CN101302171A

CN101302171A - 纯氨基酸螯合物的生产方法及其用途

Info

Publication number: CN101302171A
Application number: CNA2008101274198A
Authority: CN
Inventors: 谢雪菊; 柯江忠
Original assignee: RUIFA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: RUIFA PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2008-06-30
Filing date: 2008-06-30
Publication date: 2008-11-12

Abstract

一种纯氨基酸螯合物的生产方法及其用途，第一个步骤是将金属氧化物或金属氢氧化物先与氨基酸反应生成氢氧基氨基乙酸盐。第二步骤是在第一个步骤所产生的氢氧基氨基乙酸盐再与至少一个含氨基的化合物反应，而这个含有够量的氨基的化合物与金属离子反应。因此生成的氨基酸螯合物结构是由一个金属离子与多个氨基酸的配位体结合所构成，而其氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等，然后从反应生成液中分离纯氨基酸螯合物。此第二个步骤也可以包括连续的几个子步骤去与多个含氨基的化合物去反应。如上生成的纯氨基酸螯合物可以应用到饮料，食品，保健品和医药中，特别是锌氨基酸螯合物能非常显著有效地增强免疫低下的小白鼠免疫功能。

Description

纯氨基酸螯合物的生产方法及其用途

技术领域

本发明是有关氨基酸螯合物复合物的生产方法以及其用途。更具体地说，本发明所生产的纯氨基酸螯合物在很广的pH值范围内，其溶解性非常好，溶液的稳定性亦非常好，并且溶液稳定性持续的时间也非常长。

背景技术

在每日的饮食里补充适量的必要矿物质，对维持人体健康是非常重要。众所周知，例如缺乏钙可能引起骨质疏松，免疫学上的疾病，高血压，关节炎，结肠癌，糖尿病，以及肥胖症；缺乏锌时，导致延长伤口的治愈，妨碍生长，延迟性成熟，怀孕后的伸展标记，疲劳，以及对感染的敏感性。

以氨基酸螯合的金属元素是人类动物和植物营养所必需的重要矿物质来源。补充氨基酸螯合物对人和动物的健康具有好处，在很多先前的医学文献中已得到充分证明。

氨基酸螯合物的活跃输送技巧是氨基酸螯合物被黏膜细胞摄取后，其氨基酸输送载体把氨基酸金属螯合物当作为单一的氨基酸去输送，因此生物的有效吸收率非常高，若它是金属的无机盐，则不像有机盐很不容易被人体吸收和消化。

氨基酸螯合物是由天然的氨基酸与金属离子反应产生含有一个或多个戊环的结构体，是由金属原子，羧基氧，羰基碳，α碳和α氨基酸氮组成物所构成。但实际上各种氨基酸螯合物的结构是是由中心金属离子的配位数和配位体(例如氨基酸)对金属的摩尔比率而确定。一个特定原子的配位数是指在特定的化学反应中可与其它原子直接相链接的数量。例如，众所周知锌，镁和钴都有6个配位数，而钙有时可能有6或者8个配位数。皮德科克和穆尔曾利用X射线研究的报告(2001，J.Biol.Inorg.Chem.6，479-489)含钙的蛋白质结构发现Ca²⁺平均有6个配位数。

氨基酸螯合物的合成，一般是先把水溶性金属盐溶解在水中，然后加进于氨基酸配位体中，使金属对配位体的摩尔比大约在1∶1到1∶4。作为制造氨基酸螯合物起始反应的水溶性金属盐，最常用的是硫酸离子或者氯离子。硫酸离子或氯离子等阴离子会与金属离子结合并与氨基酸螯合物形成复合物。虽然先前的很多专利在技术方法上提供了在氨基酸螯合物的生产期间如何除去这些多余阴离子，但实际上尚有相当大数量的阴离子依然停留在螯合物环架结构内，并且/或者直接地与氨基酸螯合物中的金属阳离子结合而连在一起。即以金属盐生产的氨基酸螯合物会有阴离子结合阳离子的不利因素，这些不利因素都与阴离子被摄绑在氨基酸螯合物的金属阳离子上有关。例如，长期摄取这种氨基酸螯合物会导致硫酸阴离子或氯化物阴离子在身体组织内累积，进而消极地负作用影响身体健康。含有相当数量阴离子的氨基酸螯合物，特别是在强酸或碱性环境下，或在其它离子譬如磷酸盐存在的前提下，时常展示很差的溶解性和稳定体。当这种氨基酸螯合物被应用在食品和饮料中时，氨基酸螯合物里的硫酸盐或者氯离子经常能导致不好的气味和口味。

