CN101626683B

CN101626683B - 用于治疗病毒感染的化合物和药物组合物

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Publication number: CN101626683B
Application number: CN200780051858.9A
Authority: CN
Inventors: 吉恩-皮埃尔·索莫多西; 吉尔斯·格索林; 克莱尔·皮埃拉; 克里斯蒂安·佩里高德; 苏珊妮·佩罗特斯
Original assignee: Montpellier Ii, University of; NATIONAL CENTER FOR SCIENTIFIC RESEARCH; Idenix Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Montpellier Ii, University of; NATIONAL CENTER FOR SCIENTIFIC RESEARCH; Idenix Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2006-12-28
Filing date: 2007-12-28
Publication date: 2015-08-19
Anticipated expiration: 2027-12-28
Also published as: CN101626683A

Abstract

本文提供了用于治疗肝脏病症包括HCV和/或HBV感染的化合物、组合物和方法。具体地，本文公开了核苷衍生物化合物和组合物，它们可以单独施用或与其它抗病毒剂联合施用。

Description

用于治疗病毒感染的化合物和药物组合物

相关申请的交叉引用

本专利申请主张以下专利申请的优先权：1)2006年12月28号提交的美国临时申请号60/877,944；2)2007年6月18号提交的美国临时申请号60/936,290；和3)2007年11月6号提交的美国临时申请号60/985,891。以上提及的申请的公开内容通过引用被完整并入本文。

发明领域

本文提供了用于在有此需要的宿主内治疗病毒感染(包括丙肝病毒感染和乙肝病毒感染)的化合物、方法和药物组合物。在具体实施方案中，提供了核苷的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物，所述化合物容许药物在肝脏中的聚集。

背景技术

黄病毒科病毒

病毒的黄病毒科包含至少三个不同的属：瘟病毒属，其在牛和猪中引起疾病；黄病毒属，其是疾病例如登革热和黄热病的主要起因；和丙肝病毒属，它的唯一成员是HCV。黄病毒属包括超过68个成员，根据血清学相关性分成若干组(Calisher等，J.Gen.Virol，1993，70，37-43)。临床症状多变，包括发热、脑炎和出血热(Fields Virology，编辑：Fields，B.N.、Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，PA，1996，第31章，931-959)。与人类疾病相关的全球关注的黄病毒包括登革出血热病毒(DHF)、黄热病病毒、休克综合症和日本脑炎病毒(Halstead，S.B.，Rev.Infect.Dis.，1984，6，251-264；Halstead，S.B.，Science，239：476-481，1988；Monath，T.P.，NewEng.J.Med.，1988，319，641-643)。

瘟病毒属包括牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、典型性猪瘟病毒(CSFV，也叫猪霍乱病毒)和绵羊的边界病病毒(BDV)(Moennig V.等，Adv.Vir.Res.1992，41，53-98)。驯化家畜(牛、猪和绵羊)的瘟病毒感染，在世界范围内引起重大的经济损失。BVDV在牛中引起黏膜疾病，而且对畜牧业具有重大的经济重要性(Meyers G.和Thiel H.J.，Advances in Virus Research，1996，47，53-118；Moennig V.等，Adv.Vir.Res.1992，41，53-98)。人的瘟病毒还没有像动物瘟病毒那样被广泛表征。但是，血清学鉴定显示了人体内相当多的瘟病毒暴露。

瘟病毒属和丙肝病毒属是黄病毒科内紧密相关的病毒群组。这个科中其它紧密相关的病毒包括GB病毒A、类GB病毒A物质、GB病毒-B和GB病毒-C(也叫肝炎G病毒，HGV)。丙肝病毒群组(丙肝病毒；HCV)由许多紧密相关但基因型上可区分的感染人类的病毒组成。有大约6种HCV基因型和超过50种亚型。由于瘟病毒和丙肝病毒之间的相似性，以及丙肝病毒在细胞培养中有效生长的低劣能力，牛病毒性腹泻病毒(BVDV)经常被用作研究HCV病毒的替代物。

瘟病毒和丙肝病毒的遗传组成非常类似。这些正链RNA病毒具有单个大开放读码框(ORF)，该ORF编码病毒复制所必需的所有病毒蛋白。这些蛋白被表达为多聚蛋白，该多聚蛋白在翻译中和翻译后被细胞蛋白酶和病毒编码蛋白酶处理，产生成熟的病毒蛋白。负责病毒基因组RNA复制的病毒蛋白位于大约羧基末端内。ORF的三分之二被称作非结构(NS)蛋白。瘟病毒和丙肝病毒的ORF的非结构蛋白部分的遗传组成和多聚蛋白处理非常类似。对瘟病毒和丙肝病毒两者，成熟的非结构(NS)蛋白按照从非结构蛋白编码区的氨基末端到ORF的羧基末端的顺序由p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B组成。

瘟病毒和丙肝病毒的NS蛋白均具有特定蛋白功能所特有的序列域。举例来说，两个群组中病毒的NS3蛋白均具有丝氨酸蛋白酶和解螺旋酶所特有的氨基酸序列基序(Gorbalenya等(1988)Nature 333：22；Bazan和Fletterick(1989)Virology 171：637-639；Gorbalenya等(1989)Nucleic Acid Res.17.3889-3897)。类似地，瘟病毒和丙肝病毒的NS5B蛋白具有RNA指导的RNA聚合酶所特有的基序(Koonin，E.V.和Dolja，V.V.(1993)Crit.Rev.Biochem.Molec.Biol.28：375-430)。

瘟病毒和丙肝病毒的NS蛋白在病毒生命周期中的实际作用和功能是直接类似的。在两种情况下，NS3丝氨酸蛋白酶负责ORF中在其位置下游的多聚蛋白前体的所有蛋白水解处理(Wiskerchen和Collett(1991)Virology 184：341-350；Bartenschlager等(1993)J.Virol.67：3835-3844；Eckart等(1993)Biochem.Biophys.Res.Comm.192：399-406；Grakoui等(1993)J.Virol.67：2832-2843；Grakoui等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：10583-10587；Hijikata等(1993)J.Virol.67：4665-4675；Tome等(1993)J.Virol.67：4017-4026)。NS4A蛋白在两种情况下都作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅因子(Bartenschlager等(1994)J.Virol.68：5045-5055；Failla等(1994)J.Virol.68：3753-3760；Lin等(1994)68：8147-8157；Xu等(1997)J.Virol.71：5312-5322)。两种病毒的NS3蛋白也起解螺旋酶作用(Kim等(1995)Biochem.Biophys.Res.Comm.215：160-166；Jin和Peterson(1995)Arch.Biochem.Biophys.，323：47-53；Warrener和Collett(1995)J.Virol.69：1720-1726)。最后，瘟病毒和丙肝病毒的NS5B蛋白具有预期的RNA指导的RNA聚合酶活性(Behrens等(1996)EMBO J.15：12-22；Lchmann等(1997)J.Virol.71：8416-8428；Yuan等(1997)Biochem.Biophys.Res.Comm.232：231-235；Hagedorn，PCT WO 97/12033；美国专利号5,981,247；6,248,589和6,461,845 Zhong等(1998)J.Virol.72.9365-9369)。

丙肝病毒

丙肝病毒(HCV)是世界范围内慢性肝脏疾病的主要病因。(Boyer，N.等J.Hepatol.32：98-112，2000)。HCV引起缓慢增长的病毒感染，而且是肝硬化和肝细胞癌的主要病因(Di Besceglie，A.M.和Bacon，B.R.，ScientificAmerican，10月：80-85，(1999)；Boyer，N.等J.Hepatol.32：98-112，2000)。估计世界范围内有一亿七千万人感染了HCV。(Boyer，N.等J.Hepatol.32：98-112，2000)。由慢性丙肝感染引起的肝硬化每年在美国导致了8,000-12,000例死亡，而且HCV感染是肝脏移植的首要病症。

已知HCV引起了至少80％的输液后肝炎和主要比例的偶发性急性肝炎。初步证据还暗示在“特发性”慢性肝炎、“隐源性”肝硬化以及可能与其它肝炎病毒例如乙肝病毒(HBV)不相关的肝细胞癌中涉及HCV。一小部分健康人群显示为慢性HCV携带者，随地理和其它流行病学因素而变化。尽管信息仍然是初步的，但HCV携带者的人数可能远远超出HBV携带者的人数；还不清楚这些人中有多少患有亚临床的慢性肝脏疾病。(The Merck Manual，第69章，第901页，第16版，(1992))。

HCV是包膜病毒，包含大约9.4kb的正义单链RNA基因组。病毒基因组由5′非翻译区(UTR)、编码具有大约3011个氨基酸的多聚蛋白前体的长开放读码框和短的3′UTR组成。5′UTR是HCV基因组中最高度保守的部分而且对多聚蛋白翻译的起始和控制是重要的。HCV基因组的翻译通过被称作内部核糖体进入的帽(cap)依赖性机制起始。这一机制包括核糖体与被称作内部核糖体进入位点(IRES)的RNA序列的结合。RNA假结体结构最近被确定为HCVIRES的基本结构元件。病毒的结构蛋白包括核壳体核心蛋白(C)和两种包膜糖蛋白E1和E2。HCV也编码两种蛋白酶，由NS2-NS3区域编码的锌依赖性金属蛋白酶和在NS3区域中编码的丝氨酸蛋白酶。需要这些蛋白酶将前体多聚蛋白的特定区域裂解为成熟的肽。非结构蛋白5的羧基一半NS5B，包含RNA依赖性RNA聚合酶。剩下的非结构蛋白NS4A和NS4B以及NS5A(非结构蛋白5的氨基末端一半)的功能仍然是未知的。

目前抗病毒研究的重大焦点针对治疗人体中慢性HCV感染的改良方法的开发(Di Besceglie，A.M.和Bacon，B.R.，Scientific American，10月：80-85，(1999))。

由于HCV感染已经在世界范围内达到了流行病等级且对受感染的患者具有悲剧性的影响的事实，对提供治疗丙肝的对宿主具有低毒性的新有效药剂，仍然存在强烈需求。

此外，考虑到其它黄病毒感染日益增加的威胁，对提供对宿主具有低毒性的新有效药剂仍然存在强烈需求。

乙肝

乙肝病毒已经在世界范围内达到了流行病等级。在宿主未意识到感染的二到六个月潜伏期后，HBV感染可以导致急性肝炎和肝损伤，引起腹痛、黄疸和某些酶血浓度的提高。HBV可以引起暴发性肝炎，一种肝脏的大部分被毁坏的快速进展且常常致命的疾病形式。患者通常从急性病毒性肝炎中康复。但是，在一些患者中，高浓度的病毒抗原在血液中持续延长的或无限的期间，引起慢性感染。慢性感染可以导致慢性持续性肝炎。感染了慢性持续性HBV的患者在发展中国家最常见。慢性持续性肝炎可以引起疲劳、肝硬化和肝细胞癌，一种原发性肝癌。在西方工业化国家中，HBV感染的高危人群包括与HBV携带者或他们的血液样品接触的那些人。HBV的流行病学实际上与获得性免疫缺陷综合症的流行病学非常类似，这解释了为什么HBV感染在患有AIDS或HIV相关感染的患者中常见。但是，HBV比HIV更具传染性。

用α-干扰素(一种基因工程蛋白)进行的每日治疗已经显示了前景。人血清源疫苗也已经被开发，以使患者对HBV免疫。已经通过遗传工程生产疫苗。虽然已经发现疫苗是有效的，但疫苗的生产是困难的，因为来自慢性携带者的人血清供给是有限的，而且纯化过程是漫长而昂贵的。此外，由不同血清制备的每批疫苗必须在黑猩猩中测试，来确保安全性。另外，疫苗不能帮助已经感染了该病毒的患者。

嘌呤和嘧啶核苷针对病毒疾病特别是HBV和HCV的作用模式中，一个必不可少的步骤是它们被细胞激酶代谢激活，以产生单-、二-和三磷酸盐衍生物。许多核苷的生物活性类型是三磷酸盐形式，这抑制病毒的DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶，或者引起链终止。

由于乙肝和丙肝病毒已经在世界范围内达到了流行病等级而且对受感染的患者具有严重且经常是悲剧性的影响的事实，对提供对宿主具有低毒性用于治疗感染了病毒的人的新有效药剂仍然存在强烈需求。

因此，对HCV和HBV感染的有效治疗存在持续的需求。

发明概述

本发明提供了各种治疗剂的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物，以及它们的制造方法和在各种病症包括肝脏病症的治疗中的使用方法。这样的化合物可以在一些实施方案中使用，以容许在肝脏中聚集治疗剂。在一个实施方案中，该化合物是S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯、S-新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺、S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯、或S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺。

本发明提供了各种治疗剂的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物。本文使用的“治疗剂的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物”包括经衍生包含氨基磷酸酯或膦酰胺基团的治疗剂。该治疗剂是例如抗病毒剂，它包含或经衍生而包含反应基团例如羟基，供氨基磷酸酯或膦酰胺部分连接。这样的治疗剂包括但不限于核苷和核苷类似物包括无环核苷。在一些实施方案中，本发明还提供了核苷酸和核苷酸类似物的氨基磷酸酯，例如1′、2′、3′-支链和4′-支链核苷的氨基磷酸酯。可以施用有效量的这样的化合物来治疗肝脏病症，包括传染性疾病例如乙肝和丙肝感染，包括其耐药性株。

在一些实施方案中，虽然不受限于任何理论，由氨基磷酸酯或膦酰胺化合物在肝脏中的选择性新陈代谢而获得母体药物是可能的，因此母体药物能够在宿主的肝脏中积累。通过选择性地在肝脏中靶向和激活化合物，可以减少活性化合物在胃肠道中潜在的不希望的分布。此外，可以提高活性化合物在肝脏中感染位点的治疗量。

在一些实施方案中，由氨基磷酸酯或膦酰胺化合物在肝脏中的新陈代谢形成母体核苷(或核苷衍生物)药物的5′-单磷酸盐或膦酸盐，使得单磷酸盐或膦酸盐在宿主的肝脏中形成和积累。因此，在一些实施方案中，氨基磷酸酯实际上提供了核苷或核苷类似物的稳定的磷酸酯。在化合物需要被三磷酸化来激活的一些实施方案中，这可以有利地消除对初始磷酸化步骤的需求，并使得更易形成激活的三磷酸盐，该三磷酸盐抑制靶向的酶，而且可以提高核苷或核苷类似物的总活性。

不受限于任何理论，在一个实施方案中，提供了核苷例如2′-C-甲基-核糖核苷的氨基磷酸酯，它在口服施用后在肝脏中选择性聚集，并在肝细胞中代谢，以产生5′-单磷酸盐，5′-单磷酸盐可以经酶转化成抑制HCV聚合酶的5′-三磷酸盐活性形式。因此，和施用核苷母体分子相比，可以降低潜在的治疗剂量。

因此，在一些实施方案中，口服施用本文所述的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物后，化合物可以在感染位点的肝细胞中有利地聚集，并在肝细胞中转化成磷酸盐或膦酸盐，然后其任选地进一步磷酸化，以实现它的治疗效果。

因为这些方法允许本文公开的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物在宿主的肝脏中积累，所以本文所述的方法可用于对例如肝脏疾病或病症例如乙肝或丙肝的治疗和/或预防。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可用于对黄病毒科感染和其它相关病症的预防和治疗，相关病症例如抗黄病毒科抗体阳性和黄病毒科阳性病症、由HCV引起的慢性肝炎、肝硬化、纤维化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎和疲劳。这些化合物或制剂也可以被预防地使用，以在抗黄病毒科抗体或黄病毒科抗原阳性的个体或者曾经暴露于黄病毒科的个体中预防或延迟临床疾病的进展。在一个具体的实施方案中，黄病毒科是丙肝。在一些实施方案中，化合物被用来治疗任何通过RNA依赖性RNA聚合酶复制的病毒。

也提供了在宿主包括人中治疗黄病毒科感染的方法，包括任选地在药学上可接受的载体中施用有效量的本文提供的化合物，所述施用单独进行，或者与另一种抗黄病毒科药剂联合或交替施用。

在一些实施方案中，本文提供了治疗和/或预防乙肝感染和其它相关病症的方法，相关病症例如抗HBV抗体阳性和HBV阳性病症、HBV引起的慢性肝炎、纤维化、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎和疲劳。

在一些实施方案中，各种药剂的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物可以如本文描述进行制备和治疗使用从而提高药物向肝脏的递送。在一个实施方案中，该化合物是S-酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物，例如S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物。

本文提供的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物及它们的盐、以及包含该化合物的组合物，可用于治疗肝脏病症例如HBV和/或HCV感染。在一个实施方案中，本文提供的化合物是式I的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、互变异构体或多晶型，其中

X^a是

Z是O或S；

各个W独立地是O或S；

R^y和R^u各自独立地代表烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、氨基烷基、羟基烷基、烷氧基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

R^a和R^b如下选择：

i)R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、羧基烷基、羟基烷基、羟基芳基烷基、酰氧基烷基、氨基羰基烷基、烷氧基羰基烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，所有基团任选地被取代；或

ii)R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起形成3-7元杂环或杂芳环；

n是0-3；n₂是1-4；而且

R¹是可通过从抗病毒药物的羟基上去除氢而衍生的部分。

在另一个实施方案中，

X^a是

Z是O、S、NH或NR^w，其中R^w是例如烷基、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、氨基烷基、烷氧基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

各个W是O、S、NH或NR^w，其中R^w是例如烷基、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、氨基烷基、烷氧基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

R^y和R^u各自独立地代表烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、氨基烷基、烷氧基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

R^a和R^b如下选择：

i)R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、羧基烷基、羟基烷基、羟基芳基烷基、酰氧基烷基、氨基羰基烷基、烷氧基羰基烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基或杂环基，所有基团任选地被取代；或

ii)R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起构成了3-7元杂环或杂芳环；

n是0-3；n₂是1-4；而且

R¹如本文所述。

本领域技术人员将认识到式I的化合物可以通过例如在所述抗病毒药物的羟基上进行反应，例如通过缩合或脱水而设计或制备。为方便起见，在本文的描述中，当取代基例如示例性R¹基团被认定为药物时，本领域技术人员将认识到化合物例如式I的化合物包含抗病毒药物的衍生物例如自由基。那些衍生物可以通过例如从该药物的羟基上去除氢基而制备，例如在脱水反应中制备。在适当情况下，一些衍生物可以通过修饰抗病毒药物的磷酸酯或膦酸酯而制备，以产生式I的化合物。

在式I的一些实施方案中，R¹是包含环或无环糖的核苷，或其类似物。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HCV病毒感染的抗病毒核苷类似物，选自利巴韦林、viramidine、2′-C-甲基胞苷、2′-C-甲基鸟苷、valopicitabine(NM 283)、MK-0608和PSI-6130。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HBV病毒感染的抗病毒核苷类似物，选自拉米夫定(益平维-HBV、Zeffix或贺普丁)、阿德福韦、恩替卡韦(博路定)、替比夫定(替泽卡、素比伏)、恩曲他滨(FTC)、克拉夫定(L-FMAU)、viread(替诺福韦)、托西他滨、伐托他滨(monoval LdC)、氨多索韦(DAPD)和RCV(Racivir)。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HBV病毒感染的非核苷抗病毒剂，选自瑞喹莫德或西戈斯韦。

在依照式I的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在一些实施方案中，选择本文提供的化合物使得R¹不是3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧胸苷。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是式IIa或IIb的化合物：

R^y是烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、氨基烷基、羟基烷基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

R^a和R^b如下选择：

ii)R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起构成了3-7元杂环或杂芳环；而且

R¹是抗病毒药物(如本文使用的，在R¹是抗病毒药物情况下，实施方案包括通过从该抗病毒药物的羟基上去除氢而衍生的部分)，例如核苷或核苷类似物。

在依照式IIa或IIb的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基组成的集团。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式I所述，且

其中R²和R³各自独立地是H；直链的、支链的或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基(其中苯基被任选地取代)；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；和氨基酸残基、碳水化合物；肽；胆固醇；或其它药学上可接受的离去基团，例如在体内施用时，其能够提供其中R²和/或R³独立地是H的化合物；或R²和R³通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接形成环状基团；而且其中各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链的、支链的或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基(其中苯基被任选地取代)；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在根据本段的一些实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R²和R³各自是H；R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R²和R³各自是H；R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式I所述。R^d选自氢、烷基和烷氧基。在一些实施方案中，R^d是氢、甲基或甲氧基。在根据本段的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在一个实施方案中，可以被衍生以在例如5′位置包含氨基磷酸酯或膦酰胺的核苷包括：

核苷氨基磷酸酯或膦酰胺化合物的例子包括：

在一个实施方案中，核苷氨基磷酸酯或膦酰胺化合物包括：

一方面，本文描述的化合物与第二治疗剂联合提供或施用，例如可用于治疗或预防HBV和/或HCV感染的第二治疗剂。示例性的治疗剂在以下章节中详细描述。

另一方面，提供了适合在治疗或预防病症例如HBV和/或HCV感染中使用的药物组合物、单一单位剂型和试剂盒，它们包含治疗或预防有效量的本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物，以及治疗或预防有效量的第二治疗剂例如可用于治疗或预防HBV和/或HCV感染的治疗剂。

在一些实施方案中，提供了治疗肝脏病症的方法，该方法包括对有此需要的个体施用治疗有效量的核苷或核苷类似物的氨基磷酸酯或膦酰胺衍生物，其中该衍生物任选地是S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物。该衍生物任选地选自本文公开的化合物。

在一些实施方案中，本文提供了：

(a)如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物，以及其药学上可接受的盐和组合物；

(b)如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物，以及在治疗和/或预防肝脏病症包括黄病毒科感染中使用的，特别是在被诊断为患有黄病毒科感染或有被丙肝感染风险的个体中使用的所述化合物的药学上可接受的盐和组合物；

(c)如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物的制备工艺，下文将更详细地说明；

(d)药物制剂，包含如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或稀释剂；

(e)药物制剂，任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中包含如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物或其药学上可接受的盐以及其它一种或多种有效的抗HCV药剂；

(f)供治疗和/或预防宿主感染黄病毒科的方法，包括施用有效量的如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物、其药学上可接受的盐或组合物；

(g)治疗和/或预防感染黄病毒科的宿主的方法，包括与一种或多种有效抗HCV药剂联合和/或交替施用有效量的如本文描述的化合物如式I、IIa或IIb的化合物、其药学上可接受的盐或组合物；

(h)用于治疗和/或预防HBV感染，特别是在被诊断为患有HBV感染或有被乙肝感染风险的个体中使用的如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物，及其药学上可接受的盐和组合物；

(i)药物制剂，任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中包含如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物或其药学上可接受的盐以及其它一种或多种有效的抗HBV药剂；

(j)治疗和/或预防乙肝感染和其它相关病症的方法，所述病症例如抗HBV抗体阳性和HBV阳性状况、HBV引起的慢性肝炎、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎和疲劳，所述方法包括施用有效量的如本文描述的化合物例如式I、IIa或IIb的化合物，或其药学上可接受的盐或组合物。

(k)在抗HBV抗体或HBV抗原阳性的个体或者曾经暴露于HBV的个体中预防或延迟临床疾病进展的预防方法。

可以被治疗的黄病毒科例如在Fields Virology，编辑：Fields，B.N.、Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，PA，第31章，1996中被一般性地论述。在本发明的具体实施方案中，黄病毒科是HCV。在可选实施方案中，黄病毒科是黄病毒或瘟病毒。具体的黄病毒不受限地包括：阿布塞塔罗夫(Absettarov)、阿尔弗(Alfuy)、Apoi、Aroa、Bagaza、Banzi、Bouboui、布苏夸拉(Bussuquara)、Cacipacore、卡勒岛(Carey Island)、达喀尔蝙蝠(Dakar bat)、登革热1、登革热2、登革热3、登革热4、边山(Edge Hill)、恩德比蝙蝠(Entebbe bat)、Gadgets Gully、Hanzalova、Hypr、伊列乌斯(Ilheus)、以色列火鸡脑膜脑炎、日本脑炎、Jugra、胡蒂亚帕(Jutiapa)、Kadam、Karshi、Kedougou、科科贝拉(Kokobera)、Koutango、Kumlinge、昆津(Kunjin)、夸赛纳(Kyasanur)森林病、兰加特(Langat)、跳跃病、Meaban、莫多克(Modoc)、蒙大纳鼠耳蝠脑白质炎、墨累谷脑炎、Naranjal、根岸(Negishi)、Ntaya、鄂木斯克出血热、金边蝙蝠、波瓦森(Powassan)、布拉沃(Rio Bravo)、罗西奥(Rocio)、皇家农庄(Royal Farm)、俄罗斯春夏脑炎、Saboya、圣路易斯脑炎、Sal Vieja、San Perlita、Saumarez Reef、塞皮克(Sepik)、Sokuluk、Spondweni、Stratford、Tembusu、Tyuleniy、乌干达S、乌苏土(Usutu)、韦塞尔斯布朗(Wesselsborn)、西尼罗、雅温得(Yaounde)、黄热病、和Zika。

可以被治疗的瘟病毒在Fields Virology，编辑：Fields，B.N.、Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，PA，第33章，1996中一般性地论述。具体的瘟病毒不受限地包括：牛病毒性腹泻病毒(“BVDV”)、典型性猪瘟病毒(“CSFV”，也叫做猪霍乱病毒)、和边界病病毒(“BDV”)。

附图简要说明

图1描述了NM108羟基SATE氨基磷酸酯(B299)在猴肝脏S9中与NADPH共培养和未与NADPH共培养后的损耗。

图2描述了NM107羟基SATE氨基磷酸酯(B102)在猴肝脏S9中与NADPH共培养和未与NADPH共培养后的损耗。

示例性实施方案的说明

本文提供了可用于在个体中治疗肝脏病症例如HBV和/或HCV感染有用的化合物、组合物和方法。进一步提供的是对这样的方法有用的剂型。

定义

除非另外指出，当提及本文提供的化合物时，以下术语具有以下含义。

除非另外说明，本文使用的术语“烷基”包括通常C₁到C₁₀的饱和的直链、支链或环状的伯、仲或叔烃，且具体包括甲基、CF₃、CCl₃、CFCl₂、CF₂Cl、乙基、CH₂CF₃、CF₂CF₃、丙基、异丙基、环丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基、3-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、和2，3-二甲基丁基。该术语包括取代和未取代的烷基，而且特别地包括卤代烷基，而且甚至更加特别地包括氟化烷基。可以取代烷基的部分的非限制性例子选自卤素(氟、氯、溴或碘)、羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸盐、膦酸、磷酸盐或膦酸盐，它们未被保护或在必需时被保护，如本领域技术人员已知的，例如，如在Greene等，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley and Sons，第二版，1991中教导的，该文献通过引用并入本文。

除非另外说明，本文使用的术语“低碳数烷基”包括C₁到C₄饱和的直链、支链或(如果适当的话)环状(例如环丙基)烷基，包括取代和未取代部分。

“亚烃基”包括二价的饱和脂肪族烃基，特别是具有多达大约11个碳原子，而且更加特别是具有1到6个碳原子的烃基，其可以是直链或有支链的。这个术语的示例是例如亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基异构体(例如-CH₂CH₂CH₂-和-CH(CH₃)CH₂-)等基团。

“烯基”包括一价的烯系不饱和烃基团，在一些实施方案中，其具有多达大约11个碳原子、2到8个碳原子、或2到6个碳原子，它可以是直链或有支链的，而且具有至少1个或1到2个烯系不饱和位点。示例性烯基包括乙烯基(-CH＝CH₂)、正丙烯基(-CH₂CH＝CH₂)、异丙烯基(-C(CH₃)＝CH₂)、乙烯基和取代的乙烯基等。

“亚烯基”包括二价的烯系不饱和烃基团，在一些实施方案中，其具有多达大约11个碳原子或2到6个碳原子，它可以是直链或有支链的，而且具有至少1个或1到2个烯系不饱和位点。这个术语的示例是例如亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚丙烯基异构体(例如-CH＝CHCH₂-、-C(CH₃)＝CH-和-CH＝C(CH₃)-)等的基团。

“炔基”包括炔系不饱和烃基团，在一些实施方案中，其具有多达大约11个碳原子或2到6个碳原子，它可以是直链或有支链的，而且具有至少1个或1到2个炔系不饱和位点。炔基的非限制性例子包括炔属的乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH₂C≡CH)等。

除非另外说明，本文使用的术语“芳基”包括苯基、二苯基或萘基，而且优选地是苯基。该术语包括取代和未取代的部分。芳基可以被任何描述的部分取代，包括但不限于选自卤素(氟、氯、溴或碘)、烷基、卤代烷基、羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸盐、膦酸、磷酸盐或膦酸盐的一个或多个部分，它们未被保护或在必需时被保护，如本领域技术人员已知的，例如，如在Greene等，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley and Sons，第二版，1991中教导的。

“烷氧基”包括-OR基团，其中R是烷基。具体的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基等。

“烷氧基羰基”包括-C(O)-烷氧基，其中烷氧基如本文定义。

“氨基”包括-NH₂基。

“羧基”包括-C(O)OH基。

术语“烷基氨基”或“芳基氨基”分别包括具有一或两个烷基或芳基取代基的氨基。除非在本申请中另外具体规定，当烷基是合适部分时，低碳数烷基是优选的。类似地，当烷基或低碳数烷基是合适部分时，未取代的烷基或低碳数烷基是优选的。

“卤素”或“卤代”包括氯、溴、氟或碘。

“单烷基氨基”包括烷基-NR′-基团，其中R′选自氢和烷基。

“硫代烷氧基”包括-SR基团，其中R是烷基。

除非另外定义，本文使用的术语“被保护”指添加至氧、氮或磷原子以预防其进一步反应或为了其它目的的基团。各种广泛的氧和氮保护基团是有机合成领域技术人员已知的。

“药学上可接受的盐”包括本文提供的化合物的任何盐，所述盐保持了化合物的生物性质，而且它不是有毒的或不是在其它方面不适合药用的。这样的盐可以源自本领域熟知的各种有机和无机反离子。这样的盐包括：(1)与有机或无机酸形成的酸加成盐，这些酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、戊二酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、月桂酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、苯甲酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎尼酸、粘康酸等酸；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子(a)被金属离子置换或(b)与有机碱配位所形成的盐，所述金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子，或者碱金属或碱土金属氢氧化物例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化锌和氢氧化钡，氨水；所述有机碱例如脂肪族、脂环族或芳香族的有机胺，例如氨水、甲胺、二甲胺、二乙胺、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N′-二苯甲基乙烯-二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苯甲基苯乙胺、N-甲基葡糖胺哌嗪、三(羟甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵等。

仅仅作为举例，盐进一步包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐、四烷基铵盐等，而且当化合物包含碱性官能团时，包括无毒的有机或无机酸的盐，例如，氢卤化物例如盐酸盐和氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、硝酸盐、醋酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊基丙酸盐、乙醇酸盐、戊二酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、山梨酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、苦味酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、邻苯二甲酸盐、月桂酸盐、甲烷磺酸盐(甲磺酸盐)、乙烷磺酸盐、1，2-乙烷-二磺酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、苯磺酸盐(苯磺酸盐)、4-氯苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基二环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸盐、葡庚糖酸盐、3-苯基丙酸盐、三甲基乙酸盐、叔丁基乙酸盐、月桂基硫酸盐、葡萄糖酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、羟基萘酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎尼酸盐、粘康酸盐等。

术语“烷芳基”或“烷基芳基”包括带有烷基取代基的芳基。术语芳烷基或芳基烷基包括带有芳基取代基的烷基。

术语“嘌呤”或“嘧啶”碱基包括但不限于腺嘌呤、N⁶-烷基嘌呤、N⁶-酰基嘌呤(其中酰基是C(O)(烷基、芳基、烷基芳基或芳基烷基)、N⁶-苯甲基嘌呤、N⁶-卤代嘌呤、N⁶-乙烯基嘌呤、N⁶-炔属嘌呤、N⁶-酰基嘌呤、N⁶-羟基烷基嘌呤、N⁶-烷基氨基嘌呤、N⁶-硫代烷基嘌呤、N²-烷基嘌呤、N²-烷基-6-硫嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、6-氮杂嘧啶包括6-氮杂胞嘧啶、2-和/或4-巯基嘧啶、尿嘧啶、5-卤代尿嘧啶包括5-氟尿嘧啶、C⁵-烷基嘧啶、C⁵-苯甲基嘧啶、C⁵-卤代嘧啶、C⁵-乙烯基嘧啶、C⁵-炔属嘧啶、C⁵-酰基嘧啶、C⁵-羟基烷基嘌呤、C⁵-酰氨基嘧啶、C⁵-氰基嘧啶、C⁵-碘嘧啶、C⁶-碘-嘧啶、C⁵-Br-乙烯基嘧啶、C⁶-Br-乙烯基嘧啶、C⁵-硝基嘧啶、C⁵-氨基-嘧啶、N²-烷基嘌呤、N²-烷基-6-硫嘌呤、5-氮杂胞苷基、5-氮杂尿嘧啶基、三唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、和吡唑并嘧啶基。嘌呤碱基包括但不限于鸟嘌呤、腺嘌呤、次黄嘌呤、7-去氮杂鸟嘌呤、7-去氮杂腺嘌呤、2，6-二氨基嘌呤和6-氯嘌呤。在必需或希望时，碱基上的官能性氧和氮基团可以被保护。合适的保护基团是本领域技术人员熟知的，而且包括三甲基硅烷基、二甲基己基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、和叔丁基二苯基硅烷基、三苯甲基、烷基、和酰基例如乙酰基和丙酰基、甲烷磺酰基、以及对甲苯磺酰基。

术语“酰基”或“O-连接的酯”包括具有式C(O)R′的基团，其中R′是直链、支链或环状的烷基(包括低碳数烷基)，氨基酸的羧酸残基，芳基包括苯基，烷芳基，芳基烷基包括苯甲基，烷氧基烷基包括甲氧基甲基，芳氧基烷基例如苯氧基甲基；或取代的烷基(包括低碳数烷基)，芳基包括苯基(任选地被氯、溴、氟、碘、C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基)，磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基，单、二或三磷酸酯，三苯甲基或单甲氧基-三苯甲基，取代的苯甲基，烷芳基，芳基烷基包括苯甲基，烷氧基烷基包括甲氧基甲基，芳氧基烷基例如苯氧基甲基。酯中的芳基优选地包含苯基。特别地，酰基包括乙酰基、三氟乙酰基、甲基乙酰基、环丙基乙酰基、丙酰基、丁酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、新庚酰基、苯基乙酰基、2-乙酰氧基-2-苯基乙酰基、二苯基乙酰基、α-甲氧基-α-三氟甲基-苯基乙酰基、溴乙酰基、2-硝基-苯乙酰基、4-氯-苯乙酰基、2-氯-2，2-二苯基乙酰基、2-氯-2-苯基乙酰基、三甲基乙酰基、氯二氟乙酰基、全氟乙酰基、氟乙酰基、溴二氟乙酰基、甲氧基乙酰基、2-噻吩乙酰基、氯磺酰基乙酰基、3-甲氧基苯基乙酰基、苯氧基乙酰基、叔丁基乙酰基、三氯乙酰基、单氯-乙酰基、二氯乙酰基、7H-十二氟-庚酰基、全氟-庚酰基、7H-十二-氟庚酰基、7-氯十二氟-庚酰基、7-氯-十二氟-庚酰基、7H-十二氟庚酰基、7H-十二-氟庚酰基、九-氟-3，6-二氧-庚酰基、九氟-3，6-二氧庚酰基、全氟庚酰基、甲氧基苯甲酰基、甲基3-氨基-5-苯基噻吩-2-羧基、3，6-二氯-2-甲氧基-苯甲酰基、4-(1，1，2，2-四氟-乙氧基)-苯甲酰基、2-溴-丙酰基、ω-氨基辛酰基、癸酰基、正十五酰基、硬脂酰基、3-环戊基-丙酰基、1-苯-羧基、O-乙酰基扁桃酸基、新戊酰基乙酰基、1-金刚烷-羧基、环己烷-羧基、2，6-吡啶二羧基、环丙烷-羧基、环丁烷-羧基、全氟环己基羧基、4-甲基苯甲酰基、氯甲基异噁唑基羰基、全氟环己基羧基、巴豆酰基、1-甲基-1H-吲唑-3-羰基、2-丙烯基、异戊酰基、1-吡咯烷羰基、4-苯基苯甲酰基。

术语“氨基酸”包括天然存在的和合成的α、β、γ或δ氨基酸，而且包括但不限于在蛋白中发现的氨基酸，即甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸。在优选的实施方案中，氨基酸为L-构型。或者，氨基酸可以是丙氨酰、缬氨酰、亮氨酰、异亮氨酰、脯氨酰、苯丙氨酰、色氨酰、甲硫氨酰、甘氨酰、丝氨酰、苏氨酰、半胱氨酰、酪氨酰、天冬酰胺酰、谷氨酰胺酰、天冬氨酰、谷氨酰、赖氨酰、精氨酰、组氨酰、β-丙氨酰、β-缬氨酰、β-亮氨酰、β-异亮氨酰、β-脯氨酰、β-苯丙氨酰、β-色氨酰、β-甲硫氨酰、β-甘氨酰、β-丝氨酰、β-苏氨酰、β-半胱氨酰、β-酪氨酰、β-天冬酰胺酰、β-谷氨酰胺酰、β-天冬氨酰、β-谷氨酰、β-赖氨酰、β-精氨酰或β-组氨酰的衍生物。

本文使用的术语“基本不含”或“基本没有”，就核苷组合物而言，包括核苷组合物，其包含至少85或90％重量，优选地95％、98％、99％或100％重量的该核苷的指定对映异构体。在优选的实施方案中，在本发明的方法和化合物中，该化合物基本不含对映异构体。

类似地，术语“分离”就核苷组合物而言，包括核苷组合物，它包含量比至少85％、90％、95％、98％、99％到100％重量的该核苷，剩余部分包含其它化学种类或对映异构体。

“溶剂化物”包括本文提供的化合物或其盐，它进一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量量或非化学计量量的溶剂。当溶剂是水时，该溶剂化物是水合物。

本文使用的术语“宿主”，包括病毒可以在其中复制的任何单细胞或多细胞生物，包括细胞系和动物，而且优选地包括人。或者，宿主可以携带一部分黄病毒科病毒基因组，它的复制或功能可以被本发明的化合物改变。术语宿主具体地包括被感染的细胞、被全部或部分黄病毒科基因组转染的细胞、和动物，特别是灵长目动物(包括黑猩猩)和人。在本发明的绝大多数动物应用中，宿主是人类患者。但是，在一些病症中，本发明明确地预期了兽医应用(例如黑猩猩)。

本文使用的术语“个体”和“患者”在本文中可互换使用。术语“个体”指动物例如哺乳动物，包括非灵长目动物(例如母牛、猪、马、猫、狗、大鼠和小鼠)和灵长目动物(例如，猴例如食蟹猴、黑猩猩和人)，例如人。在一个实施方案中，个体是当前的丙肝感染治疗难治的或无反应的。在另一个实施方案中，个体是家畜(例如马、母牛、猪等)或宠物(例如狗或猫)。在一个实施方案中，个体是人。

本文使用的术语“治疗剂”指可用于病症或其一种或多种症状的治疗或预防的任何药剂。在一些实施方案中，术语“治疗剂”包括本文提供的化合物。在一个实施方案中，治疗剂是已知可用于、已被用于、或正在被用于治疗或预防病症或其一种或多种症状的药剂。

“治疗有效量”包括化合物或组合物的量，当对个体施用以治疗疾病时，该量足以实现对疾病的治疗。“治疗有效量”可以根据化合物、疾病及其严重程度、以及待接受治疗的个体的年龄、体重等因素变化。

任何疾病或病症的“治疗”，在一个实施方案中，指改善个体中存在的疾病或病症。在另一实施方案中，“治疗”包括改善至少一个身体参数，它可能是个体本身难以察觉的。在又一个实施方案中，“治疗”包括身体上(例如可辨别症状的稳定)或生理上(例如身体参数的稳定)或两方面同时缓和疾病或病症。在又一个实施方案中，“治疗”包括延迟疾病或病症的发作。

本文使用的术语“预防剂”用于指可用于预防病症或其一种或多种症状的任何药剂。在一些实施方案中，术语“预防剂”包括本文提供的化合物。在一些其它的实施方案中，术语“预防剂”不指本文提供的化合物。例如，预防剂是已知可用于、或已被用于或正在被用于预防或阻止病症的发作、发展、进展和/或严重程度的药剂。

本文使用的词组“预防有效量”包括治疗(例如预防剂)的量，它足以防止或减轻与病症相关的一种或多种症状的发展、复发或发作，或者提高或改进另一种治疗(例如另一种预防剂)的预防效果。

化合物

可以使用本领域中可得到的方法和本文公开的方法来形成各种治疗剂的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物。这样的化合物可以在一些实施方案中使用，以提高药物向肝脏的递送。在一个实施方案中，化合物是S-酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物，例如S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯、S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯、S-新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺或S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺。可以被衍生为化合物形式的治疗剂包括抗病毒剂，该抗病毒剂包含或已被衍生从而包含供氨基磷酸酯或膦酰胺部分连接的反应性基团，所述抗病毒剂包括但不限于核苷和核苷类似物包括无环核苷。可以被衍生为化合物形式的治疗剂也包括抗病毒剂，该抗病毒剂包含或已被衍生从而包含磷酸酯或膦酸酯基团，所述磷酸酯或膦酸酯基团可以被衍生从而形成氨基磷酸酯或膦酰胺部分，所述抗病毒剂包括但不限于核苷和核苷类似物包括无环核苷。

可以被衍生的核苷包括本文公开的任何R¹。可以被衍生从而在例如5′、3′或2′位置包括氨基磷酸酯或膦酰胺的核苷的例子包括：

核苷氨基磷酸酯或膦酰胺化合物的例子包括：

也可如本文所述形成本文描述的和本领域已知的其它核苷和核苷类似物的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物，并将其用于治疗肝脏病症。氨基磷酸酯或膦酰胺部分可以在例如5′位置。

在一个实施方案中，本文提供了可用于治疗肝脏病症包括HBV和/或HCV感染的化合物及其盐，和包含所述化合物的组合物。在一个实施方案中，本文提供的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物是式IIa或IIb的化合物：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、互变异构体或多晶型，其中；

R^y是烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、杂环基或杂芳基，所有基团任选地被取代；

R^a和R^b如下选择：

R¹是抗病毒药物(它包括可通过从抗病毒药物的羟基上去除一个氢衍生得到的部分)。

在一些实施方案中，选择式IIa或IIb的化合物的条件是：当R^y是叔丁基或羟基-叔丁基时，R¹不是3′-叠氮基-2′，3′-二脱氧胸苷。

在一些实施方案中，R¹、R^a、R^b和R^y任选地被一个或多个如定义部分所定义的取代基取代。

在一些实施方案中，化合物具有式IIa或IIb，其中R^y是烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、环烯基、氨基、杂环基或杂芳基；

R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、羧基烷基、羟基烷基、羟基芳基烷基、酰氧基烷基、氨基羰基烷基、烷氧基羰基烷基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基或杂环基，所有基团任选地被取代；而且

R¹是抗病毒药物(这意味着包括可通过从抗病毒药物的羟基上去除一个氢而衍生得到的部分)。

在一个实施方案中，R¹是包含环或无环糖的核苷或其类似物，包括任何本文所述的或本领域已知的核苷或其类似物。

可如本文所述被衍生的可用于治疗丙肝感染的示例性核苷药物是：

可以如本文所述被衍生的示例性非核苷药物是：

可以如本文所述被衍生的可用于治疗乙肝感染的示例性核苷药物是：

可以施用阿昔洛韦、L-ddA或D-ddA的氨基磷酸酯或膦酰胺化合物以治疗乙肝，这些化合物的例子显示如下：

阿昔洛韦 L-ddA 阿昔洛韦的氨基磷酸酯

当核苷类似物已经包含膦酸酯时，该膦酸酯基团可以并入本文的结构式中显示的膦酰胺部分中，例如在阿德福韦的膦酰胺中所显示的：

因此，在下面式IIa的化合物的一些实施方案中：

部分：源自是非环核苷的膦酸酯的药物，即：其是例如PMEA(9-[2-(膦酰基甲氧基)乙基]腺嘌呤(阿德福韦)。

在根据式IIa或IIb的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。

在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据该段的一些实施方案中，R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在一个实施方案中，R^y是烷基或羟基烷基。在一个实施方案中，R^y是甲基、叔丁基、羟基-叔丁基或羟乙基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在一个实施方案中，R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、羧基烷基、羟基烷基、羟基芳基烷基、酰氧基烷基、氨基羰基烷基、烷氧基羰基烷基、芳基或芳基烷基，其中烷基可以被一个或多个取代基进一步取代。在一个实施方案中，R^a或R^b中至少一个不是氢。在一个实施方案中，R^a和R^b各自独立地是氢、甲基或苯甲基。

