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CN101360492A - 含安莎霉素的组合物 - Google Patents

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CN101360492A
CN101360492A CNA2006800491929A CN200680049192A CN101360492A CN 101360492 A CN101360492 A CN 101360492A CN A2006800491929 A CNA2006800491929 A CN A2006800491929A CN 200680049192 A CN200680049192 A CN 200680049192A CN 101360492 A CN101360492 A CN 101360492A
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CNA2006800491929A
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P·K·曼斯菲尔德
E·H·厄尔姆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Conforma Therapeutics Corp
Original Assignee
Conforma Therapeutics Corp
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Abstract

提供了含有油相和水相的药物组合物，该油相含有安莎霉素和小于2％w/w的油酸，其中安莎霉素是格尔德霉素、17－氨基格尔德霉素、17－烯丙氨基－17－脱甲氧基－格尔德霉素、具有下面结构的化合物(563)或者化合物(237)，或者任何一种上述安莎霉素的盐。

Description

含安莎霉素的组合物
相关申请
本申请要求2005年12月1日提交的美国临时申请60/742,093的优先权，其在此以其全部(包括所有附图)引入以作参考。本申请也与美国公开2005/0176695、20060014730、2006/0067953和WO公开2003/026571、2003/086381和2004/082676相关，所有这些以其全部引入以作参考。
发明领域
本发明一般涉及药物组合物及其制备和使用方法。具体地说，本发明涉及含安莎霉素(例如，17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素(17-AAG))的组合物。
背景技术
17-烯丙氨基-格尔德霉素(17-AAG)是格尔德霉素(GDM)的合成类似物。两种分子都属于被称为安莎霉素的广类抗生素分子。GDM——当首次从微生物吸水链酶菌(Streptomyces hygroscopicus)中分离时——起初被鉴定为某些激酶的强效抑制剂，并且后来表明通过刺激激酶降解起作用，具体地通过靶向“分子侣伴”，例如热休克蛋白90s(HSP90s)起作用。随后，各种其它安莎霉素显示出或多或少的这类活性，17-AAG是其中最有前景的并且是目前由美国国家癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)所进行的深入临床研究的对象。参见，例如，Federal Register，66(129)：35443-35444；Erlichman等，Proc.AACR(2001)，42，摘要4474.
HSP90s是普遍存在的伴侣蛋白，其涉及许多蛋白质的折叠、活化和装配，包括参与信号转导、细胞循环控制以及转录调节的关键蛋白质。研究者报道：HSP90s伴侣蛋白与重要的信号蛋白相关，比如类固醇激素受体和蛋白激酶，包括，例如，Raf-1、EGFR、v-Src家族激酶、Cdk4和ErbB-2(Buchner J.TIBS 1999，24，136-141；Stepanova，L.等Genes Dev.1996，10，1491-502；Dai，K.等J.Biol.Chem.1996，271，22030-4)。研究进一步表明某些辅陪伴分子，例如，HSP70、p60/Hop/Sti1、Hip、Bag1、HSP40/Hdj2/Hsj1、亲免素、p23和p50，可以在其功能上协助HSP90(参见，例如，Caplan，A.Trends in Cell Biol.1999，9，262-68)。
安莎霉素抗生素，例如，除莠霉素A(HA)、GDM和17-AAG被认为通过紧密结合HSP90的N-端ATP-结合袋发挥它们的抗肿瘤作用(Stebbins，C.等，1997，Cell，89：239-250)。这种袋是高度保守的并且对DNA促旋酶的ATP-结合位点具有弱的同源性(Stebbins，C.等，见上；Grenert，J.P.等，1997，J.Biol.Chem.，272：23843-50)。此外，ATP和ADP都被显示以低亲和力结合此袋并具有弱的ATPase活性(Proromou，C.等，1997，Cell，90：65-75；Panaretou，B.等，1998，EMBO J，17：4829-36)。体内和体外研究已经表明：这种N-端袋被安莎霉素和其它HSP90抑制剂占有改变了HSP90的功能并抑制蛋白折叠。在高浓度下，安莎霉素和其它HSP90抑制剂已经显示出可阻止蛋白底物与HSP90结合(Scheibel，T.，H.等，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96：1297-302；Schulte，T.W.等，1995，J.Biol.Chem.270：24585-8；Whitesell，L.，等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91：8324-8328)。安莎霉素也表现出抑制蛋白伴侣相关的蛋白底物的依赖ATP的释放(Schneider，C.，L.等，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：14536-41；Sepp-Lorenzino  等，1995，J.Biol.Chem.270：16580-16587)。在任一情况中，底物通过蛋白酶体中依赖泛素的过程被降解(Schneider，C.，L.，supra；Sepp-Lorenzino，L.，等，1995，J.Biol.Chem.，270：16580-16587；Whitesell，L.等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，91：8324-8328)。
这种底物不稳定在肿瘤和非转化细胞中以类似方式发生，并表明在信号调节器的子集上尤其有效，例如，Raf(Schulte，T.W.等，1997，Biochem.Biophys.Res.Commun.239：655-9；Schulte，T.W.，等，1995，J.Biol.Chem.270：24585-8)；核类固醇受体(Segnitz，B.，和U.Gehring.1997，J.Biol.Chem.272：18694-18701；Smith，D.F.等，1995，Mol.Cell.Biol.15：6804-12)；v-src(Whitesell，L.，等，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：8324-8328)；以及某些跨膜酪氨酸激酶(Sepp-Lorenzino，L.等，.1995，J.Biol.Chem.270：16580-16587)，比如EGF受体(EGFR)和Her2/Neu(Hartmann，F.，等，1997，Int.J.Cancer 70：221-9；Miller，P.等，1994，Cancer Res.54：2724-2730；Mimnaugh，E.G.，等，1996，J.Biol.Chem.271：22796-801；Schnur，R.等，1995，J.Med.Chem.38：3806-3812)、CDK4和突变体p53.Erlichman等，Proc.AACR(2001)，42，摘要4474。安莎霉素诱导的这些蛋白质的丧失导致一些调节途径的选择性中断并在细胞周期的特定阶段导致生长停滞(Muise-Heimericks，R.C.等，1998，J.Biol.Chem.273：29864-72)，和细胞调亡，和/或如此处理的细胞的分化(Vasilevskaya，A.等，1999，Cancer Res.，59：3935-40)。
除了抗癌和抗肿瘤发生活性，HSP90抑制剂也包括许多其它用途，其包括用作抗炎药物，抗感染性疾病药物，治疗自身免疫的药物，治疗中风、局部缺血、多发性硬化、心脏病、中枢神经系统相关疾病的药物和用于促进神经再生的药物(参见例如Rosen等，WO02/09696(PCT/US01/23640)；Degran等WO 99/51223(PCT/US99/07242)；Gold的美国专利6,210,974 B1；DeFranco等的美国专利6,174,875。与上述部分相一致，在文献中存在这样的报道：致纤维化疾病也可以用HSP90抑制剂治疗，其包括但不限于硬皮病(scleroderma)、多肌炎(polymyositis)、系统性狼疮(systemiclupus)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、肝硬化(liver cirrhosis)、瘢痕疙瘩形成(keloid formation)、间质性肾炎(interstitial nephritis)、以及肺纤维症(pulmonary fibrosis)。Strehlow，WO 02/02123(PCT/US01/20578)。仍然进一步的HSP90调节、调节剂及其用途在以下申请中给予报告：PCT/US03/04283、PCT/US02/35938、PCT/US02/16287、PCT/US02/06518、PCT/US98/09805、PCT/US00/09512、PCT/US01/09512、PCT/US01/23640、PCT/US01/46303、PCT/US01/46304、PCT/US02/06518、PCT/US02/29715、PCT/US02/35069、PCT/US02/35938、PCT/US02/39993、60/293,246、60/371,668、60/335,391、60/128,593、60/337,919、60/340,762、60/359,484以及60/331,893。
