CN101330909B

CN101330909B - A3腺苷受体激动剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用

Info

Publication number: CN101330909B
Application number: CN2006800448083A
Authority: CN
Inventors: P·菲什曼
Original assignee: Can Fite Biopharma Ltd
Current assignee: Can Fite Biopharma Ltd
Priority date: 2005-11-30
Filing date: 2006-11-29
Publication date: 2012-09-26
Anticipated expiration: 2026-11-29
Also published as: KR101101252B1; AU2006321165A1; US10265337B2; KR20080071609A; JP5339916B2; AU2006321165B2; JP2009517458A; EP1959939B1; US20080300213A1; ES2379591T3; CN101330909A; CA2622879A1; ATE540673T1; BRPI0619395A2; WO2007063538A1; DK1959939T3; US20160263142A1; JP2013166789A; CA2622879C; EP1959939A1

Abstract

本发明提供了A₃腺苷受体激动剂(A₃AR激动剂)在制备用于治疗患骨关节炎(OA)的哺乳动物的药物组合物中的应用，A₃AR激动剂的量可以有效地治疗或预防OA的发展。根据本发明优选的A₃AR激动剂是IB-MECA和CI-IB-MECA。该A₃AR激动剂可以与其他药物例如甲氨蝶呤(MTX)联合施用；本发明也提供了治疗骨关节炎的药物组合物，包含一定量的A₃AR激动剂。

Description

A3腺苷受体激动剂在制备治疗骨关节炎的药物中的应用

发明领域

本发明涉及治疗，特别是骨关节炎的治疗。

发明背景

骨关节炎，过去称作变性关节炎，是关节炎最常见的形式。它是一种关节疾病，在关节异常或损伤后发生或在没有关节损伤时即会发生。该疾病涉及关节中软骨的退化。随着时间的推移，覆盖在关节中骨的末端的软骨开始分解，并可能完全被磨损，骨头将会在一起摩擦，导致疼痛。由于关节中的疼痛，会较少使用周围的肌肉，因此肌肉强度将变弱。

骨关节炎的常见症状是僵硬、活动受限、疼痛和关节变形，受影响的关节表现为浮肿、热潮红和关节的异常增大。

男性和女性的骨关节炎发病率类似。但是，在女性中受影响的关节数量较大，而男性的髋关节受疾病侵害的频率更高。骨关节炎的危险因子包括年龄(发病率随着年龄显著升高)、肥胖、臀部先天发育不良、意外或运动伤害、关节炎病史、药物、特定的工作类型、手术和遗传。骨关节炎本身不会对人的生活有很大的影响，但是长期存在的慢性骨关节炎会导致疼痛和关节变形，因此降低生活质量。特别地，已知膝盖的骨关节炎是慢性残疾的主要原因。

已经发展出很多的药物和治疗方法，用于治疗骨关节炎。治疗的主要目的是缓解疼痛，维持关节的功能和预防由于关节的功能障碍导致的残疾。

当前，还没有已知的药物治疗能够逆转软骨损伤的影响。骨关节炎治疗主要是涉及治疗症状。由此，使用皮质类固醇类的抗炎物质(例如氢化可的松和倍他米松)和很多的非甾体抗炎药(NSAIDs，例如双氯芬酸、阿司匹林和布洛芬)来治疗骨关节炎，皮质类固醇类的功能是抑制前列腺素合成，非甾体抗炎药具有止痛和抗炎的作用。但是，由于严重的副作用，这些药物必须谨慎使用。

因此，仍然需要探索和发展治疗骨关节炎的新方法。

发明内容

本发明提供了A₃腺苷受体激动剂(A₃AR激动剂)在制备治疗哺乳动物患者的骨关节炎的药物组合物中的应用。

此外，本发明提供了一种治疗哺乳动物患者的骨关节炎的方法，该方法包括向需要所述治疗的患者施用一定量的A₃AR激动剂，该量能够有效地治疗或预防骨关节炎的发生。

此外，本发明提供一种治疗哺乳动物患者的药物组合物，包含作为活性成分的A₃AR激动剂和药学可接受的载体。

A₃AR激动剂的治疗应用可以是其本身，或有时与其他药物例如甲氨蝶呤(MTX)、类固醇、NSAIDS及其他药物联用。

附图简述

为了理解本发明并明白如何在实践中实施，现在将参考附属的附图来描述优选的实施方案，这些仅仅是非限制性的例子，其中：

附图1A-1B的条形图显示了如MTT分析所确定的IB-MECA(CF101)或IB-MECA和MTX的联合治疗对于人成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)(附图1A)或大鼠FLS(附图1B)增殖的作用。