公知技术曾采用各种各样的方法来改良氨基酸螯合物混杂有阴离子而导致的不利因素。例如，美国专利5,504,055和6,299,914号揭示，在氨基酸螯合物反应过程中加进pH值调解剂和悬浮稳定剂可以改进氨基酸螯合物的溶解度和稳定性。美国专利6,458,981号用金属硫酸盐与氢氧化钙一起来合成氨基酸螯合物，在反应中硫酸根与钙就生成硫酸钙而沉淀，自由硫酸离子进而从氨基酸螯合物中分离出去。

发明内容

本发明的目的上提供一种生产氨基酸螯合物的方法，更具体地说，这种方法能使氨基酸与金属直接反应生产出更为理想纯净的氨基酸螯合物，此反应产物仅仅含有纯净的氨基酸螯合物。

依照本发明，本发明的生产纯氨基酸螯合物的新方法是一个含有二个步骤的方法。此方法的第一个步骤是将金属离子与氨基酸接触产生氢氧基氨基乙酸盐。在这一步骤的反应中，金属离子是选自金属氧化物或金属氢氧化物。

第二步骤是将第一步骤所产生的氢氧基氨基乙酸盐再与至少有一个含多量的氨基化合物反应，此生成的氨基酸螯合物结构是由一个金属与多个氨基酸的配位体结合所构成，而其氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等的。这种含氨基的化合物(配位体)是氨基酸，也可为缩二氨酸，缩三氨酸，或者一种多缩氨酸。

本发明的再一个第二个步骤，包括可以连续分成几个子步骤进行。这是将第一个步骤所产生的氢氧基氨基乙酸盐再与多个不同含氨基的化合物接触反应生成氨基酸螯合物，此结构是由一个金属与多个不同氨基酸的配位体结合所构成，而此氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等。如果该氨基酸配位体中含有天冬氨酸或谷氨酸且含有至少两个不同氨基酸则会更为理想。进一步而言，前述含氨基的化合物(配位体)是氨基酸，也可为缩二氨酸、缩三氨酸、或者一种多缩氨，亦可能是这些的混合物。

本发明的最后一个课题，就是从反应液中分离氨基酸螯合物并干燥的。

本发明的功效、用途：

本发明所生产的氨基酸螯合物，由于没有混杂任何譬如硫酸盐和氯离子外来离子，因此无任何味道。在很广的pH值范围内，不但溶解性非常好，其溶液稳定性亦非常好，持续的时间也非常长。在常温下又非常容易溶解，无需附加任何pH值调解剂，溶解剂和悬挂浮稳定剂。

本发明的氨基酸螯合物可以应用在饮料，食品，营养滋补品和医药中。应用在饮料的包括萃取物或汁液，其它任何形式譬如果实、种子、根块茎、芽尖部，叶子以及其它的部位。

本发明所生产的氨基酸螯合物更可应用于牛奶制品或其它代替产品，特别是锌氨基酸螯合物，能非常有效地增强免疫低下的小白鼠免疫功能。

本发明的详细说明

本发明是有关生产氨基酸螯合物的方法及其用途，以及以此方法所制造出来的纯氨基酸螯合物。此纯氨基酸螯合物不但在很广的pH值范围内(pH2-11)溶解性非常好。在幅度很广的贮存温度下，既使被暴露在如磷酸盐那样易反应的阴离子，其溶液稳定性极为良好，持续的时间也非常长。

为使本发明更为明了，在本说明书中所使用的词语先予详细加以注明如下。

氨基酸螯合物：是指金属离子与氨基酸配位体结合形成的一个杂环结构物。

纯氨基酸螯合物：是指没有外来的阳离子或阴离子例如氢氧根，硫酸根和氯离子等与氨基酸螯合物结合或捆在一起，而所谓纯氨基酸螯合物的意思是杂环结构中的中心的金属离子配位数是完全只与氨基酸配位体提供的电子结合在一起，金属离子与氨基酸配位体的结合是离子键，共价键并且/或者是配位共价键。

