率32.9％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.95(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.74(d，J＝7.2Hz，1H，NH)，7.49(td，J₁＝3.2Hz，J₂＝8.8Hz，1H，Ar-H₅)，7.41(dd，J₁＝3.2Hz，J₂＝8.0Hz，1H，Ar-H₇)，7.32～7.29(m，4H，Ar-H)，7.26～7.24(m，1H，Ar-H)，7.14(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H，Ar-H₈)，6.69(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，5.19(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.80(dd，J₁＝8.0Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，4.43(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.39(td J₁＝4.0Hz，J₂＝8.0Hz，1H，COCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：415.3([C₂₂H₁₇FN₂O₄+Na]⁺计算值：415.11)。

实施例5

(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

将实施例4所得重结晶母液减压蒸除溶剂，残余固体用氯仿重结晶，得(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体，mp：218～220℃，收率42.8％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.94(d，J＝8.4Hz，1H，NH)，7.88(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，7.51～7.45(m，2H，Ar-H₅，Ar-H₇)，7.31～7.26(m，4H，Ar-H)，7.26～7.23(m，1H，Ar-H)，7.14(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H，Ar-H₈)，6.63(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，5.05(t，J＝8.4Hz，1H，CHNH)，4.53(dd，J₁＝3.6Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.92(dd，J₁＝6.8Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.26(td，J₁＝3.6Hz，J₂＝6.8Hz，J₃＝8.4Hz，1H，COCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：415.2([C₂₂H₁₇FN₂O₄+Na]⁺计算值：415.11)。

实施例6

(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用6-氟-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃替代，苯甲醛用2-噻吩甲醛替代，得(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色固体，mp：198～200℃，收率23.6％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.96(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，7.94(d，J＝7.6Hz，1H，NH)，7.52～7.46(m，2H，Ar-H₅，Ar-H₇)，7.43(dd，J₁＝1.2Hz，J₂＝4.8Hz，1H，Thiophene-H₅)，7.14(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝9.6Hz，1H，Ar-H₈)，7.11(d，J＝3.2Hz，1H，Thiophene-H₄)，6.98(dd，J₁＝3.2Hz，J₂＝4.8Hz，1H，Thiophene-H₃)，6.70(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，5.50(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.69(dd，J₁＝4.4Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，4.03(dd，J₁＝9.2Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.45(td，J₁＝4.4Hz，J₂＝7.2Hz，J₃＝9.2Hz，1H，COCH)；ESI-MS(m/z，+Q)：421.2([C₂₀H₁₅FN₂O₄S+Na]⁺计算值：421.06)。

实施例7

(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

将实施例6所得重结晶母液减压蒸除溶剂，残余固体用氯仿-甲醇混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体，mp：186～188℃，收率15.2％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.98(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，7.68(d，J＝8.0Hz，1H，NH)，7.50～7.46(m，2H，Ar-H₅，Ar-H₇)，7.42(dd，J₁＝1.2Hz，J₂＝4.8Hz，1H，Thiophene-H₅)，7.13(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝9.6Hz，1H，Ar-H₈)，6.99(d，J＝3.2Hz，1H，Thiophene-H₄)，6.97(dd，J₁＝2.0Hz，J₂＝4.8Hz，1H，Thiophene-H₃)，6.78(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，5.54(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.80(dd，J₁＝9.2Hz，J₂＝11.6Hz，1H，OCH₂)，4.54(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝11.6Hz，1H，OCH₂)，3.44(td，J₁＝4.0Hz，J₂＝7.2Hz，J₃＝9.2Hz，1H，COCH)；ESI-MS (m/z，+Q)：421.1([C₂₀H₁₅FN₂O₄S+Na]⁺计算值：421.06)。

实施例8

(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-硝基-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用6-硝基-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃替代，得(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-硝基-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色固体，mp：203～205℃，收率35.8％。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：8.42(s，1H，Ar-H₅)，8.40(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H₇)，7.95(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，7.74(d，J＝7.6Hz，1H，NH)，7.33(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H₈)，7.31(s，4H，Ar-H)，7.27～7.23(m，1H，Ar-H)，6.70(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，5.20(t，J＝7.2Hz，1H，CHNH)，4.96(dd，J₁＝8.0Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，4.63(dd，J₁＝4.4Hz，J₂＝12.0Hz，1H，OCH₂)，3.50(td，J₁＝4.4Hz，J₂＝7.2Hz，J₃＝8.0Hz，1H，COCH)；ESI-MS(m/z，-Q)：418.0([C₂₂H₁₇N₃O₆-H]⁺计算值：418.1)。

