CN101396371B - 一种藏药材炮制物质佐太的含量测定方法及其在制药中的用途 - Google Patents
一种藏药材炮制物质佐太的含量测定方法及其在制药中的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提出一种藏药材炮制物佐太(坐台)的质控方法及其新用途。对佐太(坐台)的药学特征如化学组成、性状、鉴别方法、主要成分含量测定等得以进一步明确，并提出了该药物的药物新用途。本发明有利于为佐太(坐台)这一藏药界的神秘炮制物提供科学的鉴别和测定依据，明确并进一步拓展其药物作用，对藏药的安全生产和可持续发展具有重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及藏药生产领域的一种藏药材佐太的鉴别测定方法及药物作用。
背景技术
佐太是藏语“仁青欧曲佐珠钦木”的简称，又译“佐台”(卫藏、安多语)、“佐塔”(康巴语)、“坐台”等，“佐”是炼制，“太”指灰、粉末，意思是煅烧成灰，是一种由剧毒的藏药材水银(又名“欧曲”)加工成的具有很高药用价值的药材。佐太在西藏已有上千年的用药历史，其炮制工艺是目前国内加工程序最为复杂、操作难度最高的药材炮制工艺，同时由于其独特的药理作用使其在藏药界具有极高的地位和极为神秘的色彩，佐太因此被誉为“藏药技术加工之最”。目前藏药中最为经典的几个产品如：七十味珍珠丸、仁青常觉、坐珠达西、二十五味松石丸等组方中均含有佐太。它像中药方剂中的“六神曲”一样，其本身就是一个复方炮制品。
佐太的炮制工艺在我厂主管单位西藏自治区藏医院申报并获得授权的专利“药用水银粉末(坐台)的加工方法”(申请号：88107006.8)中作了详尽的描述，近几年来随着藏药研究的进一步发展，以及我厂对佐太药物基础研究的进一步深入，我厂对佐太的药学特征如化学组成、性状、鉴别方法、主要成分含量测定状等得以进一步明确，并提出了该药物的新用途。本发明有利于为佐太这一藏药界的神秘炮制物提供科学的鉴别和测定依据，明确并进一步拓展其药物作用，对藏药的生产和发展具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在提供一种藏药材的炮制物及其测定方法。
本发明所述的藏药材的炮制物品佐太是藏药材水银(又名“欧曲”)的炮制品，含水银与硫等结合而成的多种汞化合物及多种矿物质的混合物，主要成分为硫化汞。
以硫化汞计，含量在37～47％。性状为近黑色粉末，具光泽，无臭，无味。
1、佐太用以下方法进行鉴别：
(1)取本品少量，撒于水面，上浮，迅速散开。
(2)汞珠取本品约1g，平铺于白纸，用扩大镜检视，不应有汞珠存在。
(3)取本品2g，加盐酸-硝酸(3∶1)混合溶液2ml使之溶解，蒸干，加水2ml再使之溶解，滤过，滤液显示汞盐与硫酸盐的鉴别反应。
(4)取本品适量，用盐酸湿润后，在光洁铜片上摩擦，铜片表面显银白色，加热烘烤后，银白色消失。
2、佐太用以下方法进行含量测定：
(1)样品处理取0.1～0.5g于微波消解罐中，加1ml硝酸，3ml盐酸，4ml去离子水，冷消化2h后，盖好安全阀，将消解罐放入微波炉消解系统中，设置消解系统为最佳分析条件，至消解完全，冷却后用稀硝酸溶液定量转移并定容至25ml，混匀待测。
(2)标准溶液汞标准溶液：用稀硝酸将汞标准溶液(1000ug/ml)稀释成10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ug/L标准系列。
(3)实验步骤混合酸湿法消化后，强酸性介质中将氯化亚硒还原成元素汞，以氩气为载体，将元素吹入原子吸收分光光度计中，进行冷原子吸收测定。吸收253.7nm的共振线，其吸收值与含量成正比，与标准系列比较定量。
(4)计算公式X(ug/g)＝C(ug/L)×V(m1)/[G(g)×10-3]