一个特定的金属原子配位数，是在螯合反应中，可与这个金属原子直接相链接的其它原子的总数量。

纯氨基酸配位体(Ligand)：包括任何氨基酸，比如丙氨酸(alanine)、精氨酸(arginine简称Arg)、天冬酰氨酸(asparagine)、天冬氨酸(aspartic acid简称Asp)、半胱氨酸(cysteine)、胱氨酸(cystine)、谷氨酸(glutamic acid简称Glu)、谷酰氨酸(glutamine)、甘氨酸(glycine简称Gly)、组氨酸(histidine简称His)、异白氨酸(isoleucine)、白氨酸(leucine)、赖氨酸(lysine简称Lys)、甲硫氨酸(methionine简称Met)、鸟氨酸(ornithine)、苯丙氨酸(phenylalanine)、脯氨酸(proline)、丝氨酸(serine简称Ser)、苏氨酸(threonine简称Thr)、色氨酸(tryptophane)，酪氨酸(tyrosine)、缬氨酸(valine)、硒半胱氨酸(selenocysteine)和吡咯赖氨酸(pyrrolysine)，以及包括缩二氨酸(dipeptides)，缩三氨酸(tripetides)，或者多缩氨酸(polypeptides)，也可为以上几种的混合。

金属：指任何人体，动物，或植物营养所需的必要矿物元素，包括铜(Cu)，锌(Zn)，铁(Fe)，铬(Cr)，钴(Co)，镁(Mg)，锰(Mn)，硒(Se)，硼(B)以及钼(Mb)及其它元素，也可为金属氢氧化物或者氧化物。

″高溶解度：表明本发明的纯氨基酸螯合物溶解性非常好，其溶液稳定性，持续的时间亦非常长，譬如：(1)在很广的pH值范围内(pH2-12)的溶液中，(2)在包含有磷酸和/或柠檬酸的溶液里，或(3)在果汁那样的饮料和/或牛奶(等)，本发明所生产的纯氨基酸螯合物不需要添加任何助溶剂去帮助提升其溶解性。

无味道的意思是本发明的纯氨基酸螯合物跟纯水比较没有不愉快的味道之意。

本发明生产纯氨基酸螯合物的新方法是含有二个步骤的方法。此方法的第一个步骤是将金属氢氧化物或氧化物与氨基酸接触反应产生氢氧基氨基乙酸盐。第二个步骤一般是包括3个子步骤生产(a)金属与配位体的摩尔比为1∶4，(b)金属与氨基酸配位体的键数量与中心金属离子的配位数是相等的纯氨基酸螯合物。特别要强调的是本发明的方法可以在温度范围10℃-35℃的常温内就能很满足地完成。但若有需要反应温度控制在35℃-80℃，其反应完成时间则可减少。

用之于本发明生产没有任何干扰离子的纯氨基酸螯合物的反应公式，有以下四个步骤：

步骤1：生产氢氧基α-氨基乙酸金属盐

Me(OH)₂+HA¹→A¹MeOH (1)

其中的HA¹可为任何L-氨基酸，或缩二氨酸，缩三氨酸，或者多缩氨酸。

Me(OH)₂为金属氧化物，A¹MeOH为氢氧氨基乙酸金属盐。

步骤2：氢氧基α-氨基乙酸金属盐转换成氨基酸螯合物

A¹MeOH+HA²→MeA¹A² (2)

其中的HA²可为任何L-氨基酸，或缩二氨酸，缩三氨酸，或者多缩氨酸。

MeA¹A²为含二个氨基化合物的氨基酸螯合物

HA³+MeA¹A²→MeA¹A²A³ (3)

其中的HA³可为任何L-氨基酸，或缩二氨酸，缩三氨酸，或者多缩氨酸。

MeA¹A²A³为含三个氨基化合物的氨基酸螯合物

HA⁴+MeA¹A²A³→MeA¹A²A³A⁴ (4)