在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH，而且R^a和R^b各自独立地是氢、甲基或苯甲基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH，而且R^a是氢而R^b是苯甲基。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R¹和R^y如式IIa或IIb中所定义的。

在式IIIa、b、c或d的一些实施方案中：

R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且

在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基，或羟基-、氨基-、烷基-、卤代烷基-或三氟甲基-取代的苯甲基。在一些实施方案中，R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起形成3-7元杂环或杂芳环。

在一个实施方案中，R^y是烷基或羟基烷基。在一个实施方案中，R^y是甲基、叔丁基、羟基-叔丁基或羟乙基。在一个实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在根据式IIIa或IIIb的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R¹、R^a和R^b是例如如式IIa或IIb中所定义。

在式IVa或IVb的一些实施方案中：

R¹是抗病毒药物，例如核苷或核苷衍生物；而且

R^a和R^b各自独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基，或羟基-、氨基-、烷基-、卤代烷基-或三氟甲基-取代的苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是H、苯甲基或取代的烷基。在一些实施方案中，R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起形成3-7元杂环或杂芳环。

在式IVa或IVb的一些实施方案中：

R¹是抗病毒药物，例如核苷或核苷衍生物；而且

其中，在一个实施方案中，R^a和R^b中的一个是H，而另一个是烷基，该烷基任选地被芳基、苯甲基或杂芳基取代，所述基团各自任选地被取代。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R¹如式IIa或IIb中所定义。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HCV病毒感染的抗病毒核苷类似物，其选自利巴韦林、viramidine、2′-C-甲基胞苷、2′-C-甲基鸟苷、valopicitabine(NM 283)、MK-0608和PSI-6130。如本文使用的，当R¹是自身包含膦酸酯基团的核苷类似物例如阿昔洛韦时，该膦酸酯可以为本文公开的式中的膦酰胺形式。因此，例如在式Va或Vb中，R¹P(O)O-片段源自包含膦酸酯的核苷类似物。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HBV病毒感染的抗病毒核苷类似物，其选自拉米夫定(益平维-HBV、肝安能或贺普丁)、阿德福韦、恩替卡韦(博路定)、替比夫定(替泽卡、素比伏)、恩曲他滨(FTC)、克拉夫定(L-FMAU)、viread(替诺福韦)、托西他滨、伐托他滨(monoval LdC)、氨多索韦(DAPD)和RCV(Racivir)。

可以被用作R¹的进一步的示例性抗病毒核苷类似物在国际公开号WO2005021568、WO2006094347和WO2006093987以及美国专利公开号US20050215510中公开。

在一些实施方案中，R¹是可用于治疗HBV病毒感染的非核苷抗病毒剂，其选自瑞喹莫德或西戈斯韦。

在一个实施方案中，R¹是免疫抑制剂，例如combretastatin A-4、麦考酚酸、喷司他丁、奈拉滨或米托蒽醌。

在一个实施方案中，R¹是基于干扰RNA(iRNA)的抗病毒药，包括基于短干扰RNA(siRNA)的抗病毒药。这些化合物在国际专利公开号WO/03/070750和WO2005/012525，美国专利号7,176,304、7,109,165、7,041,817、7,034,009、7,022,828、6,852,535和6,849,726，以及美国专利公开号US2004/0209831中有描述。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb所定义，且R²和R³各自独立地是H；直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基任选地被取代；烷基磺酰基，芳基磺酰基，芳烷基磺酰基，脂类例如磷脂；氨基酸；和氨基酸残基，碳水化合物；肽；胆固醇；或其它例如在体内施用时能够提供其中R²和/或R³独立地是H或磷酸盐(包括单-、二-或三磷酸盐)的化合物的药学上可接受的离去基团；或R²和R³通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接相连形成环状基团。各R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基任选地被取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在一些实施方案中，R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R²和R³各自是H；R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R²和R³各自是H；R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb所定义，而且R^e是氢或烷基。各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基被任意取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在一些实施方案中，R^e是甲基、乙基或丙基，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R²和R³各自是H；R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^e是甲基、乙基或丙基；R²和R³各自是H；R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^e是甲基、乙基或丙基；R²和R³各自是H；R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R²和R³各自是H；R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^e是甲基、乙基或丙基；R²和R³各自是H；R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R¹选自美国专利申请公开号US2006/0111324 A1中描述的核苷，其内容通过引用完整并入本文。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义。各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基任选地被取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在根据本段的一些实施方案中，各个R^L是氢，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，各个R^L是氢，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，各个R^L是氢，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，各个R^L是氢，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义。各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基被任意取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在根据本段的一些实施方案中，各个R^L是氢，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，各个R^L是氢，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，各个R^L是氢，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，各个R^L是氢，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义。各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基被任意取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在根据本段的一些实施方案中，各个R^L是氢，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，各个R^L是氢，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，各个R^L是氢，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，各个R^L是氢，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

在一些实施方案中，可以形成2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-核苷，并将其衍生成为氨基磷酸酯化合物，例如本文举例描述的化合物，以增强活性单磷酸盐对患有HCV的个体的肝脏的递送。在一些实施方案中，提供下式的化合物：

其中：

T＝O、S、CH₂、CH(hal)或CH(hal)₂、S(O)n；

n＝1、2；

hal＝卤素；

R＝H、酰基(带有低碳数线性和非线性烷基-C_1-6-、氨基酸)、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、单磷酸酯前药例如(烷基-O)₂PO、(tBuSate-O)₂PO、环状单磷酸酯前药、氨基磷酸酯前药(芳香族胺、氨基酸)；

X和Y独立地是H、OH、O-烷基(低碳数)、O-酰基、F、NH₂、NH-烷基、N-二烷基、NH-酰基、N-二酰基或叠氮基；

Z是H、烷基、烯基、炔基、羟甲基、氟甲基或叠氮基；

W是H、烷基、烯基、炔基、羟甲基、氟甲基、叠氮基、羧酸、CO₂-烷基、氰基或甲酰胺；

A是H、烷基、烯基、炔基、羟甲基、氟甲基、叠氮基、羧酸、CO₂-烷基、氰基或甲酰胺；而且

碱基是天然或修饰的碱基。

化合物任选地在2′-位置包含氯原子。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义；A是H、烷基、烯基、炔基、羟甲基、氟甲基、叠氮基、羧酸、CO₂-烷基、氰基或甲酰胺；而且R^b1是卤素、烷氧基或卤代烷基。各个R^L独立地是H，氨甲酰基，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基任选地被取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；氨基酸残基；或碳水化合物。在根据本段的一些实施方案中，各个R^L是氢，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，各个R^L是氢，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，各个R^L是氢，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，各个R^L是氢，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义的。在一些实施方案中，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在根据本段的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中X是卤素，R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义，而且R²和R³各自独立地是H，直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基被任意取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；和氨基酸残基，碳水化合物；肽；胆固醇；或其它例如在体内施用时能够提供其中R²和/或R³独立地是H或磷酸盐(包括单-、二-或三磷酸盐)的化合物的药学上可接受的离去基团；或R²和R³通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接相连以形成环状基团。R^L是氢或本领域技术人员已知的任何亲脂性基团。在一些实施方案中，R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在一些实施方案中，所述亲脂性基团选自烷基、烯基、环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基-烷基。在根据本段的一些实施方案中，X是氟，R^L是氢，R²和R³各自是H，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，X是氟，R^L是氢，R²和R³各自是H，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，X是氟，R^L是氢，R²和R³各自是H，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，X是氟，R^L是氢，R²和R³各自是H，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，X是氟，R^L是氢，R²和R³各自是H，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义。在一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-OR^c、-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中R^a、R^b和R^y如式IIa或IIb中所定义。R^L是氢或本领域技术人员已知的任何亲脂性基团。在一些实施方案中，R^a是氢，R^b是-CH₂-C₆H₅，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。在一些实施方案中，所述亲脂性基团选自烷基、烯基、环烷基、芳基、杂芳基、芳基烷基和杂芳基-烷基。在根据本段的一些实施方案中，R^y是取代的烷基，例如羟基烷基或氨基烷基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在另一个实施方案中，R^y是-C(R^c)₃或-NHR^c，其中各个R^c独立地是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或芳基；而且R^a和R^b独立地是氢、烷基、取代的烷基、苯甲基或取代的苯甲基，例如羟基-或氨基-取代的烷基或苯甲基。在进一步的实施方案中，R^a和R^b独立地是苯甲基或取代的烷基。在进一步的实施方案中，R^y选自烷基和羟基烷基。在一些实施方案中，R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中变量如上所述。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物是下式的化合物：

其中变量如上所述。

在一个实施方案中，R¹是天然核苷。在一个实施方案中，R¹是生物活性的1′、2′、3′或4′C-支链β-D或β-L核苷的2′-或3′-前药。在本说明书中使用的术语1′、2′、3′或4′C-支链，包括在1′、2′、3′或4′-位置具有额外的非天然取代基的核苷(即碳与四个非氢取代基连接)。本文使用的术语2′-前药，包括在2′-位置具有可生物裂解部分的1′、2′、3′或4′C-支链-β-D或β-L核苷，可生物裂解部分包括但不限于酰基，且在一个实施方案中是天然或合成的D或L氨基酸，在一个实施方案中是L-氨基酸。本文使用的术语3′-前药，包括在3′-位置具有可生物裂解部分的1′、2′、3′或4′C-支链-β-D或β-L核苷，可生物裂解部分包括但不限于酰基，且在一个实施方案中是天然或合成的D或L氨基酸，在一个实施方案中是L-氨基酸。在一个实施方案中，该氨基酸是缬氨酸。

前药的例子(它可以如本文所述进一步被衍生从而在例如5位置包含氨基磷酸酯或膦酰胺部分)包括β-D-2′-C-甲基-胞苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-胸苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟胞苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-尿苷的2′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-胞苷的2′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-胸苷的2′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的2′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的2′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟-胞苷的2′-乙酰基酯；和β-D-2′-C-甲基-(胞苷、5-氟胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷或胸苷)的2′-酯，其中(i)该2′酯是氨基酸酯；或(ii)该2′酯是烷基或芳基酯。

前药的进一步的例子是β-D-2′-C-甲基-胞苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-胸苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟胞苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-尿苷的3′-L-缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-胞苷的3′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-胸苷的3′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的3′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的3′-乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟-胞苷的3′-乙酰基酯；和β-D-2′-C-甲基-(胞苷、5-氟胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷或胸苷)的3′-酯，其中(i)该3′酯是氨基酸酯；或(ii)该3′酯是烷基或芳基酯。

前药的额外例子包括β-D-2′-C-甲基-胞苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯(dival-2′-Me-L-dC)；β-D-2′-C-甲基-胸苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟-胞苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-尿苷的2′，3′-L-二缬氨酸酯；β-D-2′-C-甲基-胞苷的2′，3′-二乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-胸苷的2′，3′-二乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-腺苷的2′，3′-二乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-鸟苷的2′，3′-二乙酰基酯；β-D-2′-C-甲基-5-氟-胞苷的2′，3′-二乙酰基酯；和β-D-2′-C-甲基-(胞苷、5-氟胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷或胸苷)的2′，3′-二酯，其中(i)2′酯是氨基酸酯而且3′-酯是烷基或芳基酯；(ii)两种酯都是氨基酸酯；(iii)两种酯独立地是烷基或芳基酯；或(iv)2′酯是烷基或芳基酯而且3′-酯是氨基酸酯。

在一个实施方案中，R¹是：

其中碱基如本文所定义是天然或非天然嘌呤或嘧啶碱基；

R⁶是氢、羟基、烷基、烯基、炔基、叠氮基、氰基、Br-乙烯基、烷氧基、酰氧基、烷氧基羰基、烯氧基、卤素、NO₂或NR^6aR^6b；

R^6a和R^6b各自独立地是氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、酰基、芳基、杂芳基或杂环基；

R⁷、R⁹、R⁸和R¹⁰如下选择：

i)R⁷和R⁹各自独立地是氢、OR^7a、羟基、烷基、烯基、炔基、叠氮基、氰基、Br-乙烯基、烷氧基羰基、酰氧基、卤素、NO₂或NR^6aR^6b。

ii)R⁸和R¹⁰各自独立地是H、烷基或卤素；或者

iii)各个R⁷和R⁹、R⁷和R¹⁰、R⁸和R⁹或R⁸和R¹⁰一起形成双键；

R^7a是H；直链、支链或环状的烷基(包括低碳数烷基)；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯包括烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基任选地被一个或多个如本文给出的芳基定义中所描述的取代基取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类包括磷脂；氨基酸；和氨基酸残基，碳水化合物；肽；胆固醇；或其它例如在体内施用时能够提供其中R^7a是H或磷酸盐(包括单-、二-或三磷酸盐)的化合物的药学上可接受的离去基团；其中在一个实施方案中R^7a不是磷酸酯(包括单-、二-或三磷酸酯或稳定的磷酸酯前药)，或两个R^7a基团通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接相连形成环状基团；且

X是O、S、SO₂或CH₂。

在一个实施方案中，R¹具有式：

其中R²和R³各自独立地是H；直链、支链或环状的烷基；酰基(包括低碳数酰基)；CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、磺酸酯例如烷基或芳基烷基磺酰基包括甲烷磺酰基和苯甲基，其中苯基被任意取代；烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳基烷基磺酰基、脂类例如磷脂；氨基酸；和氨基酸残基，碳水化合物；肽；胆固醇；或其它例如在体内施用时能够提供其中R²和/或R³独立地是H或磷酸盐(包括单-、二-或三磷酸盐)的化合物的药学上可接受的离去基团；或R²和R³通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接相连形成环状基团；

其中Y¹是氢、溴、氯、氟、碘、CN、OH、OR⁴、NH₂、NHR⁴、NR⁴R⁵、SH或SR⁴；

X¹是直链、支链或环状的任选被取代的烷基，CH₃，CF₃，C(Y³)₃，2-Br-乙基，CH₂F，CH₂Cl，CH₂CF₃，CF₂CF₃，C(Y³)₂C(Y³)₃，CH₂OH，任选被取代的烯基，任选被取代的炔基，COOH，COOR⁴，COO-烷基，COO-芳基，CO-O烷氧基烷基，CONH₂，CONHR⁴，CON(R⁴)₂，氯，溴，氟，碘，CN，N₃，OH，OR⁴，NH₂，NHR⁴，NR⁴R⁵，SH或SR⁵；而且

X²是H，直链、支链或环状的任选被取代的烷基，CH₃，CF₃，C(Y³)₃，2-Br-乙基，CH₂F，CH₂Cl，CH₂CF₃，CF₂CF₃，C(Y³)₂C(Y³)₃，CH₂OH，任选被取代的烯基，任选被取代的炔基，COOH，COOR⁴，COO-烷基，COO-芳基，CO-O烷氧基烷基，CONH₂，CONHR⁴，CON(R⁴)₂，氯，溴，氟，碘，CN，N₃，OH，OR⁴，NH₂，NHR⁴，NR⁴R⁵，SH或SR⁵；且

其中各个Y³独立地是H、F、Cl、Br或I；

各个R⁴和R⁵独立地是氢、酰基(包括低碳数酰基)、烷基(包括但不限于甲基、乙基、丙基和环丙基)、低碳数烷基、烯基、炔基或环烷基。

在本文所述的实施方案中，R²和/或R³可以是例如在体内施用时能够提供其中R²和/或R³独立地是H或磷酸盐(包括单-、二-或三磷酸盐)的化合物的药学上可接受的离去基团。

在另一个实施方案中，各个R²和R³独立地是氢或酰基。在另一个实施方案中，R²和R³通过烷基、酯或氨基甲酸酯连接相连形成环状基团。

在另一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、Y¹、Y³、X¹和X²如式XIII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中碱基选自如下基团：

其中各个W¹、W²、W³和W⁴独立地是N、CH、CF、CI、CBr、CCl、CCN、CCH₃、CCF₃、CCH₂CH₃、CC(O)NH₂、CC(O)NHR⁴、CC(O)N(R⁴)₂、CC(O)OH、CC(O)OR⁴或CX³；

各个W^*独立地是O、S、NH或NR⁴；

X是O、S、SO₂、CH₂、CH₂OH、CHF、CF₂、C(Y³)₂、CHCN、C(CN)₂、CHR⁴或C(R⁴)₂；

X^*是CH、CF、CY³或CR⁴；

X²是H，直链、支链或环状的任选被取代的烷基，CH₃，CF₃，C(Y³)₃，2-Br-乙基，CH₂F，CH₂Cl，CH₂CF₃，CF₂CF₃，C(Y³)₂C(Y³)₃，CH₂OH，任选被取代的烯基，任选被取代的炔基，COOH，COOR⁴，COO-烷基，COO-芳基，CO-O烷氧基烷基，CONH₂，CONHR⁴，CON(R⁴)₂，氯，溴，氟，碘，CN，N₃，OH，OR⁴，NH₂，NHR⁴，NR⁴R⁵，SH或SR⁵；

各个X³独立地是直链、支链或环状的任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)，CH₃，CH₂CN，CH₂N₃，CH₂NH₂，CH₂NHCH₃，CH₂N(CH₃)₂，CH₂OH，卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)，CF₃，C(Y³)₃，2-Br-乙基，CH₂F，CH₂Cl，CH₂CF₃，CF₂CF₃，C(Y³)₂C(Y³)₃，任选被取代的烯基，卤代烯基，Br-乙烯基，任选被取代的炔基，卤代炔基，N₃，CN，-C(O)OH，-C(O)OR⁴，-C(O)O(低碳数烷基)，-C(O)NH₂，-C(O)NHR⁴，-C(O)NH(低碳数烷基)，-C(O)N(R⁴)₂，-C(O)N(低碳数烷基)₂，OH，OR⁴，-O(酰基)，-O(低碳数酰基)，-O(烷基)，-O(低碳数烷基)，-O(烯基)，-O(炔基)，-O(芳基烷基)，-O(环烷基)，-S(酰基)，-S(低碳数酰基)，-S(R⁴)，-S(低碳数烷基)，-S(烯基)，-S(炔基)，-S(芳基烷基)，-S(环烷基)，氯，溴，氟，碘，NH₂，-NH(低碳数烷基)，-NHR⁴，-NR⁴R⁵，-NH(酰基)，-N(低碳数烷基)₂，-NH(烯基)，-NH(炔基)，-NH(芳基烷基)，-NH(环烷基)，-N(酰基)₂；

各个Y独立地选自H、任选被取代的低碳数烷基、环烷基、烯基、炔基、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂F、CH₂Cl、CH₂N₃、CH₂CN、CH₂CF₃、CF₃、CF₂CF₃、CH₂CO₂R、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCOOR、(CH₂)_mCONH₂、(CH₂)_mCONR₂、和(CH₂)_mCONHR；

其中R是H、烷基或酰基；

Y¹是氢、溴、氯、氟、碘、CN、OH、OR⁴、NH₂、NHR⁴、NR⁴R⁵、SH或SR⁴；

各个Y²独立地是O、S、NH或NR⁴；

各个Y³独立地是H、F、Cl、Br或I；

各个R⁴和R⁵独立地是氢、酰基(包括低碳数酰基)、烷基(包括但不限于甲基、乙基、丙基和环丙基)、低碳数烷基、烯基、炔基或环烷基；

各个R⁶独立地是任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₃、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、任选被取代的烯基、卤代烯基、Br-乙烯基、任选被取代的炔基、卤代炔基、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)O(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂或氰基；

各个R⁷独立地是H、OH、OR²、任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₃、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、任选被取代的烯基、卤代烯基、Br-乙烯基、任选被取代的炔基、卤代炔基、任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)、任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)、任选被取代的杂芳基(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂芳环)、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)SH、-CH₂C(O)SR⁴、-CH₂C(O)S(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)SH、-(CH₂)_mC(O)SR⁴、-(CH₂)_mC(O)S(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)O(低碳数烷基)、-C(O)SH、-C(O)SR⁴、-C(O)S(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂、-O(酰基)、-O(低碳数酰基)、-O(R⁴)、-O(烷基)、-O(低碳数烷基)、-O(烯基)、-O(炔基)、-O(芳基烷基)、-O(环烷基)、-S(酰基)、-S(低碳数酰基)、-S(R⁴)、-S(低碳数烷基)、-S(烯基)、-S(炔基)、-S(芳基烷基)、-S(环烷基)、NO₂、NH₂、-NH(低碳数烷基)、-NHR⁴、-NR⁴R⁵、-NH(酰基)、-N(低碳数烷基)₂、-NH(烯基)、-NH(炔基)、-NH(芳基烷基)、-NH(环烷基)、-N(酰基)₂、叠氮基、氰基、SCN、OCN、NCO或卤素(氟、氯、溴、碘)；

或者，R⁶和R⁷可以一起形成螺环化合物，其选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)；

各个m独立地是0、1或2。

在一个实施方案中，碱基是

在另一个实施方案中，R¹是

其中各个R⁶和R⁷如上面式XX、XXI或XXII中所定义的；

其中各个R⁸和R¹¹独立地是氢、任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₃、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、任选被取代的烯基、卤代烯基、Br-乙烯基、任选被取代的炔基、卤代炔基、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)O(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂、氰基、叠氮基、NH-酰基或N(酰基)₂；

各个R⁹和R¹⁰独立地是氢、OH、OR²、任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₃、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、任选被取代的烯基、卤代烯基、Br-乙烯基、任选被取代的炔基、卤代炔基、任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)、任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)、任选被取代的杂芳基(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂芳环)、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)SH、-CH₂C(O)SR⁴、-CH₂C(O)S(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)SH、-(CH₂)_mC(O)SR⁴、-(CH₂)_mC(O)S(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)O(低碳数烷基)、-C(O)SH、-C(O)SR⁴、-C(O)S(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂、-O(酰基)、-O(低碳数酰基)、-O(R⁴)、-O(烷基)、-O(低碳数烷基)、-O(烯基)、-O(炔基)、-O(芳基烷基)、-O(环烷基)、-S(酰基)、-S(低碳数酰基)、-S(R⁴)、-S(低碳数烷基)、-S(烯基)、-S(炔基)、-S(芳基烷基)、-S(环烷基)、NO₂、NH₂、-NH(低碳数烷基)、-NHR⁴、-NR⁴R⁵、-NH(酰基)、-N(低碳数烷基)₂、-NH(烯基)、-NH(炔基)、-NH(芳基烷基)、-NH(环烷基)、-N(酰基)₂、叠氮基、氰基、SCN、OCN、NCO或卤素(氟、氯、溴、碘)；

各个m独立地是0、1或2；

或者，R⁶和R¹⁰、R⁷和R⁹、R⁸和R⁷或R⁹和R¹¹可以一起形成桥联化合物，该化合物选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)；或

或者，R⁶和R⁷或R⁹和R¹⁰可以一起形成螺环化合物，该化合物选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)。

在另一个实施方案中，R¹是：

其中碱基^*是如本文定义的嘌呤或嘧啶碱基；

各个R¹²独立地是取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、取代的烯基、卤代烯基(但不是Br-乙烯基)、取代的炔基、卤代炔基、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、 -CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂；

各个R¹³独立地是取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、取代的烯基、卤代烯基(但不是Br-乙烯基)、取代的炔基、卤代炔基、任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)、任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)、任选被取代的杂芳基(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂芳环)、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)SH、-CH₂C(O)SR⁴、-CH₂C(O)S(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)SH、-(CH₂)_mC(O)SR⁴、-(CH₂)_mC(O)S(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)SH、-C(O)SR⁴、-C(O)S(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂、-O(R⁴)、-O(炔基)、-O(芳基烷基)、-O(环烷基)、-S(酰基)、-S(低碳数酰基)、-S(R⁴)、-S(低碳数烷基)、-S(烯基)、-S(炔基)、-S(芳基烷基)、-S(环烷基)、-NHR⁴、-NR⁴R⁵、-NH(烯基)、-NH(炔基)、-NH(芳基烷基)、-NH(环烷基)、SCN、OCN、NCO或氟；

或者，R¹²和R¹³可以一起形成螺环化合物，该化合物选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)；

R²和R³依照式XII；而且

各个m独立地是0、1或2。

在另一个实施方案中，R是：

其中碱基^*是如本文所述的嘌呤或嘧啶碱基；且

各个R⁸和R¹¹独立地是氢、任选被取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₃、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、任选被取代的烯基、卤代烯基、Br-乙烯基、任选被取代的炔基、卤代炔基、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)O(低碳数烷基)、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂、氰基、NH-酰基或N(酰基)₂；

各个R¹²独立地是取代的烷基(包括低碳数烷基)、CH₂CN、CH₂N₃、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂OH、卤代烷基(包括卤代的低碳数烷基)、CF₃、C(Y³)₃、2-Br-乙基、CH₂F、CH₂Cl、CH₂CF₃、CF₂CF₃、C(Y³)₂C(Y³)₃、取代的烯基、卤代烯基(但不是Br-乙烯基)、取代的炔基、卤代炔基、-CH₂C(O)OH、-CH₂C(O)OR⁴、-CH₂C(O)O(低碳数烷基)、-CH₂C(O)NH₂、-CH₂C(O)NHR⁴、-CH₂C(O)NH(低碳数烷基)、-CH₂C(O)N(R⁴)₂、-CH₂C(O)N(低碳数烷基)₂、-(CH₂)_mC(O)OH、-(CH₂)_mC(O)OR⁴、-(CH₂)_mC(O)O(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)NH₂、-(CH₂)_mC(O)NHR⁴、-(CH₂)_mC(O)NH(低碳数烷基)、-(CH₂)_mC(O)N(R⁴)₂、-(CH₂)_mC(O)N(低碳数烷基)₂、-C(O)OH、-C(O)OR⁴、-C(O)NH₂、-C(O)NHR⁴、-C(O)NH(低碳数烷基)、-C(O)N(R⁴)₂、-C(O)N(低碳数烷基)₂；

各个m独立地是0、1或2；

或者，R⁸和R¹³、R⁹和R¹³、R⁹和R¹¹或R¹⁰和R¹²可以一起形成桥联化合物，该化合物选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)；或

或者，R¹²和R¹³或R⁹和R¹⁰可以一起形成螺环化合物，该化合物选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)。

一方面，R¹是：

B指螺环化合物，其选自任选被取代的碳环(例如3-7元碳环)或任选被取代的杂环(例如具有一个或多个O、S和/或N的3-7元杂环)；

碱基选自：

其中各个R′、R″、R″′和R″″独立地选自H、OH、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、环烷基、Br-乙烯基、-O-烷基、O-烯基、O-炔基、O-芳基、O-芳基烷基、-O-酰基、O-环烷基、NH₂、NH-烷基、N-二烷基、NH-酰基、N-芳基、N-芳基烷基、NH-环烷基、SH、S-烷基、S-酰基、S-芳基、S-环烷基、S-芳基烷基、F、Cl、Br、I、CN、COOH、CONH₂、CO₂-烷基、CONH-烷基、CON-二烷基、OH、CF₃、CH₂OH、(CH₂)_mOH、(CH₂)_mNH₂、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCN、(CH₂)_mNO₂和(CH₂)_mCONH₂；

m是0或1；

各个W独立地是C-R″或N；

T和V独立地是CH或N；

Q是CH、-CCl、-CBr、-CF、-CI、-CCN、-C-COOH、-C-CONH₂或N；

Q₁和Q₂独立地是N或C-R；

Q₃、Q₄、Q₅和Q₆独立地是N或CH；以及

它们的互变异构形式。

另一方面，R¹是：

G和E独立地选自CH₃、CH₂OH、CH₂F、CH₂N₃、CH₂CN、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCOOR、(CH₂)_mCONH₂、(CH₂)_mCONR₂、(CH₂)_mCONHR、N₃和N-酰基；

m是0或1；

R是H、烷基或酰基；而且

碱基如式(XIII)所定义。

在一个实施方案中，G和E中至多一个可以进一步是氢。

在另一个实施方案中，R¹是：

其中M选自O、S、SO和SO₂；且碱基如式(XIII)所定义。

在一些实施方案中，R¹是：

其中A选自任选被取代的低碳数烷基、环烷基、烯基、炔基、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂F、CH₂Cl、CH₂N₃、CH₂CN、CH₂CF₃、CF₃、CF₂CF₃、CH₂CO₂R、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCOOR、(CH₂)_mCONH₂、(CH₂)_mCONR₂和(CH₂)_mCONHR；

Y选自H、任选被取代的低碳数烷基、环烷基、烯基、炔基、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂F、CH₂Cl、CH₂N₃、CH₂CN、CH₂CF₃、CF₃、CF₂CF₃、CH₂CO₂R、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCOOR、(CH₂)_mCONH₂、(CH₂)_mCONR₂和(CH₂)_mCONHR；

X选自H、-OH、任选被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、-O-烷基、-O-烯基、-O-炔基、-O-芳基、-O-芳基烷基、-O-环烷基-、O-酰基、F、Cl、Br、I、CN、NC、SCN、OCN、NCO、NO₂、NH₂、N₃、NH-酰基、NH-烷基、N-二烷基、NH-烯基、NH-炔基、NH-芳基、NH-芳基烷基、NH-环烷基、SH、S-烷基、S-烯基、S-炔基、S-芳基、S-芳基烷基、S-酰基、S-环烷基、CO₂-烷基、CONH-烷基、CON-二烷基、CONH-烯基、CONH-炔基、CONH-芳基烷基、CONH-环烷基、CH₂OH、CH₂NH₂、CH₂NHCH₃、CH₂N(CH₃)₂、CH₂F、CH₂Cl、CH₂N₃、CH₂CN、CH₂CF₃、CF₃、CF₂CF₃、CH₂CO₂R、(CH₂)_mCOOH、(CH₂)_mCOOR、(CH₂)_mCONH₂、(CH₂)_mCONR₂、(CH₂)_mCONHR、任选被取代的3-7元碳环、和独立地具有O、S和/或N单独或联合作为杂环原子的任选被取代的3-7个原子的杂环；

m是0或1；

R是H、烷基或酰基；且碱基是非天然碱基，其选自：

m是0或1；

各个W独立地是C-R″或N；

T和V独立地是CH或N；

Q是CH、-CCl、-CBr、-CF、-CI、-CCN、-C-COOH、-C-CONH₂或N；

Q₁和Q₂独立地是N或C-R″″；且

Q₃、Q₄、Q₅和Q₆独立地是N或CH；

条件是：在碱基(g)和(i)中，R′、R″″不是H、OH或NH₂；且Q、T、V、Q₂、Q₅和Q₆不是N。

在一个实施方案中，R¹是具有任何天然或非天然的嘌呤或嘧啶碱基的1′、2′、3′或4′C-支链-β-D或β-L核苷的2′-(烷基或芳基)酯或3′-(烷基或芳基)酯。在一个实施方案中，R¹是1′、2′、3′或4′C-支链-β-D或β-L核苷的2′或3′-(D或L)-氨基酸酯，其中氨基酸是天然或合成的氨基酸。在另一个实施方案中，R¹是1′、2′、3′或4′C-支链-β-D或β-L核苷的3′-D或L-氨基酸酯，其中氨基酸是天然或合成的氨基酸。在一个实施方案中，氨基酸是L-氨基酸。

在一个实施方案中，氨基酸残基是式

C(O)C(R¹¹)(R¹²)(NR¹³R¹⁴)，

其中R¹¹是氨基酸的侧链，且其中R¹¹可以任选地与R¹³连接形成环结构；或者，R¹¹是烷基、芳基、杂芳基或杂环部分；

R¹²是氢、烷基(包括低碳数烷基)或芳基；且

R¹³和R¹⁴独立地是氢、酰基(包括与R¹¹连接的酰基衍生物)或烷基(包括但不限于甲基、乙基、丙基和环丙基)。

在另一个实施方案中，R²和R³的至少一个是氨基酸残基。在一个实施方案中，R²和R³的至少一个是L-缬氨酸基。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰和碱基^*如式XXX、XXXI、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、R⁶和碱基^*如式XXX、XXXI、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中X¹和X²各自独立地是氢、烷基、卤素或氨基；Y是氢、氨基、氨基烷基、氨基环烷基、烷基、环烷基、羟基、烷氧基、环烷氧基、SH或硫代烷基；X是O或S；而且其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹如式XXX、XXXI、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中X¹是氢、烷基、卤素或氨基；Y是氢、氨基、氨基烷基、氨基环烷基、烷基、环烷基、羟基、烷氧基、环烷氧基、SH或硫代烷基；X是O或S；且其中R⁶、R⁷、R⁸、R⁹如式XXX、XXXI、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³和碱基^*如式XIII、XXX、XXXI、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、Y¹、Y³、X¹和X²如式XIII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、Y¹、Y³、X¹和X²如式XIII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、R⁶、Y和X¹如式XIII、XX、XXI或XXII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R²、R³、R⁶、R⁷、X和碱基^*如式XIII、XX、XXI、XXII、XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R¹是：

其中R⁸是烷基、烯基或炔基；R⁷是OR^7a；

R⁹是OR^7a；

R^7a是H或

R^m是任何天然或非天然氨基酸的侧链；且

R^p是氢、羟基、烷基或烷氧基；且

碱基^*如式XL、XLI或XLII中所定义。

在一个实施方案中，R⁸是甲基、乙基、乙烯基或乙炔基；R⁷是羟基或氟；R⁹是羟基，且其它变量如本文所述。

在一个实施方案中，R¹是：

在一个实施方案中，R⁸是甲基或乙基。在一个实施方案中，R^7a是H或

在一个实施方案中，本文提供的氨基磷酸酯化合物是：

或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

在一个实施方案中，本文提供的氨基磷酸酯化合物是：

在一个实施方案中，本文提供的膦酰胺化合物是PMPA或PMEA的膦酰胺形式，例如：

光学活性化合物

已经认识到本文提供的化合物具有数个手性中心，且可以以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可表现为多晶型。可以理解，具有本文描述的有用性质的本文提供的化合物的任何外消旋、光学活性、非对映异构、多晶型或立体异构形式或它们的混合物均包含在本发明的范围内。如何制备光学活性形式是本领域熟知的(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过使用光学活性起始材料合成、通过手性合成、或通过使用手性固定相进行色谱分离)。

特别地，因为核苷的1′和4′碳是手性的，它们的非氢取代基(分别是碱基和CHOR基团)就糖环体系而言可以是顺式(在同侧)或反式(在对侧)的。因此，四种光学异构体通过以下构型表示(当将糖部分定位在水平面使得氧原子位于背面时)：顺式(两个基团都“朝上”，这对应于天然存在的β-D核苷的构型)、顺式(两个基团都“朝下”，这是非天然存在的β-L构型)、反式(C2′取代基“朝上”，而C4′取代基“朝下”)、和反式(C2′取代基“朝下”，而C4′取代基“朝上”)。“D-核苷”在天然构型中是顺式核苷，而“L-核苷”在非天然构型中是顺式核苷。

同样地，大部分氨基酸是手性的(表示为L或D，其中L对映异构体是天然存在的构型)，且可以作为独立的对映异构体存在。

获得光学活性材料的方法的例子是本领域中已知的，而且包括至少以下方法：

i)晶体的物理分离——通过该技术，各对映异构体的肉眼可见的晶体被人工分离。如果单独的对映异构体的晶体存在，即该材料是聚集物且晶体在视觉上有区别，则可以使用该技术；

ii)同时结晶——通过该技术，从外消旋物的溶液中分别结晶各对映异构体，仅仅当外消旋物在固态为聚集物时是可能的；

iii)酶法拆分——通过该技术，基于对映异构体与酶反应的速率不同，部分或完全分离外消旋物；

iv)酶法不对称合成——通过该合成技术，合成的至少一个步骤使用酶反应，以获得所需对映异构体的对映异构纯或富集的合成前体；

v)化学不对称合成——通过该合成技术，在于产物中产生不对称性(即手性)的条件下，从手性前体合成所需对映异构体，所述条件可通过使用手性催化剂或手性助剂来实现；

vi)非对映异构体分离——通过该技术，外消旋化合物与对映异构体纯试剂(手性助剂)反应，该试剂将独立的对映异构体转化成非对映异构体。然后基于此时非对映异构体更加显著的结构差异，通过色谱或结晶将生成的非对映异构体分离，之后去除手性助剂以获得所需对映异构体；

vii)一级-和二级-不对称转化——通过该技术，来自外消旋体的非对映异构体平衡以在溶液中产生非对映异构体相对于所需的对映异构体的优势，或非对映异构体从所需对映异构体中优先结晶，扰乱了平衡，最终使得原则上所有材料由所需的对映异构体转化成结晶的非对映异构体。然后从非对映异构体中释放所需的对映异构体；

viii)动力学拆分——该技术指在动力学条件下，由于对映异构体与手性的非外消旋试剂或催化剂的不等反应速率，实现外消旋物的部分或完全拆分(或者部分拆分的化合物进一步拆分)；

ix)从非外消旋前体的对映特定合成——通过该合成技术，从非手性的起始材料获得所需的对映异构体，且在合成过程中立体化学完整性没有或仅仅最低限度被损害；

x)手性液相色谱——通过该技术，外消旋物的对映异构体基于它们与固定相的不同相互作用在液态流动相中分离。固定相可以由手性材料制造，或流动相可以包含额外的手性材料以激发不同的相互作用；

xi)手性气相色谱——通过该技术，外消旋物挥发且对映异构体基于它们在气态流动相中与包含固定的非外消旋的手性吸附相的柱的不同相互作用而分离；

xii)用手性溶剂萃取——通过该技术，基于一种对映异构体在特定手性溶剂中的优先溶解而分离对映异构体；

xiii)透过手性膜转移——通过该技术，外消旋体处于与薄膜障碍的接触中。该障碍通常分离两种易混合的液体，其中一种包含外消旋体，驱动力例如浓度或压力差引起透过膜障碍的优先运输。分离作为膜的非外消旋手性性质的结果发生，该膜仅允许外消旋体的一种对映异构体通过。

在一些实施方案中，提供膦酰胺或氨基磷酸酯化合物的组合物，它们基本不含该核苷的指定对映异构体。在优选实施方案中，在本发明的方法和化合物中，该化合物基本不含对映异构体。在一些实施方案中，该组合物包含至少85、90％、95％、98％、99％到100％重量的所述化合物，剩下部分包含其它化学种类或对映异构体。

化合物的制备

本文提供的化合物可以通过对本领域技术人员而言显而易见的任何方法制备、分离或获得。示例性的制备方法在下面的实施例中详细说明。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可以通过将醇和H-膦酸单酯如下面的反应方案所示进行偶联来制备：

方案A

R^y、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰上或碱基上的任何反应活性功能都可以在偶联反应期间被保护。可以使用本领域技术人员已知的各种偶联剂。用于反应的示例性的偶联剂包括但不限于HOBt(N-羟基苯并三唑)、HBTU(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基铵六氟磷酸盐)、DCC(N，N′-二环已基碳化二亚胺)、BOP(苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-膦六氟磷酸盐)、PyBOP(1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基膦六氟磷酸酯)和本领域技术人员已知的其它偶联剂。

合成用B代表的羟基tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯核苷衍生物的一般方案在以下方案B1-B3中提供。

其中在为反应活性胺的情况下R＝H、Tr、MMTr或DMTr；R¹、R²、R⁴、R⁶＝H、烷基或卤素，且R³/R⁵都是H或异亚丙基。

方案B1：H-膦酸单酯试剂的合成

方案B2：被保护的核苷的合成(R＝DMTr和/或R³/R⁵＝异亚丙基)

方案B3：(未)被保护的核苷与试剂5的偶联、氧化氨化和去保护步骤

另外，一些核苷及其类似物以及它的前药，可以依照以下文献中说明的方法进行：美国专利号6,812,219；7,105,493；7,101,861；6,914,054；6,555,676；7,202,224；7,105,499；6,777,395；6,914,054；7,192,936；美国公开号2005203243；2007087960；2007060541；2007060505；2007060504；2007060503；2007060498；2007042991；2007042990；2007042940；2007042939和2007037735；国际公开号WO 04/003000；WO 04/022999；WO 04/002422；WO 01/90121和WO01/92282。公开了可以被如本文所述衍生的治疗丙肝病毒的核苷类似物的其它专利/专利申请，包括：BioChem Pharma公司(现在叫Shire Biochem公司)提交的PCT/CA00/01316(WO 01/32153；2000年11月3日提交)和PCT/CA01/00197(WO 01/60315；2001年2月19日提交)；Merck公司的PCT/US02/01531(WO 02/057425；2002年1月18日提交)；PCT/US02/03086(WO02/057287；2002年1月18日提交)；US7,202,224；7,125,855；7,105,499和6,777,395；Roche的PCT/EP01/09633(WO 02/18404；2001年8月21日公开)；US2006/0040890；2005/0038240；2004/0121980；6,846,810；6,784,166和6,660,721；Pharmasset有限公司的PCT公开号WO 01/79246(2001年4月13日提交)、WO 02/32920(2001年10月18日提交)和WO 02/48165；US2005/0009737和US2005/0009737；7,094,770和6,927,291。这些文献的内容通过引用被完整并入本文。

测试方法

可以根据本领域技术人员已知的任何测试测试化合物的HBV活性。可以根据本领域技术人员已知的任何测试测试化合物的HCV活性。

此外，可以根据本领域技术人员已知的任何测试测试化合物在个体的肝细胞中的积累。在一些实施方案中，可以对个体施用化合物，并可以对个体的肝细胞测试化合物或其衍生物，例如其核苷、磷酸核苷或三磷酸核苷衍生物。

在一个实施方案中，对细胞例如肝细胞在体内或体外施用氨基磷酸酯或膦酰胺核苷化合物，并测量细胞内递送的三磷酸核苷水平，以显示化合物的递送和在细胞中的三磷酸化。细胞内三磷酸核苷的水平可以使用本领域已知的分析技术测量。检测ddATP的方法在本文下面举例说明，但其它三磷酸核苷可以使用适当的对照、校准样品和测试技术容易地检测。

在一个实施方案中，通过与由对照样品制成的校准标准比较，测量样品中的ddATP浓度。样品中的ddATP浓度可以使用分析方法例如HPLC LC MS测量。在一个实施方案中，将测试样品与用已知浓度的ddATP创建的校准曲线比较，由此获得该样品的浓度。

在一个实施方案中，在分析前处理样品以去除杂质例如盐(Na⁺、K⁺等)。在一个实施方案中，对于肝细胞提取物的量的下限是大约～0.2pmol/mL，特别是在减少的盐存在时。

在一个实施方案中，在例如培养的肝细胞和HepG2细胞中，方法允许在每百万个细胞1-10,000pmol水平成功地测量形成的三磷酸核苷酸。

使用方法

各种治疗剂的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物，可以使用本领域可得到的和本文公开的方法形成。这些化合物可以用于一些实施方案以提高药物对肝脏的递送。

在一个实施方案中，化合物包括S-酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-酰基-2-硫代乙基膦酰胺，例如，S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物。可以被衍生为氨基磷酸酯或膦酰胺化合物形式的治疗剂包括任何抗病毒剂，它包含或已被衍生而包含供氨基磷酸酯或膦酰胺部分连接的反应性基团，所述抗病毒剂包括但不限于核苷和核苷类似物包括无环核苷。

有利地，这样的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物可以有利地提高对肝脏的递送。在一些实施方案中，该化合物允许核苷的活性5′-单磷酸盐对肝脏的递送，这可以提高活性三磷酸化的化合物的形成。

