CN101250490A - 活酵母细胞衍生物的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种活酵母细胞衍生物的生产方法，其步骤为：选用酵母菌作为菌源，采用麦芽汁作为斜面培养基，采用适合酵母菌生长的YEPD培养基作为液体培养基进行液体菌种培养；液体菌种培养至对数期8h～12h制得酵母培养液；将酵母培养液由最适温度转变至37℃高温，应激30min；采用冷冻离心机对酵母培养液进行离心分离，并收集酵母菌体；采用高压均质机对酵母菌体细胞壁进行破碎处理；将酵母细胞再次离心分离，去除沉淀，制得活酵母细胞衍生物。本生产方法不采用传统蛋白酶水解的方法进行破壁，而是选择高压均质机破碎酵母细胞，破碎效果好、操作方便、易于推广应用，可实现工业化，同时具有生产成本低、投资少、实用性强的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物活性添加剂领域，特别是一种活酵母细胞衍生物的生产方法。
背景技术
随着经济的发展，人们生活水平的不断提高，人们对健康有了更高的要求，也越来越意识到生活环境和工作环境中存在着诸多对健康不利的因素。为了有效防止外界不良环境对身体造成的伤害并增强身体抵抗力，需要使用具有保湿、抗衰老的功能性化妆品、食品及医药制品，而且这些制品越来越受到人们的喜爱。
目前，作为功能性化妆品、食品及医药制品，其生物活性添加剂的提取方法主要有三种：1.从动物腺体(如胸腺、脾、胎盘、大脑和肺)和循环体系的血清、淋巴细胞中提取；2.从海藻、各种植物及非动物器官中提取；3.从微生物培养液和微生物细胞中提取。由于动物产品的不安全性以及动物保护组织的反对，愈来愈多的消费者反对将来源于动物的产品应用于化妆品，因此取自植物的活性成份在化妆品中的应用大大增加，但自植物中提取活性成份的成本较高。因此，人们开始研究微生物酵母这种低成本、易操作的物质。1993年，日本学者伊藤进提出把酵母细胞代谢物、线粒体成份和糖脂PSL用于化妆品中。随着生物技术向化妆品领域的不断渗透，酵母的一些组分及其代谢物、衍生物已逐渐应用于化妆品的开发和生产。目前在国外已经有许多以酵母及其衍生物为原料的化妆品问世，从啤酒酵母细胞壁中提取的葡聚糖也被应用于抗衰老、防皱、增加皮肤弹性的高功能化妆品中，含有活性酵母衍生物的化妆品更是得到了极大的应用。但现有的活性酵母衍生物制备方法均具有难度大、成本高等不足，而且其保湿、抗衰老效果仍然有待提高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、成本低、效益高的活酵母细胞衍生物的生产方法，由该方法生产加工而成的活酵母细胞衍生物可作为添加剂应用于功能性化妆品、功能性食品和医药制品，使其具有更佳的保湿效果及抗衰老功能。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
一种活酵母细胞衍生物的生产方法，其生产方法包括如下步骤：
(1).菌种选择：选用微生物活酵母菌作为菌种；
(2).酵母培养液的制备：将保存在麦芽汁斜面培养基的酵母菌转接到液体培养基，在28-30℃温度条件下培养至对数期8-12h制得酵母培养液；
(3).极端高温刺激：将酵母培养液自适应温度转变于高温35-37℃应激28-30min；
(4).菌体收集：对高温应激后的酵母培养液离心分离处理8-10min，收集酵母菌体；
(5).菌体破壁：采用高压均质机对所收集的酵母菌体进行细胞壁破碎处理，处理3-4次；
(6).活酵母细胞衍生物的提取：将破壁后的酵母细胞进行离心分离，去除沉淀，制得的胞内提取物即为活酵母细胞衍生物。
而且，在酵母培养液的制备步骤中，所采用的培养基为：斜面培养基采用麦芽汁10-120Brix，液体培养基采用YEPD培养基。
而且，在菌体收集步骤中采用冷冻离心机对高温应激后的酵母培养液在4000rpm转速下进行离心处理。
而且，在菌体破壁步骤中所采用高压均质机对所收集的酵母菌体进行细胞壁破碎处理的压力为120-130Mpa。
本发明的优点和积极效果是：
1.本活酵母细胞衍生物的生产方法，应用活酵母细胞内生物化学过程与人体细胞内生物化学过程极为相似的原则，采用酵母菌这种廉价的微生物作为原料，充分挖掘细胞防御体系的潜能，依靠高温极端环境的刺激使酵母菌产生对抗极端环境的活性物质，克服了从动物体内提取活性物质的不安全性以及从植物细胞中提取的高成本问题。
2.本活酵母细胞衍生物的生产方法依靠微生物繁殖快、易培养、代谢能力强的特性，大幅度缩短生产周期，提高生产效率，从而提高经济效益。
3.本活酵母细胞衍生物的生产方法不采用传统蛋白酶水解的方法进行破壁，而是选择高压均质机破碎酵母细胞，破碎效果好、操作方便、易于推广应用，可实现工业化，同时具有生产成本低、投资少、实用性强的优点。
4.本活酵母细胞衍生物的生产方法所制得的产品含有丰富的维生素、多糖、氨基酸、SOD、CAT等营养成份，因此可进一步与化妆品和食品以及医药生产领域有机结合，开发出高效的功能性化妆品、功能性食品和医药保健品，为长期在不良环境中工作和生活的人们，提供了一种有效抵抗不良环境的方式，充分发挥活酵母细胞衍生物对抗高温极端环境的作用、解决极端环境对人类健康的不利影响，提供一种有效的途径，有显著的经济效益及社会效益。
