CN101611707B

CN101611707B - 一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法

Info

Publication number: CN101611707B
Application number: CN200910166429.7A
Authority: CN
Inventors: 刘国忠; 张洁岩; 刘勇; 宁良丹
Original assignee: HAINAN NEEMTECH BIOLOGICAL PESTICIDE CO Ltd
Current assignee: Hainan limont Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2009-08-12
Filing date: 2009-08-12
Publication date: 2014-07-16
Anticipated expiration: 2029-08-12
Also published as: CN101611707A

Abstract

本发明提供一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂，其成分以重量百分比计包括：2×10¹¹活芽孢/克的枯草芽孢杆菌1％～20％、稀释剂60％～80％、表面活性剂5％～20％。本发明还提供所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，即将枯草芽孢杆菌母粉或孢子粉加入稀释剂、表面活性剂中，将菌体均匀地分散，粉碎至胶体粒径为5μm以下即得。本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂具有药效高、成本低、对环境和操作人员污染毒害小的特点，是一种新型微生物杀菌剂，具有十分广阔的应用前景。

Description

一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种油悬浮剂及其制备方法，特别涉及枯草芽孢杆菌油悬浮剂及其制备方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌，英文名(Bacillus subtilis)，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2.0～3.0微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。枯草芽孢杆菌可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5′-核苷酸酶的菌种，在遗传学研究中应用广泛。因广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。

枯草芽孢杆菌是一种微生物杀菌剂，对多种植物真菌和细菌病原菌具有抑制生长的作用，可用于农林植物多种病虫害的防治。它通过营养竞争进行生长繁殖从而占据生存空间的方式来阻止植物病原菌的生长，能在植物表面迅速形成一层高密保护膜，使病原菌得不到生存空间，从而保护作物免受病原菌危害；枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，抑制病菌孢子萌发和菌丝生长，从而达到预防与治疗的目的。经田间药效试验结果表明，枯草芽孢杆菌对于黄瓜白粉病、草莓白粉病、灰霉病的防治效果较好。

目前国内外生产的枯草芽孢杆菌均为可湿性粉剂和水剂，因枯草芽孢杆菌为微生物活体，水剂保存时间短，最多三个月，影响使用。枯草芽孢杆菌可湿性粉剂相对而言保存时间较长，但在存贮条件恶劣如温度高时，孢子数下降较多；另外用于大棚使用时，因兑水较多而增加了大棚的湿度；用于森林病虫害防治或果树杀菌时，因树木高大，用喷水雾方法较为困难，且对操作人员危害严重，枯草芽孢杆菌大量流失于土壤中，造成污染。

发明内容

本发明针对现有技术中枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和水剂的不足，提供一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂，所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂保存时间长，药效高，对环境和操作人员毒害小，适用于森林、果园等场合的防病除虫。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂，其组分以重量百分比计包括：

2×10¹¹活芽孢/克的枯草芽孢杆菌母粉：1％～20％

稀释剂：60％～80％

表面活性剂：5％～20％。

所述稀释剂优选为为甲酯化的植物油之一或或几种混合，优选为甲酯化葵花籽油、甲酯化菜籽油、甲酯化大豆油、甲酯化花生油的一种或几种混合。

植物油的主要成分是高级不饱和脂肪酸甘油酯，即长链的烯酸和炔酸的甘油酯，将植物油经催化剂催化与甲醇发生酯化反应生成某酸甲酯即为甲酯化，植物油经甲酯化后作为农药助剂、溶剂，有助于提高制剂的药效。甲酯化的植物油还是清洁的高性能的喷雾助剂，具有粘附、溶解植物表面蜡质层的功能，使有效成分大多作用在作物上，且其来源于植物、生物降解性好、毒性低、对环境无毒害，可更好地防治作物多种病害。

表面活性剂可以增加悬浮率，并在使用过程中均匀地与稀释剂相溶。本发明所述表面活性剂优选采用烷基酚聚氧乙烯醚OP-4、烷基酚聚氧乙烯醚OP-7、烷基酚聚氧乙烯醚OP-10、烷基酚聚氧乙烯醚OP-21、山梨醇酐单月桂酸酯SPAN-20、山梨醇酐单棕榈酸酯SPAN-20、山梨醇酐单油酸酯SPAN-80中的一种或两种以上混合。