实施例9

(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-氰基-3-三氟甲基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将对硝基苯胺用4-氰基-3-三氟甲基苯胺替代，苯甲醛用2-噻吩甲醛替代，得(syn)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-氰基-3-三氟甲基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色固体，收率20.8％。ESI-MS(m/z，+Q)：485.2([C₂₂H₂₄ClF₃N₂O₂S+Na]⁺计算值：485.03)。

实施例10

(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-氰基-3-三氟甲基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

将实施例9所得重结晶母液减压蒸除溶剂，残余固体用氯仿-甲醇混合溶剂(体积比1∶1)重结晶，得(anti)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-氰基-3-三氟甲基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体，收率32.6％。

实施例11

(syn/anti)-3，4-二氢-4-氧-6-甲基3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用6-甲基-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃替代，得3，4-二氢-4-氧-6-甲基-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体，其为syn和anti的混合物，收率68.1％。

实施例12

(syn/anti)-3，4-二氢-4-氧-6-甲基-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用6-甲基-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃替代，苯甲醛用2-噻吩甲醛替代，得3，4-二氢-4-氧-6-甲基-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃的黄色粉末固体，其为syn和anti的混合物，收率62.5％。

实施例13

(S，S，S)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用(S)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸替代，得(S，S，S)-3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的黄色固体，mp：176～178℃，收率53.6％，(c 0.4，CHCl₃)。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：8.05(d，J＝10.0Hz，1H，NH)，7.83(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.71(dd，J₁＝2.8Hz，J₂＝9.2Hz，1H，Ar-H₇)，7.63(d，J＝2.8Hz，1H，Ar-H₅)，7.61～7.58(m，2H，Ar-H)，7.43～7.39(m，2H，Ar-H)，7.33～7.31(m，1H，Ar-H)，7.28(d，J＝9.2Hz，1H，Ar-H₈)，6.64(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，4.91(t，J＝10.0Hz，1H，CHNH)，4.66(d，J＝1.6Hz，1H，OCH)，4.02(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，3.43(dd，J₁＝1.6Hz，J₂＝11.2Hz，1H，COCH)，1.01(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)；¹³C NMR(DMSO-d₆，50MHz)δ：188.59(C＝O)，168.41(COCH₂)，158.11(Ar-C_8a)，153.03(Ar-C_1’)，138.99(Ar-C_1”)，136.82(Ar-C_4’)，136.65(Ar-C₇)，128.09(2×Ar-C)，128.45(Ar-C₅)，127.67(2×Ar-C)，126.59(Ar-C_4”)，125.91(2×Ar-C)，125.61(Ar-C₆)，120.73(Ar-C₈)，120.38(Ar-C_4a)，112.20(2×Ar-C)，76.48(OCH)，61.99(OCH₂)，55.78(COCH)，52.69(NHCH)，13.92(CH₃)；ESI-MS(m/z，-Q)：479.0([C₂₅H₂₁ClN₂O₆-H]^-计算值：479.1)。

实施例14

(S，S，S)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用(S)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸替代，得(S，S，S)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的黄色固体，mp：153～155℃，收率40.2％，