在一个实施方案中，本文提供了治疗和/或预防感染了黄病毒科的宿主的方法，该方法包括施用有效量的本文提供的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，本文提供了治疗个体中HCV感染的方法。在一些实施方案中，该方法包含对有此需要的个体联合施用有效治疗或预防HCV感染的量的化合物和有效治疗或预防该感染的第二药剂的步骤。该化合物可以是本文所述的任何化合物，且第二药剂可以是本领域或本文所述的任何第二药剂。在一些实施方案中，化合物是以上章节所述的药物组合物或剂型形式。

可以被治疗的黄病毒科在Fields Virology，编辑：Fields，B.N.、Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，PA，第31章，1996中一般性地论述。在本发明的具体实施方案中，黄病毒科是HCV。在本发明的可选实施方案中，黄病毒科是黄病毒或瘟病毒。具体的黄病毒包括但不限于：阿布塞塔罗夫(Absettarov)、阿尔弗(Alfuy)、Apoi、Aroa、Bagaza、Banzi、Bouboui、布苏夸拉(Bussuquara)、Cacipacore、卡勒岛(Carey Island)、达喀尔蝙蝠(Dakar bat)、登革热1、登革热2、登革热3、登革热4、边山(EdgeHill)、恩德比蝙蝠(Entebbe bat)、Gadgets Gully、Hanzalova、Hypr、伊列乌斯(Ilheus)、以色列火鸡脑膜脑炎、日本脑炎、Jugra、胡蒂亚帕(Jutiapa)、Kadam、Karshi、Kedougou、科科贝拉(Kokobera)、Koutango、Kumlinge、昆津(Kunjun)、夸赛纳(Kyasanur)森林病、兰加特(Langat)、跳跃病、Meaban、莫多克(Modoc)、蒙大纳鼠耳蝠脑白质炎、墨累谷脑炎、Naranjal、根岸(Negishi)、Ntaya、鄂木斯克出血热、金边蝙蝠、波瓦森(Powassan)、布拉沃(Rio Bravo)、罗西奥(Rocio)、皇家农庄(Royal Farm)、俄罗斯春夏脑炎、Saboya、圣路易斯脑炎、Sal Vieja、San Perlita、Saumarez Reef、塞皮克(Sepik)、Sokuluk、Spondweni、Stratford、Tembusu、Tyuleniy、乌干达S、乌苏土(Usutu)、韦塞尔斯布朗(Wesselsborn)、西尼罗、雅温得(Yaounde)、黄热病、和Zika。

可以被治疗的瘟病毒在Fields Virology，编辑：Fields，B.N.、Knipe，D.M.和Howley，P.M.，Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia，PA，第33章，1996中一般性地论述。具体的瘟病毒包括但不限于：牛病毒性腹泻病毒(“BVDV”)、典型性猪瘟病毒(“CSFV”，也叫做猪霍乱病毒)、和边界病病毒(“BDV”)。

在一些实施方案中，本文提供了治疗和/或预防乙肝感染的方法，该方法包括施用有效量的如本文所述的化合物，例如式I、IIa或IIb的化合物，其药学上可接受的盐或组合物。在另一个实施方案中，提供了治疗和/或预防乙肝感染相关病况的方法，例如抗HBV抗体阳性和HBV阳性状况、HBV引起的慢性肝脏炎症、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎和疲劳。

在一些实施方案中，本文提供了预防或延迟个体中临床疾病的进展的预防方法，所述个体是抗HBV抗体或HBV抗原阳性或者曾经暴露于HBV。

在一些实施方案中，个体可以是感染了HCV和/或HBV或者有感染HCV和/或HBV风险的个体。感染或有感染风险可以依照本领域专业技术人员认为合适的任何技术来确定。在一个实施方案中，个体是感染了HCV和/或HBV的人。

在一些实施方案中，个体从未接受对HCV和/或HBV感染的治疗或预防。在进一步的实施方案中，个体以前接受了对HCV和/或HBV感染的治疗或预防。例如，在一些实施方案中，个体对HCV和/或HBV治疗无应答。例如，在当前的干扰素治疗下，多达50％或更多的HCV个体对治疗无应答。在一些实施方案中，个体可以是接受了治疗但继续承受病毒感染或其一种或多种症状的个体。在一些实施方案中，个体可以是接受了治疗但未能实现持续的病毒学应答的个体。在一些实施方案中，个体已经接受了对HCV和/或HBV感染的治疗，但治疗12星期后未能显示例如HCV RNA浓度的2 log₁₀下降。相信在治疗12星期后血清HCV RNA没有显示超过2 log₁₀减少的个体有97-100％的机会无应答。

在一些实施方案中，个体是因为与治疗相关的一种或多种不良事件而中断了HCV和/或HBV治疗的个体。在一些实施方案中，个体是当前治疗对其不适用的个体。例如，某些对HCV的治疗与神经精神病学事件相关。干扰素(IFN)-α+利巴韦林与高比例的抑郁相关。抑郁症状在许多医学病症中与更糟的结果相连。有生命威胁或致命性的神经精神病学事件包括自杀、自杀和杀人意念、抑郁、药瘾/过量用药的复发、和攻击行为，在HCV治疗期间在先前患有和不曾患有精神病学病症的个体中发生。干扰素诱导的抑郁是对慢性丙肝治疗的限制，特别是对患有精神病学病症的个体。精神病学副作用对干扰素治疗是常见的，而且是大约10％到20％的对HCV感染的当前治疗中断的原因。

因此，提供了在神经精神病学事件例如抑郁的风险禁忌使用当前HCV疗法治疗时治疗或预防个体中HCV感染的方法。在一个实施方案中，提供了在神经精神病学事件例如抑郁或此类风险需要中断当前HCV疗法治疗时治疗或预防个体中HCV感染的方法。进一步提供了在神经精神病学事件例如抑郁或此类风险需要当前HCV疗法降低剂量时治疗或预防个体中HCV感染的方法。

在对干扰素或利巴韦林或两者或用于施用干扰素或利巴韦林的药物产品的任何其它成分过敏的个体中，当前治疗也是禁忌的。当前治疗不适用于患有血红蛋白病(例如重型地中海贫血、镰状细胞性贫血)的个体和有当前治疗的血液病学副作用风险的其它个体。常见的血液病学副作用包括骨髓抑制、嗜中性白血球减少症和血小板减少症。此外，利巴韦林对血红细胞是有毒的，而且与溶血相关。因此，在一个实施方案中，提供了在对干扰素或利巴韦林或两者过敏的个体、患有血红蛋白病的个体例如重型地中海贫血个体和镰状细胞性贫血个体、以及有当前治疗的血液病学副作用风险的其它个体中，治疗或预防HCV感染的方法。

在一些实施方案中，个体已经接受了HCV和/或HBV治疗，而且在施用本文提供的方法前中断了所述治疗。在进一步的实施方案中，个体已经接受了治疗且持续接受所述治疗并同时施用本文提供的方法。所述方法可以根据本领域技术人员的判断，与针对HBC和/或HCV的其它治疗联合施用。在一些实施方案中，本文提供的方法或组合物可以与减少剂量的用于HBC和/或HCV的其它治疗联合施用。

在一些实施方案中，提供了对干扰素治疗难治性的个体的治疗方法。例如，在一些实施方案中，个体可以是未能对一种或多种药剂的治疗应答的个体，所述药剂选自干扰素、干扰素α、聚乙二醇干扰素α、干扰素+利巴韦林、干扰素α+利巴韦林、和聚乙二醇干扰素α+利巴韦林。在一些实施方案中，个体可以是对一种或多种药剂的治疗应答不良的个体，所述药剂选自干扰素、干扰素α、聚乙二醇干扰素α、干扰素+利巴韦林、干扰素α+利巴韦林、和聚乙二醇干扰素α+利巴韦林。也可以使用利巴韦林的前药形式例如他立韦林。

在一些实施方案中，个体已经联合感染了HCV和HIV，或具有这种风险。例如，在美国，30％的HIV个体同时感染了HCV，而且证据表明，感染了HIV的人的丙肝感染进程更快。Maier和Wu，2002，World J Gastroenterol 8：577-57。本文提供的方法可以用来治疗或预防这些个体中的HCV感染。相信这些个体中HCV的消除将降低末期肝脏疾病的死亡率。事实上，在患有严重AIDS限定的免疫缺陷的个体中，进行性肝脏疾病的风险比未患有该疾病的个体更高。参见，例如，Lesens等，1999，J Infect Dis 179：1254-1258。在一个实施方案中，本文提供的化合物在HIV个体中已经显示抑制HIV。因此，在一些实施方案中，提供了在有此需要的个体中治疗或预防HIV感染和HCV感染的方法。

在一些实施方案中，在肝脏移植后对个体施用所述化合物或组合物。在美国，丙肝是肝脏移植的首要原因，而且许多经历了肝脏移植的个体在移植后仍然是HCV阳性的。在一个实施方案中，提供了用本文提供的化合物或组合物治疗这样的复发性HCV个体的方法。在一些实施方案中，提供了在肝脏移植之前、期间或之后治疗个体以预防复发性HCV感染的方法。

在一些实施方案中，本文提供了治疗和/或预防乙肝感染和其它相关状况的方法，所述状况例如抗HBV抗体阳性和HBV阳性状况、HBV引起的慢性肝脏炎症、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎、和疲劳，所述方法包括施用有效量的本文提供的化合物或组合物。

在一个实施方案中，本文提供了治疗和/或预防乙肝感染和其它相关状况的方法，所述状况例如抗HBV抗体阳性和HBV阳性状况、HBV引起的慢性肝脏炎症、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持续性肝炎、和疲劳，所述方法包括施用有效量的本文提供的化合物或组合物。

第二治疗剂

在一些实施方案中，本文提供的化合物和组合物可用于治疗肝脏病症的方法，所述方法包含在有此需要的个体中进一步施用对治疗病症例如HCV和/或HBV感染有效的第二药剂。第二药剂可以是本领域技术人员已知的对治疗病症有效的任何药剂，包括FDA目前批准的那些。

在一些实施方案中，本文提供的化合物与一种第二药剂联合施用。在进一步的实施方案中，第二药剂是与两种第二药剂联合施用。在更进一步的实施方案中，第二药剂是与两种或更多种第二药剂联合施用。

本文使用的术语“联合”包括超过一种治疗(例如一种或多种预防和/或治疗剂)的使用。术语“联合”的使用不限制对患有病症的个体施用治疗(例如预防和/或治疗剂)的顺序。可在向患有病症的个体施用第二治疗之前(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期或12星期之前)、同时、或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期或12星期之后)施用第一治疗(例如，预防或治疗剂例如本文提供的化合物)。

本文使用的术语“协同”包括本文提供的化合物与已经或目前正在被用来预防、控制或治疗病症的另一种治疗(例如预防或治疗剂)的组合，所述组合比治疗的累加效应更有效。治疗的组合(例如预防或治疗剂的组合)的协同效应允许对患有病症的个体使用更低剂量的一种或多种治疗和/或更低频率地施用所述治疗。使用更低剂量的治疗(例如预防或治疗剂)和/或更低频率施用所述治疗的能力，降低了对个体施用所述治疗相关的毒性，而没有降低所述治疗在病症的预防或治疗中的功效。另外，协同效应可以在病症的预防或治疗中引起药剂功效的改善。最后，治疗的组合(例如预防或治疗剂的组合)的协同效应可以避免或降低单独使用任何一种治疗时相关的不良作用或不想要的副作用。

本文提供的活性化合物可以与另一种治疗剂联合或交替施用，特别是抗HCV或乙肝药剂。在联合治疗中，两种或更多种药剂的有效剂量被一起施用，尽管在交替或有序分步治疗中，各种药剂的有效剂量被连续或依序施用。施用的剂量将取决于药物的吸收、失活和排泄速率，以及本领域技术人员已知的其它因素。应当注意到，剂量值也将随着待被减轻的状况的严重程度而变化。应当进一步理解，对于任何特定的个体，具体剂量方案和时间表应当依照个人需要和施用或监督施用组合物的人的专业判断随时间而调节。在一些实施方案中，希望抗HCV(或抗瘟病毒属或抗黄病毒属)化合物显示的EC₅₀值是10-15μM，或优选地小于1-5μM。

已经认识到，黄病毒、瘟病毒或HCV的耐药变种可以在长时间用抗病毒剂治疗后出现。药物抗性最常通过编码在病毒复制中使用的酶的基因突变而发生。通过与第二和或许第三抗病毒化合物联合或交替施用化合物，药物对于病毒感染的功效可以被延长、提高或恢复，所述抗病毒化合物诱导与主药引起突变所不同的突变。或者，药物的药物动力学、生物分布或其它参数可以通过这样的联合或交替治疗而改变。一般来说，联合治疗和交替治疗相比通常是优选的，因为它诱导了对病毒的同时的多重压力。

在本发明的背景技术中所描述的任何病毒治疗都可以与本说明书中描述的化合物联合或交替使用。第二药剂的非限制性例子包括：

HCV蛋白酶抑制剂：例子包括Medivir HCV蛋白酶抑制剂(Medivir/Tobotec)；ITMN-191(InterMune)、SCH 503034(Schering)和VX950(Vertex)。蛋白酶抑制剂的进一步例子包括基于底物的NS3蛋白酶抑制剂(Attwood等，Antiviral peptide derivatives，PCT WO 98/22496，1998；Attwood等，AntiviralChemistry and Chemotherapy 1999，10，259-273；Attwood等，Preparation anduse of amino acid derivatives as anti-viral agents，德国专利公开DE 19914474；Tung等Inhibitors of serine proteases，particularly hepatitis C virus NS3 protease，PCT WO 98/17679)，包括α酮酰胺和肼基脲，和在亲电试剂例如硼酸或膦酸盐中终止的抑制剂(Llinas-Brunet等，Hepatitis C inhibitor peptide analogues，PCTWO 99/07734)；不基于底物的NS3蛋白酶抑制剂例如2，4，6-三羟基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等，Biochemical and Biophysical ResearchCommunications，1997，238，643-647；Sudo K.等Antiviral Chemistry andChemotherapy，1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前一个在酰胺上有14碳的碳链取代，而后一个处理了对苯氧基苯基；以及Sch 68631，菲醌，HCV蛋白酶抑制剂(Chu M.等，Tetrahedron Letters 37：7229-7232，1996)。

从真菌灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)中分离的SCH 351633被认为是蛋白酶抑制剂(Chu M.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9：1949-1952)。从水蛭中分离的Eglin c是数种丝氨酸蛋白酶的强效抑制剂，例如S.griseus蛋白酶A和B、α-糜蛋白酶、糜酶和枯草杆菌蛋白酶。Qasim M.A.等，Biochemistry36：1598-1607，1997。

公开了用于治疗HCV的蛋白酶抑制剂的美国专利，包括例如Spruce等的美国专利号6,004,933，其公开了一类抑制HCV肽链内切酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制剂；Zhang等的美国专利号5,990,276，其公开了丙肝病毒NS3蛋白酶的合成抑制剂；Reyes等的美国专利号5,538,865；Corvas International公司的WO 02/008251，和Schering公司的US7,169,760、US2005/176648、WO 02/08187和WO 02/008256。HCV抑制剂三肽在Boehringer Ingelheim的美国专利号6,534,523、6,410,531和6,420,380，以及Bristol Myers Squibb的WO 02/060926中公开。作为HCV的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的二芳基肽，在Schering公司的WO 02/48172和US 6,911,428中公开。作为HCV的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的咪唑烷酮在Schering公司的WO 02/08198和US 6,838,475，以及Bristol Myers Squibb的WO 02/48157和US 6,727,366中公开。VertexPharmaceuticals的WO 98/17679和US 6,265,380，以及Bristol Myers Squibb的WO 02/48116和US 6,653,295也公开了HCV蛋白酶抑制剂。HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂的进一步例子在US 6,872,805(Bristol-Myers Squibb)；WO2006000085(Boehringer Ingelheim)；US 7,208,600(Vertex)；US 2006/0046956(Schering-Plough)；WO 2007/001406(Chiron)；US 2005/0153877；WO2006/119061(Merck)；WO 00/09543(Boehringer Ingelheim)，US 6,323,180(Boehringer Ingelheim)，WO 03/064456(Boehringer Ingelheim)，US 6,642,204(Boehringer Ingelheim)，WO 03/064416(Boehringer Ingelheim)，US 7,091,184(Boehringer Ingelheim)，WO 03/053349(Bristol-Myers Squibb)，US 6,867,185，WO 03/099316(Bristol-Myers Squibb)，US 6,869,964，WO 03/099274(Bristol-Myers Squibb)，US 6,995,174，WO 2004/032827(Bristol-Myers Squibb)，US7,041,698，WO 2004/043339和US 6,878,722(Bristol-Myers Squibb)中提供。

在拥有NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC测试中显示出相关抑制的噻唑烷衍生物(Sudo K.等，Antiviral Research，1996，32，9-18)，特别是化合物RD-1-6250，具有被长烷基链取代的稠合肉桂酰基部分，RD4 6205和RD4 6193；

在Kakiuchi N.等J.EBS Letters 421，217-220；Takeshita N.等AnalyticalBiochemistry，1997，247，242-246中确认的噻唑烷和苯甲酰苯胺；

在SDS-PAGE和放射自显影测试中具有针对蛋白酶的活性的菲醌，该菲醌从链霉菌属SCH 68631种(Chu M.等，Tetrahedron Letters，1996，37，7229-7232)和从真菌灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)中分离的SCH 351633种的发酵液体培养基中分离，其在亲近闪烁检测中显示活性(Chu M.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9，1949-1952)；

解螺旋酶抑制剂(Diana G.D.等，Compounds，compositions and methods fortreatment of hepatitis C，美国专利号5,633,358；Diana G.D.等，Piperidinederivatives，pharmaceutical compositions thereof and their use in the treatment ofhepatitis C，PCT WO 97/36554)；

核苷酸聚合酶抑制剂和胶霉毒素(Ferrari R.等Journal of Virology，1999，73，1649-1654)，以及天然产物浅蓝菌素(Lohmann V.等，Virology，1998，249，108-118)；

基于干扰RNA(iRNA)的抗病毒药，包括基于短干扰RNA(siRNA)的抗病毒药，例如Sirna-034和国际专利公开号WO/03/070750和WO 2005/012525，以及美国专利公开号US 2004/0209831中描述的其它抗病毒药。

反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸(S-ODN)，它与病毒的5′非编码区(NCR)中的序列片段互补(Alt M.等，Hepatology，1995，22，707-717)，或与包含NCR的3′端的核苷酸326-348以及位于HCV RNA的核心编码区的核苷酸371-388互补(Alt M.等，Archives of Virology，1997，142，589-599；Galderisi U.等，Journal of Cellular Physiology，1999，181，251-257)；

IRES依赖性翻译的抑制剂(Ikeda N等，Agent for the prevention andtreatment of hepatitis C，日本专利公开JP-08268890；Kai Y.等Prevention andtreatment of viral diseases，日本专利公开JP-10101591)；

核酶，例如核酸酶抗性核酶(Maccjak，D.J.等，Hepatology 1999，30，摘要995)以及Barber等的美国专利号6,043,077和Draper等的美国专利号5,869,253和5,610,054中公开的核酶；以及

核苷类似物也已经被开发用于治疗黄病毒科感染。

在一些实施方案中，本文提供的化合物可以与Idenix Pharmaceuticals在国际公开号WO 01/90121、WO 01/92282、WO 2004/003000、2004/002422和WO 2004/002999中描述的任何化合物联合施用。

公开了可以用作第二药剂以治疗丙肝病毒的某些核苷类似物的用途的其它专利申请包括：BioChem Pharma公司(现在叫Shire Biochem公司)提交的PCT/CA00/01316(WO 01/32153；2000年11月3日提交)和PCT/CA01/00197(WO 01/60315；2001年2月19日提交)；PCT/US02/01531(WO 02/057425；2002年1月18日提交)；PCT/US02/03086(WO 02/057287；2002年1月18日提交)；Merck公司的US 7,202,224；7,125,855；7,105,499和6,777,395；PCT/EP01/09633(WO 02/18404；2001年8月21日公开)；Roche的US2006/0040890；2005/0038240；2004/0121980；6,846,810；6,784,166和6,660,721；PCT公开号WO 01/79246(2001年4月13日提交)，WO 02/32920(2001年10月18日提交)和WO 02/48165；US 2005/0009737；Pharmasset有限公司的US2005/0009737；7,094,770和6,927,291。

可以用作第二药剂以治疗丙肝病毒的进一步的化合物在Emory大学的PCT公开号WO 99/43691，题为“2′-Fluoronucleosides”中公开。一些2′-氟核苷治疗HCV的用途被公开。

可以用作第二药剂的其它各种化合物包括1-氨基-烷基环己烷(Gold等的美国专利号6,034,134)、烷基脂类(Chojkier等的美国专利号5,922,757)、维生素E和其它抗氧化剂(Chojkier等的美国专利号5,922,757)、鲨烯、金刚烷胺、胆汁酸(Ozeki等的美国专利号5,846,964)、N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸(Diana等的美国专利号5,830,905)、苯二甲酰胺(Diana等的美国专利号5,633,388)、多聚腺苷酸衍生物(Wang等的美国专利号5,496,546)、2′，3′-二脱氧肌苷(Yarchoan等的美国专利号5,026,687)、苯并咪唑(Colacino等的美国专利号5,891,874)、植物提取物(Tsai等的美国专利号5,837,257、Omer等的美国专利号5,725,859、和美国专利号6,056,961)、和哌啶(Diana等的美国专利号5,830,905)。

治疗HCV的示例性第二药剂

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒干扰素联合或交替施用，所述干扰素例如(干扰素α-2b)和派罗(聚乙二醇干扰素α-2a)；Roferon(重组干扰素α-2a)、干复(复合干扰素；干扰素alfacon-1)、聚乙二醇-(聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗(聚乙二醇干扰素α-2a)。

在一个实施方案中，抗丙肝病毒干扰素是干复津、IL-29(聚乙二醇干扰素λ)、R7025(Maxy-α)、Belerofon、口服干扰素α、BLX-883(Locteron)、ω干扰素、multiferon、水母干扰素、Albuferon或

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒聚合酶抑制剂联合或交替施用，例如利巴韦林、viramidine、NM283(valopicitabine)、PSI-6130、R1626、HCV-796或R7128。

在一些实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与利巴韦林和抗丙肝病毒干扰素联合施用，例如(干扰素α-2b)和派罗(聚乙二醇干扰素α-2a)；Roferon(重组干扰素α-2a)、干复(复合干扰素；干扰素alfacon-1)、聚乙二醇-(聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗(聚乙二醇干扰素α-2a)。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒蛋白酶抑制剂联合或交替施用，所述蛋白酶抑制剂例如ITMN-191、SCH 503034、VX950(telaprevir)或Medivir HCV蛋白酶抑制剂。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒疫苗联合或交替施用，所述疫苗例如TG4040、PeviPROTM、CGI-5005、HCV/MF59、GV1001、IC41或INNO0101(E1)。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒单克隆抗体联合或交替施用，例如AB68或XTL-6865(以前的HepX-C)；或者与抗丙肝病毒多克隆抗体例如cicavir联合或交替施用。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒免疫调节剂联合或交替施用，例如日达(胸腺法新)、NOV-205或Oglufanide。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与多吉美、多柔比星、PI-88、金刚烷胺、JBK-122、VGX-410C、MX-3253(Ceglosivir)、Suvus(BIVN-401或virostat)、PF-03491390(以前的IDN-6556)、G126270、UT-231B、DEBIO-025、EMZ702、ACH-0137171、MitoQ、ANA975、AVI-4065、Bavituxinab(Tarvacin)、Alinia(硝唑尼特)或PYN17联合或交替施用。

治疗HBV的示例性第二药剂

已经认识到，用抗病毒剂长时间治疗后，可能出现HBV的耐药变种。药物抗性最常通过编码病毒生命周期中使用的酶的基因突变而发生，就HBV而言，最常为DNA聚合酶。通过与第二和或许第三抗病毒化合物联合或交替施用化合物，可以延长、提高或恢复药物对HBV感染的功效，所述抗病毒化合物诱导与主药引起的突变所不同的突变。或者，药物动力学、生物分布或药物的其它参数可以通过这样的联合或交替治疗而改变。一般来说，联合治疗相比于交替治疗通常是优选的，因为它诱导了对病毒同时的多重压力。

通过联合或交替施用一种或多种这些进一步的药剂，本文提供的化合物的抗乙肝病毒活性可以被提高。或者，例如，本文提供的一种或多种化合物可以与任何其它已知的抗乙肝病毒药剂联合或交替施用。这样的药剂包括抗乙肝病毒干扰素，例如Intron(干扰素α-2b)和派罗(聚乙二醇干扰素α-2a)；聚合酶抑制剂，例如益平维-HBV(拉米夫定)、肝适能(阿德福韦酯)、博路定(恩替卡韦)、替泽卡(替比夫定)、恩曲他滨(FTC)、克拉夫定(L-FMAU)、Viread(替诺福韦)、伐托他滨、氨多索韦、ANA 380、帕拉德福韦(瑞莫夫韦)和RCV(racivir)；疫苗，例如Hi-8 HBV、HepaVaxxB和HBV核心抗原疫苗；和其它药剂，例如HepX、SpecifEx-HepB、日达仙、EHT899、Bay 41-4109、UT 231-B、HepeX-B和NOV-205或在2.2.15细胞中显示的EC₅₀值小于15微摩尔的其它任何化合物；或它们的前药或药学上可接受的盐。在美国申请公开号20050080034和国际公开号WO 2004/096286中提供了抗HBV药剂的其它一些例子，它们通过引用被完整并入本文。

在一个实施方案中，本文提供的一种或多种化合物可以与抗乙肝病毒药剂联合或交替施用，例如干扰素α-2b、聚乙二醇干扰素α-2a、拉米夫定、肝适能、博路定、替比夫定、恩曲他滨、克拉夫定、替诺福韦、伐托他滨、氨多索韦、ANA 380、瑞莫夫韦、racivir、alinia、Hi-8 HBV和HepaVaxx B。

在另一个实施方案中，本文提供的化合物与病毒复制的免疫调节剂或其它药学上的活性调节剂联合或交替施用，包括生物材料例如蛋白、肽、寡核苷酸、或γ球蛋白，包括但不限于干扰素、白细胞介素、或表达或调节乙肝复制的基因的反义寡核苷酸。

可以使用为患者提供治疗的任何交替方法。交替模式的非限制性实施例包括施用有效量的一种药剂1-6星期，接着施用有效量的第二种抗HBV药剂1-6星期。交替时间表可以包含无治疗的时期。联合治疗通常包括同时施用有效比率的两种或多种抗HBV药剂剂量。

根据HBV经常在抗HIV抗体或HIV抗原也为阳性的患者或曾经暴露于HIV的患者中被发现的事实，所以本文公开的活性抗HBV化合物或它们的衍生物或前药可以在适当的情况下与抗HIV药物联合或交替施用。

本文提供的化合物也可以与抗生素、其它抗病毒化合物、抗真菌剂、或为治疗次级感染施用的其它药剂联合施用。

药物组合物和施用方法

可以使用本领域中可获得的方法和本文公开的方法将各种治疗剂的氨基磷酸酯和膦酰胺化合物配制成药物组合物。这样的化合物可以被用在一些实施方案中以提高药物对肝脏的递送。在一个实施方案中，该化合物包括S-酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-酰基-2-硫代乙基膦酰胺，例如，S-新戊酰基-2-硫代乙基氨基磷酸酯或S-羟基新戊酰基-2-硫代乙基膦酰胺衍生物。可以被衍生为氨基磷酸酯或膦酰胺化合物形式的治疗剂包括任何抗病毒剂，所述抗病毒剂包含或已被衍生而包含供氨基磷酸酯或膦酰胺部分连接的反应基团，包括但不限于核苷和核苷类似物包括无环核苷。本文公开的任何氨基磷酸酯或膦酰胺化合物可以在适当的药物组合物中提供，并且通过合适的施用途径施用。

本文提供的方法包含施用药物组合物，其包含至少一种如本文所述的化合物，包括通式I、IIa或IIb的化合物，如果合适的话，处于盐形式，其单独使用或者以与一种或多种相容且药学上可接受的载体例如稀释剂或佐剂、或另一种抗-HCV或抗-HBV药剂组合的形式使用。

在一些实施方案中，第二药剂可以和本文提供的化合物一起配制或包装。当然，仅仅在根据本领域技术人员的判断这样的联合制剂不应当干扰任一药剂的活性或施用方法时，才将第二药剂和本文提供的化合物一起配制。在一些实施方案中，本文提供的化合物和第二药剂分开配制。为了本领域专业技术人员的方便，这些药剂可以被包装到一起，或分开包装。

在临床实践中，本文提供的活性剂可以通过任何常规途径施用，特别是口服、肠胃外、直肠或通过吸入(例如以气溶胶形式)施用。在一些实施方案中，口服施用本文提供的化合物。

可以使用片剂、丸剂、硬明胶胶囊、粉末或颗粒作为供口服施用的固体组合物。在这些组合物中，活性产物与一种或多种惰性稀释剂或佐剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。

这些组合物可以包含不是稀释剂的物质，例如润滑剂，例如硬脂酸镁，或者旨在控制释放的包衣。

可以使用药学上可接受的溶液、包含惰性稀释剂(例如水或液体石蜡)的悬浮液、乳液、糖浆和酏剂作为供口服施用的液体组合物。这些组合物也可以包含不是稀释剂的物质，例如润湿剂、甜味剂或调味剂。

供肠胃外施用的组合物可以是乳液或无菌溶液。可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油特别是橄榄油、或者可注射的有机酯例如油酸乙酯作为溶剂或运载体。这些组合物也可以包含佐剂，特别是润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。可以用数种方式进行灭菌，例如使用细菌过滤器、通过辐照、或通过加热。它们也可以被制备成无菌固体组合物形式，其可以在使用时溶于无菌水或其它任何可注射的无菌介质中。

供直肠施用的组合物是栓剂或直肠胶囊，除了活性主成分之外，其还包含赋形剂，例如可可黄油、半合成的甘油酯或聚乙二醇。

组合物也可以是气溶胶。当以液体气溶胶形式使用时，该组合物可以是稳定的无菌溶液或固体组合物，该固体组合物在使用时溶于在无热原的无菌水、盐水、或其它任何药学上可接受的运载体中。当以供直接吸入的干气溶胶的形式使用时，活性主成分被精细分开，并与水溶性的固体稀释剂或运载体例如葡聚糖、甘露醇或乳糖组合。

在一个实施方案中，本文提供的组合物是药物组合物或单一单位剂型。本文提供的药物组合物和单一单位剂型包含预防或治疗有效量的一种或多种预防或治疗剂(例如，本文提供的化合物，或其它预防或治疗剂)和通常一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。在具体实施方案中和在上下文中，术语“药学上可接受的”指被联邦或州政府的管理机构批准的、或者在美国药典或其它一般公认的药典中列举的用于动物且特别用于人类的。术语“载体”包括与治疗剂一同施用的稀释剂、佐剂(例如Freun d′s佐剂(完全的和不完全的))、赋形剂、或运载体。这些药学上的载体可以是无菌液体例如水和油，包括石油、动物油、蔬菜油或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水可以用作载体。盐水溶液、右旋糖水溶液和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是对于可注射的溶液。合适的药学上的载体的例子在E.W.Martin的“Remington′s PharmaceuticalSciences”中描述。

典型的药物组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是制药领域技术人员熟知的，而且合适的赋形剂的非限制性例子包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。特定的赋形剂是否适合加入药物组合物或剂型，取决于本领域中熟知的多种因素，包括但不限于将剂型施用于个体的方式和剂型中的具体活性成分。组合物或单一单位剂型，如果希望的话，也可以包含少量的润湿剂或乳化剂、或pH缓冲剂。

本文提供的不含乳糖的组合物可以包含本领域中熟知的和在例如美国药典(USP)SP(XXI)/NF(XVI)中列举的赋形剂。一般来说，不含乳糖的组合物包含药学上相容且药学上可接受量的活性成分、粘合剂/填充剂、以及润滑剂。示例性的不含乳糖的剂型包含活性成分、微晶纤维素、预胶化淀粉、和硬脂酸镁。

因为水可以促进一些化合物的降解，本文进一步涵盖包含活性成分的无水药物组合物和剂型。例如，为了确定例如保质期或制剂随时间的稳定性等特性，加水(例如5％)是药学领域中广泛接受的模拟长期贮存的手段。参见，例如，Jens T.Carstensen，Drug Stability：Principles & Practice，第2版，MarcelDekker，NY，NY，1995，第379-80页。实际上，水和热量加速一些化合物的分解。因此，水对制剂的作用可以具有显著意义，因为在制造、处理、包装、贮存、运输和使用制剂期间经常会遇到水分和/或湿气。

本文提供的无水药物组合物和剂型可以使用无水或水分含量低的成分，在低水分或低湿度条件下制备。如果预期在制造、包装和/或贮存期间会与水分和/或湿气有实质性接触，包含乳糖和至少一种含有伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型可以是无水的。

无水的药物组合物应该被制备和贮存以使得其无水性质被保持。因此，无水组合物可以使用已知防止暴露于水的材料包装，这样它们可以被包含在合适的配方试剂盒中。合适的包装的例子包括但不限于密封铝箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条带包装。

进一步提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低活性成分分解速率的化合物。这样的化合物在本文中被称作“稳定剂”，其包括但不限于抗氧化剂例如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

药物组合物和单一单位剂型可以采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放制剂等形式。口服制剂可以包括标准载体例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物和剂型将包含预防或治疗有效量的预防或治疗剂(在一些实施方案中为纯化的形式)与合适量的载体，从而提供对个体恰当的施用形式。制剂应当适合施用模式。在某些实施方案中，药物组合物或单一单位剂型是无菌的，而且处于向个体施用的合适形式，所述个体例如动物个体，例如哺乳动物个体，例如人类个体。

配制药物组合物以和其预期施用途径相容。施用途径的例子包括但不限于肠胃外施用，例如，静脉内、皮内、皮下、肌肉内、皮下、口服、口颊、舌下、吸入、鼻内、透皮、局部、透黏膜、肿瘤内、滑膜内和直肠施用。在具体的实施方案中，组合物依照常规过程配制为适合对人静脉内、皮下、肌肉内、口服、鼻内或局部施用的药物组合物。在实施方案中，药物组合物依照常规过程配制用于对人皮下施用。通常，供静脉内施用的组合物是在无菌等渗水缓冲液中的溶液。在必要时，组合物也可以包含增溶剂和局部麻醉剂例如lignocamne，以减轻注射部位的疼痛。

剂型的例子包括但不限于：片剂；囊片；胶囊例如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；糖锭；锭剂；分散剂；栓剂；油膏；糊剂(敷剂)；软膏；粉末；敷料剂；乳膏；膏药；溶液；贴片；气溶胶(例如鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶；适合对个体口服或黏膜施用的液体剂型，包括悬浮液(例如水或非水液体的悬浮液、水包油乳液、或油包水液体乳剂)、溶液和酏剂；适合对个体肠胃外施用的液体剂型；和无菌固体(例如结晶或无定形固体)，它们可以被重配，以提供适合对个体肠胃外施用的液体剂型。

本文提供的剂型的组合物、形状和类型通常将取决于它们的用途而变化。例如，和在相同感染的维持治疗中使用的剂型相比，在病毒感染的初始治疗中使用的剂型可以包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，和用于治疗相同疾病或病症的口服剂型相比，肠胃外剂型可以包含更少量的一种或多种活性成分。本文所包含的具体剂型互相变化的各种方式对于本领域技术人员将是显而易见的。参见，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第20版，Mack Publishing，Easton PA(2000)。

通常，组合物的成分是单独提供的或在单位剂型中混合在一起提供，例如在封闭密封容器例如安瓿或小袋中作为干燥的冻干粉或无水浓缩物，所述容器指示活性剂的数量。当组合物通过输液施用时，其可以用含有无菌的药物级水或盐水的输液瓶来配制。当组合物通过注射施用时，可以提供一安瓿的注射用无菌水或盐水，以便使所述成分能在施用前混合。

典型的剂型包含本文提供的化合物，或者它的药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物，范围在每天大约0.1mg到大约1000mg内，作为单一的一天一次剂量在早上施用，或作为分开的剂量在一天期间与食物一起服用。特定的剂型可以含有大约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、100、200、250、500或1000mg的活性化合物。

口服剂型

适合口服施用的药物组合物可以作为离散剂型提供，例如但不限于片剂(例如可咀嚼的片剂)、囊片、胶囊和液体(例如调味糖浆)。这样的剂型包含预定量的活性成分，而且可以通过本领域技术人员熟知的制药方法制备。一般参见，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第20版，Mack Publishing，EastonPA(2000)。

在一些实施方案中，口服剂型是固体，且在无水条件下用无水成分制备，如以上章节详细说明的。但是，本文提供的组合物的范围扩展超出无水的固体口服剂型。由此，进一步的形式如本文中描述。

通过将活性成分与至少一种赋形剂根据常规药学混合技术充分混合来制备典型的口服剂型，。根据施用所需的制剂形式，赋形剂可以具有各种广泛形式。例如，适合用于口服液体或气溶胶剂型的赋形剂包括但不限于水、乙二醇、油、酒精、调味剂、防腐剂和着色剂。适合用于固体口服剂型(例如粉末、片剂、胶囊和囊片)的赋形剂的例子包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。

因为施用方便，片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情况下使用固体赋形剂。如果需要，片剂可以通过标准的水性或非水性技术包衣。这样的剂型可以通过任何制药方法制备。一般来说，通过将活性成分与液体载体、精细固体载体、或两者均匀充分地混合，然后如果有必要的话，把产品做成希望的形状来制备药物组合物和剂型。

例如，可以通过压缩或模制来制备片剂。可以通过在合适的机器中压制任选地与赋形剂混合的处于自由流动形式(例如粉末或颗粒)的活性成分来制备压制片。可以通过在合适的机器中模制被惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备模制片。

可以在口服剂型中使用的赋形剂的例子包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适合在药物组合物和剂型中使用的粘合剂包括但不限于玉米淀粉、土豆淀粉、或其它淀粉、明胶、天然和合成的胶例如阿拉伯树胶、藻酸钠、海藻酸、其它藻酸盐、粉末黄蓍胶、瓜尔豆胶、纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羟丙基甲基纤维素(例如2208、2906、2910号)、微晶纤维素、和它们的混合物。

适用于本文公开的药物组合物和剂型的填充剂的例子包括但不限于滑石、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末纤维素、葡聚糖、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉、和它们的混合物。药物组合物中的粘合剂或填充剂，通常以药物组合物或剂型的大约50到大约99重量％存在。

微晶纤维素的合适形式包括但不限于作为AVICEL PH 101、AVICEL PH103、AVICEL RC 581、AVICEL PH 105(可从FMC Corporation，AmericanViscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA得到)出售的材料，和它们的混合物。具体的粘合剂是作为AVICEL RC 581出售的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低水分的赋形剂或添加剂，包括AVICEL PH103和淀粉1500LM。

在组合物中使用崩解剂以提供在暴露于水性环境时崩解的片剂。包含过多崩解剂的片剂可能在贮存中崩解，而包含过少崩解剂的片剂可能不能以所需的速率崩解，或不能在所需的条件下崩解。因此，应该使用足量的崩解剂来形成固体口服剂型，该量不过多也不过少，不会有害地改变活性成分的释放。使用的崩解剂的量基于制剂的类型而变化，而且是本领域普通技术人员容易识别的。典型的药物组合物包含大约0.5到大约15重量％的崩解剂，特别是大约1到大约5重量％的崩解剂。

可以在药物组合物和剂型中使用的崩解剂包括但不限于琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、波拉克林钾、羟基乙酸淀粉钠、土豆或木薯淀粉、预胶化淀粉、其它淀粉、粘土、其它褐藻胶、其它纤维素、胶、和它们的混合物。

可以在药物组合物和剂型中使用的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其它乙二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、和它们的混合物。额外的润滑剂包括，例如syloid硅胶(AEROSIL200，W.R.Grace公司，Baltimore，MD制造)、合成二氧化硅的凝固气溶胶(Degussa公司，Piano，TX销售)、CAB O SIL(Cabot公司，Boston，MA出售的高热制成的二氧化硅产品)、和它们的混合物。如果完全使用，润滑剂通常以占包含它们的药物组合物或剂型的少于大约1重量％的量使用。

延时释放剂型

可以通过控制释放手段或本领域普通技术人员熟知的递送装置来施用活性成分例如本文提供的化合物。例子包括但不限于在美国专利号：3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；和4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,639,480；5,733,566；5,739,108；5,891,474；5,922,356；5,972,891；5,980,945；5,993,855；6,045,830；6,087,324；6,113,943；6,197,350；6,248,363；6,264,970；6,267,981；6,376,461；6,419,961；6,589,548；6,613,358；6,699,500中描述的那些，各篇文献都通过引用被完整并入本文。可以使用这些剂型来对一种或多种活性成分提供缓慢或控制释放，通过使用不同比例的例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透的膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球体、或它们的组合来提供所需的释放特征。可以容易地选择本领域普通技术人员已知的合适的控制释放制剂(包括本文所述的那些)从而与本文提供的活性成分一起使用。因此，本文包含了适合口服施用的单一单位剂型，例如但不限于适合控制释放的片剂、胶囊、软胶囊和囊片。

所有控制释放的药物产品都具有相比于非受控制的对应物改善药物治疗的共同目标。理想地，最佳设计的控制释放制剂在医学治疗中的使用特征是应用最小量的药物以在最少量的时间里治愈或控制病况。控制释放制剂的优点包括延长的药物活性、降低的给药频率，而且增加的个体依从性。另外，控制释放制剂可被用来影响作用起效的时间或其它特征，例如药物的血浓度，并因此可以影响副作用(例如不良作用)的发生。

大多数控制释放制剂被设计为最初释放一定量的药物(活性成分)，其迅速地产生所需的治疗效果，并逐步和连续地释放其它量的药物，以在延长的时间段内维持这个水平的治疗或预防效果。为了在体内保持药物的该恒定水平，药物必须从剂型中以一定速率释放，该速率将会替换被新陈代谢和从体内排出的药物量。活性成分的控制释放可以被各种条件刺激，包括但不限于pH、温度、酶、水、或其它生理条件或化合物。

在一些实施方案中，可以使用静脉注入、可植入的渗透泵、透皮贴片、脂质体、或其它施用模式来施用药物。在一个实施方案中，可以使用泵(参见，Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed Eng.14：201(1987)；Buchwald等，Surgery 88：507(1980)；Saudek等，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。在另一个实施方案中，可以使用聚合材料。在又一个实施方案中，控制释放系统可以被放置在个体内由专业技术人员确定的适当位置，即因此仅仅需要全身剂量的一部分(参见，例如Goodson，Medical Applications of Controlled Release，第2卷，115-138页(1984))。其它控制释放系统在Langer的综述(Science 249：1527-1533(1990))中讨论。活性成分可以散布在固体内部基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑的或未增塑的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、硅碳酸酯共聚物、亲水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇、和交联的部分水解的聚醋酸乙烯酯中，该内部基质被外部的聚合膜包围，例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯和醋酸乙烯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、聚对苯二甲酸乙二酯离聚物、丁基橡胶表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/醋酸乙烯/乙烯醇三元共聚物、和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物，所述聚合膜不能在体液中溶解。活性成分在释放速率控制步骤中扩散通过外部的聚合膜。在这样的肠胃外组合物中，活性成分的百分比高度取决于它的具体性质和个体的需求。

肠胃外剂型

在一个实施方案中，提供了肠胃外剂型。肠胃外剂型可以通过各种途径对个体施用，包括但不限于皮下、静脉(包括弹丸注射)、肌肉内和动脉内。因为肠胃外剂型的施用通常避开了个体对污染物的天然防御，它们通常是无菌的或能够在对个体施用前被灭菌。肠胃外剂型的例子包括但不限于注射用溶液；适于溶解或悬浮在药学上可接受的注射用运载体、注射用悬浮液和溶液中的干粉产品。