附图说明
图1为对本发明活酵母细胞衍生物(LYCD)中的多糖进行红外光谱分析的分析图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1：
一种活酵母细胞衍生物(LYCD)的生产方法，包括如下步骤：
(1).菌种选择：选用微生物活酵母菌作为菌种；
(2).酵母培养液的制备：采用麦芽汁100Brix作为斜面培养基，采用YEPD培养基作为液体培养基，将保存在麦芽汁斜面培养基的酵母菌转接到液体培养基，在28℃温度条件下培养至对数期12h制得酵母培养液；
(3).极端高温刺激：将酵母培养液自适应温度转变于高温35℃应激30min，而且，酵母培养液在对数前期、中期和末期时均为高温35℃；
(4).菌体收集：采用冷冻离心机对高温应激后的酵母培养液在4000rpm转速下离心分离处理10min，收集酵母菌体；
(5).菌体破壁：采用高压均质机(最好为意大利生产)在130Mpa压力下对所收集的酵母菌体的进行细胞壁破碎处理，处理3次。
(6).活酵母细胞衍生物的提取：将破壁后的酵母细胞进行离心分离，去除沉淀，制得的胞内提取物即为活酵母细胞衍生物。
本实施例制得的活酵母细胞衍生物理化性质如下：
性质：为乳白色液体；
pH值： 7.3；
可溶性固性物： ≤1％；
维生素B1： ≥11μg/mL；
维生素B2： ≥0.8μg/mL；
多糖： ≥6.4μg/mL；
氨基酸： ≥5mg/mL；
SOD(超氧化物歧化酶)：≥38.07U/mg；
CAT(过氧化氢酶)： ≥7.588U/mg。
上述活酵母细胞衍生物中主要成份的测定方法为：
LYCD中维生素的测定：采用紫外分光光度法测定其含量。
LYCD中氨基酸的测定：采用GB/T 5009，124-2003方法。
LYCD中多糖的测定：采用硫酸-苯酚法。对LYCD中多糖进行红外光谱分析，IR吸收极大值(KBr压片)：如图1中所示，极大吸收在：3450、2850、1700、1600、1406、1000、577cm-1处。
LYCD中SOD的测定：采用联苯三酚自氧化法。
LYCD中CAT的测定：采用紫外分光光度法。
实施例2：
一种活酵母细胞衍生物(LYCD)的生产方法，包括如下步骤：
(1).菌种选择：选用微生物活酵母菌作为菌种；
(2).酵母培养液的制备：采用麦芽汁120Brix作为斜面培养基，采用YEPD培养基作为液体培养基，将保存在麦芽汁斜面培养基的酵母菌转接到液体培养基，在30℃温度条件下培养至对数期8h制得酵母培养液；
(3).极端高温刺激：将酵母培养液自适应温度转变于高温37℃应激28min，而且，酵母培养液在对数前期、中期和末期时均为高温37℃；
(4).菌体收集：采用冷冻离心机对高温应激后的酵母培养液在4000rpm转速下离心分离处理8min，收集酵母菌体；
(5).菌体破壁：采用高压均质机(最好为意大利生产)在120Mpa压力下对所收集的酵母菌体的进行细胞壁破碎处理，处理4次。
(6).活酵母细胞衍生物的提取：将破壁后的酵母细胞进行离心分离，去除沉淀，制得的胞内提取物即为活酵母细胞衍生物。
本实施例制得的活酵母细胞衍生物理化性质如下：
性质：为乳白色液体；
pH值： 6.8；
可溶性固性物： ≤1％；
维生素B1： ≥11μg/mL；
维生素B2： ≥0.8μg/mL；
多糖： ≥6.4μg/mL；
氨基酸： ≥5mg/mL；
SOD(超氧化物歧化酶)： ≥38.07U/mg；
CAT(过氧化氢酶)： ≥7.588U/mg。
由本发明生产方法制得的活酵母细胞衍生物，其维生素、多糖、氨基酸、SOD、CAT含量均有较大提高，因此当其作为添加剂应用于化妆品、食品及医药等产品中时，所得的功能性产品其保湿、抗衰老作用则更为突出。
Claims (4)
1. 一种活酵母细胞衍生物的生产方法，其特征在于：生产方法包括如下步骤：
(1).菌种选择：选用微生物活酵母菌作为菌种；
(2).酵母培养液的制备：将保存在麦芽汁斜面培养基的酵母菌转接到液体培养基，在28-30℃温度条件下培养至对数期8-12h制得酵母培养液；
(3).极端高温刺激：将酵母培养液自适应温度转变于高温35-37℃应激28-30min；
(4).菌体收集：对高温应激后的酵母培养液离心分离处理8-10min，收集酵母菌体；
(5).菌体破壁：采用高压均质机对所收集的酵母菌体进行细胞壁破碎处理，处理3-4次；
(6).活酵母细胞衍生物的提取：将破壁后的酵母细胞进行离心分离，去除沉淀，制得的胞内提取物即为活酵母细胞衍生物。
2. 根据权利要求1所述的活酵母细胞衍生物的生产方法，其特征在于：在酵母培养液的制备步骤中，所采用的培养基为：斜面培养基采用麦芽汁10-120Brix，液体培养基采用YEPD培养基。
3. 根据权利要求1所述的活酵母细胞衍生物的生产方法，其特征在于：在菌体收集步骤中采用冷冻离心机对高温应激后的酵母培养液在4000rpm转速下进行离心处理。
4. 根据权利要求1所述的活酵母细胞衍生物的生产方法，其特征在于：在菌体破壁步骤中所采用高压均质机对所收集的酵母菌体进行细胞壁破碎处理的压力为120-130Mpa。
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