(c1.0，CHCl₃)。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：8.07(d，J＝10.0Hz，1H，NH)，7.83(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，7.61～7.58(m，2H，Ar-H)，7.55(dd，J₁＝3.2Hz，J₂＝8.4Hz，1H，Ar-H₅)，7.43～7.39(m，3H，Ar-H)，7.32(t，J＝7.2Hz，1H，Ar-H₇)，7.28(dd，J₁＝4.4Hz，J₂＝9.2Hz，1H，Ar-H₈)，6.63(d，J＝8.8Hz，2H，Ar-H)，4.90(t，J＝10.0Hz，1H，CHNH)，4.64(d，J＝1.6Hz，1H，OCH)，4.01(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，3.44(dd，J₁＝1.6Hz，J₂＝10.8Hz，1H，COCH)，1.00(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)；¹³C NMR(DMSO-d₆，50MHz)δ：188.90(C＝O)，168.55(COCH₂)，157.13(d，J＝238.9Hz，Ar-C₆)，155.78(Ar-C_8a)，153.03(ArNH-C_1’)，139.05(Ar-C_1”)，136.78(ArNH-C_4’)，129.08(2×Ar-C)，128.43(Ar-C_4”)，127.66(2×Ar-C)，125.93(2×Ar-C)，124.58(d，J＝24.4Hz，Ar-C₇)，120.59(d，J＝7.55Hz，Ar-C_4a)，119.83(d，J＝6.55Hz，Ar-C₈)，112.15(2×ArNH-C)，111.54(d，J＝23.4Hz，Ar-C₅)，76.48(OCH)，61.92(OCH₂)，55.81(COCH)，52.65(NHCH)，13.92(CH₃)；ESI-MS(m/z，-Q)：463.1([C₂₅H₂₁FN₂O₆-H]^-计算值：463.13)。

实施例15

(R，R，R)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的制备

操作过程同实施例1，只是将6-氯-3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃用(R)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸替代，得(R，R，R)-3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯的黄色固体，mp：152～154℃，收率46.5％，

(c1.0，CHCl₃)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ： 7.92(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，7.52～7.50(m，3H，Ar-H)，7.48～7.44(m，2H，Ar-H)，7.37(dd，J₁＝2.8Hz，J₂＝7.2Hz，1H，Ar-H₅)，7.32(td，J₁＝2.8Hz，J₂＝8.0Hz，1H，Ar-H₇)，7.16(dd，J₁＝4.0Hz，J₂＝8.8Hz，1H，Ar-H₈)，6.43(d，J＝9.2Hz，2H，Ar-H)，5.65(brs，1H，NH)，4.68(d，J＝11.2Hz，1H，CHNH)，4.66(s，1H，OCH)，4.08(q，J＝7.6Hz，2H，OCH₂)，3.23(d，J＝11.2Hz，1H，COCH)，1.10(t，J＝7.6Hz，3H，CH₃)；ESI-MS(m/z，-Q)：463.0([C₂₅H₂₁FN₂O₆-H]^-计算值：463.13)。

实施例16生物活性测试

1.材料设备

1.1质粒和细胞株

雄激素受体表达质粒和荧光素酶报告基因质粒由国家新药筛选中心构建；人乳腺癌细胞株MDA-MB-453和猴肾上皮细胞CV-1均购自美国ATCC。

1.2试剂

胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS，GIBCO/BRL，USA)；活性炭和葡聚糖处理胎牛血清(CD-FBS，Hyclone，USA)；DMEM及RPMI 1640培养基(GIBCO/BRL，USA)；IMEM培养基(Bioresource，USA)；荧光素酶检测试剂盒(Promega Corporation，USA)；Fugene 6(Roche Ltd.，USA)；[³H]-二氢睾酮(Dehydrotestosterone，DHT，Amersham，UK)；闪烁液(SuperMixTM，PerkinElmer，USA)。

1.3仪器Envision 2101 Multilabel Reader(PerkinElmer，USA)；二氧化碳培养箱(Forma，USA)；Wallac MicroBeta

TriLux 1450(PerkinElmer，USA)；VERSA^max MicroplateReader(Molecular Devices，U SA)。

2.实验方法和结果

2.1报告基因表达检测

2.2.1激动活性模式

MDA-MB-453细胞在含10％FBS和2mML型谷氨酸盐(L-glutamine)的IMEM培养基中培养，转染前一天换成含5％CD-FBS的IMEM培养基，转染采用Fugene 6试剂。将报告基因载体和Fugene 6以1∶3的比例混合均匀逐滴加入细胞中，在37℃及5％CO₂条件下培养6小时，细胞消化后以20000个/100μl/孔接入96孔培养板，以含5％CD-FBS的IMEM培养基于37℃培养2小时。加入待测目标化合物，并以5α-二氢睾酮(5α-DHT)为激动剂阳性对照物，在二氧化碳培养箱中培养24小时后，用荧光素酶素检测试剂盒检测酶活性，以此评估化合物对雄激素受体的激动活性。以1μM DHT所诱导的报告基因活性为100％，计算各目标物的相对激动活性。