本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂还可包含常规的防冻液、增效剂、稳定剂或与其他有效成分进行复配，可以大大提高枯草芽孢杆菌油悬浮剂的药效和农业上的实用性。

所述增效剂优选木质素磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、三苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、苯乙基聚氧乙烯醚、仲烷醇聚氧乙烯醚。

所述稳定剂优选沸点200℃以上的多烷基取代芳烃、二甘醇、三甘醇、邻二氯苯的一种或两种以上混合。

所述防冻剂优选乙二醇或丙二醇或两种混合。

本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂中枯草芽孢杆菌的浓度为2×10⁹～4×10¹⁰活芽孢/克。经田间药效试验证明，由于雾滴粒径极小(2-5μm)，故在作物上的覆盖面大，因此药效比普通制剂高20％以上。施药功效高，即省工省时，功效为常规喷雾的10倍，故大大降低施药成本。

本发明还提供一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法。

本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法如下：

按配方量将枯草芽孢杆菌、稀释剂、表面活性剂均匀混合，再将其粉碎，使固体颗粒达到2-5μm以下的胶体粒径，使其成为均匀的油悬浮剂，即得本发明所述枯草芽孢杆菌。经检测有效成分含量、pH值、倾倒性、稳定性等各项指标合格后进行包装储运。

本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的突出特点为：

1.本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂使枯草芽孢杆菌的孢子悬浮于稀释剂中，这种方法增加了微生物活体的存活时间，30℃贮存18周稳定性实验显示其分解率不到2％，而枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的分解率高达20％。可见油悬浮剂货架期大大增加，更易于商品化。

2.热雾剂通常是将农药原药溶解于高沸点溶剂中，形成单相溶液，因枯草芽孢杆菌母药不能溶解，因此不能制成热雾剂。本发明克服了枯草芽孢杆菌不能溶解，因此不能制成热雾剂的缺陷，提供的枯草芽孢杆菌油悬浮剂可形成热雾，由于它的雾滴微细，能被气雾机送至很远很高的距离，并具有产长时间的飘浮能力，可用于森林、果园等场合，防病除虫。

3.提高了药效。由于雾滴粒径极小(2-5μm占80％以上)，故在作物上的覆盖面大，可覆盖常规喷雾无法到达的植株叶背和叶片基部等隐蔽处，达到了对植株病害的全方位防治，因此药效比普通制剂高20％以上。

4.施药功效高，省工省时。由于雾滴粒径小，弥散性好，绝大部分可沉积于植株表面，药液利用率高，可节省大量人工、药械及时间，功效约为常规喷雾的10倍，大大降低施药成本。

5.对环境和操作人员毒害小。常规喷水雾对高大密植作物喷雾时，对操作人员危害严重，且药滴大量流失于土壤中，造成污染。

6.无污染。本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的表面活性剂、稀释剂都采用绿色物质，对环境无影响。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

实施例1：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备

称取2×10¹¹个活芽孢/克的枯草芽孢杆菌母粉200克，甲酯化葵花籽植物油750克，OP-10表面活性剂50克，在混合釜中混合，在泵入超微粉碎砂磨机中粉碎3小时，即可形成稳定的油悬浮剂，经检测颗粒粒径达到5μm以下，枯草芽孢杆菌的浓度为4×10¹⁰活芽孢/克。

实施例2：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备

称取2×10¹¹个活芽孢/克的枯草芽孢杆菌200克，稀释剂(甲酯化的葵花籽植物油)600克，OP-10表面活性剂200克，在混合釜中混合，再泵入超微粉碎砂磨机中粉碎3小时，形成一稳定的油悬浮剂，经检测颗粒粒径达到5μm以下，枯草芽孢杆菌的浓度为4×10¹⁰活芽孢/克。

实施例3：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备

称取2×10¹¹个活芽孢/克枯草芽孢杆菌母粉10克，稀释剂(葵花籽植物油)800克，SPAN-20表面活性剂190克，在混合釜中混合，再泵入超微粉碎砂磨机中粉碎3小时，形成一稳定的油悬浮剂，经检测颗粒粒径达到5μm以下，枯草芽孢杆菌的浓度为2×10⁹活芽孢/克。