其中的HA⁴可为任何L-氨基酸，或缩二氨酸，缩三氨酸，或者多缩氨酸。

MeA¹A²A³A⁴为含四个氨基化合物的氨基酸螯合物

本领域技术人员都了解本发明生产纯氨基酸螯合物的新方法步骤2的反应式(4)中的氨基酸螯合产品的酸碱度PH是会受选用于步骤1及步骤2中的氨基酸所影响。

以反应式(4)所生产得到的透明溶液(其中含有本发明的纯氨基酸螯合物)，这个透明的溶液宁可先被过滤，然后干燥成固体粉末，进而得到纯氨基酸螯合物产品。多种不同的干燥设备可用来干燥本发明的氨基酸螯合物，如喷雾干燥设备，鼓烘干机、液体床烘干机、闪烁干燥器、旋转蒸发器、传动机盘烘干机及真空烘干机等等。干燥步骤可以是一步或者多步过程进行。

本发明的上述各种生产方法中HA¹，HA²，HA³和HA⁴可以是同一个氨基酸。也可以在HA¹，HA²，HA³和HA⁴的中至少包括有一个天冬氨酸或者谷氨酸。在HA¹，HA²，HA³和HA⁴中也可以随便包括至少两种不同的氨基酸。本领域技术人员都知道本发明中的天冬氨酸或者谷氨酸，在纯氨基酸螯合物的合成中不但作为配位体还是pH值的调解剂和/或稳定剂，而且更可作为促进氨基酸螯合物的溶解度。

依照本发明的方法所生产的纯氨基酸螯合物具有以下的物理化学属性：

第一，纯氨基酸螯合物的pH可被控制在一个特定的值。这是选择及变更混合不同的氨基酸与金属离子反应而达成，因此不需加pH值的调解剂或者pH值缓冲系统去调解氨基酸螯合物去达到人和动物体最佳的吸收条件。

第二，本发明的氨基酸螯合物非常容易溶于水，甚至可用来做非常浓缩的糖浆。

第三，本发明的纯氨基酸螯合物能溶解在非常低的pH值溶液中例如pH值2，本发明的纯氨基酸螯合物也能溶解在如pH值11非常高的pH值溶液中并且在长时间下的贮存仍很稳定。而且，本发明的氨基酸螯合物在酸性饮料，果汁和牛奶里亦很稳定。这种纯氨基酸螯合物的溶解性和稳定属性，尤其适合并大范围地应用在医药，保健食品中。

第四，由于本发明的纯氨基酸螯合物不含有硫酸盐或氯离子等外来的阴离子。从而，本发明的纯氨基酸螯合物基本上并无味道。本发明人等更为吃惊地发现，用本发明的方法生产的一种钴氨基酸螯合物竟有一种甜的味道。

公知的发明工艺在计算氨基酸螯合物中的金属所占螯合物比率，总是依据金属离子与配位体的摩尔比率。但是这些氨基酸螯合物中所含有的其它阴离子如硫酸盐或氯离子等可能与金属结合，特别是当pH值调整剂或溶剂或稳定剂被加在氨基酸螯合物中时。应注意本发明的纯氨基酸螯合物的生产方法，仅以金属氧化物或者金属氢氧化物与氨基酸配位体反应，并且其金属与氨基酸配位体之间的结合键数与金属离子的配位数相同。从而，本发明生产的氨基酸螯合物中的金属含量的计算是不基于金属离子与配位体的摩尔比率，而是基于配位体的实际数结合金属离子来计算。由此，本发明的氨基酸螯合物中的金属含量将比公知的发明工艺所报告的较低。

本发明生产的氨基酸螯合物适合用于人类，动物和禽类的营养产品。这样的产品或作品包括：饮料，食品，营养滋补品，以及粉状，药片，胶囊和液体的医药剂。

具体实施方式

以下是本发明氨基酸螯合物的合成实施例，这些实施例为本发明的范例，并不限制本发明的技术范围。

实施例1

将3.7923克天冬氨酸溶解在200mL的蒸馏水中，2.1100克的氢氧化钙被加在溶液中并搅动20分钟，待pH值是10.30时，4.3433克甘氨酸被加到反应溶液中并且搅动30分钟，测pH值得8.75。最后，3.9098克的天冬氨酸被加到反应溶液中并且搅动反应混合物40分钟，生成pH值6.83的透明溶液后并用旋转蒸发器(Tokyo Rikakikai Co.，Ltd.EyelaDigital Water Bath SB-1000)蒸发去水，再在真空(Gardner Denver WelchVacuum Technology，Inc.，Skokie，IL，USA.Welch 1400)帮助下干燥成固体。本方法所生产的纯氨基酸螯物经测试得钙和氨基酸的比率为1∶4(Ca∶2Asp∶2Gly)。以红外线光谱仪(FT-IR)、核磁共振仪NMR分析显示氨基酸螯合物(Ca∶2Asp∶2Gly)的四个氨基酸配位体完全与金属钙结合并无非结合键自由氨基酸残余物留在螯合物中。

