CN101633661A - 制备斑蝥酸钠的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备斑蝥酸钠的工艺，它是由斑蝥虫体的处理，斑蝥素的提取、纯化精制，斑蝥酸钠的合成、斑蝥酸钠的纯化精制等步骤。本发明具有工艺简单实用、安全性好、制备的成品纯度高，性质稳定，生产成本低等优点。可用于大针剂、大输液、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液及软膏剂等多种剂型的生产。

Description

制备斑蝥酸钠的工艺

技术领域

本发明涉及一种肿瘤治疗药物的制备工艺，特别涉及一种斑蝥酸钠的制备工艺。

背景技术

我国的中医很早就开始使用斑蝥虫治疗肿瘤：早在十三世纪《仁斋直指方》中就记载了斑蝥有治疗乳癌及腹部癌的作用。古人常用“斑蝥煮鸡蛋，弃斑蝥食蛋”的偏方治疗肝癌及其它消化系统癌症，至今仍在民间沿用。该药性味辛，热；有大毒，可攻毒蚀疮，归肝、胃、肾经。有破血消{徵}，功毒蚀疮，引赤发泡的功能，用于{徵}瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌的治疗。但毒副作用很大。近年发现其抗癌有效成分是体内天然存在的斑蝥素。我国对斑蝥素的临床研究表明，斑蝥素及其衍生物等对治疗原发性肝癌疗效显著，明显优于手术治疗或放疗。此外，它还能治疗慢性肝炎和神经性皮炎白细胞减少等。另有报道证明，斑蝥素及其衍生物对乳腺癌、食道癌、肺癌、肠癌、肝硬化等疾病也有一定疗效；同时可用于治疗疥癣、消瘰病；还可以通利水道，是一种很强的利尿剂。外用为皮肤刺激药，有引赤发泡、生毛之功效，并能治恶疮溃痛、痈疽拔脓、积年癣疮、疣痣黑子等。经科学提取得到的斑蝥素虽然服用方便，但是毒副作用仍然很大，斑蝥素的有效剂量与毒性剂量很接近。而斑蝥酸钠是斑蝥素的衍生物，在保持了斑蝥素的药理活性外，降低了其毒副作用。其分子量小，易入细胞内，产生细胞毒作用，具有较强的抗肿瘤作用，是一种较为理想的抗癌药物，具有抗肿瘤、免疫调节、升高白细胞等药理活性，在临床上主要用于用于晚期原发性肝癌及晚期肺癌的治疗。斑蝥酸钠作为抗肿瘤的先锋药物，使应用现代生物技术从斑蝥虫中提取其有效成分，结合药物合成技术，经过斑蝥虫体的处理，斑蝥素的提取、纯化精制，斑蝥酸钠的合成、斑蝥酸钠的纯化精制而成，其抗肿瘤机理主要是通过抑制癌细胞的蛋白质合成，影响其RNA及DNA，抑制癌细胞的生长分裂，从而达到治疗的目的。

公告号为CN1166669C的中国专利公开了一种斑蝥酸钠的制备工艺，包括斑蝥素提取、结晶，制备斑蝥酸钠的几个步骤，具体方法为将斑蝥虫体粉末加入盐酸浸润24小时，再加入丙酮冷浸，过滤，分取有机相，回收丙酮至油膏状，加入石油醚与无水乙醇混合溶液洗涤，得黄白色斑蝥素粗品；取斑蝥素粗品按1∶30重量的比例加入丙酮，回流30分钟，趁热抽滤，得无色澄明滤液，回收丙酮，冷却后抽滤，得白色结晶，得斑蝥素精品；再取斑蝥素精品按1∶20重量的比例加入丙酮溶液，回流溶解，再取与斑蝥素摩尔比为1∶2的氢氧化钠20％的溶液，反应1小时，然后蒸馏，加入活性炭回流，浓缩，干燥，得白色斑蝥酸钠结晶粉末。然而，该方法使用了大量的丙酮，成本高，且丙酮为毒性溶剂，对操作者易产生危害。

