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CN101412983B - 一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用 - Google Patents

一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用 Download PDF

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CN101412983B CN2008102355120A CN200810235512A CN101412983B CN 101412983 B CN101412983 B CN 101412983B CN 2008102355120 A CN2008102355120 A CN 2008102355120A CN 200810235512 A CN200810235512 A CN 200810235512A CN 101412983 B CN101412983 B CN 101412983B
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Abstract

一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用，属于微生物技术领域。一株凝结芽孢杆菌菌株，其分类命名为：凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)JSSW-LA-07，巳保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.2602；该凝结芽孢杆菌菌株JSSW-LA-07在有氧条件下能够产芽孢，并在发酵过程中代谢产出少量L-乳酸；在无氧静置条件下能够产出纯度较高的L-乳酸。该菌不产生对人体、养殖动物有害的物质，具有无毒、无残留、无副作用等特点，它对生产绿色、安全的畜禽、水产品，改善养殖生态环境都具有重要意义，可广泛应用于高产、优质、高效、生态、安全的畜禽、水产养殖生产及养殖生态环境的调控。

Description

一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用
技术领域
一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
我国是一个农业大国，养殖业在整个农业中占有相当的比重，随着我国畜牧、水产养殖业的迅猛发展，肉类和禽类产量跃居世界前列，但是，养殖业经济迅速发展的同时却忽视了畜禽、水产品的食用安全问题。近年来高密度集约化的人工养殖以重数量轻质量的方式发展，导致养殖生态环境遭到了破环，养殖动物病害频繁爆发；人们长期大量使用抗生素及化学合成药物导致抗药性、耐药性越来越明显，养殖动物抗病能力不断下降，并且药物残留带来二次污染直接影响人类的免疫和健康，从而使畜禽、水产品的食用安全遭到威胁，严重影响养殖业的可持续发展。近几年间，全球相继发生了包括比利时二恶英事件、英国疯牛病事件、日本大肠杆菌“0—157”食物中毒事件、法国李斯特杆菌污染事件、中国的“瘦肉精”事件、多宝鱼事件等一系列重大食品安全事件，使食品安全问题迅速引起全球关注。氯霉素、孔雀石绿、硝基呋喃等药物残留问题使我国的水产品在国际市场上屡遭“绿色贸易壁垒”。近期三鹿奶粉三聚氰胺污染事件再次敲响了食品安全的警钟，同时也向人们警示在农产品生产的源头上消除食品安全问题是当务之急。因此，在不影响畜禽产品、水产品产量和质量的前提下，如何降低畜禽、水产养殖业所带来的环境污染，提高畜禽、水产品的食用安全性已成为人们关注的焦点，同时也是研究的热点。水产养殖、畜禽养殖行业在向高产、优质、高效、生态、安全的现代养殖方式转变和发展过程中，都急需能够替代或部分替代抗生素和化学药物的新型绿色、安全饲料添加剂及水质、环境调控技术。