可以用来提供肠胃外剂型的合适的运载体是本领域技术人员熟知的。例子包括但不限于：USP注射用水；水性运载体例如但不限于氯化钠注射液、’格林注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液、和乳酸盐格林注射液；易与水混合的运载体例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性运载体例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯甲酯。

也可以向肠胃外剂型中加入提高本文公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物。

透皮、局部和黏膜剂型

也提供了透皮、局部和黏膜剂型。透皮、局部和黏膜剂型包括但不限于眼用溶液、喷雾剂、气溶胶、乳膏、洗液、油膏、凝胶、溶液、乳液、悬浮液、或其它本领域中技术人员已知的形式。参见，例如Remington′sPharmaceutical Sciences，第16、18和20版，Mack Publishing，Easton PA(1980、1990 & 2000)；和Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第4版，Lea &Febiger，Philadelphia(1985)。适合治疗口腔内的黏膜组织的剂型可以配制为漱口剂或口服凝胶。此外，透皮剂型包括“储库型”或“基质型”贴片，它们可以被应用于皮肤，并附着具体一段时间，以允许所需量的活性成分渗透。

合适的赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它可以用来提供本文包含的透皮、局部和黏膜剂型的材料是制药领域技术人员熟知的，而且取决于给定的药物组合物或剂型将被应用的特定组织。考虑到这个事实，典型的赋形剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1，3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油、和它们的混合物，以形成无毒的且药学上可接受的洗液、酊剂、乳膏、乳液、凝胶或油膏。如果需要，还可以向药物组合物和剂型中加入保湿剂或润湿剂。这样的附加成分的例子是本领域熟知的。参见，例如，Remington′s Pharmaceutical Sciences，第16、18和20版，Mack Publishing，Easton PA(1980、1990 & 2000)。

取决于待被治疗的具体组织，可以在使用提供的活性成分治疗之前、同时或随后，使用额外的成分。例如，渗透增强剂可以用来辅助活性成分向组织的递送。合适的渗透增强剂包括但不限于：丙酮；各种醇例如乙醇，油醇和四氢呋喃甲醇；烷基亚砜例如二甲基亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon等级(聚乙烯比咯烷酮、聚维酮)；尿素；和各种水可溶或不溶的糖酯，例如Tween 80(聚山梨醇酯80)和Span 60(山梨聚糖单硬脂酸酯)。

也可以调节药物组合物或剂型的pH值，或者药物组合物或剂型所应用的组织的pH值，以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力以改善递送。化合物例如硬脂酸盐也可以被加入到药物组合物或剂型中，以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲脂性，以便改善递送。在这点上，硬脂酸盐可以充当制剂的脂质运载体、乳化剂或表面活性剂、以及递送提高或渗透增强剂。活性成分的不同的盐、水合物或溶剂化物可以被用来进一步调节得到的组合物的性质。

剂量和单位剂型

在人类治疗学中，医生将依照预防或治疗性治疗并依照年龄、体重、感染阶段和待被治疗的个体特有的其它因素来确定他认为最合适的剂量。在一些实施方案中，剂量为成人每天大约1到大约1000mg、或成人每天大约5到大约250mg、或成人每天大约10到50mg。在一些实施方案中，剂量是每个成年人每天大约5到大约400mg或每天25到200mg。在一些实施方案中，也预期每天大约50到大约500mg的给药速率。

在进一步的方面，提供了治疗或预防个体中HCV和/或HBV感染的方法，所述方法通过对由此需要的个体施用有效量的本文提供的化合物或其药学上可接受的盐。将在预防或治疗病症或其一种或多种症状中有效的化合物或组合物的量将随疾病或病况的性质和严重程度、以及活性成分施用途径而变化。频率和剂量也将依照每个个体特有的因素，根据施用的具体治疗(例如治疗或预防剂)，病症、疾病或状况的严重程度，施用途径，以及个体的年龄、身体、重量、反应和过去的病史而变化。有效剂量可以由源自体外或动物模型试验系统的剂量应答曲线外推得到。

在一些实施方案中，组合物的示例性剂量包括每千克个体或样品重量毫克或微克量的活性化合物(例如，每千克大约10微克到每千克大约50毫克、每千克大约100微克到每千克大约25毫克、或每千克大约100微克到每千克大约10毫克)。对本文提供的组合物，在一些实施方案中，对个体施用的剂量是基于活性化合物的重量，0.140mg/kg到3mg/kg个体体重。在一些实施方案中，对个体施用的剂量是0.20mg/kg到2.00mg/kg个体体重之间，或0.30mg/kg到1.50mg/kg个体体重之间。

在一些实施方案中，对本文描述的状况，本文提供的组合物的推荐日剂量范围在每天大约0.1mg到大约1000mg范围内，作为单一的一天一次剂量给予，或作为分开的剂量在一天期间给予。在一个实施方案中，日剂量以等分剂量每天施用两次。在一些实施方案中，日剂量范围应该从每天大约10mg到大约200mg；在其它实施方案中，在每天大约10mg和大约150mg之间；在进一步的实施方案中，在每天大约25和大约100mg之间。在一些情况下，可能有必要使用在本文公开的范围之外的活性成分剂量，这对本领域普通技术人员将是显而易见的。此外，注意到临床医师或治疗医生结合个体应答将了解怎样和何时中断、调整或终止治疗。

不同的治疗有效量可以被应用于不同的疾病和病况，这是本领域普通技术人员将容易了解的。类似地，足以预防、控制、治疗或改善这些病症，但不足以引起、或足以减少与本文提供的组合物相关的不良作用的量，也被上面描述的给药量和给药频率时间表所涵盖。此外，当个体被施用了多重剂量的本文提供的组合物时，所有的剂量并不是必须相同的。例如，对个体施用的剂量可以被提高，以提高组合物的预防或治疗效果，或者它可以被减少，以降低特定个体经历的一种或多种副作用。

在一些实施方案中，基于活性化合物的重量，在个体中施用以预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状的本文提供的组合物的剂量是0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg个体体重或更多。在另一个实施方案中，在个体中施用以预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状的组合物或本文提供的组合物的剂量是0.1mg到200mg、0.1mg到100mg、0.1mg到50mg、0.1mg到25mg、0.1mg到20mg、0.1mg到15mg、0.1mg到10mg、0.1mg到7.5mg、0.1mg到5mg、0.1到2.5mg、0.25mg到20mg、0.25到15mg、0.25到12mg、0.25到10mg、0.25mg到7.5mg、0.25mg到5mg、0.5mg到2.5mg、1mg到20mg、1mg到15mg、1mg到12mg、1mg到10mg、1mg到7.5mg、1mg到5mg、或1mg到2.5mg的单位剂量。

在一些实施方案中，治疗或预防可以从本文提供的化合物或组合物的一个或多个加载剂量开始，接着是一个或多个维持剂量。在这样的实施方案中，加载剂量可以是例如每天大约60到大约400mg或每天大约100到大约200mg，持续一天到五周。加载剂量之后可以是一个或多个维持剂量。在一些实施方案中，每个维持剂量独立地是大约每天大约10mg到大约200mg、每天大约25mg至大约150mg、或每天大约25至大约80mg。维持剂量可以每天施用，而且可以作为单一剂量或分开的剂量施用。

在一些实施方案中，可以施用一剂本文提供的化合物或组合物以在个体的血液或血清中实现活性成分的稳态浓度。稳态浓度可以根据技术人员可用的技术通过测量来确定，或可以基于个体的身体特征例如身高、体重和年龄来确定。在一些实施方案中，施用足量的本文提供的化合物或组合物，以在个体的血液或血清中实现大约300到大约4000ng/mL、大约400到大约1600ng/mL、或大约600到大约1200ng/mL的稳态浓度。在一些实施方案中，可以施用加载剂量以实现大约1200到大约8000ng/mL、或大约2000到大约4000ng/mL的稳态血液或血清浓度，持续一到五天。在一些实施方案中，可以施用维持剂量，以在个体的血液或血清中实现大约300到大约4000ng/mL、大约400到大约1600ng/mL、或大约600到大约1200ng/mL的稳态浓度。

在一些实施方案中，同一组合物可以重复施用，而且施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。在其它实施方案中，同一预防或治疗剂可以重复施用，而且施用可以相隔至少至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。

在某些方面，本文提供了在适合施用的形式中包含了化合物或其药学上可接受的盐的单位剂量。这样的形式在上面详细描述。在一些实施方案中，单位剂量包含1到1000mg、5到250mg、或10到50mg活性成分。在具体的实施方案中，单位剂量包含大约1、5、10、25、50、100、125、250、500或1000mg活性成分。这样的单位剂量可以依照本领域技术人员熟悉的技术制备。

第二药剂的剂量将被用于本文提供的联合治疗。在一些实施方案中，在本文提供的联合治疗中使用比已经或目前正在用于预防或治疗HCV和/或HBV感染的剂量更低的剂量。第二药剂的推荐剂量可以由技术人员的知识获得。对那些被批准供临床使用的第二药剂，推荐的剂量在例如Hardman等编辑，1996，Goodman & Gilman′s The Pharmacological Basis Of Basis OfTherapeutics，第九版，Mc-Graw-Hill，New York；Physician′s Desk Reference(PDR)第57版，2003，Medical Economics Co.，Inc.，Montvale，NJ中描述，所有文献通过引用被完整引入本文。

在各种实施方案中，治疗(例如本文提供的化合物和第二药剂)相隔少于5分钟、相隔少于30分钟、相隔1小时、相隔大约1小时、相隔大约1到大约2小时、相隔大约2小时到大约3小时、相隔大约3小时到大约4小时、相隔大约4小时到大约5小时、相隔大约5小时到大约6小时、相隔大约6小时到大约7小时、相隔大约7小时到大约8小时、相隔大约8小时到大约9小时、相隔大约9小时到大约10小时、相隔大约10小时到大约11小时、相隔大约11小时到大约12小时、相隔大约12小时到18小时、相隔18小时到24小时、相隔24小时到36小时、相隔36小时到48小时、相隔48小时到52小时、相隔52小时到60小时、相隔60小时到72小时、相隔72小时到84小时、相隔84小时到96小时、或相隔96小时到120小时施用。在各种实施方案中，治疗相隔不超过24小时或相隔不超过48小时施用。在一些实施方案中，在同一次患者来访内施用两种或多种治疗。在其它实施方案中，本文提供的化合物和第二药剂被同时施用。

在其它实施方案中，本文提供的化合物和第二药剂相隔大约2到4天、相隔大约4到6天、相隔大约1星期、相隔大约1到2星期、或相隔超过2星期施用。

在一些实施方案中，同一药剂可以重复施用，而且施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。在其它实施方案中，同一药剂可以重复施用，而且施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。

在一些实施方案中，本文提供的化合物和第二药剂以一定的次序在一定的时间间隔内对患者例如哺乳动物例如人施用，使得本文提供的化合物可以与其它药剂一起作用，和如果它们用别的方法施用相比提供增强的益处。例如，第二活性剂可以在同一时间施用或依序以任何次序在不同时间点施用；但是，如果没有在同一时间施用，它们应当在时间上充分接近地被施用从而提供所需的治疗或预防效果。在一个实施方案中，本文提供的化合物和第二活性剂在重叠的时间发挥它们的效果。各个第二活性剂可以用任何适当的形式和通过任何合适的途径分开施用。在其它实施方案中，本文提供的化合物在施用第二活性剂之前、同时或之后施用。

在一些实施方案中，对患者循环施用本文提供的化合物和第二药剂。循环治疗包括施用第一药剂(例如第一预防或治疗剂)一段时间，接着施用第二药剂和/或第三药剂(例如第二和/或第三预防或治疗剂)一段时间，并重复该顺序施用。循环治疗可以减少对一种或多种治疗的抗性的形成，避免或减少其中一种治疗的副作用，和/或提高治疗的功效。

在一些实施方案中，本文提供的化合物和第二活性剂在少于大约3周的循环中施用、大约每两周施用一次、大约每10天施用一次或大约每周施用一次。一个循环可以包含每个循环大约90分钟、每个循环大约1小时、每个循环大约45分钟通过输液施用本文提供的化合物和第二药剂。各个循环可以包含至少1周休息、至少2周休息、至少3周休息。施用的循环数目是大约1到大约12个循环，更通常地大约2到大约10个循环，而更通常地大约2到大约8个循环。

在其它实施方案中，治疗过程是对患者同时施用的，即独立剂量的第二药剂分开施用，但在一定的时间间隔内使得本文提供的化合物可以与第二活性剂一起起效。例如，一种成分可以每周施用一次，它与可以每两周施用一次或每三周施用一次的其它成分组合。换句话说，给药方案是同时进行的，即使治疗没有同时施用或在同一天期间施用。

第二药剂可以与本文提供的化合物累加或协同作用。在一个实施方案中，本文提供的化合物与一种或多种第二药剂在同一药物组合物中同时施用。在另一个实施方案中，本文提供的化合物与一种或多种第二药剂在不同的药物组合物中同时施用。在又一个实施方案中，本文提供的化合物在施用第二药剂之前或之后施用。也预期到，本文提供的化合物和第二药剂通过相同或不同的施用途径施用，例如口服和肠胃外施用。在一些实施方案中，当本文提供的化合物与潜在地产生不良副作用(包括但不限于毒性)的第二药剂同时施用时，第二活性剂可以有利地以降至引发不良副作用的阀值以下的剂量施用。

试剂盒

也提供了用于治疗肝脏病症例如HCV和/或HBV感染的方法中的试剂盒。试剂盒可以包含本文提供的化合物或组合物、第二药剂或组合物、以及为保健提供者提供关于供治疗病症的用法信息的说明书。说明书可以用印刷形式提供，或以电子媒介例如软盘、CD或DVD形式提供，或以可以获得这样的说明书的网址形式提供。本文提供的化合物或组合物、或者第二药剂或组合物的单位剂量可以包括这样的剂量，使得当向个体施用时化合物或组合物的治疗或预防有效的血浆浓度可以在个体中维持至少1天。在一些实施方案中，化合物或组合物可以作为无菌的药物组合物水溶液或干粉(例如冻干)组合物被包含。

在一些实施方案中，提供了合适的包装。本文使用的“包装”包括通常在系统中使用而且能够在固定界限内容纳本文提供的化合物和/或适合对个体施用的第二药剂的固体基质或材料。这样的材料包括玻璃和塑料(例如，聚乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯)瓶、小瓶、纸、塑料、和塑料薄膜分层包膜等。如果使用电子束灭菌技术，包装应当具有足够低的密度，以允许内容物的灭菌。

以下实施例说明了本文提供的代表性的化合物的合成。这些实施例不意在限制权利要求主张的主题的范围，也不应被如此解释。清楚的是，权利要求主张的主题的范围可以不同于本文的具体描述进行操作。由于本文的教导，对主题的许多修正和改变是可能的，且因此它们在权利要求主张的主题的范围内。

实施例

实施例1

A550(NM204)，L-2′，3′-二脱氧腺苷L-ddA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷

酸酯衍生物的制备

NM204，A550

合成方案

在室温下，将2，2-二甲基-3-羟基丙酸甲酯(965μL，7.57mmol)滴加到4，4′-二甲氧基三苯甲基氯(2.82g，8.33mmol)在无水吡啶(7.6mL)中的搅拌溶液中。反应混合物迅速转变成红色溶液，然后变成橙色悬浮液(大约30分钟)，且这一悬浮液继续搅拌过夜。将混合物小心地倒在饱和NaHCO₃水溶液(30mL)上，用Et₂O(3×20mL)萃取产物。合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并减压去除挥发物。得到的油与甲苯共蒸发，残余物通过快速柱色谱(SiO₂，H＝20cm)快速纯化，用含5→10→20→30％Et₂O的石油醚(40-60)洗脱。该部分(R_f＝0.25，含30％Et₂O的石油醚(40-60))的蒸发提供醚1，为黄色的油(3.11g，95％)。将该化合物(3.00g，6.91mmol)溶解在THF(35mL)中，然后在室温下加入NaOH水溶液(10％，3.5g在35mL H₂O中)。溶液立即转变成深橙色，且该溶液被搅拌2天。然后通过滴加HCl(1M)来小心地中和介质。用Et₂O(4×50mL)萃取产物，合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并减压去除挥发物。粗产物黄色的油通过快速柱色谱(SiO₂，H＝10cm)快速纯化，用含50％Et₂O的石油醚(40-60)洗脱。该部分的蒸发提供羧酸2，为白色泡沫(2.23g，77％)。R_f＝0.50(含50％Et₂O的石油醚(40-60))；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)1.10(s，6H，2×CH₃)，3.06(s，2H，CH₂O)，3.65(s，6H，2×OCH₃)，6.62-6.79(m，4H，PhCH)，7.02-7.46(堆叠，8H，PhCH)；¹³C-NMR(75MHz，CDCl₃)22.6(2×CH₃)，43.5(C(CH₃)₂)，55.1(2×OCH₃)，85.9(CPh₃)，[125.3，126.7，127.7，128.2，129.1，130.0，136.0，144.9，158.4(Ph)，部分重叠]，182.2(C＝O)。

硫酯3的合成

在室温下，向羧酸2在无水PhMe/DMF(2/1，v/v，2.7mL)中的搅拌溶液中加入1，1′-羰二咪唑(830mg，5.12mmol)，反应混合物立即变混浊。30分钟后，通过加入无水PhMe/DMF(93/7，v/v，17mL)稀释介质，并冷却到-10℃。然后滴加2-巯基乙醇(359μL，5.12mmol)，并在该温度下搅拌溶液1h。反应混合物用H₂O(60mL)稀释，并用Et₂O(3×15mL)萃取产物。合并的有机萃取物用盐水(15mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并减压去除挥发物(水浴温度不超过20℃)。残余物通过快速柱色谱(SiO₂，H＝15cm，1％Et₃N)纯化，用含60→70％Et₂O的石油醚(40-60)洗脱。该部分的蒸发提供硫酯3，为白色浆体(1.74g，92％)，其在4℃储存时固化。R_f＝0.35(含70％Et₂O的石油醚(40-60))；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)1.16(s，6H，2×CH₃)，3.02(t，J 6.0，2H，CH₂S)，3.09(s，2H，CH₂O)，3.66(t，J 6.0，2H，CH₂OH)，3.72(s，6H，2×OCH₃)，6.74-6.78(m，4H，PhCH)，7.09-7.36(堆叠，8H，PhCH)；¹³C-NMR(75MHz，CDCl₃)22.9(CH₃，2×CH₃)，31.7(CH₂，CH₂S)，51.0(quat.C，C(CH₃)₂)，55.2(CH₃，2×OCH₃)，61.9(CH₂，CH₂OH)，70.0(CH₂，CH₂O)，85.8(quat.C，CPh₃)，[113.0(CH，Ph)，126.7(CH，Ph)，127.7(CH，Ph)，128，2(CH，Ph)，130.1(CH，Ph)，部分重叠]，[135.9(quat.C，Ph)，144,8(quat.C，Ph)，158.4(quat.C，Ph)，部分重叠]，205.0(quat.C，C＝O)。

H-膦酸单酯4的合成

将β-L-ddA(1.00g，4.25mmol)与无水吡啶(3×10mL)共蒸发，然后在无水吡啶/DMF(1/1，v/v，21mL)中溶解。然后在室温下向该溶液中滴加亚磷酸二苯酯(5.76mL，29.8mmol)。搅拌反应混合物20分钟，这时滴加Et₃N/H₂O的混合物(1/1，v/v，8.5mL)，继续搅拌另外20分钟。反应混合物减压浓缩到大约15-20mL，通过快速柱色谱(SiO₂，H＝15cm，1％Et₃N)直接纯化该残余物，用CH₂Cl₂(150mL)然后用含5％(200mL)→10％(200mL)→15％(300mL)MeOH的CH₂Cl₂缓慢洗脱。该部分的蒸发提供H-膦酸单酯4，为白色泡沫(1.36g，80％)，其可以在4℃保存数星期。R_f＝0.10(Et₃N/MeOH/CH₂Cl₂，1/10/89)；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)1.21(t，J 7.4，9H，3×NCH₂CH₃)，1.92-2.50(堆叠，4H，2×2′-H，2×3′-H)，3.02(q，J 7.4，6H，3×NCH₂CH₃)，[3.96-4.03和4.18-4.30(堆叠，3H，4′-H，2×5′-H)，6.28(m，1′-H)，6.91(d，J 623，1H，P-H)，7.05(br s，2H，NH₂)，8.21(s，1H)，8.54(br s，1H，OH)，8.57(s，1H)。

氨基磷酸二酯5的合成

H-膦酸单酯4(1.03g，2.57mmol)和醇3(1.66g，3.45mmol)与无水吡啶(3×5mL)共蒸发，然后在无水吡啶(5mL)中溶解。然后一次性加入PyBOP(1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基膦六氟磷酸酯，1.60g，3.08mmol)，反应混合物在室温下搅拌15分钟。将溶液倒在饱和NaHCO₃水溶液(30mL)上，用CH₂Cl₂(4×15mL)萃取产物。合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并减压浓缩，以留下相应的H-膦酸二酯，为微黄的油(1.84g，假定为2.41mmol)。该油与无水吡啶(3×5mL；注意：为了帮助进一步溶解，不要蒸发至干燥)共蒸发，残余物在无水CCl₄(24mL)中溶解。滴加苯甲胺(791μL，7.23mmol)，反应混合物立即变得混浊(观察到少量热产生)。牛奶状溶液在室温下搅拌1h，倒在饱和NaHCO₃水溶液(30mL)上，用CH₂Cl₂(4×15mL)萃取产物。合并的有机萃取物用盐水(15mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并减压浓缩，以提供氨基磷酸二酯5，为黄色的油(2.00g，假定为2.31mmol)。它在下一步中使用，无需任何进一步纯化。R_f＝0.29(含4％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)1.11(s，6H，2×CH₃)，1.91-2.05(m，2H)，2.31-2.59(m，2H)，3.06(m，2H，CH₂S)，3.08(s，2H，CH₂ODMTr)，3.69(s，6H，2×OCH₃)，3.83-4.28(堆叠，7H，CH₂O，NCH₂Ph，4′-H，2×5′-H)，5.71(br s，1H，NH)，6.18(m，1H，1′-H)，6.69-6.80(m，4H，PhCH)，7.02-7.31(堆叠，13H，PhCH)，7.90(s，1H)，8.01(s，1H)，8.23(s，2H，NH₂)；¹³P-NMR(61MHz，CDCl₃)8.82，8.99。

NM204(A550)，L-ddA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的合成

将粗产物氨基磷酸二酯5(2.00g，假定为2.31mmol)溶解在二氧杂环己烷/AcOH/H₂O(25/17/25，v/v/v，462mL)中，溶液在室温下搅拌3天。挥发物减压蒸发，留下残余物，该残余物通过快速柱色谱(SiO₂，H＝15cm)纯化，用CH₂Cl₂(100mL)、然后用含2％(100mL)→4％(100mL)→6％(100mL)→8％(150mL)MeOH的CH₂Cl₂洗脱。该部分的蒸发留下NM 204，为白色泡沫，其在MeCN(5mL)中溶解。当加入H₂O(5mL)时，溶液变混浊，而且需要在冻干前超声处理。得到的白色粉末在室温下在真空中干燥(使用P₂O₅为干燥剂)1天。获得标题化合物，为高度吸湿的白色粉末(依照³¹P-NMR判断，为非对映异构体的1∶1混合物；499mg，35％，3步)。[α]²⁰ _D＝+4.2°(c1.0，CHCl₃)；R_f＝0.29(含4％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)1.10(s，6H，2×CH₃)，2.02-2.14(m，2H，2×3′-H)，2.41-2.55(m，2H，2×2′-H)，3.01(t，J 6.4，2H，CH₂S)，3.43(d，J 5.0，2H，CH₂OH)，3.75-4.07和4.18-4.29(堆叠，7H，CH₂O，NCH₂Ph，4′-H，2×5′-H)，5.02(t，J 5.0，1H，OH)，5.62(m，1H，NH)，6.25(t，J5.1，1H，1′-H)，7.16-7.36(堆叠，7H，PhH，NH₂)，8.14(s，1H)，8.26(s，1H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d6)21.8(2×CH₃)，25.9和26.0(CH₂，3′-C)，28.2和28.3(CH₂，CH₂S)，30.9和31.0(CH₂，2′-C)，44.2(CH₂，NCH₂Ph)，51.7(quat.C，C(CH₃)₂)，63.7和63.8(CH₂，CH₂O)，66.8(CH₂，m，5′-C)，68.3(CH₂，CH₂OH)，78.9(CH，m，4′-C)，84.2(CH，1′-C)，118.9(quat.C)，[126.5(CH，Ph)，127.2(CH，Ph)，128.1(CH，Ph)，部分重叠]，138.8和138.9(CH)，140.5和140.6(quat.C)，148.9(quat.C)，152.3(CH)，155.0(quat.C)，204.0(quat.C，C＝O)；¹³P-NMR(61MHz，DMSO-d6)9.86，9.95；m/z(FAB^-)563(2)，306(76)，153(100)；HRMS 565.2034([M+H]⁺。C₂₄H₃₄O₆N₆PS要求值为565.1998)；HPLC t_R＝3.52分钟(20％TEAC 20mM，MeCN中)；UV(EtOH 95％)λ_max＝259(ε_max 15900)，λ_min＝224(ε_min 7200)。

实施例2

B102，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

过程A：

H-膦酸单酯5的合成

羧酸3的合成：

向2，2-二甲基-3-羟基丙酸甲酯(1，15ml，117.6mmol)在无水二氯甲烷(590ml)和三乙胺(23ml)的混合物中的搅拌溶液中，加入三苯基二氯甲烷(1.2当量，39.3g)和4-二甲基氨基吡啶(0.1当量，1.44g)。反应混合物回流过夜。将混合物小心地倒在饱和NaHCO₃水溶液上，用二氯甲烷萃取产物，并用水洗涤。合并的有机萃取物减压蒸发，以得到粗产物化合物2，该粗产物将供下一步使用，无需进一步纯化。将得到的油溶解在二氧杂环己烷(350ml)和NaOH水溶液(30％，350ml)的混合物中。将异质混合物回流16小时。允许反应混合物冷却到室温，两相分离，通过滴加HCl(1M)小心地中和有机相。用二氯甲烷萃取产物，有机相减压蒸发。粗产物橙色的油从二氯甲烷重结晶以提供羧酸3，为白色晶体(92％)。R_f＝0.50(含70％二乙醚的石油醚)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)1.24(s，6H，2×CH₃)，3.19(s，2H，CH₂O)，7.2-7.5(m，15H，C₆H₅)。

H-膦酸单酯5的合成：

在室温下，向羧酸3(2g，5.56mmol)在甲苯和二甲基甲酰胺(2/1，v/v，4.5ml)的无水混合物中的搅拌溶液中，加入1，1′-羰二咪唑(1.3当量，1.17g)，反应混合物立即变混浊。30分钟后，用甲苯和二甲基甲酰胺的混合物(93/7，v/v，28ml)稀释反应混合物，冷却到-10℃，并加入2-巯基乙醇(1.3当量，500μL)。溶液在该温度下搅拌3h。减压去除挥发物(水浴温度不超过25℃)。将残余物溶解在二氯甲烷中，并用水洗涤。合并有机相，用硫酸钠(Na₂SO₄)干燥，过滤并蒸发至干燥，以得到化合物4，为黄色的油。该化合物将与无水吡啶共蒸发，供下一步使用，无需进一步纯化。R_f＝0.71(含70％Et₂O的石油醚)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)1.20(s，6H，2×CH₃)，3.05(t，J＝6.4Hz，2H，CH₂S)，3.15(s，2H，CH₂OTr)，3.69(t，J＝6.4Hz，2H，CH₂OH)，7.3-7.9(m，15H，C₆H₅)。

将亚磷酸(10当量，4.1g)与无水吡啶共蒸发两次，溶解在该溶剂(25ml)中，并加入到粗产物4中。反应混合物在室温下搅拌，数分钟后出现白色沉淀。将反应混合物冷却到0℃，并加入新戊酰氯(5.5当量，3.4ml)。让反应混合物升温到室温，并搅拌3h。通过加入三乙基碳酸氢铵溶液(TEAB 1M，10ml)停止反应，并用乙酸乙酯(EtOAc)稀释。在用EtOAc和TEAB 0.5M萃取后，合并有机相，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)。残余物通过快速柱色谱纯化，用含10％甲醇的二氯甲烷+1％三乙胺洗脱。该部分的蒸发提供H-膦酸单酯5，为白色浆体(90％)。R_f＝0.25(含70％Et₂O的石油醚)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)1.17(m，2×CH₃+过量的(CH₃CH₂)₃N)，2.9(m，过量的(CH₃CH₂)₃N)，3.12(t，J＝6.8Hz，2H，CH₂S)，3.37(s，2H，CH₂OTr)，3.90(m，2H，CH₂OP)，7.2-7.6(m，15H，C₆H₅)，9.9(m，过量的(CH₃CH₂)₃NH)；³¹P-NMR(161MHz，CDCl₃)3.85(s)。

B102，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的合成：

使用以下两种策略：

策略a

被保护的核苷7的合成

将2′C-甲基胞苷(NM107)(10g，39.0mmol)、原甲酸三乙酯(8.3当量，54ml)和对甲苯磺酸一水合物(1当量，7.4g)在无水丙酮(650ml)中的混合物在氮气氛围下回流过夜。反应混合物用氨水溶液(26％)中和，并过滤沉淀物。滤液减压蒸发，并与乙醇共蒸发。粗制混合物用硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，得到化合物6，为浅黄色固体(86％)。R_f＝0.30(含20％MeOH的二氯甲烷)，¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)1.06(s，3H，CH₃)，1.33(s，3H，CH₃)，1.47(s，3H，CH₃)，3.6(m，2H，H-5′，H-5″)，4.1(m，1H，H-4′)，4.41(d，1H，H-3′，J＝3.2Hz)，5.16(t，1H，OH-5′，J＝4.0Hz，D₂O可交换的)，5.69(d，1H，H-5，J＝8.0Hz)，6.04(s，1H，H-1′)，7.14-7.19(bd，2H，NH₂，D₂O可交换的)，7.74(d，1H，H-6，J＝8.0Hz)；LC/MS Scan ES-296(M-H)^-，Scan ES+298(M+H)⁺，λ_max＝280.7nm。

将化合物6(4.4g，14.8mmol)溶解在无水吡啶(74ml)中，并加入氯三甲基硅烷(3当量，5.4ml)。将反应混合物在氮气氛围下在室温下搅拌2h，然后连续加入4，4′-二甲氧基三苯甲基氯(1.5当量，7.5g)和4-二甲基氨基吡啶(0.5当量，900mg)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用饱和NaHCO₃水溶液淬灭。粗产物用二氯甲烷萃取，用NaHCO₃饱和水溶液和水洗涤。合并的有机相减压浓缩，然后溶解在二氧杂环己烷(160ml)和氨水(28％，29ml)的混合物中。溶液在70℃加热3h，并蒸发至干燥。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[1-5％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到被保护的核苷7，为黄色固体(81％)。R_f＝0.16(含30％EtOAc的CH₂Cl₂)¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)1.03(s，3H，CH₃)，1.30(s，3H，CH₃)，1.42(s，3H，CH₃)，3.5(m，2H，H-5′，H-5″)，3.71(s，6H，2×OCH₃)，4.0(d，1H，H-4′，J＝3.2Hz)，4.36(d，1H，H-3′，J＝2.8Hz)，5.1(m，1H，OH-5′，D₂O可交换的)，5.90(s，1H，H-1′)，6.2(m，1H，H-5)，6.8-7.2(m，13H，DMTr)，7.6(m，1H，H-6)，8.32(s，1H，NH，D₂O可交换的)；LC/MS Scan ES-598(M-H)^-，λ_max1＝231.7nm，λ_max2283.7nm。

B102(化合物10)的合成

化合物7(2.0g，3.34mmol)和5(2.2当量，4.3g)与无水吡啶一起共蒸发，并在该溶剂(50ml)中溶解。滴加新戊酰氯(2.5当量，1ml)，溶液在室温下搅拌2小时30分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用氯化铵水溶液(NH₄Cl0.5M)中和。用二氯甲烷/0.5M NH₄Cl水溶液萃取后，合并有机相，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷+2‰乙酸分级梯度)纯化，以提供希望的产物8，其与甲苯共蒸发，以得到米色泡沫(94％)。R_f＝0.63(含5％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)1.21(m，9H，3 CH₃)，1.42(s，3H，CH₃)，1.60(s，3H，CH₃)，3.13(m，2H，CH₂S)，3.17(m，2H，CH₂OTr)，3.79(s，6H，2×OCH₃)，4.1(m，2H，CH₂OP)，4.2-4.3(m，3H，H-5′，H-5″，H-4′)，5.09(d，1H，H-3′，J＝7.6Hz)，5.89(d，1H，H-5，J＝5.6Hz)，6.0(m，1H，H-1′)，6.8-7.7(m，29H，Tr，DMTr，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，CDCl₃)7.92，8.55；LC/MS ScanES+1066(M+H)⁺，Scan ES-1064(M-H)^-。

向化合物8(3.4g，3.15mmol)在无水四氯化碳(30ml)中的溶液中滴加苯甲胺(10当量，3.4ml)。反应混合物在室温下搅拌1小时30分钟。出现白色沉淀。溶液用二氯甲烷稀释，并用氯化氢水溶液(HCl 1M)中和。用CH₂Cl₂/HCl1M和CH₂Cl₂/NaHCO₃水溶液连续萃取后，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发至干燥。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到9，为黄色泡沫(87％)。R_f＝0.35(含5％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)1.1-1.2(m，9H，3 CH₃)，1.40(s，3H，CH₃)，1.59(s，3H，CH₃)，2.9-3.2(m，4H，CH₂OTr，CH₂OS)，3.76(s，6H，2×OCH₃)，3.9-4.4(m，8H，CH₂OP，CH₂N，H-3′，H-4′，H-5′，H-5″)，5.0(m，1H，H-5)，6.0(2s，1H，H-1′)，6.7-7.7(m，34H，Tr，DMTr，C₆H₅CH₂，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，CDCl₃)8.40，8.8.68；LC/MS Scan ES+1171(M+H)⁺。

最后，将化合物9(2.39g，2.04mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸水溶液(90％，10ml)的混合物中。反应混合物在35-40℃搅拌2h，然后用乙醇(140ml)稀释。挥发物减压蒸发，并与乙醇共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[0-30％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，接着用反相色谱(洗脱液：含乙腈[0-50％]的水的分级梯度)纯化，以得到希望的产物10(B102)(依照³¹P-NMR判断，为非对映异构体的1∶1混合物，36％)，其从二氧杂环己烷/水的混合物冻干。R_f＝0.34(含15％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.92(s，3H，CH₃)，1.10(s，6H，2×CH₃)，3.0(m，2H，CH₂S)，3.33(m，1H，H-3′)，3.56(s，2H，CH₂OH)，3.8-4.0和4.05-4.25(堆叠，7H，CH₂OP，NCH₂Ph，H-4′，H-5′和H-5″)，4.9(m，1H，OH-3′，J＝5.4Hz，D₂O可交换的)，5.07(s，1H，OH-2′，D₂O可交换的)，5.3(m，1H，CH₂OH，D₂O可交换的)，5.6-5.7(m，2H，H-5和NH，D₂O可交换的)，5.91(s，1H，H-1′)，7.3-7.4(堆叠，7H，PhH，NH₂，D₂O可交换的)，7.6(m，1H，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO-d₆)9.71，9.91；HPLC t_R＝4.67分钟(0-100％乙腈，经过8分钟)，λ_max＝274.9；LC/MS Scan ES+587(M+H)⁺。

策略b：

被保护的核苷11的合成

将NM107(10g，38.87mmol)溶解在无水吡啶(194ml)中，并加入氯三甲基硅烷(4.5当量，21.6ml)。反应混合物在氮气氛围下在室温下搅拌2小时30分钟，然后连续加入4，4′-二甲氧基三苯甲基氯(1.5当量，19.8g)和4-二甲基氨基吡啶(0.5当量，2.37g)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用饱和NaHCO₃水溶液淬灭。粗产物用二氯甲烷萃取，用NaHCO₃饱和水溶液和水洗涤。合并的有机相减压浓缩，然后溶解在四氢呋喃(110ml)中。向该溶液中加入含1M四丁基氟化铵的THF(1当量，38.87ml)，在室温下搅拌反应混合物30分钟。用EtOAc和水萃取后，收集有机相，并蒸发至干燥。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[0-10％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到被保护的核苷11，为黄色固体(93％)。R_f＝0.32(含10％MeOH的CH₂Cl₂)¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.79(s，3H，CH₃)，3.56(m，2H，H-5′，H-5″)，3.71(s，7H，2×OCH₃，H-4′)，5.0(m，4H，H-3′，OH-2′，OH-3′，OH-5′，D₂O可交换的)，5.72(s，1H，H-1′)，6.16(m，1H，H-5)，6.8-7.2(m，13H，DMTr)，7.82(m，1H，H-6)，8.24(m，1H，NH D₂O可交换的)；LC/MS Scan ES-560(M+H)⁺，ES-558(M-H)^-，λ_max＝284.7nm。

被保护的前核苷酸氨基磷酸酯13的合成，其为10的前体

化合物11(7g，12.5mmol)和5(1.5当量，11.0g)与无水吡啶一起共蒸发，并溶解在该溶剂(187ml)中。在-15℃滴加新戊酰氯(2.0当量，3.08ml)，并将溶液在该温度下搅拌1小时30分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用氯化铵水溶液(NH₄Cl 0.5M)中和。用二氯甲烷/0.5M NH₄Cl水溶液萃取后，合并有机相，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸分级梯度)纯化，以提供所需的产物12，其与甲苯共蒸发，以得到白色泡沫(3.5g，27％)。R_f＝0.44(含5％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，DMSO)0.8(m，3H，CH₃)，1.14和1.06(2s，6H，2 CH₃)，3.06(m，2H，CH₂S)，3.16(m，2H，CH₂OTr)，3.5(m，1H，H-3′)，3.70(m，6H，2 OCH₃)，3.90(m，1H，H-4′)，4.03(m，2H，CH₂OP)，4.24(m，2H，H-5′，H-5″)，5.30和5.04(2ms，2H，OH-2′和OH-3′，D₂O可交换的)，5.78(m，1H，H-1′)，5.98(m，1H，P-H)，6.22(m，1H，H-5)，7.0-7.5(m，16H，Tr)，8.32(m，1H，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO)9.17，9.65；LC/MS Scan ES+1026(M+H)⁺，λ_max＝282.7nm。

向化合物12(500mg，0.49mmol)在无水四氯化碳(4.9ml)中的溶液中滴加苯甲胺(5当量，0.266ml)。反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供化合物13，为泡沫(75％)。R_f＝0.25(含3％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，DMSO)0.79(s，3H，CH₃)，1.13和1.06(2s，6H，2 CH₃)，3.05(m，4H，CH₂OTr，CH₂OS)，3.51(m，1H，H-3′)，3.69(s，6H，2×OCH₃)，3.87(m，3H，CH₂OP，CH₂N，H-3′)，4.08(m，2H，H-5′，H-5″)，5.19和5.0(2m，2H，OH-2′和OH-3′，D₂O可交换的)，5.67(m，1H，NH，D₂O可交换的)，5.75(2s，1H，H-1′)，6.21(m，1H，H-5)，6.7-7.5(m，34 H，Tr，DMTr，C₆H₅CH₂，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO)9.84，9.69；LC/MS Scan ES+1132(M+H)⁺。

化合物13可以遵循实施例3(过程A)和实施例4中最后一步所描述的实验条件，转化成氨基磷酸酯前药10(B102)。

过程B

合成方案：

B102作为1∶1比率的含磷非对映异构体的混合物合成。从NM107到B102的单独总产率是31％，因为生产的偶联材料不是所有都用于去保护。

步骤1.1

材料	级别	FWgmol^-1	量	密度gml^-1	摩尔量	当量
							NM107	99％	257.2	150g	-	0.583	1
PhB(OH)2	98％	122.1	78g	-	0.639	1.10
							无水吡啶	98％	79.1	2.5L	0.978	-	-

在氩气下将NM107溶解在吡啶中，并加入苯硼酸。搅拌混合物在氩气下回流加热3h。然后进行共沸混合物的蒸馏，去除1.2L(吡啶/水)。

顶部温度：103℃→113℃ 混合物温度：112℃→116℃

将混合物冷却到室温，在真空下蒸发吡啶，以得到金色的油。产物在真空下储存过夜，以供下一步使用。通过1H-NMR(d6-DMSO)，观察到97∶3的产物∶起始材料比率。在步骤1.2前，将粗产物在250mL无水吡啶中溶解。或者，可以使用以下条件：

-当量苯硼酸

-5当量吡啶

-1.5当量Na₂SO₄

-对于1g NM107使用5mL CH₃CN

-回流加热1小时-1小时30分钟。冷却到室温。用于下一反应。

-通过质子NMR，转化了98-99％

步骤1.2：

材料	级别	FWgmol^-1	量	密度gml^-1	摩尔量	当量
							2，3-PhB-NM107	-	343.1	溶液	-	～0.583	1
膦酸盐3	-	585.7	615g	-	1.049	1.8
							EDCI.HCl	98％	191.7	570g	-	2.973	5.1
无水乙腈	98％	-	3L	-	-	-
							苯甲胺	98％	107.2	445mL	0.98	4.0	7^*
四氯化碳	98％	153.8	260mL	1.59	2.6	4^*

^*如果需要(如果通过HPLC可见P-OH)，可以加入额外当量的这些试剂(例如15当量)

将膦酸盐3在氩气下溶解在3L乙腈中。加入来自步骤1.1的2，3-PhB-NM107溶液，接着加入EDCI.HCl。在氩气下将混合物于41-46℃搅拌4h，之后HPLC分析显示P-H产物与NM107比率为～7∶1。将该混合物冷却到18℃，滴加苯甲胺，接着滴加四氯化碳。反应是轻微放热。HPLC分析显示P-H完全转化成氨基磷酸酯产物。向混合物中加入乙酸乙酯(1L)，然后用3L 20％柠檬酸将该混合物酸化到pH4。用2.5L乙酸乙酯萃取水相。合并有机相，用3L 10％柠檬酸洗涤。用5L碳酸氢钠水溶液(饱和的)将有机相碱化到pH8，并用2L碳酸氢钠水溶液(饱和的)第二次洗涤。用有机相干燥硫酸钠，在真空下过滤，并蒸发以得到黄色泡沫，712g。

将粗制残余物溶解在二氯甲烷(1L)中，并用硅胶塞纯化(2.3Kg二氧化硅)。洗脱使用：5L 4％甲醇/DCM，2×1L 4％，3×1L 5％，8×250mL 6％，4×250mL7％，9×1L 7％。相关部分的蒸发产生254g(HPLC纯度：98.5％，产率：52％)和73g(HPLC纯度：87.6％，产率：13％)氨基磷酸酯4。

步骤2：

材料	级别	FWgmol^-1	量	密度gml^-1	摩尔量	当量
							氨基磷酸酯4	-	828.9	246g	-	0.291	1
AcCl	99％	78.5	62.6mL	1.105	1.049	3.0^*
							无水EtOH	98％	-	3.5L^*	-	-	-

^*随后使用2.0当量AcCl和1∶10w/v比率的4∶EtOH。

将氨基磷酸酯4溶解在无水乙醇中，并在氩气下向反应混合物中加入乙酰氯(放热：18℃到27℃)。在氩气下在60℃搅拌混合物。30分钟后，HPLC分析显示氨基磷酸酯4完全转化成去保护的产物5。将混合物冷却到25℃，并分几部分加入固体碳酸氢钠(1.04Kg)(发泡，pH～5.5-6)。将混合物通过硅藻土过滤，并用两体积的乙醇洗涤。滤液在35℃在真空下蒸发。残余物用TBME(3L)研磨1h，然后过滤，以去除三苯甲基副产物。获得的固体在真空下干燥以得到185g，HPLC在254nm显示的纯度为93％。