公开号为CN1586500A中国专利申请公开了一种斑蝥酸钠注射剂及其制备方法，其中也公开了斑蝥酸钠的制备步骤，其中包括斑蝥虫粉碎、斑蝥素提取、斑蝥素脱脂、斑蝥酸钠合成等步骤。该申请在提取、脱脂等步骤中，也采用了大量的丙酮，因此存在着与CN1166669C同样的缺点。

现有技术仍然需要一种操作简便、污染少、对操作人员危害小的制备斑蝥酸钠的制备方法。

发明内容

申请人经大量研究发现，在斑蝥素提取步骤中，采用乙酸乙酯来替代丙酮作为溶剂进行提取，可以使操作时间缩短，而且达到更好的提取效果。

同时，在斑蝥素纯化步骤中，仅用石油醚进行脱脂洗涤，也能达到较好的纯化效果。

在斑蝥酸钠的合成步骤中，申请人还另人惊讶地发现，先用异丙醇将斑蝥素溶解，然后再采用5％-20％，优选15％的氢氧化钠溶液，可以使斑蝥酸钠的合成时间缩短，产率增加。其中，斑蝥素与异丙醇的重量比可以是1∶5～200，优选1∶10～100，最优选1∶30～70。

因此，本发明的目的是提供一种新的符合国家药典要求的斑蝥酸钠的制备方法，该方法包括采用斑蝥虫体，经虫体前处理、提取、纯化精制得到斑蝥素精品，再经半合成而得到斑蝥酸钠精品的工艺。该方法中没有采用丙酮等毒性溶剂，工艺简单、安全、方便、快捷、经济，产品质量稳定，纯度高，且能达到良好的收率。

本发明是采用以下技术方案实现的，具体包括斑蝥虫体的处理，斑蝥素的提取、纯化精制，斑蝥酸钠的合成、斑蝥酸钠的纯化精制步骤：

(1)斑蝥虫体的处理。

将符合国家药典标准的干燥斑蝥虫体进行挑拣，除去土块等杂物，粉碎。

(2)斑蝥素的提取。

将斑蝥虫体粉加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯，浸泡10～20小时。将浸出液放出至储藏罐中，再加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯浸泡提取一次。放出浸出液合并至回收器中蒸汽加热至50℃浓缩。其中斑蝥虫体粉与盐酸饱和的乙酸乙酯的重量比为1∶7～9。

(3)斑蝥素的纯化精制。

将浓缩液转移至旋转瓶中，水浴加热至50℃加入约1倍量石油醚(bp：60℃～90℃)，共热5分钟，倒入以绸布为滤材的布氏漏斗中，减压抽滤至干，用约2.5倍量石油醚淋洗至得到白色斑蝥素结晶，常温减压干燥，即得到斑蝥素精品(纯度97％以上)。

(4)斑蝥酸钠的合成。

将斑蝥素加入异丙醇稍加热使其溶解，将氢氧化钠和水按比例配成5％-20％溶液，以斑蝥素与氢氧化钠摩尔比1∶2加入到以上斑蝥素异丙醇溶液中，在水浴中加热至70℃～75℃反应1至2小时。减压蒸出溶剂，得到斑蝥酸钠粗品。其中斑蝥素与异丙醇的重量比为1∶30～70。

(5)斑蝥酸钠的纯化精制。

将斑蝥酸钠粗品加入纯化水，再加入0.4％左右的活性炭，在60℃水浴中保温1至1.5小时，减压蒸出水份，干燥，即得斑蝥酸钠成品。

采用本发明方法制备的斑蝥酸钠，纯度高，性质稳定，可用于大针剂、大输液、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、软膏剂等剂型以及多种缓控释制剂的生产。