附图2的图显示的是在相同动物内注射MIA的膝盖(右膝)的直径和未注射MIA的膝盖(左膝)的直径之间的差异，在CF101治疗(-■-CF101)和未治疗(-◆-对照)的动物中其是引入MI A后的天数的函数。每组包含5只动物。

附图3A-3D是膝盖的X线照相的图像，其显示了与载体治疗的动物(附图3A和3B，分别为左和右膝)相比，在CF101治疗的动物(附图3C和3D，分别为左和右膝)中没有硬化的正常动物的胫骨骺线。

附图4A-4E是来自CF101治疗的(CF101)和未治疗的(对照)的OA 大鼠的膝关节的蛋白质提取物的蛋白质印迹分析；蛋白质提取物是A₃AR(附图4A)、PI3K(附图4B)、IKK(附图4C)、NF-κB(附图4D)、GSK-3β(附图4E)。

示例性实施方案的详述

本发明在下面的详述中描述了治疗骨关节炎的治疗方法，包括给其需要的患者施用A₃AR激动剂。应当注意的是，除了所述治疗方法，A₃AR激动剂在制备施用于患骨关节炎的患者的药物组合物以及治疗骨关节炎的药物组合物也包括在本发明内，其中所述药物组合物包含有效量的A₃AR激动剂和药学可接受的载体。

在说明书和权利要求中使用的术语“一种”和“所述”，除非上下文另有明确的说明，包括单数和复数。例如，术语“一种A₃AR激动剂”包括一种或多种激动剂。

此外，本文使用的术语“包含”意欲是指方法或组合物包括所列举的要素，但并不排除其他。类似地，“基本上由......组成”是用于定义包括所列举的要素但排除对骨关节炎具有非常显著的治疗活性的其他要素的方法和组合物。例如，基本上由A₃AR激动剂组成的组合物将不包括或仅仅包括轻微量(该量下对于骨关节炎没有显著的效果)的具有该活性的其他活性成分。同时，本文定义的基本上由A₃AR激动剂组成的组合物将不排除分离和纯化方法带来的痕量污染物、药学可接受的载体例如磷酸盐缓冲盐水、赋形剂、防腐剂等等。“由.......组成”是指排除超过痕量的其他药物。这些可互换的术语的每一个所定义的实施方案在本发明的范围内。

此外，所有的数值，例如浓度或剂量或其范围是近似值，可以在指定值的(+)或(-)高达20％，有时高达10％的范围内变化。应当理解的是，尽管并不总是明确指出，但所有的数值前面都是有术语“约”的。同时应当理解的是，尽管并不总是明确指出，但是本文所述的试剂都仅仅是示例性的，它们的等价物是本领域已知的。

本发明提供了一种治疗患骨关节炎的哺乳动物患者的骨关节炎的方法，该方法包括给所述患者施用有效量的A₃AR激动剂。

在本发明的全文中，术语“治疗”包括治疗骨关节炎以逆转疾病的症状，预防骨关节炎的发生，以及控制和/或缓解骨关节炎或其一种或多种症状。因此，治疗是指施用治疗有效量的A₃AR激动剂以达到所需的治疗效果。所需的治疗效果包括但不限于，改善患者的运动性，减轻关节的肿胀和触痛，减缓或预防关节和周围组织的退化，减缓由骨关节炎的慢性阶段导致的任何不可逆损伤，增加疾病急性发作期间缓和的时间，减小骨关节炎的严重程度或治愈骨关节炎，或者使从骨关节炎中更快地恢复，以及减少任一的下列症状：僵硬、疼痛和关节变形、关节浮肿、热潮红和关节异常增大，或者在它们发生之前预防出现这些症状。

在本发明的全文中，治疗也包括预防骨关节炎的发生(例如，在具有发生该疾病的高度倾向性的患者例如运动员中)，以及逆转由该疾病引发的软骨损伤。

至于A₃AR激动剂，这些化合物是本领域已知的，并且容易获得。一般地，A₃AR激动剂是能够与腺苷A₃受体(“A₃R”)特异性结合并由此完全或部分活化所述受体而获得治疗效果(在该特定情况下，为抗-骨关节炎效果)的任意化合物。因此A₃AR激动剂是一种通过结合并活化A₃AR而显示其主要作用的分子。这就是说，在一定剂量下施用时，它基本上结合并仅活化A₃R：在一个优选的实施方案中，A₃AR激动剂对人A₃AR的亲和力(K_i)小于1000nM，需要地小于500nM，有利地小于200nM，甚至小于100nM，典型地小于50nM，优选小于20nM，更优选小于10nM，理想地小于5nM。K_i越低，有效活化A₃R并由此达到治疗效果的(可以使用的)A₃AR激动剂的剂量就越低。