如果需要，可以通过在水中溶解和用Amberlite IRA-743树脂处理，从产物中去除任何残留的苯硼酸。

以下可替换的反应条件(以避免酰化4的可能性)是可能的：

-2.0当量AcCl在EtOH中，1∶10 v∶v，以生成HCl并消耗所有的AcCl(放热)

-氨基磷酸酯4在EtOH中(以实现1∶10 w∶v总体积EtOH)

-在20℃向反应混合物中加入HCl/EtOH溶液

-60℃在氩气下，30-45分钟

粗产物通过反相色谱(1.5Kg的制备Bakerbond 40μm C-18 RP-二氧化硅-，用100％乙腈到100％H₂O梯度洗涤)纯化。粗产物溶解在乙腈(58mL)、H₂O(164mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(170mL)中。

在温和真空下用3％MeCN/H₂O、10％、15％、25％(纯净产物洗脱)分级梯度的洗脱和相关部分的蒸发得到106g B102(产率62％)，HPLC在254nm显示的纯度为98.6％。

典型的分析数据显示如下：

B102：C₂₄H₃₅N₄O₉PS 586.59gmol^-1

HPLC AUC(测试方法20)：98.9％254nm，Rt 3.34分钟

m/z(ESI+)：587.12[M+H]⁺100％；1173.62[2M+H]⁺80％

V_max(KBr disc)(cm^-1)：3343.1 br(O-H，N-H)；1647.2 br(C＝O碱基，硫酯)

KF：2.02％H₂O含量

比旋光度：[α]_D ²⁰+55.011(c.10.492mg cm^-3，于DMSO中)

元素分析：计算值：C 49.14％；H 6.01％；N 9.55％；S 5.47％；P 5.28％；

观测值：C 48.74％；H 5.83％；N 9.41％；S 5.81％；P 5.33％

NMR：使用¹H、¹³C、³¹P、COSY、DEPT、HSQC和HMBC实验来分析。

¹H NMR δ_H(400MHz，d6-DMSO)：0.94(3H，d，J 1.8Hz，CH₃)，1.11(6H，s，(CH₃)₂C)，3.04(2H，m，J 6.4Hz，CH₂S)，3.44(2H，d，J 5.0Hz，CH₂OH)，3.60(1H，br-m，H-3′)，3.82-4.01(5H，m，H-4′，CH₂O，CH₂Ph)，4.07-4.12(1H，m，H-5′)，4.13-4.24(1H，m，H-5″)，4.94(1H，t，J 5.0Hz，CH₂OH)，5.07(1H，d，J 1.8Hz，OH-2′)，5.26(1H，t，J 6.8Hz，OH-3′)，5.64-5.76(1H，m，P-N-H)，5.69，5.70(1H，2×d，2×J 7.6Hz，H-5)，5.93(1H，br-s，H-1′)，7.13-7.20(2H，2×br-s，NH₂)，7.20-7.25(1H，m，Ar-H)，7.28-7.35(4H，m，4×Ar-H)，7.53，7.57(1H，2×d，J 7.6Hz，H-6)

¹³C NMRδ_c(100MHz，d6-DMSO)：19.81(CH₃)，21.79(C(CH₃)₂)，28.17，28.24(CH₂S)，44.18(PhCH₂)，51.62(C(CH₃)₂)，63.74，63.79(CH₂O)，64.21，64.51(C-5′)，68.29(CH₂OH)，72.41，72.57(C-3′)，77.80，77.85(C-2′)，79.47，(C-4′)，91.66，(C-1′)，93.82(C-5)，126.68，127.09，128.08，128.09(5×Ar-C)，140.34，140.38，140.40(Ar-C_本位，C-6)，155.12，165.21(C-2，C-4)，203.85(C＝OS)

³¹P NMRδ_P(162MHz，d6-DMSO)：9.71，9.91(1P，2×s，比率1.00∶1.07)

合成过程A可以用来合成核苷前药例如B 102。优选对核苷碱基上可能存在的2′和3′羟基以及氨基进行保护。在策略A中，2′和3′羟基被保护，例如作为丙酮化合物衍生物，而且氨基被保护，例如作为二-甲氧基三苯甲基衍生物。在核苷与SATE中间产物偶联后，使用酸例如TFA进行丙酮化合物的水解。该水解过程可以潜在地产生副产物，并引起低产率，且不利的是，二-甲氧基三苯甲基氯是昂贵的。下方的合成过程B可以克服这样的困难。使用酸例如硼酸，例如苯基硼酸来保护糖部分上的2′和3′羟基。核苷的苯基硼酸盐衍生物与SATE中间产物的偶联可以得到好的产率，且在对反应混合物的后处理中，通过用酸例如柠檬酸水溶液洗涤，苯基硼酸盐去保护方便地发生。通过使用有机溶剂系同例如乙酰氯/乙醇混合物温和地进行保护基团例如三苯甲基(在Sate部分上)的最终去除。该去保护反应可以一致地重现，可扩大规模而且得到显著的高产率。

实施例3

B299，2′-C-甲基鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

过程A

合成方案：

2′-C-甲基鸟苷(NM108)(3g，10.10mmol)和化合物5[关于5的合成，参见实施例2](6.48g，11.10mmol)与无水吡啶一起共蒸发，并溶解在该溶剂(152mL)中。在-15℃滴加新戊酰氯(2.48mL，20.18mmol)且在同一温度下搅拌溶液2h。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用氯化铵水溶液(NH₄Cl 0.5M)中和。在用二氯甲烷/0.5M NH₄Cl水溶液萃取后，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发两次。粗制混合物用硅胶快速柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸分级梯度)纯化，以提供所需的产物6(2.5g，32％)。R_f＝0.34(含15％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.80(s，3H，CH₃)，1.13(s，6H，2×CH₃)，3.04(m，2H，CH₂OTr)，3.14(m，2H，CH₂S)，3.97-4.08(m，4H，H-3′，H-4′，CH₂OP)，4.28-4.38(m，2H，H-5′，H-5″)，5.10-5.35(m，2H，OH-2′，OH-3′，D₂O可交换的)，5.77(s，1H，H-1′)，6.52(bs，2H，NH₂，D₂O可交换的)，7.11-7.42(m，15H，Tr)，7.75(s，1H，H-8)，10.67(bs，1H，NH，D₂O可交换的)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO-d₆)9.47，9.20；LC/MS Scan ES+764(M+H)⁺，Scan ES-762(M-H)^-。

向化合物6(2.5g，3.27mmol)在无水四氯化碳(33mL)中的溶液中滴加苯甲胺(5当量，1.79mL)。反应混合物在室温下搅拌1h，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)。粗制混合物用硅胶快速柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化以得到化合物7，为白色泡沫(2.9g，定量产率)。R_f＝0.27(含10％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.81(s，3H，CH₃)，1.10(s，6H，2×CH₃)，2.99-3.08(m，4H，CH₂OTr，CH₂S)，3.87-4.30(m，8H，H-3′，H-4′，H-5′，H-5″CH₂OP，NCH₂Ph)，5.66(m，1H，NH，D₂O可交换的)，5.76(s，1H，H-1′)，6.60(bs，2H，NH₂，D₂O可交换的)，7.17-7.39(m，20H，Tr，C₆H₅CH₂)，7.77(s，1H，H-8)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO-d₆)9.93，9.78；LC/MS Scan ES+869(M+H)⁺，Scan ES-867(M-H)^-。

将化合物7(2.84g，3.27mmol)溶解在三氟乙酸(1.1mL)和二氯甲烷(11.4mL)的混合物中。反应混合物在室温下搅拌0.5h。溶液用乙醇稀释，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发两次。粗制混合物用硅胶快速柱色谱(洗脱液：含[0-30％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，然后用反相柱色谱(洗脱液：含[0-100％]乙腈的水的分级梯度)纯化，以得到所需的产物8(B299)(依照³¹P-NMR，为非对映异构体的1∶1混合物，800mg，39％)，其由二氧杂环己烷/水的混合物冻干。R_f＝0.57(含20％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.82(s，3H，CH₃)，1.09(s，6H，2×CH₃)，3.01(m，2H，CH₂S)，3.42(d，2H，CH₂OH，J＝8.0Hz)，3.81-4.00(m，6H，H-3′，H-4′CH₂OP，NCH₂Ph)，4.11-4.27(m，2H，H-5′，H-5″)，4.92(t，1H，CH₂OH，J＝8.0Hz，D₂O可交换的)，5.16(s，1H，OH-2′，D₂O可交换的)，5.40(m，1H，OH-3′，D₂O可交换的)，5.64(m，1H，NH，D₂O可交换的)，5.75(s，1H，H-1′)，6.50(bs，2H，NH₂，D₂O可交换的)，7.19-7.32(m，5H，PhH)，7.77(s，1H，H-8)，10.61(bs，1H，NH，D₂O可交换的)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO-d₆)9.91，9.78；HPLC t_R＝3.67分钟(0-100％乙腈，经过8分钟)，λ_max＝251.3；LC/MS ScanES+627(M+H)⁺，Scan ES-625(M-H)^-。

实施例4

B208，2′-C-甲基胸苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

2′-C-甲基胸苷(NM105)(700mg，2.57mmol)与5[关于5的合成，参见实施例2](1.1当量，1.6g)和无水吡啶一起共蒸发，并溶解在该溶剂(40ml)中。在-15℃滴加新戊酰氯(2.0当量，0.633ml)，并在该温度下搅拌溶液1小时30分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用氯化铵水溶液(NH₄Cl 0.5M)中和。在用二氯甲烷/0.5M NH₄Cl水溶液萃取后，合并有机相，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸分级梯度)纯化，以提供所需的产物6，其与甲苯共蒸发，以得到白色泡沫(942mg，50％)。R_f＝0.56(含15％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，DMSO)1.00(s，3H，CH₃)，1.13(s，6H，2 CH₃)，1.77(s，3H，CH₃)，3.16(m，2H，CH₂S)，3.32(m，2H，CH₂OTr)，3.6(m，1H，H-3′)，3.9(m，1H，H-4′)，4.0(m，2H，CH₂OP)，4.2-4.3(m，2H，H-5′，H-5″)，5.21(s，1H，OH-2′，D₂O可交换的)，5.40(t，1H，OH-3′，D₂O可交换的)，5.83(s，1H，H-1′)，6.0(s，1H，P-H)，7.0-7.5(m，16H，Tr，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO)9.29，9.68；LC/MS Scan ES+761(M+Na)⁺。

向化合物6(920mg，1.25mmol)的无水四氯化碳(13ml)溶液中滴加苯甲胺(10当量，1.4ml)。反应混合物在室温下搅拌2h。出现白色沉淀。溶液用二氯甲烷稀释，用氯化氢水溶液(HCl 1M)中和。在用CH₂Cl₂/HCl 1M和CH₂Cl₂/NaHCO₃水溶液连续萃取后，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发至干燥。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到7，为白色泡沫(875mg，83％)。R_f＝0.56(含15％MeOH的CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，DMSO)0.99(s，3H，CH₃)，1.12(s，6H，2 CH₃)，1.75(s，3H，CH₃)，3.04(m，4H，CH₂OTr，CH₂S)，3.69(m，1H，H-3′)，3.8-4.0(m，5H，CH₂OP，CH₂N，H-4′)，4.0-4.2(m，2H，H-5′，H-5″)，5.17(s，1H，OH-2′，D₂O可交换的)，5.3(m，1H，OH-3′，D₂O可交换的)，5.7(m，1H，NH，D₂O可交换的)，5.82(s，1H，H-1′)，7.1-7.5(m，21H，Tr，C₆H₅CH₂，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO)9.95，9.86；HPLC t_R＝7.91分钟(0-100％乙腈，经过8分钟)，λ_max＝266.7nm；LC/MS Scan ES+866(M+Na)⁺。

最后，将化合物7(860mg，1.02mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)和三氟乙酸(0.51ml)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2h，然后用甲苯稀释。挥发物减压蒸发，并与乙醇共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[0-10％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，接着用反相色谱(洗脱液：含乙腈[0-50％]的水的分级梯度)纯化，以得到所需的产物8(B208)(257mg，42％)。R_f＝0.31(含10％MeOH的二氯甲烷)；¹H-NMR(400MHz，DMSO-d₆)0.99(s，3H，CH₃)，1.10(s，6H，2×CH₃)，1.75(s，3H，CH₃)，3.0(m，2H，CH₂S)，3.42(d，2H，CH₂OH)，3.7(m，1H，H-3′)，3.8-4.0(堆叠，5H，CH₂OP，NCH₂Ph，H-4′)，4.0-4.3(m，2H，H-5′和H-5″)，4.9(m，1H，CH₂OH，D₂O可交换的)，5.17(s，1H，OH-2′，D₂O可交换的)，5.3(m，1H，OH-3′，D₂O可交换的)，5.7(m，1H，NH，D₂O可交换的)，5.81(s，1H，H-1′)，7.2-7.4(堆叠，6H，PhH，H-6)；¹³P-NMR(161MHz，DMSO-d₆)9.84，9.90；HPLC t_R＝4.98分钟(0-100％乙腈，经过8分钟)，λ_max＝269.0nm；LC/MS Scan ES+602(M+H)⁺。

实施例5

B261，PMEA的羟基-tBuSATE N-苯甲基膦酰胺衍生物的制备

过程A：

中间产物4的合成：

配备冷凝器的500mL三颈烧瓶中装填了PMEA(2.00g，7.25mmol)、CH₂Cl₂(121mL)和DMF(617μL，7.98mmol)。猛烈搅拌生成的浆，在0℃用10分钟滴加草酰氯(2.21mL，25.4mmol)(释放气体)。浆转变成黄色溶液(10分钟)，之后变得混浊(10分钟)。其在回流下被进一步搅拌3h，并转变成白色的粘稠浆体。产物通过在室温下减压蒸发所有的挥发物，原位schlenk干燥1h。生成的黄色固体随后可以在CH₂Cl₂(121mL)中部分溶解，在0℃用10分钟滴加吡啶(1.17mL，14.5mmol)。白色的悬浮液转变成蓝色溶液，将它冷却到-78℃。然后沿内壁缓慢滴加(大约45分钟)醇3[关于3的合成，参见实施例1](3.480g，7.25mmol)和三乙胺(6.37mL，45.7mmol)在CH₂Cl₂(72mL)中的溶液，反应在-78℃搅拌10h。然后在-78℃滴加苯甲胺(2.37mL，21.7mmol)，搅拌溶液，经过1h升温到室温。将NaHCO₃(饱和水溶液，200mL)倒在反应物上，各层分离。水相用CH₂Cl₂(2×100mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水(50mL)和Na₂SO₄干燥。过滤并浓缩溶液，以提供大约6.5g粗产物黄色的浆。通过快速柱色谱(SiO₂，H＝11cm)纯化，用含4→8→12％MeOH的CH₂Cl₂(1％Et3N)洗脱，以提供3.70g黄色泡沫(0.15＜Rf＜0.30，含10％MeOH的CH₂Cl₂)，对其进行快速柱色谱(SiO₂，H＝12cm)的第二次纯化，用含4→6％MeOH的CH₂Cl₂(1％Et3N)洗脱，以提供2.67g黄色泡沫(0.16＜Rf＜0.25，含10％MeOH的CH₂Cl₂)。对其进行快速柱色谱(SiO₂，H＝12cm)的第三次纯化，用含4→6％MeOH的CH₂Cl₂(1％Et3N)洗脱，以生产165mg膦酰胺4(大约2.7％)，为白色泡沫，以及1.75g混合化合物。对它们进行快速柱色谱(SiO₂，H＝12cm)的最后一次纯化，用含4→6％MeOH的CH₂Cl₂(1％Et3N)洗脱，提供353mg膦酰胺4(大约5.9％)，为白色泡沫。总产率：8.6％。R_f＝0.21(含6％MeOH的CH₂Cl₂)；1H-NMR(300MHz，CDCl₃)1.13(s，6H，2 CH₃)，3.02-3.10(m，2H，CH₂S)，3.59(t，J 7.5，2H，CH₂)，3.58(s，6H，2×OCH₃)，3.73(t，J 7.1，2H，CH₂)，3.88-4.09(堆叠，4H，2×CH₂)，4.21(t，J 7.0，2H，CH₂O)，5.50(br s，2H，NH₂)，6.67-6.78(m，4H，PhH)，7.04-7.38(堆叠，9H，PhH)，7.72(s，1H)，8.22(s，1H)；³¹P-NMR(121MHz，CDCl₃)25.0；m/z(FAB+)825(1)，303(100)；HRMS 825.3171([M+H]+。C₄₃H₅₀O₇N₆PS要求值为825.3199)。

化合物5(B261)的合成：

在0℃向醚4(353mg，0.43mmol)在CH₂Cl₂(4.3mL)中的溶液中滴加二氯乙酸(CH₂Cl₂中的20％溶液，大约140滴)，将其搅拌55分钟。然后加入NaHCO₃固体(大约1.5g)，并在过滤和蒸发前搅拌10分钟。通过快速柱色谱(SiO₂， H＝10cm)纯化，用含4→10％MeOH的CH₂Cl₂洗脱，提供纯的膦酰胺5(在THF/H₂O中冻干并在P₂O₅干燥剂中放置3天后，130mg，58％)。也对165mg的醚4进行该反应，以生成51mg膦酰胺5(B261，49％)。R_f＝0.20(含10％MeOH的CH₂Cl₂)；1H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)1.10(s，6H，2×CH₃)，2.80(t，J 7.0，2H，CH₂S)，3.43(d，J 5.5，2H，CH₂OH)，3.69(AB的A，J 4.8，1H，1×CH₂P)，3.71(AB的B，J 4.8，1H，1×CH₂P)，3.75-3.88(堆叠，4H，CH₂O，NCH₂)，3.88-4.07(m，2H，NCH₂Ph)，4.30(t，J 7.0，2H，CH₂O)，4.97(t，J 6.1，1H，OH)，5.31-5.42(m，1H，NH)，7.16-7.32(堆叠，7H，PhH，NH₂)，8.09(s，1H)，8.13(s，1H)；¹³C-NMR(75MHz，DMSO-d₆)21.8(2×CH₃)，28.4和28.5(CH₂，CH₂S)，42.4(CH₂，NCH₂)，43.3(CH₂，NCH₂)，51.7(quat.C，C(CH₃)₂)，61.7和61.8(CH₂，CH₂O)，64.6(CH₂，CH₂O)，68.4(CH₂，CH₂O)，118.5(quat.C)，[126.5(CH，Ph)，127.0(CH，Ph)，128.0(CH，Ph)，部分重叠]，140.5和140.6(quat.C)，141.0(CH)，149.4(quat.C)，152.3(CH)，155.9(quat.C)，203.9(quat.C，C＝O)；³¹P-NMR(121MHz，DMSO-d₆)25.9；m/z(FAB+)161(32)，256(42)，523(100)；HRMS 523.1899([M+H]⁺C₂₂H₃₂O₅N₆PS要求值为523.1892)；HPLC(C18，流速：0.5mL/分钟，溶液A＝TEAC 20mM，溶液B＝20％TEAC 20mM)：tR＝5.04分钟(含60％A的B)，tR＝27.24分钟(t＝0→10分钟：100％A；t＝10→30分钟：含0→50％B的A；t＝30→35分钟：含50→100％B的A)；UV(EtOH 95％)λ_max＝205(ε_max 23900)，λ_min＝228(εmin5400)。

过程B：

[PMEA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物(B261，化合物5)的改进制备]

合成方案：

步骤1：中间产物A的合成

在室温下，向PMEA(2g，7.3mmol)在120mL DCM(无水)中的悬浮液中加入DMF(640mg，1.2当量)，随后加入草酰氯(2.3mL，3.5当量)。将混合物加热回流1.5小时，以得到粘稠的黄色悬浮液。混合物通过旋转蒸发浓缩至干燥，以得到粗制中间产物2，为浅黄色固体。中间产物2在甲醇溶液中的等分试样的LCMS分析证实了该产物的结构的良好的纯度。

步骤2：中间产物B的合成：

将粗制中间产物A(7.33mmol)悬浮在100mL无水DCM中。将悬浮液冷却到0℃。在0℃向其中加入吡啶(1.2mL，14.6mmol，2当量)。加入后，浅黄色悬浮液转变成金色澄清溶液。用ACN/干冰浴将该溶液冷却到-32℃。向其中滴加3(3.52g，7.33mmol，1当量)在70mL无水DCM中的溶液，该无水DCM含有三乙胺(6.3mL，44mmol，6当量)。在添加期间，内部反应温度保持在-35℃～-30℃之间。亮金色溶液转变成绿色溶液，同时一些沉淀在添加期间从溶液中析出。沉淀被推测为三乙胺的HCl盐。耗时20分钟来完成所述添加。在添加后，将混合物在-30℃～-10℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至-20℃。向其中加入苯甲胺(2.4mL，22mmol，3当量)。混合物在-20℃搅拌10分钟。向反应混合物中加入饱和NaHCO₃/H₂O，并搅拌混合物2分钟。分离DCM层，用Na₂SO₄干燥，并浓缩至干燥，以得到粗制中间产物B，为黄色粘稠的油。粗制中间产物在272nm的HPLC分析显示纯度为62％。

步骤3：中间产物4的合成：

作为粘稠的浅黄色油的粗制中间产物B(7.33mmol)溶解在200mL MeOH中。将反应混合物回流过夜。反应混合物的HPLC分析显示脒完全转化成胺。[通过目前的内部的HPLC方法，脒的保留时间(RT＝5.92分钟)与胺(RT＝5.98分钟)非常接近！]。将混合物冷却到室温并过滤。滤液通过旋转蒸发浓缩至干燥。获得的粗产物通过硅胶柱色谱(使用120g硅胶combiflash柱，含3-8％MeOH的DCM为洗脱液)纯化，以得到3.1g纯的产物4，为白色泡沫，由2gPMEA制得，单独的产率为51％。获得的4的1H-NMR与所需的结构一致。获得的4的HPLC分析显示纯度为96％(AUC)。

步骤4：B261(化合物5)的合成

将中间产物4(300mg，0.36mmol)溶解在EtOH(无水，5mL)中。在室温下向其中一次性加入乙酰氯(43mg，1.5当量)。应当在封闭的反应烧瓶中进行该反应以避免损失HCl气体。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。向其中加入固体NaHCO₃，并搅拌混合物15分钟。发现反应混合物的pH值为大约7-8。过滤混合物，将滤液浓缩至干燥。粗产物通过硅胶柱色谱(含5-10％MeOH的DCM为洗脱液)纯化，以得到163mg的5，为澄清的粘稠的油，产率86％。获得的产物的1H-NMR与所需的结构一致。获得的产物的HPLC分析显示纯度为97.4％(AUC)。

实施例6

B263，2′-C-甲基腺苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例2(过程A，策略b)中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B263(94mg，总产率6％)已由它的母体核苷2′-C-甲基-6-NH-二甲氧基三苯甲基-腺苷(1.59g，2.73mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.80(s，3H)，0.97-0.98(d，J＝4.26Hz，6H)，3.02(m，2H)，3.34-3.35(m，2H)，3.76-3.96(m，4H)，4.03-4.05(m，2H)，4.15-4.17(m，2H)，4.76-4.79(m，1H)，5.32(s，1H)，5.34-5.36(m，1H)，5.45-5.55(m，1H)，5.93(s，1H)，7.1-7.4(m，7H)，8.14(s，1H)，8.21(1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.75和9.86(2s)；Scan ES⁺611(M+H)⁺，λ_max＝258nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝4.79分钟λ_max＝260.8nm。

实施例7

B229，2′-C-甲基尿苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

试剂和条件：(i)pTsOH.H₂O，CH(OEt)₃，丙酮，室温；(ii)PivCl，pyr，室温；(iii)苯甲胺，CCl₄，室温；(iv)90％TFA水溶液，DCM，室温

遵循与实施例2，策略A中制备的前核苷酸的合成类似过程，前核苷酸6(446mg，0.76mmol，经4步的总产率为9％)已由它的核苷母体1合成。

B229 6

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ0.98(s，3H，CH₃)；1.10(s，6H，2×CH₃)；3.03(m，2H，CH₂S)；3.41(m，2H，CH ₂OH，J 5.6Hz)；3.61(m，1H，H-3′)；3.8-4.0和4.05-4.25(堆叠，5H，NCH ₂Ph，H-4′，H-5′和H-5″)；4.05-4.25(2×1H，2×m，CH ₂OP)；4.91(t，1H，3′-OH，D₂O可交换的，J＝5.62Hz)；5.20(br-s，1H，2′-OH，D₂O可交换的)；5.39(a-t，1H，CH₂OH，D₂O可交换的，J＝7.32Hz)；5.52(m，1H，H-5)；5.65(m，1H，PhNH，D₂O可交换的)；5.8(br-s，1H，H-1′)；7.2-7.32(m，5H，ArH)；7.55(a-dd，1H，H-6)；11.37(br-s，1H，NH，D₂O可交换的)。

³¹P NMR(161.8MHz，DMSO-d₆)：δ9.73和9.98(经积分的信号比率为52∶48)。

m/z(ES+)588.11(M+H)⁺。

HPLC(方法20)：化学纯度99.2％，3.48分钟。

CHN分析：-观测值：C，49.29，H，5.95，N，6.88，P，5.16；C₂₄H₃₄N₃O₁₀PS要求值为C，49.06，H，5.83，N，7.15，P，5.46。

[α]_D ²³+26.3(c，0.571于H₂O中)。

v_max(KBr)：3373(br，NH和OH)，1682(C＝O)。

实施例8

B186，2′-C-甲基肌苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例2(过程A，策略a)中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B186(314mg，总产率8％)已由它的母体核苷2′，3′-O-异亚丙基-2′-C-甲基-肌苷(2.0g，6.26mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.79(s，3H)，1.09(s，6H)，3.01-3.04(t，J＝6.53Hz，2H)，3.42(s，2H)，3.84-3.91(m，2H)，3.94-4.03(m，3H)，4.05-4.09(m，1H)，4.15-4.26(m，2H)，4.92(s，1H)，5.36(s，1H)，5.43(t，J＝6.54Hz，1H)，5.62-5.71(m，1H)，5.94(s，1H)，7.18-7.22(m，1H)，7.25-7.30(m，4H)，8.08(s，1H)，8.10(s，1H)，12.15(brs，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.76-9.90(2s)；Scan ES⁺612(M+H)⁺，λ_max＝240.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝4.72分钟λ_max＝243.1nm。

实施例9

B396，9-[2-C-甲基-β-呋喃核糖基]-6-氯嘌呤的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例4中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B396(75mg，总产率10％)已由它的母体核苷9-[2-C-甲基-β-呋喃核糖基]-6-氯嘌呤(571mg，1.90mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.82(d，J＝2.63Hz，3H)，1.07(s，6H)，3.02(m，2H)，3.40-3.41(q，J＝3.36Hz和J＝1.89Hz，2H)，3.85-3.98(m，4H)，4.12(s，2H)，4.25(m，2H)，4.89-4.90(m，1H)，5.47(s，1H)，5.50(s，1H)，5.62-5.70(m，1H)，6.10(d，J＝1.23Hz，1H)，7.17-7.29(m，5H)，8.76(s，1H)，8.82(s，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.91和9.79(2s)；Scan ES⁺630(M+H)⁺，λ_max＝260nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝4.42分钟λ_max＝265nm。

实施例10

B307，2′，3′-O-碳酸酯-2′-C-甲基鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

N-苯甲胺基-2′，3′-O-碳酸酯-2′-C-甲基鸟苷-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯(C1)：

将化合物B2[参见，化合物7，实施例3，过程A](250mg，0.288mmol)溶解在二甲基甲酰胺(3.5mL)中，并用1，1-羰二咪唑(186.60mg，1.15mmol)处理。混合物在室温下搅拌4h 30，减压浓缩(水浴温度不超过30℃)。对粗制残余物进行硅胶色谱，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到C1，为无色的油。(68mg，26％)。化合物C1：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆；δ10.80(ls，1H，NH)，7.80(s，1H，H-8)，7.33-7.18(m，20H，4C₆H₅)，6.66(sl，2H，NH₂)，6.30(s，1H，H-1′)，5.78(m，1H，PNH)，5.22(m，1H，H-3′)，4.47-4.30(m，2H，H-4′和H-5′a)，4.20-4.05(m，1H，H-5′b)，3.99-3.87(m，4H，CH₂O和CH₂N)，3.10-3.03(m，4H，CH₂S和CH₂OTr)，1.27(s，3H，CH₃)，1.11(s，6H，2CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆；δ10.42(S)，10.18(S)。LR LC/MS(M+H⁺)895.4(5.57分钟)。UV：λ_max＝253nm。

N-苯甲胺基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)-2′，3′-O-碳酸酯-2′-C-甲-基鸟苷-5′-基磷酸酯B307(化合物C2)：

将化合物C1(65mg，0.073mmol)溶解在二氯甲烷(260μL)中，并用TFA(26μL)处理。混合物在室温下搅拌15分钟，然后用乙醇稀释，蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。生成的残余物通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，并由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以得到B307(化合物C2)(34mg，72％，白色冻干粉)。B307(化合物C2)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.84(ls，1H，NH)，7.80(s，1H，H-8)，7.32-7.20(m，5H，C₆H₅)，6.69(ls，2H，NH₂)，6.30(s，1H，H-1′)，5.77(m，1H，PNH)，5.25(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝20.0Hz)，4.92(ls，1H，OH)，4.50-4.41(s，2H，CH₂OH)，3.03(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝8.0Hz)，1.30(s，3H，CH₃)，1.10(s，3H，CH₃)，1.08(s，3H，CH₃)。¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ204.4(C＝O)，154.5(C-4)，153.1(C-2)，150.7(C-6)，140.9(C₆H₅)，135.6(C-8)，128.7-127.3(5C，C₆H₅)，117.0(C-5)，89.7(C-1′)，83.7和83.6(2C，C-2′和C-3′)，81.8(C-4′)，68.8(CH₂OH)，65.1(CH₂O)，64.5(C-5′)，52.2(C(CH₃)₂CH₂OH)，44.7(CH₂N)，28.7(CH₂S)，22.3(2C，2CH₃)，18.3(CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)δ10.39(s)，10.15(s)。LR LC/MS(2M+H⁺)1305.4(M+H⁺)653.2(2M-H^-)1303.8(M-H^-)651.4(5.57分钟)。HRFAB-MS C₂₆H₃₄O₁₀N₆PS(M+H⁺)计算值653.1795，观测值653.1819。UV：λ_max＝251nm。R_f 0.67(MeOH/CH₂Cl，20/80，v/v)。

实施例11

B242，2′-C-甲基鸟苷的羟基-tBuSATE N-(4-三氟甲基)苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

2′-C-甲基鸟苷-5′-基-N-(4-三氟甲基)-苯甲胺基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯(D1)：

向化合物B1[参见，化合物7，实施例3，过程A](355mg，0.465mmol)在无水四氯化碳(4.65mL)中的溶液中加入4-三氟甲基苯甲胺(331μL，2.324mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时30分钟，并减压浓缩(水浴温度不超过30℃)。对生成的残余物进行硅胶色谱，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到D1，为白色固体。(420mg，96％)。化合物D1：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.77-7.20(m，20H，3C₆H₅，C₆H₄CF₃和H-8)，6.57(ls，2H，NH₂)，5.84-5.75(m，2H，H-1′和PNH)，5.50(m，1H，OH-3′)，4.26-3.86(m，8H，H-3′，H-4′，H-5′，CH₂O和CH₂N)，3.10(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝4.0Hz)，3.03(m，2H，CH₂OTr)，1.11(s，6H，2CH₃)，0.82(s，3H，CH₃)。¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ204.0(C＝O)，157.2(C-4)，154.2(C-2)，151.3(C-6)，145.8-143.9(4C，3C₆H₅和C₆H₄CF₃)，135.6(C-8)，129.0-120.0(20C，3C₆H₅和C₆H₄CF₃)，117.0(C-5)，91.0(C-1′)，86.1(C(C₆H₅))，80.7(C-3′)，78.7(C-2′)，73.3(C-4′)，70.0(CH₂OTr)，65.9(CH₂O)，64.4(C-5′)，50.8(C(CH₃)₂CH₂OTr)，44.2(CH₂N)，28.8(CH₂S)，22.7(2C，2CH₃)，20.4(CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.80(s)，9.64(s)。¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-60.8(s)。LR LC/MS(M+H⁺)937.3(M-H^-)935.4(5.47分钟)。UV：λ_max＝254nm。R_f 0.61(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)-2′-C-甲基鸟苷-5′-基-N-(4-三氟甲-基)-苯甲胺基磷酸酯B242(化合物D2)：

将化合物D1(400mg，0.427mmol)溶解在二氯甲烷(1.6mL)中，并用TFA(160μL)处理。混合物在室温下搅拌15分钟，然后用乙醇稀释，蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。对生成的残余物进行硅胶色谱，用含0-15％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，然后通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，并由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以得到化合物B2742(化合物D2)(90mg，30％，白色冻干粉)。B242(化合物D2)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.54(ls，1H，NH)，7.75(s，1H，H-8)，7.75-7.52(m，4H，C₆H₄CF₃)，6.50(sl，2H，NH₂)，5.82-5.74(m，2H，H-1′和PNH)，5.40(m，1H，OH-3′)，5.17(s，1H，OH-2′)，4.92(t，1H，OH，J_OH-CH2＝4.0Hz)，4.26-3.84(m，8H，H-3′，H-4′，H-5′，CH₂O和CH₂N)，3.41(d，2H，CH₂OH，J_CH2-OH＝4.0Hz)，3.03(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝8.0Hz)，1.07(s，6H，2CH₃)，0.82(s，3H，CH₃)。¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ204.4(C＝O)，157.2(C-4)，154.1(C-2)，151.2(C-6)，145.9(C₆H₄CF₃)，135.8(C-8)，128.3-125.4(6C，C₆H₄CF₃)，117.0(C-5)，90.9(C-1′)，80.5(C-3′)，78.7(C-2′)，73.2(C-4′)，68.8(CH₂OH)，66.0(CH₂O)，64.4(C-5′)，52.2(C(CH₃)₂CH₂OH)，44.3(CH₂N)，28.7(CH₂S)，22.3(2C，2CH₃)，20.4(CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.62(s)，9.77(s)。¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-60.8(s)。LR LC/MS(M+H⁺)695.2(M-H^-)693.4(4.25分钟)。HRFAB-MS C₂₆H₃₅O₉N₆F₃PS(M+H⁺)计算值695.1876，观测值695.1874。UV：λ_max＝253nm。R_f 0.43(MeOH/CH₂Cl，20/80，v/v)。

实施例12

B503，9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯-基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)H-膦酸酯(G1)：

将化合物B5[未公开结果](100mg，0.32mmol)和化合物F3[参见实施例2的化合物5](246mg，0.42mmol)与无水吡啶一起共蒸发，并溶解在该溶剂(4.8mL)中。在-15℃滴加新戊酰氯(80μL，0.64mmol)，将溶液在同一温度下搅拌2h。反应混合物用二氯甲烷稀释，并用0.5M NH₄Cl的水溶液中和。混合物在二氯甲烷和0.5M NH₄Cl水溶液之间分配，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，并减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发两次。粗制混合物通过快速柱色谱纯化，用含0-10％甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸梯度洗脱，以提供所需的产物G1，为无色的油(68mg，28％)。化合物G1：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.72(ls，1H，NH)，7.83(s，1H，H-8)，7.35-7.11(m 15H，3C₆H₅)，6.59(m，2H，NH₂)，6.36(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.6Hz)，6.14(d，1H，H-1′，J_1′-F＝18.0Hz)，4.65(m，1H，H-3′)，4.40-4.33(m，2H，H-5′)，4.10-4.01(m，3H，H-4′和CH₂O)，3.93(d，1H，CCH，⁴J_H-F＝5.6Hz)，3.15-3.12(m，2H，CH₂S)，3.04(s，2H，CH₂OTr)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)；δ9.50(s)，9.22(s)。¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-156.5(m)。LR LC/MS(B)(M+Na⁺)798.2(M-H^-)774.2(4.93分钟)。UV：λ_max＝254nm。R_f 0.48(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

N-苯甲胺基-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯(G2)

向化合物G1(68mg，0.088mmol)在无水四氯化碳(880μL)中的溶液中滴加苯甲胺(48μL，0.44mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)。粗制混合物用硅胶塞过滤，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到化合物G2，为白色固体(80mg，定量产率)。化合物G2：³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.95(s)9.80(s)。¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-157.5(m)。LR LC/MS(B)(M+H⁺)881.3(M-H^-)879.4(5.18分钟)。UV：λ_max＝254nm。R_f0.31(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

N-苯甲胺基-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯B503(化合物G3)：

将化合物G2(80mg，0.09mmol)溶解在二氯甲烷(320μL)中，并用TFA(32μL)处理。将混合物在室温下搅拌10分钟，通过固相萃取柱过滤，用含0-30％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，然后通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，并由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以得到化合物B503(化合物G3)(15mg，26％，白色冻干粉)。B503(化合物G3)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.61(ls，1H，NH)，7.83(s，1H，H-8)，7.30-7.18(m，5H，C₆H₅)，6.60(ls，2H，NH₂)，6.32(m，1H，OH-3′)，6.11和6.12(2 d，2×1H，2H-1′，J_1′-F＝18.0Hz)，5.68(m，1H，PNH)，4.93(t，1H，OH，J_OH-CH2＝5.5Hz)，4.61(m，1H，H-3′)，4.26-4.18(m，2H，H-5′)，4.08(m，1H，H-4′)，3.98-3.82(m，5H，CH₂O，CH₂N和CCH)，3.42(d，2H，CH₂OH，J_CH2-OH＝5.0Hz)，3.01(m，2H，CH₂S)，1.09(s，6H，2CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.92(s)，9.79(s)。¹⁹F NMR(376MHz，DMSO-d₆)：δ-156.8(m)。LR LC/MS(B)(M+H⁺)639.2(M-H^-)637.3(3.85分钟)。HRFAB-MS C₂₆H₃₃O₈N₆FPS(M+H⁺)计算值639.1802，观测值639.1816。UV：λ_max＝253nm。R_f0.46(MeOH/CH₂Cl，20/80，v/v)。

起始核苷如下合成：

9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤(D961，实施例12的起始核苷)的合成，及其三磷酸酯衍生物B427的合成

合成方案：

9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-核-呋喃糖基]-N²-异丁酰基-鸟嘌呤(B1)：Hirao，I.；Ishikawa，M.；Miura，K.Chem.Lett.1986，11，1929-1932。

9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]-N²-异丁酰基-鸟嘌呤(B2)：在0℃向CrO₃(11.07g，110.76mmol)在二氯甲烷(220mL)中的悬浮液中加入乙酸酐(10.4mL，110.76mmol)和无水吡啶(17.82mL，221.52mmol)。滴加化合物B1(22g，36.92mmol)在二氯甲烷(110mL)中的溶液。去除冷却浴，将生成的溶液在室温下搅拌5h。将反应混合物倒入冷的乙酸乙酯中，通过二氧化硅和硅藻土胶塞过滤，浓缩至干燥，并与甲苯共蒸发两次。将获得的残余物溶解在二氯甲烷中，与过量MgSO₄搅拌过夜，过滤并蒸发，以得到酮。将三甲基硅烷基乙炔(12.5mL，88.60mmol)在氩气下溶解在无水THF(98mL)中。在-78℃滴加丁基锂(55.4mL，1.6M，于己烷中)。将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，然后让其升温到-55℃。在-78℃滴加酮在THF(49mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后让其升温到-30℃，搅拌3h。通过在-78℃小心地加入饱和NH₄Cl水溶液(72mL)淬灭反应。升温到室温后，混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，并浓缩至干燥。粗产物材料使用柱色谱纯化，用含1.5％MeOH的二氯甲烷洗脱，以得到化合物B2(8.59g，34％，2步)，为浅黄色泡沫。化合物B2：NMR ¹ H(250MHz，DMSO-d ₆ )：δ12.10(ls，1H，NH)，11.69(ls，1H，NH)，7.91(s，1H，H-8)，6.69(s，1H，OH)，5.94(s，1H，H-1′)，4.29(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝5.5Hz)，3.85-3.95(m，3H，H-4′，H-5′和H-5″)，2.46(m，1H，CH(CH₃)₂)，0.90-1.08(m，30H，iPr和CH(CH₃)₃)，0.00(s，9H，Si(CH₃)₂)。LC/MS(A)：(M+H⁺)692.4(24.96分钟)。UV：λ_max1＝254nm，λ_max2＝281nm。R_f0.34(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

9-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-N²-异丁酰基-鸟嘌呤(B3)：

将化合物B2(2.00g，2.89mmol)在氩气下溶解在干燥的DCM(60mL)中，并加入吡啶(1.45mL，18.06mmol)。将反应混合物冷却到-20℃，滴加DAST(4.11mL，31.35mmol)。在添加完成后，去除冷却浴。继续搅拌1h 15，混合物用乙酸乙酯溶解，倒入饱和NaHCO₃中，并搅拌5分钟。有机层用饱和的盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，并通过硅胶色谱纯化，用含乙酸乙酯的DCM(2％)洗脱，以得到所需的化合物B3(1.41g，70％)，为黄色的油。化合物B3：NMR ¹ H(250MHz，DMSO-d ₆ )：δ12.22(s，1H，NH)，8.09(s，1H，H-8)，6.21(d，1H，H-1′，J_1′-F＝15.6Hz)，4.54(dd，1H，H-3′，J_3′-F＝23.6Hz，J_3′-4′＝9.8Hz)，4.33(m，1H，H-5′，²J_5′-5″＝13.1Hz)，4.16(m，1H，H-5″)，2.81(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.13-1.03(m，34H，iPr和CH(CH₃)₂)，0.08(s，9H，Si(CH₃)₃，³J_H-H＝6.9Hz)。NMR ¹⁹ F(235MHz，DMSO-d ₆ )：δ-160.26(dd，J_F-1′＝16.1Hz，J_F-3′＝23.3Hz)。LC/MS(A)：(M+H⁺)694.7(24.02分钟)。LRFAB-MS(GT)：694(M+H)⁺，692(M-H)^-。UV：λmax＝256nm。R_f0.46(MeOH/CH₂Cl，05/95，v/v)。

9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃糖基]-N²-异丁酰基-鸟嘌呤(B4)：

将化合物B3(1.31g，1.89mmol)溶解在甲醇(13.8mL)中，并加入氟化铵(908.9mg，24.54mmol)。将生成的溶液在回流下搅拌1h，并蒸发至干燥。粗产物材料通过硅胶色谱纯化，用含6-10％甲醇的二氯甲烷分级梯度洗脱，以生产化合物B4(344mg，48％)，为浅黄色的油。化合物B4：NMR ¹ H(400MHz， DMSO-d ₆ )：δ12.18(ls，1H，NH)，11.77(ls，1H，NH)，8.34(s，1H，H-8)，6.29(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.5Hz)，6.20(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.2Hz)，5.39(t，1H，OH-5′，J_OH-5′＝5.1Hz)，4.52(dt，1H，H-3′，J_3′-F＝22.9Hz)，3.98(m，1H，H-4′)，3.90-3.85(m，2H，H-5′和乙炔基)，3.72(m，1H，H-5″)，2.52(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.14(d，6H，CH(CH₃)₂，³J_H-H＝6.9Hz)。NMR ¹³ C(100MHz， DMSO-d ₆ )：δ180.7(C-6)，155.3(C-2)，148.9(C-4)，137.3(C-8)，120.4(C-5)，95.8(d，C-2′，¹J_2′-F＝182.1Hz)，87.7(d，C-1′，²J_1′-F＝39.2Hz)，83.4(d，CCH，³J_C-F＝9.1Hz)，82.6(C-4′)，75.9(d，CCH，²J_C-F＝31.2Hz)，72.9(d，C-3′，²J_3′-F＝19.1Hz)，59.3(C-5′)。NMR ¹⁹ F(235MHz，DMSO-d ₆ )δ-158.9(m)。LC/MS (A)：(M+H⁺)380.3(8.34分钟)。UV：λ_max1＝260nm，λ_max2＝277nm。R_f 0.40(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤D961(化合物B5)：