具体实施方式：

实施例1：

(1)斑蝥虫体的处理。

将符合国家药典标准的干燥斑蝥虫体进行挑拣，除去土块等杂物，粉碎，使斑蝥虫体粉末的细度在20目～40目。

(2)斑蝥素的提取。

将斑蝥虫体粉100公斤，加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯700公斤至2000升的不锈钢提取罐中，浸泡16小时，前10个小时每隔半小时搅拌一次。将浸出液放出至储藏罐中。重复以上操作，再加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯700公斤浸泡提取一次。放出浸出液合并至回收器中蒸汽加热至50℃浓缩，停止加热，回收的溶剂作为下一次提取用。浸出液放干后，取出虫渣，集中收集统一处理。

(3)斑蝥素的纯化精制。

将浓缩液转移至旋转瓶中，水浴加热至50℃加入1倍量石油醚(bp：60℃～90℃)，共热5分钟，倒入以绸布为滤材的布氏漏斗中，减压抽滤至干，用2.5倍量石油醚淋洗至得到白色斑蝥素结晶，常温减压干燥，即得到斑蝥素精品(纯度99.3％)。

(4)斑蝥酸钠的合成。

在1000毫升至5000ml的圆底烧瓶中加入斑蝥素，加入约50倍量的异丙醇稍加热使其溶解，按比例将氢氧化钠和水配成溶液后，倒入烧瓶中，在水浴中加热至70℃～75℃反应1至2小时。减压蒸出溶剂，得到斑蝥酸钠粗品。其中，斑蝥素精品∶异丙醇∶氢氧化钠∶蒸馏水＝1.96∶50∶0.8∶4(重量比)。

(5)斑蝥酸钠的纯化精制。

将斑蝥酸钠粗品投入到3000毫升至5000毫升的烧瓶中，加入10倍量的纯化水，再加入0.4％左右的活性炭，在60℃水浴中保温1至1.5小时，减压蒸出水份，干燥，即得斑蝥酸钠成品。

实施例2：

(1)斑蝥虫体的处理。

将符合国家药典标准的干燥斑蝥虫体进行挑拣，除去土块等杂物，粉碎，使斑蝥虫体粉末的细度在20目～30目。

(2)斑蝥素的提取。

将斑蝥虫体粉100公斤，加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯800公斤至2000升的不锈钢提取罐中，浸泡16小时，前10个小时每隔半小时搅拌一次。将浸出液放出至储藏罐中。重复以上操作，再加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯700公斤浸泡提取一次。放出浸出液合并至回收器中蒸汽加热至50℃浓缩，停止加热，回收的溶剂作为下一次提取用。浸出液放干后，取出虫渣，集中收集统一处理。

(3)斑蝥素的纯化精制。

将浓缩液转移至旋转瓶中，水浴加热至50℃加入2倍量石油醚，共热5分钟，倒入以绸布为滤材的布氏漏斗中，减压抽滤至干，用1.5倍量石油醚淋洗至得到白色斑蝥素结晶，常温减压干燥，即得到斑蝥素精品(纯度98.6％)。

(4)斑蝥酸钠的合成。

在1000毫升至5000ml的圆底烧瓶中加入斑蝥素，加入约20倍量的异丙醇稍加热使其溶解，按比例将氢氧化钠和水配成溶液后，倒入烧瓶中，在水浴中加热至70℃～75℃反应1至2小时。减压蒸出溶剂，得到斑蝥酸钠粗品。其中，斑蝥素精品∶异丙醇∶氢氧化钠∶蒸馏水＝1.96∶77∶0.80∶5.50(重量比)

(5)斑蝥酸钠的纯化精制。

将斑蝥酸钠粗品投入到3000毫升至5000毫升的烧瓶中，加入8倍量的纯化水，再加入0.4％左右的活性炭，在60℃水浴中保温1至1.5小时，减压蒸出水份，干燥，即得斑蝥酸钠成品。