由于安莎霉素较差的水溶性性质，目前难以制备含安莎霉素的药物组合物，尤其是可注射的静脉内制剂。迄今，已经尝试使用有机赋形剂(例如，DMSO或者，蓖麻油衍生物—Cremophor)、脂质载体和水包油型乳化剂，但迄今这些需要复杂的加工步骤，苛刻或者临床上不可接受的溶剂，和/或导致制剂不稳定。通常，参见Vemuri，S.和Rhodes，C.T.，Preparation and characterization of liposomes astherapeutic delivery systems：综述，Pharmaceutica Acta Helvetiae 70，pp.95-111(1995)；又参见2000年6月29日作为WO 00/37050公布的PCT/US99/30631。当向患者给予DMSO时，已知DMSO——除了其肝毒性和心脏毒性之外——可导致不良事件(反胃、呕吐、恶臭)，而Cremophor在患者体内有诱导超敏反应和过敏性反应的趋向，所述患者通常需要用抗组胺剂和类固醇进行预治疗。
共同拥有的美国专利申请20060014730、2006/0067953和2006/0148776教导了制备乳液形式的安莎霉素组合物的方法，其不需要DMSO或者cremophor来溶解安莎霉素。然而，这些乳液必须储存在冷冻状态或者冻干状态以便长期使用，并且因此导致在临床位置给药过程中的不方便或困难(例如，要求解冻或者再水合并调整到合适浓度)。对这样的安莎霉素组合物存在需要：其在冷藏状态或者室温下显示出提高的稳定性，以便在生产和运送以及在临床位置施用准备中增加处理组合物的容易度。
发明概述
本发明提供包含油相和水相的药物组合物，该油相包含安莎霉素和小于2％w/w的油酸，其中安莎霉素是格尔德霉素、17-氨基格尔德霉素、17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素、具有下面结构的化合物563或者化合物237，或者任何一种上述安莎霉素的盐。
Figure A20068004919200111
化合物#563                 化合物#237
在一种实施方式中，安莎霉素的最终浓度在大约0.5mg/mL到4mg/mL之间的范围内。
在另一种实施方式中，组合物中油酸的量不高于该药物组合物的大约1％w/w。
在又一种实施方式中，组合物中油酸的量在该药物组合物的大约0.5％到0.05％w/w之间。
在进一步实施方式中，该药物组合物进一步包含中链甘油三酯。在仍然另一实施方式中，中链甘油三酯的量不高于该药物组合物的大约15％w/w。
在仍然另一实施方式中，该药物组合物进一步包含长链甘油三酯。在进一步的另一实施方式中，长链甘油三酯的量不高于该药物组合物的大约7％w/w。
在另一实施方式中，该药物组合物进一步包含乳化剂。
在进一步的实施方式中，本发明提供其中油相是药物组合物的大约5％到30％w/w的药物组合物。
在进一步的实施方式中，本发明提供这样的组合物：其中安莎霉素的最终浓度在大约1mg/mL到3mg/mL之间的范围内；组合物中油酸的量在药物组合物的大约0.5％到0.05％w/w之间的范围内；中链甘油三酯的量在药物组合物的大约7％到13％w/w之间的范围内；长链甘油三酯的量在药物组合物的大约2％到5％w/w之间的范围内；以及卵磷脂的量在药物组合物的大约5％到8％w/w之间的范围内。
本发明的进一步实施方式提供这样的组合物，其中平均滴大小小于大约500nm；平均滴大小小于大约150nm；或者平均滴大小是大约80nm。
在仍然另一实施方式中，药物组合物的pH在从大约5到8的范围内。
本发明的又一实施方式提供包含油相和水相的药物组合物，该油相进一步包含17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素和小于2％w/w的油酸，该药物组合物在从大约5到8的pH范围和在大约0℃到10℃之间的温度范围内保持稳定至少18个月。
又一实施方式提供治疗患有HSP90介导的疾病的个体的方法，其包括给予所述个体有效量的根据本发明的药物组合物。该HSP90介导的疾病可以是选自下述疾病的一种：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、白血病、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。
在又一实施方式中，本发明提供一种方法，该方法进一步包括给予至少一种治疗性药物，该治疗性药物选自：细胞毒素药物、抗血管生成药物以及抗肿瘤药物。
附图简述
图1显示储存在冷冻状态(-20℃)下的六种不含油酸的组合物(C04H044、C05E011、C05F022、C05L043、C05L047和C06A007)的物理稳定性(平均滴大小)。
图2显示三种含有0.2％w/w油酸的组合物(N191-021、N191-058和N191-150)在冷冻状态(-20℃)下的物理稳定性(平均滴大小)。
图3显示含有和不含油酸的组合物在室温下的物理稳定性(平均滴大小)。N191-021、N191-058和N191-150是三种含有油酸的组合物，而E05A002不含油酸。
图4显示六种不含油酸的组合物(C04H044、C05E011、C05F022、C05L043和C05L047)在冷藏温度(5℃)下的物理稳定性(平均滴大小)。
图5显示三种含有0.2％w/w油酸的组合物(N191-021、N191-058和N191-150)在冷藏状态(5℃)下的物理稳定性(平均滴大小)。
发明详述
术语“蒸发(evaporating)”和“冻干(lyophilizing)”不必表示100％除去溶剂和溶液，并且可以伴有较少百分数的除去(例如，大约95％或者更多)。
术语“水合(hadrating)”或“再水合(rehadrating)”是指加入水溶液，例如，水或者生理相容的缓冲液比如汉克斯溶液、林格溶液或者生理盐水缓冲液。
术语“大约(about)”是指包括与所述的有20％的偏差。当与术语“在…之间(between)”或者“在大约…之间(between about)”结合使用时，术语“包含在内的(inclusive)”是指包括所述范围的端值。
如本文所用，术语“稳定的(stable)”是指本发明组合物的性质。在冷藏温度(例如，0-10℃或者2-8℃)和室温下的高稳定性(与不含油酸的类似化合物相比)是本发明组合物的特征。典型地，在室温和大约5-8(例如，5.5-7)的pH值下，这样的含油酸组合物具有的平均滴大小在至少3个月内的增加不超过100nm(或者甚至50nm)；在冷藏温度(例如，0-10℃或者2-8℃)和大约5-8(例如，5.5-7)的pH值下，这样的含油酸组合物具有的平均滴大小在至少12个月内的增加不超过50nm(或者甚至35nm)。进一步，如果17-AAG存在于本发明的组合物中，发现17-AAG的两种主要降解产物——RS-A和17-AG——在12个月的期间内分别不超过大约2.5％(例如，1％)和7.5％(例如，5％)w/w。
“油(oils)”包括脂肪酸和含有脂肪酸的甘油酯，例如，如本领域所知的单-甘油酯、双-甘油酯和三-甘油酯。本发明使用的脂肪酸和甘油酯可以是饱和的和/或不饱和的，天然的和/或合成的，带电荷的或者中性的。“合成的(synthetic)”可以是全部合成的或者半合成的，如本领域已知那些术语。油在其组成和/或来源上也可以是同质的或者是非均质的。
当用于描述碳链时(例如，在脂肪酸或三甘油酯中)，术语“短(short)”、“中(medium)”和“长(long)”分别是指：小于8个直链碳原子、8到12个直链碳原子和大于12个直链碳原子。
“生理上可接受的载体(physiologically acceptable carrier)”是指不会对有机体引起明显刺激并且不会消除所施用化合物的生物活性和性质的载体或者稀释剂。
“赋形剂(excipient)”是指添加到药理组合物中以进一步促进化合物给药的物质。赋形剂的例子包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和淀粉类型、纤维素和纤维素衍生物、凝胶、植物油和聚乙二醇。这些也可以是生理上可接受的载体——如上面所述，例如，蔗糖。进一步落入赋形剂的定义范围的是填充剂。“填充剂(bulking agent)”一般为制剂提供机械支持。这类物质的例子是糖类。如本文中所用的糖类包括但不限于：单糖、二糖、寡糖和多糖。具体的例子包括但不限于果糖、葡萄糖、甘露糖、海藻糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、右旋糖以及葡聚糖。糖也包括糖醇，比如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、木糖醇以及阿拉伯糖醇(arabitol)。根据本发明，也可以使用糖的混合物。各种填充剂——例如，甘油、糖、糖醇以及单糖和二糖——也可以起到等渗化剂(isotonizing agent)的作用，如上面所描述。期望的是：填充剂对于药物(一种或多种)是化学惰性的，并且在使用条件下不具有或者具有非常有限的有害副作用或者毒性。除了填充剂载体之外，可以或者不能用作填充剂目的的其它载体包括，例如，本领域熟知并容易得到的佐药和稀释剂。
“有效量(effective amount)”是指能够提供治疗和/或预防疾病效果的量。当然，根据本发明给予以获得治疗和/或预防疾病效果的化合物的具体剂量将通过关于病例的具体环境来确定，其包括，例如，给药途径、被治疗的状况以及被治疗的个体。然而必须确定诸如清除率、半衰期和最大耐受量(MTD)之类的因子，但是本领域普通技术人员可以使用标准程序确定这些因子。
本发明组合物的组分
安莎霉素