实施例4：

称取2×10¹¹个活芽孢/克的枯草芽孢杆菌母粉100克，葵花籽植物油300克，OP-10表面活性剂200克，防冻液乙二醇、增效剂十二烷基苯磺酸钙、稳定剂邻二氯苯共计400g，在混合釜中混合，再泵入超微粉碎砂磨机中粉碎3小时，形成稳定的油悬浮剂，经检测颗粒粒径达到5μm以下，枯草芽孢杆菌的浓度为2×10¹⁰活芽孢/克。

实施例5：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的田间药效试验

参照GBT 17980.67-2004农药田间药效试验准则(二)，于2008年7-8月在湖北省襄樊市进行2×10⁹、1×10¹⁰、4×10¹⁰活芽孢/克枯草芽孢杆菌油悬浮剂的田间药效试验，进行超低容喷雾，防治水稻稻瘟病(叶瘟)，共施药两次，施药制剂量为1200克/公顷。药前病情指数分别为1.02、0.99、1.00。第二次施药后14天调查，病情指数分别为2.09、1.41、1.25，空白对照病情指数为9.57，该药剂防效达到79.19％、85.42％、87.28％。同年在广东省和海南省对该药剂进行的田间药效试验，防效均达到80％以上。

实施例5：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的各项检测指标

表1、枯草芽孢杆菌油悬浮剂检测指标

低温稳定性和热贮稳定性试验在正常生产情况下，每3个月至少检验一次。

表2、本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂小试生产产品检测结果

实施例6：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂与不同剂型稳定性对比试验

将含量分别为1.25×10⁹、1.32×10¹⁰活芽孢/克枯草芽孢杆菌油悬浮剂和可湿性粉剂各200克，贮存于30℃的恒温箱内，18周后，通过鉴别及定量测定试验测定每克菌剂所含活芽孢数量。结果表明，枯草芽孢杆菌油悬浮剂的分解率低于2％，而可湿性粉剂的分解率则高达20％，油悬浮剂中活芽孢的存活率明显高于可湿性粉剂，说明本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂稳定性高，可延长枯草芽孢杆菌制剂的货架期。

表3、两种枯草芽孢杆菌制剂30℃贮存18周稳定性实验

实施例7：本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂与其他剂型的药效对比试验

参照GBT 17980.67-2004农药田间药效试验准则(二)、GB/T17980.111-2004农药田间药效试验准则(二)第111部分：杀菌剂防治番茄叶霉病、以及GB/T 17980.95-2004农药田间药效试验准则(二)第95部分：杀菌剂防治香蕉叶斑病，对本发明实施例1、2、3制备的枯草芽孢杆菌油悬浮剂的药效进行对比试验，其结果如下表所示。

表4、本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂与其他剂型的药效对比实验

由以上对比试验结果可知，本发明所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂药效比普通制剂高20％左右。

Claims

1.一种枯草芽孢杆菌油悬浮剂，其成分以重量百分比计包括：

2×10¹¹活芽孢/克的枯草芽孢杆菌母粉：1%～20%

稀释剂：60%～80%

表面活性剂：5%～20%以及防冻液、增效剂和稳定剂；

其中，所述稀释剂为甲酯化植物油的一种或几种混合；

所述表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚OP-4、烷基酚聚氧乙烯醚OP-7、烷基酚聚氧乙烯醚OP-10、烷基酚聚氧乙烯醚OP-21、山梨醇酐单月桂酸酯SPAN-20、山梨醇酐单棕榈酸酯SPAN-20、山梨醇酐单油酸酯SPAN-80中的一种或两种以上混合；

所述增效剂为木质素磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、三苯乙基苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚、苯乙基聚氧乙烯醚或仲烷醇聚氧乙烯醚的一种或两种以上混合；

所述稳定剂包括二甘醇、三甘醇、邻二氯苯或两种以上混合；

所述防冻剂包括乙二醇或丙二醇或两种混合。

2.一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌油悬浮剂的制备方法，其特征在于，按配方量将枯草芽孢杆菌、稀释剂、表面活性剂均匀混合，粉碎至胶体粒径为5μm以下，即得所述枯草芽孢杆菌的油悬浮剂。