用微生态制剂(Microbial ecological agent)进行畜禽、水产养殖动物病害的防治，修复养殖污染环境，是近年发展起来的一种新方法。微生态制剂是基于微生态平衡理论、微生态营养理论及微生态防治理论而发展起来的微生物产品，它对动物疾病的防治是一种主动形式的防治，微生态制剂有助于扶持体内益生菌生长，拮抗致病菌繁殖，增强机体免疫功能，防治并减少疾病的发生，提高宿主健康水平，促进营养物质消化吸收，净化动物体内外环境，抑制腐败细菌的生长，进而减少氨、胺等有害物质的产生，减少环境中臭气的污染；除此之外，它可直接用于畜禽污染环境中，依靠微生物对畜禽粪便中有机物的降解作用，来降低畜禽粪便对环境的污染；或应用于养殖水体中，通过对水体有害物质的分解、病原菌的抑制及水体有益菌群的培育，来改善水质，维持水体生态平衡，从而保持畜禽、水产养殖生产与环境保护的协调发展。微生态制剂具有无毒害、无副作用、无残留、无污染、无耐药性，能提高动物生产性能，提高饲料转化率等诸多的优点，因此正日益受到人们的重视，其广阔前景是毋庸置疑的。
目前，微生态制剂已经广泛应用于畜禽、水产养殖业中，对微生态制剂的开发和研究，国内外已进入高潮，并且已形成强大的产业，每年的收入相当可观。有学者指出“抗生素之后的时代，将是微生态制剂的时代”。作为饲用微生物添加剂，乳酸菌类益生菌是目前我国农业部、美国食品及药物管理局等国内外政府批准使用的数量最多、效果较好的一类安全微生物菌种，具有良好的生物学功能，它具有提高饲料转化率、提高增重，补充、调节、维持动物肠道内微生物平衡，抑制病原菌，增强机体免疫力，防止疾病发生、治疗已发疾病、降低死亡率，促进消化等作用，还可提高畜禽渔类成品质量，避免大量使用化学药物和抗生素造成的药物残留和污染，因此，它具有无毒、无抗药性、无残留、无副作用等特点。此外，乳酸菌能利用有机物进行生长，降低污染水体的生物耗氧量和化学耗氧量，是一类重要的污水处理微生物，可修复养殖水体环境。
由于菌株自身的生物学特性是影响乳酸菌类饲用微生物添加剂应用效果的关键因素，大多数乳酸菌不产芽孢，营养菌体对环境抗逆性差，不耐氧，不耐热，不利于饲料加工和保存，严重影响其质量及应用效果，在水产养殖和饲料工业中的应用受到很大的限制。由此，基于上述背景，如果可以开发出兼有直接参与养殖动物体内微生态平衡的调整、促进生长，防治疾病，同时又能改善养殖环境的微生态制剂，则对减少抗生素和化学药物的使用，生产无污染的绿色畜禽、水产品，提高养殖经济效益具有重要意义。
乳酸是广泛存在于人、动物、植物和微生物等生物体中的有机酸。其分子结构中含有一个不对称碳原子，因此具有旋光性，按其构型可分D(-)-乳酸、L(+)-乳酸和DL-乳酸三种。人体只含有L-乳酸脱氢酶，因此只能代谢利用L-乳酸，过多食用D-乳酸或DL-乳酸都会导致人体代谢功能的紊乱，危害人体健康，而对L-乳酸则不加限制。因此，人类服用能够在体内产L-乳酸的益生菌就成为一种十分绿色健康的食用选择，它能降低消化道pH，使肠道处于酸性环境，抑制病原菌生长，对人体肠道健康起到积极的作用。哺乳动物与人类一样，都只能代谢利用L-乳酸，因此在饲料中添加在动物体内能够产L-乳酸的乳酸菌就具有十分广阔的市场前景，而且也将成为发展无公害产品的有效途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌芽孢的高密度培养方法及其应用，在这种培养方法下凝结芽孢杆菌在有氧条件下能够产芽孢，在发酵过程中代谢产出少量L-乳酸；在厌氧静置条件下凝结芽孢杆菌能够产出纯度较高的L-乳酸。
本发明的技术方案：一株凝结芽孢杆菌菌株，其分类命名为：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)JSSW-LA-07，巳保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.2602；该菌株JSSW-LA-07在有氧条件下能够产芽孢，并在发酵过程中代谢产出少量L-乳酸；在静置厌氧条件下能够产出纯度较高的L-乳酸。