X：含量；C：浓度；V：稀释体积；G：质量。
(5)含量计算经检测，本品汞含量在32～40％，以硫化汞计，含量在37～47％。
3、由于历史原因及研究条件的制约，佐太的药效学基础研究极为薄弱，仅有零星的安全性及毒理文献报道，至今尚未见有较为系统全面的药效学基础研究或文献报道。
我厂联合了国家药物研究GLP基地山东大学药物评价中心对佐太进行系统的药效学研究，发现佐太在镇静安神、促进睡眠、抗惊厥、解热、消肿、抗炎、提高免疫力等方面有明显作用。
具体实施方式
1、佐太的鉴别
1.1取本品少量，撒于水面，上浮，迅速散开。结果见表1：
| 批号 | 070801 | 070802 | 070803 |
| 鉴别反应 | 合格 | 合格 | 合格 |
1.2汞珠取本品约1g，平铺于白纸，用扩大镜检视，不应有汞珠存在。结果见表2：
| 批号 | 070801 | 070802 | 070803 |
| 鉴别反应 | 合格 | 合格 | 合格 |
1.3取本品粉末2g，加盐酸-硝酸(3∶1)的混合溶液2ml使溶解，蒸干，加水2ml使溶解，滤过，滤液显汞盐(附录IV)与硫酸盐(附录IV)的鉴别反应。结果见表3：
| 批号 | 070801 | 070802 | 070803 |
| 鉴别反应 | 合格 | 合格 | 合格 |
1.4取本品适量，用盐酸湿润后，在光洁铜片上摩擦，铜片表面显银白色，加热烘烤后，银白色消失。结果见表4：
| 批号 | 070801 | 070802 | 070803 |
| 鉴别反应 | 合格 | 合格 | 合格 |
结果：三批样品按本发明提供的方法鉴别重现性好，方法可行，可控，具有专属性。
2、佐太的含量测定
2.1样品处理取0.1~0.5g于微波消解罐中，加1ml硝酸，3ml盐酸，4ml去离子水，冷消化2h后，盖好安全阀，将消解罐放入微波炉消解系统中，设置消解系统为最佳分析条件，至消解完全，冷却后用稀硝酸溶液定量转移并定容至25ml，混匀待测。
2.2标准溶液汞标准溶液：用稀硝酸将汞标准溶液(1000ug/ml)稀释成10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ug/L标准系列。
2.3实验步骤混合酸湿法消化后，强酸性介质中将氯化亚硒还原成元素汞，以氩气为载体，将元素吹入原子吸收分光光度计中，进行冷原子吸收测定。吸收253.7nm的共振线，其吸收值与含量成正比，与标准系列比较定量。
2.4计算公式X(ug/g)＝C(ug/L)×V(ml)/[G(g)×10-3]
X：含量；C：浓度；V：稀释体积；G：质量。
经检测，本品汞含量在32～40％，以硫化汞计，含量在37～47％。
3、佐太的药效学试验
3.1佐太与戊巴比妥钠协同镇静作用试验
目的：通过评价佐太与戊巴比妥钠对KM小鼠的协同镇静作用，为临床试验提供参考。
方法：取KM小鼠50只，♀♂各半，预饲养3天，体重18～22g。按体重随机分为5组，每组10只，♀♂各半，分别为阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)、阳性对照组(安定片)1mg·kg-1、佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1。各剂量组分别灌胃(ig)给予相应体积的药物，给药容积为0.2ml·10g-1。每天给药1次，连续给药4d。末次给药前禁食14h，自由饮水，药后30min，腹腔注射(ip)40mg·kg-1的戊巴比妥钠，给药容积为0.1ml·10g-1。单独观察每只小鼠翻正反射消失时间(睡眠潜伏期)及翻正反射恢复时间(睡眠时间)，进行统计比较。
结果：
睡眠潜伏期结果：(1)与阴性对照组比较，佐太各剂量组小鼠睡眠潜伏期缩短，且随剂量增加呈一定剂量依赖关系，但均无统计学差异；阳性对照组小鼠睡眠潜伏期明显缩短，但亦无统计学差异(2)与阳性对照组比较，佐太各剂量组小鼠睡眠潜伏期均相对较长，但无统计学差异，组间随剂量增加小鼠睡眠潜伏期缩短；阴性对照小鼠睡眠潜伏期相对较长。