实施例2

将天冬氨酸(3.7912克)溶解在含有氢氧化钙(2.1094克)200mL的水中，让反应进行20分钟。待pH值是10.30且稳定后加5.9866克丝氨酸并且搅动直到pH值降低到8.52且稳定(大约30分钟)。最后，天冬氨酸3.7862克被加到反应溶液中并搅动反应混合物105分钟。最后得pH值6.89的透明溶液置于旋转蒸发器移走水，再在真空泵帮助下干燥成固体。本方法所生产的纯氨基酸螯合物中的钙和氨基酸的比率为1∶4(Ca∶2Asp∶2Ser)。

实施例3

将2.1135克氢氧化钙和3.7985克天冬氨酸加入200mL的水中进行反应，连续搅动并让反应进行20分钟。待反应液的pH值达到10.30并且趋于稳定，加入6.7999克的苏氨酸并连续搅拌大约30分钟直到pH值降低到8.50且稳定。然后，加入天冬氨酸3.8012克并且搅动120分钟。生成pH值6.90的透明液用旋转蒸发器去水，在真空泵下进一步干燥。最后的氨基酸螯合物产品是白色的粉末，钙与氨基酸比率为1∶4(Ca∶2Asp∶2Thr)。

实施例4

将3.8101克天冬氨酸溶解在200mL的蒸馏水的后加入氢氧化钙2.1199克，连续搅动并让反应进行20分钟。待反应液的pH值达到10.40并且趋于稳定后8.3634克赖氨酸被加入并且搅动30分钟，直到反应溶液的pH值降低到9.91。最后，加进天冬氨酸3.8091克使溶液继续反应70分钟生成pH值9.09的透明液。用旋转蒸发器去水再在真空泵下进一步干燥。得白色的氨基酸螯合物产品粉末，其钙与氨基酸比率为1∶4(Ca∶2Asp∶2Lys)。

实施例5

将含有3.6938克天冬氨酸和2.0707克氢氧化钙的200mL反应水溶液，连续搅动并进行反应48分钟。当反应液的pH值达到10.80，加入2.0978克甘氨酸到反应溶液中并且搅动30分钟，待pH值降低到9.60并且趋于稳定，再加入4.1663克甲硫氨酸，连续搅动并让反应进行大约35分钟。当溶液的pH值是9.12时，加入天冬氨酸3.7495克于反应液中，进行反应大约130分钟，此时pH值为6.71。最后，生成液用旋转蒸发器去水，再在真空泵下更进一步干燥得白色的氨基酸螯合物产品粉末，钙与氨基酸比率为1∶4(Ca∶2Asp∶Gly∶Met)。FT-IR，NMR分析显示氨基酸螯合物(Ca∶2Asp∶Gly∶Met)的四个氨基酸配位体完全与金属钙结合。

实施例6

先将4.2482克谷氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.1407克氢氧化钙于谷氨酸溶液中搅动并进行反应大约20分钟，溶液的pH值大约在10.44时加入3.4476克苏氨酸并搅动反应液30分钟，使反应液的pH值降低到9.08并且趋于稳定。再加入3.0383克丝氨酸，搅动反应20分钟并使反应液的pH值降低到8.72。最后加入3.4630克天冬氨酸搅动并进行反应大约190分钟，使反应液的pH值再降低到7.00，生成pH值7.00的透明液。用旋转蒸发器去水，再在真空泵下进一步干燥得纯氨基酸螯合物，其钙与氨基酸比率为1∶4(Ca∶Glu∶Thr∶Asp)。