应当注意的是，一些A₃AR激动剂也会与其他受体以较低的亲和力(即K_i较高)相互作用并活化所述受体。在本发明的全文中，如果其与A₃R的亲和力比与其他任何腺苷受体的亲合力大至少3倍(即，其与A₃RK_i低至少3倍)，优选10倍，希望地至少20倍，最优选至少50倍，那么就认为该分子是A₃AR激动剂(即，通过结合并活化A₃R来显示其主要作用的分子)。

A₃AR激动剂与人A₃R的亲和力，以及与其他的人腺苷受体的相对亲和力可以通过很多试验例如结合试验来测定。结合试验的例子包括提供具有受体的膜或细胞，并测定A₃AR激动剂置换结合的放射性激动剂的能力；在功能性试验中，根据具体情况使用显示各种人腺苷受体的细胞并测定A₃AR激动剂活化或使下游信号事件失活的能力例如通过提高或降低cAMP水平来影响所测定的腺苷酸环化酶；等等。显然，如果增加A₃AR激动剂的施用水平使得其血液水平达到接近其他腺苷受体的K_i的施用水平，那么在这样施用后除了会活化A₃R，还会发生这些受体的活化。因此，优选以一定剂量施用A₃AR激动剂，以使将获得的血液水平仅仅主要使A₃R活化。

一些腺苷A₃AR激动剂的性质及它们的制备方法在文献中有详细描述，特别是US 5,688,774；US 5,773,423；US 5,573,772；US 5,443,836；US 6,048,865；WO 95/02604；WO 99/20284；WO 99/06053；WO 97/27173和WO 01/19360，将它们全部通过参考引入本文。

下面的实例是在US 5,688,774的第4栏，第67行-第6栏，第16行；第5栏第40-45行；第6栏，第21-42行；第7栏，第1-11行；第7栏，第34-36行；和第7栏，第60-61行所指出的：

N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-9-羟基乙基腺嘌呤；

R-N⁶-(3-碘苄基)-9-(2，3-二羟基丙基)腺嘌呤；

S-N⁶-(3-碘苄基)-9-(2，3-二羟基丙基)腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基腺嘌呤-9-基)乙酸；

N⁶-(3-碘苄基)-9-(3-氰基丙基)腺嘌呤；

2-氯-N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

2-氨基-N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

2-酰肼基(hydrazido)-N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-2-甲氨基-9-甲基腺嘌呤；

2-二甲氨基-N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基-2-丙基氨基腺嘌呤；

2-己基氨基-N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-2-甲氧基-9-甲基腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基-2-甲基硫代腺嘌呤；

N⁶-(3-碘苄基)-9-甲基-2-(4-吡啶基硫代)腺嘌呤；

(1S，2R，3S，4R)-4-(6-氨基-2-苯基乙基氨基-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1，2，3-三醇；

(1S，2R，3S，4R)-4-(6-氨基-2-氯-9H-嘌呤-9-基)环戊烷-1，2，3-三醇；

(±)-9-[2α，3α-二羟基-4β-(N-甲基氨甲酰基)环戊-1β-基)]-N⁶-(3-碘苄基)-腺嘌呤；

2-氯-9-(2′-氨基-2′，3′-二去氧-β-D-5′-甲基-阿糖-furonamido)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-9-(2′，3′-二去氧-2′-氟-β-D-5′-甲基-阿糖furonamido)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

9-(2-乙酰基-3-去氧-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基(ribofuronamido))-2-氯-N⁶(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-9-(3-去氧-2-甲磺酰基-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-9-(3-去氧-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-9-(3，5-1，1，3，3-三异丙基二硅氧基-β-D-5-呋喃核糖基)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-9-(2′，3′-O-硫代羰基-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

9-(2-苯氧基硫代羰基-3-去氧-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-2-氯-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

1-(6-苄基氨基-9H-嘌呤-9-基)--1去氧-N，4-二甲基-β-D-呋喃核糖苷糖醛酰胺(ribofuranosiduronamide)；

2-氯-9-(2，3-二去氧-β-D-5-甲基-呋喃核糖酰氨基)-N⁶苄基腺嘌呤；

2-氯-9-(2′-叠氮基-2′，3′-二去氧-β-D-5′-甲基-阿糖-furonamido)-N⁶-苄基腺嘌呤；

2-氯-9-(β-D-赤呋喃糖苷)-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

N⁶-(苯并二噁烷甲基)腺苷；

1-(6-糠基氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-去氧-N-甲基-β-D-呋喃核糖苷糖醛酰胺；