睡眠时间结果：(1)与阴性对照组比较，佐太各剂量组小鼠睡眠时间延长，且随剂量增加呈一定剂量依赖关系，其中H组具有统计学差异(P＜0.05)；阳性对照组小鼠睡眠时间明显延长，具有显著统计学差异(P＜0.01)。(2)与阳性对照组比较，佐太各剂量组小鼠睡眠时间均相对较短，且具有显著统计学差异(P＜0.01)，组间随剂量增加小鼠睡眠时间延长；阴性对照组小鼠睡眠时间相对较短。
入睡率结果：(1)与阴性对照组比较，佐太各剂量组小鼠入睡率提高，且随剂量增加呈一定剂量依赖关系，其中H组具有统计学差异(P＜0.05)；阳性对照组小鼠入睡率明显提高为100％，与阴性对照组比较具有显著统计学差异(P＜0.01)。(2)与阳性对照组比较，佐太各剂量组小鼠入睡率均相对较低，其中L组具有统计学差异(P＜0.05)，组间随剂量增加小鼠入睡率提高；阴性对照小鼠入睡率相对较低，与阳性对照组比较具有显著统计学差异(P＜0.01)。
结论：
(1)佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1与阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)比较睡眠潜伏期均有缩短，睡眠时间延长，入睡率有明显提高，其中H组具有统计学差异(P＜0.05)。随用药剂量的增加，佐太作用表现明显的剂量效应关系。
(2)与阳性对照组(安定片)比较，佐太3.3mg·kg-1作用不显著，6.6mg·kg-1、13.2mg·kg-1作用效果明显增强但与其比较仍有部分差距。
(3)由以上药效学研究结果提示，佐太本试验中小鼠有效起始剂量为6.6mg·kg-1，折合临床用药有效起始剂量约为0.66mg·kg-1。
3.2佐太对尼可刹米注射液致小鼠惊厥作用的影响试验
目的：通过研究佐太对尼可刹米注射液致KM小鼠惊厥的抑制作用，为临床试验提供参考。
方法：KM小鼠50只，♀♂各半，预饲养3天，体重18～22g。按体重随机分为5组，每组10只，♀♂各半，分别为阴性对照组0.5％羧甲基纤维素钠、阳性对照组(安定片)1.0mg·kg-1、佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1。试验时各剂量组分别灌胃(ig)给予相应体积的药物，给药容积为0.2ml·10g-1。每天给药1次，连续给药4d。末次给药前禁食14h，自由饮水，药后30min，各组小鼠皮下注射(sc)给予尼可刹米注射液770mg·kg-1，立即观察小鼠出现惊厥的时间(惊厥潜伏期)、发生惊厥的动物数、死亡动物数(未惊厥小鼠的潜伏期计作120min)及死亡潜伏期(从出现惊厥至死亡时间)，计算惊厥率和死亡率。通过比较上述指标，评价药物的抗惊厥作用。
结果：
惊厥潜伏期结果：(1)与阴性对照组比较，佐太各剂量组小鼠惊厥潜伏期明显延长，且M、H剂量组具有显著统计学差异(P＜0.01)；阳性对照组小鼠惊厥潜伏期亦相对延长，但无统计学差异。(2)与阳性对照组比较，佐太M、H剂量组小鼠惊厥潜伏期均明显延长，且H剂量组具有显著统计学差异(P＜0.01)；阴性对照小鼠惊厥潜伏期相对较短。
死亡潜伏期结果：(1)与阴性对照组比较，佐太各剂量组小鼠死亡潜伏期相对延长，其中M、H剂量组延长较明显，但匀无统计学差异；阳性对照组小鼠死亡潜伏期亦相对延长，无统计学差异。(2)与阳性对照组比较，佐太M剂量组小鼠死亡潜伏期延长明显，但无统计学差异；阴性对照小鼠死亡潜伏期相对较短。
各剂量组小鼠均出现惊厥，且均死亡，惊厥率和死亡率均为100％。
结论：