术语“安莎霉素”是描述具有“柄型(ansa)”结构的化合物特征的广义术语，其包括由长链桥联的苯醌、苯并氢醌、萘醌或者萘并氢醌部分的任一种。萘醌或者萘并氢醌类化合物分别由临床上重要的药物甲哌力复霉素和利福霉素示例。苯醌类化合物由格尔德霉素(包括其合成衍生物17-AAG和17-N，N-二甲氨基-乙氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素(DMAG))、二氢格尔德霉素和herbamycin示例。苯并氢醌类以macbecin示例。根据本发明的安莎霉素和苯醌安莎霉素可以是合成的、天然出现的，或者两者的混合物，即“半-合成的”，并且可以包括二聚物和共轭变体和前体药物形式。在本发明方法中有用的一些示例性苯醌安莎霉素和它们的制备方法包括但不限于例如在美国专利3,595,955(描述格尔德霉素的制备)，美国专利4,261,989、5,387,584以及5,932,566中所述的那些。格尔德霉素也可从例如CNBiosciences——德国达姆施塔特的Merck KGaA分支机构，总部在美国加利福尼亚州的圣地亚哥(目录编号345805)——商业获得。来自吸水链酶菌(ATCC 55256)培养物的格尔德霉素衍生物4，5-二氢格尔德霉素及其氢醌的生物化学纯化在国际申请PCT/US92/10189中予以描述，该申请被转让给Pfizer Inc.，于1993年7月22日以WO 93/14215公开，并列举Cullen等为发明人；通过催化氢化格尔德霉素合成4，5-二氢格尔德霉素的可选方法也是已知的。参见例如Progress in theChemistry of Organic Natural Products，Chemistry of the AnsanzycinAntibiotics，33：278(1976)。可以在本发明的各种实施方式中使用的其它安莎霉素在上面“背景技术”部分引用的文献中予以描述。在本发明的组合物中，安莎霉素(例如17-AAG)的最终浓度典型地是大约0.5-4mg/mL(例如1-3mg/mL或2mg/mL)。
长链甘油三酯
“长链甘油三酯”是具有长度大于12个直链碳原子的脂肪酸的甘油三酯组合物。其通常来源是植物油，例如，大豆油或者豆油，其典型地含有55-60％的亚油酸(9，12-十八碳二烯酸)、22％的油酸(顺式十八碳-9-烯酸)以及较少量的棕榈酸和硬脂酸。典型地存在于本发明组合物的长链甘油三酯的量，基于该组合物的重量，不超过大约7％w/w(例如，大约2-5％w/w)。
中链甘油三酯
如本文所用的“中链甘油三酯”是具有长度在8-12个直链碳原子、并且更优选地长度在8-10个碳原子的大小范围内的脂肪酸的甘油三酯组合物。本发明的各种实施方式包括使用Miglyol
Figure A20068004919200161
812N(CondeaVista Co.，Cranford，NJ，USA)。Miglyol
Figure A20068004919200162
812N含有约50-65％的辛酸(8个碳)和30-45％的癸酸(10个碳)。己酸(6个碳原子)也存在，其最大量达大约2％，月桂酸(12个碳)也是如此。仍然以较少量(最大1％)存在的是肉豆蔻酸(14个碳)。可以在本发明组合物中使用的其它中链甘油三酯包括Miglyol
Figure A20068004919200163
810、818、829和840，以及其它熟知的中链甘油三酯。Miglyol 812N在欧洲药典(EuropeanPharmacopeia)中作为中链甘油三酯具有记录，在英国药典(BritishPharmacopeia)中作为分馏的椰子油具有记录，以及在日本药典(Japanese Pharmacopeia)中作为辛酸甘油三酯/癸酸甘油三酯具有记录。中链甘油三酯的其它来源包括椰子油、棕榈仁油以及黄油。典型地存在于本发明组合物中的中链甘油三酯的量，基于该组合物重量，是大约3-10％w/w(例如，大约5-8％w/w)。
如共同拥有的专利申请US 2006/0148776所述，当迅速给予时，由于辛酸酯的代谢性释放，Miglyol812N可以产生镇静作用。在大鼠体内静脉输注17-AAG乳剂(Miglyol
Figure A20068004919200165
812N油)过程中，在输注速率大于1.1gm总脂质/kg/hr时观察到镇静作用。参见相关的美国申请2006/0148766的图1。以大于1.13gm总脂质/kg/hr的速率静脉输注17-AAG乳剂时，镇静作用在狗身上被注意到。为了对抗这种情况，如上面所描述，加入长链甘油三酯(例如豆油)以与体内Miglyol 812N的代谢竞争，从而减少在静脉输注过程中产生的辛酸酯脂肪酸。在豆油/Miglyol 812N CF237乳剂中，在输注速率达大约40gm总脂质/kg/hr时，在大鼠身上没有明显观察到镇静作用。因此，豆油与Miglyol 812N的结合大大地提高了CF237乳化制剂对镇静作用的耐受性。类似地，以静脉输注12mL制剂/kg/hr的形式给予6个剂量CF237乳化制剂，在猴子身上没有观察到镇静作用，而且没有观察到静脉刺激。
短链甘油三酯
“短链甘油三酯”是具有长度小于8个直链碳原子的脂肪酸的甘油三酯组合物。其可以任选地存在于本发明的组合物中。
乳化剂
“乳化剂”与“表面活性剂”同义并包括但不限于磷脂比如卵磷脂。“卵磷脂”是天然产生的硬脂酸、棕榈酸和油酸的甘油二酯的混合物，其与磷酸的胆碱酯相连。术语表面活性剂或者乳化剂也包括磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)，该独特的化合物是熟知的。本发明使用的乳化剂的例子是大豆卵磷脂例如Phospholipon 90G(PL90G，AmericanLecithin Company，Oxford，CT，USA)和大豆磷脂酰胆碱例如LipoidS-100(Lipoid KG，Ludwigshafen，Germany)。Phospholipon 90G之前已经用于胃肠外营养产品，如以大约1.2％的浓度用于Intralipid，以大约1％的浓度用于Doxil
Figure A20068004919200172
(阿霉素)，以大约2％的浓度用于Abisome
Figure A20068004919200173
(两性霉素B)，以及以大约1.2％的浓度用于Propofol
Figure A20068004919200174
。在后者的情况下，参见例如美国专利6,140,374。典型地存在于本发明组合物中的表面活性剂/乳化剂的量，基于该组合物的重量，是大约3-10％w/w(例如大约5-8％w/w)。
阴离子表面活性剂的例子包括：十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸三乙醇胺(lauryl sulfate triethanolamine)、聚氧乙烯月桂基醚硫酸钠(sodium polyoxyethylene lauryl ether sulfate)、聚氧乙烯壬基苯基醚硫酸钠(sodium polyoxyethylene nonylphenyl ether sulfate)、聚氧乙烯月桂基醚硫酸三乙醇胺(polyoxyethylene lauryl ether sulfatetriethanolamine)、椰油酰基肌氨酸钠(sodium cocoylsarcosine)、N-椰油酰基甲基氨基乙磺酸钠(sodium N-cocoylmethyltaurine)、聚氧乙烯(椰子)烷基醚硫酸钠(sodium polyoxyethylene(coconut)alkylether sulfate)、二醚磺基琥珀酸己酯钠(sodium dietherhexylsulfosuccinate)、a-烯烃磺酸钠(sodium a-olefin sulfonate)、十二烷基磷酸钠(sodium lauryl phosphate)、聚氧乙烯月桂基醚磷酸钠(sodium polyoxyethylene lauryl ether phosphate)以及全氟烷基羧酸盐(perfluoroalkyl carboxylate salt)(由Daikin Industries Ltd.制造，商业名称为UNIDINE DS-101和102)。
阳离子活性剂的例子包括：二烷基(C12-C22)二甲基氯化铵、烷基(椰子)二甲基苄基氯化铵、十八胺醋酸盐、十四胺醋酸盐、牛油烷基丙二胺醋酸盐(tallow alkylpropylenediamine acetate salt)、十八烷基三甲基氯化铵、烷基(牛脂)三甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、烷基(椰子)三甲基氯化铵、十六烷基三甲基氯化铵、联苯基三甲基氯化铵、烷基(牛脂)-咪唑啉季胺盐、十四烷基甲基苄基氯化铵、十八烷基二甲基苄基氯化铵、二油基二甲基氯化铵(dioleyidimethylammonium chloride)、聚氧乙烯十二烷基单甲基氯化铵、聚氧乙烯烷基(C12-C22)苄基氯化铵、聚氧乙烯月桂基单甲基氯化铵、1-羟乙基-2-烷基(牛脂)-咪唑啉季胺盐，以及具有硅氧烷基团作为疏水基团的硅树脂阳离子表面活性剂，具有氟烷基基团作为疏水基团的含氟阳离子表面活性剂(由Daikin Industries Ltd.制造，商品名称为UNIDINE DS-202)。
非离子表面活性剂的例子包括：聚氧乙烯十二烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯十六烷基醚、聚氧乙烯硬脂基醚(polyoxyethylene stearyl ether)、聚氧乙烯油基醚(polyoxyethylene oleyl ether)、聚氧乙烯壬基苯基醚(polyoxyethylenenonylphenyl ether)、聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octylphenylether)、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯单油酸酯、失水山梨醇单月桂酸酯、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇单棕榈酸酯、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇单油酸酯、失水山梨糖醇倍半油酸酯、失水山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚合物、聚甘油脂肪酸酯、聚乙醚改性的硅油(由TorayDow Corning Silicone Co.，Ltd.生产，商品名称为SH3746、SH3748、SH3749以及SH3771)、全氟烷基氧化乙烯加成物(由Daikin IndustriesLtd.制造，商品名称为UNIDINE DS-401和DS-403)、氟代烷基氧化乙烯加成物(由Daikin Industries Ltd.制造，商品名称为UNIDINEDS-406)以及全氟烷基低聚物(由Daikin Industries Ltd.制造，商品名称为UNIDINE DS-451)。