N⁶-[3-(L-脯氨酰氨基)苄基]腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(uronamide)；

N⁶-[3-(β-丙氨酰氨基)苄基]腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺；

N⁶-[3-(N-T-Boc-β-丙氨酰氨基)苄基]腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺

6-(N′-苯基肼基)嘌呤-9-β-呋喃核糖苷-5′-N-甲基糖醛酰胺；

6-(O-苯基羟基氨基)嘌呤-9-β-呋喃核糖苷-5′-N-甲基糖醛酰胺；

9-(β-D-2′，3′-二去氧赤呋喃糖苷基)-N⁶-[(3-β-丙氨酰氨基)苄基]腺苷；

9-(β-D-赤呋喃糖苷)-2-甲基氨基-N⁶-(3-碘苄基)腺嘌呤；

2-氯-N-(3-碘苄基)-9-(2-四氢呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺；

2-氯-(2′-去氧-6′-硫代-L-阿糖胞苷基)腺嘌呤；和

2-氯-(6′-硫代-L-阿糖胞苷基)腺嘌呤。

在US 5,773,423的第6栏第39行到第7栏的第14行，具体公开了包括下式的化合物：

其中

X₁是R^aR^bNC(＝O)，其中R^a和R^b可以相同或不同，选自氢、C₁-C₁₀ 烷基、氨基、C₁-C₁₀卤代烷基、C₁-C₁₀氨基烷基和C₃-C₁₀环烷基；

R₂选自氢、卤素、C₁-C₁₀烷氧基、氨基、C₂-C₁₀烯基和C₂-C₁₀炔基；和

R₅选自R-和S-1-苯乙基、未取代的苄基和在一个或多个位置被选自C₁-C₁₀烷基、氨基、卤素、C₁-C₁₀卤代烷基、硝基、羟基、乙酰氨基、C₁-C₁₀烷氧基和硫的取代基取代的苄基。

更具体的化合物包括上式中其中R^a和R^b可以相同或不同且选自氢和C₁-C₁₀烷基的那些，特别是当R₂是氢或卤素，特别是氢时。

其他具体的化合物是其中R^a是氢和R₂是氢，特别是当R₅是未取代的苄基时的那些化合物。

更具体的化合物是那些化合物，其中R^b是C₁-C₁₀烷基或C₃-C₁₀环烷基，特别是C₁-C₁₀烷基，更特别地是甲基。

特别具体的是那些化合物，其中R^a是氢，R^b是C₁-C₁₀烷基或C₃-C₁₀ 环烷基，R₅是R-或S-1-苯基乙基或在一个或多个位置被选自卤素、氨基、乙酰氨基、C₁-C₁₀卤代烷基和硫的取代基取代的苄基，其中硫衍生物是盐，例如三乙基铵盐。

在US 5,773,423中公开的特别优选的化合物的例子是IB-MECA。此外，在这篇文献中特别提到的那些化合物，其中R₂是式R^d-C＝C-的C₂-C₁₀亚烯基，其中R^d是C₁-C₈烷基。同时具体公开了其中R₂不是氢的那些化合物，特别是其中R₂是卤素、C₁-C₁₀烷基氨基、或C₁-C₁₀烷基硫的那些，更特别地，另外当R^a是氢时，R^b是C₁-C₁₀烷基，和/或R₅是取代的苄基。

这些具体公开的化合物包括2-氯-N⁶-(3-碘苄基)-9-[5-(甲基氨基)-β-D-呋喃核糖基]-腺嘌呤、N⁶-(3-碘苄基)-2-甲氨基-9-[5-(甲基氨基)-β-D-呋喃核糖基]-腺嘌呤和N⁶-(3-碘苄基)-2-甲基硫代-9-[5-(甲基氨基)-β-D-呋喃核糖基]-腺嘌呤。

此外，US 5,773,423在第7栏第60行到第8栏第6行公开了具有下式的作为修饰的黄嘌呤-7-肌苷的A₃AR激动剂：

其中

X是O；

R₆是R^aR^bNC(＝O)，其中R^a和R^b可以相同或不同，选自氢、C₁-C₁₀ 烷基、氨基、C₁-C₁₀卤代烷基、C₁-C₁₀氨基烷基和C₃-C₁₀环烷基；