将化合物B4(0.78g，1.33mmol)溶解在饱和的甲醇氨(62mL)中，并在室温下搅拌20h。然后反应混合物减压蒸发至干燥。将残余物溶解在水中，用乙酸乙酯洗涤两次。蒸发水层，并用反相柱色谱(C18)纯化，用含2-15％乙腈的水梯度洗脱。然后，将生成的残余物溶解在热的乙酸乙酯中，过滤并干燥，以得到D961(化合物B5)(134mg，33％)，为黄色固体。NMR ¹ H(400MHz， DMSO-d ₆ )：δ10.70(ls，1H，NH)，7.98(s，1H，H-8)，6.60(ls，2H，NH₂)，6.21(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.6Hz)，5.83(d，1H，H-1，J_1-F＝16.9Hz)，5.29(t，1H，OH-5′，J_OH-5′＝5.2Hz)，4.50(td，1H，H-3′，J_3-F＝22.8Hz，J_3-4＝9.2Hz)，3.93-3.81(m，3H，H-4′，H-5′和乙炔基)，3.70(m，1H，H-5″)。NMR ¹³ C (100MHz，DMSO-d ₆ )：δ157.2(C-6)，154.3(C-2)，151.05(C-4)，135.1(C-8)，116.7(C-5)，96.4(d，C-2′，¹J_C-F＝182.1Hz)，87.4(d，C-1′，²J_C-F＝39.2Hz)，83.1(d，CCH，J_C-F＝9.1Hz)，82.4(C-4′)，76.2(d，CCH，²J_C-F＝31.2Hz)，73.2(d，C-3′，²J_C-F＝20.1Hz)，59.5(C-5′)。NMR ¹⁹ F(235MHz，DMSO-d ₆ )：δ-158.5(m)。LC/MS(A)：(M+H⁺)310.1(5.55分钟)。LRFAB-MS(GT)：619(2M+H)⁺，310(M+H)⁺，152(B+H)⁺，617(2M-H)^-，308(M-H)^-。UV：λ_max＝254nm。

合成方案：

制备核苷5′-三磷酸酯的标准过程：(Ludwig，J.Acta Biochim.Biophys.Acad.Sci.Hung.1981，16，131-133。)

在0℃向核苷(0.286mmol)在磷酸三乙酯(750μL)中的溶液中加入磷酰氯(75μL，0.807mmol)。将该反应混合物A在5℃搅拌过夜。将三丁基焦磷酸铵(PPi/Bu₃N 1/1.5，1g，2.19mmol)在溶解无水DMF(2mL)中。向PPi中加入三丁基胺(420μL，1.76mmol)，并将生成的混合物在0℃搅拌15分钟。向反应混合物A中加入2.4mL该溶液。将反应混合物在0℃搅拌1分钟。小心地用TEAB 1M(pH＝7.5，10mL)淬灭反应，在0℃搅拌20分钟，然后用水和乙酸乙酯稀释。水相减压浓缩。对粗产物材料进行DEAE-交联葡聚糖色谱，用10^-3-1M的TEAB梯度洗脱。将所需的部分合并，减压浓缩，并与水/甲醇的混合物共蒸发，最后与水共蒸发。生成的残余物用半制备型HPLC纯化。包含所需产物的部分减压浓缩，与水/甲醇的混合物共蒸发，并由水冻干。三磷酸三乙基铵盐在Dowex Na⁺树脂柱上用水洗脱三次，以在由水冻干后生成钠盐。

9-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤5′-三磷酸酯钠盐(B427)：¹ H NMR(400MHz，D ₂ O)：δ7.97(s，1H，H-8)，6.19(d，1H，H-1′，³J_1′-F＝16.0Hz)，4.70(m，于H₂O下1H，H-3′)，4.39(m，1H，H-5′)，4.29-4.22(m，2H，H-4′和H-5″)，2.98(d，1H，乙炔基，⁴J_H-F＝5.0Hz)。³¹ P NMR (162MHz，D ₂ O)：-10.50(d，1P，P_γ，J_Pγ-Pβ＝19.4Hz)，-11.03(d，1P，P_α，J_Pα-Pβ＝19.4Hz)，-22.38(t，1P，P_β，J_Pβ-Pγ＝J_Pβ-Pα＝19.4Hz)。NMR ¹⁹ F(376MHz， DMSO-d ₆ )：δ-159.1(m)。LRFAB-MS(GT)：638(M+Na)⁺，616(M+H)⁺，594(M-Na+2H)⁺，572(M-2Na+3H)⁺，550(M-3Na+4H)⁺，592(M-Na)^-，570(M-2Na+H)^-，548(M-3Na+2H)^-。

实施例13

B306，2′-C-甲基-5-氮杂-7-去氮杂-鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例4中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B306(25mg，总产率6％)已由它的母体核苷2′-C-甲基-5-氮杂-7-去氮杂-鸟苷(200mg，0.67mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.90-0.91(d，J＝2.56Hz，3H)，1.09(d，J＝4.26Hz，6H)，3.07-3.10(t，J＝6.66Hz，2H)，3.42(d，J＝5.64Hz，2H)，3.86-3.99(m，6H)，4.10-4.15(m，1H)，4.15-4.20(m，1H)，4.90-4.93(t，J＝5.64Hz，1H)，5.28(s，1H)，5.46-5.50(m，1H)，5.62-5.69(m，1H)，5.80(s，1H)，7.00(s，2H)，7.18-7.21(m，2H)，7.26-7.33(m，5H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.80-9.95(2s)；Scan ES⁺627(M+H)⁺，λ_max＝261.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝3.18分钟λ_max＝258.4nm。

实施例14

B389，2′-C-甲基-7-去氮杂-鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例4中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B389(80mg，总产率21％)已由它的母体核苷2′-C-甲基-7-去氮杂-鸟苷(200mg，0.67mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.74(s，3H)，1.09(s，6H)，3.0(t，J＝6.10Hz，2H)，3.42(d，J＝5.49Hz，2H)，3.8-4.0(2m，6H)，4.04-4.11(m，1H)，4.24-4.17(m，1H)，4.90-4.93(t，J＝5.36Hz，1H)，4.96-4.98(d，J＝4.76Hz，1H)，5.31-5.36(m，1H)，5.57-5.67(m，1H)，5.93(s，1H)，6.21-6.26(m，3H)，6.76(d，J＝22Hz，1H)，7.19-7.23(m，1H)，7.27-7.32(m，4H)，10.34(brs，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.77和9.90(2s)；Scan ES⁺626(M+H)⁺，λ_max＝258.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝3.84分钟λ_max＝259.6nm。

实施例15

B288，3′-C-甲基尿苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例4中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B288(34mg，总产率3％)已由它的母体核苷3′-C-甲基-尿苷(513mg，1.99mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，1.15(s，3H)，3.00-3.05(m，2H)，3.30(s，1H)，3.42(d，J＝6.13Hz，2H)，3.76-3.79(m，1H)，3.86-3.99(m，6H)，4.92-4.94(t，J＝5.40Hz，1H)，4.97(s，1H)，5.47(m，1H)，5.59-5.62(m，1H)，5.67-5.78(m，1H)，5.83-5.87(m，1H)，7.20-7.24(m，1H)，7.30(m，4H)，7.66-7.71(m，1H)，11.32(brs，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.66和9.95(2s)；Scan ES⁺588(M+H)⁺，λ_max＝261.7nm。

实施例16

B350，3′-C-甲基鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

3′-C-甲基鸟苷-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)H-膦酸酯(E1)：

将3′-C-甲基鸟苷(NM76)(233.7mg，0.79mmol)和化合物A3[参见实施例2的化合物5](504.9mg，0.87mmol)与无水吡啶一起共蒸发，并溶解在该溶剂(11.8mL)中。在-15℃滴加新戊酰氯(193.7μL，1.57mmol)，将溶液在该温度下搅拌2h。反应混合物用二氯甲烷稀释，用0.5M NH₄Cl水溶液中和。混合物在二氯甲烷和0.5M NH₄Cl水溶液之间分配，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发两次。粗制混合物用硅胶塞过滤，用含0-10％甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸梯度洗脱，以提供所需的产物E1(250mg，42％)。化合物E1：³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.93(s)，9.13(s)。LR LC/MS(M+H⁺)521.1(5.88分钟)。UV：λ_max＝262nm。R_f 0.21(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

N-苯甲胺基-3′-C-甲基鸟苷-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯(E2)：

向化合物E1(250mg，0.33mmol)在无水四氯化碳(3.3mL)中的溶液中滴加苯甲胺(178μL，1.637mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h 30，并蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)。粗制混合物用硅胶塞过滤，用含0-30％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到化合物E2，为白色固体(290mg，定量产率)。化合物E2：³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)δ9.91(s)，9.74(s)。LR LC/MS(M+H⁺)869.3(M-H^-)867.7(5.20分钟)。UV：λ_max＝253nm。R_f 0.13(MeOH/CH₂Cl，10/90，v/v)。

N-苯甲胺基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)-3′-C-甲基鸟苷-5′-基磷酸酯B350(化合物E3)：

将化合物E2(290mg，0.33mmol)溶解在二氯甲烷(1.16mL)中，并用TFA(113μL)处理。将混合物在室温下搅拌10分钟，然后用乙醇稀释，蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发。对生成的残余物进行硅胶色谱，用含0-30％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，然后通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以得到B350(化合物E3)(15mg，7％，白色冻干粉)。B350(化合物E3)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.60(m，1H，NH)，7.90(s，1H，H-8)，7.30-7.19(m，5H，C₆H₅)，6.47(ls，2H，NH₂)，5.72-5.59(m，2H，H-1′和PNH)，5.51(d，1H，OH-2′，J_OH2′-1′＝8.0Hz)，4.94-4.92(2H，OH-3′和OH)，4.28(m，1H，H-2′)，4.01-3.83(m，7H，H-4′，H-5′，CH₂O和CH₂N)，3.41(m，2H，CH₂OH)，3.02(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝6.0Hz)，1.20(s，3H，CH₃)，1.09(s，6H，2CH₃)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)δ9.86(s)，9.72(s)。LR LC/MS(M+H⁺)627.2(M-H^-)625.5(3.87分钟)。HRFAB-MS C₂₅H₃₆O₉N₆PS(M+H⁺)计算值627.2002，观测值627.2014。UV：λ_max＝251nm。

实施例17

B305，1-[2-C-甲基-β-呋喃核糖基]-3-甲酰胺基-4-氟-吡唑的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例4中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B305(28.3mg，总产率8％)已由它的母体核苷1-[2-C-甲基-β-呋喃核糖基]-吡唑基-3-甲酰胺-4-氟(180mg，0.65mmol)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.75(s，3H)，1.08-1.09(d，J＝3.35Hz，6H)，2.98-3.02(m，2H)，3.40-3.42(m，2H)，3.85-4.03(m，5H)，4.16-4.19(m，2H)，4.89-4.92(m，1H)，5.25-5.29(m，2H)，5.55(s，1H)，5.56-5.64(m，1H)，7.19-7.22(m，1H)，7.26-7.50(m，7H)，8.05(d，J＝4.32Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.75和9.90(2s)；¹⁹F NMR(d₆-DMSO，235MHz)δ(ppm)-170.70(d，J＝61.74Hz，1F)；Scan ES⁺605(M+H)⁺，λ_max＝233.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝4.56分钟λ_max＝235.2nm。

实施例18

B436，2′-C-甲基-7-去氮杂-7-氟-腺苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循与实施例2(过程A，策略b)中制备的前核苷酸的合成过程类似的过程，前核苷酸B436(30mg，总产率9％)已由它的母体核苷2′-C-甲基-7-去氮杂-6-NH-二甲氧基三苯甲基-腺苷(320mg，0.53mmo1)合成，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.66(s，3H)，1.02(s，6H)，2.95-2.98(t，J＝6.10Hz，2H)，3.35(d，J＝5.49Hz，2H)，3.77-3.85(m，3H)，3.88-3.95(m，3H)，4.03-4.18(m，2H)，4.83-4.86(t，J＝5.44Hz，1H)，5.14(s，1H)，5.21-5.25(t，J＝7.40Hz，1H)，5.55-5.66(m，1H)，6.14(s，1H)，6.9-7.3(m，8H)，8.01(s，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.77和9.89(2s)；¹⁹F NMR(d₆-DMSO，235MHz)δ(ppm)-166.85(d，J＝14.16Hz，1F)；Scan ES⁺628(M+H)⁺，λ_max＝280.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝4.78分钟λ_max＝280.8nm。

实施例19

B589，4′-C-甲基尿苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循实施例4描述的过程，由4′-C-甲基尿苷(A437)(200mg，0.77mmol)起始，首先生成中间产物P3(62mg，11％。³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.15，9.56(2s)；Scan ES⁺747(M+Na)⁺，λ_max＝259.7nm)，然后在第二步期间生成化合物P4(28mg，39％。Scan ES⁺852(M+Na)⁺)，由二氧杂环己烷冻干后最终获得所需的前药B589，为白色粉末(21mg，58％)。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.10(s，6H)，1.13(s，3H)，3.03(t，J＝6.42Hz，2H)，3.15(d，J＝5.29Hz，1H)，3.42(d，J＝5.67Hz，2H)，3.72-4.16(m，7H)，4.06-4.15(m，1H)，4.92(t，J＝5.29Hz，1H)，5.22(d，J＝5.29Hz，1H)，5.36-5.38(2d，1H)，5.57-5.60(2d，1H)，5.64-5.70(m，1H)，5.78-5.80(2d，1H)，7.20-7.31(m，5H)，7.60-7.64(2d，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.58，9.77(2s)；Scan ES⁺610(M+Na)⁺，λ_max＝260.7nm。

实施例20

B678，4′-C-氟甲基鸟苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

遵循实施例3中描述的过程A的过程，由4′-C-氟甲基鸟苷(A402)(69.4mg，0.22mmol)起始，在第一步后，获得化合物P1(67.5mg，39％)作为中间产物。Scan ES^-780(M-H)^-。第二步导致中间产物P2形成(57.5mg；76％)。将化合物P2(26.3mg，0.03mmol)溶解在二氯甲烷(1ml)中，用蒙脱石K10(150mg)处理，在室温下搅拌1h。将反应混合物直接放在硅SPE管上，用含0-100％MeOH的二氯甲烷梯度萃取，以在由二氧杂环己烷/水冻干后得到B678，为白色粉末(7.7mg，40％)。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.09(2 ls，6H)，3.03-3.05(m，2H)，3.42(m，2H)，3.87-4.00(m，6H)，4.15-4.24(m，2H)，4.43-4.66(m，2H)，4.74(m，1H)，4.93(m，1H)，5.52(d，J＝4.36Hz，1H)，5.58(m，1H)，5.70-5.73(m，1H)，5.75-5.77(d，J＝8.05Hz，1H)，6.52(ls，2H)，7.24-7.35(m，5H)，7.92(2s，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.70，9.83(2s)；¹⁹F NMR(d₆-DMSO，235MHz)δ(ppm)-235.92，-236.25(2s)；Scan ES⁺645(M+H)⁺，λ_max＝250.7nm HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝3.91分钟λ_max＝251.1nm。

实施例21

B704，阿昔洛韦的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

方案1

9-(2-羟基-乙氧基甲基)-鸟嘌呤-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)H-膦酸酯(F1)：

将阿昔洛韦(200mg，0.89mmol)和化合物A3[参见实施例2的化合物5](674.2mg，1.15mmol)与无水吡啶一起共蒸发，并在该溶剂(13.3mL)中溶解。在-15℃滴加新戊酰氯(162μL，1.15mmol)，将溶液在室温下搅拌2h。反应混合物用二氯甲烷稀释，用0.5M NH₄Cl水溶液中和。混合物在二氯甲烷和0.5MNH₄Cl水溶液之间分配，合并有机相，用Na₂SO₄干燥，减压蒸发(水浴温度不超过30℃)，并与甲苯共蒸发两次。粗制混合物用硅胶塞过滤，用含0-15％甲醇的二氯甲烷+0.2％乙酸梯度洗脱，以提供所需的产物F1(602mg，98％)。化合物F1：LR LC/MS(M+H⁺)691.9(M-H^-)690.0(4.82分钟)。UV：λ_max＝254nm。

N-苯甲胺基-9-(2-羟基-乙氧基甲基)-鸟嘌呤-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯(F2)：

向化合物F1(602mg，0.87mmol)在无水四氯化碳(8.7mL)中的溶液中滴加苯甲胺(475μL，4.35mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h 30，并蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)。对粗制混合物进行硅胶色谱，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到化合物F2，为白色固体(550mg，79％)。化合物F2：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.77(s，1H，H-8)，7.58-7.17(m，20H，4 C₆H₅)，6.68(ls，2H，NH₂)，5.59(m，1H，PNH)，5.32(s，2H，OCH₂N)，3.92-3.78(m，6H，CH₂SCH₂O，CH₂N，POCH₂CH₂O)，3.51(t，2H，POCH₂CH₂O，J_CH2-CH2＝5.2Hz)，3.16(s，2H，CH₂OTr)，3.00(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝5.6Hz)，1.12(s，6H，2CH₃)。¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ204.0(C＝O)，157.2(C-4)，154.6(C-2)，151.8(C-6)，143.9(4C，4C₆H₅)，136.9(C-8)，128.9-127.2(20C，4C₆H₅)，117.0(C-5)，86.3(1C，C(C₆H₅)₃)，72.3(OCH₂N)，70.0(CH₂OTr)，68.2(POCH₂CH₂O)，64.8(POCH₂CH₂O)，64.2(CH₂SCH₂O)，50.8(C(CH₃)₂)，44.7(CH₂N)，28.8(CH₂S)，22.8(2C，C(CH₃)₂)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)δ9.79(s)。LR LC/MS(M+H⁺)797.2(5.15分钟)。UV：λ_max＝254nm。R_f 0.57(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

N-苯甲胺基-9-(2-羟基-乙氧基甲基)-鸟嘌呤-5′-基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯B704(化合物F3)：

将化合物F2(550mg，0.69mmol)溶解在二氯甲烷(2.2mL)中，并用TFA(220μL)处理。混合物在室温下搅拌15分钟，通过固相萃取柱过滤，用含0-15％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，然后通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以得到B704(化合物F3)，(103mg，27％，白色冻干粉)。B704(化合物F3)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.57(ls，1H，NH)，7.79(s，1H，H-8)，7.29-7.18(m，5H，C₆H₅)，6.49(Is，2H，NH₂)，5.55(m，1H，PNH)，5.33(s，2H，OCH₂N)，4.92(t，1H，OH，J_OH-CH2＝5.2Hz)，3.94-3.73(m，6H，CH₂SCH₂O，CH₂N，POCH₂CH₂O)，3.60(t，2H，POCH₂CH₂O，J_CH2-CH2＝4.2Hz)，3.42(d，2H，CH₂OH，J_CH2-OH＝4.4Hz)，3.00(t，2H，CH₂S，J_CH2S-CH2O＝6.4Hz)，1.10(s，6H，2CH₃)。¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ204.4(C＝O)，157.2(C-4)，154.4(C-2)，151.9(C-6)，141.0(1C，C₆H₅)，138.1(C-8)，128.6-127.2(5C，C₆H₅)，117.0(C-5)，72.3(OCH₂N)，68.8(CH₂OH)，68.2(POCH₂CH₂O)，64.7(POCH₂CH₂O)，64.2(CH₂SCH₂O)，52.2(C(CH₃)₂)，44.7(CH₂N)，28.7(CH₂S)，22.3(2C，C(CH₃)₂)。³¹P NMR(162MHz，DMSO-d₆)：δ9.76(s)。LR LC/MS(M+H⁺)555.9(M-H^-)553.9(3.77分钟)。HRFAB-MS C₂₂H₃₂O₇N₆PS(M+H⁺)计算值555.1791，观测值5551.795。UV：λ_max＝250nm。

实施例22

B390，2′-C-甲基-2′，3′-二-O-乙酰基-胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向前核苷酸13(参见实施例2，过程A，策略b)(300mg，0.27mmol)在无水乙腈中的溶液中，连续加入三乙胺(92μl)、乙酸酐(2.2当量，54μl)和4-二甲基氨基吡啶(0.1当量，4mg)。将反应混合物在室温下搅拌2h，并再次加入三乙胺(92μl)、乙酸酐(2.2当量，54μl)和4-二甲基氨基吡啶(0.1当量，4mg)。减压去除溶剂后，粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[0-5％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到被完全保护的前核苷酸(329mg，定量产率)。最后用三氟乙酸(132μl)和二氯甲烷(3.9ml)的混合物处理该化合物。在室温下搅拌1小时30分钟后，再次加入三氟乙酸(132μl)，再搅拌混合物1h。溶剂减压蒸发，并与甲苯共蒸发。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含甲醇[0-10％]的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到B390(36.4mg，21％)，冻干为白色粉末。¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.10(s，6H)，1.33(d，J＝2.60Hz，3H)，2.05(s，6H)，3.01-3.04(t，J＝6.54Hz，2H)，3.31(d，J＝5.45 H，2H)，3.85-3.90(m，2H)，3.94-3.99(m，2H)，4.09-4.11(m，2H)，4.21-4.23(m，1H)，4.90-4.93(t，J＝5.71Hz，1H)，5.22(m，1H)，5.67-5.73(m，2H)，6.20(m，1H)，7.21-7.27(m，7H)，7.54(m，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.69和9.86(2s)；Scan ES⁺671(M+H)⁺，λ_max＝273.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝5.04分钟λ_max＝233.7nm和271.4nm。

实施例23

B302的制备

2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯2′，3′-环碳酸酯衍生物B302的合成

合成使用以下策略：

将被保护的氨基磷酸酯13(1.72g，1.52mmol)在氩气下溶解在无水二氯甲烷(17ml)中。加入1，1′-羰二咪唑(251mg，1.55mmol)，并将反应混合物在氩气下在室温下搅拌1h。

通过TLC的分析(含8％MeOH的DCM)显示起始材料(Rf 0.35)完全转化成产物(Rf 0.56)。HPLC分析(测试方法20，272nm)确认了该状况：9％起始材料(Rt 7.30分钟)和91％产物(Rt 7.97分钟)。

加入更多份CDI(最终一共299mg，1.84mmol)，将反应混合物在室温下搅拌额外24h，在此之后HPLC分析显示1.5％SM和97.5％P。

将反应混合物在真空中蒸发，以得到灰白色泡沫(1.97g)。通过硅胶塞柱纯化，用乙酸乙酯洗脱，由合适部分的蒸发得到被保护的环碳酸酯14(C₆₅H₆₅N₄O₁₂PS 1157.27gmol^-1)，为白色泡沫(1.62g，产率92％)。TLC(含8％MeOH的DCM)：Rf0.56；HPLC测试20 AUC：99.5％254nm，Rt 7.97分钟；m/z(ESI-)：1155.9[M-H]^-100％；m/z(ESI+)：1157.5[M+H]⁺100％，1179.5[M+Na]⁺20％。

将被保护的环碳酸酯14(1.50g，1.30mmol)在室温下在氩气下溶解在无水二氯甲烷(15ml)中。向反应混合物中滴加无水三氟乙酸(1.77g，15.5mmol)，然后在室温下搅拌45分钟。HPLC分析(测试方法20，272nm)显示起始材料(Rt 7.97分钟)消失而产物(Rt 3.80分钟)形成。

向反应混合物中加入无水甲醇(5ml)，在25℃在真空中部分去除溶剂(10ml)。向混合物中加入更多甲醇(7ml)，然后蒸发该混合物，以得到橙色残余物。用己烷/TBME 3∶2(12ml)研磨20分钟，产生粘性残余物和不透明的上清液，倾析上清液。用己烷/TBME 3∶2(5ml)再次研磨1h，去除第二次的上清液，与甲醇(3ml)共蒸发后，得到浅色泡沫(1.18g)。

粗产物泡沫通过反相色谱(在1ml乙腈中加样，用含0％、10％、15％、20％、25％、30％乙腈的水洗脱)纯化。相关部分合并，在25℃蒸发溶剂，用乙醇(1ml)追踪，得到环碳酸酯15，B302，为白色泡沫状固体(560mg，产率71％)。

B302：C₂₅H₃₃N₄O₁₀PS 612.59gmol^-1

HPLC AUC(测试方法20)：99％254nm，Rt 3.83分钟

m/z(ESI+)：613.1[M+H]⁺100％；1225.5[2M+H]⁺100％；453.1[N+H]⁺95％

m/z(ESI-)：611.4[M-H]^-80％；1223.9[2M-H]^-50％；451.3[N-H]^-100％

化学式：C₁₈H₂₁N₄O₈P

精确质量：452.1097

v_max(KBr disc)(cm^-1)：3346.4，3206.5 O-H，分子间H键；1815.3 C＝O环5-环碳酸酯；1650.9 br C＝O碱基，硫酯

KF：1.54％H₂O含量

比旋光度：[α]_D ²⁰+9.289(c 10.104mg cm^-3，于DMSO中)

m.p.：100-102℃收缩并软化，104-106℃相变I，127-135℃相变II成为粘性玻璃状物，140-150℃部分熔化成为粘性残余物，200-210℃分解成褐色粘性材料

元素分析：计算值：C 49.02％；H 5.43％；N 9.15％

观测值：C 49.30％；H 5.26％；N 9.30％-伴有0.26％F存在(来自TFA)

NMR：用¹H、¹³C、³¹P、COSY、TOCSY、DEPT、HSQC和HMBC进行归属

H NMRδ_H(400MHz，d6-DMSO)：1.11(6H，s，(CH₃)₂C)，1.30(3H，br-s，CH₃)，3.04(2H，m，CH₂S)，3.44(2H，d，J 4Hz，CH₂OH)，3.87-3.92(2H，m，CH₂O)，3.94-4.01(2H，m，CH₂Ph)，4.15-4.25(2H，m，H-5′，H-5″)，4.37(1H，br-s，H-4′)，4.95(2H，br-s，H-3′，CH₂OH)，5.75-5.77(2H，2×d，J 7Hz，H-5，P-N-H)，6.07(1H，br-s，H-1′)，7.22-7.25(1H，m，Ar-H)，7.29-7.33(4H，m，4×Ar-H)，7.39，7.44(2H，2×br-s，NH₂)，7.62(1H，br-d，J 7Hz，H-6)

¹³C NMRδ_c(100MHz，d6-DMSO)：17.72(CH₃)，21.78(C(CH₃)₂)，28.13，28.21(CH₂S)，44.17(PhCH₂)，51.62(C(CH₃)₂)，63.84，63.89(CH₂O)，64.55(C-5′)，68.29(CH₂OH)，94.23(C-5)，126.70(Ar-C_对位)，127.08，128.11(2×Ar-C_间位，2×Ar-C_邻位)，140.35，140.38(Ar-C_本位)，152.73，154.45(C-2，C-4)，165.69(C-6)，203.87(C＝OS)。C-1′、C-2′、C-3′、C-4′和C＝O变宽成为基线，没有被观察到。

³¹P NMR δ_P(162MHz，d6-DMSO)：9.80，9.94(1P，2×s，比率1.15∶1.00)。

实施例24

B234，3′-O-L-缬氨酸基-2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成使用以下策略：

将Boc保护的缬氨酸(6.72g，30.94mmol)溶解在无水DCM(50ml)中，在室温下在氩气下加入1，1′-羰二咪唑(4.87g，30.01mmol)。最初在活化步骤期间观察到气体的猛烈放出，将混合物在室温下搅拌30分钟。

将被保护的氨基磷酸酯13(10.0g，8.84mmol)在氩气下溶解在独立容器中在无水二氯甲烷(50ml)中。向氨基磷酸酯溶液中滴加活化的Boc-Val溶液，将生成的混合物在氩气下加热到40℃，持续24h。

TLC分析(含8％MeOH的DCM)显示起始材料13(Rf 0.35)完全转化成产物(Rf 0.50)。HPLC分析(测试方法20，272nm)确认了该状况：起始材料(Rt 7.30分钟)和产物(Rt 9.46分钟)。

将反应混合物在真空中蒸发，以得到灰白色泡沫。通过硅胶柱色谱纯化，从DCM加样，用乙酸乙酯/己烷1∶1然后用100％乙酸乙酯洗脱，蒸发合适的部分，得到被保护的缬氨酸酯16(C₇₄H₈₄N₅O₁₄PS 1330.52gmol^-1)，为白色泡沫(10.3g，产率88％)。TLC(乙酸乙酯)：Rf 0.24；HPLC测试20 AUC：97％272nm，Rt 9.46分钟；m/z(ESI-)：1329.29[M-H]^-100％；m/z(ESI+)：1331.68[M+H]⁺25％，303.16[DMTr]⁺100％。

将被保护的缬氨酸酯16(3.0g，2.25mmol)在氩气下在室温下溶解在无水二氯甲烷(22.5ml)中。经3分钟向反应混合物中滴加无水三氟乙酸(4.5ml，58.4mmol)，然后将该反应混合物在室温下搅拌1h。HPLC分析(测试方法20，272nm)显示了起始材料(Rt 9.46分钟)的消失以及产物(Rt 3.33分钟)和显著的Boc中间产物(Rt 4.60分钟)的形成。

向反应混合物再滴加额外的无水三氟乙酸(1.0ml，13.0mmol)，然后在室温下再搅拌该反应混合物1h。HPLC分析(测试方法20，272nm)显示Boc中间产物(Rt 4.60分钟)的消失和产物(Rt 3.33分钟)的形成。

将反应混合物冷却到5℃，并加入无水甲醇(50ml)，搅拌30分钟。在25℃真空去除溶剂。残余物用TBME(50ml×3)处理并研磨，倾析三次的TBME液体。

将残余材料溶解在无水甲醇(5ml)中，加入无水DCM(10ml)和固体碳酸氢钠(5g)，搅拌30分钟，以达到pH6。澄清液体通过针筒式滤器。残留的固体碳酸氢盐用含25％甲醇的DCM(无水，10ml)洗涤，并再次过滤溶液。合并的滤液在真空中浓缩，以得到粗产物17(2.15g)。

粗产物材料通过反相色谱(在15ml水和3ml乙腈中加样，并用含0％、5％、20％、30％乙腈的水洗脱)纯化。相关部分合并，在25℃蒸发溶剂，得到缬氨酸酯17，B234，为白色泡沫状固体(737mg，产率48％)。

B234：C₂₉H₄₄N₅O₁₀PS 685.73gmol^-1

HPLC AUC(测试方法20)：99％254nm，Rt 3.33分钟

m/z(ESI+)：686.3[M+H]⁺100％；1371.6[2M+H]⁺20％；526.1[N+H]⁺20％

m/z(ESI-)：744.4[M+OAc]^-35％；1369.8[2M-H]^-35％；1430.2[2M+OAc]^-15％；524.5[N-H]^-100％

化学式C₂₂H₃₂N₅O₈P

精确质量525.1988

v_max(KBr disc)(cm^-1)：3350.7，3211.9 O-H，N-H；1757.8 C＝O酯；1673.9，1652.0 C＝O硫酯，碱基

KF：1.94％H₂O含量

比旋光度：[α]_D ²⁰+44.370(c 10.033mg cm^-3，于DMSO中)

NMR：用¹H、¹³C、³¹P、COSY、TOCSY、DEPT、HSQC和HMBC进行归属

H NMRδ_H(400MHz，d₆-DMSO)：0.96，0.98(2×3H，2×s，(CH₃)₂CH)，1.03(3H，br-s，CH₃)，1.11(6H，s，(CH₃)₂C)，2.15(1H，m，(CH₃)₂CH)，3.03(2H，m，CH₂S)，3.44(2H，a-s，CH₂OH)，3.85(1H，a-d，J 4.8Hz，CHNH₂)，3.85-3.92(2H，m，CH₂O)，3.92-4.00(2H，m，CH₂Ph)，4.06-4.11(1H，br-m，H-5′)，4.17-4.20(1H，br-m，H-5″)，4.27-4.29(1H，br-m，H-4′)，5.08(1H，br-s，H-3′)，5.73(1H，a-t，J 7.3Hz，H-5)，5.74-5.82(1H，m，P-N-H)，5.92(1H，br-s，H-1′)，7.22-7.25(1H，m，Ar-H)，7.28-7.32(4H，m，4×Ar-H)，7.60，7.63(2×0.5H，2×d，J 7.3Hz，H-6)。没有观察到2×O-H和2×NH₂。

¹³C NMRδ_c(100MHz，d6-DMSO)：17.84，17.96(CH(CH₃)₂)，20.42，20.48(CH₃)，21.78，(C(CH₃)₂)，28.09，28.16(CH₂S)，29.72(CH(CH₃)₂)，44.16(PhCH₂)，51.62(C(CH₃)₂)，57.84(CHNH₂)，63.77，63.81(CH₂O，C-5′)，68.26(CH₂OH)，74.67(C-3′)，77.28(C-4′)，78.09(C-2′)，91.32(C-1′)，94.22(C-5)，126.71(Ar-C_对位)，127.04，127.08，128.11(2×Ar-C_间位，2×Ar-C_邻位)，140.23，140.27，140.32(Ar-C_本位，C-6)，155.06(C-2)，165.32(C-4)，169.65，169.72(CO₂R)，203.84(C＝OS)。C-1′、C-3′、C-4′变宽成为基线但可以观察到。

³¹P NMR δ_P(162MHz，d6-DMSO)：9.63，9.96(1P，2×s，比率1.02∶1.00)

实施例25

B183，2′-C-甲基-NH-4-乙酰基-胞苷的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向B102(参见实施例2)(化合物10，200mg，0.34mmol)在无水二甲基甲酰胺(3.4ml)中的溶液中滴加乙酸酐(1.1当量，34μl)。将反应混合物在室温下搅拌4h，并再次加入10μl乙酸酐。将反应混合物搅拌过夜，减压蒸发溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-10％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以得到所需的乙酰化的前核苷酸B183(169mg，79％)，作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.93(s，3H)，1.09(s，6H)，2.09(s，3H)，3.01-3.04(t，J＝6.54Hz，2H)，3.40-3.42(d，J＝5.10Hz，1H)，3.53-3.62(m，2H)，3.83-3.91(m，1H)，3.94-4.01(m，4H)，4.10-4.15(m，1H)，4.20-4.25(m，1H)，4.88-4.91(t，J＝5.20Hz，1H)，5.23(s，1H)，5.33-5.37(t，J＝7.19Hz，1H)，5.67-5.78(m，1H)，5.93(s，1H)，7.18-7.21(m，1H)，7.27-7.32(m，5H)，7.96和8.03(2d，J＝7.59Hz，1H)，10.87(s，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.74和9.98(2s)；Scan ES⁺629(M+H)⁺，λ_max＝300.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝4.89分钟λ_max＝302.1nm

实施例26

B187，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-(2-(三氟甲基)苯甲基)氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物8(参见实施例2，过程A，策略a)(1.4g，1.3mmol)在无水四氯化碳(13ml)中的溶液中，滴加N-2-(三氟甲基)苯甲胺(10当量，2.3g)。反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-3％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(60％)。将该化合物遵循实施例2策略A中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B187(245mg，35％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.92(s，3H)，1.09(s，6H)，3.05(t，J＝6.45Hz，2H)，3.29(s，1H)，3.41(d，J＝5.60Hz，2H)，3.91-3.93(m，3H)，4.17-4.21(m，4H)，4.91(t，J＝5.59Hz，1H)，5.06(d，J＝4.25Hz，1H)，5.23(t，J＝7.50Hz，1H)，5.65-5.67(m，1H)，5.76-5.83(m，1H)，5.91(s，1H)，7.08和7.16(2s，2H)，7.45-7.79(m，5H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.57-9.78(2s，1P)；¹⁹F NMR(d₆-DMSO，235MHz)δ(ppm)-60.79(s，3F)；Scan ES⁺655(M+H)⁺，λ_max＝280.73nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝5.08分钟λ_max＝271.4nm。

实施例27

B399，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-(4-(三氟甲基)苯甲基)氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物8(参见实施例2，过程A，策略a)(1.0g，0.94mmol)在无水四氯化碳(10ml)中的溶液中滴加N-4-三氟甲基苯甲胺(5当量，670μl)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(84％)。将该化合物遵循实施例2策略A中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B399(204mg，40％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.91-0.92(d，J＝2.09Hz，3H)，1.09(s，6H)，3.02-3.06(m，2H)，3.41(d，J＝6.17Hz，2H)，3.53-3.57(m，1H)，3.84-3.94(m，3H)，4.03-4.13(m，3H)，4.18-4.23(m，1H)，4.91-4.94(t，J＝5.48Hz，1H)，5.06(s，1H)，5.23-5.27(t，J＝6.82Hz，1H)，5.65-5.67(m，1H)，5.79-5.87(m，1H)，5.90(s，1H)，7.09和7.16(2s，2H)，7.48-7.55(m，3H)，7.64-7.67(m，2H)；¹⁹F NMR(d₆-DMSO，235MHz)δ(ppm)-60.79(s，3F)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.55和9.76(2s)；ScanES⁺655(M+H)⁺，λ_max＝270nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝5.03分钟λ_max＝271nm。

实施例28

B204，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-(正甲基-正辛基-胺)氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物8(参见实施例2，过程A，策略a)(950mg，0.89mmol)在无水四氯化碳(9ml)中的溶液中滴加正甲基正辛胺(10当量，1.28g)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-3％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(88％)。将该化合物遵循实施例2策略A中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B204(52mg，7％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.83(m，3H)，0.93-0.94(d，J＝3.75Hz，3H)，1.10(s，6H)，1.22(s，10H)，1.44(m，2H)，2.56(d，J＝8.2Hz，3H)，2.88-2.93(m，2H)，3.31(m，2H)，3.43(d，J＝5.60Hz，2H)，3.50-3.53(m，1H)，3.91-3.93(m，3H)，4.04-4.07(m，1H)，4.13-4.16(m，1H)，4.91(t，J＝5.59Hz，1H)，5.06(s，1H)，5.23(m，1H)，5.65-5.67(m，1H)，5.91(s，1H)，7.08-7.16(m，2H)，7.50-7.57(m，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)10.52和10.66(2s)；Scan ES⁺623(M+H)⁺，λ_max＝280.73nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝6.07分钟λ_max＝274.9nm。

实施例29

B244，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N，N-(二丁基胺)氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(1.5g，1.46mmol)在无水四氯化碳(15ml)中的溶液中滴加二丁基胺(10当量，2.5ml)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(61％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B244(21mg，4％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.76-0.81(td，J＝2.40Hz和J＝7.43Hz，6H)，0.86-0.87(d，J＝5.51Hz，3H)，1.05(s，6H)，1.11-1.19(m，4H)，1.33-1.39(m，4H)，2.80-2.87(q，J＝9.50Hz，J＝8.67Hz，4H)，3.01-3.04(t，J＝6.23Hz，2H)，3.42-3.43(m，2H)，3.50-3.60(m，1H)，3.81-3.88(m，3H)，3.97-4.01(m，1H)，4.07-4.10(m，1H)，4.84-4.87(m，1H)，5.06(s，1H)，5.23和5.29(2d，J＝8.0Hz，1H)，5.70(s，1H)，5.91(brs，1H)，7.10和7.17(2s，2H)，7.49和7.55(2d，J＝8.0Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)10.44和10.56(2s)；Scan ES⁺609(M+H)⁺，λ_max＝279.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝5.59分钟λ_max＝274.9nm。

实施例30

B308，2′-C-甲基-胞苷的羟基-tBuSATE N-甲基苯甲基氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(2.7g，2.6mmol)在无水四氯化碳(26ml)中的溶液中滴加N-苯甲基甲胺(5当量，1.67ml)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供希望的被保护的核苷，为泡沫(44％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B308(43mg，2％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.93-0.94(s，3H)，1.10(s，6H)，2.43-2.45(d，J＝4.26Hz，3H)，3.13(t，J＝6.23Hz，2H)，3.36-3.37(d，J＝5.24Hz，2H)，3.56-3.60(m，2H)，3.97-4.01(m，3H)，4.07-4.21(m，3H)，4.92-4.94(m，1H)，5.08(s，1H)，5.30-5.32(m，1H)，5.59-5.67(2d J＝8.0Hz，1H)，5.91(s，1H)，7.13(m，2H)，7.42-7.50(m，5H)，7.45-7.54(2d J＝8.0Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)10.53和10.34(2s)；Scan ES⁺601(M+H)⁺，λ_max＝268.7；HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝3.37分钟λ_max＝274.9nm。

实施例31

B353，2′-C-甲基-胞苷的羟基-tBuSATE N-哌啶氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(300mg，0.29mmol)在无水四氯化碳(3ml)中的溶液中滴加哌啶(5当量，145μl)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(55％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B353(19mg，22％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.92(d，J＝2.56，3H)，1.10(s，6H)，1.44-1.43(m，4H)，1.50-1.53(m，2H)，2.97-3.02(m，4H)，3.07-3.10(t，J-6.66Hz，2H)，3.42(d，J＝5.64Hz，2H)，3.56-3.60(m，1H)，3.89-3.94(m，3H)，4.04-4.10(m，1H)，4.13-4.20(m，1H)，4.91-4.93(t，J＝5.64Hz，1H)，5.06(s，1H)，5.25-5.31(2d，J＝9.31Hz，1H)，5.68(m，1H)，5.90(s，1H)，7.17和7.10(2s，2H)，7.50-7.55(2d，J＝9.01Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)8.75和8.59(2s)；Scan ES⁺565(M+H)⁺，λ_max＝275.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过6分钟)t_R＝3.08分钟λ_max＝273.7nm。

实施例32

B354，2′-C-甲基-胞苷的羟基-tBuSATE N-环己胺氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(300mg，0.29mmol)在无水四氯化碳(3ml)中的溶液中滴加环己胺(5当量，170μl)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。将粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(55％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B354(44mg，50％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.92(d，J＝2.56，3H)，1.10(s，6H)，1.13(m，5H)，1.46-1.47(m，1H)，1.62(m，2H)，1.76-1.78(m，2H)，2.80(m，1H)，3.07-3.10(t，J＝6.66Hz，2H)，3.42(d，J＝5.64Hz，2H)，3.56-3.60(m，1H)，3.89-3.94(m，3H)，4.04-4.10(m，1H)，4.13-4.20(m，1H)，4.91-4.93(t，J＝5.64Hz，1H)，5.06(m，2H)，5.25和5.31(2d，J＝7.2Hz，1H)，5.68-5.71(m，1H)，5.90(s，1H)，7.19和7.09(2s，2H)，7.50和7.55(2d，J＝7.2Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.05和8.91(2s)Scan ES⁺579(M+H)⁺，λ_max＝280.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过6分钟)t_R＝3.23分钟λ_max＝274.9nm。

实施例33

B391，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-吗啉代氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(350mg，0.34mmol)在无水四氯化碳(3.4ml)中的溶液中滴加吗啉(10当量，300μl)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(70％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B391(53mg，49％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.92(d，J＝2.56，3H)，1.10(s，6H)，3.0(m，4H)，3.07-3.10(t，J＝6.66Hz，2H)，3.31(s，2H)，3.42(d，J＝5.64Hz，2H)，3.56-3.60(m，3H)，3.89-3.94(m，3H)，4.04-4.10(m，1H)，4.13-4.20(m，1H)，4.91-4.93(t，J＝5.64Hz，1H)，5.08(s，1H)，5.25-5.31(m，1H)，5.68-5.71(d，J＝7.2Hz，1H)，5.90(s，1H)，7.18和7.12(2s，2H)，7.52和7.50(2d，J＝7.6Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)7.76和7.61(2s)；Scan ES⁺567(M+H)⁺，λ_max＝279.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝3.42分钟λ_max＝273.7nm。