实施例3：

(1)斑蝥虫体的处理。

将符合国家药典标准的干燥斑蝥虫体进行挑拣，除去土块等杂物，粉碎，使斑蝥虫体粉末的细度在30目～40目。

(2)斑蝥素的提取。

配方比例为：

将斑蝥虫体粉100公斤，加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯900公斤至2000升的不锈钢提取罐中，浸泡16小时，前10个小时每隔半小时搅拌一次。将浸出液放出至储藏罐中。重复以上操作，再加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯700公斤浸泡提取一次。放出浸出液合并至回收器中蒸汽加热至50℃浓缩，停止加热，回收的溶剂作为下一次提取用。浸出液放干后，取出虫渣，集中收集统一处理。

(3)斑蝥素的纯化精制。

将浓缩液转移至旋转瓶中，水浴加热至50℃加入1倍量石油醚，共热5分钟，倒入以绸布为滤材的布氏漏斗中，减压抽滤至干，用2.5倍量石油醚淋洗至得到白色斑蝥素结晶，常温减压干燥，即得到斑蝥素精品(纯度98.8％)。

(4)斑蝥酸钠的合成。

在1000毫升至5000ml的圆底烧瓶中加入斑蝥素，加入约65倍量的异丙醇稍加热使其溶解，按比例将氢氧化钠和水配成溶液后，倒入烧瓶中，在水浴中加热至70℃～75℃反应1至2小时。减压蒸出溶剂，得到斑蝥酸钠粗品。其中，斑蝥素精品∶异丙醇∶氢氧化钠∶蒸馏水＝1.96∶107.55∶0.8∶16(重量比)

(5)斑蝥酸钠的纯化精制。

将斑蝥酸钠粗品投入到3000毫升至5000毫升的烧瓶中，加入12倍量的纯化水，再加入0.4％左右的活性炭，在60℃水浴中保温1至1.5小时，减压蒸出水份，干燥，即得斑蝥酸钠成品。

实施例4  产品质量研究

斑蝥酸钠国家药品标准[标准号：WS-10001-(HD-0044)-2002]规定斑蝥酸钠含量按照干燥品计算，不得少于85％，而按照上述实施例制得的斑蝥酸钠进行含量测定和纯度检查，结果均在98％以上。说明按照本发明制得的斑蝥酸钠质量要明显优于市售产品，含量测定和纯度检查具体方法如下：

1含量测定

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(51∶49)为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为227nm；灵敏度为0.005AUFS。理论塔板数按斑蝥素峰计算，应不低于2000。

对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含斑蝥素0.15mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取本品10mg，至100ml烧瓶中，加50ml水溶解，再加1mol/LH₂8O₄溶液10ml，摇匀，置65℃水浴中回流30分钟，稍冷后移于分液漏斗中，用氯仿25ml、15ml、10ml萃取三次，每次10分钟，合并萃取液，置70℃水浴中挥干溶剂，残渣用甲醇转容至50ml量瓶中，定容，摇匀，即为供试品溶液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算斑蝥素含量，再乘以1.316，即得斑蝥酸钠含量。

结果斑蝥酸钠实际含量在98％以上。

2纯度检查

色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.5％三乙胺(28∶72)为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为210nm；灵敏度为0.005AUFS。理论塔板数按斑蝥酸钠峰计算，应不低于2000。

供试品溶液制备：精密称取本品10mg，至10ml量瓶中，加水溶解并定容，摇匀，即为供试品溶液。

测定：精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以面积归一化法检查斑蝥酸钠的纯度。

结果斑蝥酸钠纯度大于98％。

3测定结果

Claims (2)

1、一种斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于包括将斑蝥虫体加入预先用盐酸饱和的乙酸乙酯浸泡提取斑蝥素的步骤。

2.根据权利要求1的制备方法，其中斑蝥虫体粉与盐酸饱和的乙酸乙酯的重量比为1∶7～9。