R₇和R₈可以相同或不同，选自C₁-C₁₀烷基、R-和S-1-苯基乙基、未取代的苄基和在一个或多个位置被选自C₁-C₁₀烷基、氨基、卤素、C₁-C₁₀卤代烷基、硝基、羟基、乙酰氨基、C₁-C₁₀烷氧基和硫的取代基取代的苄基；和

R₉选自卤素、苄基、苯基和C₃-C₁₀环烷基。

WO 99/06053在实施例中公开了化合物19-33：

N⁶-(4-联苯基-羰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(2，4-二氯苄基-羰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(4-甲氧基苯基-羰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(4-氯苯基-羰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(苯基-羰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(苄基氨甲酰基氨基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(4-硫代氨基-苯基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(4-乙酰基-苯基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-((R)-α-苯基乙基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-((S)-α-苯基乙基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(5-甲基-异噁唑-3-基-氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(1，3，4-噻二唑-2-基-氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-(4-正丙氧基-苯基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；

N⁶-二-(4-硝基苯基氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺；和

N⁶-二-(5-氯-吡啶-1-基-氨甲酰基)-腺苷-5′-N-乙基糖醛酰胺。

根据本发明的一个实施方案，A₃AR激动剂是通过结合并活化腺苷A₃AR而发挥其主要作用的化合物，它是一种落在通式(I)的范围内的嘌呤衍生物：

其中，

-R₁₁代表烷基、羟基烷基、羧基烷基或氰基烷基或下列通式(II)的基团：

其中：

-Y代表氧、硫或CH₂；

-X₁₁代表H、烷基、R^eR^fNC(＝O)-或HOR^g，其中

-R^e和R^f可以相同或不同，选自氢、烷基、氨基、卤代烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和环烷基，或者结合在一起形成包含2到5个碳原子的杂环；和

-R^g选自烷基、氨基、卤代烷基、氨基烷基、BOC-氨基烷基和环烷基；

-X₁₂是H、羟基、烷基氨基、烷基氨基或羟基烷基；

-X₁₃和X₁₄独立地代表氢、羟基、氨基、酰氨基、叠氮基、卤素、烷基、烷氧基、羧基、三价氮基、硝基、三氟基、芳基、烷芳基、硫、硫酯、硫醚、-OCOPh、-OC(＝S)OPh或X₁₃和X₁₄都是与＞C＝S连接形成五元环的氧，或者X₁₂和X₁₃形成式(III)的环：

其中R′和R″独立地代表烷基；

-R₁₂选自氢、卤素、烷基醚、氨基、酰肼基(hydrazido)、烷基氨基、烷氧基、硫代烷氧基、吡啶基硫(pyridylthio)、烯基；炔基、硫、和烷基硫；和

-R₁₃是式-NR₁₅R₁₆的基团，其中

-R₁₅是氢原子或选自烷基、取代的烷基或芳基-NH-C(Z)-的基团，其中Z是O、S、或NR^a具有上述含义的R^e；其中当R₁₅是氢时，那么

-R₁₆选自R-和S-1-苯基乙基、苄基、苯基乙基或者未取代或在-个或多个位置被选自烷基、氨基、卤素、卤代烷基、硝基、羟基、乙酰氨基、烷氧基和磺酸及其盐的取代基取代的苯胺；苯并二噁烷甲基、糠基、L-丙基丙氨酰-氨基苄基、β-丙氨酰氨基-苄基、T-BOC-β-丙氨酰氨基苄基、苯基氨基、氨甲酰基、苯氧基或环烷基；或R₁₆是下式的基团：

或者当R₁₅是烷基或芳基-NH-C(Z)-时，那么R₁₆选自杂芳基 -NR^a-C(Z)-、杂芳基-C(Z)-、烷芳基-NR^a-C(Z)-、烷芳基-C(Z)-、芳基-NR-C(Z)-和芳基-C(Z)-；Z代表氧、硫或胺；或以上化合物的生理学可接受的盐。

根据一个优选的实施方案，A₃AR激动剂是通式(IV)的核苷衍生物：

其中X₁、R₂′和R₅如上定义，及所述化合物的生理学可接受的盐。

形成本发明的化合物的取代基的非环碳水化合物基团(例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳烷基、烷芳基、烷基胺等等)可以是有支链或无支链的，优选包含1或2到12个碳原子。

一个具体组的A₃AR激动剂是N⁶-苄基腺苷-5′-糖醛酰胺的衍生物。一些优选的N⁶-苄基腺苷-5′-糖醛酰胺衍生物是N⁶-2-(4-氨基苯基)乙基腺苷(APNEA)、N⁶-(4-氨基-3-碘苄基)腺苷-5′-(N-甲基糖醛酰胺)(AB-MECA)和1-去氧-1-{6-[({3-碘苯基}甲基)氨基]-9H-嘌呤-9-基}-N-甲基-β-D-呋喃核糖(ribofuran)糖醛酰胺(IB-MECA)和2-氯-N⁶-(3-碘苄基)腺苷-5′-N-甲基糖醛酰胺(C1-IB-MECA)。