实施例34

B395，2′-C-甲基胞苷的羟基-tBuSATE N-吡咯烷氨基磷酸酯衍生物的制备

合成方案：

向化合物12(参见实施例2，过程A，策略b)(500mg，0.49mmol)在无水四氯化碳(5ml)中的溶液中滴加吡咯烷(5当量，200μl)。将反应混合物在室温下搅拌3h，减压去除溶剂。粗制混合物通过硅胶柱色谱(洗脱液：含[0-5％]甲醇的二氯甲烷分级梯度)纯化，以提供所需的被保护的核苷，为泡沫(87％)。将该化合物遵循实施例2策略B中描述的实验条件转化成氨基磷酸酯前药B395(48mg，21％)，并作为白色冻干粉分离。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.93-0.94(d，J＝3.75Hz，3H)，1.10(s，6H)，1.78-1.79(q，J＝5.80Hz，4H)，3.09-3.09(m，6H)，3.42(s，2H)，3.57-3.59(m，1H)，3.92-3.93(m，3H)，4.09-4.11(m，1H)，4.16-4.18(m，1H)，4.93(brs，1H)，5.10(s，1H)，5.28-5.32(t，J＝8.00Hz，1H)，5.70(d，J＝8.0Hz，1H)，5.89(s，1H)，7.27和7.40(2s，2H)，7.55和7.61(2d，J＝8.0Hz，1H)；³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)7.56和7.69(2s)；Scan ES⁺551(M+H)⁺，λ_max＝275.7nm；HPLC(0-100％ACN，经过10分钟)t_R＝3.88分钟λ_max＝273.7nm。

实施例35

抗HBV活性

将实施例1的化合物(NM 204)(L-ddA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物)(A550)与HBV-感染的HepG2细胞接触。依照标准技术测量EC₅₀值。如下表中显示的，与母体分子LddA相比，实施例1的化合物显示了显著的活性。

实施例36

用于ddATP测量的校准曲线的制备

通过例如肝细胞的甲醇提取物的液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)进行2′-3′-二脱氧腺苷-5′-三磷酸酯(ddATP)(2′-3′-二脱氧腺苷(ddA)的三磷酸核苷)浓度的测量。

通过与标准曲线比较，测量ddATP的浓度。

TP-ddA的工作储液由从Sigma Chemical公司购买的在去离子水中含100pmol/μl ddATP(其四钠盐＞91％纯度)的储液如下制备：

ddATP工作储液和ddATP标准曲线的制备

1.工作储液#1

测试储液浓度取样体积 DIH₂O 总体积浓度摩尔/10

化合物 pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 2000 2000 4000 50.0 500

2.工作储液#2

储液浓度取样体积 DIH₂O 总体积浓度摩尔/10

测试物品

pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 1000 3000 4000 25.0 250

3.工作储液#4(由储液#1制备)

储液浓度取样体积 DIH2O 总体积浓度摩尔/10

测试物品

pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 500 3500 4000 12.5 125

4.工作储液#5(由储液#1制备)

储液浓度取样体积 DIH2O 总体积浓度摩尔/10

测试物品

pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 200 3800 4000 5.0 50

5.工作储液#6(由储液#1制备)

储液浓度取样体积 DIH2O 总体积浓度摩尔/10

测试物品

pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 100 3900 4000 2.5 25

6.工作储液#7(由储液#1制备)

储液浓度取样体积 DIH2O 总体积浓度摩尔/10

测试物品

pmol/μl μL 体积μL μL pmol/μl μl

TP-ddA 100 40 3960 4000 1.0 10

内部标准(ISTD)工作储液由从Sigma Chemical公司购买的2-脱氧腺苷5-三磷酸酯的0.50mg/mL储液制备。

储液浓度取样体积 MeOH 总体积浓度浓度

ISTD

μg/mL μL 体积μL μL μg/mL pmol/mL

dATP 500 200 9800 10000 10 500

在一些实施方案中，校准标准如下制备，使用校对标准的制备

肝脏样品：

在一些实施方案中，使用以下HPLC条件进行HPLC MS，例如HPLC串联MS分析仪器方法：

在Phenomenex Luna Amino 3μm 100A，30×2mm柱上进行HPLC，使用流动相：A：70％10mM NH4OAc 30％ACN pH6.0；和B：70％1mM NH4OAc30％ACN pH10.5如下：

梯度洗脱程序：

步骤时间(分钟) 流速(μl/分钟) A(％) B(％)

0 0 400 60 40

1 1.1 400 60 40

2 1.11 400 40 60

3 2.11 400 30 70

4 2.6 400 20 80

5 3.1 400 0 100

6 5.5 400 0 100

7 5.51 400 60 40

8 10 400 60 40

注射体积： 50ul

对MS的流速： 0.400mL/分钟，流体无分裂

多重反应监测(MRM)条件：(API3000)

离子化模式：阳离子电喷雾(ESI+)

离子喷雾电压(IS)： 5000V

温度(TEM)： 550℃

涡轮IS气体 8L/分钟

喷雾器(NEB)： 14

CAD气体设置(CAD)： 6

去簇电位(DP) 68V

碰撞能量(CE) 27eV

进入/离开电位(EP/CXP) 10V/11V

化合物前体离子＝＞产物离子

ddA三磷酸酯 476.2＝＞135.9

ddA二磷酸酯 396.2＝＞135.9

dA三磷酸酯(ISTD) 460.2＝＞135.9

^*Luna Amino柱直接连接到适合2.1mm Phenomenex柱(包括C18柱)的“Security Guard”柱套的入口端。

实施例37

肝细胞中的体外磷酸化

原代肝细胞(大鼠、食蟹猴或人)以0.8×10⁶在带胶原涂层的12孔板中接种，并让其贴壁4-6小时，在此之后，接种培养基被替换成无血清的培养基，并让细胞适应新培养基过夜。第二天，让细胞暴露于在新鲜培养基中制备的10和50μM测试物品(NM204)(A550)中1、4、8和24小时，所述新鲜培养基来自DMSO中的储液(最终DMSO浓度为0.1％)。在每个时间点，收集等分试样(500μl)，并立即将其加入到500μl乙腈中，并在-20℃储存直至分析。去除剩余的暴露培养基，并用冰冷的PBS洗涤细胞单层(粘在培养皿上)两次。小心地吸去所有残留的PBS，通过在1mL 70％冰冷的甲醇中刮取来收获细胞。细胞样品放置在-20℃过夜，并在第二天通过离心去除细胞残骸。去除上清液，并在用LC/MS分析前过滤。通过使用未处理的经过类似操作的细胞制备标准曲线，除了在70％甲醇中收获前，向洗涤过的单层中加入在甲醇中制备的10μlLddATP标准溶液。这些对照样品然后如对测试样品所述的处理和分析。

结果显示如下：

如数据所显示的，在肝细胞中检测出显著水平的L-ddATP。在猴肝细胞中，该水平在8小时显示达到最高水平，接着快速降低。相比之下，在大鼠和人肝细胞中的水平在8小时后显示为稳定。

实施例38

大鼠中的体内研究

以20(口服)或10(I.V.)mg/Kg体重的剂量单次静脉注射(I.V.)或口服施用A550(NM-204)后，评估NM-204(实施例1的化合物(L-ddA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物)(A550)在大鼠肝脏中的分布。给药溶液在同一天给药施用前制备。

在特定的时间点(对IV动物为第1和3小时，或对口服动物为第1，3和8小时)，各只动物通过CO₂气体安乐死，接着通过腹静脉放血。在杀死后立即收集肝脏，在液氮中快速冷冻，放置在干冰上，稍后在-70℃储存，直至分析。

来自对照肝脏提取物的校准标准的制备：

借助于组织取芯器(Harris Unicore，8.0mm，VWR，)从完整的冷冻肝脏(Bioreclamation公司，Hicksville，NY)获取对照大鼠肝脏样品。将各个～0.1g的样品与0.940mL的80％MeOH/20％DIH₂O一起放置在独立的2mL聚乙烯小瓶中，并使用机械组织破坏器(Tissue Master，Omni-International公司，Marietta GA)制备匀浆。小瓶接收10μl工作储液的等分试样和50μl ISTD的等分试样，之后涡旋～30秒。混合物在-20℃储存过夜，且第二天在台式离心机中离心10分钟去除。将每份上清液转移到独立的离心过滤单元(0.45μm)，将生成的滤液转移到HPLC小瓶中进行LC/MS/MS分析。校准标准中ddATP的终浓度是1000、500、250、125、50和0pmol/ml。各个校准标准直接以50μL体积注射到离子交换柱上以供分析。对来自照肝脏提取物的校准标准进行标准曲线分析。

通过离子交换色谱方法以及多重反应监测(MRM)检测模式的在线阳离子化ESI-MS/MS检测，进行ddATP分析。由5个校准样中的4个获得的峰面积，允许标准曲线的构建，该曲线在50-1000pmol/ml浓度范围内显示良好的线性(R²＝0.9996)。这等同于使用样品制备的每克肝脏5-100pmol的范围。使用实施例5中所述的HPLC MS MS条件。对包含少得多的盐的肝细胞提取物，通过LC/MS/MS方法证实的数量下限是例如～0.2pmol/mL。

显示A550(NM204)(显示进入肝细胞的化合物)和LddATP(显示肝脏中氨基磷酸酯部分的裂解和ddA三磷酸化成为活性三磷酸盐)的胞内水平的结果显示如下：

^*大鼠的肝细胞数量是每克肝脏114×106个细胞(Toxicology in Vitro 20(2005)1582-1586。

因此，这些结果显示了化合物可被用来提高肝脏中的药物浓度。这些结果还显示肝细胞中形成的活性三磷酸盐浓度提高。

实施例39

HCV复制子测试

将包含HCV Con1次基因组复制子的Huh-7细胞(GS4.1细胞)(C.Seeger；Fox Chase University，Philadelphia，PA，USA)在补充了10％胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺、110mg/L丙酮酸钠、1×非必需氨基酸、100U/mL青霉素-链霉素和0.5mg/mL G418(Invitrogen)的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中生长。对于剂量应答测试，细胞以7.5×10³个细胞/孔在96孔板中接种，体积为50μL，并在37℃/5％CO₂培养。铺盘后三小时，加入50μL的10份2倍连续稀释的化合物(最高浓度75μM)，将细胞培养物在37℃/5％CO₂在0.5％DMSO存在下培养。或者，化合物在单一浓度15μM测试。在所有情况下，缺乏HCV复制子的Huh-7细胞作为阴性对照。细胞在化合物的存在下培养72小时，之后通过酶联免疫吸附测试(ELISA)监测这些细胞的NS4A蛋白的表达。为此，用1∶1的丙酮∶甲醇将板固定1分钟，用含0.1％Tween 20的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤板两次，在室温下用包含10％FBS的TNE缓冲液将板封闭1小时，然后将板在37℃与在相同缓冲液中稀释的抗NS4A小鼠单克隆抗体A-236(ViroGen)一起培养2h。用含0.1％Tween 20的PBS洗涤三次后，细胞在37℃与含10％FBS的TNE中的抗小鼠免疫球蛋白G-过氧化物酶偶联物一起培养1小时。如上所述洗涤后，反应用邻苯二胺(Zymed)显影。30分钟后用2N H₂SO₄停止反应，使用Sunrise Tecan分光光度计在492nm读取吸光度。用Tecan Magellan软件基于四个参数使用S形非线性回归分析由％抑制对浓度的数据确定EC₅₀值。在单一浓度筛选时，结果被表示为在15μM的％抑制。对于细胞毒评估，GS4.1细胞用如上所述的化合物处理，细胞生存能力使用Cell Titer 96 AQ_ueous单溶液细胞增殖测试(Promega)监测。如上所述，用Tecan Magellan软件由％细胞毒性对浓度的数据确定CC₅₀值。

结果

以下表格中显示的化合物依照上面描述的复制子测试来测试。

ELISA 2测试中的EC₅₀如下提供：

+++≤1μm，++＞1-10μm，+＞10μm

CC₅₀如下提供：

++≤75μm.+＞75μm

实施例40

HBV药物敏感性测试

a)带胶原-I涂层的细胞培养板以每孔0.25-0.5×10⁶个细胞的密度在2ml生长/筛选培养基中接种细胞。

b)在100％DMSO中新鲜配制药物储液，为200×储液。制备测试化合物的7份4倍稀释液，范围从2.5μM到0.0006μM(终浓度)。药物稀释母液被分成4个等分试样，然后在-20℃储存，直至使用。

c)细胞接种后1天，通过加入10μl药物稀释液和2ml新鲜的生长/选择培养基，开始药物处理。因此，DMSO终浓度不超过0.5％。无药物的对照孔接受含10μl DMSO的新鲜培养基。

d)每隔一天用2ml新鲜的药物组合/培养基处理细胞，总计8天。然后如下所述在第10天收集细胞裂解液，并进行内源性聚合酶测试。

为EPA分析制备包含核壳体的裂解液

a)最后一次药物处理后两天，收获细胞。

b)小心地吸去培养基，用1ml PBS冲洗细胞单层一次。

c)向每个孔中加入1ml裂解缓冲液(50mM Tris-HCl pH7.5/150mMNaCl/5mM MgCl₂/0.2％NP-40)。需要去污剂将外包膜从病毒颗粒中剥去并允许捕获内部核壳体。板保持在冰上＞30分钟。

d)将裂解的细胞转移到1.5ml微量离心管中。

e)通过在室温下在14,000rpm旋转5分钟，澄清裂解液。

f)将澄清的裂解液转移到新的管中，立即用干冰冷冻，然后在-80℃储存，直到可以如下所述进行内源性聚合酶测试。

细胞裂解液的内源性聚合酶测试(EPA)

a)EPA基本上如在Seifer等(1998).J.Virol.72：2765-2776中所述的进行。澄清的裂解液在室温下解冻。

b)胞内HBV核壳体用多克隆兔抗HBcAg抗体在4℃过夜从细胞质裂解液中免疫沉淀，并固定在蛋白A琼脂糖CL-4B磁珠上。

c)用1ml EPA洗涤缓冲液(75mM NH₄Cl、50mM Tris-HCl pH7.4、1mMEDTA)洗涤已固定的壳体两次后，通过加入50μl包含去污剂的EPA混合物(50mM Tris-HCl pH7.4，75mM NH₄Cl，1mM EDTA，20mM MgCl₂，0.1mMβ-ME，0.5％NP-40，100μM冷的dGTP、TTP、dCTP和50nM ³³P-dATP)开始内源性聚合酶反应，并在37℃培养过夜。需要去污剂来提高核壳体的渗透性。

d)在37℃用1mg/ml蛋白酶K消化1小时后，通过苯酚/氯仿萃取，释放内源性的³³P-标记的HBV DNA。

e)然后用一体积的5M NH₄-醋酸盐和2.5体积的100％EtOH沉淀核酸，在Tris-硼酸盐缓冲液中通过1％天然琼脂糖凝胶分离。

f)通过在0.4 N NaOH中的毛细管转移，凝胶在室温下过夜印迹杂交到带正电荷的尼龙膜上。

g)将干燥的膜在室温下过夜暴露于磷光影像屏幕(GE Healthcare)，然后扫描(Storm 860，GE Healthcare)，用ImageQuant软件(GE Healthcare)定量。

h)使用XLfit 4.1软件生成剂量应答曲线。由若干独立实验计算以50％抑制内源性HBV聚合酶活性的平均有效药物浓度。

细胞毒测定

在HepG2细胞中进行标准的体外细胞毒测试。将细胞对药物暴露9天。使用CellTiter 96 Aqueous单溶液细胞增殖测试，根据制造者的说明书，通过MTS染色测定细胞生存能力。

a)将HepG2细胞以每孔7×10³个细胞接种到96孔组织培养板中的100μl新鲜的生长培养基中。

b)药物储液在100％DMSO中配制为400×储液，并在-20℃储存，直至使用。

c)细胞铺板后四小时，制备药物稀释液，并随后加入细胞。细胞在总量200μl的包含0.25％DMSO的新鲜生长培养基中，接收了多达100μM的药物。对照孔接收含有0.25％DMSO的生长培养基。板在37℃、5％CO₂下培养。

d)如上所述，每隔一天用新鲜的生长培养基和新鲜的药物稀释液处理细胞，总计8天。

e)在第9天，通过加入20μl的MTS CellTiter 96 Aqueous单溶液，测定HepG2细胞的细胞生存能力。在37℃培养4小时后，在Victor V读板器(PerkinElmer)中，在A₄₉₀nm测量吸光度。

f)CC₅₀浓度使用XLfit 4.1软件测定。

在总计4个HBV药物敏感性测试中测试PMEA、B261(PMEA的羟基-tBuSATE N-苯甲基氨基磷酸酯衍生物，如实施例10表格中所示)的体外抗病毒活性，使用LdT作为对照。下面的表格提供了结果：

HBV细胞测试(EPA读出)

细胞毒性抗病毒活性^*

药物 (CC₅₀，μM) (EC₅₀，μM) SI

PMEA ＞100 0.328±0.082 ＞310

B261 19.6 0.016±0.004 1225

LdT ＞100 0.366±0.056 ＞273

细胞毒和功效在胶原板中测定。

实施例41

肝脏亚细胞部分中的总新陈代谢测定(母体损耗)

NADPH培养。微粒体或S9培养在终体积0.5mL中进行。在37℃将悬浮在培养缓冲液(100mM磷酸钾，pH7.4，5mM MgCl₂和0.1mM EDTA)中的汇集肝微粒体或S9蛋白(1.0mg/mL)与10-50μM来自DMSO中的储液的OHSATE氨基磷酸酯化合物(DMSO终浓度为0.1％)一起预培养5分钟；通过加入NADPH(终浓度3mM)起始反应。未加入NADPH的培养充当对照。在特定的时间(0-120分钟)取出0.1mL样品，通过加入1体积停止溶液(乙腈)终止反应。将样品涡旋30秒，然后在1500g离心10分钟。将上清液转移到HPLC玻璃小瓶中，并无需进一步的处理即进行HPLC分析。图1和2分别描述了在与猴肝脏S9中NADPH一起培养后，NM108 SATE氨基磷酸酯(B299)和NM107 SATE氨基磷酸酯(B102)的损耗。

用于介质样品-未改变的前药的HPLC系统

HPLC： Agilent 1100

柱： Phenomenex Luna C18(2)，20×2mm，

流动相(MP)： MP(A)10mM K₂HPO₄ pH5，MP(B)

ACN

梯度洗脱： 20到63％MP(B)，流动0到30分钟

运行时间： 20分钟

流速： 1mL/分钟

注射体积： 10-20μL

UV： 252nm-NM108SATE衍生物(B299)

272 nm-NM107SATE衍生物(B102)

因此，不受限于任何理论，因为新陈代谢是NADPH依赖性的，氨基磷酸酯化合物在肝脏中被细胞色素P450优先活化是可能的。

实施例42

细胞中三磷酸酯水平的测定

原代肝细胞培养物的制备

从动物和人的肝脏中新近分离的细胞在悬浮液中在冰上获得。接收后，通过在500rpm(大鼠)或700rpm(猴和人)离心而将细胞沉淀并以每mL铺盘培养基(HPM)80万个细胞重悬。然后通过加入1mL细胞悬浮液(80万个细胞/mL)接种带胶原涂层的多孔板(12孔)。轻轻摇晃板来均匀分布细胞，并将板放置在37℃培养箱中大约4到6小时，以允许细胞贴壁。一旦细胞已经贴壁，去除铺板培养基，用肝细胞培养基(HCM)代替。细胞留在37℃培养箱中过夜，以适应培养和培养基。

与测试物品一起培养

肝细胞培养以终体积1.0mL HCM/孔(80万细胞/mL)进行。从过夜培养的细胞中去除HCM，用预热到37℃的新鲜HCM代替，该新鲜HCM包含10μM来自DMSO中储液的测试物品(DMSO终浓度为0.1％)。在特定的时间(多达24小时)丢弃培养基，细胞单层小心地用冰冷的PBS洗涤两次。最后一次洗涤后，小心地去除所有的PBS，并加入1mL提取缓冲液(冰冷的70％甲醇)。加入甲醇后，各个孔立即用封口膜(parafilm)密封。一旦处理了整个板，用额外的封口膜(parafilm)包裹整个板，形成双重密封，以预防提取过程期间的蒸发。然后将盖板放置到板上，用胶带密封。然后将板在-20℃储存至少24小时，以允许细胞内容物的提取。

Huh7或HepG2培养物的制备

HepG2s或Huh7细胞以0.4×10⁶个细胞/孔在带胶原涂层的12孔板中铺板。让细胞贴壁过夜。去除细胞过夜培养中的培养基，用预热到37℃的新鲜培养基代替，该培养基包含10μM来自DMSO中储液的测试物品(DMSO终浓度为0.1％)。24-72小时后，丢弃培养基，细胞单层小心地用冰冷的PBS洗涤两次。最后一次洗涤后，小心地去除所有的PBS，加入1mL提取缓冲液(冰冷的70％甲醇)。加入甲醇后，各个孔立即用封口膜(parafilm)密封。一旦整个板都处理了，用额外的封口膜(parafilm)包裹整个板，形成双重密封，以预防提取过程期间的蒸发。然后将盖板放置到板上，并用胶带密封。然后将板在-20℃储存至少24小时，以允许细胞内容物的提取。

用于分析的样品制备

通过将0.9mL提取物转移到2mL微量离心管中，接着在14,000rpm离心5分钟，制备细胞提取物。将大约100μL上清液转移到HPLC小瓶中，如下所述通过LCMS/MS测定三磷酸酯浓度。

HPLC条件：NM107-三磷酸酯

HPLC：

柱： Phenomenex Luna Amino 3μm 100A，30×2mm，

流动相(MP)： (A)70％10mM NH₄OAc 30％ACN pH6.0

(B)70％1mM NH₄OAc 30％ACN pH10.5

梯度洗脱：

步骤时间流速 A B

0 0.00 400 80 20

1 0.10 400 80 20

2 0.11 400 40 60

3 0.21 400 40 60

4 2.60 400 10 90

5 2.61 400 0 100

6 5.60 400 0 100

7 5.61 400 80 20

8 9.00 400 80 20

对MS的流速： 0.400mL/分钟，无分裂

注射体积： 10μL

化合物前体离子产物离子

NM107三磷酸酯 498.0 112.0

示例性的HPLC条件：NM108-三磷酸酯

HPLC：

柱： Phenomenex Luna Amino 3μm 100A，30×2mm，

流动相(MP)： (A)70％ 10mM NH₄OAc 30％ACN pH6.0

(B)70％1mM NH₄OAc 30％ACN pH10.5

梯度洗脱：

步骤时间流速 A B

0 0.00 400 60 40

1 0.10 400 60 40

2 0.11 400 40 60

3 0.21 400 40 60

4 2.60 400 10 90

5 2.61 400 0 100

6 5.61 400 0 100

7 5.61 400 60 40

8 9.00 400 60 40

对MS的流速： 0.400mL/分钟，无分裂

注射体积： 10μL

化合物前体离子产物离子

NM108三磷酸酯 538.0 152.0

细胞提取物中的NM107三磷酸酯和B102三磷酸酯水平观察如下：

从数据中看出，B102的胞内三磷酸酯水平比NM107的要高。

实施例43

第二代核苷抑制剂B102在感染了HCV的黑猩猩中的强效抗病毒活性的证明

核苷类似物例如NM107(2′甲基胞苷，valopicitabine的核苷组分)已经在临床环境中显示了针对HCV的功效，而且它们的5′-三磷酸盐(TP)可以是HCVNS5B聚合酶的强力抑制剂。但是，它们的广泛全身性分布和向TP的无效率肝转换可能导致安全性和抗病毒活性降低。评估了核苷酸前药B102的体内临床前安全性和抗病毒活性。

方法：对于药物动力学(PK)和毒理学研究，以20到300mg/kg/天的剂量对大鼠或猴口服施用B102，多达14天。通过LC-MS/MS确定肝脏的核苷TP水平。通过口腔强饲法对HCV基因型1慢性感染的黑猩猩每天施用一次化合物(10mg/kg/天)，共4天。在治疗之前、期间和之后，通过定量RT-PCR监测HCV病毒荷载。

结果：大鼠和猴中的PK研究显示B102具有＞95％的首过肝提取和低的全身性暴露(＜1％)。核苷酸前药的肝TP水平比对应的核苷高10-50倍。对猴以50mg/kg/天施用A2 14天后，没有观察到毒性。没有观察到初始呕吐或GI毒性。在感染了HCV的黑猩猩中，B102产生快速且强效的抗病毒效果，之后在药物中断后反弹回基线。经过4天的药物暴露，B102的平均病毒荷载减少范围是1.5 log10。相等剂量的valopicitabine导致0.7 log10的病毒减少。在黑猩猩中，没有观察到实验室异常或毒性证据。

因此，当口服施用时，B102产生三磷酸盐的肝脏高水平以及低的全身性暴露，在黑猩猩中导致对HCV复制的快速且强效的抑制，因此显示了有前途的体内临床前安全性特征和抗病毒活性。

实施例44

在抗HBV测试中测试化合物。通过内源性聚合酶测试(EPA)，测定HBV病毒颗粒和核壳体中的抗HBV活性。

使用野生型HBV生产细胞系的药物敏感性测试

1.用表达野生型HBV的生产细胞以每孔0.5-1×10⁶个细胞的密度在2ml生长/筛选培养基中接种到带胶原I涂层的12孔板中。

2.药物储液在100％DMSO中新鲜配制为200×储液。自这些在100％DMSO中的200×储液制备五份额外的4倍稀释液。对于每个试验，将各个药物稀释系列的4个等分试样在-20℃储存，直至使用。

3.一旦细胞达到汇合(细胞接种后1天)，通过向2ml新鲜的生长/筛选培养基加入10μl药物稀释液，开始药物处理。因此，DMSO终浓度不超过0.5％。无药物的对照孔仅在新鲜的培养基中接收10μl DMSO。

4.每隔一天用2ml新鲜的药物/培养基处理细胞，总计8天。然后如下所述在第10天收集细胞裂解液，并进行EPA分析。

为EPA分析制备包含核壳体的裂解液

1.细胞在带胶原I涂层的12孔板中生长3到4天，直至汇合。

2.小心地吸去培养基，用1ml PBS冲洗细胞单层一次。

3.向每个孔中加入1ml裂解缓冲液(50mM Tris-HCl pH7.5/150mMNaCl/5mM MgCl₂/0.2％NP-40)。板在冰上存放30分钟至4小时。

4.将裂解的细胞转移到1.5ml微量离心管中。

5.通过在室温下在14,000rpm旋转5分钟，澄清裂解液。

6.将澄清的裂解液转移到新的管中，立即用干冰冷冻，然后在-80℃储存，直到如下进行内源性聚合酶测试。

为EPA分析从上清液制备分泌的病毒颗粒

1.细胞在带胶原I涂层的12孔板中生长3到4天，直至汇合。

2.小心地吸去培养基，并转移到1.5ml微量离心管中。

3.通过在室温下在14,000rpm旋转5分钟，澄清上清液。

4.将澄清的上清液转移到新的管中，立即用干冰冷冻，然后在-80℃储存，直到基本上如下所述进行内源性聚合酶测试。

细胞裂解液和上清液的内源性聚合酶测试(EPA)

1.基本上如Seifer等(1998)所述进行EPA。胞内HBV核壳体用多克隆兔抗HBcAg抗体在4℃过夜从细胞质裂解液中免疫沉淀，并固定在蛋白A琼脂糖CL-4B磁珠上。在没有去污剂的情况下，分泌的病毒颗粒用单克隆小鼠抗LS抗体(MA 18/7)在4℃过夜从澄清的细胞上清液中免疫沉淀。

2.在用1ml EPA洗涤缓冲液(75mM NH₄Cl，50mM Tris-HCl pH7.4，1mM EDTA)洗涤已固定的壳体或病毒颗粒3次后，通过加入50μl包含去污剂的EPA混合物(50mM Tris-HCl pH7.4，75mM NH₄Cl，1mM EDTA，20mMMgCl₂，0.1mM β-ME，0.5％NP-40，100μM冷的dGTP、TTP、dCTP和50nM³³P-dATP)，起始内源性聚合酶反应，并在37℃培养过夜。需要去污剂来剥去免疫沉淀的病毒颗粒的外包膜并提高核壳体的渗透性。

3.在37℃用1mg/ml蛋白酶K消化1小时后，通过苯酚/氯仿萃取释放内源的³³P-标记的HBV DNA。

4.用一体积的5M NH₄-醋酸盐和2.5体积的100％EtOH沉淀核酸，然后在Tris-硼酸盐-EDTA缓冲液中通过1％天然琼脂糖凝胶分离。

5.通过在0.4N NaOH中的毛细管转移，将凝胶在室温下过夜印迹杂交到带正电荷的尼龙膜上。

6.将干燥的膜在室温下暴露于磷光影像屏幕(GE Healthcare)过夜，然后扫描(Storm 860，GE Healthcare)，并用ImageQuant软件(GE Healthcare)定量。

7.通过由Xlfit，4.1版(IDBS)确定的最佳拟合公式，计算50％有效浓度(EC₅₀)值。

获得以下结果。

HBV病毒颗粒和RI中的EC₅₀如下提供：

+++≤1μm，++＞1-10μm，+＞10μm

实施例45：用于治疗HCV的乙炔基核苷

示例性的化合物合成描述如下：

29：{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)H-膦酸酯

向7j(0.32mmol)和S-(2-亚磷酸-乙基)2，2-二甲基-3-三苯基甲氧基-硫代丙酸酯(0.42mmol)在吡啶(5ml)中的搅拌溶液中，在氮气下在-15℃滴加新戊酰氯(0.64mmol)。将反应混合物在-15℃搅拌2小时。加入二氯甲烷和NH₄Cl溶液。分离有机相，用NH₄Cl溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，并减压浓缩。粗产物材料通过快速柱色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。褐色粉末。分子式C₃₈H₃₉FN₅O₈PS ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.12(s，6H)，1.84(m，4H)3.04(s，2H)，3.92(d，J＝5.60Hz，1H)，4.01-4.10(m，3H)，4.33-4.39(m，2H)，4.60-4.66(m，1H)，6.13(d，J＝18.00Hz，1H)，6.67(s，2H)，7.21-7.35(m，15H)，7.81(s，1H)，10.86(brs，1H)

30a：N-(4-氟-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

向29(0.088mmol)在无水四氯化碳(880μL)中的搅拌溶液中滴加4-氟-苯甲胺(0.44mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，并蒸发至干燥(水浴温度不超过30℃)。粗制混合物用硅胶塞过滤，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以生产标题化合物。白色固体。分子式C₄₅H₄₅F₂N₆O₈PS ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(s，2H)，3.39-3.41(m，2H)，3.90-3.93(m，5H)，4.05-4.08(m，1H)，4.20-4.23(m，2H)，4.62-4.65(m，1H)，5.74(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.32(m，1H)，6.67(s，2H)，7.21-7.35(m，19H)，7.81(s，1H)，10.86(brs，1H)³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.83(s，1P)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-116.24(s，1F)，-158-.2(s，1F)Scan ES⁺899(M-H)⁺，UVλ_max 255nm

31a：N-(4-氟-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

将30a(0.09mmol)溶解在二氯甲烷(320μL)中，并用甲酸(32μL)处理。将混合物在室温下搅拌10分钟，通过固相萃取柱过滤，用含0-30％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，然后通过反相(C18)硅胶柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，由水/二氧杂环己烷的混合物冻干，以生产标题化合物。白色固体。分子式C₂₆H₃₁F₂N₆O₈PS ¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(s，2H)，3.39-3.41(m，2H)，3.90-3.93(m，5H)，4.05-4.08(m，1H)，4.20-4.23(m，2H)，4.62-4.65(m，1H)，4.92(m，1H)，5.74(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.32(m，1H)，6.67(s，2H)，7.21-7.35(m，4H)，7.81(s，1H)，10.86(brs，1H)³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.66(s，1P)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-116.24(s，1F)，-158.44(s，1F)ScanES⁺657(M-H)⁺，UVλ_max 254nm

30b：N-(4-甲氧基-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

如30a所述，30b由29和4-甲氧基-苯甲胺合成。白色固体。分子式C₄₆H₄₈FN₆O₉PS ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(m，2H)，3.42(d，J＝5.02Hz，2H)，3.71(d，J＝3.60Hz，3！：H)，3.85-3.90(m，5H)，4.06-4.10(m，1H)，4.23-4.29(m，2H)，4.60-4.66(m，1H)，5.54-5.57(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.28-6.33(m，1H)，6.60(s，2H)，6.80-6.85(m，2H)，7.18-7.20(m，2H)，7.23-7.25(m，15H)，7.82(s，1H)，10.56(brs，1H))³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.83(s，1P)¹⁹FNMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-116.24(s，1F)，-158.2(s，1F)Scan ES⁺911(M-H)⁺，UVλ_max255nm

31b：N-(4-甲氧基-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

如31a所述，31b由30b合成。白色固体。分子式C₂₇H₃₄FN₆O₉PS ¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(m，2H)，3.42(d，J＝5.02Hz，2H)，3.71(d，J＝3.60Hz，3H)，3.85-3.90(m，5H)，4.06-4.10(m，1H)，4.23-4.29(m，2H)，4.60-4.66(m，1H)，4.92(t，J＝5.50Hz，1H)，5.54-5.57(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.28-6.33(m，1H)，6.60(s，2H)，6.80-6.85(m，2H)，7.18-7.20(m，2H)，7.82(s，1H)，10.56(brs，1H)，³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.86(s，1P)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.24(s，1F)Scan ES⁺669(M-H)⁺，UVλ_max 254nm

30c：N-(4-三氟-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(三苯基甲氧基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

如30a所述，30c由29和4-三氟甲基-苯甲胺合成。白色固体。分子式C₄₆H₄₅F₄N₆O₈PS ¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(t，J＝6.44Hz，2H)，3.42(s，2H)，3.87-3.92(m，5H)，4.03-4.08(m，1H)，4.24-4.29(m，2H)，4.60-4.64(m，1H)，5.79-5.82(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.28-6.33(m，1H)，6.60(s，2H)，7.23-7.25(m，15H)，7.50-7.70(m，4H)，8.25(brs，1H)，10.76(brs，1H)，³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.86(s，1P)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.20(s，1F)Scan ES⁺949(M-H)⁺，UVλ_max 254nm

31c：N-(4-三氟甲基-苯甲胺基)-{9-[(2R)2-脱氧-2-氟-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃糖基]-鸟嘌呤}-5′-基-O-(羟基-叔丁基-S-酰基-2-硫代乙基)磷酸酯

如31a所述，31c由30c合成。白色固体。分子式C₂₇H₃₁F₄N₆O₈PS ¹H NMR(d₆-DMSO，400MHz)δ(ppm)1.09(s，6H)，3.03(t，J＝6.44Hz，2H)，3.42(s，2H)，3.87-3.92(m，5H)，4.03-4.08(m，1H)，4.24-4.29(m，2H)，4.60-4.64(m，1H)，4.91(brs，1H)，5.79-5.82(m，1H)，6.08-6.14(dd，J＝17.94Hz和J＝4.22Hz，1H)，6.28-6.33(m，1H)，6.60(s，2H)，7.50-7.70(m，4H)，8.25(brs，1H)，10.64(brs，1H)，³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)9.86(s，1P)¹⁹FNMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.24(s，1F)Scan ES⁺669(M-H)⁺，UVλ_max254nm

使用与本文所述的过程类似的过程合成的进一步的示例性的化合物列举如下。对于在实施例中合成的化合物，记录了以下名字。

6a：6-氯-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]嘌呤

6b：N2-异丁酰基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

6c：1-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

6d：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胸腺嘧啶

6e：N4-苯甲酰基-1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

6f：5-氟-1-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

6g：4-氯-7-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基--2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

7i：9-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]腺嘌呤

7j：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

7k：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

7l：4-氨基-7-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

11c：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-尿嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯

11f：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-5-氟尿嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

11k：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-胞嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

11l：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-4-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

16：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-甘油-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

17：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-甘油-呋喃戊糖基]鸟嘌呤-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

20：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

23：9-[(2R)2-脱氧-3，5-二-O-异丁酰基-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

24：N2-异丁酰基-9-[(2R)2-脱氧-3，5-二-O-异丁酰基-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

27i：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]腺嘌呤5′-三磷酸酯钠盐

27j：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤5′-三磷酸酯钠盐

28：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-甘油-呋喃戊糖基]鸟嘌呤5′-三磷酸酯钠盐

3a：6-氯-9-[2-氧代-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]嘌呤

将6-氯-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]嘌呤(18.84mmol)与THF共蒸发两次，然后溶解在无水THF(50mL)中。加入无水DMSO(119.82mmol)，将生成的溶液冷却到-40℃和-30℃之间。滴加三氟乙酸酐(36.17mmol)，将溶液在-40℃和-30℃之间搅拌2h，之后加入EtN₃(97.52mmol)。与搅拌同时，让生成的溶液经30分钟升温到室温，然后用二乙醚稀释，用H₂O洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并蒸发至干燥。粗产物材料通过柱色谱纯化，用含1％乙酸乙酯的二氯甲烷洗脱。将获得的黄色的油溶解在DCM中，在室温下与过量的MgSO₄搅拌36h，过滤，减压浓缩，以得到标题化合物。浅黄色泡沫。分子式C₂₂H₃₅ClN₄O₅Si₂。¹H NMR(DMSO-d₆，250MHz)δ(ppm)9.01(s，1H，H-8)，8.61(s，1H，H-2)，6.35(s，1H，H-1′)，5.35(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝9.7Hz)，4.31(m，1H，H-4′)，4.12-4.09(m，2H，H-5′，H-5″)，1.22-0.94(m，28H，iPr)。LRFAB-MS(GT)：527(M+H)⁺，525(M-H)^-。UVλ_max 263nm。R_f0.17(乙酸乙酯/CH₂Cl，10/90，v/v)。

4a和4′a：6-氯-9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]嘌呤(4a)和6-氯-9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基-二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-核-呋喃糖基]嘌呤(4′a)

将三甲基硅烷基乙炔(59.20mmol)溶解在无水THF(70mL)中。在-78℃滴加正丁基锂(37mL，1.6M，于己烷中)。将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，然后允许其升温到-55℃。在-78℃滴加3a(11.84mmol)在THF(34mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后让其升温到-30℃。通过在-78℃小心加入饱和NH₄Cl水溶液(45mL)，淬灭反应。升温到室温后，混合物用二乙醚稀释，用饱和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并浓缩至干燥。粗产物材料通过硅胶色谱纯化，用含20％Et₂O的石油醚洗脱，以生产两种化合物：4a(4.62g，62％)。浅黄色泡沫。分子式C₂₇H₄₅ClN₄O₅Si₃ ¹H NMR(DMSO-d₆，200MHz)δ(ppm)8.81(s，1H，H-8)，8.64(s，1H，H-2)，6.64(s，1H，OH-2′)，6.33(s，1H，H-1′)，4.57(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝6.6Hz)，4.20-3.97(m，3H，H-4′、H-5′和H-5″)，1.20-1.00(m，28H，iPr)，0.14(s，9H，Si(CH₃)₃)。LRFAB-MS(GT)：625(M+H)⁺。R_f 0.72(乙酸乙酯/CH₂Cl，10/90，v/v)；

和4′a(0.75g，10％)。黄色的油。分子式C₂₇H₄₅ClN₄O₅Si₃ ¹H NMR(DMSO-d₆，200MHz)δ(ppm)8.80(s，1H，H-8)，8.73(s，1H，H-2)，6.64(s，1H，OH-2′)，6.55(s，1H，H-1′)，4.62(d，1H，H-3′，³J_3′-4′＝9.1Hz)，4.39(m，1H，H-4′)，4.13(dd，1H，H-5′，J_5′-4′＝3.4Hz，²J_5′-5″＝13.2Hz)，3.90(dd，1H，H-5″，J_5″-4′＝2.6 Hz，²J_5″-5′＝13.2Hz)，1.15-1.00(m，28H，iPr)，0.10(s，9H，Si(CH₃)₃)。LRFAB-MS(GT)：625(M+H)⁺。R_f 0.64(乙酸乙酯/CH₂Cl，10/90，v/v)。

5a：6-氯-9-[(2R)2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]嘌呤

将4a(6.78mmol)在氩气下溶解在无水甲苯(31.8mL)中，并冷却到-20℃。滴加DAST(40.68mmol)，并在添加完成后，去除冷却浴。继续搅拌1.5小时，将混合物用乙酸乙酯溶解，并倒入饱和NaHCO₃中，搅拌5分钟。有机层用饱和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，通过硅胶色谱纯化，用含20％Et₂O的石油醚洗脱，以得到标题化合物(1.11g，26％)。黄色的油。分子式C₂₇H₄₄ClN₄O₄Si₃。¹H NMR(CDCl₃-d₆，200MHz，)δ(ppm)8.79(s，1H，H-8)，8.48(s，1H，H-2)，6.48(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.0Hz)，4.74(dd，1H，H-3′，J_3′-4′＝9.4Hz，J_3′-F＝22.4Hz)，4.36(d，1H，H-5′，²J_5′-5″＝13.4Hz)，4.20(m，1H，H-4′)，4.10(dd，1H，H-5″，²J_5″-5′＝13.4Hz，J_5″-4′＝2.6Hz)，1.30-1.10(m，28H，iPr)，0.00(s，9H，Si(CH₃)₃)。LRFAB-MS(GT)：627(M+H)⁺。UV λ_max263nm。R_f 0.24(二乙醚/石油醚，30/70，v/v)。

将5a(3.65mmol)和氟化铵(47.45mmol)在甲醇(12.5mL)中的混合物回流加热2h。冷却到室温后，将混合物浓缩至干燥，并通过硅胶色谱纯化，用含2-4％甲醇的DCM分级梯度洗脱，以提供标题化合物(0.89g，78％)。黄色固体。分子式C₁₂H₁₀ClFN₄O₃。¹H NMR(DMSO-d₆，200MHz)δ(ppm)9.02(s，1H，H-8)，8.89(s，1H，H-2)，6.55(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.1Hz)，6.34(ld，1H，OH-3′)，5.38(lt，1H，OH-5′)，4.64(dt，1H，H-3′，J_3′-4′＝9.3Hz，J_3′-F＝22.5Hz)，4.07(m，1H，H-4′)，3.83(m，2H，H-5′，H-5″)，3.76(d，1H，乙炔基，⁴J_H-F＝5.3Hz)。¹³C NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)152.0(C-2)，151.2(C-4)，149.5(C-6)，144.7(C-8)，130.9(C-5)，95.1(d，C-2′，¹J_2′-F＝182.3Hz)，88.0(d，C-1′，²J_1′-F＝39.8Hz)，82.9(d，CCH，J_C-F＝8.2Hz)，82.5(C-4′)，75.3(d，CCH，J_C-F＝31.5Hz)，72.7(d，C-3′，²J_3′-F＝19.5Hz)，59.0(C-5′)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-159.0(m)。LC/MS：(M+H⁺)313.1(8.29分钟)。UVλ_max 262nm。R_f 0.21(MeOH/CH₂Cl，7/93，v/v)。

7i：9-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]腺嘌呤

将6a(2.24mmol)溶解在饱和氨甲醇(80mL)中，在90℃在钢制反应釜中加热4h。在冷却到室温后，将混合物共蒸发至干燥，并通过硅胶色谱纯化，用含5-8％甲醇的DCM梯度洗脱，以生产标题化合物(305mg，46％)。黄色固体。分子式C₁₂H₁₂FN₅O₃。¹H NMR(DMSO-d₆，200MHz)δ(ppm)8.40(s，1H，H-8)，8.17(s，1H，H-2)，7.38(ls，2H，NH₂)6.35(d，1H，H-1′，³J_1′-F＝17.1Hz)，6.25(m，1H，OH-3′)，5.33(lt，1H，OH-5′)，4.68(m，1H，H-3′)，4.00-3.69(m，3H，H-4′，H-5′，H-5″)，3.77(d，1H，乙炔基，⁴J_H-F＝5.4Hz)。¹³C NMR(DMSO-d₆，75MHz)δ(ppm)155.8(C-4)，152.(C-2)，149.0(C-6)，138.7(C-8)，118.5(C-5)，95.4(d，C-2′，¹J_2′-F＝180.8Hz)，87.6(d，C-1′，²J_1′-F＝40.5Hz)，82.5(d，CCH，³J_C-F＝8.0Hz)，82.0(C-4′)，74.5(d，CCH，²J_C-F＝31.0Hz)，72.8(d，C-3′，²J_3′-F＝19.5Hz)，59.2(C-5′)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.0(t)。LC/MS：(M+H⁺)294.1(5.74分钟)。UV λ_max 258nm。R_f 0.33(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