所述凝结芽孢杆菌的高密度芽孢制剂的制备方法，是通过以下步骤来完成：
(1)斜面菌体活化
无菌开启菌株JSSW-LA-07的冻干保藏菌种，划线接种于麸皮营养琼脂试管斜面，斜面培养基(麸皮营养琼脂培养基)组成以g/L计为：蛋白胨10，牛肉膏3，NaCl5，麸皮10，琼脂15-20，pH7.0-7.2；30-60℃培养24-48h；然后划线转接于麸皮营养琼脂茄子瓶斜面，30-60℃培养24-48h，镜检，当90％以上菌体形成芽孢时，即为成熟，准备移种；
(2)摇瓶及种子罐培养
准备一个内装玻璃珠的无菌三角瓶，用无菌水将茄子瓶斜面上的成熟菌泥刮洗下来，装入三角瓶，振荡分散菌泥，获得均匀的菌悬液，将菌悬液在80℃水浴中加热10分钟，以体积比1％-10％的接种量接入250mL三角瓶，装液量为15mL；或500mL三角瓶，装液量为30mL；摇瓶培养，或接入种子罐培养，种子罐体积选用10L、20L、50L或100L，种子罐的装量系数体积比为60％-70％；
培养基组成为以g/L计：麸皮5-20，酵母膏5.0-10，豆粕粉5-10，K2HPO4 3，NaCl 5，MnSO4·H2O 0.3，pH 7.0；
培养条件为：摇瓶转速200r/min；种子罐搅拌转速≥150r/min，通气量1-2m3/h，培养温度为30-60℃，培养时间为18-48h；
(3)发酵罐培养
种子培养液以体积比1％-10％的接种量接入发酵罐，发酵罐选用1T、2T、或3T体积的发酵罐，发酵罐装量系数体积比为60％-70％；
发酵罐培养基组成：
发酵培养基由碳源、氮源和无机盐组成，以g/L计：碳源5-20，氮源5-20，K2HPO4 3，NaCl 5，MnSO4·H2O 0.3，碳酸钙2-10，pH6.0-8.0；
发酵罐培养条件为：搅拌转速≥150r/min，通气量1-2m3/h，培养温度为30-60℃，培养时间为18-48h；在培养过程中根据泡沫的高涨情况加豆油或泡敌进行消泡，防止因泡沫逃逸出发酵罐而引起杂菌污染；取发酵液进行镜检，当90％以上的菌体已形成芽孢时，即可放罐结束培养；取样测总菌数及芽孢数；
活菌及芽孢检测用番茄汁琼脂计数培养基以g/L计：酵母膏10，蛋白胨10，番茄汁200mL，CaCO3 5 ，琼脂15-20，蒸馏水800mL，pH7.0-7.2；测得发酵液芽孢数量达1×109cfu/mL以上；
(4)芽孢收集及菌粉制备
将培养液泵入转速为15000r/min的连续式离心机进行离心，获得芽孢，将芽孢与干淀粉以重量比1:1-5混合，在40-50℃干燥20-24h，粉碎机粉碎，过40目筛，加入配料石粉、麸皮或玉米芯粉中的一种或几种，混合后制成微生态制剂，芽孢含量达1×109cfu/mL以上。
所述的制备方法，其凝结芽孢杆菌好氧液体发酵的碳源和氮源的选择十分广泛，碳源选用麸皮、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、果糖、阿拉伯糖、玉米糖、大米糖、可溶性淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、小麦淀粉、红薯淀粉或马铃薯淀粉中的一种或几种；氮源选用蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、玉米浆粉、豆粕粉、大豆肽、棉籽蛋白、黄豆饼粉或花生饼粉中的一种或几种。
静置厌氧发酵产L-乳酸：将凝结芽孢杆菌芽孢接入下述培养基中，培养基组成以g/L计为：蛋白胨5-10，酵母膏5-10，葡萄糖10-20，牛肉膏1-3，吐温-800.5，pH7.0。培养条件：培养温度30-60℃，静置厌氧发酵培养，培养时间24-72h。
L-乳酸检测：将发酵液先加热至80-100℃，然后于4000rpm/min离心5分钟，取上清液用L-乳酸脱氢酶法测定或以此方法为原理的SBA-40C生物传感分析仪(山东科学院生物研究所研制)测L-乳酸含量，测得L-乳酸含量达8.0g/L以上。