根据另一个实施方案，A₃AR激动剂可以是腺苷的氧化衍生物，例如N⁶-苄基腺苷-5′-N-烷基糖醛酰胺-N¹-氧化物或N⁶-苄基腺苷-5′-N-二烷基糖醛酰胺-N¹-氧化物，其中2-嘌呤位置可以被烷氧基、氨基、烯基、炔基或卤素取代。

A₃AR激动剂是以足以达到抗骨关节炎效果的量施用的。可以理解的是，A₃AR激动剂的量将取决于疾病的严重度，预期的治疗方案和期望的治疗剂量决定的。例如，剂量是1mg/日，所期望的施用方案是一天施用1次，那么在药物组合物中A₃AR激动剂的量就是1mg。当意欲将每日剂量分为每日施用2次时，在药物组合物中活性剂的量将是0.5mg。

可以通过本领域已知的考虑事项来确定有效达到期望的效果时的量。本文中为此目的的“抗骨关节炎的有效量”必须有效地达到治疗效果，其中该治疗效果如前文所定义。

完全理解的是，有效量取决于各种因素，包括所选择的A₃AR激动剂与A₃AR的亲和力、它在体内的分布曲线、各种药理学参数例如体内半衰期、不期望的副作用(如果有的话)、各种因素例如所要治疗的患者的年龄和性别等等。可以在目标为发现有效的剂量范围、最大耐受剂量和最佳剂量的临床研究中典型地研究有效量。进行这些临床研究的方式对于临床研制领域的熟练技术人员是公知的。

有时候该量也可以根据在动物中显示有效时的量来确定。众所周知，可以通过使用本领域公知的一种可能的换算公式将施用于大鼠的X mg/Kg的量转换为在另一种物种(特别是人)中的等价量。换算公式的例子如下：

换算I：

物种	体重(Kg)	体表面积(m²)	Km因子
				小鼠	0.2	0.0066	3.0
大鼠	0.15	0.025	5.9
				儿童	20.0	0.80	25
成年人	70.0	1.60	37

体表面积依赖性剂量换算：大鼠(150g)相对于人(70Kg)是1/7大鼠剂量。这是指，在当前情况下在大鼠中0.001-0.4mg/Kg相当于在人中为约0.14-56微克/Kg，假定平均体重为70Kg，换算为绝对剂量为约0.01到约4mg。

换算II：

以下换算系数为：小鼠＝3，大鼠＝67。用换算系数乘以动物体重，将人的剂量当量从mg/Kg转变为mg/m²。

物种	体重(Kg)	BSA(m²)
			人	70.00	1.710
小鼠	0.02	0.007
			大鼠	0.15	0.025
狗	8.00	0.448

根据这个等式，与在大鼠中0.001-0.4mg/Kg相当的人的量是0.16-64μg/Kg；即体重约70Kg的人的绝对剂量是约0.011到约4.4mg，与换算I中所示的范围类似。

换算III：

另一个可选的换算是通过调节剂量得到与给动物施用后所达到的血浆水平或AUC相同的血浆水平或AUC。

因此，根据口服IB-MECA(一种A₃AR激动剂)后在小鼠中进行的测定和根据在给健康男性志愿者的IB-MECA的临床研究中的人所进行的此类测定，可以推导出在小鼠中IB-MECA有效时1微克/Kg-400微克/Kg的剂量相当于约0.14-57微克/Kg的人剂量，即对于70Kg的个体总剂量为0.01-4mg。

此外，根据上述换算方法，IB-MECA和C1-IB-MECA(另一种A₃AR激动剂)的优选剂量范围小于4mg，典型地在约0.01到约2mg(分别为约0.14-28微克/Kg)的范围内，期望地在约0.1到1.5mg(分别为约1.4-21微克/Kg)的范围内。该剂量可以一天1次，2次或有时候数次施用。