实施例7

先将3.7117克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入1.7043克氢氧化镁在天冬氨酸的水溶液中，搅动并进行反应大约30分钟，溶液的pH值大约在9.26。此时加入3.3213克苏氨酸搅动大约100分钟使其溶液的pH值大约降低到8.79。然后加入2.9309克丝氨酸并搅动直到pH值降低到8.54并且稳定(大约35分钟)。最后，加入谷氨酸4.0622克并搅动大约190分钟。生成pH值6.80透明液。然后用旋转蒸发器去水，再在真空泵下进一步干燥。最后生产得纯氨基酸螯合物，其镁与氨基酸比率为1∶4(Mg∶Asp∶Thr∶Ser∶Glu)。

实施例8

先将3.7086g克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.5539克氢氧化钴在天冬氨酸的水溶液中，搅动并进行反应大约45分钟使溶液的pH值大约在5.99。此时加入4.8528克精氨酸并搅动大约120分钟使溶液的pH值大约再升到8.45。加入2.0093克甘氨酸并搅动大约150分钟直到pH值降低到7.68。最后，加入谷氨酸4.0973克并搅动大约12小时反应得pH值5.99溶液。并将此反应溶液过滤，然后用旋转蒸发器去水再在真空泵下进一步干燥。得纯氨基酸螯合物，其钴与氨基酸比率为1∶4(Co∶Asp∶Arg∶Gly∶Glu)。

实施例9

取3.7539克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后，加入2.6258克氢氧化钴在天冬氨酸的水溶液中，搅动并进行反应大约45分钟，使溶液的pH值大约在6.27。此时加入3.3595克苏氨酸并搅动大约60分钟使溶液的pH值大约降低到5.86并趋于稳定。下一步，加入精氨酸4.9131克并搅动大约50分钟直到pH值升到7.66。加入2.1154克甘氨酸并搅动大约240分钟反应得pH值7.56溶液。然后用旋转蒸发器去水，再在真空泵下更进一步干燥。最后生产得纯氨基酸螯合物其钴与氨基酸比率1∶4(Co∶Asp∶Thr∶Arg∶Gly)。

实施例10

取3.8163g克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.3252克氧化锌在天冬氨酸的水溶液中，搅动并进行反应大约2.5个小时，使溶液的pH值大约在6.73。加入精氨酸9882克并搅动大约1个小时，此时的溶液pH值升到9.51。然后加入3.8150克天冬氨酸，搅动大约4个小时使溶液的pH值降大约在7.40。最后过滤溶液，蒸发水份，并在真空下干燥得纯锌氨基酸螯合物，其金属与氨基酸比为1∶4(Zn∶2Asp∶2Arg)。

实施例11

取3.7482克天冬氨酸溶解在200mL的水中，然后加入2.2833克氧化锌在天冬氨酸的水溶液中，搅动并进行反应大约2个小时，此时pH值6.66。在此的后加入8.2299克赖氨酸并搅动反应溶液反应大约1个小时使溶液pH值升到9.35。最后，加进天冬氨酸3.7490克反应大约12个小时，生成pH值7.64溶液。将生成的溶液过滤，然后蒸发，并在真空下干燥。这方法生产所得的氨基酸螯合物的金属与氨基酸的比率是1∶4(Zn∶2Asp∶2Lys)。

实施例12

先将3.7036克天冬氨酸溶解在200mL的水中。此后，加入2.7186克氢氧化铜并搅动反应30分钟，此时的pH值是4.11。然后加入8.154克赖氨酸于溶液中进一步搅动反应溶液60分钟使溶液pH值升到9.74。最后，加3.7041克天冬氨酸到反应溶液中反应大约90分钟。这时反应溶液的pH值降低到5.81并趋于稳定。过滤透明的生成液，蒸发，并在真空下干燥成为固体粉末。本反应生成的最后产物纯氨基酸螯合物，其金属与氨基酸的比率是1∶4(Cu∶2Asp∶2Lys)。

实施例13

取1.0081克氢氧化铜物和3.2103克组氨酸混合溶解在200mL的水中并使它反应大约3个小时，此时的反应溶液pH值是9.31。此后加入1.3802克天冬氨酸到反应液中并反应大约45分钟，此反应溶液的pH值是6.49。最后，加入0.7817克甘氨酸到反应液中并反应大约30分钟使溶液的pH达到6.52并且趋于稳定。如前所述实施例将最后生成透明的溶液过滤，蒸发，然后在真空泵下干燥成固体。这个反应生成的最后产物是纯氨基酸螯合物，金属与氨基酸的比率是1∶4(Cu∶Asp∶2His∶1Gly)。