本发明的有益效果：
1.凝结芽孢杆菌属于兼性好(厌)氧菌，在有氧条件下，能发酵形成高浓度、高活性的芽孢；在静置无氧条件下，能发酵产生对人和动物有益的L-乳酸。
2.发酵培养基中可选择的C源、N源十分广泛，所以运用于生产时，可以选用经济实惠的原料作为C、N源；并且其温度生长范围广，在30℃-60℃范围均能生长，在较高温度下生长，减少了染菌的机会，单罐培养获得芽孢浓度可达1×109cfu/ml以上。
3.凝结芽孢杆菌是乳酸菌类的一种益生菌，它具有一般乳酸菌的维持肠道微生态平衡，刺激免疫，提高机体健康水平，提高人和动物消化功能等作用外，同时还具有普通乳酸菌所不具备的环境抗逆性强、抗胃酸、抗干燥、耐高温高压、易贮存等独特的生物特性。
4.凝结芽孢杆菌可作为动物益生素，直接添加于畜禽类饲料、水产饵料中，补充、调节、维持动物肠道内微生物的平衡，提高动物机体免疫力、抑制有害细菌的生长繁殖，并且凝结芽孢杆菌在哺乳动物体内无氧条件下产生的L-乳酸能够直接被机体吸收，提高动物免疫力和抵抗力，从而减少抗生素药物的使用。它还可应用于养殖生态环境的调控，通过对养殖环境中有机污染物、有害物质的分解，病原菌的抑制等，对养殖环境进行微生态修复，从而改善养殖环境，维持环境生态平衡。
5.该菌不产生对人体、养殖动物有害的物质，具有无毒、无残留、无副作用等特点，同时它对环境的保护及治理也起到了积极的作用。因此，它对生产绿色、安全的畜禽、水产品，改善养殖生态环境都具有重要意义，广泛应用于高产、优质、高效、生态、安全的畜禽、水产养殖生产及养殖生态环境的调控。
生物材料样品保藏
一株凝结芽孢杆菌菌株，其分类命名为：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)JSSW-LA-07，巳保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2008年7月28日，保藏号为CGMCC No.2602。
具体实施方式
实施例1：高密度凝结芽孢杆菌芽孢的培养
1、菌体的活化
无菌开启凝结芽孢杆菌JSSW-LA-07的冻干菌种，划线接种于试管麸皮营养琼脂斜面，斜面培养基组成为：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，麸皮10g/L，琼脂15-20g/L，蒸馏水1L，pH 7.0-7.2。40℃培养20-24小时，然后划线转接于麸皮营养琼脂茄子瓶斜面，40℃培养20-24小时，镜检，当90％以上菌体形成芽孢时，即为成熟，可准备移种。
2、100L种子罐培养
准备一个内装玻璃珠的无菌三角瓶，用无菌水将茄子瓶斜面上的成熟菌泥刮洗下来，装入三角瓶，振荡分散菌泥，获得均匀的菌悬液。将菌悬液在80℃水浴中加热10分钟，以体积比2％-10％的接种量接入100L种子罐，种子罐的装量系数为60％-70％(v/v)，即100L种子罐装培养基60-70L。
种子培养基组成为：麸皮20g/L，酵母膏5g/L，豆粕粉10g/L，K2HPO4 3g/L，NaCl 5g/L，MnSO4·H2O 0.3g/L，pH7.0。
种子罐培养条件为：搅拌转速200r/min，通气量1-2m3/h，培养温度为40℃，培养时间为20-24h。
3、1T发酵罐培养
种子培养液以体积比5％-10％的接种量接入1T发酵罐，发酵罐装量系数为60％-70％(v/v)，即1T发酵罐装培养基600-700L。
发酵培养基组成为：麸皮20g/L，酵母膏5g/L，豆粕粉10g/L，K2HPO4 3g/L，NaCl 5g/L，MnSO4·H2O 0.3g/L，碳酸钙5g/L，pH 7.0。
发酵罐培养条件为：搅拌转速200r/min，通气量1.5m3/h，培养温度为45℃，培养时间为48h。在培养过程中根据泡沫的高涨情况加豆油或泡敌进行消泡，防止因泡沫逃逸出发酵罐而引起杂菌污染；取发酵液进行镜检，当90％以上的菌体已形成芽孢时，即可放罐结束培养；取样测总菌数及芽孢数；