美国专利申请公开20050101560和Fishman等人[Fishman P.等人，Tolerability，pharmacokinetics，and concentration-dependenthemodynamic effects of oral CF101(oral IB-MECA)，an A3 adenosinereceptor agonist，in healthy young men Int J Clin Pharmacol Ther. 42：534-542，2004]所描述的人体研究表明，在每日多次施用的情况下，IB-MECA的水平在人体血浆中逐渐降低，半衰期为约8-10小时，与之相比，在小鼠中半衰期仅为1.5小时，有时需要进行累计效果的剂量的校正(在前一个剂量的水平降低前施用后续剂量，这样，产生了超过单一剂量的血浆水平的积累。基于所述的人体试验，每日2次施用看起来是优选的施用方案。但是这并不排除其他的施用方案。

根据本发明的一个实施方案，优选A₃AR激动剂的施用是每日施用，每日1次到数次，优选每日1次或2次，每次施用的剂量范围是约1到约1000μg/kg体重，优选小于400μg/kg体重，甚至小于200μg/kg体重。典型地，A₃AR激动剂的剂量范围是1到100μg/kg体重。

A₃AR激动剂配制在药物组合物中。本发明的上下文中的“组合物”意欲是指活性剂的组合，单独地或与药学可接受的载体以及其他添加剂一起。有时载体具有改善活性成分递送或渗透到靶组织、改善药物的稳定性、减缓清除率、给予缓释性质、减小不期望的副作用等等的效果。载体也可以是稳定制剂的物质(例如，防腐剂)，以及用于提供含有可食用香味剂的制剂等等。载体的例子包括稳定剂和佐剂，参见E.W.Martin，REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，MacK Pub Co(June，1990)。

在本发明的上下文中，术语“药学可接受的载体”是指任一的惰性、无毒性物质，它不会与A₃AR激动剂反应，可以加入到制剂中作为稀释剂、载体或使制剂成型或具有稠度。

本发明的组合物可以根据良好的医学实践来施用和给药，同时要考虑患者个体的临床条件、施用位点和方法、施用安排、患者的年龄、性别、体重和医生已知的其他因素。载体的选择部分地是由具体的活性成分，以及用于施用组合物的具体方法决定的。因此，本发明有广泛不同的适当药物组合物。

可以通过本领域已知的很多递送模式来将A₃AR激动剂施用于患者。但是优选口服施用A₃AR激动剂。根据期望的制剂形式来选择载体。

适合口服的载体的典型例子包括(a)液体溶液，其中将有效量的A₃AR激动剂溶解于稀释剂例如水、盐水、天然汁液、醇、糖浆等等中；(b)胶囊(例如普通的硬或软壳明胶型，包含例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂)、片剂、锭剂(其中A₃AR激动剂在香味剂例如蔗糖中或 A₃AR激动剂在惰性基质例如明胶和甘油中)和含片，分别包含预定量的固体或颗粒状的A₃AR激动剂；(c)粉末；(d)在适当液体中的混悬液；(e)适当的乳剂；(f)脂质体制剂；及其他。

也可以将A₃AR激动剂配制成用于局部施用。为此目的，如本领域技术人员所已知，将A₃AR激动剂与生理学可接受的载体混合以得到适合局部施用的乳膏、洗剂、软膏、凝胶、水凝胶、油包水型乳剂等等。

如上所述，治疗性使用A₃AR激动剂有时可以与其他药物例如甲氨蝶呤(MTX)、类固醇、NSAIDS等等联用。根据每种药物的给药方案，在这种联合治疗中，其他药物和A₃AR激动剂可以同时或在不同时间给予患者。例如，MTX典型地以每周1次5到25mg的剂量范围每周1次给予患者，口服或胃肠外施用。A₃AR激动剂典型地以更频繁的给药方案给予，例如每日1次或2次。

上面已经以说明性的方式描述了本发明，应当理解的是，所使用的术语意欲是指所述词语的性质而不是进行限定。显然，根据上述教导，本发明的很多变更和改变都是可能的。因此，应当理解的是，在附属的权利要求范围内，本发明可以以下文所述的具体方式以外的方式实施。

示例性的实施方案

实施例1

研究了IB-MECA(本文有时作CF101)单独或与MTX联合对于人或大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)增殖的作用。对于FLS增殖的作用是骨关节炎中潜在治疗效果的暗示。

人FLS的培养

从经受穿刺术的骨关节炎(OA)患者中收集人滑液样品。离心该液体并除去上清液。将细胞再悬浮于包含I型胶原酶(4mg/ml)的DMEM中2小时，并在37℃下剧烈振荡。离心收集上清液中释放的细胞，并在37℃的5％CO₂培养箱中在包含10％FBS、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、1％非必需氨基酸、1％丙酮酸钠和20nM HEPES缓冲液的DMEM中培养。在培养过夜过后，除去未粘附的细胞。将粘附细胞(FLS)以1∶2的比例进行传代培养，在该实验中使用第4到第10代的细胞。