油酸
油酸是具有乳化性质的可电离的、单不饱和的ω-9脂肪酸。其可以发现于各种动物和植物油(例如，橄榄油)中。油酸在本发明组合物中存在的量不超过1％w/w(例如，大约0.5-0.05％w/w或者大约0.2％w/w)。因为油酸的解离常数是大约5，因此组合物的pH可能对油酸在稳定滴大小上的有效性具有影响。
应当注意的是：其它次级乳剂(例如，二肉豆蔻基磷脂酰甘油(dimyristylphosphatidylglycerol，DMPG)、Solutol HS15和Tween 80)在冷藏温度下被测试滴大小稳定性的提高。发现，Solutol HS15和Tween 80未提高滴大小稳定性，以及DMPG产生了难以抽出注射器的粘性乳状液，然而油酸显示出提高的稳定性而不影响其它性质如粘度。
蔗糖
蔗糖在本发明中被用作填充剂。蔗糖被认为是通过在刚性玻璃中形成含有活性成分的油滴分散体而使得制剂潜在稳定性提高。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可以被用于代替蔗糖。存在于本发明组合物中的填充剂(例如，蔗糖)的量不超过大约12％w/w(例如大约7-8％w/w)。
其它
为了防止或者最小化氧化降解或者脂质过氧化，除了去除氧(例如，在惰性气体如氮气和氩气存在下形成，和/或使用耐光容器)之外或者作为代替去除氧的可选方案，抗氧化剂例如α-生育酚和二丁基羟基甲苯，以及防腐剂如edentate可以被包括。
药学上可接受的共溶剂也可以被加入到组合物中以进一步提高安莎霉素的稳定性。本领域中已知的许多合适的共溶剂可以被使用。示例性溶剂的例子包括，但不限于，甘油、labrafil(杏仁油PEG-6酯)、labrasol(PEG-8辛酸/癸酸甘油酯)、聚乙二醇400、Tween 80、Solutol HS15、碳酸异丙烯酯、Transcutol HP(乙氧基二甘醇)以及glycofurol。
本发明组合物的制备
一般地，制备本发明组合物方法的第一步是溶解安莎霉素。如下面实施例6中所示，乙醇可以用于促进安莎霉素溶解到组合物的油相中。最常见的是，首先利用声处理或者加热在乙醇中溶解安莎霉素(例如，17-AAG)，然后向组合物中加入油相组分(例如，长/中链甘油三酯、油酸和乳化剂)。为了实现所有组分的混合和溶解，搅拌和声处理通常是必需的。然后在加入水相之前通过蒸发除去乙醇。
可选地，本发明的组合物可以通过直接在油相中溶解安莎霉素(不使用乙醇)并与水相混合而制备。分别制备两相，然后混合。初级乳状液中两相比例可以是大约4∶1(水相∶油相)(即，大约20％水包油乳状液)。应当注意的是，也可以使用不同于4∶1的比例。然后微流体化(microfluidize)初级乳状液以减小滴大小(例如，达到大约80nm的平均滴大小)，然后无菌过滤并在无菌条件下装入最后的容器封闭系统中。制备含有17-AAG的组合物(100kg批量)的大致工艺流程描述在下面的实施例5中。
温和的加热可以用于促进安莎霉素溶解到油相中(例如，大约40-60℃)。应当注意的是：应当基于安莎霉素的熔点(一种与另一种的熔点稍微不同)调节升高的温度。例如，17-AAG的较低熔点形式(通过17-AAG从异丙醇而非乙醇中结晶制备)甚至可以在室温下溶解到油相中。
注意，当暴露于高温一段延长的时间时，17-AAG以较高的速率分解。当在加热的油相中溶解17-AAG时应当小心(例如，实施温度控制)。
在本发明组合物中使用的一些缓冲剂体系(柠檬酸盐、磷酸盐和L-组氨酸)被评价，而这些体系导致组合物具有高粘度和/或低稳定性。因此，本发明的组合物不经缓冲而使用。在未缓冲的状态下，pH在冷藏温度下逐渐下降并在大约pH 6时出现稳定。在制备本发明组合物时，在减小尺寸之前调节乳状液的pH到大约7.5(例如，用NaOH)(因为在减小尺寸之后调节CNF1010的pH导致乳状液分离)。在尺寸减小过程中pH降低0.5-1.5个pH单位。
然后乳化、匀化或者微流体化所产生的组合物(参见下面描述)以获得期望的平均滴大小。然后采用灭菌以保证组合物适合药学使用。
乳化和微流体化
包含油相和水相的乳状液作为治疗上有效成分的载体或者肠胃外营养的来源在本领域广为人知。乳状液可以以水包油或者油包水的形式存在。如果——如目前例子的情况下——治疗成分特别溶于油相中，水包油类型是优选的实施方式。简单的乳状液是热力学不稳定的体系，从中油相和水相分离(油滴聚结)。乳化剂(一种或多种)引入到乳状液中对于将聚结过程降低到可忽略水平是关键的。
通过各种熟知方法，例如机械搅拌、涡流处理和声处理，可以实现乳化。声处理可以利用浴-型或者探针-型装置实现。
微流体化仪(microfluidizer)是商业可得的(例如110S型微流体化仪，Microfluidics Corp.，Newton，MA，其在例如U.S 4,533,254中被进一步描述)，并且利用压力协助通道穿过窄孔以减小乳状液中滴的尺寸。也可以采用通过各种商业可得的聚碳酸酯膜的压力协助的挤出。本发明的组合物可以在高压(例如16,000-19,000psi)下微流体化以将分散体的粒度从大约5μm减小到0.1-0.5μm或者更小(平均粒度)。
灭菌
灭菌可以通过过滤实现，其可以包括预过滤通过较大直径的滤器例如0.45微米的滤器，然后通过较小的滤器例如0.2微米的滤器(例如在可达60psi压力下，灭菌0.2微米Sartorius Sartobran P囊式滤器(500cm2)。滤器介质可以是乙酸纤维素(Sartorius-SartobranTM，Sartorius AG，Goettingen，Germany)。
本发明组合物的表征和使用
化学和物理稳定性的表征和评价
磷脂和降解产物可以在从乳状液中提取之后被确定。然后该脂质混合物可以在二维薄层色谱(TLC)体系或者高效液相色谱(HPLC)体系中被分离。在TLC中，对应于单一组成的斑点可以被除去并进行磷测试。样品中的总磷可以被定量确定，例如，通过使用分光光度计测量在825nm处相对于水所产生的蓝颜色的强度的方法。在HPLC中，磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰甘油(phosphotidylglycerol，PG)可以被准确且精确地分离和定量。脂类可以在203-205nm区域检测。在UV光谱的200nm波长区域，不饱和脂肪酸(例如，油酸)显示出高吸光度，而饱和脂肪酸显示出较低的吸光度。
乳状液可见外观、平均滴大小以及大小分布可以是观察和维持的重要参数(确定物理稳定性)。存在评价这些参数的许多方法。例如，动态光散射法和电子显微镜是两种可以使用的技术。参见，例如Szoka和Papahadjopoulos，Annu.Rev.Biophys.Bioeng.，9：467-508(1980)。形态特征，特别地，可以使用冷冻断裂电子显微镜获得。也可以使用较低强度的光显微镜。
例如，使用粒度分布分析仪如由Horiba Limited(Ann Arbor，Mich.，USA)制造的CAPA-500、库尔特计数器(Coulter counter)(BeckmanCoulter Inc.，Brea，CA，USA)或者Zetasizer(Malvern Instruments，Southborough，MA，USA)，可以测定乳状液滴大小分布。
此外，组分的化学稳定性——特别是活性成分安莎霉素例如17-AAG——可以在组分/乳状液提取之后通过HPLC评价。使得治疗有效的安莎霉素从其降解产物中分离的具体实验方法可以被开发。降解的程度可以从与治疗有效的安莎霉素相关的HPLC峰的信号的减少和/或通过与降解产物(例如，17-AAG情况下的17-AG或者RS-A)相关的HPLC峰(一种或多种)信号的增加进行评估。安莎霉素——相对于乳状液组分的其它组分——在其345nm的最大吸光度处易于且非常特定地被检测到。
配制和给予方式
尽管静脉内给予在本发明的各个方面和实施方式中是优选的，本领域普通技术人员将认识到，该方法可以被修改或者易于改变，以适应其它给予方式，例如，经口的、肠胃外的、气雾剂、皮下的、肌内的、腹膜内的、直肠的、阴道的、肿瘤内的或者肿瘤周围的。
本发明的组合物，如前面所述，非常适合于通过注射进行直接或者接近直接的肠胃外给药，其例如通过快速注射或者持续输注。在后一给予方法中，可以使用连续静脉内输送装置以维持患者体内恒定的浓度。这种装置的例子是Deltec CADD-PLUSTM 5400型静脉泵。注射用组合物可以以单位剂型例如以安瓿形式或者以多剂量容器形式呈现，其具有添加的防腐剂例如edentate。如前面所讨论，本发明的组合物可以被储藏在惰性环境中，例如，在耐光或者无氧的安瓿或者其它包装中。
药学上可接受的组合物可以使用一种或者多种生理上可接受的包含赋形剂和助剂在内的载体以传统方式进行配制，所述赋形剂和助剂促进活性化合物加工成为药学上可使用的制剂。合适的配制取决于所选择的给药途径。一些赋形剂和它们在制剂制备中的用途已经给予描述。其它的是本领域中已知的，例如，如在以下文献中所述：PCT/US99/30631，Remmington′s Pharmaceutical Sciences，MeadePublishing Co.，Easton，Pa.(最新版本)，和Goodman and Gilman′s ThePharmaceutical Basis of Therapeutics，Pergamon Press，New York，N.Y.(最新版本)。
剂量范围