4b：N²-异丁酰基-9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]鸟嘌呤

在0℃向CrO₃(110.76mmol)在DCM(220mL)中的悬浮液中加入乙酸酐(110.76mmol)和无水吡啶(221.52mmol)。滴加9-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-核-呋喃糖基]-N²-异丁酰基鸟嘌呤(36.92mmol)在DCM(110mL)中的溶液。去除冷却浴，将生成的溶液在室温下搅拌5h。将反应混合物倒入冷的乙酸乙酯中，通过硅和硅藻土胶塞过滤，浓缩至干燥，并与甲苯共蒸发两次。将获得的残余物溶解在DCM中，并与过量的MgSO₄搅拌过夜，过滤并蒸发以得到酮。将三甲基硅烷基乙炔(88.60mmol)在氩气下溶解在无水THF(98mL)中。在-78℃滴加正丁基锂(55.4mL，1.6M，于己烷中)。将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，然后让其升温到-55℃。在-78℃滴加该酮在THF(49mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌1h，然后让其升温到-30℃，并搅拌3h。通过在-78℃小心加入饱和NH₄Cl水溶液(72mL)，淬灭反应。升温到室温后，将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和盐水洗涤两次，干燥(Na₂SO₄)，并浓缩至干燥。粗产物材料使用柱色谱纯化，用含1.5％MeOH的二氯甲烷洗脱，以得到标题化合物(8.59g，34％，2步)。浅黄色泡沫。分子式C₃₁H₅₅N₅O₆Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，250MHz)δ(ppm)12.10(ls，1H，NH)，11.69(ls，1H，NH)，7.91(s，1H，H-8)，6.69(s，1H，OH)，5.94(s，1H，H-1′)，4.29(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝5.5Hz)，3.85-3.95(m，3H，H-4′，H-5′和H-5″)，2.46(m，1H，CH(CH₃)₂)，0.90-1.08(m，30H，iPr和CH(CH₃)₃)，0.00(s，9H，Si(CH₃)₂)。LC/MS：(M+H⁺)692.4(24.96分钟)。UV λ_max1 254nm，λ_max2 281nm。R_f 0.34(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

5b：N²-异丁酰基-9-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

4b(2.89mmol)在氩保护下在无水DCM(60mL)中溶解，加入吡啶(18.06mmol)。反应混合物冷却到-20℃，滴加DAST(31.35mmol)。添加完成后，去除冷却浴。继续搅拌1h 15，将混合物用乙酸乙酯溶解，倒入饱和NaHCO₃中，并搅拌5分钟。有机层用饱和盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，浓缩，通过硅胶色谱纯化，用含乙酸乙酯的DCM(2％)洗脱，以得到标题化合物(1.41g，70％)。黄色的油。分子式C₃₁H₅₄FN₅O₅Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，250MHz)δ(ppm)12.22(s，1H，NH)，8.09(s，1H，H-8)，6.21(d，1H，H-1′，J_1′F＝15.6Hz)，4.54(dd，1H，H-3′，J_3′-F＝23.6Hz，J_3′-4′＝9.8Hz)，4.33(m，1H，H-5′，²J_5′-5″＝13.1Hz)，4.16(m，1H，H-5″)，2.81(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.13-1.03(m，34H，iPr和CH(CH₃)₂)，0.08(s，9H，Si(CH₃)₃，³J_H-H＝6.9Hz)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-160.26(dd，J_F-1′＝16.1Hz，J_F-3′＝23.3Hz)。LC/MS：(M+H⁺)694.7(24.02分钟)。LRFAB-MS(GT)：694(M+H)⁺，692(M-H)^-。UV λ_max 256nm。R_f0.46(MeOH/CH₂Cl，05/95，v/v)。

6b：N²-异丁酰基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

将5b(1.89mmol)溶解在甲醇(13.8mL)中，并加入氟化铵(24.54mmol)。将生成的溶液回流搅拌1h，并蒸发至干燥。粗产物材料通过硅胶色谱纯化，用含6-10％甲醇的DCM分级梯度洗脱，以生产标题化合物(344mg，48％)。浅黄色的油。分子式C₁₆H₂₀FN₅O₄Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)12.18(ls，1H，NH)，11.77(ls，1H，NH)，8.34(s，1H，H-8)，6.29(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.5Hz)，6.20(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.2Hz)，5.39(t，1H，OH-5′，J_OH-5′＝5.1Hz)，4.52(dt，1H，H-3′，J_3′-F＝22.9Hz)，3.98(m，1H，H-4′)，3.90-3.85(m，2H，H-5′和乙炔基)，3.72(m，1H，H-5″)，2.52(m，1H，CH(CH₃)₂)，1.14(d，6H，CH(CH₃)₂，³J_H-H＝6.9Hz)。¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ(ppm)180.7(C-6)，155.3(C-2)，148.9(C-4)，137.3(C-8)，120.4(C-5)，95.8(d，C-2′，¹J_2′-F＝182.1Hz)，87.7(d，C-1′，²J_1′-F＝39.2Hz)，83.4(d，CCH，³J_C-F＝9.1Hz)，82.6(C-4′)，75.9(d，CCH，²J_C-F＝31.2Hz)，72.9(d，C-3′，²J_3′-F＝19.1Hz)，59.3(C-5′)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.9(m)。LC/MS：(M+H⁺)380.3(8.34分钟)。UV λ_max1 256nm，R_f 0.40(MeOH/CH₂Cl，15/85，v/v)。

7j：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

将6b(1.33mmol)溶解在饱和甲醇氨(62mL)中，在室温下搅拌20h。然后将反应混合物减压蒸发至干燥。将残余物溶解在水中，并用乙酸乙酯洗涤两次。蒸发水层，并用反相柱色谱(C18)纯化，用含2-15％乙腈的水梯度洗脱。将获得的残余物溶解在热的乙酸乙酯中，过滤并干燥，以得到标题化合物(134mg，33％)。黄色固体。分子式C₁₂H₁₂FN₅O₄ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)10.70(ls，1H，NH)，7.98(s，1H，H-8)，6.60(ls，2H，NH₂)，6.21(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.6Hz)，5.83(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.9Hz)，5.29(t，1H，OH-5′，J_OH-5′＝5.2Hz)，4.50(td，1H，H-3′，J_3′-F＝22.8Hz，J_3′-4′＝9.2Hz)，3.93-3.81(m，3H，H-4′、H-5′和乙炔基)，3.70(m，1H，H-5″)。¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ(ppm)157.2(C-6)，154.3(C-2)，151.05(C-4)，135.1(C-8)，116.7(C-5)，96.4(d，C-2′，¹J_C-F＝182.1Hz)，87.4(d，C-1′，²J_C-F＝39.2Hz)，83.1(d，CCH，J_C-F＝9.1Hz)，82.4(C-4′)，76.2(d，CCH，²J_C-F＝31.2Hz)，73.2(d，C-3′，²J_C-F＝20.1Hz)，59.5(C-5′)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.5(m)。LC/MS(A)：(M+H⁺)310.1(5.55分钟)。LRFAB-MS(GT)：619(2M+H)⁺，310(M+H)⁺，152(B+H)⁺，617(2M-H)^-，308(M-H)^-。UV λ_max 253nm。

3c：1-[2-氧代-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]尿嘧啶

如3a所述，3c由1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-核-呋喃糖基]尿嘧啶合成。浅黄色泡沫。分子式C₂₁H₃₆N₂O₇Si₂ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)11.58(ls，1H，NH)，7.74(d，1H，H-6，J_6-5＝8.0Hz)，5.68(d，1H，H-5，J_5-6＝8.0Hz)，5.45(s，1H，H-1′)，4.97(d，1H，H-3′，J_3′-4′＝9.2Hz)，4.06-3.90(m，3H，H-4′，H-5′)，1.14-0.87(m，28H，iPr)。LR LC/MS：(M+H⁺)485.1(M-H^-)483.1(5.53分钟)。UV λ_max 262nm。R_f0.40(MeOH/CH₂Cl，05/95，v/v)。

4c：1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]尿嘧啶Yoshimura，Y.；Iino，T.；Matsuda，A.TetrahedronLett.1991，32，6003-6006。

分子式C₂₆H₄₆N₂O₇Si₃ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)11.35(ls，1H，NH)，7.44(d，1H，H-6，J_6-5＝8.0Hz)，6.54(s，1H，OH)，6.02(s，1H，H-1′)，5.54(d，1H，H-5，J_6-5＝8.0Hz)，4.13-3.93(m，3H，H-3′，H-5′)，3.75(m，1H，H-4′)，1.03-0.96(m，28H，iPr)，0.00(s，9H，Si(CH₃)₃)。¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ(ppm)163.4(C-4)，150.8(C-2)，141.6(C-6)，103.6(CCSi)，101.2(C-5)，92.5(CCSi)，87.3(C-1′)，80.9(C-4′)，77.9(C-2′)，75.9(C-3′)，61.8(C-5′)，17.7-17.1(8C，4SiC(CH₃)₂)，13.3-12.6(4C，4 SiC(CH₃)₂)，0.2(3C，Si(CH₃)₃)。LR LC/MS：(M+H⁺)583.2(M-H^-)581.2(6.72分钟)。UVλ_max 261nm。R_f 0.27(乙酸乙酯/CH₂Cl，10/90，v/v)。

5c：1-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

如5a所述，5c由4c合成。黄色的油。分子式C₂₇H₄₉FN₂O₆Si₃ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)11.62(sl，1H，NH)，7.43(dl，1H，H-6，J_6-5＝8.0Hz)，6.12(d，1H，H-1′，J_1′-F＝16.8Hz)，5.68(d，1H，H-5，J_5-6＝8.0Hz)，4.22-3.85(m，4H，H-3′，H-4′，H-5′)，1.16-1.00(m，28H，iPr)，0.00(s，9H，Si(CH₃)₃)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-159.7。LR LC/MS：(M+H⁺)585.2(M-H^-)583.3(6.47分钟)。UV λ_max 261nm。R_f 0.52(乙酸乙酯/CH₂Cl，15/85，v/v)。

6c：1-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

将5c(0.56mmol)和氟化铵(7.31mmol)的混合物溶解在甲醇(10mL)中，在回流下搅拌1h，蒸发至干燥。生成的残余物用硅胶快速柱色谱纯化，用含0-20％甲醇的DCM梯度洗脱，然后用反相柱色谱纯化，用含0-100％乙腈的水梯度洗脱，以得到所需的产物，其由水冻干(47mg，31％)。白色冻干粉。分子式C₁₁H₁₁FN₂O₅。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)11.49(sl，1H，NH)，7.87(d，1H，H-6，J_6-5＝8.0Hz)，6.18(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝7.2Hz)，6.10(d，1H，H-1′，J_1′-F＝18.0Hz)，5.69(d，1H，H-5，J_5-6＝8.0Hz)，5.32(m，1H，OH-5′)，4.19-4.10(m，2H，H-3′和乙炔基)，3.85-3.75(m，2H，H-4′H-5′)，3.60(m，1H，H-5″)。¹³C NMR(DMSO-d₆，100MHz)δ(ppm)163.3(C-4)，150.6(C-2)，140.1(C-6)，102.5(C-5)，95.5(d，C-2′，J_2′-F＝186.1 Hz)，87.1(d，C-1′，²J_1′-F＝40.2Hz)，83.2(d，CCH，²J_C-F＝8.0Hz)，82.1(C-4′)，76.5(d，CCH，⁴J_C-F＝30.1Hz)，73.3(d，C-3′，²J_C-F＝19.1Hz)，58.7(C-5′)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-158.2。LR LC/MS：(M+H⁺)271.1(M-H^-)269.2(1.12分钟)。HRFAB-MS C₁₁H₁₂O₅N₂F。(M+H⁺)计算值271.0730，观测值271.0739。UV λ_max261nm。R_f 0.33(MeOH/CH₂Cl，20/80，v/v)。

2d：1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]胸腺嘧啶

将1-(β-D-核-呋喃糖基)胸腺嘧啶(40.9mmol)溶解在吡啶(435ml)中，将混合物用冰浴25分钟冷却到0℃。然后加入TIPSCl₂(16.2ml)，并在完全添加后，让混合物升温到室温。将反应混合物在室温下搅拌3小时，用二氯甲烷和水稀释，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。合并有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。残余物与甲苯共蒸发，以去除吡啶。生成的残余物通过快速柱色谱纯化，用含0-2％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，以得到标题化合物。灰白色粉末。分子式C₂₂H₄₀N₂O₇Si₂。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.94-1.04(m，28H)，1.73(s，3H)，3.86-3.96(m，1H)，4.06-4.13(m，2H)，4.14-4.20(m，1H)，5.44-5.48(m，1H)，5.53(brs，1H)，5.77(brs，1H)7.42(s，1H)，11.35(brs，1H)。UVλ_max 212nm，266nm。

3d：1-[2-氧代-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]胸腺嘧啶

在0℃向CrO₃(60mmol)在二氯甲烷(200mL)中的悬浮液中加入乙酸酐(59mmol)和无水吡啶(120mmol)。滴加2d(20mmol)在DCM中的溶液。去除冷却浴，将生成的溶液在室温下搅拌3h。将反应混合物倒入冷的乙酸乙酯中，通过硅和硅藻土胶塞过滤，浓缩至干燥，并与甲苯共蒸发两次，以得到标题化合物。无色的油。分子式C₂₂H₃₈N₂O₇Si₂

4d：1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]胸腺嘧啶

如4a所述，4d由3d和三甲基乙炔合成。褐色固体。分子式C₂₇H₄₈N₂O₇Si₃。Scan ES⁺597(M+H)⁺，UVλ_max265nm。

5d：1-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胸腺嘧啶

如5a所述，5d由4a合成。褐色固体。分子式C₂₇H₄₇FN₂O₆Si₃ ¹H NMR(CDCl₃-d₆，400MHz)δ(ppm)0.1(s，9H)，1.05-1.14(m，28H)，1.92(s，3H)，3.99-4.13(m，1H)，4.44-4.9(m，3H)，6.35(d，1H，J＝16.44Hz)，7.2(s，1H)，8.86(s，1H)。Scan ES⁺599(M+H)⁺。

如7i所述，6d由5d合成。分子式C₁₂H₁₃FN₂O₅。¹H NMR(CDCl₃-d₆，400MHz)δ(ppm)1.75(s，3H)，3.6-3.65(m，1H)，3.82-3.84(m，2H)，4.07(d，1H，J＝5.27Hz)，4.19(m，1H)，5.4(brs，1H)，6.08(d，1H，J＝17.8Hz)，6.17(brs，1H)，7.8(s，1H)，11.46(brs，1H)。Scan ES⁺285(M+H)⁺，UVλ_max266nm。

4e：N⁴-苯甲酰基-1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]胞嘧啶

如4a所述，4e由3e和三甲基乙炔合成。褐色固体。分子式C₃₃H₅₁N₃O₇Si₃Scan ES⁺686(M+H)⁺，UVλ_max260nm，310nm。

5e：N⁴-苯甲酰基-1-[(2R)2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

如5a所述，5e由N⁴-苯甲酰基-1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-D-阿拉伯-呋喃糖基]胞嘧啶合成。黄色固体。分子式C₃₀H₄₂FN₃O₆Si₂。Scan ES⁺688(M+H)⁺，UVλ_max 260nm，310nm。

6e：N⁴-苯甲酰基-1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

如7i所述，6e由5e合成。白色粉末。分子式C₁₈H₁₆FN₃O₅。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)3.63-3.69(m，1H)，3.82-3.93(m，2H)，4(d，1H，J＝5.27Hz)，4.13-4.24(m，1H)，5.38(brs，1H)，6.23-6.28(m，2H)，7.32-7.36(m，1H)，7.49-7.53(m，2H)，7.6-7.64(m，1H)，7.99-8.01(m，2H)，8.34(d，1H，J＝7.32Hz)，11.30(brs，1H)。Scan ES⁺374(M+H)⁺，UVλ_max 262nm，303nm。

7k：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

分子式C₁₁H₁₂FN₃O₄。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)3.57-3.62(m，1H)，3.77-3.80(m，2H)，3.95(d，1H，J＝5.53Hz)，4.03-4.16(m，1H)，5.2(brs，1H)，5.73(d，1H，J＝7.19Hz)，6.06(d，1H，J＝7.19Hz)，6.14-6.25(m，1H)，7.17-7.3(2brs，2H)，7.74(d，1H，J＝7.74Hz)。Scan ES⁺270(M+H)⁺，UV λ_max271nm。

8k：N⁴-二甲氧基三苯甲基-1-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

在室温下向7k(2.34mmol)在吡啶(7.2ml)中的搅拌溶液中加入三甲基硅烷基氯(9.36mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。然后加入4-二甲基氨基吡啶(1.17mmol)和二甲氧基三苯甲基氯(3.51mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物用DCM和饱和NaHCO₃溶液稀释。有机相用饱和NaHCO₃溶液洗涤两次，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将粗产物材料溶解在NH4OH/二噁英(2∶1)溶液中，并搅拌4小时。蒸发溶剂，残余物通过硅胶色谱(DCM/EtOH)纯化，以生产标题化合物。白色泡沫。分子式C₃₂H₃₀FN₃O₆。Scan ES^-570(M+H)^-，UVλ_max 277nm

9k：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-4-N-二甲氧基三苯甲基-胞嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯

在0℃向8k(0.35mmol)在无水THF/四唑溶液(1.05mmol)中的搅拌溶液中加入二(S-新戊酰基-2-硫代乙基)N，N-二异丙基亚磷酰胺(0.42mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物冷却到0℃，并加入叔丁基过氧化氢(0.7ml/mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。混合物用DCM稀释，用饱和Na₂S₂O₃溶液中和。有机相用H₂O洗涤两次，萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。粗产物材料通过硅胶色谱(DCM/EtOH)纯化，以生产标题化合物。玻璃状化合物。分子式C₄₇H₅₉FN₃O₁₁PS₂。Scan ES⁺938(M+H)⁺，UVλ_max 277nm

11k：1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-胞嘧啶-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯

将9k(34mmol)在AcOH/MeOH/H₂O(3/6/1)溶液中搅拌2小时，并在50℃搅拌4小时。将反应混合物蒸发，并通过硅胶色谱(DCM/EtOH)纯化，以生产标题化合物。白色冻干粉。分子式C₂₅H₃₇FN₃O₉PS₂。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.17(s，18H)，3.08-3.11(t，J＝6.07Hz，4H)，3.99-4.08(m，7H)，4.22-4.28(m，2H)，5.73-5.75(d，J＝7.30Hz，1H)，6.30(brs，2H)，7.26-7.31(d，J＝17.30Hz，2H)，7.47-7.48(d，J＝7.30Hz，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-156.48(s，1F)³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)-1.96(s，1P)。Scan ES⁺638(M+H)⁺，UVλ_max 271nm

12：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

在室温下向7j(5.18mmol)在吡啶(7ml/mmol)中的搅拌溶液中加入三甲基硅烷基氯。将混合物在室温下搅拌6小时。然后加入甲氧基三苯甲基氯(6.21mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时，并与NH₄OH(4ml/mmol)一起搅拌2小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H₂O、饱和NaHCO₃溶液和饱和NaCl溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将粗产物材料通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。淡黄色油。分子式C₃₂H₂₈FN₅O₅。

13：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-5-O-叔丁基二甲基硅烷基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

在0℃向12(2.29mmol)在吡啶(5ml)中的搅拌溶液中加入叔丁基二甲基硅烷基氯(2.75mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。然后它在DCM中稀释，用H₂O洗涤两次。萃取有机相，用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。粗产物材料通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。淡黄色油。分子式C₃₈H₄₄FN₅O₅Si。Scan ES⁺696(M+H)⁺，λ_max 260nm。Scan ES^-694(M+H)^-，UVλ_max260nm

14：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-5-O-叔丁基二甲基硅烷基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

在室温下向13(0.14mmol)在乙腈(47ml/mmol)中的搅拌溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(0.56mmol)和硫代氯甲酸苯酯(0.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，并减压浓缩。将获得的残余物在DCM中溶解，将有机相用H₂O、HCl(1N)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，蒸发，并与甲苯共蒸发。

将粗产物材料溶解在甲苯(12ml/mmol)中，在室温下加入偶氮-二-异丁腈(0.02mmol)和三丁基锡烷(0.24mmol)。将反应混合物在125℃搅拌2小时，并减压浓缩。粗产物材料通过硅胶色谱(DMC/MeOH)纯化，以生产标题化合物。淡黄色油。分子式C₃₈H₄₄FN₅O₄Si。Scan ES⁺680(M+H)⁺，UVλ_max 260nm

15：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

将14(0.35mmol)溶解在MeOH(20ml/mmol)中。然后在室温下加入氟化铵(3.55mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌2小时。在减压浓缩后，将粗产物材料通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。米色泡沫。分子式C₃₂H₃₀FN₅O₄。¹H NMR(CDCl₃-d₆，400MHz)δ(ppm)2.38-2.45(m，2H)，2.75(brs，2H)，3.64-3.67(d，J＝12.20Hz，2H)，3.77(s，4H)，4.20-4.23(d，J＝11.7Hz，1H)，4.41-4.42(d，J＝8.4Hz，1H)，5.83-5.87(d，J＝16.24Hz，1H)，6.80-6.82(d，J＝8.12Hz，4H)，7.26-7.31(m，11H)，7.84(brs，1H)，9.26(brs，1H)

16：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

在50℃将15(0.09mmol)在AcOH/THF/H₂O(3/6/1)溶液中搅拌1天。然后将反应混合物减压浓缩，通过硅胶色谱纯化，C18(H₂O/ACN)。米色冻干粉。分子式C₁₂H₁₂FN₅O₅。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)2.57-2.74(m，2H)，3.56(s，1H)，3.61-3.64(d，J＝12.10Hz，1H)，3.79-3.82(d，J＝12.10Hz，1H)，3.91-3.93(d，J＝5.40Hz，1H)，4.32-4.35(m，1H)，5.25(s，1H)，6.06-6.10(d，J＝18.20Hz，1H)，6.64(s，1H)，8.01(s，1H)，10.82(s，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-138.4(s，1F)。Scan ES^-292(M+H)^-，Scan ES⁺316(M+Na)⁺，UVλ_max 251nm

17：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-鸟嘌呤-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯)

如9所述，17由14(0.35mmol)合成。然后在50℃将粗产物材料在AcOH/THF/H₂O(4/2/1)中搅拌3小时。将反应混合物减压浓缩，通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。米色固体。分子式C₂₆H₃₇FN₅O₈PSi₂ ¹HNMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)2.48(s，18H)，2.65-2.68(m，2H)，3.06-3.10(q，J＝3.71Hz和J＝6.02Hz，4H)，3.97-4.04(m，5H)，4.31-4.35(m，2H)，4.50-4.52(m，1H)，6.13-6.18(d，J＝17.60Hz，1H)，6.63(s，2H)，7.82(s，1H)，10.85(s，1H)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-139.2(s，1F)。Scan ES⁺662(M+H)⁺，UVλ_max 254nm。HPLC(0-100％ACN，经过8分钟)t_R＝5.65分钟。

18：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-5-O-叔丁基二甲基硅烷基-3-O-四氢吡喃基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

在室温下向13(0.8mmol)在无水THF(20ml/mmol)中的搅拌溶液中加入对甲苯磺酸(0.12mmol)和二氢吡喃(2ml/mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3天，并用TEA中和。将混合物用DCM稀释，用H₂O洗涤两次。有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将粗产物材料通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。分子式C₄₃H₅₂FN₅O₆Si。ScanES⁺780(M+H)⁺。

19：N²-甲氧基三苯甲基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-3-O-四氢吡喃基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

如15所述，19由18合成。分子式C₃₇H₃₈FN₅O₆。Scan ES⁺666(M+H)⁺。

21：N²-四氢吡喃基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-5-O-叔丁基二甲基硅烷基-3-O-四氢吡喃基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

21由18的纯化获得。分子式C₂₈H₄₂FN₅O₆Si。Scan ES⁺592(M+H)⁺，UVλ_max273nm。

22：N²-四氢吡喃基-9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-3-O-四氢吡喃基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

如15所述，22由21(0.46mmol)合成。分子式C₂₂H₂₈FN₅O₆。

20：9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤-5′-基-二(S-新戊酰基-2-硫代乙基磷酸酯

如9k所述，20由19(0.09mmol)合成。然后将粗产物材料在室温下在AcOH/THF/H₂O(4/2/1)溶液中搅拌过夜。将反应混合物减压浓缩，并通过硅胶色谱(DCM/MeOH)纯化，以生产标题化合物。白色冻干粉。分子式C₂₆H₃₇FN₅O₉PS₂ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.16(s，20H)，3.06-3.09(m，4H)，3.90-3.91(d，J＝5.40Hz，1H)，3.99-4.10(q，J＝6.70Hz和J＝7.00Hz，4H)，4.32-4.38(m，2H)，4.63(m，1H)，6.10-6.14(d，J＝16.93Hz，1H)，6.69(s，2H)，7.79(s，1H)，10.96(s，1H)³¹P NMR(DMSO-d₆，162MHz)δ(ppm)-1.91(s，1P)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-156.82(s，1F)Scan ES⁺678(M+H)⁺。

25：1-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]-4-硫尿嘧啶

将5c(820mg，1.40mmol)溶解在无水1，2-二氯乙烷(35mL)中，并用Lawesson′s试剂(1.13g，2.80mmol)处理。将反应混合物回流搅拌过夜，并蒸发至干燥。生成的残余物用硅胶塞过滤，用含0-5％乙酸乙酯的二氯甲烷梯度洗脱，以得到标题化合物。黄色的油。分子式C₂₆H₄₅FN₂O₅SSi₃ LR LC/MS：(M+H⁺)601.3(M-H^-)599.3(7.03分钟)。UVλ_max 332nm。R_f 0.71(乙酸乙酯/CH₂Cl，7/93，v/v)。

26：1-[(2R)2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]胞嘧啶

将粗产物25溶解在饱和氨甲醇(9mL)中。将生成的溶液在120℃微波加热20分钟，并减压浓缩，以得到标题化合物。油性残余物。分子式C₂₆H₄₆FN₃O₅Si₃ LR LC/MS(B)：(M+H⁺)512.3(M-H^-)510.3(5.33分钟)。UVλ_max1 242nm，λ_max2 273nm。

在0℃向7i(0.286mmol)在磷酸三乙酯(750μL)中的溶液中加入磷酰氯(75μL，0.807mmol)。将该反应混合物A在5℃搅拌过夜。将三丁基焦磷酸铵(PPi/Bu₃N 1/1.5，1g，2.19mmol)溶解在无水DMF(2mL)中。向PPi中加入三丁基胺(420μL，1.76mmol)，并将生成的混合物在0℃搅拌15分钟。向反应混合物A中加入2.4mL该溶液。将反应混合物在0℃搅拌1分钟。小心地用TEAB 1M(pH＝7,5，10mL)淬灭反应，在0℃搅拌20分钟，然后用水和乙酸乙酯稀释。将水相减压浓缩。对粗产物材料进行DEAE-葡聚糖层析，用10^-3-1MTEAB梯度洗脱。合并所需的部分，减压浓缩，并与水/甲醇的混合物共蒸发，最后与水共蒸发。生成的残余物用半制备型HPLC纯化。将包含期望产物的部分减压浓缩，与水/甲醇的混合物共蒸发，并由水冻干。将该三磷酸三乙基铵盐通过Dowex Na⁺树脂柱用水洗脱三次，以在由水冻干后生成钠盐。

分子式C₁₂H₁₁FN₅O₁₂P₃ 3Na。¹H NMR(D₂O，300MHz)δ(ppm)8.31(s，1H，H-8)，8.14(s，1H，H-2)，6.28(d，1H，H-1′，³J_1′-F＝15.6Hz)，4.64(m，1H，H-3′)，4.42(m，1H，H-5′)，4.35-4.25(m，2H，H-4′和H-5″)，2.82(d，1H，乙炔基，⁴J_H-F＝5.5Hz)。³¹P NMR(D₂O，121MHz)δ(ppm)-10.27(d，1P，P_γ，J_Pγ-Pβ＝19.4Hz)，-11.03(d，1P，P_α，J_Pα-Pβ＝19.4Hz)，-22.38(t，1P，P_β，J_Pβ-Pγ＝J_Pβ-Pα＝19.4Hz)。¹⁹F NMR(D₂O，282MHz)δ(ppm)-160.0(m)。LRFAB-MS(GT)：600(M+H)⁺，578(M-Na+2H)⁺，556(M-2Na+3H)，598(M-H)^-，576(M-Na)^-，554(M-2Na+H)^-，532(M-3Na+2H)^-。

如27所述，27j由7j合成。分子式C₁₂H₁₁FN₅O₁₃P₃ 3Na。¹H NMR(D₂O，400MHz)δ(ppm)7.97(s，1H，H-8)，6.19(d，1H，H-1′，³J_1′F＝16.0Hz)，4.70(m，H₂O下1H，H-3′)，4.39(m，1H，H-5′)，4.29-4.22(m，2H，H-4′和H-5″)，2.98(d，1H，乙炔基，⁴J_H-F＝5.0Hz)。³¹P NMR(D₂O，162MHz)：_-10.50(d，1P，P_γ，J_Pγ-Pβ＝19.4Hz)，-11.03(d，1P，P_α，J_Pα-Pβ＝19.4Hz)，-22.38(t，1P，P_β，J_Pβ-Pγ＝J_Pβ-Pα＝19.4Hz)。¹⁹F NMR(DMSO-d₆，376MHz)δ(ppm)-159.1(m)。LRFAB-MS(GT)：638(M+Na)⁺，616(M+H)⁺，594(M-Na+2H)⁺，572(M-2Na+3H)⁺，550(M-3Na+4H)⁺，592(M-Na)^-，570(M-2Na+H)^-，548(M-3Na+2H)^-。

2g：4-氯-7-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-核-呋喃糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

如中间产物12所述，2g由9-[β-D-核-呋喃糖基]-7-去氮杂-6-氯嘌呤合成。黄色的油。分子式C₂₃H₃₈ClN₃O₅Si₂。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.96-1.04(m，28H)，3.92-3.95(m，3H)，4.41-4.58(m，2H)，5.65(s，1H)，6.08(s，1H)，6.71(s，1H)，7.83(s，1H)，8.62(s，1H)。

3g：4-氯-7-[2-氧代-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-β-D-赤式-呋喃戊糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

如3d所述，3g由2g合成。褐色固体。分子式C₂₃H₃₆ClN₃O₅Si₂。Scan ES⁺(M+H)⁺528，UV λ_max 271nm。

4g：4-氯-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

如4a所述，4g由3g合成。米色固体。分子式：C₂₈H₄₆ClN₃O₅Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)，0.12(s，9H)，0.95-1.09(m，28H)，3.90-3.94(m，1H)，4.02-4.03(m，2H)，4.37-4.39(d，J＝6.74Hz，1H)，6.43(s，1H)，6.44(s，1H)，6.68(d，J＝3.71Hz，1H)，7.71-7.72(d，J＝3.84Hz，1H)，8.66(s，1H)。

5g：4-氯-7-[(2R)2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

如5a所述，5g由4g合成。黄色的油。分子式C₂₈H₄₅ClFN₃O₅Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.33(s，9H)，1.02-1.13(m，28H)，4.0.-4.03(d，J＝13.42Hz，1H)，4.12-4.14(d，J＝9.43Hz，1H)，4.27-4.31(d，J＝14.00Hz，1H)，4.71(brs，1H)，6.58-6.62(d，J＝17.07Hz，1H)，6.82-6.83(d，J＝3.80Hz，1H)，7.72(d，J＝3.80Hz，1H)，8.69(s，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-159.6(s，1F)。

6g：4-氯-7-[(2R)2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]吡咯并[2，3-d]嘧啶

如6a所述，6g由5g合成。黄色的油。分子式C₁₃H₁₁ClFN₃O₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)3.60-3.65(d，J＝5.44Hz，1H)，3.68-3.71(d，J＝12.35Hz，1H)，3.85-3.88(d，J＝12.35Hz，1H)，3.95-3.97(d，J＝8.90Hz，1H)，4.46-4.54(dd，J＝23.23Hz和J＝9.39Hz，1H)，5.38(s，1H)，6.28(s，1H)，6.57-6.61(d，J＝16.47Hz，1H)，6.79(d，J＝3.82Hz，1H)，8.04(d，J＝3.78Hz，1H)，8.70(s，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.30(s，1F)。ScanES⁺312(M+H)⁺。Scan ES^-356(M+HCO₂)^-。

如6a所述，7l由6g合成。白色冻干粉。分子式C₁₃H₁₃FN₄O₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)3.61(d，J＝5.52Hz，1H)，3.63-3.67(m，1H)，3.80-3.83(d，J＝12.14Hz，1H)，3.86-3.88(d，J＝9.38Hz，1H)，4.46-4.54(dd，J＝23.23Hz和J＝9.39Hz，1H)，5.30(brs，1H)，6.1(brs，1H)，6.41-6.47(d，J＝16.47Hz，1H)，6.57-6.61(d，J＝16.47Hz，1H)，7.04(s，2H)，7.37-7.38(d，J＝3.65Hz，1H)，8.05(s，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-157.15(s，1F)Scan ES⁺293(M+H)⁺，UV λ_max 275nm。

将9-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃糖基]鸟嘌呤(0.16mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.01mmol)、三乙胺(0.48mmol)和异丁酸酐(0.48mmol)在乙腈(1mI)中的溶液在室温下搅拌6小时。将反应混合物用NaHCO₃饱和溶液水解。加入乙酸乙酯。分离有机相，用NaCl饱和溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。粗产物材料通过快速柱色谱(DCM/EtOH)纯化，以生产标题化合物。白色粉末。分子式C₂₀H₂₄FN₅O₆ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.02-1.22(m，12H)，2.53-2.59(m，1H)，2.65-2.70(m，1H)，4.04(d，J＝4.77Hz，1H)，4.35-4.40(m，3H)，5.88-5.94(dd，J＝9.39Hz和J＝8.21Hz，1H)，6.21-6.25(d，J＝17.28Hz，1H)，6.58(s，2H)，7.09(s，1H)，10.82(s，1H)。Scan ES⁺450.0(M+H)⁺，UVλ_max 251nm。

24：N-2-异丁酰基-9-[(2R)2-脱氧-3，5-二-O-异丁酰基-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]鸟嘌呤

由23纯化获得24。白色粉末。分子式C₂₄H₃₀FN₅O₇ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)1.02-1.22(m，18H)，2.53-2.59(m，1H)，2.65-2.70(m，1H)，2.74-2.80(m，1H)，4.04(d，J＝4.90Hz，1H)，4.35-4.40(m，3H)，5.73-5.80(dd，J＝10.14Hz和J＝7.80Hz，1H)，6.29-6.34(d，J＝17.36Hz，1H)，8.23(s，1H)，11.80(brs，1H)，12.3(brs，1H)。Scan ES⁺520(M+H)⁺，UVλ_max 257nm。

4f：5-氟-1-[3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基硅烷基乙炔基-β-D-阿拉伯-呋喃糖基]尿嘧啶

如4a所述，4f由3f合成。橙色固体。分子式C₂₆H₄₅FN₂O₇Si₃ ¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.13(s，9H)，0.94-1.06(m，28H)，3.75(m，1H)，3.96-4.09(m，3H)，5.99(d，J＝1.53Hz，1H)，6.53(s，1H)，7.58-7.60(d，J＝6.76Hz，1H)，11.8(brs，1H)Scan ES^-599(M-H)^-，UVλ_max271nm。

5f：5-氟-1-[(2R)-2-脱氧-2-氟-3，5-O-(1，3-二基-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷)-2-C-三甲基-硅烷基乙炔基-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

如5a所述，由4f合成5f。白色固体。分子式C₂₆H₄₄F₂N₂O₆Si₃。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)0.13(s，9H)，0.94-1.06(m，28H)，3.92-3.95(d，J＝12.47Hz，1H)，3.96-4.09(m，1H)，4.21(d，J＝12.22Hz，1H)，5.20(brs，1H)，6.10-6.15(d，J＝16.53Hz，1H)，7.56(s，1H)，12.23(brs，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-160.06(s，1F)，-165.94(s，1F)Scan ES⁺603(M-H)⁺，UVλ_max272nm。

6f：5-氟-1-[(2R)-2-脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-赤式-呋喃戊糖基]尿嘧啶

如6a所述，6f由5f合成。白色固体。分子式C₁₁H₁₀F₂N₂O₅。¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ(ppm)3.61-3.64(d，J＝12.55Hz，1H)，3.81-3.85(m，2H)，4.11(d，J＝4.91Hz，1H)，4.14-4.20(m，1H)，5.50(s，1H)，6.04-6.09(d，J＝16.91Hz，1H)，6.20(d，J＝7.64Hz，1H)，8.29(d，J＝7.09Hz，1H)，12.05(s，1H)¹⁹F NMR(DMSO-d₆，235MHz)δ(ppm)-158.74(s，1F)，-166.27(s，1F)Scan ES⁺289.0(M-H)⁺，UVλ_max 270nm。

如9k所述，11f由6f合成。白色固体。分子式C₂₅H₃₅F₂N₂O₁₀PS₂。¹HNMR(DMSO-d_6+D2O，400MHz)δ(ppm)1.15-1.17(m，18H)，3.10(t，J＝6.40Hz，4H)，4-4.08(m，5H)，4.19(d，J＝5.39Hz，1H)，4.24-4.39(m，3H)，6.12(d，J＝16.82Hz，1H)，6.39(d，J＝6.07Hz，1H)，7.86(brs，1H)，12.12(brs，1H)。

28：9-[(2R)-2，3-二脱氧-2-C-乙炔基-2-氟-β-D-甘油-呋喃戊糖基]鸟嘌呤5′-三磷酸钠

如27i所述，28由16合成。白色粉末。分子式C₁₂H₁₂FN₅Na₃O₁₂P₃。¹H NMR(D₂O，400MHz)δ(ppm)2.61-2.72(m，2H)，2.95-2.96(m，1H)，4.16-4.22(m，1H)，4.35-4.40(m，1H)，4.6-4.7(m，1H)，6.17(d，J＝16Hz，1H)，8.02(s，1H)。¹⁹F NMR(D₂O，235MHz)δ(ppm)(-138.95)-(-138.74)(m，1F)，³¹P NMR(D₂O，162MHz)δ(ppm)-10.66(d，J＝19.44Hz，1P)，-11.14(d，J＝19.44Hz，1P)，-22.82(t，J＝19.44Hz，1P)。Scan ES⁺599.6(M-3Na)³⁺，UV λ_max 253nm。

本说明书中引用的所有公开物和专利、申请都通过引用并入本文，如同每个独立的公开物或专利申请都被特别且独立地表明通过引用并入本文一样。尽管权利要求主张的主题已经根据各种实施方案被描述，熟练的技术人员将意识到可以在不背离其精神的情况下作出各种修正、替代、删节和改变。因此，意在主题的范围仅仅被所附的权利要求包括其等同物的范围所限制。

Claims

1.具有式

的化合物，或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中：

R^y是羟基(C₁-C₁₀)烷基；

R^a和R^b如下选择：

i)R^a和R^b各自独立地是氢、C₁-C₁₀烷基、或苯基(C₁-C₁₀)烷基，其中该苯基未被取代或被三氟甲基取代；或

ii)R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起形成3-7元杂环；而且

R¹是利巴韦林、viramidine、valopicitabine、PSI-6130、MK-0608、瑞喹莫德、西戈斯韦、拉米夫定、恩替卡韦、替比夫定、racivir、恩曲他滨、克拉夫定、氨多索韦或伐托他滨。

2.如权利要求1所述的化合物，具有式：

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

3.如权利要求1所述的化合物，具有式：

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

4.如权利要求1所述的化合物，具有式：

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

5.具有下式的化合物：

其中R²和R³各自独立地是H，或R²和R³相连形成环状碳酸酯基团；

或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中

R^y是羟基(C₁-C₁₀)烷基；

R^a和R^b如下选择：

ii)R^a和R^b和它们在其上进行取代的氮原子一起形成3-7元杂环。

6.具有下式的化合物：

其中R^d是氢；

各个R^L独立地是H或CO-(C₁-C₁₀)烷基，

或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中

R^y是羟基(C₁-C₁₀)烷基；

R^a和R^b如下选择：

7.具有下式的化合物：

或其药学上可接受的盐或互变异构体，其中：

R^y是羟基(C₁-C₁₀)烷基；

R^a和R^b如下选择：

8.如前述任意一项权利要求所述的化合物，其中R^b独立地是氢、C₁-C₁₀烷基、苯甲基或三氟甲基取代的苯甲基。

9.如权利要求1-7任意一项所述的化合物，其中R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

10.如权利要求1-7任意一项所述的化合物，其中R²和R³各自是氢，R^a是氢，R^b是苯甲基，而且R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH。

11.选自如下的化合物：

或或其药学上可接受的盐或互变异构体。

12.具有如下结构的化合物：

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

13.如权利要求1-12中任意一项权利要求所述的化合物在制备用于治疗感染了黄病毒科病毒或乙肝病毒的宿主的药物中的用途。

14.如权利要求13所述的用途，其中所述病毒是丙肝。

15.如权利要求14所述的用途，其中所述宿主是人。

16.如权利要求14所述的用途，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

17.如权利要求14所述的用途，其中所述施用将相当量的所述化合物或其药学上可接受的盐导向所述宿主的肝脏。

18.如权利要求14所述的用途，其中所述化合物或其药学上可接受的盐与第二抗病毒剂联合或交替施用，所述第二抗病毒剂选自干扰素、利巴韦林、白细胞介素、NS3蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、菲醌、噻唑烷衍生物、噻唑烷、苯甲酰苯胺、解旋酶抑制剂、聚合酶抑制剂、核苷酸类似物、胶霉毒素、浅蓝菌素、反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸、IRES依赖性翻译抑制剂或核酶。

19.如权利要求17所述的用途，其中所述化合物或其药学上可接受的盐与第二抗病毒剂联合或交替施用，所述第二抗病毒剂选自干扰素、利巴韦林、白细胞介素、NS3蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、菲醌、噻唑烷衍生物、噻唑烷、苯甲酰苯胺、解旋酶抑制剂、聚合酶抑制剂、核苷酸类似物、胶霉毒素、浅蓝菌素、反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸、IRES依赖性翻译抑制剂或核酶。

20.如权利要求19所述的用途，其中所述第二药剂是聚乙二醇干扰素α2a、干扰素alphacon-1、天然干扰素、albuferon、干扰素β-1a、ω干扰素、干扰素α、干扰素γ、干扰素τ、干扰素δ或干扰素γ-1b。

21.如权利要求17所述的用途，其中所述宿主是人。

22.如权利要求21所述的用途，其中所述施用将相当量的所述化合物或其药学上可接受的盐导向所述宿主的肝脏。

23.如权利要求13所述的用途，包含治疗感染了乙肝病毒的人类宿主。

24.如权利要求23所述的用途，其中所述化合物具有式

其中R^y是-C(CH₃)₂CH₂OH；

其中R^a和R^b独立地是氢、C₁-C₁₀烷基、或苯甲基；且

而且其中任选地，所述化合物或其药学上可接受的盐可以与第二抗病毒剂联合或交替施用，所述第二抗病毒剂选自干扰素α-2b、聚乙二醇干扰素α-2a、拉米夫定、恩替卡韦、替比夫定、racivir、恩曲他滨、克拉夫定、氨多索韦、伐托他滨、替诺福韦或阿德福韦。

25.如权利要求24所述的用途，其中所述施用将相当量的所述化合物或其药学上可接受的盐导向所述宿主的肝脏。

26.药物组合物，包含如权利要求1、2、3、4或5中任意一项权利要求所述的化合物和药学上可接受的赋形剂或载体。

27.如权利要求26所述的组合物，其中所述化合物是

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

28.如权利要求26所述的组合物，其中所述化合物选自

或其药学上可接受的盐或互变异构体。

29.如权利要求26所述的组合物，其中所述组合物是口服制剂。

30.如权利要求28所述的组合物，其中所述组合物是口服制剂。

31.如权利要求24所述的用途，其中所述化合物具有式：

药学上可接受的盐或互变异构体。