使用MTT试验研究CF101单独或与MTX联合对于FLS增殖的作用。在生长培养基中，将细胞(5×10⁴/ml细胞)培养于96-孔微量滴定板上72小时。在最后24小时，向培养基中加入CF101(10nM)。

大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)的培养

从佐剂引发关节炎的大鼠中收集滑液组织。切碎该组织并在4mg/mlI型胶原酶和0.25w/v胰蛋白酶的DMEM中消化。将混合物在37℃下强烈振荡4小时。离心分离上清液中释放的细胞，并在37℃的5％CO₂培养箱中在包含15％FCS、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的DMEM中培养。在培养过夜过后，除去未粘附的细胞。将粘附细胞(FLS)以1∶2的比例进行传代培养，在该实验中使用第4到第10代的细胞。

结果

附图1A和1B分别表明了如MTT试验所评价，单用CF101、单用MTX及CF101和MTX的组合分别对于人和大鼠FLS增殖的作用。如所示，与对照组相比，抑制的百分比是显著的(比对照组高20％)。可以清楚地看出，单用CF101或CF101和MTX的组合对于FLS显示出显著的抑制作用。

实施例2

在下列的研究中，确定IB-MECA(本文有时作CF101)对于实验性骨关节炎(OA)发展的作用。在该研究中，使用单-碘乙酸盐(MIA)试验模型。MIA是快速再现OA的临床和病理性质的大鼠实验模型。MIA是在体外显示出诱导软骨细胞死亡的糖酵解的抑制剂。MIA的关节内注射诱导啮齿动物的关节软骨中软骨细胞死亡。

特别地，用异氟烷麻醉雄性Wistar大鼠(～200gr)(Harlanlaboratories)，弯曲右腿使膝盖呈90°角。将MIA溶解于生理盐水中，使用27-号，0.5-英寸的针头将50μL体积的2mg药物注射到每只动物的右脚的关节内。

在注射后第7天开始每日2次用CF101，100μg/kg，Per Oz(PO)治疗。

用测定膝盖直径的通过增强顶端配装的标刻数字的测径器测定膝盖直径。在附图2中所示的结果显示了相同动物中注射了MIA的膝盖(右膝)和未注射MIA的膝盖(左膝)的直径之间的数值。将对照组与CF101治疗组(每组5只动物)进行比较。

如附图2所示，与对照组相比，CF101显著抑制了组织肿胀的发展(P＝9.48317E-06)。

除了代表性的膝盖的X线摄影检查显示了邻近胫骨骺线的硬化区以外，在载体治疗的动物中骺和small exophite变薄。在CF101治疗的动物中，记录没有硬化的正常胫骨骺线(附图3A-3D，其中附图3A和3B代表未治疗的对照组，附图3C和3D代表CF101治疗组)。

为了研究A₃AR和参与NF-kB和Wnt信号途径下游关键信号蛋白质的命运，将对照和CF101治疗的动物的膝关节蛋白质提取物进行蛋白质印迹分析。在从OA大鼠的大鼠膝关节中提取的细胞中，A₃AR高度表达，而在CF101治疗时向下调节，表明发生了受体活化。然后向下调节PI3K、IKK和NF-kB的表达水平，表明用CF101治疗时，抑制了NF-kB信号途径。此外，当用CF101治疗时，向上调节GSK-3β，Wnt信号途径的关键要素的表达水平(附图4A-4E)。

该数据清楚地表明，CF101作为口服生物可利用的小分子I，能够缓解OA患者的膝关节中的炎症过程。CF101治疗诱导的OA大鼠的高度A₃AR表达水平以及NF-kB和Wnt信号途径失控，这强化了使用A₃AR战胜OA的建议。

Claims

1.A₃AR激动剂在制备指示用于治疗患骨关节炎的哺乳动物患者的药物组合物中的应用，其中所述A₃AR激动剂选自IB-MECA和C1-IB-MECA。

2.权利要求1的应用，其中所述药物组合物是适用于对所述患者口服施用A₃AR激动剂的形式。

3.权利要求2的应用，其中所述药物组合物是适用于对所述患者一天一次或两次施用A₃RA激动剂的剂型。

4.权利要求1到3任一项的应用，其中被制备的药物组合物包含数量范围在0.01至4mg的所述A₃AR激动剂。

5.权利要求4的应用，其中被制备的药物组合物包含数量0.01到2mg的所述A₃AR激动剂。

6.权利要求5的应用，其中被制备的药物组合物包含数量0.1到1.5mg的所述A₃AR激动剂。