(1)佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1与阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)比较惊厥潜伏期和死亡潜伏期均明显延长，且随用药剂量的增加，佐太作用表现出一定的剂量效应关系。
(2)与阳性对照组(安定片)比较，佐太3.3mg·kg-1作用不明显，6.6mg·kg-1、13.2mg·kg-1作用效果明显增强且13.2mg·kg-1具有显著统计学差异(P＜0.01)。
(3)由以上药效学研究结果提示，佐太本试验中小鼠有效起始剂量为6.6mg·kg-1，折合临床用药有效起始剂量约为0.66mg·kg-1。
3.3佐太解热作用试验(伤寒Vi多糖疫苗致热家兔法)
目的：通过观察佐太对因伤寒Vi多糖疫苗致使家兔发热的作用，对其进行评价，为临床试验提供参考。
方法：健康新西兰兔30只，预饲养5天，室温20℃，体重2.5～3.0kg。取肛温在38.0℃～38.8℃的兔用于试验。试验前测正常肛温2次，温差值不超过0.3℃。耳缘静脉注射伤寒Vi多糖疫苗(0.5ml·kg-1)，1h后测肛温，取升温0.8℃以上的家兔，按升温高低随机分组，共5组，每组6只，♀♂各半。分别为阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)、阳性对照组(阿斯匹林肠溶片)50mg·kg-1、佐太低剂量L组1.0mg·kg-1、中剂量M组2.0mg·kg-1、高剂量H组4.0mg·kg-1。各组分别灌胃(ig)给予相应体积的药物，给药容积为2.0ml·kg-1。给药后每隔1h同法测量兔肛温，共测5次，以不同时间所测肛温与基础肛温之差，为体温变化的指标。统计肛温差值进行比较，评价不同剂量组佐太解热作用。
结果：新西兰兔耳缘静脉注射伤寒Vi多糖疫苗(0.5ml·kg-1)，1h后新西兰兔体温明显升高。灌胃给予佐太L、M、H剂量后每隔1h测肛温，共测5次，与阴性对照组比较，新西兰兔体温明显降低，且药后2h中剂量M组有明显统计学差异(P＜0.05)。与阳性对照组比较，佐太M、H剂量组新西兰兔体温降低明显，但均无统计学差异。
结论：
(1)与阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)比较，佐太1.0mg·kg-1剂量组药后能降低新西兰兔体温，但效果不明显，无统计学差异；2.0mg·kg-1和4.0mg·kg-1剂量组可明显降低新西兰兔体温，且随用药剂量的增加，佐太作用有明显的剂量效应关系。
(2)与阳性对照组(阿斯匹林肠溶片)比较，佐太1.0mg·kg-1剂量组解热作用不明显，2.0mg·kg-1作用与其相当，4.0mg·kg-1作用效果较其有所增强。
(3)由以上药效学研究结果提示，佐太本试验中新西兰兔有效起始剂量为2.0mg·kg-1，折合临床用药有效起始剂量约为0.66mg·kg-1。
3.4佐太对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验
目的：通过观察、评价佐太对二甲苯引起小鼠耳肿胀的抑制作用，为临床试验提供参考。
方法：KM小鼠50只，♀♂各半，预饲养3天，体重18～22g。按体重随机分为5组，每组10只，♀♂各半，分别为阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)、阳性对照组(阿斯匹林肠溶片)200mg·kg-1、佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1。分别灌胃(ig)给予相应体积的药物，给药容积为0.2ml·10g-1。每天给药1次，连续给药4d。末次给药后30min，用二甲苯0.05ml/只滴于小鼠右耳内外两面致炎，左耳为对照侧。30min后，颈椎脱臼处死动物，用直径8mm的打耳器左、右两耳相应部位各打一耳片，用电子天平称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度。计算各组肿胀度，求出肿胀抑制率(％)。