当每三星期通过输注1小时每天给予持续5天时，在患有晚期实体肿瘤的成年患者中进行的17-AAG I期药理学研究确定了40mg/m2的最大耐受量(MTD)。Wilson等，Am.Soc.Clin.Oncol.，abstract，Phase I Pharmacologic Study of 17-(Allylamino)-17-Denzethoxygeldanamycin(AAG)in Adult Patients with AdvancedSolid Tumors(2001)。在此研究中，最终的半衰期、清除率和稳定状态体积的平均±SD值被确定为2.5±0.5小时、41.0±13.5L/小时和86.6±34.6L/m2。血浆Cmax水平在40mg/m2和56mg/m2下被确定为1860±660nM和3170±1310nM。使用这些值作为指导，预期本发明制剂的有效患者剂量范围将包括在大约0.4mg/m2到225mg/m2之间的有效成分。存在标准算法，以将mg/m2转化成mg药物/kg体重。
HSP90介导疾病的治疗
在一些方法实施方式中，优选的治疗效果是在一定程度上抑制增生性疾病例如乳癌的细胞特征化生长。治疗效果也通常——但不一定——在一定程度上减轻一种或者多种除细胞生长或者细胞群大小之外的症状。治疗效果可包括例如下面所述的一种或者多种：1)减少细胞数量；2)减小细胞大小；3)抑制(即，在一定程度上减缓，优选地停止)细胞渗透进入周围器官，例如在癌症转移的情况中；3)抑制(即，在一定程度上减缓，优选地停止)肿瘤转移；4)在一定程度上抑制细胞生长；和/或5)在一定程度上减轻一种或者多种与疾病相关的症状。
在一些实施方式中，本发明组合物被用于治疗或者预防HSP90-依赖型/介导的疾病。在一些实施方式中，组合物被用于药物的制造中。在其它实施方式中，组合物被用于制造这样的药物：其用于治疗性和/或预防性治疗HSP90依赖型疾病和状况。此类疾病和状况的例子包括病症，诸如：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、白血病、慢性淋巴细胞白血病、获得性免疫缺陷综合征、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。致纤维化疾病包括但不限于硬皮病、多肌炎、系统性狼疮、风湿性关节炎、肝硬化、瘢痕疙瘩形成、间质性肾炎以及肺纤维。
本发明组合物也可以与其它熟知治疗药物或者方法联合使用，所述药物或者方法因为其对抗被治疗状况特别有用而被选择。例如，本组合物在与已知的抗癌和细胞毒素药物或者其它治疗方法(例如放射)的联合中可以是有用的。此外，本方法和组合物在与连接细胞表面生长因子受体与启动细胞增生的核信号的部分信号途径的其它抑制剂的联合中也是有用的。
本发明的方法也可与其它抑制血管生成并因此抑制肿瘤细胞生长和侵袭的药物一起使用，该药物包括但不限于VEGF受体抑制剂，包括靶向VEGF受体的核酶和反义、ngiostatin和内皮他丁。
可以与本发明的组合物和方法联合使用的抗肿瘤药的例子通常并适当地包括烷基化剂、抗代谢物、epidophyllotoxins、抗肿瘤酶(anantineoplastic enzyme)、拓扑异构酶抑制剂(topoisomerase inhibitor)、甲基苄肼(procarbazine)、米托蒽醌(mitoxantrone)、铂配位络合物(platinum coordination complexes)、生物反应调节剂(biologicalresponse modifiers)和生长抑制剂(growth inhibitors)、激素/抗激素治疗药物(hormonal/anti-hormonal therapeutic agents)以及造血生长因子(haematopoietic growth factors)。抗肿瘤药的示例性种类包括蒽环类抗生素(anthracyclines)、vinca药物、丝裂霉素(mitomycins)、争光霉素(bleomycins)、细胞毒性核苷(cytotoxic nucleosides)、埃博霉素(epothilones)、discodermolide、蝶啶(pteridines)、diynenes以及鬼臼毒素(podophyllotoxins)。这些种类中特别有用的成员包括例如：洋红霉素(carminomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、氨基喋呤(aminopterin)、氨甲蝶呤(methotrexate)、甲氨蝶呤(methopterin)、二氯甲氨蝶呤(dichloromethotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)、泊非霉素(porfiromycin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、吉西他滨(gemcitabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)、鬼臼毒素，或者鬼臼毒素衍生物如依托泊苷(etoposide)、依托泊苷磷酸盐或者替尼泊甙(teniposide)、美法仑(melphalan)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、异长春花碱(leurosidine)、长春地辛(vindesine)、环长春碱(leurosine)、紫杉醇(paclitaxel)及其类似物。其它有用的抗肿瘤药物包括：雌二醇氮芥(estramustine)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、博莱霉素(bleomycin)、gemcitibine、异环磷酰胺(ifosamide)、美法仑、六甲蜜胺(hexamethyl melamine)、塞替派(thiotepa)、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、达卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜树碱、CPT-11、topotecan、阿糖胞嘧啶、bicalutamide、氟他氨、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚衍生物(pyridobenzoindole derivatives)、干扰素和白细胞介素。
本发明组合物的优点
不含油酸的含安莎霉素的组合物(例如，在US2006/0014730和2006/0148776的可行实施例中所描述的那些)必须冷冻(大约-20℃)储存或者冻干以保存产品的物理稳定性。即使在冷冻状态下，不含油酸的含安莎霉素的组合物批次之间的稳定性可能不同。基于稳定性数据，一批(C04H044)在-20℃下保持两年是稳定的，而其它批次(例如，批C05E011和C05F022)仅仅稳定保持6个月。见图1。图1中所有的6种组合物在组成上是相同的(参见下面表1)并且不含油酸。这些组合物使用类似于实施例5所描述的方法制备。
表1.图1所示组合物的组成
  成分   组成(％w/w)
  17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素(17-AAG)   0.2
  Miglyol 812，NF(中链甘油三酯)   9.9
  豆油，USP(长链甘油三酯)   3.3
  Phospholipon 90G(大豆卵磷脂)   6.6
  油酸，NF   0.0
  蔗糖，NF   7.5
  EDTA，USP   0.005
  氢氧化钠，NF   调整pH
  注射用水，USP   q.s.(足量)
另一方面，当储存在-20℃下时含油酸的CNF1010的滴大小稳定性是不稳定的(见图2)，类似于不含油酸的组合物(见图1)所观察到的批次-对-批次的变化性。三批含油酸的组合物都含有如下面表2所描述的相同的组分，并且它们使用实施例5所描述的方法制备。
因为不含油酸的组合物在冷藏储存条件下具有不可接受的保存期，并且具有有限的室温稳定性(小于一星期)，它们必须冷冻储存(或冻干)以保持大于一个月的稳定期间。相比之下，含油酸的组合物可以在冷藏温度和室温下储存显著更长的时间期间(冷藏温度下1-2年的保存期和稳定性在室温下维持1个月或更长)。见图3，其说明室温下含油酸和不含油酸的组合物的滴大小稳定性。进一步，含油酸的组合物显示较少的批次间变化性。见图4和图5，其说明冷藏温度下油酸对含有和不含油酸的组合物的滴大小稳定性的影响。
安莎霉素在油/水乳状液中可能不是化学稳定的，并且17-AAG以依赖温度的方式降解成RS-A、未鉴定的降解产物以及17-氨基格尔德霉素(17-AG)，17-AG也是活性代谢物。在本发明的组合物中，17-AG看来以每年大约1.7％的速率形成，并且RS-A以每年大约0.6％的速率形成。在RS-A和17-AG的这些形成速率下，本发明的组合物被计划允许根据目前的规格(对于RS-A和17-AG分别小于或者等于2.5％和7.5％w/w)冷藏储存达两年。
仅通过说明的方式提供下面的实施例，并非意欲限制本发明。
实施例
实施例1
17-AAG的制备；可选方案1
向干燥的2L烧瓶内的1.45L干燥THF中的45.0g(80.4mmol)格尔德霉素中，逐滴加入在50mL干燥THF中的36.0mL(470mmol)烯丙胺，历时30分钟。将反应混合物在室温下氮气下搅拌4小时，此时TLC分析表明反应完成[(GDM：亮黄色：Rf＝0.40；(5％MeOH-95％CHCl3)；17-AAG：紫色：Rf＝0.42(5％MeOH-95％CHCl3)]。通过旋转蒸发除去溶剂，使粗物质在25℃下在420mLH2O∶EtOH(90∶10)中成浆，过滤，并在45℃下干燥8hr，得到40.9g(66.4mmol)的17紫色晶体(收率82.6％，经HPLC在254nm处监测的纯度＞98％)。MP 206-212℃，如使用差示扫描量热法(DSC)所确定。1H NMR和HPLC与期望产物一致。
实施例2
17-AAG的低熔点形式的制备
可选的纯化方法是：在80℃下在800mL 2-丙醇(异丙醇)中溶解来自实施例1的粗17-AAG，然后冷却到室温。过滤，然后在45℃干燥8hr得到44.6g(72.36mmol)的紫色晶体17-AAG(收率90％，经HPLC在254nm处监测的纯度＞99％)。MP 147-175℃，如使用差示扫描量热法(DSC)所确定。1H NMR和HPLC与期望产物一致。
实施例3
17-AAG的低熔点形式的制备，可选方案1