番茄汁琼脂计数培养基：酵母膏10g/L，蛋白胨10g/L，番茄汁200mL，蒸馏水800mL，琼脂15-20g/L，CaCO3 5g/L，pH7.0-7.2。
发酵结束后，测得发酵液总菌数为6.0×109CFU/mL，芽孢数达5.8×109CFU/mL，芽孢率96.7％。SBA生物传感分析仪测得L-乳酸的浓度为3.0g/L。
实施例2：凝结芽孢杆菌静置培养产L-乳酸
1、静置发酵培养
将凝结芽孢杆菌芽孢接入下述培养基中，培养基组成为：蛋白胨5g/L，酵母浸膏5g/L，葡萄糖10g/L，牛肉膏1g/L，吐温-800.5g/L，蒸馏水1000mL，pH7.0。
培养条件：培养温度：45℃，培养时间：72h，静置厌氧培养。
2、L-乳酸检测
将发酵液先加热至80-100℃，然后于4000rpm/min离心5分钟，取上清液用SBA-40C生物传感分析仪测L-乳酸含量，测得L-乳酸含量为8.5g/L。
实施例3：制作微生态制剂
1、凝结芽孢杆菌芽孢的培养方法与实施例1所述相同
2、凝结芽孢杆菌菌粉的制备
将高密度纯培养收集的凝结芽孢杆菌湿菌体与干淀粉1∶1-5混合，在40-50℃下干燥20-24h，粉碎机粉碎，过40目筛，最后用干淀粉调整菌粉中的芽孢数，使菌粉中凝结芽孢杆菌的芽孢数≥5×109个/克。
3、成品制备
取辅料石粉过40目筛后，与凝结芽孢杆菌菌粉混合，用饲料混合机拌匀，使成品中凝结芽孢杆菌芽孢总数≥1×109个/克。成品采用铝箔袋装，每袋装量1kg，15袋为1个纸箱包装，纸箱材料采用瓦楞纸。
实施例4：凝结芽孢杆菌制剂的应用实例1
取养殖池塘水，在实验室的水池中进行凝结芽孢杆菌制剂产品净化水质的试验。实验用水池为瓷砖贴片水泥池，水体体积0.05m3。水温25℃，曝气20小时后，添加氯化铵、亚硝酸钾调整起始氨氮和亚硝酸盐浓度。起始氨氮浓度为1.20mg/L，亚硝酸盐浓度0.50mg/L，化学需氧量COD为12.36mg/L，试验分为对照组和试验组，每组3个平行，按0.3ppm的添加量将凝结芽孢杆菌制剂加入每个试验组，5天后分别检测试验组和对照组的水质变化，水质各指标变化平均值如下：
试验组：氨氮含量为0.23mg/L，亚硝酸盐含量为0mg/L，COD为6.92mg/L。
对照组：氨氮含量1.26mg/L，亚硝酸盐含量0.68mg/L，COD为14.22mg/L。
因此，凝结芽孢杆菌JSSW-LA-07可明显降低养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐等有害物质含量，改善养殖池塘水质，可作为水质净化剂应用于水产养殖中。
实施例5：凝结芽孢杆菌制剂的应用实例2
试验选择出生重相近的1日龄彼德逊鸡300只，试验分为对照组和试验组，每组3个平行，分别于同一养殖大棚内地面平养。对照组，只饲喂基础日粮，不添加凝结芽孢杆菌制剂，试验组在基础日粮中添加重量比0.5％的凝结芽孢杆菌制剂。在开食前各组全部称出出生重量，出生后24h开食，将凝结芽孢杆菌制剂和饲料充分混匀后饲喂。试验期为49d，每周称重1次，并空腹取肠内容物，将其稀释后，以涂布方法接种在SS琼脂培养基上进行细菌培养，37℃有氧培养24h后进行菌落计数。到7周龄时，试验结果如下：
对照组：平均增重2058g，料重比2.20，存活率94.67％，沙门氏菌阳性率29.60％
试验组：平均增重2385g，料重比1.90，存活率97.33％，沙门氏菌阳性率23.50％
试验组与对照组比较，试验组平均增重比对照组提高15.89％，经单因素方差分析，差异极显著(P<0.01)；试验组比对照组料重比降低极显著；从存活率情况看，试验组比对照组存活率提高；试验组比对照组沙门氏菌阳性率降低20.61％。以上结果表明，在鸡饲料中添加凝结芽孢杆菌制剂对鸡的生长发育大有益处，它在提高增重，提高饲料转化率，降低料重比，提高存活率，增强抗病能力及免疫力方面效果明显。因此，该凝结芽孢杆菌制剂能够替代抗生素或抗菌药作为生长促进剂使用。

Claims (3)