实施例14

表格1是上列实施例中的11种不同金属氨基酸螯合物，在四种不同酸性及两种不同碱性溶液中的溶解度和稳定性测试结果。进行测定的四种酸性溶液，分别是蒸馏水稀释的(1)盐酸溶液，pH3.5，(2)盐酸溶液，pH2，(3)磷酸溶液，pH3.5，(4)磷酸溶液，pH2。两种碱性溶液分别是：(1)pH11氢氧化钠稀释液，(2)pH9氢氧化钠稀释液。同时也测定了在橙汁中(pH值3.76)，以及在牛奶中(pH值6.66)的溶解度和稳定性。在每一5mL的测试溶液中都溶解有0.2克氨基酸螯合物样品，酸性溶液和碱性溶液储存在22℃，橙汁和牛奶的储存在4℃。四周的后对溶液进行是否有沉淀物检查。发现没有一个被测试样品在储存四周的后有沉淀产生。

由本测试得知本发明生产的各种氨基酸螯合物可适用于各种饮料、果汁和乳奶以及保健食品中。

实施例15

氨基酸锌螯合物(Zn∶2Asp∶2Lys)对环磷酰胺模型组小白鼠碳粒廓清实验：

取健康小白鼠雌雄各半，体重18-22g，在实验室适应4日后均衡随机分成7组每组10只。此7组分别为空白组，环磷酰胺所致免疫功能低下组(简称CTX)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予硫酸锌(对照组)(17mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(57mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(114mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(228mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(456mg/kg)。从给药后第10天开始(除空白组外)6组均腹腔注射环磷酰胺(50mg/kg)，每日一次连续四天，给药容积为10ml/kg。空白组和环磷酰胺模型组给予等容量蒸馏水。于第16天末次给药60分钟后，尾静脉用生理盐水稀释3倍的印度墨汁注射，给药容积为10ml/kg，分别于注射后1分钟和11分钟从眼眶后静脉取血40μl，溶于4ml 0.1％碳酸钠(Na₂CO₃)，溶液中摇匀，置于721分光光度计在波长600nm下比色测定光密度(简称OD)，并以0.1％Na₂CO₃溶液校零。最后将小白鼠处死，称其体重、肝重和脾重.依下式计算廓清指数K和吞噬指数α：

K＝(lgOD1-lgOD2)/t2-t1，α＝K1/3×体重/(肝重+脾重)

其中K为廓清指数(index of carbon clearance test)，α为吞噬指数(phagocytic index)，1g为对数(Logarithm)，OD1和OD2为不同时间所取血样的光密度，t2-t1为取两血样的时间差。

由表2可以看出本实验的环磷酰胺造模块与空白组相比的吞噬指数α明显降低，表明环磷酰胺造模成功。氨基酸锌螯合物(114mg/kg，228mg/kg)使环磷酰胺所致免疫低下小白鼠的廓清指数K明显提升。而氨基酸锌螯合物(114mg/kg，228mg/kg及456mg/kg)使环磷酰胺所致免疫低下小白鼠的吞噬指数α均明显提升。这表明氨基酸锌螯合物对免疫低下的小白鼠明显地有效增强免疫功能。

表2.氨基酸锌螯合物对免疫低下小白鼠碳粒廓清实验的影响

P为机率(probability)