可选的纯化方法是在25℃下在400mL的H2O∶EtOH(90∶10)中，将来自实施例2的17-AAG产物制成浆，过滤并在45℃下干燥8hr，得到42.4g(68.6mmol)的紫色晶体17-AAG(收率95％，经HPLC在254nm处监测的纯度＞99％)。MP 147-175℃。1H NMR和HPLC与期望产物一致。
实施例4
用于非17-AAG的相似配制安莎霉素的其它安莎霉素的制备
基本上任何安莎霉素可以代替17-AAG并如上面实施例所述进行配制。各种此类安莎霉素和它们的制备在PCT/US03/04283中予以详细描述。这些中的两种的制备在下面予以描述。
化合物563：17-(苯甲酰基)-氨基格尔德霉素。17-氨基格尔德霉素(1mmol)的EtOAc溶液在室温(RT)下用Na2SO4(0.1M，300ml)处理。2小时后，水层用EtOAc萃取两次，合并的有机层经Na2SO4干燥，在减压下浓缩得到黄色固体18，21-二氢-17-氨基格尔德霉素。将后者溶解到无水THF中并通过套管转移到苯甲酰氯(1.1mmol)和MS4A.ANG.(1.2g)的混合物中。两小时后，EtN(i-Pr)2(2.5mmol)被进一步加入到反应混合物中。搅拌过夜后，将反应混合物过滤并在减压下浓缩。然后向用EtOAc萃取三次的剩余物中加入水，合并的有机层经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩得到粗产物，该粗产物通过急骤层析纯化得到17-(苯甲酰基)-氨基格尔德霉素。在80∶15∶5 CH2Cl2∶EtOAc∶MeOH中Rf＝0.50。Mp＝218-220℃ 1H NMR(CDCl3)0.94(t，6H)，1.70(br s，2H)，1.79(br s，4H)，2.03(s，3H)，2.56(dd，1H)，2.64(dd，1H)，2.76-2.79(m，1H)，3.33(br s，7H)，3.44-3.46(m，1H)，4.325(d，1H)，5.16(s，1H)，5.77(d，1H)，5.91(t，1H)，6.57(t，1H)，6.94(d，1H)，7.48(s，1H)，7.52(t，2H)，7.62(t，1H)，7.91(d，2H)，8.47(s，1H)，8.77(s，1H)。
化合物237：二聚体。在N2下向烘干的烧瓶中的格尔德霉素(10g，17.83mmol)的DMSO(200ml)溶液中逐滴加入3，3′-二氨基-二丙胺(1.32g，9.1mmol)，并在室温下搅拌。12小时后将反应混合物用水稀释。沉淀形成并过滤得到粗产物。该粗产物通过硅胶色谱(5％CH3OH/CH2Cl2)分离，得到为紫色固体的期望二聚体。在急骤层析(硅胶)后获得纯的紫色产物；收率93％；mp 165℃；1H NMR(CDCl3)0.97(d，J＝6.6Hz，6H，2CH3)，1.0(d，J＝6.6Hz，6H，2CH3)，1.72(m，4H，2CH2)，1.78(m，4H，2CH2)，1.80(s，6H，2CH3)，1.85(m，2H，2CH)，2.0(s，6H，2CH3)，2.4(dd，J＝11Hz，2H，2CH)，2.67(d，J＝15Hz，2H，2CH)，2.63(t，J＝10HZ，2H，2CH)，2.78(t，J＝6.5Hz，4H，2CH2)，3.26(s，6H，2OCH3)，3.38(s，6H，20CH3)，3.40(m，2H，2CH)，3.60(m，4H，2CH2)，3.75(m，2H，2CH)，4.60(d，J＝10Hz，2H，2CH)，4.65(Bs，2H，20H)，4.80(Bs，4H，2NH2)，5.19(s，2H，2CH)，5.83(t，J＝15Hz，2H，2CH.dbd.)，5.89(d，J＝10Hz，2H，2CH.dbd.)，6.58(t，J＝15Hz，2H，2CH.dbd.)，6.94(d，J＝10Hz，2H，2CH.dbd.)，7.17(m，2H，2NH)，7.24(s，2H，2CH.dbd.)，9.20(s，2H，2NH)；MS(m/z)1189(M+H)。
通过下面的方法制备相应的HCl盐：在室温下向化合物#237(1gm，如上述制备)的THF(15ml)和EtOH(50ml)溶液中加入HCl的EtOH溶液(5ml，0.123N)。将反应混合物搅拌10分钟。盐沉淀、过滤和用大量的EtOH洗涤，并真空干燥。
实施例5
含油酸的17-AAG组合物的制备
本方法可以用于实施例1-4中制备的任何安莎霉素。下面的描述是指100kg批量的17-AAG组合物的典型制备。
油相(以批量要求的2％过量制备)
Miglyol 812N(9894g)、豆油(3366Kg)以及油酸(204g)在25L 316L不锈钢罐中使用Silverson高剪切混合器混合大约5分钟。向混合油中缓慢加入phospholipon 90G(PL90G；6732)。搅拌持续直到PL90G溶解产生清澈的黄色粘性溶液为止。针对纯度对17-AAG进行重量调整并且含有3％过量(217.3g)以考虑到制造过程中的降解。将17-AAG加到油相中并使用Silverson高剪切混合器混合直到17-AAG溶解(大约1小时)。然后使17-AAG油相在40℃下过滤通过5英寸囊式滤器，该滤器包含1.0/0.5μm混合的纤维素酯滤膜以除去可能干扰乳化过程的任何沉淀。17-AAG油相的组成是：1.06％17-AAG、1.00％油酸、16.49％豆油、32.98％PL90G以及48.47％Miglyol812N。
水相
与油相分开地制备水相。向150L罐中加入注射用水(71.5Kg)。在罐中安装有顶部混合器，向漩涡中加入蔗糖(7500g)，然后是EDTA(5.0g)。混合水相直到所有的蔗糖和EDTA溶解。水相组成(％w/w)是：9.38％蔗糖、0.0063％EDTA以及90.62％水。
初级乳状液
将水相罐连接到在线高剪切混合器，并且开始混合。含17-AAG的油相通过蠕动泵被转移到混合的水相中以形成初级乳状液。该加入需要大约30分钟，并且在含17-AAG的油相被转移后混合持续另外10分钟。
当用在线混合器混合时，使用0.1N NaOH将初级乳状液的pH从大约5.0调节到大约7.5±0.3。加入注射用水直到100kg的足量。
微流体化(减小大小)
将初级乳状液冷却到低于15℃，然后使用单分散入口进行微流体化进入另一150L罐中。继续微流体化直到该乳状液的平均滴大小小于或者等于80nm。在微流体化过程中产物温度维持在低于15℃。然后微流体化的乳状液被过滤通过含有混合的纤维素酯滤膜的1.0/0.2μm囊式滤器。
过滤和填充
然后将乳状液灭菌过滤通过囊式预过滤器(1.0/0.2μm MCE滤膜)和串联设置在无菌填充区域中的两个灭菌级别的Durapore囊式滤器(聚偏1，1-二氟乙烯(polyvinylidine fluoride)滤膜)，在填充区域中产物被装进(20mL)20mL Type 1的透明玻璃瓶中，然后用溴代丁基橡胶塞和铝易拉盖密封。
表2.实施例5的组成
  成分   组成(％w/w)
  17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素(17-AAG)   0.2
  Miglyol 812，NF(中链甘油三酯)   9.7
  豆油，USP(长链甘油三酯)   3.3
  Phospholipon 90G(大豆卵磷脂)   6.6
  油酸，NF   0.2
  蔗糖，NF   7.5
  EDTA，USP   0.005
  氢氧化钠，NF   调整pH
  注射用水，USP   足量
本发明的组合物也可以使用相关申请中所述方法制备。下面的实施例说明如何修改US 2006/0014730的实施例4和US 2006/0148776以产生本发明的组合物。
实施例6
含油酸的17-AAG组合物的另一种制备
在5L聚丙烯烧杯中称量17-AAG(或者上面实施例1-4所述的任何安莎霉素)。向磷脂中以大约50倍17-AAG重量的量加入乙醇并混合直到完全溶解。然后向乙醇/磷脂溶液中加入17-AAG并混合直到完全溶解。然后向该溶液中加入Miglyol 812N、豆油和油酸。可使用声处理器浴和/或加热到大约45℃来帮助溶解固体。可以使用光学显微镜检测溶液以保证期望的溶解。
在液面上强加干燥空气流或者氮气流，结合剧烈搅拌以使乙醇蒸发，直到乙醇含量减少到例如小于初始存在量的50％(例如，小于5-10％)w/w。在安装有偏振滤波器的光学显微镜下检测溶液以保证17-AAG完全溶解(无晶体或者沉淀)。
EDTA(二钠，二水合物，USP)、蔗糖以及注射用水(一起为水相)被称量到5L聚丙烯烧杯中并搅拌直到固体溶解。然后向油相中加入水相，并且利用安装有乳化头的高速乳化器/均化器以5000rpm实现充分混合，直到粘附到表面的油被“除去(stripped off)”。然后剪切速率被增加到10000rpm进行2-5分钟以产生均匀的初级乳状液。激光散射(LLS)可以被用于测量平均滴大小，并且溶液可以进一步被检测，例如在光学显微镜下确定晶体和固体的相对存在或者不存在。
用0.2N NaOH将乳状液pH调节到6.0±0.2。然后初级乳状液通过在大约110psi的静压下操作(60-95psi的操作压力)、具有6-8通道的75-微米乳液互动室(F20Y)的11OS型微流体化器(Microfluidics Inc.，Newton，Mass.，USA)，直到平均滴大小小于或者等于190nm。在单独的通道之后可以使用激光散射(LLS)以评价进展。可以在光学显微镜下使用偏振光进一步检查溶液中晶体的存在。
在层流净化罩中，乳状液然后通过0.45微米Gelman微囊式过滤器(Pall Corp.，East Hills，N.Y.，USA)，然后穿过无菌0.2微米Sartorius Sartobran P囊式过滤器(500cm2)(Sartorius AG，Goettingen，Germany)。使用达60psi的压力以维持光滑而连续的流动。然后收集滤液，并且小量可以被留置，以便使用激光散射(LLS)和/或高效液相色谱(HPLC)进行测试。
生物学实施例
实施例7
静脉(IV)施用制剂A(不含油酸)和制剂B(含油酸)之后在大鼠体内的比较药物动力学(17-AAG)
概述
在静脉(i.v.)给予制剂A和制剂B之后，17-烯丙氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG)和其活性代谢物(17-AG)在大鼠体内的药物动力学(PK)被评价。制剂A是17-AAG的水包油(中链和长链甘油三酯和大豆卵磷脂)乳剂。除了其包含最终浓度为0.2％(w/w)的油酸附加成分之外，制剂B具有与制剂A相同的组成。