1.一株凝结芽孢杆菌菌株，其分类命名为：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)JSSW-LA-07，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.2602；该菌株JSSW-LA-07在有氧条件下能够产芽孢，并在发酵过程中代谢产出少量L-乳酸；在静置厌氧条件下能够产出纯度较高的L-乳酸。
2.一种权利要求1所述凝结芽孢杆菌的高密度芽孢制剂的制备方法，其特征是通过以下步骤来完成：
(1)斜面菌体活化
无菌开启菌株JSSW-LA-07的冻干保藏菌种，划线接种于麸皮营养琼脂试管斜面，斜面培养基组成以g/L计为：蛋白胨10，牛肉膏3，NaCl 5，麸皮10，琼脂15-20，pH 7.0-7.2；30-60℃培养24-48h；然后划线转接于麸皮营养琼脂茄子瓶斜面，30-60℃培养24-48h，镜检，当90％以上菌体形成芽孢时，即为成熟，准备移种；
(2)摇瓶及种子罐培养
准备一个内装玻璃珠的无菌三角瓶，用无菌水将茄子瓶斜面上的成熟菌泥刮洗下来，装入三角瓶，振荡分散菌泥，获得均匀的菌悬液，将菌悬液在80℃水浴中加热10分钟，以体积比1％-10％的接种量接入250mL三角瓶，装液量为15mL；或500mL三角瓶，装液量为30mL；摇瓶培养，或接入种子罐培养，种子罐体积选用10L、20L、50L或100L，种子罐的装量系数体积比为60％-70％；
培养基组成为以g/L计：麸皮5-20，酵母膏5.0-10，豆粕粉5-10，K2HPO43，NaCl5，MnSO4·H2O 0.3，pH 7.0；
培养条件为：摇瓶转速200r/min；种子罐搅拌转速≥150r/min，通气量1-2m3/h，培养温度为30-60℃，培养时间为18-48h；
(3)发酵罐培养
种子培养液以体积比1％-10％的接种量接入发酵罐，发酵罐选用1T、2T、或3T体积的发酵罐，发酵罐装量系数体积比为60％-70％；
发酵罐培养基组成：
发酵培养基由碳源、氮源和无机盐组成，以g/L计：碳源5-20，氮源5-20，K2HPO4 3，NaCl 5，MnSO4·H2O 0.3，碳酸钙2-10，pH 6.0-8.0；
发酵罐培养条件为：搅拌转速≥150r/min，通气量1-2m3/h，培养温度为30-60℃，培养时间为18-48h；在培养过程中根据泡沫的高涨情况加豆油或泡敌进行消泡，防止因泡沫逃逸出发酵罐而引起杂菌污染；取发酵液进行镜检，当90％以上的菌体已形成芽孢时，即可放罐结束培养；取样测总菌数及芽孢数；
活菌及芽孢检测用番茄汁琼脂计数培养基以g/L计：酵母膏10，蛋白胨10， 番茄汁200mL，CaCO3 5，琼脂15-20，蒸馏水800mL，pH 7.0-7.2；测得发酵液芽孢数量达1×109cfu/mL以上；
(4)芽孢收集及菌粉制备
将培养液泵入转速为15000r/min的连续式离心机进行离心，获得芽孢，将芽孢与干淀粉以重量比1:1-5混合，在40-50℃干燥20-24h，粉碎机粉碎，过40目筛，加入配料石粉、麸皮或玉米芯粉中的一种或几种，混合后制成微生态制剂，芽孢含量达1×109cfu/mL以上。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是凝结芽孢杆菌液体发酵的碳源和氮源的选择十分广泛，碳源选用麸皮、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、果糖、阿拉伯糖、玉米糖、大米糖、可溶性淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、小麦淀粉、红薯淀粉或马铃薯淀粉中的一种或几种；氮源选用蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、玉米浆粉、豆粕粉、大豆肽、棉籽蛋白、黄豆饼粉或花生饼粉中的一种或几种。
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