结果：
肿胀度结果：(1)与阴性对照组比较，佐太L剂量组抑制耳肿胀程度不明显，M、H剂量组显著，且具有显著统计学差异(P＜0.01)；阳性对照组亦有显著抑制作用，具有显著统计学差异(P＜0.01)。(2)与阳性对照组比较，佐太L剂量组抑制耳肿胀程度不明显，且具有显著统计学差异(P＜0.01)，M、H剂量组效果与其相当，均无统计学差异。
肿胀抑制率结果：佐太L剂量组肿胀抑制率较低，M、H剂量组效果较好。
结论：
(1)与阴性对照组比较，佐太3.3mg·kg-1剂量组效果不明显；6.6mg·kg-1和13.2mg·kg-1剂量组效果显著。随用药剂量的增加，佐太作用有明显的剂量效应关系。
(2)与阳性对照组比较，佐太3.3mg·kg-1剂量组作用不显著，6.6mg·kg-1和13.2mg·kg-1剂量组抑制肿胀作用虽有提高但仍不及阳性对照组。
(3)由以上药效学研究结果提示，佐太本试验中小鼠有效起始剂量为6.6mg·kg-1，折合临床用药有效起始剂量约为0.66mg·kg-1。
3.5佐太对小鼠非特异性免疫功能的影响试验
目的：通过评价佐太对小鼠非特异性免疫功能的影响，为临床试验提供参考。
方法：取KM小鼠50只，♀♂各半，预饲养3天，体重18～22g。按体重随机分为5组，每组10只，♀♂各半，分别为阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)、阳性对照组(胸腺肽片)5.0mg·kg-1、佐太低剂量L组3.3mg·kg-1、中剂量M组6.6mg·kg-1、高剂量H组13.2mg·kg-1。分别灌胃(ig)给予相应体积的药物，给药容积为0.2ml·10g-1。每天给药1次，连续给药4d。末次给药前禁食14h，自由饮水，药前称重，药后30min，尾静脉注射50％印度墨汁，给药容积为0.05ml·10g-1。于2min和10min眼眶静脉丛取血20μl加到0.1％碳酸钠溶液2ml中，摇匀。在680nm波长处测A值。小鼠处死后取肝脏和脾脏称重。计算廓清指数(k)及吞噬指数(α)值进行统计处理。廓清指数(k)＝lg(A2/A10)/Δt，吞噬指数(α)＝体重/(肝重+脾重)
结果：与阴性对照组比较，佐太L剂量组廓清指数和吞噬指数均无明显提高，M、H剂量组提高明显是，但无统计学差异；与阳性对照组比较，佐太M、H剂量组效果与其相当，亦无统计学差异。
结论：
(1)与阴性对照组比较，佐太L剂量组廓清指数和吞噬指数均无明显提高，M、H剂量组提高明显，但无统计学差异。与阳性对照组比较，佐太M、H剂量组效果与其相当，亦无统计学差异。提示佐太M、H剂量能增强小鼠的非特异性免疫功能。
(2)由以上药效学研究结果提示，佐太本试验中小鼠有效起始剂量为6.6mg·kg-1，折合临床用药有效起始剂量约为0.66mg·kg-1。
3.6佐太体外抑菌试验
目的：通过观察佐太对已知细菌生长繁殖的抑制情况，测定其最小抑菌浓度(MIC)，为临床试验提供参考。
方法：将佐太用0.5％羧甲基纤维素钠稀释成100mg·ml-1的溶液，然后采用倍比稀释法稀释至50，25，12.5，6.25，3.125，1.56，0.78，0.39，0.195，0.098，0.049，0.0245mg·ml-112个浓度梯度。分别吸取初始菌悬液(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、乙型溶血性链球菌)500μl于10ml肉汤培养基中，调节菌液浓度约为106CFU/ml。前四排从第1孔到第12孔由低至高浓度依次加入稀释好的药液50μl，然后每排加入100μl稀释好的菌液，同时设阴性对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)和空白对照(肉汤培养基)。将微孔板封好盖置微型振荡器上振荡约1min使各孔内溶液混匀，置37℃培养箱培养24h。平行试验3次，测定最小抑菌浓度(MIC)。