七只颈内静脉插管的雌性Sprague-Dawley大鼠通过尾部静脉以10mg/kg的剂量接受单次2分钟的静脉输注制剂A(n＝3)或者制剂B(n＝4)。每只动物在给药之前以及给药之后的十个间隔下从导管被抽血。通过标准的LC/MS/MS方法确定17-AAG和17-AG的血清浓度。个体动物的17-AAG和17-AG浓度-对-时间曲线使用非房室方法(non-compartmental method)分析。
在给予制剂A和制剂B之后17-AAG和17-AG的平均PK参数没有显著区别。
代谢物17-AG是17-AAG的CYP3A4介导的氧化产物，并且它在血浆中的出现依赖于17-AAG从乳剂滴释放然后游离17-AAG扩散进入肝细胞。在给予两种制剂之后，观察到相同的17-AG Tmax和相似的17-AG AUC及浓度对时间曲线，这表明17-AAG释放的速率和程度以及随后的肝分布没有被制剂中所包含的油酸改变。
总的来说，下面所呈现的数据表明：当静脉给予大鼠时，油酸在制剂B中的存在(根据本发明的一个实施方式)未改变17-AAG和它的活性代谢物17-AG的PK，而使之不同于由制剂A观察到的。
缩写
i.v.         静脉
Cmax         最大血清浓度
Tmax         Cmax时间
Cltot        总清除率(Total clearance)
Formulation A 17-AAG的水包(中链和长链甘油三酯和大豆卵磷脂)制剂
Formulation B 17-AAG的水包中链和长链甘油三酯、大豆卵磷脂和油酸0.2％(w/w)制剂
PK           药物动力学
17-AAG       17-烯丙氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素
17-AG        17-(氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素
AUC(0-tlast) 从0到最终可测量浓度的时间的血浆浓度时间曲线下的面积
Vdss         稳定状态的体积分布(steady state volume ofdistribution)
制剂A是17-AAG的水包油(中链和长链甘油三酯和大豆卵磷脂)乳剂。除了其包含最终浓度为0.2％(w/w)的油酸附加成分之外，制剂B具有与制剂A相同的组成。该研究的目的是比较在静脉(i.v.)给予制剂A和制剂B之后17-烯丙氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG)和其活性代谢物(17-AG)在大鼠体内的PK。
材料和方法
在制造之后制剂A在-20℃下冷冻，在进行体内研究之前晚上在4℃下解冻过夜，并且在使用前转移到室温大约两小时。制剂B在制造后在4℃下储存并且在使用前转移到室温大约两小时。在制造时，对于每种测试物，确定17-AAG浓度和乳剂滴大小，如下面所述。
分析剂量样品的17-AAG浓度和滴大小
在由Agilent 1100系列二元泵、Agilent 1100系列自动进样器、Agilent 1100系列MWV UV检测器以及Zorbax 300SB-C 18，3.5μm粒度柱(4.6mm×150mm)组成的HPLC系统上进行确定17-AAG浓度的标准化方法。在332nm处监测吸光度。注射体积是50μL，并且流动相流速是1.0mL/min。恒溶剂流动相通过混合480mL 20mMTris-HLC(pH 7.0)与520mL乙腈而制备。各测试样品在进行HPLC分析之前用甲醇稀释20倍。
使用具有Microflex ver.10.1.1软件(Microtrac)的Nanotrac 150(Microtrac)，通过激光散射光谱法(LLS)测量平均乳剂滴大小。在分析前在去离子水中将批样品稀释100倍。
测试体系
所使用的颈内静脉插管的雌性Sprague-Dawley大鼠从CharlesRiver Laboratories Inc，Portage Michigan获得。在给药时其体重(02/25/05)在从268.5克到283.6克的范围内，其中给予制剂A和制剂B的大鼠平均体重分别为270.5克和274.9克。
实验设计
七只颈内静脉插管的雌性Sprague-Dawley大鼠通过尾部静脉以10mg/kg(60mg/m2)的剂量接受单次2分钟的静脉输注制剂A(n＝3)或者制剂B(n＝4)。在给药之前，将动物放置在加热垫上(大约40℃)大约5分钟以促进血管舒张。然后用手将大鼠(Rodent Restraint Cone，Fisher Scientific)稳固在加热垫上(大约40℃)，使用Terumo Surflo
Figure A20068004919200361
翼状输注工具(winged infusion set)(27Gx1/2”)以受控的2分钟输注(Harvard Apparatus Model 22输注泵)进入尾部静脉，给予测试药品。所给予的剂量体积(分别为4.55mL/kg的制剂A和5.26mL/kg的制剂B)基于给药当天确定的体重和在制造时所确定的制剂的17-AAG浓度。在给药之前，然后在给药后的1、5、10、15以及30分钟和1、2、3、4和6小时，从颈内静脉导管收集血样(大约250μL)。在每次取血样之后，用盐水冲洗导管以进行注射(约250μL)。转移血液到聚丙烯微离心管并使其在室温下凝块大约10分钟，然后将它们保存在冰上直到离心分离。将血液在10,000xg离心分离10分钟，然后将血清转移到储存在-20℃的干净微离心管，直到分析。
通过LC/MS/MS确定17-AAG和17-AG浓度
使用标准化LC/MS/MS实验确定17-AAG和17-AG的浓度。实验在与LCQ Deca Ion Trap质谱仪连接的Thermo Finnigan LCSurveyor高效液相色谱(HPLC)系统(由梯度泵、溶剂脱气装置、PDA检测器、柱加热器以及自动进样器组成)上进行。分析物在Phenomenex Synergi RP-MAX C12，4μm粒度的柱(75mmx2.0mm)上进行色谱分离。梯度方法用于由水(1.0％醋酸)组成的流动相A。流动相B由乙腈(1.0％醋酸)组成。在用50％A/50％B平衡之后，流动相混合物被变为2％A/98％B 5分钟，其总运行时间为15分钟。流速是0.4mL/min，并且柱被维持在30℃。在335nm处监测两种分析物的吸光度。
用甲醇顺序稀释17-AAG和17-AG的储液以获得范围为0.3μg/mL到30μg/mL的稀释标准溶液(spiking standard solutions)。通过进入大鼠血清中的溶解在甲醇中的17-AAG和17-AG的稀释溶液，制备17-AAG和17-AG的校正标准(BioChemed Pharmacologicals)
通过在乙腈中进行蛋白质沉淀然后离心分离和进行有机层的蒸发，制备用于分析的校正标准和样品。通过高效液相色谱与质谱连机(HPLC/MS2-SRM)——其使用负离子形式的电喷雾电离，分析流动相重建提取物。双份的17-AAG(50至5000ng/mL)的六点标准曲线和17-AG(50至3000ng/mL)的五点标准曲线以及三份的四个质量对照标准被用于进行定量。
对于两种分析物，定量方法的下限是50ng/mL。单独的17-AAG和17-AG的浓度数据在附录A中给出。代表性标准曲线和色谱图示于附录B中。
药物动力学分析：
使用房室方法(compartmental method)(WinNonlin，Version 4.1)分析个体动物的17-AAG浓度-对-时间数据。确定最终半衰期(t1/2)、从0到无限大(AUC0-∞)的浓度对时间曲线下面的面积、总清除率(Cltot)，以及稳定状态的分布体积(Vdss)。对于17-AG，使用非房室方法(WinNonlin，Version 4.1)分析浓度-对-时间数据曲线，并且从0到最终可测量浓度的曲线下面积(AUCtlast)和t1/2被估计。报告的17-AAG和17-AG的Cmax和Tmax值是观察到的值。通过使用学生t-测试，假定相等的偏差(Microsoft Excel 2000 version 9.0.6926SP-3)，比较制剂A和制剂B的PK参数值。
结果
用于该研究的制剂A和制剂B的17-AAG浓度分别是2.25mg/mL和1.90mg/mL。制剂A和制剂B平均乳剂滴大小分别是105nm和60nm。
个体大鼠的17-AAG和17-AG血清浓度数据在表4中给出。
表3：17-AAG药物动力学参数概括
Figure A20068004919200381
表4：17-AG药物动力学参数概括
Figure A20068004919200391
a从输注开始测量
NA＝不适用
在给予制剂A和制剂B之后，17-AAG(表3)和17-AG(表4)的平均PK参数估计没有显著的不同。个体大鼠PK参数在表5-7中给出。在给予两种制剂之后，活性代谢物17-AG的Tmax出现在输注后1分钟时，并且代谢物与母体AUC’s的比例没有显著不同。
代谢物17-AG是17-AAG的CYP3A4介导的氧化的产物(Conforma Therapeutics Technical Report00-1010-PC/PK-TR-006-A)，并且因此它在血浆中的出现依赖于17-AAG从乳剂滴释放然后游离17-AAG扩散进入肝细胞中。在给予两种制剂之后，观察到相同的17-AG Tmax和相似的17-AG AUC及浓度对时间曲线，这表明17-AAG释放的速率和程度以及随后的肝分布没有被制剂中所包含的油酸改变。
总的来说，这些数据表明：当静脉给予大鼠时，油酸在制剂B中的存在(根据本发明的一个实施方式)未改变17-AAG和它的活性代谢物17-AG的PK，而使之不同于由制剂A观察到的。
表5  17-AAG血清浓度数据(血清中，ng/mL)
Figure A20068004919200401
ND＝未检测
表6  17-AG血清浓度数据(血清中，ng/mL)
Figure A20068004919200402
ND＝未检测
表7
Figure A20068004919200411
本文引用的所有文献是对本发明相关领域技术水平的说明，并在此以其全部引入以作参考。然而，无一被承认为是现有技术。其它实施方式在下面的权利要求的范围内。