2.2.2拮抗活性模式

MDA-MB-453细胞在含10％FBS和2mM L型谷氨酸盐(L-glutamine)的IMEM培养基中培养。转染前一天换成含5％CD-FBS的IMEM培养基，转染采用Fugene 6试剂。将报告基因载体和Fugene 6以1∶3的比例混合均匀逐滴加入细胞中，在37℃及5％CO₂条件下培养6小时，细胞消化后以20000个/100μl/孔接入96孔培养板，以含5％CD-FBS的IMEM培养基于37℃培养2小时。加入待测目标化合物，30min后加入5nM DHT为激动剂，并以比卡鲁胺(BCA)为拮抗剂阳性对照物，在二氧化碳培养箱中培养24小时后，应用荧光素酶检测试剂盒检测酶活性，以此评估化合物对雄激素受体的拮抗活性。以10μM比卡鲁胺所抑制DHT诱导的报告基因活性为90％，计算各目标物相对拮抗活性。

2.2报告基因表达检测结果

目标物的报告基因表达检测结果见表1：

表1 3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物的报告基因表达检测结果

3.实验结论

化合物01～07在雄激素受体荧光素酶报告基因表达载体共转染的MDA-MB-453细胞中显示出较好的雄激素受体激动/拮抗活性；化合物08～010对雄激素受体无激动活性，但表现出一定的拮抗活性；化合物011无雄激素受体激动/拮抗活性。上述测试结果表明，3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物具有开发成为新型雄激素受体功能调节剂的潜力，可用于制备预防或/和治疗由于雄激素和雄激素受体功能失调引起的症状或疾病，如：中老年男性雄激素部分缺乏综合征、骨质疏松症、肌消耗、女性性功能不全、厌食、恶病质、乳腺癌、前列腺增生、前列腺癌、妇女多毛症、重度雄激素依赖型脱发、痤疮、阿尔茨海默病和帕金森综合症等。

Claims

1.一类3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)及其药学上可接受的盐，其特征在于它是具有如下化学结构通式的化合物：

式中R₁，R₂，R₃，R₄表示H、卤素、C₁～C₁₂烷基、硝基、氰基、CF₃；R₁，R₂，R₃，R₄可在苯环的任意可能位置；R₁，R₂，R₃，R₄可以相同，也可以不同；R₅表示H、COOR₈；R₈表示H、C₁～C₁₂烷基；Ar表示苯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物为syn构型或anti构型或syn与anti构型的混合物。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，当分子中存在手性碳时，所述化合物为消旋体或光学活性体。

4.如权利要求1～3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的化合物优选自：3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-硝基-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-氰基-3-三氟甲基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-甲基-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-甲基-3-[[(4-硝基苯胺基)-2-噻吩基]甲基]-2H-1-苯并吡喃，3，4-二氢-4-氧-6-氯-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯，3，4-二氢-4-氧-6-氟-3-[[(4-硝基苯胺基)-苯基]甲基]-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸乙酯。

5.如权利要求1～3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的药学上可接受的盐是2，3-二氢苯并吡喃-4-酮曼尼希碱类化合物(I)与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、甲基磺酸、乙基磺酸、樟脑磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸的盐。

6.如权利要求1～5所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，以3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃衍生物(1)、芳香醛(2)和芳香胺(3)为起始原料，在合适溶剂中经酸催化，发生Mannich缩合反应，得相应的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)；(I)再与合适的酸成盐，即得3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物的盐，其化学反应式如下：

7.如权利要求6所述的3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃曼尼希碱类化合物(I)或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，Mannich缩合反应所用溶剂为C₁～C₆脂肪醇、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、苯、正庚烷、甲苯、乙腈、四氢呋喃；酸催化剂为质子酸或Lewis酸；酸催化剂与3，4-二氢-4-氧-2H-1-苯并吡喃衍生物(1)的摩尔投料比为0.001～0.5∶1.0；反应温度为室温～150℃；反应时间为1小时～10天。

8.一种药物组合物，包括治疗有效量的一种或多种如权利要求1～5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，该药物组合物进一步含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征是，所述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分占总重量比50％～99.5％。

10.权利要求1～5任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为非甾体雄激素受体激动剂或/和拮抗剂在制备预防或/和治疗因雄激素和雄激素受体功能失调而引起的症状或疾病药物中的用途。