※P＜0.05

※※P＜0.01给药组与CTX比较

#P＜0.05 CTX与空白比较

实施例16

氨基酸锌螯合物(Zn∶2Asp∶2Lys)对环磷酰胺模型组小白鼠溶血素实验：

取健康小白鼠雌雄各半，体重18-22g。在实验室适应4日后均衡随机分成7组，每组10只。用于观察药物对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的影响。此7组分别为空白组，环磷酰胺所致免疫功能低下组(CTX)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予硫酸锌对照组(17mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(57mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(114mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(228mg/kg)；环磷酰胺所致免疫功能低下组+给予氨基酸锌螯合物(456mg/kg)。连续灌胃给药16天给药容积为10ml/kg。空白组和环磷酰胺模型组给予等容量蒸馏水。于给药后第9天开始，所有组鼠均腹腔注射20％绵羊红细胞混悬液0.2ml生理盐水进行免疫。从给药后第10天开始除空白组外的其它6组均腹腔注射环磷酰胺(CTX)50mg/kg，每日一次连续4天给药容积为10ml/kg。于第16天末次给药60分钟后摘眼球取血，离心(2000转/分钟，5分钟)，取血清稀释500倍，取稀释血清1ml与5％绵羊红细胞混悬液0.5ml生理盐水、10％补体1ml混合，放入37℃恒温箱中保温10min后在0℃冰柜中中止反应。离心(2000转/分钟，5分钟)，取上清液1ml加都氏试剂3ml摇匀放置10分钟，以721分光光度计540nm比色测定光密度(OD)。另设一不加血清的空白对照，取其上清液作为比色调零基准计算血清的半数溶血素值HC50＝样品的吸光度值/绵羊红细胞半数溶血时的吸光度×稀释倍数。

由表3看出环磷酰胺造模块与空白组相比的溶血素水平明显降低，表明环磷酰胺造模成功。氨基酸锌螯合物(57mg/kg，114mg/kg，228mg/kg及456mg/kg)使环磷酰胺所致免疫低下小白鼠的溶血素水平明显提升。这表明氨基酸锌螯合物对免疫低下的小白鼠有效明显地增强免疫功能。

表3氨基酸锌螯合物对小白鼠溶血素实验免疫低下组的影响

※※P＜0.01

※※※P＜0.001与CTX组比较

###P＜0.05 CTX组与空白组比较

Claims

1、一种生产氨基酸螯合物的方法，其方法包括两个步骤：

第一个步骤是选自金属氧化物或金属氢氧化物的金属离子与氨基酸反应产生氢氧基氨基乙酸盐；

第二步骤是第一个步骤所产生的氢氧基氨基乙酸盐再与至少含有一个够量的氨基的化合物与金属离子反应，生成由一个金属离子与多个氨基酸的配位体结合构成氨基酸螯合物，而其氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等。

2、如权利要求1所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，离子是选自硼、钙、铬、钴、铜、铁、镁、锰、钼、硒和锌的金属氧化物或金属氢氧化物。

3、如权利要求1所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，第一步骤的氨基酸为天冬氨酸和谷氨酸。

4、如权利要求1所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，第二步骤的氨基化合物是一种氨基酸，选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺酸，天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷酰氨酸、甘氨酸、组氨酸、异白氨酸、白氨酸、离氨酸、甲硫氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、吡咯啶甲酸、丝氨酸、羟丁氨酸、色氨酸，酪氨酸、缬氨酸、硒半胱氨酸和吡咯赖氨酸。

5、如权利要求4所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，氨基化合物包括缩二氨酸，缩三氨酸，或者多缩氨酸。

6、如权利要求1所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，第二步骤至少包括两个子步骤，第一子步骤是将氢氧基氨基乙酸盐与一个含氨基的化合物反应生成第一个反应生成液，第二子步骤是以第一个反应生成液与第二个含氨基的化合物反应；第二个含氨基的化合物是具足够量从而生成含有第二个氨基化合物的第二个反应生成液；此第二个反应生成物是由一个金属离子与二个氨基酸的配位体结合所构成，而且其氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等。

7、如权利要求1所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，第二个步骤包括有如下子步骤，第一子步骤是把第一步骤所生成的氢氧基氨基乙酸盐与一个含氨基的化合物反应生成相应的反应生成液，随后将这个相应反应生成液又与不同的含氨基的化合物反应，最后是将前一步生成的相应的反应生成液与最后的一个含氨基的化合物反应从而生成含有最后产品的反应生成液；此最后产品是由一个金属离子与多个氨基酸的配位体结合所构成，其氨基酸配位体的数量与金属离子的配位数是相等。

8、如权利要求1、6或7所述的生产氨基酸螯合物的方法，其中，所述的方法制成的氨基酸螯合物适用于人类、动物或禽类的营养产品，这种营养产品包括饮料、食品、营养滋补品以及抬状、片状、胶囊及液体。

9、如权利要求8所述的生产氨基酸螯合物的方法，其所生产的氨基酸螯合物，特别是锌氨基酸螯合物能非常显著有效地增强免疫低下的小鼠免疫功能。