Claims (50)

1.含有油相和水相的药物组合物，所述油相含有安莎霉素和小于2％w/w的油酸，其中所述安莎霉素是格尔德霉素、17-氨基格尔德霉素、17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素、具有下面结构的化合物563或者化合物237，或者任何一种上述安莎霉素的盐。
Figure A2006800491920002C1
化合物#563                    化合物#237
2.根据权利要求1所述的药物组合物，所述安莎霉素是17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述安莎霉素的最终浓度在大约0.5mg/mL到4mg/mL之间的范围内。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述安莎霉素的最终浓度在大约1mg/mL到3mg/mL之间的范围内。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述安莎霉素的最终浓度是大约2mg/mL。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物中油酸的量不高于所述药物组合物的大约1％w/w。
7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物中油酸的量在所述药物组合物的大约0.5％到0.05％w/w之间。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物中油酸的量是所述药物组合物的大约0.2％w/w。
9.根据权利要求1所述的药物组合物，其进一步包括中链甘油三酯。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述中链甘油三酯的量不高于所述药物组合物的大约15％w/w。
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述中链甘油三酯的量在所述药物组合物的大约7％到13％w/w的范围内。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其进一步包括长链甘油三酯。
13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述长链甘油三酯的量不高于所述药物组合物的大约7％w/w。
14.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述长链甘油三酯的量在所述药物组合物的大约2％到5％w/w的范围内。
15.根据权利要求1所述的药物组合物，其进一步包括乳化剂。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述乳化剂是卵磷脂。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述乳化剂是大豆卵磷脂。
18.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述卵磷脂的量在所述药物组合物的大约3％到10％w/w之间的范围内。
19.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述卵磷脂的量在所述药物组合物的大约5％到8％w/w之间的范围内。
20.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述油相是所述药物组合物的大约5％到30％w/w。
21.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物中油酸的量在大约0.5％到0.05％w/w之间。
22.根据权利要求5所述的药物组合物，其中所述安莎霉素是17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素，并且其中所述组合物中油酸的量是所述药物组合物的大约0.2％w/w。
23.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述安莎霉素的最终浓度在大约1mg/mL到3mg/mL之间的范围内；所述组合物中油酸的量在所述药物组合物的大约0.5％到0.05％w/w之间的范围内；所述中链甘油三酯的量在所述药物组合物的大约7％到13％w/w之间的范围内；所述长链甘油三酯的量在所述药物组合物的大约2％到5％w/w之间的范围内；以及所述卵磷脂的量在所述药物组合物的大约5％到8％w/w之间的范围内。
24.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述安莎霉素的最终浓度是大约2mg/mL；所述组合物中油酸的量是大约0.2％w/w；所述中链甘油三酯的量在大约7％到13％w/w之间的范围内；所述长链甘油三酯的量在大约2％到5％w/w之间的范围内；以及所述卵磷脂的量在大约5％到8％w/w之间的范围内，并且其中所述安莎霉素是17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素以及所述卵磷脂是大豆卵磷脂。
25.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述平均滴大小小于大约500nm。
26.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述平均滴大小小于大约150nm。
27.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述平均滴大小是大约80nm。
28.根据权利要求23所述的药物组合物，其中所述平均滴大小是大约80nm。
29.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述平均滴大小是大约80nm。
30.根据权利要求23所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH在大约5到8的范围内。
31.根据权利要求24所述的药物组合物，其中所述药物组合物的pH在大约5到8的范围内。
32.含有油相和水相的药物组合物，所述油相进一步包括17-烯丙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素和小于2％w/w的油酸，该药物组合物在大约5到8的pH范围下和在大约0℃到10℃之间的温度范围下保持稳定至少18个月。
33.根据权利要求31所述的组合物，其中所述pH在大约5.5到7.5之间的范围内和温度在大约2℃到8℃之间的范围内。
34.根据权利要求31所述的组合物，其中在室温及在大约5到8的pH范围下在至少3个月内所述组合物的平均滴大小的增加不大于100nm。
35.根据权利要求31所述的组合物，其中在室温及在大约5.5到7的pH范围下在至少3个月内所述组合物的平均滴大小的增加不大于50nm。
36.根据权利要求31所述的组合物，其中在约0℃到10℃的温度范围及在从约5到8的pH范围下在至少12个月内所述组合物的平均滴大小的增加不大于50nm。
37.根据权利要求31所述的组合物，其中在约2℃到8℃的温度范围及在从约5.5到7的pH范围下在至少12个月内所述组合物的平均滴大小的增加不大于35nm。
38.治疗患有HSP90介导的疾病的个体的方法，所述方法包括：向所述个体给予有效量的权利要求1所述的药物组合物。
39.治疗患有HSP90介导的疾病的个体的方法，所述方法包括：向所述个体给予有效量的权利要求23所述的药物组合物。
40.治疗患有HSP90介导的疾病的个体的方法，所述方法包括：向所述个体给予有效量的权利要求24所述的药物组合物。
41.根据权利要求38所述的方法，其中所述HSP90介导的疾病选自：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、自血病、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。
42.根据权利要求39所述的方法，其中所述HSP90介导的疾病选自：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、白血病、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。
43.根据权利要求40所述的方法，其中所述HSP90介导的疾病选自：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、白血病、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述HSP90介导的疾病选自：炎症疾病、感染、自身免疫疾病、中风、局部缺血、心脏病、神经障碍、致纤维化疾病、增生性疾病、肿瘤、白血病、瘤、癌症、癌、代谢疾病以及恶性疾病。
45.根据权利要求38所述的方法，其进一步包括给予至少一种治疗性药物，该治疗性药物选自：细胞毒素药物、抗血管生成药物以及抗肿瘤药物。
46.根据权利要求39所述的方法，其进一步包括给予至少一种治疗性药物，该治疗性药物选自：细胞毒素药物、抗血管生成药物以及抗肿瘤药物。
47.根据权利要求40所述的方法，其进一步包括给予至少一种治疗性药物，该治疗性药物选自：细胞毒素药物、抗血管生成药物以及抗肿瘤药物。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述至少一种抗肿瘤药物选自：烷基化剂、抗代谢物、epidophyllotoxins、抗肿瘤酶、拓扑异构酶抑制剂、甲基苄肼、米托蒽醌、铂配位络合物、生物反应调节剂和生长抑制剂、激素/抗激素治疗药物以及造血生长因子。
49.根据权利要求1-31所述的组合物在药物制造中的用途。
50.根据权利要求1-31所述的组合物在制造用于治疗性和预防性治疗HSP90介导的疾病和状况的药物中的用途。
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