结果：佐太对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、乙型溶血性链球菌最小抑菌浓度分别为6.25、6.25、12.5和25.0mg·ml-1。
结论：本试验条件下，佐太对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、乙型溶血性链球菌的生长繁殖具有一定的抑制活性，MIC为6.25～12.5mg·ml-1。
本发明不限于以上实施方式举例。
Claims (2)
1.一种藏药材炮制物质佐太的含量测定方法，其特征在于：
(1)样品处理：取本品0.1～0.5g于微波消解罐中，加盐酸-硝酸(3∶1)混合溶液，冷消化后，盖好安全阀；将消解罐放入微波炉消解系统中，至消解完全，冷却后用稀硝酸溶液定量转移并定容，再用稀硝酸溶液稀释，混匀待测；
(2)汞标准溶液：用稀硝酸将汞标准溶液稀释成10.0μg/L、20.0μg/L、30.0μg/L、40.0μg/L、50.0μg/L各种标准系列；
(3)实验步骤：混合酸湿法消化后，强酸性介质中以氯化亚硒还原成元素汞，以氩气为载体，将元素吹入原子吸收分光光度计中，进行冷原子吸收测定，吸收253.7nm的共振线，其吸收值与含量成正比，与标准系列比较定量；
(4)计算公式X(μg/g)＝C(μg/L)×V(ml)/[G(g)×10-3]，计算出汞含量后，折算出硫化汞含量；其中X：汞含量；C：浓度；V：稀释体积；G：质量。
2.权利要求1所述的藏药材炮制物质佐太在制备药物中的用途，所述药物具有抗菌消炎作用。
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| CN1038406A (zh) * | 1988-10-15 | 1990-01-03 | 西藏自治区藏医院 | 药用水银粉末(坐台)的加工方法 |
| CN1814236A (zh) * | 2005-11-29 | 2006-08-09 | 久美彭措 | 七十味松石丸 |
| CN1814259A (zh) * | 2005-11-29 | 2006-08-09 | 久美彭措 | 五十九味解毒胶囊 |
-
2008
- 2008-04-24 CN CN2008100939495A patent/CN101396371B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1038406A (zh) * | 1988-10-15 | 1990-01-03 | 西藏自治区藏医院 | 药用水银粉末(坐台)的加工方法 |
| CN1814236A (zh) * | 2005-11-29 | 2006-08-09 | 久美彭措 | 七十味松石丸 |
| CN1814259A (zh) * | 2005-11-29 | 2006-08-09 | 久美彭措 | 五十九味解毒胶囊 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| CN 1038406 A,说明书摘要及权利要求1-3. |
| 索郎.佐塔的炮制.中国民族医药杂志 5.2007,(5),40. |
| 索郎.佐塔的炮制.中国民族医药杂志 5.2007,(5),40. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101396371A (zh) | 2009-04-01 |
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